JPS6327437A - 鶏伝染病生ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 −の！　野 本発明は１．＠類特にかの伝染病予防薬、さらに詳しく
は培養細胞を用いた鶏伝染性喉頭気管炎生ワクチン、お
よびこれを用いた鶏伝染性喉頭気管炎・マレック病混合
生ワクチンに関する。

′　　　　思　　′、′ 鶏伝染性喉頭気管炎およびマレック病は、ウィルスによ
って起こる鶏伝染病で、その発生は日本のみならず、ア
メリカ、ヨーロッパ、オーストラリアなど鶏の多数羽飼
育の進んでいる国で発生し、養鶏産業の生産性を大きく
低下させる要因として重要視されている。

鶏伝染性喉頭気管炎は鶏の呼吸器病であり、鶏が鶏伝染
性喉頭気管炎ウィルスに感染すると、感染後２ないし３
日で発症し、２日から２　ｊＡ　ｔＳＦ！症状が続く。

死亡率は、ウィルスの病原性、鶏の飼育環境等の条件で
異なり、１０％から７０％とかなりの差が認められるが
、通常は２０％程度とされている。

また鶏は系統、性別、日齢に関係なくこのウィルスに対
し感受性を有しており、特に日齢の若い雛はど発生率、
死亡率ともに高い傾向を示す。

この病気に罹患すると、気管に炎症を起こして、くしゃ
み、咳などの症状を示し、重症の場合には、気管滲出物
が気管をふさいであえぎ呼吸をしたり窒息死を起こした
りする。その結果、飼育鶏の死亡率の増加、飼育効率の
低下、体重増加率の低下、産卵率の低下をまねく、鶏の
多数羽飼育の進んでいるわが国においては、ひとたび鶏
伝染性喉頭気管炎が飼育鶏の中において発生すると前に
述べたような症状が生じ、養鶏業者にとって多大な損害
を被ることから、鶏伝染性喉頭気管炎は、養鶏産業の生
産性低下の原因として重要視され届出伝染病として指定
されている。

一方、鶏のマレック病はリンパ様細胞が増殖する腫瘍性
の病気で、神経、生殖器、各種の内臓、眼および皮膚等
に広く病変が出現する伝染病である。このマレック病に
対しても鶏は系統、性別を問わず高い感受性を示すが、
日齢の若いものほど感受性が高く、その影響も大きいこ
とがわかっている。マレック病の臨床症状は、神経が冒
された場合には神経麻ひによる運動障害、内臓が冒され
た場合には腫瘍の出現による内臓の機能障害および慢性
消耗性の栄養不良が起こり、はとんどの場合に回復でき
ずに死亡することが多い。

鶏伝染性喉頭気管炎や、マレック病発生時の処置として
は、効果的な治療薬剤がなく、発症鶏を抜き出して鶏の
数を減らすとか換気をよくすることが考えられる対策で
あるが、実質的にはほとんど効果がないというのが現状
である。未然にウィルス感染を防御する効果的なワクチ
ンのみが、唯−考えられる現実の対策である。

すでにこれら２つの伝染病に対するワクチンが開発され
養鶏業界で使用されている。しかしながら、現在のとこ
ろこれらの混合ワクチンは開発されておらず、それぞれ
単独で、２度にわたり接種を行っているのが現状であり
、また鶏伝染性喉頭気管炎ワクチンも安全性、有効性お
よび接種方法の点でいまだ問題を残している。

まず現在使用されている鶏伝染性喉頭気管炎ワクチンは
、弱毒鶏伝染性喉頭気管炎ウィルスを培養細胞で培養し
て得た培養上清、すなわち感染培養細胞を除いたウィル
ス液のみ、または鶏伝染性喉頭気管炎ウィルスを鶏卵の
しよう尿腔液で培養したウィルス液を主成分とする弱毒
化生ワクチンであり、ウィルスの自然感染部位のひとつ
である眼に接種し、鶏に免疫を与えるものである。しか
い　この鶏伝染性喉頭気管炎ワクチンには、鶏伝染性喉
頭気管炎に対する十分な免疫効果という点と、接種時期
の２つの点てまだ問題が残されている。

すなわち、現行の鶏伝染性喉頭気管炎ワクチン接種では
、１４日齢以前の鶏にワクチン接種したものには免疫効
果が現れないことが確認されており、１４日齢以降の鶏
にしか十分な効果を得ることができない。そのため、鶏
す月４日齢以前に鶏伝染性喉頭気管炎ウィルスの感染を
受けた゛場合にはこれを防ぐことができないという大き
な問題が残っている。また鶏は、１４日齢ともなると体
も大きくなり、動作も俊敏となるために、この時期に鶏
を捕まえ、−羽一羽にワクチンを接種することは、鶏に
よけいなストレスを与える原因となっているとともに、
多数羽飼育が進んでいる日本の１Ｎ鶏業者にとって、経
済的にも、労働力の面からも非常に大きな負担となって
いる。また、点眼用ワクチンは弱毒化されてはいるとは
いえ、接種反応の恐れは依然として残されている。

一方、現在使用されているマレック病ワクチンは、弱毒
マレック病ウィルスまたは弱毒七面鳥ヘルペスウィルス
を培養細胞で培養した感染細胞を有効成分とするワクチ
ンであり通常０日齢の鶏に接種されている。マレック病
ワクチンで感染細胞を有効成分として用いる理由はマレ
ック病ウィルスが非常に不安定なウィルスであり、培養
細胞を用いて培養する場合でも、細胞外にウィルスが出
るとすぐにウィルスに変化が生じ、ワクチンとしての抗
原性が失われてしまうという性質を持っているためであ
る。上述した理由で、現在のところ鶏伝染性喉頭気管炎
とマレック病ワクチンの混合ワクチンは開発されておら
ず、また鶏伝染性喉頭気管炎ワクチン自体もいまだ満足
できるものは開発されていない。

１１夏亘力 本発明の目的は、０日齢の鶏にも接種できる改良された
鶏伝染性喉頭気管炎ワクチンを提供することである０本
発明のさらに別の目的はマレック病ワクチンと同様に皮
下接”種可能な鵬伝染性喉頭気管炎ワクチンを提供駅　
それによって鶏伝染性喉頭気管炎・　マレック混合ワク
チンを提供することである。

本発明のこれら、および他の目的は、弱毒鶏伝染性喉頭
気管炎ウィルスを培養細胞で培養して得た感染細胞を有
効成分とする鶏伝染性喉頭気管炎生ウィルスワクチンを
提供することによって達成される。即ち、上述のマレッ
クウィルス以外の一般的な特別の事情をもたないウィル
スを用いるワクチンでは、通常ワクチンとして必要な成
分であるウィルスのみを精製し、これ以外の培養細胞等
、不要と考えられる成分は取り除いてワクチン精製品に
するのが通常の概念であるが、本発明者らは、鶏伝染性
喉頭気管炎ウィルス感染細胞を主成分とするものを鶏に
接種したところ意外にもこれが有効であり、かつ皮下接
種できることを見い出した。

本発明はこの知見に基ずくものであり、さらに検討を進
めた結果、この感染細胞からなるワクチンは鶏に対して
極めて安全であることを確認した。

すなわち、この感染細胞を成分とする新しいワクチンを
、これまでのワクチンの接種において行っていた１４日
齢以降の鶏への点眼法ではなく、養鵬業者にとっても接
種が容易な、初生時の鶏の皮下または筋肉内に接種する
ことにより鵬伝染性喉頭気管炎ウィルスに対して十分な
免疫効果が１４日齢以前でも得られ、かつ接種による鶏
への副作用も生じないことを見い出し本発明を完成する
に至ったのである。

本発明によれば、初生時の鶏に対する１回の皮下または
筋肉的接種により、永続的な免疫効果を得ることが可能
な弱毒鶏伝染性喉頭気管炎生ワクチンが提供される。さ
らには、この弱毒鶏伝染性喉頭気管炎つィルス感染培ｉ
ｎ胞と、弱毒マレック病ウィルスまたは七面鳥ヘルペス
ウィルスの感染細胞を混合したワクチンにより、初生時
の鶏に対する１回の接種によって永続的な免疫効果を得
ることが可能な弱毒鶏伝染性喉頭気管炎・マレック病混
合生ワクチンをも提供できる。

口の　　およ　　の７ 本発明で鶏伝染性喉頭気管炎またはマレック病ウィルス
の培養に使用する細胞としては、通常本目的に使用され
る培養細胞、例えば鶏胚由来培養細胞、鶏胚由来培養細
胞、アヒル腎由来培養細胞およびアヒル胚由来培養細胞
などをあげることができる。

培養するウィルスとしては、鶏伝染性喉頭気管炎ワクチ
ン用には、弱毒化した鶏伝染性喉頭気管炎ウィルスたと
えば鶏伝染性喉頭気管炎つィルスＣＥ株等を用い、マレ
ック病ワクチン用には、弱毒化したマレック病ウィルス
または七面鳥ヘルペスウィルスを用い得る。

培養方法は、上記培養細胞に適当量の弱毒ウィルスを感
染させ、その細胞浮遊液を培養びんまたはタンクを用い
て通常の培養条件下で、例えば３７℃で４〜５日問培養
する。細胞中でウィルスが増殖極期に達したところで、
細胞をトリプシン等で浮遊させ遠心操作により感染細胞
を採取し、適当な濃度に牛血溝等を用い浮遊させワクチ
ン原液を得る。ワクチン原液は、無菌試験、マイコプラ
ズマ否定試験等のワクチンの安全性確認のため必要な試
験を行ったあと分注し保存する。また、ワクチンの剤型
としては、感染培養細胞をジメチルスルホキシドやグリ
セリンなどの凍結保護剤で懸濁し、液体窒素中で凍結保
存する凍結ワクチンおよび、適当な凍結保護剤に感染培
養細胞を懸濁させたあと、凍結乾燥をおこなう凍結乾燥
ワクチンのいずれてあってもよい。

本発明の鶏伝染性喉頭気管炎ワクチンの有効投与量はウ
ィルス量にしてＴＣＩ０５０で１０３〜１０５程度であ
る。

鶏伝染性喉頭気管炎ワクチンとマレック病ワクチンの混
合ワクチンを製造する場合には、それぞれの弱毒ウィル
スを培養細胞を用いて別々に１ｇ養し、それぞれの有効
量を適当に混合してワクチン原液を得る。またウィルス
培養時において両者のウィルスを混合し、同じ培養細胞
で同時に培養させることも可能である。このような混合
ワクチンの場合、ワクチンとしての有効性が他方の有効
成分によって損なわれる干渉作用が認められる場合が多
々あるが、本発明において後述の実施例で示すごとく、
そのような干渉作用は認められず、有効な混合ワクチン
を得ることが出来る。

本発明の最も大きな効果は、従来の鶏伝染性喉頭気管炎
ワクチンでは達せられなかった初生鶏に対し皮下または
筋肉内接種が可能となることである。すなわち、これま
での鶏伝染性喉頭気管炎ワクチンでは１４日齢以降の鶏
を接種の対象とし、通常は十分な有効性という観点から
、更に成長した２１日齢程度の鶏に接種していたため、
それ以前の感染については予防法が全くないのが現状で
あフた。これに対して、本発明のワクチンを使用すれば
、初生時の鶏にワクチンの接種が可能となり、またその
有効性、安全性も十分に達せられることから、飼育鶏の
鶏伝染性喉頭気管炎をほぼ完全に予防することができる
という大きな利点を得ることが出来る。

また、このような生まれて間もない雛にワクチン接種す
る場合、雛に母体から授かった移行抗体が存在している
ことで、十分なワクチンの効果が得られない場合がある
と言われている。しかしながら、本発明のワクチンでは
、雛の体内に鶏伝染性喉頭気管炎ウィルスに対する移行
抗体が存在する場合でも、ワクチンとしての十分な有効
性があることが確認された。これは、ワクチンとして接
種する鶏伝染性喉頭気管炎ウィルスが課の状態ではなく
、培養細胞の細胞膜で覆われているために移行抗体から
の影響を免れるのではないかと考えられる。

しかも、以上のような有効性の面での大きな効果に加え
て、本発明のワクチンは、比較的おとなしい初生時の鶏
に接種できるため、１４日齢以降の鶏に接種するこれま
でのワクチンのように、接種する作業者にとって多大な
労力を費やすことなく鶏に接種することができる。一般
にこの業界においては、授精鶏卵をふ化業者がふ化させ
た後、その雛が養鶏業者に渡されるというシステムが通
常であるため、本ワクチンでは、ふ化業者によフて鶏に
接種することが可能となる。このことは養鶏業者の労働
力の省力化の面においても大きな効果をもたらす。通常
、マレック病のワクチンなどは現在この時期に鶏に接種
されていることからして、本発明のひとつの実施態様で
ある混合ワクチンの形として使用できることは箭化業者
にも何ら余計な手間を生じさせないものである。

次に、本発明を実施例に沿って、更に詳細に説明する。

友」Ｌ労」。

９〜１１日齢のＳＰＦ鶏由来胚細胞を無菌的に採取し、
０．２５％トリプシン溶液で消化し、細胞浮遊液（２Ｘ
ＩＯ’個／１）を得た。細胞浮遊液１００ｍ１につき１
０３ｅＴＣＩ０５０の割合で、弱毒鶏伝染性喉頭気管炎
つィルスＣＥ株を加え、培養びん（ルーびんまたは回転
培養びん）に１００１〜１５０１ずつ分注し、３７℃で
４〜５日間培養し！、：：、ＣＰＥが８０％以上に出現
したことを確かめ、トリプシンで消化し、遠心分離（１
５００ｒｐｍ、　５分）して感染細胞を採取した。採取
した感染細胞を混合して、細胞数が１０７θ個になるよ
うに牛胎児血清を含むＭＥＭ培地に浮遊させワクチン原
液とした。ワクチン原液については、焦面試験、マイコ
プラズマ否定試験を行い、安全性を確認した。ワクチン
原液にジメチルスルホキシド１０ｖ／ｖ％、ベンジルペ
ニシリンカリウムｌｏｏ単位／１および硫酸ストレプト
マイシンｌｏｏμ８／１を加え、アンプルに分注した。

溶封したアンプルは液体窒素を用いて一１００℃以下に
凍結保存した。カゼイン氷解物４．０ｇ、塩化ナトリウ
ム７．９６５ｇ、リン酸−ナトリウム０．１８ｇ、リン
酸二ナトリウム１．５３ｇおよびフェノールレッド０．
０２５ｇを蒸留水９９０１に溶解したものを用意し、こ
れを滅菌した後、ワクチンの溶解用液として用いた。

このワクチンの安全性を調−へるために、正常の鶏を用
い、０日齢と、２１日齢の鶏の頚部皮下および筋肉内に
それぞれ接種した。その結果を第１表と第２表に示した
。

（以下余白） 第１表 臨床観察 ■　　　０　１０　　皮下　０．２　　ｔｏ”　　異常
なし　＋６３　　７７１１Ｉ　　　Ｏｔｏ　　筋肉内　
０．２　１０’＝　　異常なし　１６３　　７９６ＩＩ
Ｉ　　　Ｏ１０非接種対照　　　異常なし　＋６３　　
７８０第２表 臨床観察 １　　　２＋　　　１０　　　皮下　０．２　１０’５
　　異常なし　３９０　　７８４１１　　２１　　１０
　　筋肉内　０．２　１０’・５　異常なし　３７２　
　７６５ｍ　　　２１　　１０　　　　非接種対照　　
　異常なし　３７４　　７８＋上記の表から明らかなよ
うに、０日齢、２１日齢いずれの鶏からも異常は認めら
れず、本ワクチンが十分に安全であることを確認した。

次に、本ワクチンの有効性を調べるために、０日齢の鶏
の頚部皮下および筋肉内に本ワクチンを接種し、接種後
の２．４．６．８および１０週ロー強毒の鶏伝染性喉頭
気管炎ウィルスＮＳ−１７５株で気管内攻撃を行い、攻
撃後各部の臨床症状をＩＯ日間観察したところ、第３表
のとおりてあった。

第３表 １　本発明品　皮下　　１０’ｌＩ５　　１０　　１５
　　３０　（５）　　２５　（５）■　本発明品　筋肉
内　１０’・θ　　１０　　１０　　３０　　２５（０
）　　３０（５）■　　従来品　　皮下　　１０’・５
３０　　５０　　７０　　９ｆＸ３０）　　９０（４０
）■　　従来品　　点眼　　１０’・５１０　　６５　
　７０　　７５（３０）　　８５（３０）■　　　　　
　非接種対照　　　　　１００　４００　　ｔｏｏ　　
１００（ｔｏｏ）　＋００（９０）（）内の数値は、死
亡および重度の症状の発生率を示すこの表の結果かられ
かるように、本ワクチンを接種した鶏は、接種後ｌＯ週
間、鶏伝染性喉頭気管炎ウィルスに対する十分な免疫を
保有していたが、ワクチンを接種していない鶏では金利
に、また現行ワクチンを点眼接種した鶏においても高率
に鶏伝染性喉頭気管炎の症状を示した。また従来のワク
チンに比べて本発明のワクチンを接種した鶏では、重度
の症状や死亡した鶏の発生率が低く、発症しても症状が
軽いことがわかる。すなわち、このような結果から本ワ
クチンは、鶏伝染性喉頭気管炎の発症予防に十分有効で
あることを確認した。

及立且ス 実施例１と同様に、鶏胚来細胞に弱毒鶏伝染性喉頭気管
炎つィルスＣＥ株を感染させ増殖極期に感染細胞を採取
した。一方、七面鳥ヘルペスウィルスＹＴ−７株を同様
に鶏胚由来細胞に感染させ感染細胞を採取した。これら
両感染細胞を混合し、実施例１と同様に牛脂児血清含む
イーグルＭＥＭ培地で懸濁させ、ジメチルスルホキシド
等を加えてワクチン原液を得、その後同様に液体窒素中
で凍結保存した。

この混合ワクチンの安全性を調べるために、正常の鶏を
用い、０日齢と、２１日齢の鶏の頚部皮下および筋肉内
にそれぞれ接種した。その結果を第４表と第５表に示し
た。

第４表 接種ｊ１　　　　　　　臨　床　観　察■　　　０　　
！０　　皮下　０．２１０′７２０００　　異常なし　
＋７０　　７６８■　　０　１０　　筋肉内０．２］０
′７２０００　　異常なし　１７２　　７７７■　　０
　１０　　　　非接種対照　　　　異常なし　＋６１　
　７８０（注）Ｌ二弱毒鶏伝染性喉頭気管炎つィルスＣ
Ｅ株Ｍ二七面鳥ヘルペスウィルスＹＴ−７株第５表 接種量　　臨床観察 Ｉ２１１０　　　皮下　０．２１０′７２０００　　異
常なし　３７２　　７９０１１２＋１０　　　筋肉内０
．２１０”　　２０００　　異常なＬ／　　３８８　　
７７９ｍ２１１０　　　　　非接種対照　　　　　異常
なし　３７４　　７８＋（注）　し二弱毒鶏伝染性喉頭
気管炎つィルスＣＥ株Ｍ＝七面鳥ヘルペスウィルスＹＴ
−７株上記の表から明らかなように、０日齢、２１日齢
いずれの鶏からも異常は認められず、本混合ワクチンが
十分に安全であることを確認した。

次に、本混合ワクチンの有効性を調べるために、０日齢
の鶏の頚部皮下および筋肉内に本混合ワクチンを接種し
、接種後の２．４．６．８およびｌＯ０週目強毒の鶏伝
染性喉頭気管炎ウィルスＮ５−１７５株で気管内攻撃を
行い、攻撃後各部の臨床症状を１０日問観察したところ
、第６表のとおりであった。

また接種後２週目に強毒マレック病ウィルスのアラバマ
株で腹腔内攻撃を行い、攻撃後の各部の臨床症状をＩＯ
週間観察したところ第７表のとおりであった。

（以下余白） 第６表 ワクチン接種 ■　　　皮下　１０”２０００　　　１０　　１０　　
２０　　２５　　３０■　　筋肉内１０”２０００　　
　　５　　１５　　２５　　２０　　３５■　　　点眼
　１０’・’　　−１０６５ＴＯ７５８５■　　　　非
接種対Ｙ４１００　　１００　　１００　　１００　　
１００（注）Ｌ二弱毒鶏伝染性喉頭気管炎つィルスＣＥ
株Ｍ＝七面鳥ヘルペスウィルスＹＴ−７株第７表 ■　　　　皮下　　　１０４−＠　　　　２０００　　
　　　　　　０に■　　　　筋肉内　　１０’−８２０
００５Ｘ■　　　　皮下　　　　　　　　　２０００　
　　　　　　１０Ｘ■　　　　　　　　　非接種対照　
　　　　　　　　　　１００１（注）Ｌ二弱毒鶏伝染性
喉頭気管炎つィルスＣＥ株Ｍ＝七面鳥ヘルペスウィルス
ＹＴ−７株これらの表から明らかなように、本混合ワク
チンを接種した鶏は、鶏伝染性喉頭気管炎ウィルスに対
しても、マレック病ウィルスに対しても十分な免疫を保
有していることがわかる。また第７表から、マレック病
ウィルスに対しての免疫効果においても、鶏伝染性喉頭
気管炎ワクチンと混合したことによるワクチンの有効性
の低下は認められないことがわかる。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）弱毒鶏伝染性喉頭気管炎ウィルスを培養細胞で培
   養して得た感染細胞を有効成分とする鶏伝染性喉頭気管
   炎生ウイルスワクチン。
2. （２）弱毒鶏伝染性喉頭気管炎ウィルスを培養細胞で培
   養して得た感染細胞と、弱毒マレック病ウィルスまたは
   七面鳥ヘルペスウィルスを培養細胞で培養して得た感染
   細胞とを混合した鶏伝染性喉頭気管炎・マレック病混合
   生ワクチン。
3. （３）ワクチンが皮下または筋肉内接種用である前記第
   （１）項または第（２）項記載のワクチン。