DE3704868A1 - Reinigung von rekombinantem human-interleukin-1 - Google Patents
Reinigung von rekombinantem human-interleukin-1Info
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Description
Zwei Gene, welche für die α- und die β-Form von Human-
Interleukin-1 codieren, sind in der Literatur beschrieben,
so z. B. von March et al., Nature 315, 641-647 (1985). Die
europäische Patent-Anmeldung, Publikations-Nr. 200.986,
publiziert am 12. November 1986, mit den Erfindern Gubler et
at., beschreibt die Klonierung und Expression von rekombinantem
Human-Interleukin-1, d. h. einem Human-Interleukin-1
das mikrobiell hergestellt wurde. Beim darin beschriebene
Reinigungsverfahren ist ein Problem aufgrund der Unlöslichkeit
dieses Proteins innerhalb der bakteriellen Wirtszellen
erkennbar. Es wird angenommen, dass dieses Problem zurückzuführen
ist auf die Produktion grosser Mengen von Protein in
einer Umgebung, die anscheinend für die richtige Faltung des
Proteins nicht geeignet ist. Die Probleme bei der Faltung
des Proteins manifestieren sich in der Bildung von Einschlüssen
innerhalb der Bakterien. Diese Einschlusskörper
(inclusion bodies) konnten nur in stark denaturierenden
Agenzien wie Harnstoff und Guanidin-Hydrochlorid aufgelöst
werden.
Die Reinigungsverfahren, bei denen diese stark denaturierenden
Agenzien verwendet werden liefern gereinigtes
rekombinantes Human-Interleukin-1. Aus Gründen, die nicht
klar erkennbar sind, jedoch möglicherweise mit der Faltung
des Proteins in dieser nicht-biologischen Umgebung zusammenhängen,
überschritt das beobachtete spezifische Aktivitätsniveau
gereinigter Moleküle 6 × 106 Einheiten/mg nicht.
Daher war das Ziel der vorliegenden Erfindung, ein
Reinigungsverfahren für rekombinantes Human-Interleukin-1,
insbesondere für rekombinantes Human-Interleukin-1α, zu
entwickeln, welches die Reinigung und Solubilisierung des
gewünschten Proteins in einem biologisch kompatiblen Puffersystem
erlaubt und ein Produkt mit erhöhter spezifischer
Aktivität ergibt.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein verbessertes
Verfahren zur Herstellung von rekombinantem Human-Interleukin-
1, insbesondere Human-Interleukin-1α, speziell von
Human-Interleukin-1α mit einer Aminosäuresequenz gemäss
Fig. 1 als ein im wesentlichen homogenes Protein, im
wesentlichen endotoxinfrei mit erhöhter spezifischer Aktivität,
insbesondere einer spezifischen Aktivität von mindestens
etwa 5 × 107 Einheiten/mg. Ausserdem bezieht sich die
Erfindung auf rekombinantes Human-Interleukin-1, das durch
das erwähnte Verfahren hergestellt wird, nämlich ein Human-
Interleukin-1 welches mikrobiell hergestellt wird, im
wesentlichen endotoxinfrei als ein im wesentlichen homogenes
Protein mit einer spezifischen Aktivität von mindestens etwa
5 × 107 Einheiten/mg. Dieses Human-Interleukin-1 kann als
Pharmazeutikum verwendet werden für die Behandlung und Prophylaxe
von Krankheiten. Ferner betrifft die Erfindung
pharmazeutische Zusammensetzungen, die dieses Human-Interleukin-
1 enthalten. Aus Gründen, die dem Fachmann klar ersichtlich
sind, kann das Human-Interleukin-1 der vorliegenden
Erfindung einen zusätzlichen Methioninrest am N-Terminus
aufweisen.
Ein wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung beruht
auf der unerwarteten Entdeckung, dass ein beträchtlicher
Teil des in einem bakteriellen Wirt, z. B. in E. coli, exprimierten
rekombinanten Human-Interleukins-1, in der löslichen
Zytosolfraktion enthalten ist, obwohl die spezifische Aktivität
in dieser Fraktion weit unter derjenigen von mit
Harnstoff extrahierten Einschlusskörpern liegt. Ueberdies
ist es so, dass Human-Interleukin-1 nicht nur im Zytosol
enthalten ist, sondern überraschenderweise wurde gefunden,
dass es aus dem Zytosol durch eine einfache zwei- oder
gegebenenfalls drei-stufige Säulen-Chromatographie gereinigt
werden kann.
Im ersten Schritt des erfindungsgemässen Verfahrens
erhält man eine lösliche Zellfraktion durch Aufbrechen von
transformierten mikrobiellen Wirtszellen, die unter
Bedingungen aufwuchsen, die die Expression des eingeführten
Genes für Human-Interleukin-1 bewirkten und Abtrennung des
unlöslichen Zellmaterials einschliesslich der Einschlusskörper,
in denen gemäss Stand der Technik der grösste Teil
des exprimierten Human-Interleukin-1 (rHIL-1) vorliegen soll.
Das Aufbrechen der Zellen kann durch allgemein bekannte
Techniken erreicht werden, wie z. B. durch enzymatischen
Abbau, z. B. durch Lysozym-Behandlung, durch physikalische
Spaltung unter Verwendung einer Kugelmühle oder einer ähnlichen
Vorrichtung, oder vorzugsweise durch Ultraschallbehandlung.
Die Abtrennung des löslichen Zytosols vom unlöslichen
Zellmaterial wird am einfachsten durch Zentrifugieren,
z. B. bei 20 000 x g während ca. 30 Minuten, erreicht.
Der Ueberstand mit der Zytosolfraktion welcher lösliches
rHIL-1 enthält, wird dann einer Gelfiltration unterzogen,
bei der eine gepufferte Salzlösung zur Elution verwendet
wird. Eine für diesen Verfahrensschritt geeignete Säule ist
eine Sephacryl® S-200 Säule (Pharmacia Feinchemikalien
AB, Uppsala, Schweden).
Die Gel-Chromatographie-Fraktionen in der gepufferten
Salzlösung, vorzugsweise in einer mit Tris/HCl, pH 8,0
gepufferten NaCl-Lösung, die einen Protein-Stabilisator wie
Aethylendiamintetraessigsäure (EDTA) enthalten kann, werden
untersucht. Die kombinierten biologisch aktiven Fraktionen
werden mit zusätzlicher gepufferter Salzlösung verdünnt und
im zweiten Schritt des erfindungsgemässen Verfahrens
verwendet.
Die Untersuchung der chromatographischen Fraktionen kann
mit allgemein bekannten Methoden durchgeführt werden. Eine
geeignete Analysemethode ist die Maus-Thymozytenproliferations-
Analyse (LAF-Analyse) wie von Mizel et al.,
J. Immunol. 120, 1497-1508 (1978), beschrieben.
Der zweite Verfahrensschritt umfasst eine Ionenaustausch-
Chromatographie, vorzugsweise auf einer DEAE-Zellulose-
Säule, unter Verwendung eines Gradienten von ansteigender
Salzkonzentration in einer gepufferten Lösung. In einer
bevorzugten Ausführungsform ist dieser Gradient ein 0-800 mM
NaCl Gradient in 25 mM Tris/HCl, pH 8,1 Puffer.
Bei der Reinigung in grossem Massstab, werden nach dem
Zentrifugieren zur Entfernung der Zellbruchstücke die
Nukleinsäuren in der Zytosolfraktion durch eine Streptomycin-
Sulfat-Präzipitation entfernt. Ein Zehntelvolumen (des
Ueberstandes) einer 10% w/v Streptomycin-Sulfat-Lösung wird
hinzugefügt. Der pH-Wert wird mit 1N Essigsäure bei 6,2-6,4
gehalten. Die Suspension wird bei 20 000 x g während
30 Minuten zentrifugiert. Die Proteine in der resultierenden
Ueberstandslösung werden durch Hinzufügen von Ammoniumsulfat,
bis zu 60%-iger Sättigung, konzentriert. Die Suspension
wird bei 20 000 x g während 30 Minuten zentrifugiert und das
resultierende Sediment in einem Minimalvolumen 25 mM
Tris/HCl, pH 8,0, 800 mM NaCl aufgelöst.
In einigen Fällen, insbesondere bei der Durchführung des
Verfahrens in grösserem Massstab, kann die Endotoxin-Menge
bei diesem Schritt über das zulässige Mass hinaus erhöht
sein. Demzufolge kann gegebenenfalls ein dritter Schritt zur
Entfernung des Endotoxins eingeführt werden. Allgemein
bekannte Verfahren können zu diesem Zweck angewendet werden,
wenngleich das bevorzugte Verfahren gemäss der vorliegenden
Erfindung einen Durchgang der Lösung (1:1 v/v verdünnt mit
25 mM Tris/HCl, pH 8,1) von der DEAE-Säule durch eine
DetoxiGel® (Pierce Chemical Company, Rockford, I11.,
U.S.A.) -Säule umfasst, nach den Anweisungen des Herstellers.
Das gereinigte Human-Interleukin-1 der vorliegenden
Erfindung kann in bekannter Art und Weise als Pharmazeutikum
verwendet werden, um das Immunsystem eines Patienten zu
stimulieren, z. B. indem die Immunantwort auf Pathogene
verbessert wird, indem es als Vakzin-Adjuvans wirkt und
indem es die Abwehr gegen neoplastische Krankheiten verstärkt.
Andere klinische Verwendungszwecke umfassen die
Förderung der Wundheilung durch Stimulation des Wachstums
der Fibroblasten und die Verbesserung der Genesung von
kritisch kranken, proteinunterernährten Patienten.
Das Human-Interleukin-1 der vorliegenden Erfindung kann
warmblütigen Säugern für die oben genannten klinischen
Verwendungszwecke verabreicht werden. Die Verabreichung kann
durch jegliche konventionelle Methode erfolgen, wie durch
parenterale Applikation entweder intravenös, subkutan oder
intramuskulär. Es ist klar, dass die benötigte Dosis von den
besonderen Umständen abhängt, von der Schwere der
Erkrankung, der Dauer der Behandlung und der Methode der
Verabreichung. Eine geeignete Dosierungsform für die pharmazeutische
Verwendung kann erhalten werden, indem steril
filtriertes, lyophilisiertes Human-Interleukin-1 vor der
Verwendung auf bekannte Art und Weise rekonstituiert wird.
Der Zusatz von Puffern, Stabilisatoren, Bakteriostatika und
anderer Zusatzmittel die üblicherweise in pharmazeutischen
parenteralen Dosierungsformen verwendet werden, kann gemäss
dem allgemeinen Fachwissen erfolgen.
E. coli-Zellen, transformiert mit einem Expressionsvektor,
welcher für rekombinantes Human-Interleukin-1α
(rHIL-1α) codiert, wurden unter Bedingungen wachsen
gelassen, welche die Expression des rHIL-1α erlauben. Die
Zellen wurden gesammelt und gefroren. Für die Reinigung des
rHIL-1α wurden die gefrorenen E. coli Zellen in 30 mM
Tris/HCl (pH 8,0), 5 mM EDTA (in einem Verhältnis von 1:5 w/v)
aufgetaut. Die resuspendierten Zellen wurden mit einem
Branson Zellzertrümmerer 350 (Sonicator) aufgebrochen. Die
aufgebrochenen Zellen und "unlösliches" rHIL-1α in Form
von Einschlusskörpern wurde durch Zentrifugation bei
20 000 x g entfernt. Der lösliches rHIL-1α enthaltende
Ueberstand wurde auf eine Sephacryl® S-200 Säule (Fig. 2)
aufgetragen. Die Säule wurde mit 30 mM Tris/HCl (pH 8,0),
800 mM NaCl, 5 mM EDTA äquilibriert. Die biologisch aktiven
Fraktionen wurden vereinigt, im Verhältnis 1:3 (v/v) mit 30 mM
Tris/HCl (pH 8,0) verdünnt und auf DEAE-Zellulose
(Anionen-Austauscher DE 53, Whatman Ltd.) unter Verwendung
eines linearen Gradienten von 0-800 mM NaCl in 25 mM
Tris/HCl (pH 8,1) chromatographiert (Fig. 3). Mehr als 50%
der biologischen Aktivität wurden zurückgewonnen bei einer
spezifischen Aktivität von 0,4 bis 1,0 × 107 Einheiten/mg
Protein. Die Reinheit des Proteins wurde mittels SDS-Polyacrylamid-
Gelelektrophorese (SDS-PAGE), nach Laemmli et al.,
Nature 227, 680-685 (1970), (Fig. 4), sowie mittels Umkehrphasen-
HPLC bestätigt. Nach der Sephacryl® S-200
Chromatographie war das rHIL-1α mit 1000-2000 Endotoxin
Einheiten/ml verunreinigt aber die DEAE-Chromatographie
bewirkte eine 99%ige Reduktion des Endotoxins. Die biologische
Aktivität erwies sich für mindestens 3 Monate stabil,
wenn das Protein bei 4°C gelagert wurde.
Obiges Verfahren wurde in vergrössertem Massstab durchgeführt,
um 32 mg im wesentlichen reines rHIL-1α herzustellen.
Einhundert (100) g Zellmasse wurde mit einem
Manton-Gaulin (Meth. Enzymology 22, 482-484 [1971]) aufgeschlossen
und das resultierende lösliche Produkt wurde mit
Streptomycinsulfat und Ammoniumsulfat behandelt, um Nukleinsäuren
zu entfernen und die Proteine zu konzentrieren. Das
resultierende resolubilisierte Protein wurde in gepufferter
Salzlösung an einer 10 l Sephacryl® S-200 Säule chromatographiert.
Das gereinigte Material wurde dann an einer
DEAE-Zellulose-Säule chromatographiert. Das Protein war zu
mehr als 95% rein, wie durch SDS-PAGE festgestellt werden
konnte. Die gesamte Aktivität, die erhalten wurde, betrug
1,6 × 109 Einheiten mit einer durchschnittlichen spezifischen
Aktivität von 5 × 107 Einheiten/mg. Im Gegensatz zum
eigentlichen Pilotversuch war dieses Material jedoch ein
wenig mit Endotoxin verunreinigt (bis zu 500 Endotoxin-Einheiten/ml).
Diese Endotoxinverunreinigung konnte leicht
entfernt werden, indem die Proteinlösung über eine mit
DetoxiGel® gepackte Säule geführt wurde, wobei die
Anweisungen des Herstellers befolgt wurden.
Fig. 1 zeigt die Aminosäuresequenz von Human-Interleukin-
1α.
Fig. 2 zeigt ein Chromatogramm der Gelfiltration von E. coli
Zytosol mit löslichem rHIL-1α auf Sephacryl®
S-200. Das Elutionsmittel ist 30 mM Tris/HCl (pH 8,0),
800 mM NaCl. In einer Teilmenge der Fraktionen wurde mittels
LAF-Analyse die Interleukin-1 Aktivität bestimmt.
Fig. 3 zeigt ein Chromatogramm der DEAE-Zellulose-
Chromatographie der vereinigten Interleukin-1 aktiven
Fraktionen der Sephacryl® S-200 Säule. rHIL-1α wurde
mit einem Salz-Gradienten von 0-800 mM NaCl in 25 mM
Tris/HCl (pH 8,1) eluiert. Proben jeder Fraktion wurden
mittels LAF-Analyse auf biologische Aktivität geprüft.
Fig. 4 zeigt die Reinigung von rHIL-1α. Proben von
verschiedenen Stufen der Reinigung von rHIL-1α wurden
mittels SDS-PAGE analysiert.
- (A) M: Grössen-Markierungsproteine; P: Sediment nach der Zentrifugation der Ultraschall-behandelten Zellsuspension; S: Zytosolfraktion; Fraktionen 64-69 und Fraktionen 70-77: Fraktionen 64 bis 77 der Sephacryl® S-200 Chromatographie einzeln aufgetragen (markert durch |).
- (B) M: Grössen-Markierungsproteine; O: vereinigte Fraktionen der Sephacryl® S-200 Säulen-Chromatographie; O*: vereinigte Fraktionen der Sephacryl® S-200 Säulen-Chromatographie 1:3 (v/v) verdünnt mit 30 mM Tris/HCl, pH 8,1; Fraktionen 60-65 und Fraktionen 66-73: Fraktionen 60 bis 73 der DEAE-Zellulose-Chromatographie einzeln aufgetragen (markiert durch |).
Die elektrophoretischen Mobilitäten der Grössen-Markierungsproteine
in M (Phosphorylase B, [M r =94′000], Rinderserumalbumin
[M r =67′000], Ovalbumin [M r =43′000], Carboanhydrase
[M r =30′000], Sojabohnen Trypsin-Inhibitor
[M r =20′000] und α-Lactalbumin [M r =14′000] und deren
M r -Werte (× 103) sind mit Pfeilen markiert.
Claims (10)
1. Ein mikrobiell hergestelltes Human-Interleukin-1 im
wesentlichen endotoxin-frei und als ein im wesentlichen
homogenes Protein mit einer spezifischen Aktivität von
mindestens etwa 5 × 107 Einheiten/mg.
2. Ein Human-Interleukin-1 gemäss Anspruch 1, welches
Human-Interleukin-1α ist.
3. Ein Human-Interleukin-1 gemäss Anspruch 1 mit der in
Fig. 1 gezeigten Aminosäuresequenz.
4. Ein Human-Interleukin-1 gemäss einem der Ansprüche 1
bis 3 als Pharmazeutikum.
5. Ein Verfahren zur Herstellung von Human-Interleukin-1
gemäss einem der Ansprüche 1 bis 3 dadurch gekennzeichnet,
dass Mikrobenzellen, transformiert mit einem Expressionsvektor,
welcher das Gen für rekombinantes Human-Interleukin-
1 enthält, und zur Expression des genannten Gens
induziert, aufgebrochen werden, unlösliches Zellmaterial von
einer Zytosolfraktion abgetrennt wird, diese Zytosolfraktion
unter Verwendung einer gepufferten Salzlösung einer Gelfiltration
unterworfen wird, die biologisch aktiven Fraktionen
der Gelfiltration vereinigt werden und diese einer Ionenaustausch-
Chromatographie unter Verwendung eines Grandienten
steigender Salzkonzentration in einer gepufferten Lösung
unterworfen werden.
6. Ein Verfahren gemäss Anspruch 5, worin die Mikrobenzellen
mittels Ultraschallbehandlung aufgebrochen werden.
7. Ein Verfahren gemäss Anspruch 5 oder 6, worin die
genannte Gelfiltration auf einer Sephacryl® S-200 Säule
durchgeführt wird und die gepufferte Salzlösung eine
Tris/HCl gepufferte NaCl-Lösung ist.
8. Ein Verfahren gemäss den Ansprüchen 5 bis 7 worin die
genannte Ionenaustausch-Chromatographie unter Verwendung
einer DEAE-Zellulose-Säule erfolgt und der genannte Gradient
steigender Salzkonzentration in einer gepufferten Lösung ein
0-800 mM NaCl-Gradient in Tris/HCl-Puffer ist.
9. Pharmazeutische Zusammensetzungen, welche ein Human-
Interleukin-1 gemäss einem der Ansprüche 1 bis 3 enthalten.
10. Verwendung eines Human-Interleukins-1 gemäss einem
der Ansprüche 1 bis 3 für die Behandlung und Prophylaxe von
Krankheiten.
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---|---|---|---|
US06/830,406 US5831022A (en) | 1986-02-18 | 1986-02-18 | Purification of recombinant human IL-1α |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE3704868A1 true DE3704868A1 (de) | 1987-08-20 |
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Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0393140B1 (de) * | 1987-12-18 | 1993-08-11 | Immunex Corporation | Örtliche wundheilmittel, die interleukin-1-proteine enthalten |
KR960008010B1 (ko) * | 1988-07-29 | 1996-06-19 | 오오쓰까세이야꾸 가부시끼가이샤 | IL-1α 유도체 및 혈소판 감소증 치료 약제 |
IT1226713B (it) * | 1988-08-05 | 1991-02-05 | Eniricerche Spa | Procedimento per la preparazione di interleuchina 1 beta umana ricombinante in forma omogenea. |
NZ337543A (en) * | 1994-10-24 | 2002-06-28 | Allergan Inc | Composition comprising avian antitoxin against clostridial neurotoxin protein and method for producing recombinant antitoxin proteins are provided for |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4401756A (en) * | 1981-04-14 | 1983-08-30 | Immunex Corporation | Process for preparing human interleukin 2 |
DE3419995A1 (de) * | 1984-05-29 | 1985-12-05 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Gentechnologisches verfahren zur herstellung von human-interleukin-2 und mittel zur durchfuehrung dieses verfahrens |
EP0200986A1 (de) * | 1985-04-25 | 1986-11-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Rekombinantes Humaninterleukin-1 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1341562C (en) * | 1982-03-31 | 2007-11-27 | Tadatsugu Taniguchi | Gene coded for interleukin-2 polypeptide, recombinant dna carrying the said gene, a living cell line possessing the recombinant dna, and method for producing interleukin-2 using the said cell |
GR79124B (de) * | 1982-12-22 | 1984-10-02 | Genentech Inc | |
FR2550802B1 (fr) * | 1983-08-17 | 1986-04-11 | Inst Nat Sante Rech Med | Procede de production d'interleukine 1 humaine et medicaments correspondants |
CA1340853C (en) * | 1983-12-23 | 1999-12-21 | Hsiang-Fu Kung | Purification of recombinant interleukin-2 |
JPS60149386A (ja) * | 1984-01-17 | 1985-08-06 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | インタ−ロイキン1をコ−ドする伝令リボ核酸及びその調製法 |
JPS60197629A (ja) * | 1984-03-16 | 1985-10-07 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | HBs抗原の精製方法 |
IE61353B1 (en) * | 1984-06-19 | 1994-11-02 | Immunex Corp | Purified interleukin 1 |
JPS617296A (ja) * | 1984-06-19 | 1986-01-13 | イミユネツクス、コ−ポレ−シヨン | インタ−ロイキン1の遺伝子の精製、クロ−ニング及び特性づけ |
DE3432196A1 (de) * | 1984-09-01 | 1986-03-06 | Boehringer Ingelheim International GmbH, 6507 Ingelheim | Neues mechanisches aufschlussverfahren von bakterienzellen zur isolierung von rekombinant hergestellten peptiden |
US4675387A (en) * | 1985-07-26 | 1987-06-23 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for extracting protein with organic acid |
US5008374A (en) * | 1986-03-14 | 1991-04-16 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | IL-1α derivatives and drugs |
US4801686A (en) * | 1986-09-04 | 1989-01-31 | Immunex Corporation | Purification of recombinant interleukin-1 |
-
1986
- 1986-02-18 US US06/830,406 patent/US5831022A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-01-13 CH CH98/87A patent/CH676008A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-02-12 FR FR878702010A patent/FR2595714B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1987-02-16 DK DK077387A patent/DK171419B1/da not_active IP Right Cessation
- 1987-02-16 DE DE3704868A patent/DE3704868C2/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-02-17 NL NL8700397A patent/NL8700397A/nl not_active Application Discontinuation
- 1987-02-17 GB GB8703663A patent/GB2186580B/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-02-17 JP JP62034385A patent/JP2590085B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-02-18 IT IT19420/87A patent/IT1202565B/it active
- 1987-02-18 BE BE8700134A patent/BE1000636A5/fr not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4401756A (en) * | 1981-04-14 | 1983-08-30 | Immunex Corporation | Process for preparing human interleukin 2 |
DE3419995A1 (de) * | 1984-05-29 | 1985-12-05 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Gentechnologisches verfahren zur herstellung von human-interleukin-2 und mittel zur durchfuehrung dieses verfahrens |
EP0200986A1 (de) * | 1985-04-25 | 1986-11-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Rekombinantes Humaninterleukin-1 |
Non-Patent Citations (24)
Title |
---|
DE-Z: Analytical Brochemistry 124,1982,134-138 * |
DE-Z: DMW 111, 1986, 1036-1038 * |
GB-Z: Nature 315, 1985, 641-647 * |
GB-Z: Nature 323, 1986, 86-89 * |
JP 60 149386 A.In: Patents Abstracst of Japan, C-318, Dec.5, 1985, Vol.9, No.309 * |
JP 60 78917 A.In: Patents Abstracts of Japan, C-301, Sept.5, 1985, Vol.9, No.218 * |
US-Z: Brochemistry, 25, 1986, 3424-3429 * |
US-Z: Brochemistry, 25, 1986, 7696-7701 * |
US-Zeitschriften: Chemical Abstracts: Vol.104,1986 Ref.201439q * |
Vol. 94,1981,Ref.137539t * |
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