KR100540856B1 - 뉴우캐슬병에 대한 난내 백신접종 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 뉴우캐슬병 감염에 대한 가금류의 난내 백신접종용 백신에 관한 것이다. 이 백신은 CNCM(엥스티튀에 파스퇴르)에 기탁번호 제 I-781호로 기탁된 국제 표시 NDW의 뉴우캐슬병 바이러스 균주를 함유한다.
뉴우캐슬병 바이러스 균주 NDW, 난내 백신접종용 백신
Description
본 발명은 뉴우캐슬병(Newcastle Disease) 감염에 대한 난내 백신접종(in ovo vaccination)에 적합한 백신, 이러한 백신의 제조시 뉴우캐슬병 바이러스 균주의 용도 및 뉴우캐슬병 바이러스 균주를 함유하는 백신을 사용한 난내 백신접종에 따른 뉴우캐슬병 감염에 대한 가금류의 보호에 관한 것이다.
바이러스를 함유하는 백신의 난내 백신접종은 샤마(Sharma) 등의 문헌(미국 특허 제4458630호)에 상세히 기술되어 있다. 특히 마렉병(Marek's disease) 생 바이러스를 알의 양수에 주입시켜 배를 감염시킨 후, 백신 바이러스가 처리된 배 내에서 보호 항체의 형성을 유도하는 고 역가로 복제하도록 할 수 있음을 교시하고 있다[참조: Sharma; Avian Diseases 29, 1155, 1167-68(1985)].
미국 특허 제5427791호에서 아마드(Ahmad)등은 뉴우캐슬병에 대한 배 백신화(embryonal vaccination)를 기술하고 있다. 이 문헌에서는, 뉴우캐슬병 생 바이러스(균주 NDV-B1)의 비병원성 약독화를 제공하기 위하여, 바이러스를 에틸 메탄 설포네이트(EMS)를 사용하여 변형시켰다.
이러한 유형의 변형의 단점은 EMS가 돌연변이유발원이고 백신이 또한 돌연변이유발원으로서 작용할 우려가 있다는 사실이며, 이는 백신을 정규적으로 투여하는데 바람직하지 않다. 한편, 처리되지 않은 NDV-B1은, 변형되지 않은 바이러스를 알에 주입하는 경우 거의 모든 배가 죽기 때문에, 난내 백신접종에 적용될 수 없다.
또한, 이들 변형된 바이러스에 대한 안전성을 위한 최소 유효량 및 최대 용량간의 차는 10 미만(즉, 로그 1 미만)임이 밝혀졌다. 실제적인 목적, 및 생산 결과로서 및 저장 동안의 상실에 기인한 오차의 측면에서 이러한 차는 너무 적다.
놀랍게도, 뉴우캐슬병 바이러스 균주 NDW를 함유하는 백신 제제가 난내 적용에 특히 적합함이 밝혀졌다. 따라서, 본 발명은 가금류의 난내 백신접종에 있어 뉴우캐슬병 바이러스 균주 NDW의 용도에 관한 것이다. 추가의 양태로서 본 발명은 가금류의 난내 투여에 적합한 백신의 제조에서 뉴우캐슬병 바이러스 균주 NDW의 용도에 관한 것이다.
뉴우캐슬병 바이러스 균주 NDW의 샘플은 엥스티튀에 파스퇴르(Institut Pasteur)의 CNCM(Collection Nationale de Cultures de Microorganismes)에 수탁번호 제I-781호 하에 기탁되어 있다(참조: EP 351908).
유리하게는, NDW 균주는 알당 10-1 내지 103, 보다 특히 10-0.7 내지 102.2의 양으로 투여된다.
면역화에 있어 우수한 결과를 수득하기 위해서 NDW를 함유하는 백신을 17 내지 19일간, 바람직하게는 18일간 항온처리한 난내에 투여할 수 있음이 밝혀졌다.
실시예 1
난내 투여를 위한 NDW 백신의 제조
작업용 종균 바이러스 스톡을 마스터 종균 바이러스(Master Seed Virus: 엥스티튀에 파스퇴르의 CNCM에 기탁번호 제 I-781호로 기탁됨)로부터 SPF 닭 수정난의 요막강내로 접종함으로써 제조하였다.
동일한 방법으로 백신을 작업용 종균 바이러스를 SPF 수정난의 요막강내로 접종함으로써 제조한다. 항온처리한 후 백신 바이러스를 함유하는 요수를 수거한다. 요수를 희석시키고 동결시켜 -50℃에서 저장한다.
충전하기 전 요수를 해동시키고, 백신 바이러스가 필요한 농도로 될때까지 추가로 희석시키고, 안정화제와 혼합하며, 바이알내로 충전하여 동결건조시킨다.
실시예 2
SPF 알의 난내 NDW 백신의 안전성
실시예 1에 기술된 백신을 사용하여 문헌[참조: Sharma and Burmester: Avian Diseases 26(1), 134-149]에 기술된 방법으로 양막내에서 항온처리한지 18일째 SPF 알을 백신접종하였다.
6개 그룹의 알을 하기 표 1에 요약한 순서에 따라 백신접종하였다.
그룹 | 백신 용량(EID50) | 알의 수 | 부화% |
1 | 102.2 | 25 | 76 |
2 | 101.2 | 25 | 84 |
3 | 100.2 | 25 | 84 |
4 | 10-0.8 | 25 | 88 |
5 | 10-1.8 | 25 | 92 |
6 | 대조구(control) | 25 | 96 |
결론: 배 발생 18일째에 NDV 백신을 사용한 SPF 알의 난내 백신접종은 알당 101.2 내지 102.2 EID50의 최대 용량에서 안전하다.
실시예 3
모체이행 항체(maternal antibody)를 갖는 시판되는 브로일러 알(broiler egg)에서 난내 NDW 백신의 안전성
모체이행 항체를 지닌 시판되는 브로일러 알을 실시예 1에 기술된 백신을 사용하여 문헌[참조: Sharma and Burmester: Avian Diseases 26(1), 134-149]에 기술된 방법으로 양막내에서 항온처리한지 18일째 백신접종하였다.
8개 그룹의 알을 하기 표 2에 요약한 계획에 따라 백신접종하였다.
그룹 | 백신 용량(EID50) | 알의 수 | 부화% |
1 | 106 | 50 | 68 |
2 | 105 | 50 | 70 |
3 | 104 | 50 | 74 |
4 | 103 | 50 | 76 |
5 | 102 | 50 | 91 |
6 | 101 | 50 | 84 |
7 | 100 | 50 | 96 |
8 | 대조구 | 50 | 88 |
결론: 모체이행 항체를 갖는 브로일러 알의 난내 백신접종은 알당 적어도 102 EID50의 용량까지는 안전하다(부화에 영향을 미치지 않음).
실시예 4
NDV 백신을 사용한 SPF 알의 난내 백신접종의 효능
실시예 1에 따라 제조된 NDV 백신의 효능을 SPF 알에서 실험하였다.
보호 매개변수는 백신접종후 항체 반응[혈구응집 억제 시험(haemagglutination inhibition test = HI test] 및 챌린지후 치사율이었다. 챌린지 바이러스는 뉴우캐슬병 바이러스의 균주 Hertz 33/56이며, 이를 105.0 EID50의 양으로 각각의 닭에 투여하였다.
5개 그룹의 알을 하기 표 3에 요약한 계획에 따라 백신접종하였다.
그룹 | 백신 용량(EID50) | 주당 HI 역가(2log) | 4주에 챌린지한후 치사율 | |
4 | 6 | |||
1 | 101.7 | 4.6 | nd | 0 |
2 | 101.0 | 5.1 | 5.7 | 0 |
3 | 100.0 | 3.6 | 3.3 | 0 |
4 | 10-0.7 | 3.3 | 3.2 | 11 |
5 | 대조구 | 1.0 | 1.0 | 100 |
결론: 배 발생 18일째에 NDV 백신을 사용한 SPF 알의 난내 백신접종은 효과적이다. 알당 약 10-0.7의 백신 용량은 난내 NDV 백신접종을 위한 최소 유효량이다.
실시예 5
모체이행 항체를 지닌 시판되는 브로일러 알의 NDV 백신을 사용한 난내 백신접종의 효능
실시예 1에 따라 제조한 NDV 백신의 효능을 모체이행 항체를 지닌 시판되는 브로일러 알내에서 실험하였다(1일째의 난에서 5.1의 HI 역가).
보호 매개변수는 백신접종후 항체 반응(HI 시험) 및 챌린지후 치사율이었다. 챌린지 바이러스는 뉴우캐슬병 바이러스 균주 Hertz 33/56이며, 이는 각각의 닭에 105.0 EID50의 양으로 투여되었다.
3개 그룹의 알을 하기 표 4에 요약한 계획에 따라 백신접종하였다.
그룹 | 백신 용량(EID50) | 3주째 HI 역가(2log) | 3주째 챌린지후 치사율 |
1 | 102 | 3.9 | 0 |
2 | 10-1 | 2.4 | 0 |
3 | 대조구 | 1.0 | 100 |
결론: 배 발생 18일째에 시판되는 브로일러 알의 NDV 백신을 사용한 난내 백신접종은 효과적이다. 이는 모체이행 항체의 존재에 의해 영향받지 않는다.
Claims (10)
- 알당 10-1 내지 103 EID50의 양으로 투여되는 CNCM[엥스티튀에 파스퇴르의 콜렉시용 나시오날레 드 쿨투레 드 미크로오르가니스메(Collection Nationale de Cultures de Microorganismes)]에 수탁번호 제 I-781호로 기탁된 균주 NDW의 바이러스를 포함하는 것을 특징으로 하는, 뉴우캐슬병(Newcastle Disease) 감염에 대한 가금류의 백신접종용 난내(in ovo) 백신.
- 삭제
- 제1항에 있어서, 바이러스 균주 NDW가 알당 10-0.7 내지 102.2 EID50 의 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 백신.
- 제1항 또는 제3항에 있어서, 바이러스 균주 NDW가 항온처리 17 내지 19일째에 난내 투여되는 것을 특징으로 하는 백신.
- 제4항에 있어서, 바이러스 균주 NDW가 항온처리 18일째에 난내 투여되는 것을 특징으로 하는 백신.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- CNCM(엥스티튀에 파스퇴르)에 수탁번호 제 I-781호로 기탁된 균주 NDW의 특성을 지닌 바이러스를 포함하는 백신을 난내 투여함을 포함하는, 가금류에 있어 뉴우캐슬병 감염의 예방 또는 치료 방법.
- 제1항 또는 제3항에 있어서, 바이러스 균주 NDW가 요수에 투여됨을 특징으로 하는 백신.
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