DE3782986T2 - Verfahren zur trennung von n-geschuetzten alpha-l-aspartyl-l-phenylalaninen. - Google Patents

Verfahren zur trennung von n-geschuetzten alpha-l-aspartyl-l-phenylalaninen.

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DE3782986T2 DE8787307027T DE3782986T DE3782986T2 DE 3782986 T2 DE3782986 T2 DE 3782986T2 DE 8787307027 T DE8787307027 T DE 8787307027T DE 3782986 T DE3782986 T DE 3782986T DE 3782986 T2 DE3782986 T2 DE 3782986T2
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Description

  • Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zum Abtrennen von N-geschütztem α-L-Aspartyl-L-phenylalanin.
  • α-L-Aspartyl-L-phenylalanin-methylester (Aspartam) ist als ausgezeichnetes Süßmittel bekannt, und es sind verschiedene Verfahren zu seiner Herstellung vorgeschlagen worden. Da jedoch α-L-Aspartyl-D-phenylalanin-methylester, der sein Diastereomer ist, keine Süßkraft besitzt, ist bisher über keinen Versuch berichtet worden, bei der Herstellung von Aspartam und seinen verwandten Verbindungen D,L-Phenylalanin als Phenylalaninkomponente zu verwenden. Bei den bekannten Verfahren, beispielsweise bei dem Verfahren zur Herstellung von N-Formyl-α-L-aspartyl-L- phenylalanin durch Kondensation von N-Formyl-L-asparaginsäureanhydrid und Phenylalanin in Essigsäure (US-Patent 3,933,781) oder in einem alkalischen wäßrigen Medium (EP-A-0 186 378), wird L-Phenylalanin als Phenylalaninkomponente verwendet.
  • Wenn es möglich gemacht wird, D,L-Phenylalanin, das weniger teuer ist als L-Phenylalanin, für die Herstellung von Aspartam zu verwenden, wird das Herstellungsverfahren bei der industriellen Anwendung viel vorteilhafter, da es unnötig wird, L-Phenylalanin durch optische Trennung von D,L-Phenylalanin oder in einem komplizierten Verfahren durch asymmetrische Synthese zu erhalten. Wenn jedoch D,L-Phenylalanin mit beispielsweise N- geschütztem L-Asparaginsäureanhydrid kondensiert wird, werden neben dem angestrebten N-geschützten α-L-Aspartyl-L-phenylalanin (1) drei weitere Isomere, nämlich N-geschütztes α-L- Aspartyl-D-phenylalanin (2), N-geschütztes β-L-Aspartyl-L- phenylalanin (3) und N-geschütztes β-L-Aspartyl-D-phenylalanin (4) erzeugt, wie durch die folgenden chemischen Formeln gezeigt wird:
  • Wenn es möglich wird, das angestrebte N-geschützte α-L-Aspartyl-L-phenylalanin für sich allein aus einem Gemisch der vier Isomeren abzutrennen, kann die abgetrennte Verbindung (1) durch ein Verfahren in α-L-Aspartyl-L-phenylalanin-methylester umgewandelt werden, das die Deformylierung in einer Methanol/Chlorwasserstoffsäure-Lösung und die anschließende Veresterung (US-Patent 3,933,781) in dem Fall umfaßt, in dem die Schutzgruppe eine Formylgruppe ist, und somit kann ein industriell vorteilhaftes Aspartam-Herstellungsverfahren geschaffen werden.
  • Wie jedoch vorstehend erwähnt, gibt es bislang weder irgendeinen Bericht über die Verwendung von D,L-Phenylalanin für die Herstellung von Aspartam und seine verwandten Verbindungen noch sind irgendwelche Daten über die Eigenschaften, insbesondere die Löslichkeit, von N-geschütztem α-L-Aspartyl-D-phenylalanin und N-geschütztem β-L-Aspartyl-D-phenylalanin, die durch Kondensation von N-geschütztem L-Asparaginsäureanhydrid und D- Phenylalanin erzeugt werden, verfügbar, und deshalb gibt es bislang noch kein industrielles Verfahren zur selektiven Abtrennung des gewünschten N-geschützten α-L-Aspartyl-L-phenylalanins aus dem Gemisch der vier Isomeren.
  • Gemäß dem Stand der Technik ist die Entfernung des β-Isomeren (N-geschütztes β-L-Aspartyl-L-phenylalanin), das als Nebenprodukt gebildet wird, wenn N-geschütztes L-Asparaginsäureanhydrid und L-Phenylalanin umgesetzt werden, beispielsweise in dem Fall, in dem die Schutzgruppe eine Formylgruppe war, durch separates Ausfällen des angestrebten N-Formyl-α-L-aspartyl-L- phenylalanins aus einer Essigsäurelösung (US-Patent 3,933,781) oder aus einer wäßrigen Lösung (EP-A-0 186 378) durchgeführt worden, wobei N-Formyl-β-L-aspartyl-L-phenylalanin in der Mutterlauge zurückbleibt. Diese Entfernung des β-Isomeren beruht darauf, daß das α-Isomere in größerer Menge gebildet wird und eine geringere Löslichkeit besitzt als das β-Isomere. Was die gebildete Menge angeht, so beträgt bei diesen Verfahren die des N-Formyl-β- L-aspartyl-L-phenylalanins nur etwa 1/3 bis 1/4 der Menge des N-Formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanins.
  • In EP-A-0 149 263 ist auch die Abtrennung des α-L-Aspartyl-L- phenylalanin-methylesters von α-L-Aspartyl-D-phenylalaninmethylester durch selektive Kristallisation aus Wasser, aus Alkohol oder aus wäßrig-alkoholischen Gemischen beschrieben. EP-A-0 149 263 offenbart auch die Abtrennung von N-geschütztem α-L-Aspartyl-L-phenylalanin-methylester von N-geschütztem α-L- Aspartyl-D-phenylalanin-methylester durch selektive Kristallisation und die Abtrennung von α-L-Aspartyl-β-chlor-D,L-phenylalanin-methylester von β-L-Aspartyl-β-chlor-D, L-phenylalanin-methylester durch selektive Kristallisation. EP-A-0 149 263 schlägt jedoch nicht die Herstellung von α-L-Aspartyl-L- phenylalanin-methylester ausgehend von D,L-Phenylalanin unter Anwendung der selektiven Kristallisation vor.
  • Im Falle der Verwendung von D,L-Phenylalanin ist die Menge des gebildeten N-geschützten α-L-Aspartyl-D-phenylalanins fast gleich groß wie die des N-geschützten α-L-Aspartyl-L-phenylalanins, so daß die Entfernung dieses Isomeren das größte Problem darstellt.
  • Als Ergebnis von Untersuchungen zur Lösung dieses Problems wurde erfindungsgemäß gefunden, daß N-geschütztes α-L-Aspartyl-L-phenylalanin in essigsauren Lösungsmitteln oder wäßrigen Lösungsmitteln weniger löslich ist als N-geschütztes α-L-Aspartyl-D-phenylalanin, so daß das erstere durch Kristallisation für sich allein ausgefällt werden kann. Es wurde weiterhin gefunden, daß, wenn N-geschütztes L-Asparaginsäureanhydrid und D,L-phenylalanin in einem essigsauren Lösungsmittel oder einem wäßrigen Lösungsmittel kondensiert werden, die Menge an erzeugtem N-geschütztem β-L-Aspartyl-D-phenylalanin so gering wie die an N-geschütztem β-L-Aspartyl-L-phenylalanin ist, und diese beiden Nebenprodukte werden bei einem Kristallisationsvorgang nicht ausgefällt, so daß es möglich ist, N-geschütztes α-L- Aspartyl-L-phenylalanin für sich allein aus einem Gemisch der vier Isomeren separat zu kristallisieren. Die vorliegende Erfindung wurde auf der Basis dieser Erkenntnisse konzipiert.
  • Gemäß der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zum Abtrennen von N-geschütztem α-L-Aspartyl-L-phenylalanin vorgesehen, welches die selektive Kristallisation von N-geschütztem α-L- Aspartyl-L-phenylalanin aus einer essigsauren Lösung von N- geschütztem α-L-Aspartyl-L-phenylalanin umfaßt, die mindestens N-geschütztes α-L-Aspartyl-D-phenylalanin als Verunreinigung enthält, wobei die essigsaure Lösung eine Reaktionslösung ist, die durch Kondensation von N-geschütztem L-Asparaginsäureanhydrid und D,L-Phenylalanin in einem essigsauren Lösungsmittel gebildet wurde.
  • Die vorliegende Erfindung sieht auch ein Verfahren zum Abtrennen von N-geschütztem α-L-Aspartyl-L-phenylalanin vor, welches die selektive Kristallisation von N-geschütztem α-L-Aspartyl-L- phenylalanin aus einer wäßrigen Lösung von N-geschütztem α-L- Aspartyl-L-phenylalanin, die mindestens N-geschütztes α-L- Aspartyl-D-phenylalanin als Verunreinigung enthält, umfaßt, wobei die wäßrige Lösung eine Reaktionslösung ist, die durch Kondensation von N-geschütztem L-Asparaginsäureanhydrid und D,L-Phenylalanin in einem wäßrigen Lösungsmittel unter Einhalten eines pH-Wertes von 7 oder darüber und einer Temperatur von 30ºC oder darunter und durch anschließendes Ansäuern der Reaktionslösung gebildet wurde.
  • Das wäßrige Lösungsmittel (in der wäßrigen Lösung verwendetes Lösungsmittel) oder das essigsaure Lösungsmittel (in der essigsauren Lösung verwendetes Lösungsmittel), wie sie erfindungsgemäß verwendet werden, sind nicht besonders eingeschränkt, und es können beliebige Arten von Lösungsmitteln verwendet werden, vorausgesetzt, daß sie nicht mit den vier Isomeren reagieren. Als essigsaures Lösungsmittel können Essigsäure oder Gemische von Essigsäure mit anderen organischen Lösungsmitteln oder Wasser verwendet werden. Als wäßrige Lösungsmittel können Wasser oder Gemische von Wasser und mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmitteln verwendet werden. Solche organischen Lösungsmittel können beispielsweise aus Ethern, wie Diethylether, Dioxan und Tetrahydrofuran, Kohlenwasserstoffen, wie Hexan und Toluol, Alkylhalogeniden, wie Chloroform und Ethylendichlorid, Essigsäureestern, wie Ethylacetat, Alkoholen, wie Methanol, Ethanol und Isopropanol, Ketonen, wie Aceton, Carbonsäuren, wie Essigsäure und Propionsäure, Amiden, wie Dimethylformamid, und Säureanhydriden, wie Essigsäureanhydrid, ausgewählt werden.
  • Das Mischungsverhältnis von Wasser zu organischem Lösungsmittel oder das Mischungsverhältnis von Essigsäure zu Wasser oder organischem Lösungsmittel ist bei dieser Erfindung nicht kritisch; es kann jedes beliebige Mischungsverhältnis angewendet werden, wenn die gemischten Lösungsmittel sich unter Bildung eines einheitlichen Gemisches gegenseitig lösen und auch die drei Isomeren mit Ausnahme des angestrebten N-geschützten α-L- Aspartyl-L-phenylalanins gelöst werden.
  • Es ist möglich, als Schutzgruppen für die Aminogruppe der Asparaginsäurekomponente die zu verwenden, die üblicherweise für Peptidsynthesen benutzt werden, wie Formyl, Acetyl, Benzyloxycarbonyl, tert.-Butoxycarbonyl u. dgl.
  • Wenn eine N-geschütztes α-L-Aspartyl-L-phenylalanin (angestrebte Substanz) und N-geschütztes α-L-Aspartyl-D-phenylalanin enthaltende essigsaure Lösung oder wäßrige Lösung, erforderlichenfalls nach Einengen der Lösung, abgekühlt wird, scheidet sich die angestrebte Substanz ab, da ihre Löslichkeit geringer ist als die des N-geschützten α-L-Aspartyl-D-phenylalanins.
  • Tabelle 1 zeigt die Löslichkeit der beiden Isomeren, bei denen die Schutzgruppe Formyl ist, d.h. von N-Formyl-α-L-aspartyl-L- phenylalanin und von N-Formyl-α-L-aspartyl-D-phenylalanin. Tabelle 1 Material Löslichkeit * N-Formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanin N-Formyl-α-L-aspartyl-D-phenylalanin * Löslichkeit, gemessen bei Verwendung von Essigsäure als Lösungsmittel. Einheit: g/dl
  • Die Abkühlungstemperatur beträgt vorzugsweise -5 bis 50ºC. Der Kristallisationsvorgang wird beendet, bevor sich die anderen Isomeren abscheiden, und die abgetrennte angestrebte Substanz wird von der Mutterlauge abfiltriert, dann gewaschen und nach herkömmlichen Methoden getrocknet, wodurch N-geschütztes α-L- Aspartyl-L-phenylalanin mit einer Reinheit von mindestens 90 % erhalten wird.
  • Wenn die angestrebte Substanz von der wäßrigen Lösung des Isomerengemisches abgetrennt wird, ist es zu bevorzugen, den pH- Wert der Lösung mit einer anorganischen Säure, wie Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure usw., oder einer organischen Säure, wie Zitronensäure oder Ameisensäure, auf 1,0 bis 3,5 einzustellen.
  • Das obige Abtrennungsverfahren kann auf die selektive Abtrennung der angestrebten Sustanz aus einer Lösung angewandt werden, die N-geschütztes α-L-Aspartyl-L-phenylalanin (angestrebte Substanz), N-geschütztes α-L-Aspartyl-D-phenylalanin, N- geschütztes β-L-Aspartyl-L-phenylalanin und N-geschütztes β-L- Aspartyl-D-phenylalanin enthält und die durch Umsetzen von N- geschütztem L-Asparaginsäureanhydrid und D,L-Phenylalanin in einem essigsauren Lösungsmittel oder einem wäßrigen Lösungsmittel erhalten wurde.
  • Die Umsetzung von N-geschütztem L-Asparaginsäureanhydrid und D,L-Phenylalanin wird vorzugsweise bei einem Molverhältnis von N-geschütztem L-Asparaginsäureanhydrid zu D,L-Phenylalanin von 0,4 bis 3,0 durchgeführt. Was die Art und Weise der Vermischung von N-geschütztem L-Asparaginsäureanhydrid und D,L-Phenylalanin in dem Fall angeht, daß in einem essigsauren Lösungsmittel umgesetzt wird, so kann entweder das Verfahren, bei dem N- geschütztes L-Asparaginsäureanhydrid zu der Lösung von D,L-Phenylalanin zugesetzt wird, oder das Verfahren, bei dem D,L-Phenylalanin zu der Lösung von N-geschütztem L-Asparaginsäureanhydrid zugesetzt wird, angewandt werden, aber im allgemeinen erbringt das letztere eine höhere Ausbeute. Im Falle der Umsetzung in einem wäßrigen Lösungsmittel ist das erstere Verfahren zu bevorzugen.
  • Die Kondensationsreaktion läuft, wenn sie in einem essigsauren Lösungsmittel durchgeführt wird, bei Raumtemperatur glatt ab, aber es ist zu bevorzugen, die Umsetzung bei einer Temperatur von 0 bis 60ºC durchzuführen. In dem Fall, daß die Kondensationsreaktion in einem wäßrigen Lösungsmittel durchgeführt wird, wird vorzugsweise bei einer Temperatur von nicht höher als 30ºC umgesetzt, wobei der PH-Wert der Lösung auf 7 oder darüber, vorzugsweise auf 7 bis 12, gehalten wird.
  • Es erübrigt sich zu sagen, daß das bei der obigen Umsetzung verwendete D,L-Phenylalanin nicht unbedingt eine racemische Modifikation sein kann.
  • Für die selektive Abtrennung der angestrebten Substanz aus einer essigsauren Lösung oder einer wäßrigen Lösung, die die vier Isomeren enthält, nämlich N-geschütztes α-L-Aspartyl-L- phenylalanin (angestrebte Substanz), N-geschütztes α-L-Aspartyl-D-phenylalanin, N-geschütztes β-L-Aspartyl-L-phenylalanin und N-geschütztes β-L-Aspartyl-D-phenylalanin, und die durch die Kondensationsreaktion von N-geschütztem L-Asparaginsäureanhydrid und D,L-Phenylalanin erhalten wurde, können dieselben Arbeitsgänge wie im Falle der selektiven Abtrennung der angestrebten Substanz aus einer essigsauren Lösung oder einer wäßrigen Lösung, die die beiden Isomeren, nämlich N-geschütztes α- L-Aspartyl-L-phenylalanin (angestrebte Substanz) und N-geschütztes α-L-Aspartyl-D-phenylalanin, enthält, wie vorstehend beschrieben, angewandt werden.
  • Wenn die essigsaure Lösung oder die wäßrige Lösung der vier Isomeren, erforderlichenfalls nach Einengen der Lösung, auf vorzugsweise -5 bis 50ºC abgekühlt wird, scheidet sich die angestrebte Substanz als erste ab, weil die angestrebte Substanz die geringste Löslichkeit von den vier Isomeren besitzt. In dem Fall, daß die Kondensationsreaktion in einem wäßrigen Lösungsmittel durchgeführt wird, ist es zu bevorzugen, den pH- Wert der Lösung vor der Kristallisation mit einer anorganischen Säure, wie Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure usw., oder einer organischen Säure, wie Zitronensäure, Ameisensäure usw., auf 1,0 bis 3,5 einzustellen.
  • Die ausgefällte angestrebte Substanz wird durch geeignete Maßnahmen, wie Filtration, von der Mutterlauge abgetrennt, ehe sich die anderen Isomeren abscheiden, und die abgetrennte Substanz wird gewaschen und getrocknet. Auf diese Weise kann N- geschütztes α-L-Aspartyl-L-phenylalanin mit einer Reinheit von mindestens 90 % erhalten werden.
  • Wie vorstehend erläutert, kann gemäß dem Abtrennungsverfahren nach der vorliegenden Erfindung die Trennung von N-geschütztem α-L-Aspartyl-L-phenylalanin und N-geschütztem α-L-Aspartyl-D- phenylalanin, die in der Vergangenheit unbekannt war, sehr leicht vollzogen werden. Das Abtrennungsverfahren nach der Erfindung macht es außerdem möglich, für die Bildung des Zwischenproduktes bei der Herstellung von Aspartam, wofür bei den bekannten Verfahren L-Phenylalanin verwendet worden ist, D,L- Phenylalanin zu verwenden, das weniger teuer ist als L-Phenylalanin.
  • Die vorliegende Erfindung wird unter Bezugnahme auf die folgenden, keinerlei Einschränkung bedeutenden Beispiele ausführlicher beschrieben.
  • In den nachstehend angeführten Beispielen wurde die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (nachstehend abgekürzt als HPCL bezeichnet) unter den folgenden Bedingungen durchgeführt:
  • Säule: YMC-Packung A-312 (ODS), 6 mm φ x 150 mm
  • Mobile Phase: 15 % Methanol, 0,2 M NaH&sub2;PO&sub4; (pH 4,5)
  • Fließrate: 1,0 ml/min
  • Temperatur: 40ºC
  • Nachweis: 210 nm
    • BEISPIEL 1:
  • N-Formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanin (0,30 g (0,97 mmol)) und
  • N-Formyl-α-L-aspartyl-D-phenylalanin (0,30 g (0,97 mmol)) wurden in 12 ml 1 n NaOH gelöst. Der pH-Wert der Lösung wurde durch Zusetzen von 6 n HCl auf 3,0 eingestellt. Nach einer Stunde wurde der pH-Wert auf 1,4 herabgesetzt, und die Lösung wurde bei Raumtemperatur über Nacht stehengelassen.
  • Die abgeschiedenen Kristalle wurden durch Saugfiltration abgetrennt, mit einer kleinen Menge kaltem Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet, wobei 0,20 g Kristalle erhalten wurden. Das Ergebnis der HPCL-Analyse des Produktes zeigte, daß es N- Formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanin mit einer Reinheit von von 98,7 % war.
    • BEISPIEL 2:
  • N-Formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanin (0,50 g (1,62 mmol)) und N-Formyl-α-L-aspartyl-D-phenylalanin (0,50 g (1,62 mmol)) wurden bei einer Temperatur von 70ºC in 10 ml Essigsäure gelöst, und die Lösung wurde bei Raumtemperatur 3 Tage stehengelassen.
  • Die abgeschiedenen Kristalle wurden durch Saugfiltration abgetrennt, mit einer kleinen Menge Essigsäure gewaschen und im Vakuum getrocknet, wobei 0,30 g Kristalle erhalten wurden. Die HPLC-Analyse bestätigte, daß die erhaltenen Kristalle N-Formyl- α-L-aspartyl-L-phenylalanin mit einer Reinheit von 96,9 % waren.
    • BEISPIEL 3:
  • 1,50 g (10,5 mmol) N-Formyl-L-asparaginsäureanhydrid wurden zu 15 ml Eisessig zugegeben, und die Lösung wurde auf 45ºC erhitzt und gerührt. Zu der Lösung wurden über einen Zeitraum von 20 Minuten 1,68 g (10,2 mmol) D,L-Phenylalanin zugegeben, und die gemischte Lösung wurde bei derselben Temperatur eine Stunde stetig gerührt und dann bei Raumtemperatur 3 Tage stehengelassen.
  • Die abgeschiedenen Kristalle wurden durch Saugfiltration abgetrennt, mit einer kleinen Menge Essigsäure gewaschen und im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute betrug 0,68 g. Das Ergebnis der HPLC-Analyse zeigte, daß das Produkt N-Formyl-α-L-aspartyl-L- phenylalanin mit einer Reinheit von 94,6 % war.
    • BEISPIEL 4:
  • N-Formyl-L-asparaginsäureanhydrid (3,00 g (21,0 mmol)) wurde zu 15 ml Eisessig zugesetzt, und die Lösung wurde auf 45ºC erhitzt und gerührt. Zu dieser Lösung wurden über einen Zeitraum von 20 Minuten 1,68 g (10,2 mmol) D,L-Phenylalanin zugegeben, und die gemischte Lösung wurde bei derselben Temperatur eine Stunde stetig gerührt und dann 4 Tage bei Raumtemperatur stehengelassen.
  • Die abgeschiedenen Kristalle wurden durch Saugfiltration abgetrennt, mit einer kleinen Menge Essigsäure gewaschen und im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute betrug 0,77 g. Das Ergebnis der HPLC-Analyse zeigte, daß dieses Produkt N-Formyl-α-L-aspartyl- L-phenylalanin mit einer Reinheit von 95,3 % war.
    • BEISPIEL 5:
  • N-Formyl-L-asparaginsäureanhydrid (2,63 g (18,4 mmol)) wurde zu 13 ml Eisessig zugesetzt, und das Gemisch wurde bei 60ºC gerührt. Zu dieser Lösung wurden über einen Zeitraum von 20 Minuten 2,94 g (17,8 mmol) D,L-Phenylalanin zugesetzt, und die gemischte Lösung wurde bei derselben Temperatur eine Stunde gerührt und dann weiterhin bei Raumtemperatur über Nacht gerührt.
  • Die abgeschiedenen Kristalle wurden durch Saugfiltration abgetrennt, mit einer kleinen Menge Essigsäure gewaschen und im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute betrug 1,24 g. Durch HPLC-Analyse wurde bestätigt, daß das Produkt N-Formyl-α-L-aspartyl-L- phenylalanin mit einer Reinheit von 92,0 % war.
    • BEISPIEL 6:
  • D,L-Phenylalanin (1,73 g (10,4 mmol)) wurde zu 15 ml Eisessig zugesetzt, und das Gemisch wurde bei 35ºC gerührt. Zu dieser Lösung wurden über einen Zeitraum von 30 Minuten 1,50 g (10,5 mmol) N-Formyl-L-asparaginsäureanhydrid zugesetzt, und die gemischte Lösung wurde bei derselben Temperatur eine Stunde gerührt und dann 5 Tage bei Raumtemperatur stehengelassen.
  • Die abgeschiedenen Kristalle wurden durch Saugfiltration abgetrennt, mit einer kleinen Menge Essigsäure gewaschen und im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute betrug 0,56 g. Das Ergebnis der HPLC-Analyse zeigte, daß das Produkt N-Formyl-α-L-aspartyl-L- phenylalanin mit einer Reinheit von 94,8 % war.
    • BEISPIEL 7:
  • N-Formyl-L-asparaginsäureanhydrid (1,50 g (10,5 mmol)) wurde zu einem 20 ml Eisessig und 5 ml Ethylacetat enthaltenden gemischten Lösungsmittel zugesetzt, und das Gemisch wurde bei 45ºC gerührt. Zu dieser Lösung wurden über einen Zeitraum von 70 Minuten 1,73 g (10,4 mmol) D,L-Phenylalanin zugesetzt, und die gemischte Lösung wurde bei derselben Temperatur eine Stunde gerührt und dann 4 Tage bei Raumtemperatur stehengelassen.
  • Die abgeschiedenen Kristalle wurden durch Saugfiltration abgetrennt, mit einer kleinen Menge Essigsäure gewaschen und im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute betrug 0,34 g. Das Ergebnis der HPLC-Analyse zeigte, daß das Produkt N-Formyl-α-L-aspartyl-L- phenylalanin mit einer Reinheit von 91,3 % war.
    • BEISPIEL 8:
  • Eisessig (10 ml) und Essigsäureanhydrid (1,6 ml) wurden zu 2,36 g (15,0 mmol) N-Acetyl-L-asparaginsäure zugesetzt, und das Gemisch wurde bei Raumtemperatur 5 Stunden gerührt. Die erhaltene aufgeschlämmte Reaktionslösung wurde auf 40ºC erhitzt, und über einen Zeitraum von 90 Minuten wurden 2,47 g (15,0 mmol) D,L-Phenylalanin dazugegeben. Die gemischte Lösung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt, dann mit 10 ml Diethylether und 5 ml Hexan versetzt und bei Raumtemperatur 6 Tage stehengelassen.
  • Die abgeschiedenen Kristalle wurden durch Saugfiltration abgetrennt, mit einer kleinen Menge Essigsäure gewaschen und im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute betrug 0,72 g. Das Produkt wurde durch HPLC-Analyse als N-Acetyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanin mit einer Reinheit von 91,5 % identifiziert.
    • BEISPIEL 9:
  • D,L-Phenylalanin (4,00 g (24,2 mmol)) wurde zu 30 ml Wasser zugesetzt, und die Lösung wurde mit 5 n NaOH auf einen pH-Wert von 12 eingestellt und auf -10ºC abgekühlt. Zu dieser Lösung wurden über einen Zeitraum von 30 Minuten 3,98 g (27,8 mmol) N- Formyl-L-asparaginsäureanhydrid zugegeben. Während dieses Zeitraumes wurden der pH-Wert der Lösung auf 11 bis 13 und die Temperatur auf -5 bis -10ºc gehalten. Nach einer Stunde wurde die Temperatur der Lösung auf Raumtemperatur gesteigert, und ihr pH-Wert wurde mit 1 n HCl auf 3,0 herabgesetzt. Eine Stunde danach wurde der pH-Wert der Lösung mit 1 n HCl weiterhin auf 1,0 herabgesetzt.
  • Die Lösung wurde über Nacht stehengelassen, und die abgeschiedenen Kristalle wurden durch Saugfiltration abgetrennt, mit einer kleinen Menge Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute betrug 2,87 g. Das Ergebnis der HPLC-Analyse zeigte, daß das Produkt N-Formyl-α-L-aspartyl-L-phenylalanin mit einer Reinheit von 97,1 % war.

Claims (5)

1. Verfahren zum Abtrennen von N-geschütztem α-L-Aspartyl-L-phenylalanin, welches die selektive Kristallisation von N-geschütztem α-L-Aspartyl-L-phenylalanin aus einer essigsauren Lösung von N-geschütztem α-L-Aspartyl-L-phenylalanin, das mindestens N-geschütztes α-L-Aspartyl-D-phenylalanin als Verunreinigung enthält, umfaßt, wobei die essigsaure Lösung eine Reaktionslösung ist, die durch Kondensation von N-geschütztem L-Asparaginsäureanhydrid und D,L-Phenylalanin in einem essigsauren Lösungsmittel gebildet wurde.
2. Verfahren gemäß Anspruch 1, bei dem die Kristallisation bei einer Temperatur von -5 bis 50ºC durchgeführt wird.
3. Verfahren gemäß Anspruch 1 oder 2, bei dem die Kondensation bei einer Temperatur von 0 bis 60ºC durchgeführt wird.
4. Verfahren zum Abtrennen von N-geschütztem α-L-Aspartyl- L-phenylalanin, welches die selektive Kristallisation von N- geschütztem α-L-Aspartyl-L-phenylalanin aus einer wässerigen Lösung von N-geschütztem α-L-Aspartyl-L-phenylalanin, das mindestens N-geschütztes α-L-Aspartyl-D-phenylalanin als Verunreinigung enthält, umfaßt, wobei die wässerige Lösung eine Reaktionslösung ist, die durch Kondensation von N-geschütztem L-Asparaginsäureanhydrid und D,L-Phenylalanin in einem wässerigen Lösungsmittel unter Einhalten eines pH-Werts von 7 oder darüber und einer Temperatur von 30ºC oder darunter und durch anschließendes Ansäuern der Reaktionslösung gebildet wurde.
5. Verfahren gemäß Anspruch 4, bei dem der pH-Wert der angesäuerten Reaktionslösung 1,0 bis 3,5 beträgt.
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