JPS60149386A - インタ−ロイキン１をコ−ドする伝令リボ核酸及びその調製法 - Google Patents
インタ−ロイキン１をコ−ドする伝令リボ核酸及びその調製法Info
- Publication number
- JPS60149386A JPS60149386A JP59006730A JP673084A JPS60149386A JP S60149386 A JPS60149386 A JP S60149386A JP 59006730 A JP59006730 A JP 59006730A JP 673084 A JP673084 A JP 673084A JP S60149386 A JPS60149386 A JP S60149386A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- interleukin
- cells
- cell
- ribonucleic acid
- mrna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/545—IL-1
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はインターロイキン１をコートスル伝令リボ核酸
（以下ｍ ＲＮ Ａと略す）及びその」♂１製法に関す
る。
（以下ｍ ＲＮ Ａと略す）及びその」♂１製法に関す
る。
Ｇｅｒｙらは、ヒト末梢血から分離したマクロファージ
をｉｎ ＶｉｔｒＯで培養した上清中に、マイトーゲ／
によるマウス胸腺細胞分裂作用を促進させる物質を見い
たし、す７８球活性化因子（以下ＬＡＦと略す）と名づ
けた［Ｇｅｒｙ、１．、ａｔ ａｌ、、’Ｊ、Ｅｘｐ、
Ｍｅｄ、、１３０゜１２８（＋９７２）］。その後、マ
クロファージの産生ずる可溶性蛋白活性重子は多数帽告
され、それらはモノカイ／と呼ばれるようになった。リ
ンパ球の分裂を促進するモノカイ／に対して、それぞれ
の研究化か独自の名称を使用していたか、１９７９年、
それらは生化学的性状や生物学的作用か同じであること
から同一物質として扱うことになり、インターロイキン
１の名称に統一された。インターロイキン１は、ｉｎ
ｖｉＬｒｏで種々の動物のマクロファージ（例えば腹腔
マクロファージ、肺胞マクロファージ、末梢血単球、炎
症浸出マクロファージ等）又はマクロファージ由来の株
化細胞（例えばＰ ３８８ Ｄ １゜Ｊ７７４等）を、
エンドトキシン、ムラミルジベプヂド、ホルボールエス
テル、リンホカイン等の誘２ｇ剤で刺激することにより
産生される。更に、マウス表皮細胞［Ｌｕｇｅｒ、Ｔ、
八、、ｅｔ ａｌ、、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、↓↓２１４
７（１９８２）］や脳の星状叱細胞［Ｆｏｎｔａｎａ、
Ａ、、ｅｔ ａｌ。
をｉｎ ＶｉｔｒＯで培養した上清中に、マイトーゲ／
によるマウス胸腺細胞分裂作用を促進させる物質を見い
たし、す７８球活性化因子（以下ＬＡＦと略す）と名づ
けた［Ｇｅｒｙ、１．、ａｔ ａｌ、、’Ｊ、Ｅｘｐ、
Ｍｅｄ、、１３０゜１２８（＋９７２）］。その後、マ
クロファージの産生ずる可溶性蛋白活性重子は多数帽告
され、それらはモノカイ／と呼ばれるようになった。リ
ンパ球の分裂を促進するモノカイ／に対して、それぞれ
の研究化か独自の名称を使用していたか、１９７９年、
それらは生化学的性状や生物学的作用か同じであること
から同一物質として扱うことになり、インターロイキン
１の名称に統一された。インターロイキン１は、ｉｎ
ｖｉＬｒｏで種々の動物のマクロファージ（例えば腹腔
マクロファージ、肺胞マクロファージ、末梢血単球、炎
症浸出マクロファージ等）又はマクロファージ由来の株
化細胞（例えばＰ ３８８ Ｄ １゜Ｊ７７４等）を、
エンドトキシン、ムラミルジベプヂド、ホルボールエス
テル、リンホカイン等の誘２ｇ剤で刺激することにより
産生される。更に、マウス表皮細胞［Ｌｕｇｅｒ、Ｔ、
八、、ｅｔ ａｌ、、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、↓↓２１４
７（１９８２）］や脳の星状叱細胞［Ｆｏｎｔａｎａ、
Ａ、、ｅｔ ａｌ。
Ｃｃｌｌ、ＩＩＩＩＩｌｕｎｏｌ、、７０，３９７（１
９８２）］からも産生されると報告されている。
９８２）］からも産生されると報告されている。
イノターロイ、１・／１は、Ｔリンパ球やｚ３υンノオ
球の増殖分化を促進させ、またＴリンフ寸法に作用して
り／：Ｊカイノ、特にインターロイキン２（Ｔ細胞増殖
因子）の産生を促進させる効果着をイ「し、抗体産生や
細胞性免疫の調節に重要な役割を果たしていると考えら
れている［５ｔａｒｕｃｈ、Ｍ、Ｊ、、Ｃｔ ａｌ、。
球の増殖分化を促進させ、またＴリンフ寸法に作用して
り／：Ｊカイノ、特にインターロイキン２（Ｔ細胞増殖
因子）の産生を促進させる効果着をイ「し、抗体産生や
細胞性免疫の調節に重要な役割を果たしていると考えら
れている［５ｔａｒｕｃｈ、Ｍ、Ｊ、、Ｃｔ ａｌ、。
Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１３０．２１旧（１９８３）］
。その他、プロスタグラメゾ／１εやコラゲナーゼの産
生促進、綜維芽細胞の増殖促進あるいはインターロイ−
１−ン２やインターフｙ、 ｌ：＋ ７の持つナチュラ
ル−１−ター（Ｎｌ＜）細胞粘性化作用の増強効果をイ
１していると報告されている ［５ｉＩＩｏｎ、Ｐ、Ｉ
。、、ｅｔ ａｌ、、 ” Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ、
” ｃｄ。
。その他、プロスタグラメゾ／１εやコラゲナーゼの産
生促進、綜維芽細胞の増殖促進あるいはインターロイ−
１−ン２やインターフｙ、 ｌ：＋ ７の持つナチュラ
ル−１−ター（Ｎｌ＜）細胞粘性化作用の増強効果をイ
１していると報告されている ［５ｉＩＩｏｎ、Ｐ、Ｉ
。、、ｅｔ ａｌ、、 ” Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ、
” ｃｄ。
ｂｙ ＩＩ１ｉｚｃｌ、Ｓ、ｌｉ、、八ｃａｄａｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ、、Ｖｏｌ、Ｇ、ｐ、４７（’１
９８２）］。
Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ、、Ｖｏｌ、Ｇ、ｐ、４７（’１
９８２）］。
このように、イノターロイキン１は免疫畑答のみならず
、生体の防御とその修復にも関与する生体物質と考えら
れ、医薬品として臨床的に応用し得る可能性か高く、そ
の開発か期待されている。
、生体の防御とその修復にも関与する生体物質と考えら
れ、医薬品として臨床的に応用し得る可能性か高く、そ
の開発か期待されている。
しかしながら、インターロイキン１を大量に製造するこ
との困難さがイノターロイキ／１に閏する研究、更には
医薬品としての応用への大きな障害となっている。
との困難さがイノターロイキ／１に閏する研究、更には
医薬品としての応用への大きな障害となっている。
この問題点解決のため、近年進歩の著しい１Ｊｆｆ伝子
組換え技術の応用か考えられるか、その実施に際して必
要なインターロイキン１のアミノ酸配列やｍ ＲＮ Ａ
の採取方法に閃するｈ（磯釣知見はこれまて全く報告さ
れていなかった。
組換え技術の応用か考えられるか、その実施に際して必
要なインターロイキン１のアミノ酸配列やｍ ＲＮ Ａ
の採取方法に閃するｈ（磯釣知見はこれまて全く報告さ
れていなかった。
本発明は、インターロイキノ１産生能を仔する細胞から
分離され、３′末端にポリアデニル酸構造をイｊする、
インク−ロイ４・／１をコートするｍＲＮＡ、及びイノ
ターロイキン１産生能をもする細胞をイノターロイキノ
１誘導剤と蛋白合成阻害剤の存在下にｊｉ７養すること
により、該細胞中にインターロイキノ１をコートするｍ
ＲＮＡを生成蓄積させ、次いでこれを分離することから
成るイック−ロイキノ１をコートするｍ ＲＮ Ａの調
製法を提供するものである。
分離され、３′末端にポリアデニル酸構造をイｊする、
インク−ロイ４・／１をコートするｍＲＮＡ、及びイノ
ターロイキン１産生能をもする細胞をイノターロイキノ
１誘導剤と蛋白合成阻害剤の存在下にｊｉ７養すること
により、該細胞中にインターロイキノ１をコートするｍ
ＲＮＡを生成蓄積させ、次いでこれを分離することから
成るイック−ロイキノ１をコートするｍ ＲＮ Ａの調
製法を提供するものである。
イノターロイ１．）１をコードするｍ ＲＮ Ａを採取
するためのインター１−Ｊイード／１産生能を自する細
胞きしては、哺乳動物（例えばヒト、ウサ・１−、ラッ
ト、マウス”！ ）のマクロファーゾ、マク１１ファー
ジ様株化細胞２表皮細胞、脳の星伏膠細胞宿を用いるこ
とかできるか、ｔｌ［ｍ’１分離マク１ｊ）／−シ又は
マク（−１フア一ゾ様株化細胞か好ましい。釘１ｙ１゛
１分目「マク（」ファージは、例えば１ｌｌｌｉ乳動物
の肺胞、腹１１ηｒ 、 ＋１１１ ｉｔｋ 、胎Ｑ１
１あるいはその他のｉｌｌ Ｂからｉ（Ｊられる。
するためのインター１−Ｊイード／１産生能を自する細
胞きしては、哺乳動物（例えばヒト、ウサ・１−、ラッ
ト、マウス”！ ）のマクロファーゾ、マク１１ファー
ジ様株化細胞２表皮細胞、脳の星伏膠細胞宿を用いるこ
とかできるか、ｔｌ［ｍ’１分離マク１ｊ）／−シ又は
マク（−１フア一ゾ様株化細胞か好ましい。釘１ｙ１゛
１分目「マク（」ファージは、例えば１ｌｌｌｉ乳動物
の肺胞、腹１１ηｒ 、 ＋１１１ ｉｔｋ 、胎Ｑ１
１あるいはその他のｉｌｌ Ｂからｉ（Ｊられる。
あらかじめ該哺乳動物に１３ＣＧ 、Ｉ’ｒｏｐｉｏｎ
ｉｂａｃＬｃｒｉｕＩＩａｃｎｃｓ、 Ｚｙｍｏｓａｎ
のような網内系賦話剤を投！ｊ、 ｊ、 テおくことに
より、インター１」イー１−／１産生能のｉＸ’ｊ＋い
マクロファージを多１１Ｌに得ることかできる。また、
マクロノ／−ン梯４１、化ＩＩＩ胞としては、例えばＰ
３８８１） 、細胞、Ｊ７７４細胞なとのマウス細胞
及びＩＩ Ｌ ｆｉ Ｑ細胞（ＡＴＣＣＣＣＬ２４０
）、 ＴＪＩＰ−１細胞２Ｍｏｎｏ−１−２０７細胞、
Ｕ−０３−７細胞なとのマクロソアーシ様１）１１１
１１３Ｈに分化し得るヒト白１１］１病株化細胞等か挙
げられる。
ｉｂａｃＬｃｒｉｕＩＩａｃｎｃｓ、 Ｚｙｍｏｓａｎ
のような網内系賦話剤を投！ｊ、 ｊ、 テおくことに
より、インター１」イー１−／１産生能のｉＸ’ｊ＋い
マクロファージを多１１Ｌに得ることかできる。また、
マクロノ／−ン梯４１、化ＩＩＩ胞としては、例えばＰ
３８８１） 、細胞、Ｊ７７４細胞なとのマウス細胞
及びＩＩ Ｌ ｆｉ Ｑ細胞（ＡＴＣＣＣＣＬ２４０
）、 ＴＪＩＰ−１細胞２Ｍｏｎｏ−１−２０７細胞、
Ｕ−０３−７細胞なとのマクロソアーシ様１）１１１
１１３Ｈに分化し得るヒト白１１］１病株化細胞等か挙
げられる。
マクロファージ細胞内にイノターロイキ／１をコートす
るｍ ＲＮ Ａを生成蓄積させるためには、これらマク
ロファージを培養蓋面１ ｃＪ当たり約２×１０４〜ｌ
Ｘｌ０６個播き、インターロイキンｉ誘導剤及び蛋白合
成阻害剤の存在下、約４１２〜３８’Ｃ１好ましくは約
３７°Ｃ１約５〜ＩＯ％炭酸ガス含佇空気中、４度約８
０〜１００％で３〜１０時間培養する。培地としては、
高等動物細胞の培養に適した各種合成培地か用いられ、
例えばＲＰＭＩ−１（ｉ４０培地、イーグルのＭ１体４
培地、ダルベツコ変法によるＭＩＥＭ培地（以」−の培
地の組成については、例えば宗ＩＩ庚修紀［細胞培養マ
ニュアル］、講談社、 １９．８２年に記載されている
）笠か挙げられる。培地には約１〜３０％の動物血清（
例えば牛脂児血ｊ！’Ｉ ＋子牛血清宿）を加えておく
のか好ましい。インター１」イキ７１誘導剤としては、
公知の誘導剤［例えばＯｐｐｅｎｈｃｉｍ。
るｍ ＲＮ Ａを生成蓄積させるためには、これらマク
ロファージを培養蓋面１ ｃＪ当たり約２×１０４〜ｌ
Ｘｌ０６個播き、インターロイキンｉ誘導剤及び蛋白合
成阻害剤の存在下、約４１２〜３８’Ｃ１好ましくは約
３７°Ｃ１約５〜ＩＯ％炭酸ガス含佇空気中、４度約８
０〜１００％で３〜１０時間培養する。培地としては、
高等動物細胞の培養に適した各種合成培地か用いられ、
例えばＲＰＭＩ−１（ｉ４０培地、イーグルのＭ１体４
培地、ダルベツコ変法によるＭＩＥＭ培地（以」−の培
地の組成については、例えば宗ＩＩ庚修紀［細胞培養マ
ニュアル］、講談社、 １９．８２年に記載されている
）笠か挙げられる。培地には約１〜３０％の動物血清（
例えば牛脂児血ｊ！’Ｉ ＋子牛血清宿）を加えておく
のか好ましい。インター１」イキ７１誘導剤としては、
公知の誘導剤［例えばＯｐｐｅｎｈｃｉｍ。
Ｊ 、 Ｊ 、 、 ｃ ｔ ａ ｌ 、 、”口ｉｏ
ｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ １．ｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ、
” ｃｄ。
ｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ １．ｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ、
” ｃｄ。
ｂｙ Ｃｏｈｅｎ、Ｓ、、ｅｔ ａｌ、、ＡｃａｄｅＩ
Ｉｉｃ Ｉ’ｒｅｓｓ Ｉｎｃ、、ｐ、２９１（１９７
９）参１＜＋ ］を用いることかてき、例えばグラム陰
性菌より得られたエンドトキシン（例えば大腸菌、緑膿
菌、チフス菌由来のりボボリザノカライ＋：＜＋ｑ）、
；ｌル、］］゛−ルエステル類えばホル、Ｊ′−ルーＩ
２−ミリステート−１７３−アセテート７．Ｊ、ルボー
ルー１２．１３−シデノノノエート、＋ｌ、ルポールー
１２．１３−シベ／ソコ−一ト番）、メゼレイ７等か挙
げられ、それぞれ単独で、あるいは適宜糾み合わせて用
いられる。インターロイキン１誘導剤の添加前に、３０
分〜２時間の前”：’ｉ 谷を行うのか好ましい。イノ
クー【Ｊイキ７１誘導剤の添加量は、物質の種類３によ
り５“シなるか、フーントトー１−ンノの場合、＝・般
に約０，１〜１０００μ＋ｒ／ｍｌ（最終濃度、以下間
し）、好ましくは約１〜１００ ｔｌ＋；／ ＩＩ ｌ
であり、小ルポールエスｉ−ルの場合、一般に約５〜２
０００ ｎｇ／ｍｌである。蛋白合成阻−１４′剤とし
ては、例えばンクロヘー１−ンミトか挙げらｉＬ、約０
．１〜５０μｇ／ｌか添加される。
Ｉｉｃ Ｉ’ｒｅｓｓ Ｉｎｃ、、ｐ、２９１（１９７
９）参１＜＋ ］を用いることかてき、例えばグラム陰
性菌より得られたエンドトキシン（例えば大腸菌、緑膿
菌、チフス菌由来のりボボリザノカライ＋：＜＋ｑ）、
；ｌル、］］゛−ルエステル類えばホル、Ｊ′−ルーＩ
２−ミリステート−１７３−アセテート７．Ｊ、ルボー
ルー１２．１３−シデノノノエート、＋ｌ、ルポールー
１２．１３−シベ／ソコ−一ト番）、メゼレイ７等か挙
げられ、それぞれ単独で、あるいは適宜糾み合わせて用
いられる。インターロイキン１誘導剤の添加前に、３０
分〜２時間の前”：’ｉ 谷を行うのか好ましい。イノ
クー【Ｊイキ７１誘導剤の添加量は、物質の種類３によ
り５“シなるか、フーントトー１−ンノの場合、＝・般
に約０，１〜１０００μ＋ｒ／ｍｌ（最終濃度、以下間
し）、好ましくは約１〜１００ ｔｌ＋；／ ＩＩ ｌ
であり、小ルポールエスｉ−ルの場合、一般に約５〜２
０００ ｎｇ／ｍｌである。蛋白合成阻−１４′剤とし
ては、例えばンクロヘー１−ンミトか挙げらｉＬ、約０
．１〜５０μｇ／ｌか添加される。
マク１」ファージ様細胞に分化し得る（１、化Ｎ１１１
胞を用いる場合には、マクロファージ様細胞に分化させ
るために、あらかじめ分化誘導剤の存在下に約；（〜７
２７２時間培養。分化誘導剤としては、例えば、Ｊ、ル
ボールエステル類、メゼレイン等が挙げられ、ホルボー
ルエステル類は前記のものを用いることかできる。培養
時間は、細胞の種類により異なり、例えばヒ）Ｉ−ＩＬ
−６０細胞の場合は２４〜４８時間か好ましい。培養条
件は前記と同じでよい。この際ビタミ／Ａ誘ｊμ体（例
えばビタミンＡ酸等）を約０．５〜５０００ ｎｇハ１
の割合て添加するのか好ましい。マクロファージ様細胞
に分化した細胞は、培養器面に何着するようになる。こ
の後、更に約２４時間培養してもよい。分化を確認した
後、培地を取り除き、！’ｌ’ｌ記の新訂分離マクＩ」
ファージの場合と同様にインター【」イキ／１誘導剤と
蛋白合成■１害剤の７？在下に培養することにより、該
分化細胞内にイノター［ｊイキノ１をコートするｍｌぐ
ＮＡを生成１１積させることかできる。
胞を用いる場合には、マクロファージ様細胞に分化させ
るために、あらかじめ分化誘導剤の存在下に約；（〜７
２７２時間培養。分化誘導剤としては、例えば、Ｊ、ル
ボールエステル類、メゼレイン等が挙げられ、ホルボー
ルエステル類は前記のものを用いることかできる。培養
時間は、細胞の種類により異なり、例えばヒ）Ｉ−ＩＬ
−６０細胞の場合は２４〜４８時間か好ましい。培養条
件は前記と同じでよい。この際ビタミ／Ａ誘ｊμ体（例
えばビタミンＡ酸等）を約０．５〜５０００ ｎｇハ１
の割合て添加するのか好ましい。マクロファージ様細胞
に分化した細胞は、培養器面に何着するようになる。こ
の後、更に約２４時間培養してもよい。分化を確認した
後、培地を取り除き、！’ｌ’ｌ記の新訂分離マクＩ」
ファージの場合と同様にインター【」イキ／１誘導剤と
蛋白合成■１害剤の７？在下に培養することにより、該
分化細胞内にイノター［ｊイキノ１をコートするｍｌぐ
ＮＡを生成１１積させることかできる。
培養終了後、細胞より常法、例えばＣｈｉｒｇｗｉｎら
の方法ｒｌｌｉｏｃｌ＋ａｍｉｓＬｒｙ、 １８．５２
９４（１９７９）］により全ＲＮＡを抽出し、次いでこ
れを猟法に従い」リボ（ｄＴ）セルロース又はポリ（Ｕ
）セファ０−スを用いるカラムクロマトグラフィーに付
すか、又はバッチ法によりｐａｌバΔ） ｍ ＲＮ Ａ
画分を分離する。このｐｏｌｙ（八）ｍ Ｉ！ Ｎ Ａ
画分を、更にシＲ糖密度勾配遠心分離又は酸性原点アガ
ロースゲル電気泳動にイ＼１ずことにより、イ／ターロ
イキ／１をコードするｍ ＲＮ Ａを濃縮精製すること
かできる。
の方法ｒｌｌｉｏｃｌ＋ａｍｉｓＬｒｙ、 １８．５２
９４（１９７９）］により全ＲＮＡを抽出し、次いでこ
れを猟法に従い」リボ（ｄＴ）セルロース又はポリ（Ｕ
）セファ０−スを用いるカラムクロマトグラフィーに付
すか、又はバッチ法によりｐａｌバΔ） ｍ ＲＮ Ａ
画分を分離する。このｐｏｌｙ（八）ｍ Ｉ！ Ｎ Ａ
画分を、更にシＲ糖密度勾配遠心分離又は酸性原点アガ
ロースゲル電気泳動にイ＼１ずことにより、イ／ターロ
イキ／１をコードするｍ ＲＮ Ａを濃縮精製すること
かできる。
ここに得られたｍ ＲＮ Ａかインターロイキン１を＝
＋ −）するものであることを確認するためには、この
ｍ ＲＮＡを例えばアフリノノノメガエル（Ｘｅｎｏｐ
ｕｓｌａｃｖｔｓ）の卵１、ノ細胞、網払赤血球うイセ
ーｌ、小麦胚月のような適当な蛋白合成系に導入して蛋
白ダ゛′ｉに翻訳させ、 Ｌ Ａ Ｆ活性を指標として
イノクーｊｉｌイー１−ノ１活性を測定ずれはよい。ア
フリカッメツＪ、Ｉ、ルの卵”） ｌ１ｌｌ胞を用いる
方ｌＪξは、例えば次のようにして杓われる。ｍ ＲＮ
Ａを蒸留水に１μＨｚ／μβの７５５度て１右解し、
卵Ｉ−１細胞１個当たり１０〜５０ｎ１をマイク（ノイ
／シェクシｄン法てｌｉ二人し、その１０個を１００μ
βのハース培Ｊｌｉ！［Ｇｕｒｄｏｎ、Ｊ、１１．、
Ｊ、Ｅｍｂｒｙｏｌ。
＋ −）するものであることを確認するためには、この
ｍ ＲＮＡを例えばアフリノノノメガエル（Ｘｅｎｏｐ
ｕｓｌａｃｖｔｓ）の卵１、ノ細胞、網払赤血球うイセ
ーｌ、小麦胚月のような適当な蛋白合成系に導入して蛋
白ダ゛′ｉに翻訳させ、 Ｌ Ａ Ｆ活性を指標として
イノクーｊｉｌイー１−ノ１活性を測定ずれはよい。ア
フリカッメツＪ、Ｉ、ルの卵”） ｌ１ｌｌ胞を用いる
方ｌＪξは、例えば次のようにして杓われる。ｍ ＲＮ
Ａを蒸留水に１μＨｚ／μβの７５５度て１右解し、
卵Ｉ−１細胞１個当たり１０〜５０ｎ１をマイク（ノイ
／シェクシｄン法てｌｉ二人し、その１０個を１００μ
βのハース培Ｊｌｉ！［Ｇｕｒｄｏｎ、Ｊ、１１．、
Ｊ、Ｅｍｂｒｙｏｌ。
１（ｘｐ、Ｍｏｒｐｈｏｌ、、２０．４０１（１９０８
）］中、２２°Ｃて２４時間培養する。培Ｎ’ｔＧを、
Ｊモシナイズし、１０，０００ ｒｐｍで１０分間遠心
分離した後、その」二清液を検体として、ＬＡＦ活性を
Ｇｅｒｙらの方法［Ｇａｒｙ、１．、ａｔ ａｌ、、
Ｃｅ１ｌ。
）］中、２２°Ｃて２４時間培養する。培Ｎ’ｔＧを、
Ｊモシナイズし、１０，０００ ｒｐｍで１０分間遠心
分離した後、その」二清液を検体として、ＬＡＦ活性を
Ｇｅｒｙらの方法［Ｇａｒｙ、１．、ａｔ ａｌ、、
Ｃｅ１ｌ。
１■ｕｎｏ１．．６４，２９３（＋９８１）］に準じて
測定する。Ｃ３Ｈ／Ｈｅ系マウスの胸腺細胞を採取し、
９６つ、ルの組織」８養用マイクロプレート（）Ｌ：１
つ社）の各ウェルにｌＸｌ０６個の胸腺細胞を播き、フ
ィトヘムアグルチニ／（ツ下１）ｌＩ’Ａと略ず）（デ
ィフコ社。
測定する。Ｃ３Ｈ／Ｈｅ系マウスの胸腺細胞を採取し、
９６つ、ルの組織」８養用マイクロプレート（）Ｌ：１
つ社）の各ウェルにｌＸｌ０６個の胸腺細胞を播き、フ
ィトヘムアグルチニ／（ツ下１）ｌＩ’Ａと略ず）（デ
ィフコ社。
１） ｌ−Ｉ Ａ −１）品番３１１０−５６ ； ５
０μｇ／ｌ）と花釈した」ユ記検体を含むＲＩ’ＭＩ−
１８４０培ｔＪｌ！ＩＯ，２ｍｌ中、３７℃、５％炭酸
ガス含有空気中で７２時間培養する。３９養終了の１８
時時間）；１に３１１−ヂミジ／を各ウユル肖たり約ｌ
ｌｌＣｌ添加し’ｌ Ｉ：Ｓ養終了後、細胞を集め細胞
内に取り込よれた放ｑ・ｌ能活性を測定する。倹体非）
べ加系、即ち胸腺細胞と門ＩＡのみの培養系で得られた
放射能取り込み量（ｃｐｍ）を基べ１とし、ＬＡＦｉ占
性を評価する。
０μｇ／ｌ）と花釈した」ユ記検体を含むＲＩ’ＭＩ−
１８４０培ｔＪｌ！ＩＯ，２ｍｌ中、３７℃、５％炭酸
ガス含有空気中で７２時間培養する。３９養終了の１８
時時間）；１に３１１−ヂミジ／を各ウユル肖たり約ｌ
ｌｌＣｌ添加し’ｌ Ｉ：Ｓ養終了後、細胞を集め細胞
内に取り込よれた放ｑ・ｌ能活性を測定する。倹体非）
べ加系、即ち胸腺細胞と門ＩＡのみの培養系で得られた
放射能取り込み量（ｃｐｍ）を基べ１とし、ＬＡＦｉ占
性を評価する。
本発明のイノターロイキ／１をフートするｍ ＲＮ Ａ
は、逍仏子組換え技術を適用して微生物又は細胞からイ
ンターロイキンｌを製造するだめの出発物質として打用
である。即ち、該ｍ ＲＮ Ａから相捕デオキシリボ核
酸を合成し、該相補デオキシリボ核酸を適当な形質発現
ベクターに組み込んだ後、該ベクター１）ＮＡを微生物
又は細胞のような適当な宿主に４人することにより宿主
を形質転換させて形質発現宿よを得、次いで該形質発現
宿主を培養することにより、インターロイキン１を製造
すると吉ができる。更に、本発明のｍ ＲＮ Ａは、そ
れ自体をアフリカッメガエルの卵母細胞のような適当な
蛋白合成系に導入することにより、インターＵイートノ
１を製造することができ、イ／ターロイキンｊ製ｊ告の
ための祠′＃１としてもイ」川である。
は、逍仏子組換え技術を適用して微生物又は細胞からイ
ンターロイキンｌを製造するだめの出発物質として打用
である。即ち、該ｍ ＲＮ Ａから相捕デオキシリボ核
酸を合成し、該相補デオキシリボ核酸を適当な形質発現
ベクターに組み込んだ後、該ベクター１）ＮＡを微生物
又は細胞のような適当な宿主に４人することにより宿主
を形質転換させて形質発現宿よを得、次いで該形質発現
宿主を培養することにより、インターロイキン１を製造
すると吉ができる。更に、本発明のｍ ＲＮ Ａは、そ
れ自体をアフリカッメガエルの卵母細胞のような適当な
蛋白合成系に導入することにより、インターＵイートノ
１を製造することができ、イ／ターロイキンｊ製ｊ告の
ための祠′＃１としてもイ」川である。
以下に実施例を埜げて本発明を更に具体的に説明するか
、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
実施例１
ウザ、１−（体市約２．５ｋｇ）にＰｒｏｐｉｏｎｉｂ
ａｃｔａｒｉｕｍａｃｎｃｓ死菌体を１羽当り８０■の
投与量て静脈内に注入し、８日後に屠殺した。直ちに気
′１３部を切開し、リン酸緩衝化−生理食塩液て肺洗７
多し、肺胞マクロフｌ−ジを採取した。４羽のウザキよ
り約１．５×Ｉ０９個の肺胞マクロファージを得た。と
のＩＩ胞ママクロファージ１０ス牛脂児血７ｉ’？を含
むＲＰＭｌｌ 〔ｉ ４０培地に２濁させてペトリデイ
ツシュ（直径８ｃ１１）に１枚当りｌＸｌ０７個となる
ように播き、３７°Ｃて５％炭酸ガス含有゛空気中、湿
度９０〜１００％で１時間培養した。次いで、工／トド
キシ／（大腸菌由来のりボボリーリ゛ツカライト）、Ｔ
ＰＡ（ホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテ
ート）及びシクロへ−１−ンミトをそれぞれ最終心度か
ＩＯμｇ／ｌ、 ＩＯｎｇｌｌ及び１Ｍｇ７ｍｌとなる
ように添加混和し、更に４時間１；； ６した。培地を
吸引除去し、ディ・ノンユに何着したマク【Ｊファージ
を０．６％ラウロイルサル；ノンン酸り″トリウムと６
ｍＭクエン酸ナトリウムヲ含む５Ｍグアニシルチメシア
ネート液で溶解し均質化した。この溶解液をＯ，ＩＭＥ
ｌ）ＴＡを含む５．７Ｍ塩化センウム水７♂液」二に重
層し、超遠心分離機（１ぐ１１３２７−２０一ター２日
立製作所）を用い２（ｉ、５００ｒｐｍて２０時間遠心
し、全ＲＮ Ａ画分をペレットとして得た。これを０．
３５Ｍ ＮａＣ１，２０ｍＭ Ｔｒ ｉ ｓ及び２０ｍ
Ｍ ＥＤＴＡを含む７Ｍ尿素液の少量に溶解し、エタノ
ール沈殿として回収し、全ＲＮＡとして６．３■得た。
ａｃｔａｒｉｕｍａｃｎｃｓ死菌体を１羽当り８０■の
投与量て静脈内に注入し、８日後に屠殺した。直ちに気
′１３部を切開し、リン酸緩衝化−生理食塩液て肺洗７
多し、肺胞マクロフｌ−ジを採取した。４羽のウザキよ
り約１．５×Ｉ０９個の肺胞マクロファージを得た。と
のＩＩ胞ママクロファージ１０ス牛脂児血７ｉ’？を含
むＲＰＭｌｌ 〔ｉ ４０培地に２濁させてペトリデイ
ツシュ（直径８ｃ１１）に１枚当りｌＸｌ０７個となる
ように播き、３７°Ｃて５％炭酸ガス含有゛空気中、湿
度９０〜１００％で１時間培養した。次いで、工／トド
キシ／（大腸菌由来のりボボリーリ゛ツカライト）、Ｔ
ＰＡ（ホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテ
ート）及びシクロへ−１−ンミトをそれぞれ最終心度か
ＩＯμｇ／ｌ、 ＩＯｎｇｌｌ及び１Ｍｇ７ｍｌとなる
ように添加混和し、更に４時間１；； ６した。培地を
吸引除去し、ディ・ノンユに何着したマク【Ｊファージ
を０．６％ラウロイルサル；ノンン酸り″トリウムと６
ｍＭクエン酸ナトリウムヲ含む５Ｍグアニシルチメシア
ネート液で溶解し均質化した。この溶解液をＯ，ＩＭＥ
ｌ）ＴＡを含む５．７Ｍ塩化センウム水７♂液」二に重
層し、超遠心分離機（１ぐ１１３２７−２０一ター２日
立製作所）を用い２（ｉ、５００ｒｐｍて２０時間遠心
し、全ＲＮ Ａ画分をペレットとして得た。これを０．
３５Ｍ ＮａＣ１，２０ｍＭ Ｔｒ ｉ ｓ及び２０ｍ
Ｍ ＥＤＴＡを含む７Ｍ尿素液の少量に溶解し、エタノ
ール沈殿として回収し、全ＲＮＡとして６．３■得た。
この全ＲＮ Ａ画分をｌ ｍＭ ＥＤＴＡを含むＩＯｍ
ＭＴｒ ｒ ｓ −１１ＣＩ 緩衝１ｆｆｌ （ｐＨ７
，４） （以下ＴＥ液という）２ｍｌに溶解し、６５°
Ｃて５分間加熱した。これにＮａＣｌ溶液を最終０度か
０．５Ｍとなるように加えた後、あらかじめ０．５ＭＮ
ａＣｌを含むＴＥ液で平衡化したオリゴ（ｄＴ）セルロ
ースカラムに付し、吸着したｐｏｌｙ（△）口１ＲＮＡ
＠ ＴＥ液で溶出することにより、４２４μ＋ｒのｐ
ｏｌｙ（八） ｍ ＲＮ Ａを得た。ここで得たｐｏｌ
ｙ（＾） ｍ ＲＮ Ａを蒸留水にＩｔｔｚ／μβの濃
度で溶解し、アフリカッメガエルの卵母細胞に１個肖た
り５０ｎｌの割合て注入ｌした。ｎｉ１記の方法に従い
ハース培地中て２４時間培養した後、卵母細胞のホモシ
イートを得た。この、ｊ、モジネートを１０％１１−胎
児血清を含むＲＰＭＩ−１０４０培地で１０倍に花釈し
、孔径０．２μ口ノｉ＋、Ｉ、’＋過ラフイルターＭｉ
ｃｒｏｒ ｌｏｗ ２５．）１つ７」）で除菌ａＱ過し
た。これを検体として、ｆ’ｌ’ｌ記の方メツξに槌い
ＬＡＦ話性を７ｊｌｌ定した。結果を第１表に示す。表
中の卵１・少細胞１１１の値は、１０個の卵（：Ｊ：細
胞から得られた。」モジネートをそれぞれ所定の濃度に
界釈した試料についてさＩＩＩ定したものである。
ＭＴｒ ｒ ｓ −１１ＣＩ 緩衝１ｆｆｌ （ｐＨ７
，４） （以下ＴＥ液という）２ｍｌに溶解し、６５°
Ｃて５分間加熱した。これにＮａＣｌ溶液を最終０度か
０．５Ｍとなるように加えた後、あらかじめ０．５ＭＮ
ａＣｌを含むＴＥ液で平衡化したオリゴ（ｄＴ）セルロ
ースカラムに付し、吸着したｐｏｌｙ（△）口１ＲＮＡ
＠ ＴＥ液で溶出することにより、４２４μ＋ｒのｐ
ｏｌｙ（八） ｍ ＲＮ Ａを得た。ここで得たｐｏｌ
ｙ（＾） ｍ ＲＮ Ａを蒸留水にＩｔｔｚ／μβの濃
度で溶解し、アフリカッメガエルの卵母細胞に１個肖た
り５０ｎｌの割合て注入ｌした。ｎｉ１記の方法に従い
ハース培地中て２４時間培養した後、卵母細胞のホモシ
イートを得た。この、ｊ、モジネートを１０％１１−胎
児血清を含むＲＰＭＩ−１０４０培地で１０倍に花釈し
、孔径０．２μ口ノｉ＋、Ｉ、’＋過ラフイルターＭｉ
ｃｒｏｒ ｌｏｗ ２５．）１つ７」）で除菌ａＱ過し
た。これを検体として、ｆ’ｌ’ｌ記の方メツξに槌い
ＬＡＦ話性を７ｊｌｌ定した。結果を第１表に示す。表
中の卵１・少細胞１１１の値は、１０個の卵（：Ｊ：細
胞から得られた。」モジネートをそれぞれ所定の濃度に
界釈した試料についてさＩＩＩ定したものである。
第１表
検 休 ｊ１１１定条件 Ｌ Ａ Ｆ ｉｌ！ｌＩ性（
ＣＰＫ／’／Ｉル）−ＰＨＡ ３，９１１ ；Ｊモジネート ５０倍希釈液＋１）ＩＩＡ １，３０
０１００倍希釈液十ＰＨＡ ２，４７０ ２００倍昂釈液＋ＰｉｌＡ ４，２５３４００倍祁釈液
＋ＰＩＩＡ ４．０８０、］モモジネト５５０希釈液＋
Ｉ）ＩＩＡ ２０，２８０１００倍希釈液＋Ｉ）ＩＩＡ
２０，３４７２００倍希釈ｌ夜十ＰＨＡ １８，５４
８４００倍希釈液＋Ｉ）ＨＡ １２．７５２実施例２ ＩＯ％４胎児血清、 ＴＰＡ （５００口ｇ／ｍｌ）及
びビタミンＡ酸（５０００ｇ／ｉｆ）を含むＲ１）Ｍｌ
−１６４０培地に懸濁させたＩＩＬ−６０細胞を、ペト
リディソンユ（直径８ｃ１１’）に１枚当たりｉｘ＋ｏ
７個となるように播き、３７°Ｃで５％炭酸ガス含佇空
気中、湿度９０〜１００％で４８時１ｊ１１培養した。
ＣＰＫ／’／Ｉル）−ＰＨＡ ３，９１１ ；Ｊモジネート ５０倍希釈液＋１）ＩＩＡ １，３０
０１００倍希釈液十ＰＨＡ ２，４７０ ２００倍昂釈液＋ＰｉｌＡ ４，２５３４００倍祁釈液
＋ＰＩＩＡ ４．０８０、］モモジネト５５０希釈液＋
Ｉ）ＩＩＡ ２０，２８０１００倍希釈液＋Ｉ）ＩＩＡ
２０，３４７２００倍希釈ｌ夜十ＰＨＡ １８，５４
８４００倍希釈液＋Ｉ）ＨＡ １２．７５２実施例２ ＩＯ％４胎児血清、 ＴＰＡ （５００口ｇ／ｍｌ）及
びビタミンＡ酸（５０００ｇ／ｉｆ）を含むＲ１）Ｍｌ
−１６４０培地に懸濁させたＩＩＬ−６０細胞を、ペト
リディソンユ（直径８ｃ１１’）に１枚当たりｉｘ＋ｏ
７個となるように播き、３７°Ｃで５％炭酸ガス含佇空
気中、湿度９０〜１００％で４８時１ｊ１１培養した。
これによりＪ−Ｊ Ｌ −６０細胞の大部分はマク１コ
フアーシ様細胞に分化し、培養器面に伺イ′１した。培
谷液と／？遊細胞を吸引除去した後、わまたに工／１ト
キシ／（１０μｇ／ｍｌ＞、シクロヘートゾミド（１μ
ｇ／Ｎ）及び１０％牛脂児血ｔ？ｊを含むＲｌ’ Ｍ
１−１６４（１７地を加え、培養をｍ続した。再も°゛
ｆ養の５１１Ｊ間後に培ｊシｌ良を吸引除去し、培養器
１１１１に伺イ１１した細胞から実施例１に述へたと同
様の方法て全ＲＮ Ａを抽出し、史にｐｏｌｙ（八）
ｍ ＲＮ Ａを分ＰＪ［した。
フアーシ様細胞に分化し、培養器面に伺イ′１した。培
谷液と／？遊細胞を吸引除去した後、わまたに工／１ト
キシ／（１０μｇ／ｍｌ＞、シクロヘートゾミド（１μ
ｇ／Ｎ）及び１０％牛脂児血ｔ？ｊを含むＲｌ’ Ｍ
１−１６４（１７地を加え、培養をｍ続した。再も°゛
ｆ養の５１１Ｊ間後に培ｊシｌ良を吸引除去し、培養器
１１１１に伺イ１１した細胞から実施例１に述へたと同
様の方法て全ＲＮ Ａを抽出し、史にｐｏｌｙ（八）
ｍ ＲＮ Ａを分ＰＪ［した。
１．５Ｘ １０８個のＩＩＬ−００細胞から上記の工程
を経て最終的に全ＲＮＡ ２．９ｍｇ、 ｐｏｌｙ（Δ
） ｍ ＲＮ Ａ Ｉ ０８ ｕ ＩＸを得た。
を経て最終的に全ＲＮＡ ２．９ｍｇ、 ｐｏｌｙ（Δ
） ｍ ＲＮ Ａ Ｉ ０８ ｕ ＩＸを得た。
ことて？１ノだｐｏｌｙ（Ａ）ｍＲＮＡ ＋ 蒸留水に
３μｇ／μβの濃度てｉＦｉ ＩＩ’／、 Ｌ 、実施
例１に示したと同様にアフリカッメガエルの卵１：Ｊ：
＃ｌｌ＋胞にｌ主人し、 Ｌ Ａ Ｆ活性を７１１１＋
定した。霧、−果を第２表に示す。
３μｇ／μβの濃度てｉＦｉ ＩＩ’／、 Ｌ 、実施
例１に示したと同様にアフリカッメガエルの卵１：Ｊ：
＃ｌｌ＋胞にｌ主人し、 Ｌ Ａ Ｆ活性を７１１１＋
定した。霧、−果を第２表に示す。
（以下余白）
第２表
検 体 測定条件 ＬＡＦ／ｌ′Ｉｌ性（ｃｐｍ／’／
エル）−ＰＩ：ｌＡ ３，９１１ １００倍希釈液＋ｌ’ＨＡ ２，４７０２００倍界釈岐
十ＰＩＩＡ ４，２５３１００倍希訳液＋ＰＨＡ ９，
５９０
エル）−ＰＩ：ｌＡ ３，９１１ １００倍希釈液＋ｌ’ＨＡ ２，４７０２００倍界釈岐
十ＰＩＩＡ ４，２５３１００倍希訳液＋ＰＨＡ ９，
５９０
Claims (2)
- （１）イック−ロイキン１産生能を有する細胞から分離
され、３′末ＦＡにポリアデニル酸も′η」貨を有する
、インターロイキン１をコートする伝令リボわ（酸。 - （２）インター１ｊイキン１産生能をイｊする細胞をイ
／ターロイ−トン１誘導剤と蛋白合成阻害剤の存在下に
培養することにより、該細胞中にインターロイキン１を
コートする伝令リボ核酸を生成函積させ、次いてこれを
分離することを特徴とするインターロイ・トン１をコー
ドする伝令リボｔＡ酸のＵ、’ｌ製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59006730A JPS60149386A (ja) | 1984-01-17 | 1984-01-17 | インタ−ロイキン１をコ−ドする伝令リボ核酸及びその調製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59006730A JPS60149386A (ja) | 1984-01-17 | 1984-01-17 | インタ−ロイキン１をコ−ドする伝令リボ核酸及びその調製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60149386A true JPS60149386A (ja) | 1985-08-06 |
Family
ID=11646350
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59006730A Pending JPS60149386A (ja) | 1984-01-17 | 1984-01-17 | インタ−ロイキン１をコ−ドする伝令リボ核酸及びその調製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60149386A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4762914A (en) * | 1984-05-18 | 1988-08-09 | Auron Philip E | Truncated protein of interleukin-1 |
| US4898818A (en) * | 1984-12-21 | 1990-02-06 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Antitumor active substance, process for preparing the same, drug containing the substance, gene coding for the substance, vector containing the gene and recombinant microorganism |
| US5008374A (en) * | 1986-03-14 | 1991-04-16 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | IL-1α derivatives and drugs |
| EP0594607A1 (en) * | 1990-03-02 | 1994-05-04 | Autoimmune Inc | IMPROVEMENT OF THE REDUCING REGULATION OF AUTOIMMUNE DISEASES BY ORAL ADMINISTRATION OF AUTOANTIGENS. |
| US5831022A (en) * | 1986-02-18 | 1998-11-03 | Hoffmann-La Roche Inc. | Purification of recombinant human IL-1α |
| US5847098A (en) * | 1984-12-21 | 1998-12-08 | Otsuka Pharmaceutcal Co., Ltd. | DNA encoding interleukin IL-1β mutant |
| US6107465A (en) * | 1984-12-21 | 2000-08-22 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | IL-1β and derivatives thereof and drugs |
-
1984
- 1984-01-17 JP JP59006730A patent/JPS60149386A/ja active Pending
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| J CELL.BIOCHEM.SUPPL=1983 * |
| J.CELL.BIOCHEM.SUPPL.O=1983 * |
| PKOC.NAT1.ACAD.SCI.USA=1983 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4762914A (en) * | 1984-05-18 | 1988-08-09 | Auron Philip E | Truncated protein of interleukin-1 |
| US4898818A (en) * | 1984-12-21 | 1990-02-06 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Antitumor active substance, process for preparing the same, drug containing the substance, gene coding for the substance, vector containing the gene and recombinant microorganism |
| US5847098A (en) * | 1984-12-21 | 1998-12-08 | Otsuka Pharmaceutcal Co., Ltd. | DNA encoding interleukin IL-1β mutant |
| US6107465A (en) * | 1984-12-21 | 2000-08-22 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | IL-1β and derivatives thereof and drugs |
| US5831022A (en) * | 1986-02-18 | 1998-11-03 | Hoffmann-La Roche Inc. | Purification of recombinant human IL-1α |
| US5008374A (en) * | 1986-03-14 | 1991-04-16 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | IL-1α derivatives and drugs |
| EP0594607A1 (en) * | 1990-03-02 | 1994-05-04 | Autoimmune Inc | IMPROVEMENT OF THE REDUCING REGULATION OF AUTOIMMUNE DISEASES BY ORAL ADMINISTRATION OF AUTOANTIGENS. |
| EP0782859A1 (en) * | 1990-03-02 | 1997-07-09 | Autoimmune, Inc. | Enhancement of the down-regulation of autoimmune diseases by oral administration of autoantigens |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Arora | Cell culture media: a review | |
| Metcalf et al. | Haematological effects in mice of partially purified colony stimulating factor (CSF) prepared from human urine | |
| Makhluf et al. | Age-related decline in osteoprotegerin expression by human bone marrow cells cultured in three-dimensional collagen sponges | |
| KR100514957B1 (ko) | 수지상세포자극인자 | |
| US20050014255A1 (en) | Stem cells for clinical and commercial uses | |
| RU2756561C2 (ru) | Среда для формирования колоний и её применение | |
| JP6378321B2 (ja) | 筋幹細胞生体外培養方法およびその用途 | |
| JP6648259B2 (ja) | 向上された臍帯由来付着型幹細胞、その製造方法及びその用途 | |
| CN111587117A (zh) | 用于预防或治疗类风湿性关节炎的、含线粒体的药物组合物 | |
| CN112816697A (zh) | 抑制破骨细胞活性及治疗骨质疏松的试剂及其应用 | |
| Zhao et al. | Rutin promotes the formation and osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cell sheets in vitro | |
| KR860000899B1 (ko) | 인체 난포(卵胞)자극 호르몬의 제조방법 | |
| KR20240028370A (ko) | 3차원 배양된 탯줄 유래 중간엽 줄기세포 및 이의 용도 | |
| JPS60149386A (ja) | インタ−ロイキン１をコ−ドする伝令リボ核酸及びその調製法 | |
| KR860000900B1 (ko) | 인체 황체형성 호르몬의 제조방법 | |
| JP2017520582A (ja) | 関節リウマチ治療のための間葉系間質細胞 | |
| JPS58174327A (ja) | 治療および診断用組成物 | |
| US20190060406A1 (en) | Il-1ra based compositions and treatments | |
| KR20050044849A (ko) | 중간엽 줄기세포로부터 연골세포를 분화시키는 방법 | |
| WO2020158924A1 (ja) | 母児間免疫寛容を誘導する方法 | |
| Metcalf | Colony formation in agar by murine plasmacytoma cells: potentiation by hemopoietic cells and serum | |
| CN114478706B (zh) | 用于三维培养纤维网状结构多肽及其应用 | |
| Peters | Preparation of large quantities of pure bovine lymphocytes and a monolayer technique for lymphocyte cultivation | |
| Kovalchuk et al. | Monitoring of transplanted human Mesenchymal Stem Cells from Wharton’s Jelly in xenogeneic systems in vivo | |
| KR20150020112A (ko) | 메트포민이 처리된 면역조절능을 갖는 간엽줄기세포 및 이를 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물 |