KR20000069501A - 뉴우캐슬병에 대한 난내 백신화 - Google Patents

뉴우캐슬병에 대한 난내 백신화 Download PDF

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Abstract

본 발명은 뉴우캐슬병 감염에 대한 가금류의 난내 백신화용 백신에 관한 것이다. 이 백신은 CNCM(엥스티튀에 파스퇴르)에 기탁번호 제 I-781호로 기탁된 국제 표시 NDW의 뉴우캐슬병 바이러스 균주를 함유한다.

Description

뉴우캐슬병에 대한 난내 백신화{In ovo vaccination against Newcastle Disease}
본 발명은 뉴우캐슬병(Newcastle Disease) 감염에 대한 난내 백신화(in ovo vaccination)에 적합한 백신, 이러한 백신의 제조시 뉴우캐슬병 바이러스 균주의 용도 및 뉴우캐슬병 바이러스 균주를 함유하는 백신을 사용한 난내 백신화에 따른 뉴우캐슬병 감염에 대한 가금류의 보호에 관한 것이다.
바이러스를 함유하는 백신의 난내 백신화는 샤마(Sharma) 등의 문헌(미국 특허 제4458630호)에 상세히 기술되어 있다. 특히 마렉병(Marek's disease) 생 바이러스를 알의 양수에 주입시켜 배를 감염시킨 후 백신 바이러스가 처리된 배내에서 보호 항체의 형성을 유도하는 고 역가로 복제하도록 할 수 있음을 교시하고 있다[참조: Sharma; Avian Diseases 29, 1155, 1167-68(1985)].
미국 특허 제5427791호의 아마드(Ahmad)등은 뉴우캐슬병에 대한 배 백신화(embryonal vaccination)를 기술하고 있다. 이 문헌에서는, 뉴우캐슬병 생 바이러스(균주 NDV-B1)의 비병원성 약독화를 제공하기 위하여, 바이러스를 에틸 메탄 설포네이트(EMS)를 사용하여 변형시킨다.
이러한 유형의 변형의 단점은 EMS가 돌연변이유발원이고 백신이 또한 돌연변이유발원으로서 작용할 우려가 있다는 사실이며, 이는 백신을 정규적으로 투여하는데 바람직하지 않다. 한편, 처리되지 않은 NDV-B1은, 변형되지 않은 바이러스를 알에 주입하는 경우 거의 모든 배가 죽기 때문에, 난내 백신화에 적용될 수 없다.
또한, 이들 변형된 바이러스에 대한 안정성을 위한 최소 유효량 및 최대 용량간의 경계는 10 미만(즉, 로그 1 미만)임이 밝혀졌다. 실제적인 목적, 및 생산 결과로서 및 저장 동안의 상실에 기인한 실수의 측면에서 이러한 경계는 너무 적다.
놀랍게도, 뉴우캐슬병 바이러스 균주 NDW를 함유하는 백신 제제는 난내 적용에 특히 적합함이 밝혀졌다. 따라서, 본 발명은 가금류의 난내 백신화에 있어 뉴우캐슬병 바이러스 균주 NDW의 용도에 관한 것이다. 추가의 양태로서 본 발명은 가금류에 난내 투여하는데 적합한 백신의 제조시 뉴우캐슬병 바이러스 균주 NDW의 용도에 관한 것이다.
뉴우캐슬병 바이러스 균주 NDW의 샘플은 엥스티튀에 파스퇴르(Institut Pasteur)의 CNCM(Collection Nationale de Cultures de Microorganismes) 에 기탁번호 제781호하에 기탁되어 있다(참조: EP 351908).
유리하게는, NDW 균주는 알당 10-1내지 103및 더욱 특히는 10-0.7내지 102.2의 양으로 투여된다.
면역화에 있어 우수한 결과를 수득하기 위해서 NDW를 함유하는 백신을 17 내지 19일간의 항온처리, 바람직하게는 18일간의 항온처리한 난내에 투여할 수 있음이 밝혀졌다.
실시예 1
난내 투여를 위한 NDW 백신의 제조
작업용 종균 바이러스 스톡을 마스터 종균 바이러스(Master Seed Virus: 엥스티튀에 파스퇴르의 CNCM에 기탁번호 제 I-781호로 기탁됨)로 부터 SPF 닭 수정난의 양막강내로 접종함으로써 제조한다.
동일한 방법으로 작업용 종균 바이러스를 SPF 수정난의 양막강내로 접종함으로써 제조한다. 항온처리한 후 백신 바이러스를 함유하는 양수를 수거한다. 양수를 희석시키고 동결시켜 -50℃에서 저장한다.
충전된 양수를 해동시키기 전에 백신 바이러스가 필요한 농도로 될때까지 추가로 희석시키고, 안정화제와 혼합하며, 바이알내로 충전하여 동결건조시킨다.
실시예 2
SPF 알의 난내 NDW 백신의 안정성
실시예 1에 기술된 백신을 사용하여 문헌[참조: Sharma and Burmester: Avian Diseases 26(1), 134-149]에 기술된 방법으로 양막내에서 18일간 항온처리함으로써 SPF 알을 백신화한다.
6개 그룹의 알을 다음 표 1에 요약한 순서에 따라 백신화한다.
NDW 백신을 사용한 SPF 알의 난내 백신화의 안정성
그룹 백신 용량(EID50내) 알의 수 부화%
1 102.2 25 76
2 101.2 25 84
3 100.2 25 84
4 10-0.8 25 88
5 10-1.8 25 92
6 컨트롤(control) 25 96
결론: 18일째의 배 발달에서 NDV 백신을 사용한 SPF 알의 난내 백신화는 알당 101.2내지 102.2EID50의 최대 용량에서 안정하다.
실시예 3
시판되는 브로일러 알(broiler egg)에 있어 마터나 항체(maternal antibody)를 사용한 난내 NDW 백신의 안정성
마터나 항체를 지닌 시판되는 브로일러 알을 실시예 1에 기술된 백신을 사용하여 문헌[참조: Sharma and Burmester: Avian Diseases 26(1), 134-149]에 기술된 방법으로 양막내에서 18일간 항온처리함으로써 백신화한다.
8개 그룹의 알을 다음 표 2에 요약한 순서에 따라 백신화한다.
NDW 백신을 사용한 시판되는 브로일러 알의 난내 백신화의 안정성
그룹 백신 용량(EID50내) 알의 수 부화%
1 106 50 68
2 105 50 70
3 104 50 74
4 103 50 76
5 102 50 91
6 101 50 84
7 100 50 96
8 컨트롤 50 88
결론: 마터나 항체를 사용한 브로일러 알의 난내 백신화는 알당 102EID50이상의 용량까지 안정하다(부화에 영향을 미치지 않음).
실시예 4
NDV 백신을 사용한 SPF 알의 난내 백신화의 효능
실시예 1에 따라 제조된 NDV 백신의 효능을 SPF 알에서 실험한다.
보호 매개변수는 백신화후 항체 반응[헤모응집 억제 시험(haemagglutination inhibition test = HI test] 및 챌린지후 치사율이다. 챌린지 바이러스는 뉴우캐슬병 바이러스의 균주 Hertz 33/56이며, 이를 105.0EID50의 양으로 각각의 닭에 투여한다.
5개 그룹의 알을 하기 표 3에 요약한 순서에 따라 백신화한다.
SPF 알의 난내 백신화 효능
그룹 백신 용량(EID50) 주당 HI 역가(2log) 챌린지한지 4주후 치사율
4 6
1 101.7 4.6 nd 0
1 101.0 5.1 5.7 0
3 100.0 3.6 3.3 0
4 10-0.7 3.3 3.2 11
5 컨트롤 1.0 1.0 100
결론: 배 발달 18일째에 NDV 백신을 사용한 SPF 알의 난내 백신화는 효과적이다. 알당 약 10-0.7의 백신 용량은 난내 NDV 백신화에 효과적인 최소 용량이다.
실시예 5
마터나 항체를 지닌 시판되는 브로일러 알의 NDV 백신을 사용한 난내 백신화의 효능
실시예 1에 따라 제조한 NDV 백신의 효능을 마터나 항체를 지닌 시판되는 브로일러 알내에서 실험한다(1일 난에서 5.1의 HI 역가).
보호 매개변수는 백신화후 항체 반응(HI 시험) 및 챌린지후 치사율이다. 챌린지 바이러스는 뉴우캐슬병 바이러스 균주 Hertz 33/56이며, 이는 각각의 닭에 105.0EID50의 양으로 투여된다.
3개 그룹의 알을 하기 표 4에 요약한 순서에 따라 백신화한다.
그룹 백신 용량(EID50) 3주째 HI 역가(2log) 3주째 챌린지후 치사율
1 102 3.9 0
2 10-1 2.4 0
3 컨트롤 1.0 100
결론: 배 발달 18일째에 시판되는 브로일러 알의 NDV 백신을 사용한 난내 백신화는 효과적이다. 이는 마터나 항체의 존재에 의해 영향받지 않는다.

Claims (9)

  1. CNCM[엥스티튀에 파스퇴르의 콜렉시용 나시오날레 드 쿨투레 드 미크로오르가니스메(Collection Nationale de Cultures de Microorganismes)]에 기탁번호 제 I-781호로 기탁된 균주 NDW의 특성을 지닌 바이러스를 포함하는, 뉴우캐슬병(Newcastle Disease) 감염에 대한 가금류의 난내 백신화용 백신.
  2. 제1항에 있어서, 바이러스 균주 NDW가 알당 10-1내지 103EID50의 양으로 투여되는 백신.
  3. 제1항에 있어서, 바이러스 균주 NDW가 알당 10-0.7내지 102.2EID50의 양으로 투여되는 백신.
  4. 제1항에 있어서, 바이러스 균주 NDW가 17 내지 19일간 항온처리한 난내에 투여되는 백신.
  5. 제1항에 있어서, 바이러스 균주 NDW가 18일간 항온처리한 난내에 투여되는 백신.
  6. 난내 백신화에 적합한 백신의 제조시 CNCM(엥스티튀에 파스퇴르)에 기탁 번호 제 I-781호로 기탁된 뉴우캐슬병 바이러스 균주 NDW의 용도.
  7. 제6항에 있어서, 바이러스 균주 NDW가 알당 10-1내지 103의 양으로 존재하는 용도.
  8. 제6항에 있어서, 바이러스 균주 NDW가 알당 10-0.7내지 102.2의 양으로 존재하는 용도.
  9. CNCM(엥스티튀에 파스퇴르)에 기탁번호 제 I-781호로 기탁된 균주 NDW의 특성을 지닌 바이러스를 포함하는 백신을 난내 투여함을 포함하는, 가금류에 있어 뉴우캐슬병 감염의 예방 또는 치료 방법.
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