DE3446222C2

DE3446222C2 - Verfahren zur Herstellung von neuen Produkten aus der Kamille mit verbesserten Eigenschaften

Info

Publication number: DE3446222C2
Application number: DE3446222A
Authority: DE
Inventors: Franz Chlodwig; Otto Isaac
Original assignee: Viatris GmbH and Co KG
Current assignee: Meda Pharma GmbH and Co KG
Priority date: 1984-12-19
Filing date: 1984-12-19
Publication date: 2003-06-26
Anticipated expiration: 2004-12-20
Also published as: BR8506358A; DE3446222A1

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von getrockneten Blüten von tetraploider Kamille gemäß Anspruch 1.

Die echte Kamille (Chamomilla recutita (L.) Rauschert, synonym mit Matricaria chamomilla L.) ist ein sehr bedeutsames Ausgangsmaterial für die kosmetische Industrie.

In der deutschen Offenlegungsschrift DE 34 23 207 A1 werden Verfahren zur Herstellung von Produkten aus Kamille beschrieben, bei dem man von der diploiden Kamillensorte DEGUMILL in einem umfassenden Züchtungsverfahren ausgeht. Die Habilitationsschrift Dr. Franz, Weihenstephan, 1981, beschreibt unterschiedliche Züchtungsergebnisse, ausgehend auch von einer Ausgangspopulation der Sorte BK-2. Die tetraploide Sorte BK-2 wird aber in der Habilitationsschrift als inhaltsstoffmäßige Fehlzüchtung angegeben.

Die deutsche Offenlegungsschrift DE 24 02 802 A1 betrifft ein Verfahren zur Gewinnung einer Kamillendroge mit hohem Chamazulen- und Bisabololgehalt. Bei diesem Verfahren wird eine Kamillensorte H-29 als Ausgangsmaterial verwendet. Die deutsche Offenlegungsschrift DE 24 34 338 A1 betrifft ebenfalls ein Verfahren zur Gewinnung einer Kamillendroge mit hohem Chamazulen- und Bisabololgehalt. Auch dieses Verfahren geht von der Kamillensorte H-29 als Ausgangsmaterial aus.

Es wurde nun ein Verfahren zur Gewinnung von getrockneten Blüten von tetraploider Kamille gefunden. Die getrockneten Blüten sind ein besonders wertvolles Ausgangsmaterial für die Herstellung von kosmetischen Präparaten.

Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß durch die Merkmale des Anspruchs 1 gelöst.

Die geeigneten tetraploiden Ausgangskamillen werden durch Einzelpflanzen-Untersuchungen aus der Sorte BK-2 (Ungarn) herausselektiert. Es ist erforderlich, von einer Ausgangspopulation 1000-10000 Individuen zu untersuchen, um einige Individuen zu finden, die einen hohen (-)-α-Bisabololgehalt gemäß den oben angegebenen Kriterien aufweisen und als Aus gangskamille geeignet sind. Von solchen ausgesuchten Individuen wird dann in üblicher Weise Saatgut gewonnen und dieses tetraploidisiert. Nach der abgeschlossenen Tetraploidisierung werden die tetraploiden Pflanzen von den übrigen diploid gebliebenen Pflanzen ausselektiert. Von den so erhaltenen tetraploiden Pflanzen, gegebenen falls nach vorhergehender Vermehrung, werden nun alle die Pflanzen ausselektiert, deren bei 40°C getrocknete Blüten mindestens 100 mg% Chamazulen, mindestens 200 mg% (-)-α-Bisabolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisaboloiden enthalten. Die Ernte dieser Blüten erfolgt dabei in dem Entwicklungsstadium, wo 30-70% aller Röhrenblüten des Blütenköpfchens geöffnet sind. Ge gebenenfalls können sich hieran weitere Selektions- und Vermehrungsschritte anschließen, die zum Beispiel eine Verbesserung hinsichtlich folgender Merkmale be ziehungsweise Eigenschaften bewirken: Gleichzeitiger Blühtermin, gleichmäßige grundständige Verzweigung und schmale Blühzone (das heißt bessere Eignung für die maschinelle Ernte), große Blütenköpfchen, bessere Halt barkeit der getrockneten Blüten, besonders aromatischer Geruch.

Falls man von vornherein von einer tetraploiden Kamille ausgeht, erfolgt lediglich die zuvor angegebene Selektion solcher Pflanzen, deren bei 40°C getrocknete Blüten mindestens 100 mg% Chamazulen, mindestens 200 mg% (-)-α- Bisabolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisaboloiden enthalten, wobei ebenfalls die Ernte dieser Blüten in dem Entwicklungsstadium erfolgt, wo 30-70% aller Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind. Auch in diesem Fall können sich gegebenenfalls weitere Selektions- und Vermehrungsschritte anschließen, aus denen weitere Verbesserungen (wie oben angegeben) resultieren.

Besonders vorteilhafte Produkte aus Kamille erhält man, wenn bei der Selektion der Kamille nach dem Chamazulen- und (-)-α-Bisabololgehalt solche Pflanzen (bekannte oder ver fahrensgemäß hergestellte) ausselektiert werden, deren Chamazulengehalt mindestens 200 mg%, vorzugsweise 250 mg% und deren (-)-α-Bisabololgehalt mindestens 300 mg%, vorzugsweise 400 mg% beträgt (Gehalt an übrigen Bisaboloiden stets unter 50 mg%).

Von den durch Pollengrößenmessung und/oder Chromosomen zählung ausselektierten tetraploiden Kamillenpflanzen, werden dann die Pflanzen aus selektiert, die einen Mindestgehalt an Chamazulen von 100 mg% und einen Mindestgehalt an Bisabolol von 200 mg% aufweisen, während der Gehalt an übrigen Bisaboloiden (insbesondere Bisabololoxide) unter 50 mg% (bezogen auf die getrockneten Blüten, siehe Beispiel 1) liegen soll.

Die so ausselektierten Pflanzen werden nach Entfernung aller bereits aufgeblühten Blütenkörbchen im Gewächshaus bei 18-24°C Tag- und 12-14°C Nacht-Temperatur und einer Tageslänge von mindestens 14 Stunden abblühen lassen, wobei über einen Zeitraum von 4 Wochen alle Blütenköpfchen die verblüht oder kurz vor dem Zerfallen sind, zur Saatgutgewinnung geerntet werden. Nach Trocknen bei einer Lufttemperatur zwischen 20-35°C erhält man beispielsweise das Vermehrungsgut einer solchen Kamille.

Als weitere Kriterien für diese Selektion können zu sätzlich noch die folgenden zur Anwendung kommen:

a) ungefähr gleichzeitiges Blühen,
b) eine gleichmäßige, grundständige Verzweigung und eine schmale Blühzone von circa 10, insbesondere 5 cm,
c) große Blütenköpfchen mit einem Außendurchmesser von circa 30 mm (20 bis 40 mm), insbesondere 25-35 mm.

Die Anwendung der zusätzlichen Kriterien a), b) und/oder c) führt beispielsweise zu hohen Blüten erträgen und besserer Eignung für die maschinelle Ernte.

Um eine Kamille zu erhalten, die außer einem Gehalt von mindestens 100 mg% Chamazulen und mindestens 200 mg% (-)-α-Bisabolol (bezogen auf die getrockneten Blüten köpfchen) auch noch einen hohen Blütenertrag aufweist und für die maschinelle Ernte besser geeignet ist, empfiehlt sich folgendes Vorgehen: Die ausselektierten Pflanzen (wie oben beschrieben) werden vegetativ durch Stecklinge vermehrt und über 3 bis 5 Generationen aus gelesen, wobei die Auswahl stets nach dem oben ange gebenen Kriterium sowie gegebenenfalls den zusätzlichen Kriterien a)-c) erfolgt. Die gemäß diesen Kriterien ausgesuchten Pflanzen werden verklont, aus den verklonten Pflanzen wird Saatgut gewonnen, die hieraus erhaltenen Pflanzen wiederum nach dem oben angegebenen Mindestgehalt an Chamazulen und Bisabolol sowie gegebenenfalls den zusätzlichen Kriterien a)-c) ausselektiert und aus letzteren wieder Saatgut gewonnen.

Die Sequenz Aussaat - Selektion gemäß dem oben ange gebenen Mindestgehalt an Chamazulen von 100 mg% und (-)-α-Bisabolol von mindestens 200 mg% (andere Bisaboloide unter 50 mg%) sowie gegebenenfalls den zu sätzlichen Kriterien a)-c) - Saatgutgewinnung kann 3-5 mal wiederholt werden.

Daran schließt sich nochmals eine Sequenz Aussaat - wie zuvor angegebene Selektion (gegebenenfalls Ver klonung) - Saatgutgewinnung an. Das zuletzt erhaltene Saatgut ist dann das Vermehrungs gut der erfindungsgemäßen Kamille.

Die Stecklingsvermehrung erfolgt dabei auf folgende Weise: Zur Stecklingsvermehrung müssen die Ausgangspflanzen (Klonmutterpflanzen) unter Kurztagbedingungen blüten knospenfreie Kurztriebe ausbilden. Dies erfolgt im Winter halbjahr im Gewächshaus ohne Zusatzbeleuchtung oder in Klimakammern bei einer Tageslänge von 6 bis 10, vor zugsweise 8 Stunden und Temperaturen von 10 bis 15°C, vorzugsweise 12°C. Zur Verklonung beziehungsweise Ver mehrung eignen sich Blatt-, Trieb- und insbesondere Kurz trieb-(Seitentrieb-)Stecklinge. Ihre Bewurzelung erfolgt bei 12 bis 18°C, vorzugsweise 15°C und Tageslängen von 12 bis 16, vorzugsweise 14 Stunden in gespannter Atmo sphäre (ca. 100% relative Luftfeuchte). Als Substrat kann beispielsweise ein Torf-Sand-Gemisch im Verhältnis 1 : 1 verwendet werden; es eignen sich aber auch reiner Quarzsand, Steinwolle-Stecklingswürfel, Torf-Stecklings würfel und ähnliches.

Für die Aussaat kommen hierbei beispielsweise folgende Böden in Betracht: Gartenerde; humose, mittelschwere Lehmböden; lehmige oder humose Sandböden.

Es kann im Gewächshaus oder auch im Freiland ausgesät werden. Die Temperaturen für Keimung und Wachstum der Pflanzen liegen beispielsweise zwischen 12 bis 24°C, inbesondere 18 bis 20°C. Falls im Freiland ausgesät wird, wird vorzugsweise im Herbst (September/Oktober) oder im Frühjahr (März/April) gesät. Diese Termine gelten für sämtliche in Frage kommenden Anbaugebiete (zum Beispiel nördliche Hemisphäre, gemäßigte bis sub tropische Klimagebiete).

Besonders günstig ist es, wenn folgende Verfahrens bedingungen zur Anwendung kommen:
Von den tetraploiden Kamillenpflanzen, die einen Mindest gehalt an Chamazulen von 100 mg% und an (-)-α-Bisabolol von 200 mg% aufweisen, während der Gehalt an übrigen Bisaboloiden (insbesondere Bisabololoxiden) unter 50 mg% liegt (alle Werte bezogen auf die getrockneten Blüten köpfchen), werden nur diejenigen ausselektiert, welche

- ungefähr gleichzeitig blühen,
- eine gleichmäßige grundständige Verzweigung und eine schmale Blühzone von ca. 10 cm sowie
- große Blütenköpfchen mit einem Außendurchmesser von ca. 30 mm aufweisen.

Die ausselektierten Pflanzen werden vegetativ über Steck linge vermehrt und über 3-5 Generationen ausgelesen, wobei die Auswahl stets nach den oben genannten Kriterien erfolgt. Die ausgesuchten Pflanzen werden vegetativ vermehrt (verklont), gemeinsam abblühen gelassen, und es wird hiervon das Saatgut gewonnen. Die aus dem Saatgut erhaltenen Pflanzen werden wiederum nach den oben ange gebenen Kriterien selektiert und die Sequenz Aussaat- Selektion-Saatgutgewinnung-Aussaat wird 3-5mal wieder holt.

Die Kamille, die zur Herstellung der erfindungsgemäßen Mittel verwendet wird, gehört zur Kulturpflanzenart der echten Kamille mit der botanischen Bezeichnung Matricaria Chamomilla L. (synonym Chamomilla recutita (L.), Rauschert). Das bei einer Temperatur von höchstens 70°C getrocknete Material aus den Blüten dieser Kamille, die in dem Vegetationsstadium geerntet wird, wo 30-100% der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind, enthält mindestens 30 mg% Chamazulen, mindestens 100 mg% (-)-α-Bisabolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisaboloiden.

Falls die Ernte der Kamillenblüten zu einem Zeitpunkt er folgt, in dem das Blüten-Entwicklungsstadium weiter fort geschritten ist, das heißt, wo beispielsweise 100% oder bis zu 100% aller Röhrenblüten eines Blütenköpfchens ge öffnet sind (zum Beispiel Stadium der Vollblüte) und/oder falls die Trocknung der geernteten Blüten bei höherer Temperatur als 40°C erfolgt, kann der Gehalt an den Inhalts stoffen (-)-α-Bisabolol und Chamazulen niedriger sein, da durch höhere Trockentemperaturen und/oder bei späterer Ernte ein stärkerer Abbau des Azulens und Bisabolols ein treten kann.

Beispielsweise enthalten die im Trockenschrank bei 40°C getrockneten Blüten (geerntet wie oben angegeben) der verfahrensgemäßen Kamille zwischen 100 bis 200 mg% Chamazulen, zwischen 200 bis 450 mg% (-)-α-Bisabolol und nur wenig, das heißt zwischen 5 bis 50 mg% andere Bisaboloide bezogen auf die Trockensubstanz (das heißt bezogen auf das absolute Trockengewicht der Blüten). Dieses absolute Trockengewicht wird durch Trocknung einer separaten Probe von Kamillenblüten im Trocken schrank bei 105°C bis zur Gewichtskonstanz (72 bis 96 Stunden) bestimmt. Der Wirkstoffgehalt der bei bei spielsweise 35 bis 50°C getrockneten Blüten wird dann auf die bei 105°C ermittelte Trockenmasse der Blüten berechnet.

Ein besonders vorteilhaftes Produkt erhält man, wenn die Ernte der Kamillenblütenköpfchen in dem Vegetationsstadium erfolgt, wo beispielsweise 30 bis 70%, vorzugsweise 40 bis 60%, das heißt im allgemeinen 50% der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind und die Trocknung bei einer Lufttemperatur von höchstens 50°C, beispielsweise 35 bis 50°C, insbesondere 40°C erfolgt. Beispielsweise enthalten im Trockenschrank bei 40°C getrocknete Blüten (geerntet, wo 40-60% der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind) mindestens 100 mg%, zum Beispiel zwischen 100 bis 150 mg% Chamazulen, mindestens 200 mg%, zum Beispiel zwischen 200 und 300 mg% (-)-α-Bisabolol und nur wenig, das heißt zwischen 5 bis 50 mg% andere Bisaboloide bezogen auf die Trockensubstanz (das heißt bezogen auf das absolute Trockengewicht der Blüten). Dieses absolute Trockengewicht wird durch Trocknung einer separaten Probe von Kamillenblüten im Trockenschrank bei 105°C bis zur Gewichtskonstanz (72 bis 96 Stunden) bestimmt. Der Gehalt an Chamazulen und (-)-α-Bisabolol der bei beispielsweise 35 bis 50°C getrockneten Blüten wird dann auf die bei 105°C ermittelte Trockenmasse der Blüten berechnet.

Die Trocknung der Kamillenblüten kann entweder durch künstliche Luftzufuhr oder auch durch Trocknung im Schatten, gegebenenfalls auch in der Sonne erfolgen, wobei jedoch darauf geachtet werden soll, daß die Wärmezufuhr nicht über das zur vollständigen Trocknung erforderliche Maß hinausgeht. Es ist also vorteilhaft, daß man sich durch Kontrollwägungen von der erreichten Gewichtskonstanz überzeugt. Die Trocknung kann spontan oder künstlich (zum Beispiel mit künstlicher Warmluft) erfolgen. Die Ausbeute an Inhaltsstoffen ist am größten bei spontaner Trocknung unter Ausschluß des Sonnenlichts, vorzugsweise bei 40-60°C, insbesondere 40-50°C. Der Trocknungsprozeß soll möglichst bald beziehungsweise umgehend nach der Ernte stattfinden. Die Trocknung soll in dünnen Schichten, beispielsweise von 5 bis 20 cm, vorzugsweise 10 cm Dicke durchgeführt werden. Die Trocknung ist zum Beispiel auch in gut durchlüfteten Hallen bei einer Lufttemperatur zwischen 20-30°C möglich. Im allgemeinen soll die Lufttemperatur für die Trocknung nicht höher als 60°C sein. Günstig ist zum Beispiel eine Lufttemperatur zwischen 35 und 50°C.

Der Gehalt der erfindungsgemäßen Mittel, ins besondere an Chamazulen und (-)-α- Bisabolol, ist abhängig von dem Vegetationsstadium, in dem sich die Kamillenblüten zum Erntezeitpunkt befinden und von der Trocknung der geernteten Blüten. Je höher die Trocknungstemperatur ist, desto stärker ist der Abbau der Inhaltsstoffe, das heißt desto niedriger der Gehalt der getrockneten Blüten an diesen Inhaltsstoffen. Aus dem gleichen Grund hat direktes Sonnenlicht bei der Trocknung einen nachteiligen Einfluß und soll nach Möglichkeit vermieden werden.

Das Vegetationsstadium einer Blüte wird dadurch charakterisiert, wieviel % der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens zu einem bestimmten Zeitpunkt (hier dem Zeitpunkt der Ernte) geöffnet sind. Es können also Blüten geerntet werden, wo beispielsweise zwischen 30-50%, 30-70%, 40-60%, 60-100% oder 90-100% der Röhrenblüten eines Köpfchens geöffnet sind; Der Gehalt an Inhaltsstoffen ist abhängig davon, in welchem Stadium sich die Blüten jeweils befinden und er ist bei der Kamille, die für die erfindungsgemäßen Produkte eingesetzt wird, am größten, wenn 40-60% aller Röhrenblüten geöffnet sind und nimmt ab in dem Maße, wie der Prozent gehalt an geöffneten Röhrenblüten eines Blütenköpfchens zunimmt. Es ist daher gerade ein großer Vorteil dieser Kamille, daß bei ihr das Abblühen der einzelnen Pflanzen gleichmäßig erfolgt, das heißt, daß von einer Aussaat die überwiegende Zahl der Pflanzen jeweils das gleiche Blühstadium aufweisen, das heißt, daß beispielsweise bei den weitaus meisten Pflanzen 40-60% aller Röhren blüten eines Blütenköpfchens zum gleichen Zeitpunkt ge öffnet sind. Dadurch ist eine vollständige Erfassung der Blütenköpfchen zum optimalen Zeitpunkt möglich. Die Kamille, die zur Herstellung der erfindungsgemäßen Mittel verwendet wird, ist deshalb besonders geeignet für die mechanische Ernte.

Der Zusammenhang des Gehalts an Chamazulen und (-)-α-Bisabolol einerseits mit dem Blühstadium zur Zeit der Ernte und andererseits mit der Trocknungs temperatur zur Gewinnung der erfindungsgemäßen Mittel ist beispielsweise in folgender Tabelle dargestellt (der Gehalt an übrigen Bisaboloiden ist in allen Fällen weniger als 50%).

Hieraus folgt, daß aus der Kamille, die zur Herstellung der erfindungsgemäßen Mittel eingesetzt wird, beispiels weise bei einer Ernte, die im Vegetationsstadium statt findet, wo zwischen 30-100% der Röhrenblüten der Blütenköpfchen geöffnet sind und die Trocknung bei Lufttemperaturen bis zu 70°C erfolgen kann, ein trockenes Material erhalten wird, dessen Chamazulengehalt in jedem Fall mindestens 30 mg% und dessen (-)-α-Bisabolol gehalt mindestens 100 mg% beträgt, während der Gehalt an übrigen Bisaboloiden stets geringer als 50 mg% ist.

Die Kamille, die zur Herstellung der erfindungsgemäßen Mittel verwendet wird, hat einen mittelspäten Erntetermin, eine einheitliche Wuchshöhe mit schmaler Blühzone und große Blütenköpfchen und ist daher be sonders für mechanische Ernte geeignet. Hinzu kommt, daß zu gleicher Zeit ausgesäte Pflanzen der neuen tetraploiden Kamille im allgemeinen praktisch zur gleichen Zeit gemeinsam abblühen, so daß auch hierdurch die Ernte sehr vereinfacht und erleichtert wird.

Diese neue Kamille erbringt außerdem einen hohen Ertrag. Die erfindungsgemäß aus dieser Kamille hergestellten Produkte werden in der Kosmetik sowie in Form von Tees verwendet.

Beispiel 1 Gewinnung eines verbesserten Mittels aus einer tetraploiden Ausgangskamille

Eine Kamille, die man so erhält wie nachstehend be schrieben ist, wird in üblicher Weise feldmäßig ausge sät. Sobald die Pflanzen sich entwickelt haben und die Blütenköpfchen in dem Vegetationsstadium sind, wo etwa 50% der Röhrenblüten geöffnet sind, werden diese Blüten köpfchen mit einer Kamillenpflückmaschine geerntet, wobei die Kammabstände der Pflückmaschine so eingestellt sind, daß nur die Blütenköpfchen, deren Röhrenblüten zu 50% offen sind, abgestreift werden. Das Erntegut wird möglichst rasch an einen schattigen Ort transportiert und dort bis zur Weiterverarbeitung in dünner Lage aus gebreitet. Anschließend werden die Blütenköpfchen in einer Siebanlage von den Stengeln befreit und bis zur Gewichtskonstanz getrocknet. Der Gewichtsverlust beträgt etwa 80%. Die Trocknung erfolgt im Schatten an einer gut belüfteten Stelle auf Horden in einer Schichtdicke von etwa 10 cm.

Nach etwa 2-3 Tagen ist die Trocknung beendet. Zur Entfernung von Stengelteilen und Blütengrus wird das getrocknete Material gesiebt und anschließend in Ballen gepreßt.

Analyse

Chamazulen: 162 mg%
(-)-α-Bisabolol: 330 mg%.

Erfolgt die Trocknung beispielsweise in einer stationären Bandtrockenanlage mittels künstlich erwärmter Luft bei einer Temperatur zwischen 50 und 70°C, so ist die Trocknung nach etwa 4-5 Stunden beendet. Zur Ent fernung von Stengelteilen und Blütengrus wird das ge trocknete Material gesiebt und anschließend in Ballen gepresst.

Die Analysenwerte eines solchen Mittels sind zum Beispiel:
Chamazulen: 94 mg%
(-)-α-Bisabolol: 197 mg%.

Die verwendete tetraploide Ausgangskamille wird wie folgt erhalten:
Durch Einzelpflanzenvariabilitätstests in der tetra ploiden Kamillensorte, die von 1. Sárkány (Herba Hungar. 4 (1), 125-169 (1965) beschrieben wurde, (es wurden ca. 10000 Pflanzen getestet) wurde ge funden, daß auf etwa 1000 Individuen eine Pflanze kommt, die im ätherischen Öl einen hohen Chamazulen gehalt von 20 Gewichtsprozent sowie einen hohen (-)-α- Bisabololgehalt von 50 Gewichtsprozent aufweist, wo bei gleichzeitig der Gehalt an übrigen Bisaboloiden (insbesondere (-)-α-Bisabolonoxid sehr gering (weniger als 5 Gewichtsprozent) ist.

Diese Individuen wurden ausselektiert und folgenden Schritten unterworfen:

Schritt 1

Von den (wie oben beschriebenen) ausselektierten tetra ploiden Kamillenpflanzen wurden diejenigen Individuen ausgelesen, die

A) etwa gleichzeitig blühen,
B) eine gleichmäßige, grundständige Verzweigung und eine schmale Blühzone von ca. 10 cm, vorzugsweise 5 cm, aufweisen,
C) große Blütenköpfchen mit einem Außendurchmesser von ca. 30 mm, vorzugsweise 25-35 mm aufweisen,
D) einen Mindestgehalt für Chamazulen von 150 mg% und Bisabolol von 300 mg% erreichen oder über schreiten und deren Gehalt an übrigen Bisaboloiden (insbesondere Bisabololoxide) deutlich unter 50 mg% liegt. (Sämtliche Werte beziehen sich auf Blütenköpfchen, die bei 40°C getrocknet wurden und deren Ernte in dem Stadium erfolgte, wo 30-70% aller Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind.

Diese Pflanzen wurden verklont. Hierzu wurden die Pflanzen (Klonmutterpflanzen) zunächst auf circa 15 cm Sproßlänge zurückgeschnitten, unter 8 bis 10 Stunden Tageslänge und 12 bis 14°C zum Neuaustrieb (kurze Seitentriebe) gebracht. Die Kurztriebe wurden geschnitten und in ein Torf-Sand-Gemisch gesteckt. Bei circa 100% relativer Luftfeuchte, 15°C Lufttemperatur und einer Tageslänge von 14 Stunden dauerte die Bewurzelung der Stecklinge 7 bis 14 Tage.

Anstelle der angegebenen konventionellen Verklonung (Stecklingsvermehrung) kann auch die in-vitro-Vermehrung teilungsfähiger Gewebspartien der Pflanze eingesetzt werden (sogenannte Meristem-Vermehrung). Zur Etablierung einer Kamillen-Kultur eignen sich verschiedene Teile der Pflanze, vorzugsweise die Sproßspitzen oder die Achselknospen.

Nach Abspülen der Pflanzen mit H₂O₂ werden unter aseptischen Bedingungen im "Laminar Flow" (Hochleistungs-Schwebstoff- Filter mit turbulenzarmer Verdrängungsströmung) Sproß spitzen der Blattachselknospen entnommen und in Reagenz gläser übertragen, die mit einem Nährmedium, beispiels weise nach Murashige und Skoog (Physiol. Plant. 15, 473-497, 1962) gefüllt sind. Die Reagenzgläser werden in einen Klimaraum mit 12-18, vorzugsweise 16 Stunden Tageslänge (erreicht durch Fluoreszenz-Leuchtstoffröhren), einer Lichtintensität von 500-10.000 lux, vorzugsweise 1.000-3.000 lux und einer Temperatur von 15-30°C, vorzugs weise 22-27°C gestellt.

Sobald die Explantate ein gutes Wachstum zeigen, werden sie auf ein obengenanntes Nährmedium, jedoch mit einer höheren Cytokininkonzentration (30 mg/l N⁶-Isopentenyl adenin) und wenig oder gar keinem Auxin (0-0,3 mg/l Indolessigsäure) überführt. In der Folge strecken sich die Achsen und es werden Adventivorgane sowie vermehrt Achselknospen gebildet. Diese können nach der vorer wähnten Weise entnommen und angezogen werden.

Die für die Pflanzenvermehrung in größerer Zahl be stimmten Explantate (der 3. Passage = 3. Vermehrungs generation) werden nach Anwachsen und Ausbildung der Blätter auf dem erstgenannten Nährmedium auf einen Nähr boden übertragen, welcher 10 mg/l Indolessigsäure oder 3-Indolbuttersäure oder 0,1-0,3 mg/l α-Naphthylessig säure enthält. Dabei bewurzeln sich die Pflänzchen und können nach etwa 4 Wochen in mit sterilisierter Garten erde (12 Stunden bei 120°C gedämpft) gefüllte Töpfe gepflanzt und im Gewächshaus (unter Bedingungen wie für die konventionelle Stecklingsvermehrung üblich) weiter kultiviert werden.

Nährmedium nach Murashige & Skoog

Schritt 2

Die nach Schritt 1 erhaltenen Pflanzen blühten unter isolierten Bedingungen im Gewächshaus gemeinsam ab. Die Pflanzen standen hierbei in 11-cm-Töpfen, ge füllt mit Gartenerde, bei 18 bis 24°C Tag- und 12 bis 14°C Nacht-Temperatur. Die Tageslänge betrug mindestens 14 Stunden und wurde im Winterhalbjahr durch Zusatzbe lichtung (200 Watt/m²) erreicht. Die Wasserversorgung er folgte nach Bedarf.

Von der Gesamtheit der selektierten Individuen wurden über einen Zeitraum von 4 Wochen laufend diejenigen Köpfchen zur Saatgutgewinnung geerntet, die verblüht und kurz vor dem Zerfallen waren. Trocknung erfolgte in einer gut durchlüfteten Halle bei einer Lufttemperatur zwischen 20-30°C; anschließend wurde das Saatgut mittels eines Schlitzsiebes (5 × 0,4 mm) abgesiebt und durch einen Steigsichter nachgereinigt.

Schritt 3

Aus dem nach Schritt 2 erhaltenen Saatgut wurde eine Stichprobe entnommen und hieraus circa 2000 Nachkommen gezogen (ökologische Bedingungen wie bei Schritt 2) und nach den gleichen Kriterien A) bis D) von Schritt 1 selektiert. Mit den so selektierten Individuen wurde dann gemäß Schritt 2 verfahren.

Schritt 4

Von dem Saatgut gemäß Schritt 3 wurde ein Teil an zwei verschiedenen Standorten im Herbst ausgesät.

Standort I)

450 m NN, 48,5°N/11,5°O,
750 mm Jahresniederschlagssumme,
feucht-gemäßigtes Klima,
Januar -10 bis 0°C,
Juli +10 bis +20°C,

Standort II)

200 m NN, 42°N/1°O,
400 mm Jahresniederschlagssumme,
mediterranes Klima,
Januar 0 bis +10°C,
Juli +20 bis +30°C.

Die Aussaat erfolgte an beiden Standorten Ende September/Anfang Oktober.

Die so erhaltenen Feldversuchsbestände wurden hinsicht lich homogenem Wuchs, Blütengröße und Erntetermin überprüft und beurteilt (bonitiert), außerdem wurden
NN = Normalnull = Seehöhe
°N = nördliche Breite (ngrad)
°O = östlinge Länge (ngrad)
Stichproben der Blüten auf die Wirkstoffgehalte untersucht. Aus dem Feldbestand wurden erneut diejenigen Individuen selektiert, die den bei Schritt 1 genannten Parametern entsprechen. Von diesen wird Saatgut entsprechend Schritt 2, letzter Satz, gewonnen.

Schritt 5

Mit dem Saatgut gemäß Schritt 4 wurden die Schritte 3 und 4 in der angegebenen Reihenfolge und Weise wieder holt.

Schritt 6

Aus dem nach Schritt S gewonnenen Saatgut wurden circa 1500 Individuen gezogen (Ökologische Bedingungen wie bei Schritt 2) und nach dem gleichen Prinzip, wie bei Schritt 1 angegeben ist, selektiert. Von den so aus selektierten Pflanzen wurden 34 Individuen ausgewählt und gemäß Schritt 1 verklont. Je 10 Pflanzen jedes Klons wurden in zufälliger Verteilung im Abstand 40 × 30 cm im Freiland (Standort I, siehe Schritt 4) an isolierter Stelle aufgepflanzt. Der Boden war Löß lehm, pH 7,0; die Pflanzung erfolgte Anfang Juni, die erste Ernte der Samen Mitte Juli, danach wurden die Pflanzen zurückgeschnitten, blühten nochmals und lieferten Mitte bis Ende August eine zweite Saatgut ernte.

Die Saatgutgewinnung dieses Materials erfolgte gemäß Schritt 2.

Das nach Schritt 6 erhaltene Saatgut ist das Vermehrungs gut der verfahrensgemäßen Kamille.

Blüten von Pflanzen aus diesem Vermehrungsgut (Aussaat September/Oktober, Ernte Anfang Juni des darauffolgenden Jahres), die zu dem Zeitpunkt gepflückt werden, wenn 30-70% der Röhrenblüten geöffnet sind, und die sofort anschließend im Trockenschrank bei 40° 72 Stunden, getrocknet wurden, enthalten, bezogen auf das Gewicht der getrockneten Blüten (Trockensubstanz), beispielsweise mindestens: 150 mg% Chamazulen, 300 mg% (-)-α-Bisabolol und höchstens 50 mg% übrige Bisaboloide.

Die Bestimmung des Gehalts an Chamazulen und (-)-α- Bisabolol erfolgt in der hierfür üblichen Weise (spektralphotometrisch beziehungsweise mittels Gas chromatographie).

Beispiel 2 Gewinnung eines verbesserten Mittels aus einer tetraploiden Ausgangskamille

Eine Kamille, die man so erhält wie nachstehend be schrieben ist, wird in üblicher Weise feldmäßig ausge sät. Sobald die Pflanzen sich entwickelt haben und die Blütenköpfchen in dem Vegetationsstadium sind, wo etwa 50% der Röhrenblüten geöffnet sind, werden diese Blütenköpfchen mit einer Kamillenpflückmaschine ge erntet, wobei die Kammabstände der Pflückmaschine so eingestellt sind, daß nur die Blütenköpfchen, deren Röhrenblüten zu 50% offen sind, abgestreift werden. Das Erntegut wird möglichst rasch an einen schattigen Ort transportiert und dort bis zur Weiterverarbeitung in dünner Lage ausgebreitet. Anschließend werden die Blütenköpfchen in einer Siebanlage von den Stengeln befreit und bis zur Gewichtskonstanz getrocknet. Der Gewichtsverlust beträgt etwa 80%. Die Trocknung er folgt im Schatten an einer gut belüfteten Stelle auf Horden in einer Schichtdicke von etwa 10 cm.

Analyse

Chamazulen: 132 mg%
(-)-α-Bisabolol: 243 mg%.

Erfolgt die Trocknung beispielsweise in einer stationären Bandtrockenanlage mittels künstlich erwärmter Luft bei einer Temperatur zwischen 50 und 70°C, so ist die Trocknung nach etwa 4-5 Stunden beendet. Zur Ent fernung von Stengelteilen und. Blütengrus wird das ge trocknete Material gesiebt und anschließend in Ballen gepresst.

Die Analysenwerte eines solchen Mittels sind zum Beispiel:
Chamazulen: 65 mg%
(-)-α-Bisabolol: 163 mg%.

Die verwendete tetraploide Ausgangskamille wird wie folgt erhalten:
Durch Einzelpflanzenvariabilitätstests in der tetra ploiden Kamillensorte, die von I. Sárkány (Herba Hungar. 4 (1), 125-169 (1965) beschrieben wurde, (es wurden ca. 10000 Pflanzen getestet) wurde ge funden, daß auf etwa 1000 Individuen eine Pflanze kommt, die im ätherischen Öl einen hohen Chamazulen gehalt von 20 Gewichtsprozent sowie einen hohen (-)-α- Bisabololgehalt von 50 Gewichtsprozent aufweist, wo bei gleichzeitig der Gehalt an übrigen Bisaboloiden (insbesondere (-)-α-Bisabolonoxid sehr gering (weniger als 5 Gewichtsprozent) aufweist.

Diese Individuen wurden ausselektiert und folgenden Schritten unterworfen:

Schritt 1

Von den wie oben beschriebenen ausselektierten tetra ploiden Kamillenpflanzen wurden diejenigen Individuen ausgelesen, die einen Mindestgehalt für Chamazulen von 100 mg% und für (-)-α-Bisabolol von 200 mg% er reichen oder überschreiten und deren Gehalt an übrigen Bisaboloiden (insbesondere Bisabololoxiden) unter 50 mg% liegt. Sämtliche Werte beziehen sich auf Blütenköpfchen, die bei ca. 40° C getrocknet wurden und deren Ernte in dem Stadium erfolgte, wenn ca. 30-70% aller Röhren blüten eines Köpfchens geöffnet sind.

Schritt 2

Von den nach Schritt 1 erhaltenen Pflanzen wurden alle aufgeblühten Blütenkörbchen entfernt, anschließend kamen die Pflanzen in ein Gewächshaus und blühten unter isolierten Bedingungen gemeinsam ab. Die Pflanzen standen hierbei in 11-cm-Töpfen, gefüllt mit Gartenerde, bei 18 bis 24°C Tag- und 12 bis 14°C Nacht-Temperatur. Die Tageslänge betrug mindestens 14 Stunden und wurde im Winterhalbjahr durch Zusatzbelichtung (200 Watt/m²) erreicht. Die Wasserversorgung erfolgte nach Bedarf.

Das nach Schritt 2 erhaltene Saatgut ist das Vermehrungs saatgut der verfahrensgemäßen Kamille.

Blüten von Pflanzen aus diesem Vermehrungsgut (Aussaat September/Oktober, Ernte Anfang Juni des darauffolgenden Jahres), die zu dem Zeitpunkt gepflückt werden, wenn 30-70% der Röhrenblüten geöffnet sind, und die sofort anschließend im Trockenschrank bei 40°C 72 Stunden getrocknet wurden, enthalten, bezogen auf das Gewicht der getrockneten Blüten, mindestens 100 mg% Chamazulen, mindestens 200 mg% (-)-α-Bisabolol und höchstens 50 mg% übrige Bisaboloide.

Claims

1. Verfahren zur Gewinnung von getrockneten Blüten von tetraploider Kamille (Matricaria chamomilla L.) die, min destens 30 mg% Chamazulen, mindestens 100 mg% (-)-α-Bisa bolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisaboloiden ent halten,
durch Aussaat von Vermehrungsgut tetraploider Kamille und Ernten der Blüten der tetraploiden Kamillenpflanzen in dem Vegetationsstadium, bei dem 30 bis 100% der Röhren blüten eines Blütenköpfchens offen sind und Trocknen der Blüten bei einer Temperatur von höchstens 70°C,
wobei das Vermehrungsgut der tetraploiden Kamille erhal ten wird durch:
Bestimmen in 1.000 bis 10.000 Einzelpflanzen einer tetra ploiden Kamillenpopulation der Sorte BK-2 jeweils im ätherischen Öl den (-)-α-Bisabololgehalt und Ausselektie ren derjenigen Kamillenpflanzen, bei denen (-)-α-Bisabo lol die Hauptkomponente des ätherischen Öls darstellt,
aus den ausselektierten tetraploiden Kamillenpflanzen diejenigen Pflanzen ausselektiert wer den, deren bei 40°C getrocknete Blüten (Zeitpunkt der Ernte, wo 30 bis 70% der Röhrenblüten eines Blütenköpf chens geöffnet sind) bezogen auf die Trockensubstanz min destens 100 mg% Chamazulen und mindestens 200 mg% (-)-α-Bisabolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisabo loiden enthalten,
weiteres Vermehren und jeweiliges Selektieren dieser Pflanzen und Gewinnen von (Vermehrungsgut) Saatgut aus den nach diesen Schritten erhaltenen Pflanzen.

2. Verfahren zur Gewinnung von getrockneten Blüten nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Blüten in dem Vegetationsstadium geerntet werden, wo 30-70% der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind und die Blüten bei einer Lufttemperatur von nicht höher als 50°C getrocknet werden und die erhaltenen Blü ten mindestens 100 mg% Chamazulen, mindestens 200 mg% (-)-α-Bisabolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisabo loiden enthalten.

3. Verfahren zur Gewinnung von getrockneten Blüten nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Blüten in dem Vegetationsstadium geerntet werden, wo 30-70% der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind und die Blüten bei einer Lufttemperatur zwischen 50 bis 70°C getrocknet werden und die erhaltenen Blüten min destens 50 mg% Chamazulen, mindestens 150 mg% (-)-α-Bisa bolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisaboloiden enthalten.

4. Verfahren zur Gewinnung von getrockneten Blüten nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Blüten in dem Vegetationsstadium geerntet werden, wo 70-100% der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöff net sind und die Blüten bei einer Lufttemperatur von nicht höher als 50°C getrocknet werden und die erhaltenen Blüten mindestens 40 mg% Chamazulen, mindestens 120 mg% (-)-α-Bisabolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisabo loiden enthalten.

5. Verfahren zur Gewinnung von getrockneten Blüten nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Blüten in dem Vegetationsstadium geerntet werden, wo 70-100% der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöff net sind und die Blüten bei einer Lufttemperatur von 50-70°C getrocknet werden und die so erhaltenen getrockneten Blüten mindestens 30 mg% Chamazulen, mindestens 100 mg% (-)-α-Bisabolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisabo loiden enthalten.