HU203674B - Process for producing weakened turtle rhinotracheitis virus and vaccine containing them - Google Patents

Process for producing weakened turtle rhinotracheitis virus and vaccine containing them Download PDF

Info

Publication number
HU203674B
HU203674B HU882600A HU260088A HU203674B HU 203674 B HU203674 B HU 203674B HU 882600 A HU882600 A HU 882600A HU 260088 A HU260088 A HU 260088A HU 203674 B HU203674 B HU 203674B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
virus
strain
attenuated
tissue culture
turkey
Prior art date
Application number
HU882600A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT50049A (en
Inventor
Jane Kathleen Alexandra Cook
Judith A Frazier
Albert Philip Adrian Mockett
Matthew Mckinley Binns
Christine Ann Doby
Philip Box
Original Assignee
Know How Licensors Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB878712042A external-priority patent/GB8712042D0/en
Priority claimed from GB878720318A external-priority patent/GB8720318D0/en
Application filed by Know How Licensors Ltd filed Critical Know How Licensors Ltd
Publication of HUT50049A publication Critical patent/HUT50049A/hu
Publication of HU203674B publication Critical patent/HU203674B/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/543—Mucosal route intranasal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/544—Mucosal route to the airways
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18311—Metapneumovirus, e.g. avian pneumovirus
    • C12N2760/18334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/816—Viral vaccine for avian species, e.g. poultry or other birds

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás gyengített pulyka rhinotracheitis vírus és ebből készült vakcina előállítására, amely szárnyasoknak pulyka rhinotracheitis vírus vagy szerológiailag rokon törzsek által okozott betegségek ellen adagolható.
A szárnyasok, mint például pulykák és csirkék ipari méretekben történő tenyésztése jól ismert és a gyakorlatban széles körben megvalósított módszer. Már nem csupán az év egy bizonyos időszakában, például karácsonykor fogyasztják a pulykahúst, hanem - a modern pulykanevelési módszereknek és berendezéseknek köszönhetően - a pulykahús egész évben a fogyasztók rendelkezésére áll, és például pulyka-rolád vagy pulyka-„burger” formájában is fogyasztható.
A pulykák ipari léptékben történő tenyésztésének kezdetén felbukkant a pulykáknak egy légzőszervi megbetegedése, amelyet pulyka rhinotracheitísnek neveztek. A pulyka rhinotracheitis Nagy-Britanniában először 1985 júniusában fordult elő, de külföldön már évekkel előbb ismeretes volt klinikailag hasonló betegség. A pulyka rhinotracheitis akut és nagyon fertőző légúti betegség, amely a pulykákat bármely korban megtámadhatja. A morbiditási és mortalitási arány elérheti a 100%-ot, illetve 50%-ot is, és ez nyilvánvalóan rendkívül káros a pulykatenyésztés gazdaságosságára. A pulyka rhinotracheitist rendkívül nehéz kezelni. A kezdeti fertőző vírus gyorsan csillótlanítja a pulykák légcsövét. A kezdeti pulyka rhinotracheitis vírus fertőzést gyakran követi fertőzés különböző baktériumokkal, amelyek önmagukban, normális körülmények között nem okoznak fertőzést. A normális kezelési módszerek gyakran nem bizonyulnak hatásosnak Ez azt eredményezi, hogy azok a pulykák, amelyek túlélik a kezdeti vírus-fertőzést, gyakran krónikus fertőzöttségben szenvednek. A normális gyógyszeres kezelés kevéssé hat a baktériumokra, ha azok már megtelepedtek a légzőrendszerben, továbbá nincsen gyógyszer a kezdeti fertőző vírus ellen sem.
A pulykákon kívül a pulyka rhinotracheitis vírus vagy szerológiailag rokon törzsei nyilvánvalóan más szárnyasokat is, például csirkéket, gyöngytyúkokat, fácánokat és kacsákat is megtámadnak. A csirkék közül akár az étkezési célra ipari léptékben tenyésztett broilerek, akár a tojástermelő tenyészetek vagy tojók ki vannak téve a fertőzésnek A pulyka rhinotracheitis vírussal vagy szerológiailag rokon törzseivel fertőzött egyéb szárnyasoknál a betegség tünetei ugyanazok vagy eltérőek, mint a pulykák tünetei. A fertőzött csirkékről gyakran mondják, hogy „dagadt-fej szindrómá”-juk van, és ezeknek a csirkéknek duzzadtak lehetnek a peri- és infraorbitális üregei az opisthotonosszal és a torticollisszal együtt. A csirkék elveszíthetik azt a képességűket is, hogy koordinált módon mozogjanak.
A találmánynak az a célja, hogy csökkentse a pulyka rhinotracheitis vírus vagy szerológiailag rokon törzsek által okozott fentebb említett problémákat.
Következésképpen a találmány tárgya eljárás fertőző pulyka-rhinotracheitis vírus gyengített törzsének előállítására úgy, hogy egy kiindulási fertőző pulyka2 rhinotracheitis vírust embriót tartalmazó tojáson és légcső szövettenyészetben váltakozva passzálunk.
Az embriót tartalmazó tojáson és légcső szövettenyészeten a váltakozó passzálást 20-40-szer végezhetjük, előnyösen 30-szor végezzük.
Az embriót tartalmazó tojáson és légcső szövettenyészeten végzett váltakozó passzáláshoz előnyösen szárnyasok tojásait és szárnyasok légcső szövettenyészeteit alkalmazzuk; különösen előnyösnek tartjuk az embriós tyúktojásokat és csirkékből származó légcső szövettenyészeteket. A passzálást más sejtekben vagy szövettenyészet rendszerekben is végezhetjük.
A találmány szerinti eljárással előállított fertőző pulyka-rhinotracheitis vírus gyengített törzsét az European Collection of Animál Cell Cultures (Állati Sejttenyészetek Európai gyűjteménye), a PHLS Centre Fór Applied Microbiology and Researchnál (Salisbury, Wiltshire, Nagy-Britannia) V87051102 számon helyeztük letétbe.
A fertőző pulyka rhinotracheitis vírus gyengített törzse vakcina előállítására alkalmazható, amely szárnyasoknak pulyka rhinotracheitis vírus vagy szerológiailag rokon törzseik által okozott primer virális fertőzés leküzdése érdekében adagolható. A szekunder baktériumos fertőzések, amelyek a mortalitás legnagyobb részét és az összes, a fertőzést követő gyenge teljesítményt okozzák, mind normális patogénjei a szárnyasoknak, és pulyka rhinotracheitis vírus vagy szerológiailag rokon törzsei távollétében nem okoznak problémát, viszont nem kezelhetők könnyen a rendelkezésre álló gyógyszeres terápiával. így a primer vírusfertőzés leküzdésével a fenti morbiditási és mortalitási arányok jelentősen csökkenthetők, és ebből következő javulás érhető el, például a pulykák tenyésztési teljesítményében és a csirkék tenyésztésében és tojástermelésében, amelyek mindegyikére nagy szükség van.
A fertőző pulyka rhinotracheitis vírusának legyengített törzse, amelyet a fentebb jelzett törzsgyűjteményben V87051102 számon deponáltunk, új, legyengített törzs, amely különbözik más, az ezen a területen talált vírustörzsektől, például azoktól a törzsektől, amelyeket McDougall és Cook ismertetnek a Veterinary Recordban (1986), 118, & 206-207. oldalon. Az új, legyengített törzs képes fajlagos immunitást indukálni a fertőző pulyka-rhinotracheitis vírus ellen anélkül, hogy a betegség tüneteit előidézné. Hasonlóképpen az új, legyengített törzs képes lehet fajlagos immunitású antitesteket termelni védekezés céljára olyan fertőző vírusok ellen, amelyek szerológiailag rokonok a pulyka rhinotracheitis vírussal. Az új, legyengített törzs stabil, úgy találtuk, hogy a virulencia nem tért vissza 12, madárról-madárra átvitt passzálás után.
A fertőző pulyka-rhinotracheitis vírusának legyengített törzsét a fertőző pulyka-rhinotracheitis vírusának olyan szülőtörzséből kapjuk, amely a következő jellemzőkkel bír:
a) pleomorf
b) legtöbb részecske gömbalakú 80-120 nm átmé-2HU 203674 Β rővel; megnyújtott és bizarr formákat b találunk;
c) a részecskéknek sűrűn elhelyezkedő, mintegy 12-14 nm hosszúságú, a végek irányában szélesedő felületi kiugrásaik vannak;
d) csirke, pulyka, liba, egér, tengerimalac vagy nyúl eritrocitákat 4 ’C hőmérsékleten, szobahőmérsékleten vagy 37 ’C hőmérsékleten nem agglutinál;
e) kloroformmal végzett kezelésre érzékeny,
f) 56 ’C hőmérsékleten végzett melegítés hatására 20 percen belül inaktiválódik;
g) széles pH-tartományon belül stabil, de pH 2,1nél 30 percen belül inaktiválódik;
h) ribonukleinsav (RNS) vírus, sűrűsége mintegy 1,18-1,19 gúnl koncentrációjú szacharóz-sűrűségével egyenértékű;
(A meghatározást úgy végezzük, hogy centrifugacsőben szacharóz koncentráció-gradienst alakítunk ki, ennek a tetejére helyezzük a vírust, és nagy sebességgel centrifugáljuk. A vírus a szacharóz-gradiensben addig mozdul el, amíg el nem éri a saját sűrűségének megfelelő szacharóz-koncentrációt. A vírus a szacharóz-gradiens ezen pontján marad attól függetlenül, hogy a centrifugálást milyen hosszú ideig folytatjuk.)
i) legalább 7 vírus-specifikus polipeptidet tartalmaz mintegy 97*; 82*; 43; 40; és 15* kilodalton molekulatömeggel; azok, amelyek csillaggal vannak jelölve, glikozilezettek.
A gyengített törzs a következő jellemzőkkel bír:
a) a szülőtörzs ellen kialakult anti-szérummal semlegesítődik;
b) a pulykákban a gyengített törzsre kialakult antiszérum semlegesíti a szülőtörzset; és
c) a szülő törzshöz hasonló fehérje-profil ja van.
A szülőtörzs ismert törzs, amelyről McDougall és Cook számolnak be fentebb említett cikkükben a Veterinary Recordban. A vírus mRNS és a pulyka rhinotracheitis vírus által indukált polipeptidek elemzése, más, (a)—<i) közti jellemzőkkel együtt azt sugallja, hogy a vírus a Paramyxoviridae család tagja és vannak bizonyos közös jellemzői a légúti syncytialis vírussal, amely a Pneumovírus nemzetség tagja.
A fertőző pulyka-rhinotracheitis vírusának gyengített törzse elektronmikroszkópos képét a 2. ábrán mutatjuk be.
A találmány szerinti eljárás magában foglalhatja a fertőző pulyka-rhinotracheitis elkészült legyengített törzsének fagyasztva szárítási lépését is,
A találmány tárgya továbbá eljárás élő vírustenyészetet tartalmazó vakcina előállítására, amely magában foglalja a fertőző pulyka-rhinotracheitis vírus legyengített törzsének előállítását a találmány említett módszerével.
Az élő vírustenyészetet tartalmazó vakcina alkalmas pulyka rhinotracheitis elleni védelemre pulykáknál, továbbá a „duzzadt-fej szindróma elleni védelemre csirkéknél, alkalmas továbbá pulyka rhinotracheitis vírus vagy szerológiailag rokon törzsek által okozott betegségek elleni védelemre pulykáktól és csirkéktől eltérő szárnyasoknál is.
Az élő vírustenyészetet tartalmazó vakcina a fertőző pulyka-rhinotracheitis vírusának legyengített törzséhez folyékony hordozóként tartalmazhat légcső szövettenyészet folyadékot vagy allantoisz üreg folyadékot.
Az élő vírustenyészet-vakcinát előállíthatjuk úgy is, hogy a fertőző pulyka-rhinotracheitis vírus legyengített törzsét növesztjük, ismételt inokulálással és kinyeréssel. A növesztést légcső szövettenyésztő folyadékban vagy allantoisz üreg folyadékban végezhetjük.
A vakcina előállítása során a fertőző pulyka rhinotracheitis vírus legyengített törzsét bármilyen kívánt módon, például gélszűréssel, szeparálással, gradienscentrifugálással és adszorpcióval és ezt követő eluálással lehet tisztítani. A vakcinát lehet koncentrálni, például zónacentrifugálással, molekuláris szűrést, vagy adszorpciót és ezt követő eluálást alkalmazva. A vakcinát stabilizálószerek hozzáadásával stabilizálni lehet, és megfelelő konzerválószerek, például szarvasmarha-szérum-albumin vagy zselatin hozzáadásával tárolhatóvá lehet tenni.
A kész vakcinát sterilitásra, ártalmatlanságra és immunogén aktivitásra nézve ellenőrizhetjük.
A találmány szerinti eljárást a következő példákkal szemléltejük, a korlátozás szándéka nélkül.
7. példa
Pulyka rhinotracheitis (TRT) vírus legyengltése csirkeembrióban és légcső szövettenyészetben végzett váltakozó passzálással
A szövettenyészeten szaporított vírust az allantoisz üregen át 9 napos csirkeembriókba inokuláljuk.
Az allantoisz folyadékot 4 nappal később kinyerjük és légcső szövettenyészetbe inokuláljuk. A szövettenyésztő folyadékot 3 nappal később kinyerjük és 9 napos embriókba inokuláljuk az allantoisz üregen keresztül.
Embriókban és szövettenyészetekben 25-ször végzett váltakozó passzálás után in vivő vizsgáljuk a legyengítést. Két, 8-8 darab 4 hetes pulykából álló csoportot inokulálunk intranazálisan vagy a szülő, vagy a származék törzzsel. 21 nappal később mindkét csoportból vért veszünk és intranazálisan fertőzzük a szülőtörzzsel. Az eredményeket az 1. táblázatban adjuk meg.
1. táblázat
Orrgennyesedés (napok száma a fertőzés után) TRT semlegesítő antitest titer, 21 nappal később (reciprok) Klinikai légúti betegség a szQlőtőrzzsel végzett fertőzés után
Inoko- lum 4 5 6 7
Szülő- törzs* 5/8 7/8 8/8 7/8 56; 56; 56; 69; 83; 95; 125;166 átlag-88 Nincs
HU 203 674 Β
Orrgennyesedés (napok száma a fertőzés után) TRT semlegesítő antitest titer, 21 nappal később (redprok) Klinikai légúti betegség a szülőtörzzsel végzett fertőzés után
Szár- mazék törzs (EP25) 0/8 0/8 0/8 0/8 17; 17; 38; 43; 56; 56; 56; 74; átlag-45
* Az orrgennyesedést mutató pulykák száma/a csoport tagjainak száma
2. példa
A pulyka rhinotracheitis vírus szülötörzs jellemzése, amely szülötörzs McDougall és Cook közleményéből ismeretes (The Veterinary Record,
1986; 118. 206-207 oldal)
A vírus pleomorf. A legtöbb részecske gömbalakú, 80-120 nm átmérővel. Nagyobb részecskék is láthatók azonban, és találhatók megnyújtott és bizarr formák is. A vírusrészecskék sűrűn elhelyezkedő, mintegy 12 nm hosszúságú, a végek felé szélesedő felületi kiugrásokkal rendelkeznek. Ezt az 1. ábrán, (a), (b), (c) és (d) elektronmikroszkópos képeken mutatjuk be.
A vírus a csirke, pulyka, liba, egér, tengerimalac vagy nyúl eritrocitákat 4 ’C hőmérsékleten, szobahőmérsékleten vagy 37 ’C hőmérsékleten nem agglutinálja.
A vírus érzékeny kloroformmal végzett kezelésre. Ez a vírus 56 ’C hőmérsékleten melegítve 20 percen belül inaktiválódik. A vírus széles pH-tartományban stabil, de 30 percen belül inaktiválódik pH 2,1 -nél.
A vírus RNS vírus, amely 1,18-1,19 g/ml koncentrációjú szacharóz sűrűségével egyenértékű sűrűséggel rendelkezik. A vírus legalább hét vírusfajlagos polipeptidet tartalmaz 97*, 82*. 53*, 43,40,35 és 15* küodalton molekulatömeggel - azok, amelyek csülaggal vannak jelölve, glikozilezettek.
3. példa
A legyengített törzs kapcsolata a szülötörzzsel
A legyengített törzset a szülőtörzs ellen képződött antiszérum semlegesíti.
A pulykákban a legyengített törzs ellen termelt antiszérum semlegesíti a szülővírust.
A szülő- és származékvírusok hasonló fehérjeprofillal bírnak
A 2. ábra a legyengített törzs elektronmikroszkópos képét mutatja. Amint látható, a vírus mind gömbalakú, mind hosszúkás lehet, felületi kiugrásokkal.
4. példa
Vírusvizsgálat
A 3B pulyka rhinotracheitis 880 mg/1 nátrium-hidrogén-karbonátot tartalmazó, de szérumot nem tartalmazó Eagle-féle minimál esszenciális tápközegen (Eagle’s Minimál Essential Médium, MÉM) vizsgáljuk. A tápközeg pH-ja 6,8, és a vizsgálatot 37 ’C hőmérsékleten hajtjuk végre. Lezárt csöveket alkalmazunk. A vizsgálat ciliostatist mutat ki csirkeembrió légcső szövettenyészeten. Ciliostatis akkor következik be, amikor a légcső csillóval borított epitelíális rétegén lévő csülök abbahagyják a mozgást.
5. példa
A TRT vírus tojáson/szövettenyészeten passzált törzse legyengülésének kimutatása A TRT vírus legyengített törzsét és két virulens törzset szemcseppek formájában 7 napos TRT-mentes pulykacsibék 15 tagú csoportjainak adagolunk, amelyeket a fertőzés klinikai jeleire nézve naponta megfigyelünk; a betegség súlyosságát pontrendszer alapján - 2. táblázat - értékeljük ki, az eredményeket a 3. táblázat tartalmazza. Orrkenetből 4 nappal az inokulálás után vírus-visszaizolálást végzünk, és az inokulálás után 5 nappal csoportonként 5 pulykacsibét levágunk, és légcsövüket csüló-áktivitásra nézve vizsgáljuk. Ezt úgy végezzük, hogy 10 vékony szeletet készítünk az egyes légcsövekből és ezeket mikroszkóposán megvizsgáljuk csilló-aktivitásra (4. táblázat). Az aktivitást O-tól (100% csüló-aktivitás) 4-ig (az aktivitás teljes megszűnése) pontozzuk. Az inokulálás után 21 nappal az összes pulykacsibéből vért veszünk és szérumukat TRT antitestekre ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbánt Assay; enzimmel kapcsolt immunszorbens vizsgálat) vizsgálattal vizsgáljuk (5. táblázat). Ezeket a pulykacsibéket egy előzőleg nem inokulált csoporttal együtt, szemcseppek formájában adagolt virulens vírus törzzsel fertőzzük, és a fertőzés klinikai jeleire nézve naponta megfigyeljük. Vírus-visszaizolálást a fertőzést követő negyedik és hatodik napon végzünk, és az összes pulykacsibéből vért veszünk, és levágjuk 14 nappal a fertőzés után.
Eredmények
A legyengített törzs sokkal enyhébb klinikai tüneteket okoz, mint bármelyik virulens törzs (lásd a 3. táblázatot), és az okozott légcső-károsodás mértéke sokkal enyhébb, mint bármelyik virulens törzs esetén (lásd a
4. táblázatot). TRT vírust izolálunk 4 nappal az inokulálás után minden inokulált csoport pulykacsibéiből vett orrkenetből. Azok a pulykacsibék, amelyek a legyengített törzset kapták, alacsonyabb szerológiai választ adnak ELISA-val mérve, mint azok a pulykacsibék, amelyek virulens törzset kaptak (lásd az 5. táblázatot), de mégis rezisztensek a virulens vírussal végzett fertőzésre (lásd a 3. táblázatot). A fertőzést követően a vírust a kontroll csoportból vett orrkenetből ki lehet nyerni, míg a vakcináit csoportból nem.
A kapott eredmények azt igazolják, hogy a törzs le van gyengülve, de mégis képes a pulykacsibék védelmére virulens vírussal történő fertőzés ellen.
A váltakozó tojás/szövettenyészet passzálással legyengített törzset úgy választjuk ki, hogy megfelelő legyen lehetséges vakcinatörzsként való felhasználáshoz.
HU 203674 Β
2. táblázat
Akárosodás pontozási rendszere
1: Váladék, amikor az orrlyukakat megnyomjuk és/vagy enyhén megütjük
2: Ongemyesedés
3: Vizesszanek_
5: Megduzzadt orrQregek és/vagy habos szemek
7: Nehéz légzés vagy mélyről hangzó bugyborékolfa_
10: A pulykacsibe betegnek látszik
3. táblázat
Legyengített, illetve virulens TRT vírussal inokulált és 21 nappal később virulens vírussal fertőzött, 7 napos TRT-mentes pulykacsibékben megfigyelt klinikai betegségek*
Napok az inokulálás után Átlagos betegségi pontszám/madár az inokulálást kővetően
Tojás/szö- vettenyé- szet passzálással gyengített törzzsel Virulens törzzsel Nem inokulált
Atörzs Btörzs
1 0 0 0
3 0 0,4 1.3
4 0,5 1,8 1,6
5 Ifi 2,9 2,7
6 2,0 2,8 3,8
7 1,7 4,9 3,6
8 0,6 3,2 0,3
11 0 0,5 0
14 0 0 0
21 0 0 0
összesen 6,0 16,5 13,3
* (A és B virulens törzs különböző pulyka rhinotracheitis járványok esetén izolált törzsek)
A 21. napon virulens vírussal felülfertőzve:
+ 1 + 3 + 4 + 5 + 6 + 7 + 8 +10 0 0 0 0 0 0 0 0 elpusztul elpusztul 0 0 U 3,0 4,0 4,1 22 0
összesen 14,5
4. táblázat
Csillóaktivitás TRT-vírus legyengített, illetve virulens törzseivel végzett inokulálás után 5 nappal elpusztított pulykacsibék légcsöveiben
Pulykacsibe száma Teljes csillóaktivitás 5 légcsőből nyert 10 szövettenyészetben 5 nappal az inokulálás után
Tojáa/szövettényészét passzálással gyengíteti törzzsel Virulens törzzsel Nemino- kulált
Atörzs B törzs
1 0 32 32 7
2 13 30 40 3
3 29 38 40 4
4 9 32 39 18
5 5 39 39 7
összesen: 56 175 190 39
5. táblázat
Gyengített, illetve virulens TRT-vírussal inokulált és 21 nappal később virulens vírussal fertőzött 7 napos TRT-mentes pulykacsibék antitestválasza
Idő Átlagos TRT ELISA antitest titer (log2), az inokulálást követően
Tojás/szövettenyészet passzálással gyengített törzzsel Virulens törzzsel Nem inoku- lált
A törzs B törzs
21 nappal azinokul álás után 11,14 12,14 13,74 5,64
14 nappal a fertőzés után 9,94 - - 10,84
- - nem vizsgáltuk
6. példa
Embriót tartalmazó tojáson és légcső szövettenyészeten váltakozva passzálással legyengített pulyka rhinotracheitis vírus élő törzsét tartalmazó vakcina előállítása
A vírust csirke légcső szövettenyészetet alkalmazva izoláljuk és 30 cikluson át embriót tartalmazó tojáson és légcső szövettenyészeten váltakozva végzett passzálással gyengítjük. A vírust három passzálással tisztítjuk korlátozott hígítással légcső szövettenyészeten, majd embriót tartalmazó tojásban szaporítjuk A 72120 órával az inokulálás után kapott allantoisz folyadékot használjuk vakcinaként.
A vírus-folyadékot szükség szerint hígíthatjuk, összekeverhetjük stabilizálószerrel, és fagyasztva száríthatjuk Minden cső 100-1000 adagot tartalmazhat. Egy dózis 102-104 CD50-et (ciliosztatikus dózis) tartalmaz.
Immunizálás
102-104 CD50 élő vakcinavírust tartalmazó dózist adagolunk háromhetes csirkéknek spray formájában.
A vakcinálás után három héttel szérum-mintákat veszünk, és megvizsgáljuk pulyka rhinotracheitis ví5
HU 203 674 Β rus elleni antitestekre ELISA vizsgálattal. Nem vakcináit kontroli-csoportot elkülönítve tartunk.
Az átlagos ELISA titer 3 héttel a beadás után 8,5 log2 antitest. A kontroli-csoport negatív.
A kísérletek világosan mutatják, hogy a csirkéknek adagolt legyengített vírus vakcina gyorsan indukál immunválaszt, amit a pulyka rhinotracheitis vírus elleni fajlagos antitestek kifejlődése mutat. Nagyon valószínű, hogy az ilyen vakcináit csirkék ellenállók olyan fertőzések ellen, amelyek egyébként „duzzadt fej” szindrómához vezetnének
Szakember számára nyilvánvaló, hogy más legyengítési módszereket is lehet alkalmazni, például tenyésztést sejttenyészetben, hőérzékeny mutánsok kiválasztását, és kémiai mutagének alkalmazását. Miközben az egészséges szárnyasokat, például pulykákat és csirkéket előnyösen azért vakcinájuk, hogy megállítsuk a pulyka rhinotracheitis, illetve „duzzadt fej szindróma kifejlődését, megbetegedett szárnyasokat is lehet kezelni, hogy nagyobb gyógyulási arányt kapjunk, mint amely normálisan elérhető.

Claims (10)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás fertőző pulyka-rhinotracheitis vírus legyengített törzsének előállítására, azzal jellemezve, hogy a fertőző pulyka-rhinotracheitis vírus szülő törzsét embriót tartalmazó tojáson és légcső szövettenyészeten váltakozva végzett passzálással gyengítjük, és adott esetben fagyasztva szárítjuk.
  2. 2. Az igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az embriót tartalmazó tojásban és légcső szövettenyészeten váltakozva végzett passzálást 20-40-szer végezzük.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az embriót tartalmazó tojáson és légcső szövettenyészeten váltakozva végzett passzáláshoz csirkékből származó, embriót tartalmazó tojást és csirkékből származó légcső szövettenyészetet alkalmazunk.
  4. 4. Eljárás élő vírus-tenyészeteket tartalmazó, pulyka rhinotracheitis vírus által szárnyasokban okozott fertőzés elleni vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy a fertőző rhinotracheitis vírus 1. igénypont szerinti eljárással előállított, legyengített törzsét adott esetben szaporítás és adott esetben tisztítás után a vakcinakészítésben szokásos hordozóval és/vagy adott esetben stabilizáló-, konzerválószerrel összekeverve vakcinává alakítjuk, és kívánt esetben koncentráljuk.
  5. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy legyengített vírusként az 1. igénypont szerinti eljárással előállított, fagyasztva szárított, majd rekonstituált vírust alkalmazunk
  6. 6. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy legyengített vírusként az 1. igénypont szerinti eljárással előállított, majd többszöri inokulálással és összegyűjtéssel szaporított vírust alkalmazunk.
  7. 7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szaporítást légcső szövettenyészeten vagy allantoisz üreg folyadékon végezzük
  8. 8. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy legyengített vírusként az 1. igénypont szerinti eljárással előállított, majd gélszűréssel, elválasztással, gradiens centrifugálással vagy adszorpcióval és azt követő eluálással tisztított vírust alkalmazunk.
  9. 9. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vakcinát zónacentrifugálással, molekulaszűréssel vagy adszorpcióval és azt követő eluálással koncentráljuk.
  10. 10. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy legyengített vírusként az ECAAC törzsgyűjteményben V87051102 számon letétbe helyzeti vírustörzset alkalmazzuk.
HU882600A 1987-05-21 1988-05-20 Process for producing weakened turtle rhinotracheitis virus and vaccine containing them HU203674B (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB878712042A GB8712042D0 (en) 1987-05-21 1987-05-21 Virus & vaccine
GB878720318A GB8720318D0 (en) 1987-08-28 1987-08-28 Biological preparations

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT50049A HUT50049A (en) 1989-12-28
HU203674B true HU203674B (en) 1991-09-30

Family

ID=26292269

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU882600A HU203674B (en) 1987-05-21 1988-05-20 Process for producing weakened turtle rhinotracheitis virus and vaccine containing them

Country Status (7)

Country Link
US (1) US5069902A (hu)
EP (1) EP0292210B1 (hu)
CA (1) CA1337266C (hu)
DE (1) DE3878982T2 (hu)
ES (1) ES2053732T3 (hu)
HU (1) HU203674B (hu)
IL (1) IL86397A (hu)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2989080B2 (ja) * 1992-12-17 1999-12-13 帝人株式会社 磁気記録媒体用積層ポリエステルフイルム
DK0639640T3 (da) * 1993-07-30 2001-01-02 Akzo Nobel Nv Fjerkrævaccine indeholdende smitsomt bronchitis-virus serotype 4/91
FR2801607B1 (fr) 1999-11-26 2001-12-28 Merial Sas Pneumovirus du canard et vaccins correspondants
US6605460B1 (en) * 2000-09-22 2003-08-12 University Of Minnesota Avian pneumovirus vaccine
AR031405A1 (es) * 2000-11-21 2003-09-24 Wyeth Corp Metodos y vacunas para conferir proteccion in ovo contra la rinotraqueitis del pavo
US6977079B2 (en) * 2003-01-17 2005-12-20 Regents Of The University Of Minnesota Avian pneumovirus vaccine

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4122167A (en) * 1977-02-09 1978-10-24 Merck & Co., Inc. Respiratory synctial vaccine
NL7801060A (nl) * 1977-02-09 1978-08-11 Merck & Co Inc Werkwijze voor het bereiden van een afgezwakt syncytiaal ademhalingsvirus, alsmede prepara- ten en vaccins die dit virus bevatten.
LU79503A1 (fr) * 1977-08-17 1978-11-28 Merck & Co Inc Procede de preparation d'un vaccin syncytial du virus respiratoire
FR2602791B1 (fr) * 1986-08-18 1988-11-10 Ministere Agri Direction Quali Procede de culture du virus de la rhinotracheite infectieuse de la dinde, et vaccin prepare a partir du virus ainsi obtenu

Also Published As

Publication number Publication date
US5069902A (en) 1991-12-03
HUT50049A (en) 1989-12-28
IL86397A (en) 1992-09-06
DE3878982D1 (de) 1993-04-15
ES2053732T3 (es) 1994-08-01
EP0292210A2 (en) 1988-11-23
EP0292210B1 (en) 1993-03-10
EP0292210A3 (en) 1990-01-24
DE3878982T2 (de) 1993-07-22
IL86397A0 (en) 1988-11-15
CA1337266C (en) 1995-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Heddleston et al. Fowl cholera: cross-immunity induced in turkeys with formalin-killed in-vivo-propagated Pasteurella multocida
Jordan A review of the literature on infectious laryngotracheitis (ILT)
US4302444A (en) Vaccines for immunizing egg-laying birds against Egg Drop disease, preparation of said vaccines, and method of use of said vaccines
JPS63307828A (ja) ニューカッスル病ウイルスワクチン及びその適用方法
JPH07121873B2 (ja) 鳥感染性気管支炎ワクチン
Timms et al. Laboratory and field trial assessment of protection given by a Salmonella Enteritidis PT4 inactivated, adjuvant vaccine
IE51122B1 (en) Infectious-bronchitis vaccines for poultry,combined infectious-bronchitis vaccines,process for preparing such vaccines,method for preventing infectious bronchitis,and infectious-bronchitis virus strains
EP1259257B1 (en) In ovo protection against infectious bronchitis
JP3945842B2 (ja) 弱毒性ニューカッスル病ウイルスワクチン
HU203674B (en) Process for producing weakened turtle rhinotracheitis virus and vaccine containing them
RU2542440C2 (ru) Живая вакцина против заболеваний птиц
US7208164B2 (en) Ovo immunization against infectious bronchitis
Shibley et al. A study of infectious laryngotracheitis virus. II. The duration and degree of immunity induced by conjunctival vaccination
US2998349A (en) Vaccine against avian respiratory infection
Varley et al. The response of chickens to experimental infection with strains of M. gallisept1cum of different virulence and M. g allinarum
Islam et al. Standardization of effective dose of fowl cholera vaccine in pigeon in Bangladesh.
JPH07121874B2 (ja) 感染性気管支炎ワクチン
Beaudette Infectious bronchitis and Newcastle disease
NL7908687A (nl) Infectieuze bronchitis vaccins voor pluimvee en werkwijze voor het bereiden van dergelijke vaccins.
Kelleher et al. An evaluation of Newcastle disease virus spray vaccination programs of market turkeys
DE2809343C2 (de) Impfstoff gegen Eierlege-Krankheit
Jaber et al. Comparative efficacy of fowl cholera vaccines in ducks
RU2106152C1 (ru) Способ получения комбинированной вакцины против ньюкаслской болезни и инфекционного ларинготрахеита птиц
Mugera Respiratory Diseases of Poultry and Their Control
Rivera-Cruz Some immunological aspects of Newcastle disease virus.

Legal Events

Date Code Title Description
DGB9 Succession in title of applicant

Owner name: KNOW-HOW LICENSORS LIMITED,GB

HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee