DE3423207A1

DE3423207A1 - Verfahren zur herstellung einer neuen kamillensorte (bezeichnung manzana)

Info

Publication number: DE3423207A1
Application number: DE19843423207
Authority: DE
Inventors: Chlodwig Franz; Otto Dr Isaac
Original assignee: Degussa GmbH
Current assignee: Meda Pharma GmbH and Co KG
Priority date: 1983-06-29
Filing date: 1984-06-22
Publication date: 1985-01-03
Anticipated expiration: 2004-06-23
Also published as: DE3423207C2; DE3423207C3

Description

Verfahren zur Herstellung einer neuen Kamillensorte (Bezeichnung Manzana) Zubereitungen der Blütenköpfchen der Echten Kamille (Chamomilla recutita (L.) Rauschert, synonym mit Matricaria chamomilla L.) finden wegen ihrer antiphlogistischen und spasmolytischen Wirkung eine breite therapeutische Verwendung und bilden einen wichtigen Bestandteil des pflanzlichen Arzneischatzes. Besondere therapeutische Bedeutung kommt dabei den Wirkstoffen (-)- d-Bisabolol und Chamazulen zu. Eine gute Kamillendroge sollte deshalb einen möglichst hohen Gehalt an diesen beiden Substanzen aufweisen.
Unter der Bezeichnung DEGUMILL (es handelt sich hierbei um die im Patentanspruch der Deutschen Patentschrift 24 02 802 erwähnte Kamillensorte; DDR-Sortenschutzrecht Degumill; Italienisches Patent 1 035 096) ist eine Kamillensorte bekannt, die einen gleichzeitig hohen Gehalt an (-)-Gc-Bisabolol und Chamazulen aufweist.
Der Chamazulen- und Bisabololgehalt dieser Kamillensorte DEGUMILL ist jedoch nur dann beständig, wenn jegliche Einkreuzung beziehungsweise Fremdbestäubung mit anderen Kamillensorten, deren Bisabolol- und Chamazulengehalt erheblich niedriger ist, beziehungsweise mit der überall vorhandenen wirkstoffarmen Wildkamille, verhindert wird. Diese Einkreuzungsgefahr durch Fremdbestäubung ist fast immer vorhanden, da die Wildkamille praktisch überall vorkommt.
Weiterhin sind verschiedene tetraploide Kamillensorten bekannt (beispielsweise BODEGOLD, DDR; POHORELICKY, CSSR; ZLOTY LAN, Polen; BK-2, Ungarn). Diese tetraploiden Kamillensorten weisen einen Chamazulengehalt auf, der nicht wesentlich unter dem der neuen Kamillensorte Manzana liegt. Andererseits ist hingegen in diesen bekannten tetraploiden Kamillensorten der wichtige Wirkstoff (-)- q~-Bisabolol nur in äußerst geringer Menge vorhanden und es herrschen stattdessen die übrigen Bisaboloide (Bisabololoxid A und B sowie Bisabolonoxid) vor, die zusammen mehr als die Hälfte des ätherischen Öls bei den bekannten tetraploiden Kamillensorten ausmachen.
Es wurde nun ein Verfahren zur Herstellung einer neuen tetraploiden Kamillensorte mit vorteilhaften Eigenschaften gefunden.
Die Erfindung betrifft die durch die Patentansprüche definierten Gegenstände beziehungsweise Sachverhalte.
Die neue verfahrensgemäße tetraploide Kamillensorte mit der Bezeichnung Manzana zeichnet sich über raschenderweise gegenüber der bekannten Kamillensorte DEGUMILL sowie den anderen bekannten tetraploiden Kamillensorten durch eine Reihe von neuen und vorteilhaften Eigenschaften aus.
Im Gegensatz zu DEGUMILL ist sie nicht mehr anfällig gegen die Fremdbestäubung mit den natürlich vorkommenden Kamillen-Populationen (Wildkamille). Außerdem hat sie einen beträchtlich höheren Gehalt an dem wichtigen Wirkstoff (-)-d-Bisabolol als die Sorte DEGUMILL.
Gegenüber den bekannten tetraploiden Kamillensorten unterscheidet sich die verfahrensgemäße Sorte Manzana überraschenderweise durch einen unvergleichlich höheren Gehalt an dem wichtigen Wirkstoff (-)-o1-Bisabolol sowie einen sehr geringen Gehalt an den übrigen Bisaboloiden.
Darüberhinaus unterscheidet sich die verfahrensgemäße Sorte Manzana von den bekannten tetraploiden Kamillensorten überraschenderweise noch durch folgende Eigenschaften: verbesserte Keimfähigkeit der Samen; geringerer Anfall von nicht brauchbarer Krautmasse (das heißt höherer Blütenertrag); niedrigerer Wassergehalt der Blüten (das heißt bessere Ausbeute an getrockneten Blüten und kürzere Trocknungszeiten); bessere Eignung für die maschinelle Ernte, weil die Blüten weitgehend in einer Ebene lokalisiert sind und die meisten Blüten gleichzeitig blühen (dadurch wird auch ein einheitlicher Erntetermin möglich); bessere Haltbarkeit der Droge (geringere Neigung zu Zerfall und Grusbildung); besonders aromatischer und typischer Kamillegeruch.
Weiterhin ist die verfahrensgemäße Kamillensorte Manzana im Gegensatz zu den bisher bekannten tetraploiden Kamillensorten inhaltsstoffmäßig homogen, wobei die Eigenschaften chamazulen- und (-)- d-bisabololhaltig beständig (das heißt homozygot) sind.
Demgegenüber zeigt die Einzelpflanzentestung der bekannten tetraploiden Kamillensorten, daß die einzelnen Individuen verschiedenen Inhaltsstofftypen zuzurechnen sind, daß heißt jede Stichprobe einer hieraus hergestellten Droge liefert ein sowohl qualitativ als auch quantitativ unterschiedliches, inhomogenes Ergebnis.
Aufgabe der Erfindung ist die Herstellung einer neuen tetraploiden Kamillensorte mit verbesserten Eigenschaften, insbesondere einem erhöhten Gehalt an (-)- i -Bisabolol.
Die Herstellung der neuen verfahrensgemäßen Kamillensorte erfolgt durch Tetraploidisierung der Kamillensorte DEGUMILL (Genmutation) und sich hieran anschließende weitere Selektions- und Vermehrungsschritte (Mutterstamm- baumzüchtung für vegetativ vermehrbare Fremdbefruchter).
Die Sorte Manzana setzt sich aus 34 Stämmen beziehungsweise Linien, die in der Erhaltungszüchtung getrennt bearbeitet wurden, zusammen.
Die Tetraploidisierung kann beispielsweise in an sich bekannter Weise durch Behandlung von Pflanzenteilen (Samen, Wurzeln, Sproßspitzen, Keimen, Achselknospen) oder Gewebe der Kamillenpflanze DEGUMILL mit Chemikalien, Röntgenstrahlen, Gammastrahlen oder UV-Strahlen erfolgen.
Sie kann weiterhin nach der Dekapitierungs-Kallus-Methode, durch Antherenkultur oder durch Anwendung von hohen oder auch niedrigen Temperaturen auf die Kamillenpflanze DEGUMILL beziehungsweise Pflanzenteile oder Gewebe der Kamillenpflanze DEGUMILL erfolgen. Es wird hierzu beispielsweise auf das Buch von Werner Gottschalk "Die Bedeutung der Polyploidie für die Evolution der Pflanzen", Gustav Fischer Verlag, Stuttgart, 1976, insbesondere Seiten 13 bis 22 verwiesen.
Die Tetraploidisierung durch Chemikalien.
Als Chemikalien für die Tetraploidisierung kommen zum Beispiel in Frage: Colchicin, Acenaphthen, Alkaloide wie Atropin, Veratrin, Nicotin, Sanguinarin, Derivate des Benzols, Diphenyls und Phenanthrens, Naphthalin und Naphthalinderivate, Diphenylamin, Tribromanilin, Paradichlorbenzol, Methylnaphtochinon, Methylnaphthohydrochinon, Salicylsäure und verwandte Substanzen, Hexachlorhexan, Pervitin (Hydrochlorid), Alkyl-Alkali-Carbamate wie 1 sopropyl-Natrium-Carbamat, Phenylurethan, Salze der Kakodylsäure (zum Beispiel Natriumsalz), Glykoside von Convallaria wie Convallarin, Convaliatoxin und Convallamarin, Heteroauxin, Germisan (Phenylmercuribrenzkatechin), organische Quecksilberverbindungen wie Ethyl-Quecksilber-Phosphat, Ethyl-Quecksilber-Chlorid, Phenyl-Quecksilber-Hydroxid, Phenyl-Quecksilber-Dinaphthylmethandisulfonat, Chloroform, Lachgas (N2O) sowie Gemische dieser Stoffe. Weiterhin kommen auch Ölkuchen, Kompost und Kuhdung in Betracht.
Die Behandlung mit den hier erwähnten Stoffen erfolgt beispielsweise bei Temperaturen zwischen 0 und 350 C, vorzugsweise zwischen 12 und 30° C, insbesondere 15 und 259 C.
Die Applizierung erfolgt beispielsweise durch Behandeln von Samen, Sproßspitzen, Wurzeln (insbesondere Wurzelspitzen oder Wurzeln von Keimlingen), Fruchtknoten, von Schnittflächen an Blättern oder Stengeln, von Zellsuspensionen aus Meristem-Gewebe, von Kalluskulturen oder auch durch Injektion in die basale Stengelregion oder in den Bereich der Achselknospen. Die Chemikalien werden im allgemeinen in Form von Lösungen in Wasser, schwach alkoholischen (Alkoholgehalt in der Regel unter 5 %) oder schwach sauren Lösungen angewendet.
Der pH-Wert der schwach sauren Lösungen liegt beispielsweise bei 5,5 - 6,5, wobei das Ansäuern beispielsweise mittels niederen organischen aliphatischen Säuren wie Essigsäure erfolgt. Falls man alkoholische Lösungen verwendet, können diese ebenfalls schwach sauer sein. Die Konzentrationen der Chemikalien in diesen Lösungen kann beispielsweise 0,01 bis 0,5 %, vorzugsweise 0,02 bis 0,2 %, insbesondere 0,05 bis 0,1 % betragen. Gasförmige Stoffe kommen als solche, gegebenenfalls unter Druck (zum Beispiel 1 bis 10 bar) zur Anwendung. Die Behandlungsdauer beträgt beispielsweise 1 bis 36, vorzugsweise 2 bis 12, insbesondere 4 bis 6 Stunden.
Die wirksamsten Konzentrationen sowie die Einwirkungsdauer sollte zweckmäßig jeweils in Vorversuchen getestet werden.
Besonders günstig ist zum Beispiel die Behandlung mit Colchicin bei Temperaturen zwischen 0 und 350 C, vorzugsweise 12 bis 300 C, insbesondere 15 bis 250 C. Dies kann beispielsweise dadurch erfolgen, daß Samen der Kamillensorte DEGUMILL in einer 0,01 bis 0,2 %igen, insbesondere 0,02 bis 0,1 %eigen, vorzugsweise 0,05 Eigen Colchicinlösung zum Quellen gebracht werden oder daß ausgekeimte, 5 bis 7 Tage alte gut entwickelte Keimlinge der Kamillensorte DEGUMILL (mit den Keimblättern nach unten) in eine 0,01 bis 0,2 ziege, insbesondere 0,02 bis 0,1 teige, vorzugsweise 0,05 %ige Colchicinlösung getaucht werden. Bei letzterem Verfahren soll die umgebende Atmosphäre nahezu 100 % relative Luftfeuchtigkeit aufweisen. Die Dauer der Colchicin-Behandlung beträgt beispielsweise 3 bis 36 Stunden, insbesondere 4 bis 10 Stunden. Bei der Verwendung von Keimlingen ist im allgemeinen eine Einwirkungsdauer bis zu 10 Stunden ausreichend. Bei der Verwendung von Samen kann sich die Einwirkungsdauer gegebenenfalls bis zu 36 Stunden erstrecken.
Nach der Behandlung mit den Chemikalien werden die gequellten Samen, Keimlinge, beziehungsweise sonstige Pflanzenteile, mit Wasser mehrmals gespült. Die gequellten Samen werden beispielsweise ausgesät. Die Pflanzen mit behandelten Wurzeln oder sonstige Pflanzenteile oder die behandelten Keimlinge werden beispielsweise in Pflanzkisten pikiert. Aus den so behandelten Samen beziehungsweise Keimlingen werden die Pflanzen aufgezogen (zum Beispiel im Gewächshaus: Temperatur zwischen 18 bis 25O C am Tag und 10 bis 160 C nachts) und die Pflanzen ausgewählt, deren Pollen etwa 1 1/2 mal größer sind als die Pollen des Ausgangsmaterials beziehungsweise eine Chromosomenzahl der somatischen Zellen von 36 aufweisen.
Falls man sonstige Pflanzenteile (ober- oder unter- irdische Teile) der Chemikalienbehandlung unterwirft, werden ausschließlich die aus den behandelten Teilen hervorgegangenen Triebe, Wurzeln oder Blüten/Samen einer späteren Untersuchung auf erfolgte Tetraploidisierung unterzogen. Wenn beispielsweise eine Sproßbehandlung oder eine Achselbehandlung vorgenommen wurde, wird anschließend nur der aus dieser Achsel beziehungsweise aus diesem Sproß entstehende neue Trieb und die auf ihm gebildeten Blüten beziehungsweise Samen auf Chromosomenzahl untersucht.
Die Pollengrößenmessungen und die Chromosomenzählung können beispielsweise so durchgeführt werden wie in Beispiel 1 angegeben ist.
Die Tetraploidisierung durch Strahlen.
Die Einwirkung erfolgt beispielsweise auf Samen oder Wurzelspitzen bei Temperaturen zwischen 0 und 35° C, vorzugsweise 10 und 300 C, insbesondere 15 und 250 C.
Bestrahlungssumme: 5 bis 50 Krad. Vorzugsweise kommen Gamma- oder Röntgenstrahlen in Frage.
Als UV-Strahlen kommen beispielsweise solche mit einer Wellenlänge von 400 bis 30 nm, vorzugsweise von 350 nm in Frage.
Die so bestrahlten Pflanzen beziehungsweise Pflanzenteile werden dann ebenso weiterbehandelt wie nach der Behandlung mit Chemikalien.
Anwendung hoher und niedriger Temperaturen.
Als hohe Temperaturen kommen beispielsweise Temperaturen zwischen 33 und 500 C, vorzugsweise 42 bis 450 C in Frage Diesen Temperaturen werden beispielsweise ausgesetzt: gequollene Samen, Keimlinge, Triebspitzen und meristematisches Gewebe. Dauer der Behandlung: zum Beispiel 1 bis 48, vorzugsweise 12 bis 24 Stunden.
Als niedrige Temperaturen kommen beispielsweise in Frage: 0 bis 50 C, vorzugsweise 0,5 bis 4" C, insbesondere 2" C. Diesen Temperaturen werden beispielsweise ausgesetzt: gequollene Samen, Keimlinge, Triebe und meristematisches Gewebe. Dauer der Behandlung: zum Beispiel 1 bis 100, vorzugsweise 20 bis 40 Tage.
Die so behandelten Pflanzen beziehungsweise Pflanzenteile werden ebenso weiterbehandelt wie nach der Behandlung mit Chemikalien.
Die Dekapitierungs-Kallus-Methode (Dekapitierung = Köpfung oder Entspitzung oder Rückschnitt).
Die Dekapitierung wird beispielsweise an Jungpflanzen am Stengel, vorzugsweise am Spitzenvegetationskegel, nach Ausbildung von 4 bis 6 Blättern oder auch an Blattstielen oder Seitentrieben durchgeführt. Die aus dem Wundgewebe (Kallusgewebe) entstehenden Knospen beziehungsweise Sprosse werden abgeschnitten, zur Bewurzelung gebracht, in Töpfen weiterkultiviert und die tetraploidisierten Pflanzen in gleicher Weise wie bei der Chemikalienbehandlung aus selektiert.
Antherenkultur (Erzeugung von Pflanzen mit einfachem Chromosomensatz aus den Staubbeuteln mit anschließender spontaner oder künstlicher Tetraploidisierung).
Von blühenden Pflanzen werden geschlossene Röhrenblüten geerntet, deren Antheren (Staubbeutel) sich im Stadium vor der ersten Pollenmitose befinden. Die Antheren werden mittels Mikromanipulator aus den Blütenknospen entnommen und in Petrischalen übertragen, die beispielsweise mit dem Nährmedium nach Nitsch und Nitsch (Tabelle 1) gefüllt sind. Anschließend werden die Petrischalen in einem Kulturraum im 16-Stunden-Tag bei 280 C Tag- und 200 C Nachttemperatur aufbewahrt. Nach circa vier Wochen beginnen die Antheren aufzubrechen und Pflänzchen herauszuwachsen. Diese sind bei diploidem Elternteil haploid, bei tetraploidem Elternteil dihaploid; sie werden nach Ausbildung von Wurzeln beispielsweise in Gartenerde getopft und im Gewächshaus zum Blühen gebracht. Diese (di)haploiden Pflanzen sind steril, können jedoch durch Sproßspitzen-, Wurzel- oder Stengelbehandlung mit Chemikalien, wie zum Beispiel Colchicin polyploidisiert werden, wobei homozygote Pflanzen entstehen, die sich dann über Samen weitervermehren lassen. Weiteres Vorgehen siehe bei der Behandlung mit Chemikalien (zum Beispiel Colchicinbehandlung).
Tabelle 1 Kulturmedium nach Nitsch und Nitsch (Science, 1969) mg/l Kino3 950 NH4NO3 720 MgSO4 x 7 H2O 185 CaCl2 166 KH2PO4 68 MnSO4 x 4 H2O 25 H3BO3 10 ZnSO4 x 7 H20 10 Na2MoO4 x 2 H2O 0,25 CuSO4 x 5 H2O 0,025 5 ml einer Lösung aus 7,45 g Ethylendiamintetraessigsäure-dinatriumsalz und 5,57 g FeSO4 x 7 H2O auf 1000 ml myo-Inosit 100 Glycin 2 Nicotinsäure 5 Pyridoxin-HCl 0,5 Thiamin-HC 1 0,5 Folsäure 0,5 Biotin 0,05 Saccharose 20 g Fertignährboden (DIFCO-Bacto-Agar) 8 g Indolessigsäure 0,1 pH des Mediums eingestellt auf 5,5 Von den durch Pollengrößenmessung und/oder Chromosomenzählung ausselektierten tetraploiden Kamillenpflanzen, die nach den vorstehend beschriebenen Möglichkeiten erhalten werden können, werden dann nochmals die Pflanzen ausselektiert, die folgende Bedingungen erfüllen: a) ungefähr gleichzeitiges Blühen, b) eine gleichmäßige, grundständige Verzweigung und eine schmale Blühzone von circa 5 cm, c) große Blütenköpfchen mit einem Außendurchmesser von circa 30 mm (25 bis 35 mm), d) Mindestgehalt an Chamazulen von 150 mg% und Bisabolol von 300 mg% und einem Gehalt an übrigen Bisaboloiden (insbesondere Bisabololoxide) unter 50 mg% (bezogen auf die getrockneten Blüten, siehe Beispiel).
Die so ausgesuchten Pflanzen werden nun vegetativ durch Stecklinge vermehrt (verklont) und über 3 bis 5 Generationen ausgelesen, wobei die Auswahl stets nach den oben angegebenen Kriterien a) - d) erfolgt. Das heißt, die gemäß den Kriterien a) - d) ausgesuchten Pflanzen werden verklont, aus den verklonten Pflanzen wird Saatgut gewonnen, die hieraus erhaltenen Pflanzen nach den Kriterien a) - d) ausselektiert und aus letzteren wieder Saatgut gewonnen.
Die Sequenz Aussaat - Selektion gemäß a) - d) - Saatgutgewinnung kann 2 - 4 mal wiederholt werden.
Daran schließt sich nochmals eine Sequenz Aussaat -Selektion gemäß a) - d) - Verklonung - Saatgutgewinnung an.
Das zuletzt erhaltene Saatgut ist dann das Vermehrungsgut der verfahrensgemäßen Kamillensorte Manzana.
Die Stecklingsvermehrung erfolgt dabei auf folgende Weise: Zur Stecklingsvermehrung müssen die Ausgangspflanzen (Klonmutterpflanzen) unter Kurztagbedingungen blütenknospenfreie Kurztriebe ausbilden. Dies erfolgt im Winterhalbjahr im Gewächshaus ohne Zusatzbeleuchtung oder in Xlimakammern bei einer Tageslänge von 6 bis 10, vorzugsweise 8 Stunden und Temperaturen von 10 bis 150 C, vorzugsweise 120 C. Zur Verklonung beziehungsweise Vermehrung eignen sich Blatt-, Trieb- und insbesondere Kurztrieb- (Seitentrieb-) Stecklinge. Ihre Bewurzelung erfolgt bei 12 bis 18° C, vorzugsweise 150 C und Tageslängen von 12 bis 16, vorzugsweise 14 Stunden in gespannter Atmosphäre (ca. 100 % relative Luftfeuchte). Als Substrat kann beispielsweise ein Torf-Sand-Gemisch im Verhältnis 1:1 verwendet werden; es eignen sich aber auch reiner Quarzsand, Steinwolle-Stecklingswürfel, Torf-Stecklingswürfel und ähnliches.
Für die Aussaat kommen hierbei beispielsweise folgende Böden in Betracht: Gartenerde; humose, mittelschwere Lehmböden; lehmige oder humose Sandböden.
Es kann im Gewächshaus oder auch im Freiland ausgesät werden. Die Temperaturen für Keimung und Wachstum der Pflanzen liegen beispielsweise zwischen 12 bis 240 C, inbesondere 18 bis 200 C. Falls im Freiland ausgesät wird, wird vorzugsweise im Herbst (September/Oktober) oder im Frühjahr (März/April) gesät. Diese Termine gelten für sämtliche in Frage kommenden Anbaugebiete (zum Beispiel nördliche Hemisphäre, gemäßigte bis subtropische Klimagebiete).
Die neue, verfahrensgemäße Kamillensorte Manzana gehört zur Kulturpflanzenart der echten Kamille mit der botanischen Bezeichnung Matricaria Chamomilla L. (synonym Chamomilla recutita (1'.), Rauschert) und wird durch die Wirkstoffangaben des Patentanspruchs 1 definiert.
Die dort angegebenen Werte für die Wirkstoffgehalte beziehen sich auf dasjenige Blüten-Entwicklungsstadium, welches erreicht ist, wenn 30 bis 70 %, insbesondere 40 bis 60 % aller Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind (das heißt die für die Wirkstoffbestimmung verwendeten Blüten wurden zu diesem Zeitpunkt gepflückt und dann 72 Stunden bei 400 C im Trockenschrank getrocknet).
Falls die Ernte der Kamillenblüten zu einem Zeitpunkt erfolgt, in dem das Blüten-Entwicklungsstadium weiter fortgeschritten ist, das heißt, wo beispielsweise 100 % oder bis zu 100 % aller Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind (zum Beispiel Stadium der Vollblüte) und/ oder falls die Trocknung der geernteten Blüten bei höherer Temperatur als 40° C erfolgt, ist der Gehalt an den Wirkstoffen (-)-d-Bisabolol und Chamazulen niedriger.
Erfolgt also die Ernte in einem Vegetationsstadium, wo 30 - 100 % der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind und wird hierbei bei einer Temperatur bis zu 600 C getrocknet (vorzugsweise unter Ausschluß des Sonnenlichts, zum Beispiel unter solchen Trocknungsbedingungen, wie einige Seiten weiter angegeben wird), enthält die so gewonnene Kamillendroge mindestens -120 mg% Chamazulen und mindestens 200 mg% (-)-c<-Bisabolol, während der Gehalt an den übrigen Bisaboloiden nach wie vor unter 50 mg% bleibt.
Unter der Bezeichnung "übrige Bisaboloide" in dem Anspruch 1 werden insbesondere verstanden: ( -Bisabololoxid A und B; (-)-Ot-Bisabolonoxid A; Weitere Bestandteile des ätherischen Öls der verfahrensgemäßen Kamillensorte sind En-In-Dicycloether, Farnesen, Spathulenol und in geringen Konzentrationen verschiedene leichtflüchtige Terpenkohlenwasserstoffe.
Beispielsweise enthalten die im Trockenschrank bei 400 C getrockneten Blüten (geerntet in dem Blütenentwicklungsstadium, wo 30 - 70 % der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind) der verfahrensgemäßen Sorte Manzana zwischen 150 bis 200 mg% Chamazulen, zwischen 300 bis 450 mg% (-)- i -Bisabolol und nur wenig, das heißt zwischen 5 bis 50 mg andere Bisaboloide bezogen auf die Trockensubstanz (das heißt bezogen auf das absolute Trockengewicht der Blüten). Dieses absolute Trockengewicht wird durch Trocknung einer separaten Probe von Kamillenblüten der verfahrensgemäßen Sorte Manzana im Trockenschrank bei 1050 C bis zur Gewichtskonstanz (72 bis 96 Stunden) bestimmt. Der Wirkstoffgehalt der bei beispielsweise 35 bis 500 C getrockneten Blüten (Droge) wird dann auf die bei 1050 C ermittelte Trockenmasse der Blüten berechnet.
In ihrem Phänotyp ist die verfahrensgemäße Sorte Manzana den bisher bekannten tetraploiden Kamillensorten (zum Beispiel Bodegold, Zloty Lan, BK-2, Pohorelicky Velkokvety) ähnlich; sie unterscheidet sich von diesen insbesondere dadurch, daß bei der verfahrensgemäten Sorte Manzana (-)-d-Bisabolol die Hauptkomponente des ätherischen Öls der Blüten ist, daß außerdem der Chamazulengehalt höher und der Gehalt an den übrigen Bisaboloiden (Bisabololoxide A und B; Bisabolonoxid) ganz erheblich niedriger ist. Weitere Bestandteile des ätherischen Öls der Sorte Manzana sind Farnesen, Spathulenol und En-In-Dicycloäther.
Die verfahrensgemäße Kamillensorte kann auf allen Böden mit Ausnahme von Böden mit einem Gehalt von mehr als 20 % an organischer Substanz (Humusstoffe und Bodenorganismen) erfolgreich angebaut werden; es sind keine besonderen agrotechnischen Verfahren oder Kulturmaßnahmen erforderlich; Lediglich ist für den Anbau ein Langtag mit über 13 Stunden maximale Tageslänge notwendig, das heißt für den Anbau kommen insbesondere die gemäßigten Zonen und die Subtropen in Frage.
Die verfahrensgemäße Kamillensorte Manzana hat einen mittelspäten Erntetermin, eine einheitliche Wuchshöhe mit schmaler Blühzone und große Blütenköpfchen und ist daher besonders für mechanische Ernte geeignet. Hinzu kommt, daß zu gleicher Zeit ausgesäte Pflanzen der Sorte Manzana im allgemeinen praktisch zur gleichen Zeit gemeinsam abblühen, so daß auch hierdurch die Ernte sehr vereinfacht und erleichtert wird.
Die verfahrensgemäße Kamillensorte Manzana erbringt einen hohen Ertrag. Verwendungsmöglichkeiten sind beispielsweise: Gewinnung von Kamillendroge, Kamillenöl, Kamillenextrakten sowie natürlichem (-) - «-Bisabolol.
Eine aus der verfahrensgemäßen Kamillensorte Manzana hergestellte Droge besitzt den maximalen Gehalt an den Wirkstoffen Chamazulen und Bisabolol, wenn die Ernte der Kamillenblütenköpfchen in dem Vegetationsstadium erfolgt, wo beispielsweise 30 bis 70 %, vorzugsweise 40 bis 60 %, das heißt im allgemeinen 50 % der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind und die Trocknung bei einer Lufttemperatur von höchstens 500 C, beispielsweise 35 bis 500 C erfolgt. Die Trocknung kann hierbei entweder durch künstliche Luftzufuhr oder auch durch Trocknung im Schatten, gegebenenfalls auch in der Sonne erfolgen, wobei jedoch darauf geachtet werden soll, daß die Wärmezufuhr nicht über das zur vollständigen Trocknung erforderliche Maß hinausgeht. Es ist also vorteilhaft, daß man sich durch jeweilige Kontrollwägungen von der erreichten Gewichtskonstanz überzeugt. Die Trocknung kann spontan oder künstlich (zum Beispiel mit künstlicher Warmluft) erfolgen. Die Wirkstoffausbeute ist am größten bei spontaner Trocknung unter Ausschluß des Sonnenlichts.
Der Trocknungsprozeß soll möglichst bald beziehungsweise umgehend nach der Ernte stattfinden. Die Trocknung soll in dünnen Schichten, beispielsweise von 5 bis 20 cm, vorzugsweise 10 cm Dicke durchgeführt werden.
Die Bestimmung des Chamazulens erfolgt spektralphotometrisch ähnlich der bei Kamillenextrakten üblichen Weise.
Die Bestimmung des (-)- d-Bisabolols sowie der übrigen Inhaltsstoffe des Kamillenöls erfolgt nach der hierfür üblichen gaschromatographischen Methode.
Eine genaue Schilderung der analytischen Bestimmungsmethoden enthält die Anlage A.
Der Wirkstoff Chamazulen liegt in den Kamillenblüten nicht als solcher, sondern in Form des Sesquiterpenlactons Matricin vor. Das Matricin besitzt eine pharmakologische Wirkung, die der des Chamazulens entspricht. Aus dieser Vorstufe Matricin entsteht beispielsweise beim Erhitzen (zum Beispiel Wasserdampfdestillation, Teeaufguß) sofort das Chamazulen. Es ist daher üblich, bei der Kamille nicht den Gehalt an Matricin, sondern den analytisch erfaßbaren Gehalt des sich hieraus bildenden Chamazulens anzugeben.
Beispiel 1 Samen der Kamillensorte DEGUMILL wurden auf ein mit 0,05 %iger wässriger Colchicinlösung getränktes Filterpapier aufgebracht und bei Raumtemperatur (200 C) G'Stunden quellen lassen. Daraufhin wurden sie vom Filterpapier entfernt, mit Wasser mehrmals gespült und in Saatkisten (Gewächshaus) ausgesät: Erde: Torf-Sand-Gemisch 1:1, Temperatur: 18 bis 200 C, relative Luftfeuchtigkeit: circa 60 %, Tageslänge bei künstlicher Belichtung: 14 Stunden.
Die keimenden Pflanzen wurden bis zur Blume beobachtet, der Polyploidisierungserfolg wurde durch Vergleichsmessung der Pollen- und Samengröße sowie durch Chromosomenzählung der Pflanzen (F1-Nachkommenschaft = erste, aus Samen gezogene Nachkommenschaft der als tetraploid bestätigten colchicinierten Pflanzen) festgestellt.
Die Tetraploidisierung kann auch auf folgende Weise erfolgen: Auf wassergetränktem Filterpapier ausgekeimte, 5 bis 7 Tage alte, gut entwickelte Kamillenkeimlinge der Sorte DEGUMILL wurden bei Raumtemperatur (200 C) für 4 bis 6 Stunden mit den Keimblättern nach unten in eine 0,05 %ige Colchicinlösung gestellt. Die empfindlichen Keimwurzeln wurden dabei geschont; um Trockenschäden an ihnen zu vermeiden, muß die umgebende Atmosphäre nahezu 100 % relative Luftfeuchte aufweisen. Nach der Behandlung wurden die Keimlinge mit Wasser mehrmals gespült und in Pflanzkistchen pikiert. Die weitere Behandlung erfolgte wie bei den Samen.
Die Pollengrößenmessungen werden mit einem Leitz-Binokular-Forschungsmikroskop mit Mikrometer-Meßokular und Mikrometer-Objektträger durchgeführt.
Die Chromosomenzählung findet an Wurzel spitzen statt: Von den im Gewächshaus gezogenen Jungpflanzen oder Stecklingspflanzen werden 1 bis 2 cm lange frische Wurzelenden gesammelt, 5 Stunden in 0,002 molare Hydroxychinolin-Lösung und anschließend 15 Minuten in 1N HCl eingelegt. Zur Untersuchung werden circa 1 mm der Wurzel spitzen mit 2 zeiger Orcein-Essigsäure angefärbt und in Ölimmersion mikroskopisch untersucht.
Bei den in Mitose befindlichen Zellen kann so der 4-fache Chromosomensatz der somatischen Zellen bestimmt werden (4n = 36).
Diejenigen Pflanzen, bei welchen der Pollendurchmesser um circa 50 z größer als derjenige des diploiden Ausgangsmaterials (circa 30 statt circa 20 ßm) und bei denen der Chromosomensatz der somatischen Zellen auf 36 verdoppelt war (bei dem diploiden Ausgangsmaterial ist die entsprechende Zahl 18) sind tetraploid. Diese wurden ausselektiert. Ungefähr 0,1 bis 0,5 % der Samen beziehungsweise der Keimlinge wurden bei der oben angegebenen Methode tetraploidisiert und entwickelten blühfähige, intakte Pflanzen. Es schließen sich nun folgende Schritte an: Schritt 1: Von den (wie oben beschriebenen) ausselektierten tetraploiden Kamillenpflanzen wurden diejenigen Individuen ausgelesen, die a) etwa gleichzeitig blühen, b) eine gleichmäßige, grundständige Verzweigung und eine schmale Blühzone von ca. 5 cm aufweisen, c) große Blütenköpfchen mit einem Außendurchmesser von ca. 30 mm aufweisen, d) einen Mindestgehalt für Chamazulen von 150 mg% und Bisabolol von 300 mg% erreichen oder über schreiten und deren Gehalt an übrigen Bisaboloiden (insbesondere Bisabololoxide) deutlich unter 50 mg% liegt. (Sämtliche Werte beziehen sich auf Blütenköpfchen, die bei 400 C getrocknet wurden und deren Ernte in dem Stadium erfolgte, wo erst circa 50 % (40 bis 60 %) der Röhrenblüten eines Köpfchens aufgeblüht waren.) Diese Pflanzen wurden verklont. Hierzu wurden die Pflanzen (Klonmutterpf lanzen) zunächst auf circa 15 cm Sproßlänge zurückgeschnitten, unter 8 bis 10 Stunden Tageslänge und 12 bis 140 C zum Neuaustrieb (kurze Seitentriebe) gebracht. Die Kurztriebe wurden geschnitten und in ein Torf-Sand-Gemisch gesteckt. Bei circa 100 % relativer Luftfeuchte, 150 C Lufttemperatur und einer Tageslänge von 14 Stunden dauerte die Bewurzelung der Stecklinge 7 bis 14 Tage.
Anstelle der angegebenen konventionellen Verklonung (Stecklingsvermehrung) kann auch die in-vitro-Vermehrung teilungsfähiger Gewebspartien der Pflanze eingesetzt werden (sogenannte Meristem-Vermehrung). Zur Etablierung einer Kamillen-Kultur eignen sich verschiedene Teile der Pflanze, vorzugsweise die Sproßspitzen oder die Achselknospen.
Nach Abspülen der Pflanzen mit H 202 werden unter aseptischen Bedingungen im "Laminar Flow" (Hochleistungs-Schwebstoff-Filter mit turbulenzarmer Verdrängungsströmung) Sproßspitzen der Blattachselknospen entnommen und in Reagenzgläser übertragen, die mit einem Nährmedium, beispielsweise nach Murashige und Skoog (Physiol.Plant. 15, 473-497, 1962) gefüllt sind. Die Reagenzgläser werden in einen Klimaraum mit 12-18, vorzugsweise 16 Stunden Tageslänge (erreicht durch Fluoreszenz-Leuchtstoffröhren), einer Lichtintensität von 500 - 10.000 lux, vorzugsweise 1.000 -3.000 lux und einer Temperatur von 15 - 300 C, vorzugsweise 22 - 270 C gestellt.
Sobald die Explantate ein gutes Wachstum zeigen, werden sie auf ein obengenanntes Nährmedium, jedoch mit einer höheren Cytokininkonzentration (30 mg/l N6-Isopentenyladenin) und wenig oder gar keinem Auxin (0 - 0,3 mg/l Indolessigsäure) überführt. In der Folge strecken sich die Achsen und es werden Adventivorgane sowie vermehrt Achselknospen gebildet. Diese können nach der vorerwähnten Weise entnommen und angezogen werden.
Die für die Pflanzenvermehrung in größerer Zahl bestimmten Explantate (der 3. Passage = 3. Vermehrungsgeneration) werden nach Anwachsen und Ausbildung der Blätter auf dem erstgenannten Nährmedium auf einen Nährboden übertragen, welcher 10 mg/l Indolessigsäure oder 3-Indolbuttersäure oder 0,1 - 0,3 mg/l o&-Naphthylessigsäure enthält. Dabei bewurzeln sich die Pflänzchen und können nach etwa 4 Wochen in mit sterilisierter Gartenerde (12 Stunden bei 1200 C gedämpft) gefüllte Töpfe gepflanzt und im Gewächshaus (unter Bedingungen wie für die konventionelle Stecklingsvermehrung üblich) weiterkultiviert werden.
Nährmedium nach Murashige & Skoog: mg/l mg/l NH4N03 400 Indolessigsäure 2,0 Ca(N03)2.4H20 144 Furfuryladenin 0,1 KNO3 80 Thiamin 0,1 KH2PO4 12,5 Nicotinsäure 0,5 MgSO4.7H2O 72 Pyridoxin 0,5 KCl 65 Glycin 2,0 NaFe-EDTA 25 myo-Inosit 100 H3BO3 1,6 Casein-Hydrolys. 1000 MnSO4.4H2O 6,5 Saccarose 2 % ZnSO4.7H2O 2,7 gereinigtes KJ 0,75 Agar-Pulver 1 % Schritt 2: Die nach Schritt 1 erhaltenen Pflanzen blühten unter isolierten Bedingungen im Gewächshaus gemeinsam ab.
Die Pflanzen standen hierbei in 11-cm-Töpfen, gefüllt mit Gartenerde, bei 18 bis 240 C Tag- und 12 bis 140 C Nacht-Temperatur. Die Tageslänge betrug mindestens 14 Stunden und wurde im Winterhalbjahr durch Zusatzbelichtung (200 Watt/m2) erreicht. Die Wasserversorgung erfolgte nach Bedarf.
Von der Gesamtheit der selektierten Individuen wurden über einen Zeitraum von 4 Wochen laufend diejenigen Köpfchen zur Saatgutgewinnung geerntet, die verblüht und kurz vor dem Zerfallen waren. Das Saatgut wurde nach Nachtrocknen der geernteten Blüten bei Zimmertemperatur durch Ausblasen der leichteren Blütenbestandteile gewonnen.
Schritt 3: Aus dem nach Schritt 2 erhaltenen Saatgut wurde eine Stichprobe entnommen und hieraus circa 2000 Nachkommen gezogen (ökologische Bedingungen wie bei Schritt 2) und nach den gleichen Kriterien a) bis d) von Schritt 1 selektiert. Mit den so selektierten Individuen wurde dann gemäß Schritt 2 verfahren.
Schritt 4: Von dem Saatgut gemäß Schritt 3 wurde ein Teil an zwei verschiedenen Standorten im Herbst ausgesät.
Standort A) 450 m NN, 48,50 N / 11,50 0, 750 mm Jahresniederschlagssumme, feucht-gemäßigtes Klima, Januar -10 bis 0° C, Juli +10 bis +200 C, NN = nördlich Noritalnull = Se65he ON = nördliche Breite (ngrad) "o = östliche Länge (ngrad) Standort B) 200 m NN, 420 N / 10 0, 4 mm Jahresniederschlagssumme, mediterranes Klima, Januar 0 bis +100 C, Juli +20 bis +300 C.
Die Aussaat erfolgte an beiden Standorten Ende September/ Anfang Oktober.
Die so erhaltenen Feldversuchsbestände wurden hinsichtlich homogenem Wuchs, Blütengröße und Erntetermin überprüft und beurteilt (bonitiert), außerdem wurden Stichproben der Blüten auf die Wirkstoffgehalte untersucht.
Aus dem Feldbestand wurden erneut diejenigen Individuen selektiert, die den bei Schritt 1 genannten Parametern entsprechen. Von diesen wird Saatgut entsprechend Schritt 2, letzter Satz, gewonnen.
Schritt 5: Mit dem Saatgut gemäß Schritt 4 wurden die Schritte 3 und 4 in der angegebenen Reihenfolge und Weise wiederholt.
Schritt 6: Aus dem nach Schritt 5 gewonnenen Saatgut wurden circa 1500 Individuen gezogen (Ökologische Bedingungen wie bei Schritt 2) und nach dem gleichen Prinzip, wie bei Schritt 1 angegeben ist, selektiert. Von den so ausselektierten Pflanzen wurden 34 Individuen ausgewählt und gemäß Schritt 1 verklont. Je 10 Pflanzen jedes Klons wurden in zufälliger Verteilung im Abstand 40 x 30 cm im Freiland (Standort A, siehe Schritt 4) an isolierter Stelle aufgepflanzt. Der Boden war Lößlehm, pH 7,0; die Pflanzung erfolgte Anfang Juni, die erste Ernte der Samen Mitte Juli, danach wurden die Pflanzen zurückgeschnitten, blühten nochmals und lieferten Mitte bis Ende August eine zweite Saatguternte.
Die Saatgutgewinnung dieses Materials erfolgte gemäß Schritt 2.
Das nach Schritt 6 erhaltene Saatgut ist das Vermehrungsgut der verfahrensgemäßen Kamillensorte Manzana.
Blüten von Pflanzen aus diesem Vermehrungsgut (Aussaat September/Oktober, Ernte Anfang Juni des darauffolgenden Jahres), die zu dem Zeitpunkt gepflückt werden, wenn circa 50 % (40 bis 60 % der Röhrenblüten eines Köpfchens geöffnet sind, und die sofort anschließend im Trockenschrank bei 400 C 72 Stunden getrocknet wurden, enthalten bezogen auf das Gewicht der getrockneten Blüten (Trockensubstanz) beispielsweise : 150 mg% Chamazulen, 300 mg% (-)-d-Bisabolol und höchstens 50 mg% übrige Bisaboloide.
Weitere beispielshafte Angaben zu den gemäß dem Beispiel erhaltenen Pflanzen der verfahrensgemäßen Kamillensorte: 1. Wuchs einheitliche Wuchshöhe (Ausgeglichenheit) mit schmaler Blühzone, daher besonders geeignet für die mechanische Ernte, große Blütenköpfchen, mittelhoher Ertrag; Form: grundständig verzweigt (3 bis Sfach); Stengel: aufrecht, wenig verzweigt; 2. Belaubung Blatt: fiederteilig, 2- bis 3fach; Stärke: mittel; Fiederblatt, Farbe mittelgrün; Fiederblatt (Stengelmitte); Fiederung: mittel bis stark gefiedert; 3. Blütenstand Blütenkörbchen (Blütenköpfchen): circa 30 mm äußerer Durchmesser, circa 15 mm innerer Durchmesser; Einzelkörbchengewicht (trocken): circa 45 mg; Blütensproß, Länge (mm): circa 700, jedoch abhängig von Anbauort (Klima), Aussaattermin, Boden, Düngung, Pflanzenbehandlung, Witterung; Beginn der Blüte (Tag ab 1. Januar): circa 160. Tag (Aussaat September, Standort Freising Bundesrepublik Deutschland, ansonsten abhängig von den oben genannten Faktoren).
Blüte: Mitte Juni (siehe oben); Blütenstände ohne Stiel, Gehalt an ätherischem öl (& der Trockensubstanz): circa 1,0 %; Gehalt an Azulen im ätherischen Öl: mindestens 15 %; Zerfall der getrockneten Blütenstände, Blütendroge: gering, wenn vor öffnen der letzten Röhrenblüten geerntet; Pollendurchmesser: circa 30 ßm; Samenlänge: circa 1,25 mm; Chromosomenzahl der somatischen Zellen: 4 n : 36; 4. Frucht Tausendkornmasse (TKM) der Samen: 0,06 bis 0,13 g; 5. Keimfähigkeit (KF) 75,75 %; 6. Reinheit 94 - 95 %; 7. Weitere Merkmale Eintrocknungsverhältnis frisch : trocken (Blüte) = 5,5 bis 6 : 1, charakteristisch aromatischer Geruch der Droge, fein aromatischer, typischer Geschmack des Teeaufgusses.
Anlage A Gewinnung des ätherischen Öls Ausgangsmaterial ist eine Droge aus der Kamillensorte Manzana. Zur Herstellung der Droge werden nur solche Blütenköpfchen verwendet, bei denen 30 bis 70 %, insbesondere 40 bis 60 % der Röhrenblüten geöffnet sind.
Die Trocknung erfolgt in einem Trockenschrank bei 400 C während 72 Stunden.
Das ätherische Öl der Kamillenblüten wird wie im folgenden beschrieben durch zweistündige Wasserdampfdestillation der Droge gewonnen: 2,0 g unzerkleinerte Droge wird in einem Liter-Rundkolben mit 250 ml entsalztem Wasser versetzt und einer zweistündigen Rücklaufdestillation in einer Clevenger-Apparatur (Wasserdampf-Destillations-Rücklauf-Apparatur zur gravimetrischen Bestimmung kleiner Mengen ätherischer öle) unterzogen. Als Vorlage dient 1 ml Pentan pro analysi. Die Rücklaufgeschwindigkeit beträgt 40 + 4 Tropfen/Minute. Nach Beendigung der Destillation wird das in Pentan gelöste ätherische Öl möglichst wasserfrei in Reagenzgläser abgelassen und eventuell restliches in der Apparatur anhaftendes ätherisches Öl mit Pentan nachgespült. Zur Entfernung eventueller Wasserreste wird der Lösung eine Spatelspitze getrocknetes Na2 SO4 zugesetzt und die Lösung anschließend durch eine Glasfilternutsche der Porosität D 3 oder D 4 in Rollrandfläschchen abgenutscht. Nach Abdunsten des Pentans bei 400 C im Wasserbad und Nachtrocknen im Exsikkator wird die ölmenge gravimetrisch bestimmt.
In dem so erhaltenen Öl (ca. 20 mg) werden anschließend das Chamazulen und das Bisabolol bestimmt.
Spektralphotometrische Bestimmung des Chamazulens Meßlösung: Das gesamte, aus 2 g Droge erhaltene ätherische bl (ca. 20 mg) (erhalten wie vorstehend beschrieben) wird in 25 ml n-Hexan oder Cyclohexan gelöst.
Meßgerät: Filterphotometer (zum Beispiel Eppendorf).
Wellenlänge: 578 nm Küvette: 1 cm Spezifische Extinktion von Chamazulen (1 g/100 ml; 1 cm): 20,8 Kompensationsflüssigkeit: n-Hexan oder Cyclohexan Gefundener Gehalt an Chamazulen in mg/100 g: 120-E578 Steht zur Messung kein Filterphotometer zur Verfügung, so kann die Bestimmung auch mit einem Spektralphotometer durchgeführt werden: Meßgerät: Spektralphotometer (zum Beispiel PM Q II / oder PM Q III "ZEISS") Wellenlänge: 605 nm Küvette: 1 cm Spezifische Extinktion von Chamazulen (1 g/100 ml; 1 cm): 24,5 Kompensationsflüssigkeit: n-Hexan oder Cyclohexan Gefundener Gehalt an Chamazulen in mg/100 g: 102'E605 In der Meßlösung wird anschließend das Bisabolol bestimmt.
Gaschromatoqraphische Bestimmung des Bisabolols und der übrigen Bisaboloide Gaschromatograph: Hewlett Packard Modell 5750, Erba Fractovap 2350 oder ähnliches Gerät Detektor: Flammen-Ionisations-Detektor Trägergas: Helium Säule: 1/8 Zoll; 200 cm; Stahl Säulenfüllung: 3 % Nitrilsilicongummi "XE 60" auf Kieselgur silanisiert "Chromosorb WAW HP" 125 bis 150 µm als Trägermaterial Temperatur: Detektor: 3200 C Einspritzblock: 2200 C Säule: 85 - 2200 C Temperaturprogrammierung: 40/Minute Probenlösung: Es wird die Meßlösung für das Chamazulen verwandt Vergleichslösung: Circa 15 mg Standard-Bisabolol werden in Cyclohexan zu 25 ml gelöst Einspritzmenge: Von Probenlösung und Vergleichslösung je 5 ßl Auswertung: Die Auswertung erfolgt durch Peakflächenvergleich Gehalt an Bisabolol in mg pro 100 g Droge: 10 x Einwaage(Vergleich) ~ mag~ 7 x Fläche (Probe) Fläche (Vergleich) Die Bestimmung der übrigen Bisaboloide kann ebenfalls durch Gaschromatographie, beispielsweise unter folgenden Aufnahmebedingungen erfolgen: Geräte: Packard, Modell 7721, Serie 800 beziehungsweise Erba Fractovap Serie 2350 Säulen: Glassäulen, 3 m/2 mm im Durchmesser; 2 m/ 2 mm im Durchmesser Füllung: 3 % Methylphenylsilicongummi "OV 1" auf Kieselgur silanisiert t'Gaschrom Q" 125 bis 150 ßm als Trägermaterial Trägergas: 30 ml/Minute N2 Temperatur-Programm; 80 bis 1800 C, 2,5 (3)° C/Minute Injektor/Detektor-Temperatur: 2000 C Detektor: Flammen-Ionisations-Detektor Einspritzmenge: ca. 2 l des ca. 1:50 verdünnten ätherischen Öls Die Auswertung erfolgt teils ohne, teils mit innerem Standard. Als innerer Standard eignen sich Laurinsäuremethylester oder Hexadecan für chamazulenarme beziehungs- weise chamazulenfreie Öle. Bei Ölen mit einem Chamazulengehalt über 5 % ist dieser als innerer Standard vorzuziehen, wobei die Gehaltsbestimmung photometrisch (bei 578 nm) erfolgt.

Claims

Verfahren zur Herstellung einer neuen Kamillensorte (Bezeichnung Manzana) Patentansprüche: 1. Tetraploide Kamille der Kulturpflanzenart Echte Kamille (Chamomilla recutita (L.) Rauschert, synonym mit Matricaria chamomilla L., Asteraceae), deren bei 40° C getrocknete-Blüten bezogen auf die Trockensubstanz mindestens 150 mg% Chamazulen, mindestens 300 mg% (-)-Ot-Bisabolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisaboloiden aufweisen.
2. Vermehrungsgut einer Kamille nach Anspruch 1-.
3. Verfahren zur Herstellung einer neuen tetraploiden Kamillensorte (Bezeichnung Manzana) der Kulturpflanzenart Echte Kamille (Chamomilla recutita (L.) Rauschert, synonym mit Matricaria chamomilla L., Asteraceae), deren bei 40° C getrocknete Blüten bezogen auf die Trockensubstanz mindestens 150 mg% Chamazulen, mindestens 300 mg% (-)- i -Bisabolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisaboloiden aufweisen, durch die Verklonung erhaltenen Pflanzen Saatgut gewonnen wird, b) aus dem so erhaltenen Saatgut Nachkommen gezogen werden, anschließend eine Selektion gemäß a) erfolgt und aus den ausselektierten Pflanzen wiederum Saatgut gewonnen wird, c) die Maßnahmen gemäß b) 2 bis 4 mal wiederholt werden, d) aus dem gemäß c) erhaltenen Saatgut Nachkommen gezogen werden, diese gemäß a) selektiert werden, die so selektierten Pflanzen verklont werden und aus den durch die Verklonung erhaltenen Pflanzen Saatgut gewonnen wird.

6. Kamille oder Kamillenvermehrungsgut, erhalten nach einem oder mehreren der vorangegangenen AnsprUche.

7. Verwendung von Kamille nach einem oder mehreren der vorangegangenen Ansprüche zur Herstellung von Vermehrungsgut.

8. Verfahren zur Herstellung von Vermehrungsgut, dadurch gekennzeichnet, daß aus Kamillenpflanzen nach einem oder mehreren der vorangegangenen Ansprüche in an sich bekannter Weise Samen oder Stecklinge gewonnen werden.

9. Verwendung einer Kamille nach einem oder mehreren der vorangegangenen Ansprüche zur Herstellung einer Kamillendroge.

10. Verfahren zur Herstellung einer Kamillendroge aus Blüten der Kamille nach einem oder mehreren der vorangegangenen Ansprüche, die mindestens 150 mg% Chamazulen und mindestens 300 mg% (-)- d-Bisabolol enthält, wobei der Gehalt an übrigen Bisaboloiden unter 50 mg% liegt.

11. Verfahren zur Herstellung einer Kamillendroge aus BLüten der Kamille nach einem oder mehreren der vorangegangenen Ansprüche, die mindestens 150 mge Chamazulen, mindestens 300 mg% (-)-Bisabolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisaboloiden enthält, dädureh ekennichnet daß die Blüten in dem Vegetationsstadium gegeerntet werden, wo erst 30 bis 70 % der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind und die Blüten bei einer Lufttemperatur von nicht höher als 500 C getrocknet werden.

12. Kamillendroge, die mindestens 150 mg% Chamazulen, mindestens 300 mg% (-)-d-Bisabolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisaboloiden enthält, dadurch gekennzeichnet, daß zu ihrer Herstellung Blüten der Kamille nach einem oder mehreren der vorangegangenen Ansprüche verwendet werden.

dadurch gekennzeichnet, daß die diploide Kamillensorte DEGUMILL in an sich bekannter Weise tetraploidisiert wird und die aus selektierten tetraploiden Pflanzen weiteren Selektions- und Vermehrungsschritten unterworfen werden und gegebenenfalls aus Kamillenpflanzen, die aus dieser Sorte erhalten werden, Vermehrungsgut und/oder eine Kamillendroge gewonnen wird.
4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Tetraploidisierung mittels Chemikalien bei Temperaturen zwischen 0 und 350 C, mittels Gammastrahlen, Röntgenstrahlen oder UV-Strahlen bei Temperaturen zwischen 0 und 350 C, mittels hoher Temperaturen von 33 bis 500 C, mittels niedriger Temperaturen von 0 bis 50 C, mittels der Dekapitierungs-Kallus-Methode oder durch Antherenkultur erfolgt.
5. Verfahren nach einem oder mehreren der vorangegangenen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß nach der Tetraploidisierung a) eine Selektion der tetraploiden Pflanzen nach Wirkstoffgehalt (mindestens 150 mg% Chamazulen, mindestens 300 mg% Bisabolol und weniger als 50 mg% übrige Bisaboloide, alles bezogen auf die Trockensubstanz), gleichzeitigem Blühtermin, gleichmäßiger grundständiger Verzweigung sowie einer Blütenköpfchengröße von 25 bis 35 mm erfolgt, die so herausselektierten Pflanzen verklont werden und aus den