DE2858078C2

DE2858078C2 - 2-Chlorethylnitrosoharnstoffe, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zubereitungen

Info

Publication number: DE2858078C2
Application number: DE2858078A
Authority: DE
Inventors: Yoshihisa Urawa Saitama Arai; Ozeki Wako Saitama Masakatsu; Kenji Urawa Saitama Tsujihara
Original assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Current assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Priority date: 1977-07-29
Filing date: 1978-07-21
Publication date: 1983-12-15
Also published as: BE869352A; AU525239B2; AT360553B; PT68359A; FR2475040B1; GB2002370A; CH636626A5; PL208701A1; FR2475040A1; FR2485541A1; PL111784B1; DE2832127A1; FR2403994A1; AU3849178A; FR2499577A1; FI65439B; SE435501B; IT1160450B; US4182757A; HU176891B

Description

in der R¹ eine Ci-CVAlkylgruppe oder 2-Hydroxyethyl darstellt, und R² eine Gruppe der Formel

— CH₂(CHOH)₁₁CH₂OH

bedeutet, wobei π 0,1 oder 2 ist.

2. Verfahren zur Herstellung von 2-Chlorethylnitrosohamstoffen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man 2-Chlorethylharnstoffe der allgemeinen Formel

R¹

N-C-NH-CK₂CH₂Cl

/ Il R² O

in der R¹ und R^z die vorstehend angegebene Bedeutung besitzen, in an sich bekannter Weise nitrosiert.

3. Pharmazeutische Zubereitungen, enthaltend eins therapeutisch wirksame Menge einer Verbindung nach Anspruch 1 sowie pharmazeutisch annehmbare Träger.

Die Erfindung betrifft neue 2-Chiorcthylnitrosoharnstoffe, ein Verfahren zu deren Herstellung, sowie diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zubereitungen.

Die 2-ChlorethylnitrosohamstolTe entsprechen der allgemeinen Formel

glucopyranosylharnstoff(letzterer wird im folgenden als »GANU« bezeichnet) die Lebensspanne von Mäusen verlängern, denen intraperitoneal lymphoide Leükämie-L-1210-Tümorzellen eingepflanzt würden. Därü- ber hinaus ist es bekannt, daß sich (N'-Chlorethyl-N'-nitrosocarbamoyl)-aminoderivate von Disacchariden, wie l-(2-Chlorethyl)-l-nitroso-3-D-IactosylharnstofF und l-(2-Odoretoyl)-l-mtJOSo-3-D-maltosylharnstoff aus den entsprechenden (N'-Chlorethyl-carbamoyl)- amino-disacchariden auf die gleiche Weise wie im vor angehenden beschrieben, herstellen lassen und gegen Leukämiezellen eine Antitumoraktivitat zeigen CJA-PA 64 073/1975, JA-OS 141 815/1976). Es hat sich nun gezeigt, daß die erfmdungsgemäßen Nitrosohamstoffe [JJ eine starke Antitumor- oder Antileukämieaktivität bei geringer Toxizität zeigen und geeignet sind, das Wachstum von bösartigen Xumorzellen in Warmblütern zu inhibieren. Darüberhinaus sind die Nitrosohamstoffe [I] wenig toxisch und weisen eine große Sicherheit als Antitumormittel auf. Die Verbindungen [Ij zeichnen sich ebenfalls durch einen hohen therapeutischen Index aus, der als Verhältnis von Max D (maximale Dosis, die 100% Wachstumshemmung von Ehrlich-Ascites-Tumor in Mäusen bewirkt, ohne den Tod der Mäuse zu verursachen) zu Min. D (minimale Dosis, die 100% Wachstumsinhibierung des genannten Ascites-Tumors bewirkt) bestimmt wird. Die Verbindungen (I] zeigen vielfach eine geringere Toxizität auf das Knochenmark.

In der allgemeinen Formel [I] ist R¹ besonders Methyl, Äthyl, n-Propyl, Isopropyl, η-Butyl, Isobutyl, selc-ButyL terL-Butyl, n-Pentyl, oz-Methyl-n-butyl, Neopentyt, 1-Methyl-n-butyl, 1-Äthylpropyl und tert-Pentyl oder 2-Hydroxyäthyl.

R² bedeutet bevorzugt wie 2-Hydroxyäthyl, 2,3-Dihydroxy-n-propyl und 2,3,4-Trihydroxy-n-butyl.

Erfindungsgemäß werden die Nitrosohamstoffe (I) durch eine in an sich bekannte Weise vorgenommene Nitrosierung von Verbindungen der allgemeinen For mel

R¹

N-C-NH-CH₂CH₂Cl (Π)

/ II R² O

R¹

N — C — N — CHjCHjCI

Il I

O NO

der X¹ eine C,-C₅-Alkylgruppe oder 2-Hydroxyethyl darstellt, und R¹ eine Gruppe der Formet:

— CHj(CHOH)₁₁CHjOH

bedeutet wobei η 0, 1 oder 2 ist.

Es ist bekannt, (N'-Chlorethyl-N'-nitrosocarbamoyl)-äfflinoderivate von Monosacchariden durch Nitrosierung von (N' - Chlorethylcarbamoyl) - amino - monosacchariden mit einem Alkalimetallnitrit, wie Natriumnitrit, herzustellen (JA-PA 31 131/1975, 90266/1974 und 124 319/1974, die unter der jeweiligen Nr. 1 08 043/1976, 26 826/1976 und 52 128/1976 offengelegt wurden). Diese Patentanmeldungen beschreiben auch, daß l-(2-Chlorethyl)-l-nitroso-3-D-mannopyranosylharnstoff und l-(2-Chlorethyl)-l-nitroso-3-D- der R¹ und R² die bereits angegebenen Bedeutungen haben, erhalten.

Die Ausgangsverbindungen (II) werden ebenfalls auf einfache Weise erhalten. Sie können z. B. durch Kondensation einrs primären Amins der allgemeinen Formel R¹ - NH₂ (in der R¹ die bereits angegebenen Bedeutungen hat) mit einer Verbindung der allgemeinen For-

mcl R² - X (in der R² die bereits angegebene Bedeutung hat und X Hydroxyl- oder Halogen darstellt) bei etwa 20 bis 80⁰C in einem inerten Lösungsmittel (z. B. Methanol, Äthanol) unter Bildung eines sekundären Amins der allgemeiner. Formel

R¹

NH

■/

(in der R¹ und R² die bereits angegebenen Bedeutungen haben) hergestellt werden, worauf das sekundäre Amin

2&

mit 2-ehlorethylisocyanat bei O bis 30⁰G in· einem Lösungsmittel ζ. B. Tetrahydrofuran, Methanol; Äthanol kondensiert wird. :■,.'■

Die Nitxosierung wird durchgeführt, indem die Verbindungen (II) mit salpetriger Säure, Stickstofftrioxid oder Stickstofftetroxid in einem Lösungsmittel in Kontakt gebracht werden. Vorzugsweise wird die Reaktion bei -20 bis 20⁰C, insbesondere bei 0 bis 5°C durchgeführt Geeignete inerte Lösungsmittel sind Wasser, niedere Alkanole (z. B. Methanol, Äthanol), tetrahydrofuran, Methylenchlorid, Äthylacetat, Essigsäure oder Ameisensäure. Wenn freie salpetrige Säure durch Umsetzung eines Alkalimetallsalzes der salpetrigen Säure (z. S. Natriumnitrit, Kaliumnitrit) oder eines niederen ilkylesters derselben (z. B. Butylnitrit, Ämylnitrit) mit einer anorganischen oder organischen Säure (z. B. Salzsäure, Schwefelsäure, Ameisensäure oder Essigsäure) hergestellt wird, ist es vorzuziehen, die freie salpetrige Säure, die für die nachfolgende Nitrosierungsreaktion begjjmmt ist, unmittelbar nach deren Herstellung zu verwenden. Wenn andererseits Stickstofftrioxid oder Stickstofftetroxid verwendet werden, so ist es vorzuziehen, bei der Durchführung der Nitrosierungsreaktion die Ausgangsverbindungen (II) in einem inerten Lösungsmittel zu lösen und dann das gasförmige Stickstofftrioxid oder -tetro-dd in Gegenwart oder Anwesenheit eines Säureakzeptors einzuleiten. Geeignete Säureakzeptoren sind Natriumbicarbonat, Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat, Natriumacetat oder Kaliumacetat Wenn die Nitrosierungsreaktion abgeschlossen ist, können die Verbindungen (T) leicht aus dem Reaktionsgemisch gewcranen vsr/den; sie können, falls dies gewünscht wird, mit Hilfe von Silikagelchromatografie weiter gereinigt werden.

Es ist durch Versuchsbeispiele belegt worden, daß die Verbindungendes Hydroxyalkyl-Typus ausgezeichnete Anti-Tumor-Wirkung besitzen. Gerade aber für Verbindungen sehr ähnlicher Struktur hierzu, nämlich für 1 -(2-ChlorethyI)-l-nitroso-3,3-dialkylharnstoffe ist aber in Chemical Abstracts 91 (1979) Nr. 84 733 angegeben, daß diese Verbindungen sehr stark karzinogen oder sehr stark toxisch sind. Angesichts dieser literaturbelegten sehr stark toxisehen und Karzinome erzeugenden Wirkung der vorbekannten Verbindungen, ist es äußerst überraschend, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen eine Anti-Tumor-Wirkung aufweisen und diese stark ausgeprägt ist. Darüber hinaus ist weiter die geringe Toxizität sehr überraschen, die sich aus den Vergleichsdaten ebenfalls herauslesen läßt Die in der Bereitstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen zum Ausdruck kommende Lehre ist daher gegenüber dem Stand des Wissens zum Anmeldezeitpunkt gemäß der Literaturstelle Chemical Abstracts absolut überraschend und unerwartet.

Die auf diese Weise hergestellten Nitrosoharnstofie [I] zeigen eine starke Antitumoraktivität gegen verschiedene Tumorzellen, wie Ehrlich-Karzinom, Sarcom 180, Leukämie L-1210, Lewis-Lungenkarzinom, Yoshida-Sarcom oder Ratten-Ascites-Häpatom. Die erfindungsgemäße Verbindungen sind geeignet, die Überlebenszeit von warmblütigen Tieren, die von den genannten Tumoren befallen sind, zu verlängern und/oder das Wachstum der genannten Tumore in den Tieren auf ein Minimum zu reduzieren. Die Verbindungen lassen sich auch zur Therapie von bösartigem Lymphon, Leukämie, Magentumor, Häpatom und anderen bösartigen Tumoren einsetzen. Die Nitrosoharnstoffe (I) sind in Form pharmazeutischer Präparationen, und zwar für die orale oder parenterale Verabreichung geeignet Die Verbindungen 0) können ebenfalls in Verbindung oder in Beimischung zu einem; pharmazeutischen Träger verwendet werden. Der Exzipientsollte so ausgewählt werden, daß er nicht mit den Verbindungen (T) reagiert Geeignete Exztpienten umfassen z. B. Gelatine, Lactose, Glucose, Natriumchlorid, Stärke, Magnesiumstearat, Talk oder pflanzliches ÖL Ebenso können andere bekanntemedizinische Exzipienten verwendet wenien.

ίο Die pharmazeutische Zubereitung kann in Form einer festen Verabreichung, wie einer tablette, einer dragierten bzw. überzogenen Tablette, einer Pille oder einer Kapsel, erfolgen oder in flüssiger Applikationsform, wie in =Lösung, in einer Suspension oder einer Emulsion.

is Außerdem können die Verbindungen (I) in Form einer Injektion verabreicht oder die Verabreichung erfolgt parenteral in Form eines Suppositoriums. Die pharmazeutische Zubereitung kann sterilisiert werden und/ oder sie kann Hilfsstoffe, wie konservierende und stabilisferende Mittel enthalten. Die Dosis der Verbindungen (I) für pharmazeutische Zwecke hängt vom Verabreichungsweg, dem Alter, dem Gewicht und dem Zustand des Patienten ab, sowie von der speziellen Krankheit, die behandelt werden soll. Im allgemeinen werden die erfindungsgemäßen Verbindungen für pharmazeutische Zwecke in einer Dosis von 0,1. bis 30 mg/ kg, insbesondere 0,2 bh, 10 mg/kg pro Tag angewandt. Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.

Beispiel 1

a) 1,5 g N-Methyl-ethanoIamin werden in 30 ml Tetrahydrofuran gelöst; dazu gibt man tropfenweise bei 0 bis 5°C 2,1 g 2-Cblorethylisocyanat. Die Lösung wird 14 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Daraufhin dampft man die Reaktionslösung im Vakuum ein, wobei 33 g l-(2-Chlorethyl)-3-methyl-3-(2-hydroxyethyl)-harnstoff als farbloses Öl erhalten werden.

): 3320,1620,1530
Mass (m/e): 182, 180 (M⁺)

b)0,9 g l-(2-Chlorethyl)-3-methyl-3-(2-hydroxyethyl)-harnstoff werden in 10 ml Essigsäure gelöst Dazu gibt man unter Rühren 0,9 g Natriumnitrit Das Gemisch wird 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Daraufhin fügt man dem Gemisch erneut 0,5 g Natriumnitrit zu und rührt weitere 4 Stunden bei der gleichen Temperatur. Nach der Reaktion wird das

% Gemisch gefriergetrocknet und der erhaltene Rückstand mittels Silikagel-Chromatografie gereinigt (Lösungsmittel: Chloroform-Methanol = 10 :1). Man erhält 0,7 g l-(2-Chlorethyl)-l-nitroso_r3-methyl-3-(2-hydroxyethyl)-harnstoff als blaßgelbes Öl.

IR;*, (cm-¹): 3400, 1700

NMR(CDCIj) δ: 2,85 (s 1 H, OH),
3,23 (s, 3 H, CH₃),
3,60-4,25 (m, 8 H, CH₂CH₂OH, CH₂CH₂Cl)

Mass (m/e): 211,209(M⁺)

Beispiel 2

a) 2,1 g Diethanolamin werden in 30 ml Tetrahydrofuran gelöst. Dazu gibt man tropfenweise bei 0 bis 5°C 2,1 g 2-Chloräthylisocyanat. Die Lösung wird 2 Stunden

10

15

20

bei Raumtemperatur gerührt Daraufhin verdampft bzw. kondensiert man die Reaktionslösung im Vakuum. Man erhält 4,2 g l-(2-CMorethyl)-3,3-bis-(2-hydroxyethyl)-hamstoff als farbloses Öl.

(cm-¹): 3320_r 1620,1540

b) 4,0 g l-(2-Chlorethyl)-3,3-bis-(2-hydroxyethyl)-hamstoff wenden in 30 ml Essigsäure geiösJL· Dazu gibt man unter Rühren 2,5 g Natriumnitrit. Das Gemisch wird 4 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt. Nach de? Reaktion behandelt man das Gemisch, wie im Beispiel 1 b) beschrieben (für die Chromatografie verwendetes Lösungsmittel: Chloroform-Methanol [10 :1]). Man erhält 3,0 g l-(2-Chlorethyl)-l-nitroso-33-bis-(2-hydroxyethyl)-harnstoff als gelbes ÖL

IRvj?„ (cm"¹): 3370, 1690
NMR(CDCl₃) δ: 3,40-4,00 (m, 10 H,

CH₂CH₂OH, CH₂CH₂Q),
4,10 (t, 2 H, -N(NO)CH₂-),
4,50 breites s, 2 K, OH)

Beispiel 3

a) Man läßt ein Gemisch aus 3,3 g 3-Chlor-l,2-dihydroxy-n-propan und 20 ml einer 30%igen Methylamin-Methanol-Lösung 3 Tage bei Raumtemperatur stehen. Das Reaktionsgemisch wird dann unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei 4,2 g N-Methyl-2,3-dihydroxy-n-propylamin-hydrochlorid als Rohprodukt erhalten werden. 4,2 g dieses genannten Rohproduktes und 3 g Triethylamin werden in 30 ml Methanol gelöst Zu dieser Lösung gibt man tropfenweise bei 0 bis 5°C 3,2 g 2-Chlorethylisocyanat Die Lösung wird 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Daraufhin dampft man die Reaktionslösung unter vermindertem Druck ein und reinigt den erhaltenen Niederschlag durch Silikagel-Chromatografie (Lösungsmittel: Chloroform- Ethylacetat-Methanol [3:1:1]). Man erhält 3,5 g l-^-Chlorethyl^-rnethyW-^-dihydroxy-n-propyl)-harnstofT als farbloses Öl.

25

(cm'¹): 3350, 1630, 1540
Mass (m/e): 210 (M⁺ schwach), 143 (B⁺)

b) 2,1 g l-(2-Chlorethyl)-3-methyl-3-(2,3-dihydroxyn-propyl)-hamstoff werden in 10 ml Essigsäure gelöst. Dazu gibt man unter Rühren 1,4 g Natriumnitrit. Das Gemisch wird nun bei Raumtemperatur 2 Stunden gerührt. Daraufhin fügt man 2 ml konzentrierte Salzsäure and i g Natriumjiitrit und rührt weitere 2 Stunden bei der gleichen Temperatur. Nach Beendigung der Reaktion behandelt man das Gemisch, wie im Beispiel 1 b) beschrieben (für die Chromatografie verwendetes Lösungsmittel: Chloroform - Ethylacetat - Methanol (3:1: I]). Man erhält 1,5 g l-(2-Chlorethyl)-l-nitroso-3-methyl-3-(2,3-dihydroxy-n-propyl)harnstofF als blaßgelbes Öl.

IRvIl (cm"¹):
NMR(D₂O) δ:

3400, 1690

3,20 (s, 3 H, CH₃),

3,40-3,90 (m, 7 H,

CH₂CH(OH)CH₂OH,

CH₂CH₂Cl),

4,20 (t, 2 H, -N(NO)-CH₂-),

4,78 (breites s, 2 H, OH)

60

Beispiel 4

a) 6,1 g l-n-Butylamin-l-desoxy-2,4-O-äthyliden-D-erythrit (hergestellt aus 2,4-O-Ethyliden-D4rythrose gemäß dem Verfahren von Zidermann (L Zidermann und E. Dimant, J. Org. Chem. 31,223 (1966)), werden in 20 ml einer 10%igen wäßrigen Salzsäure gelöst und die Lösung 1 Stunde auf 8O⁰C erwärmt Das Reaktionsgemisch wird dann unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei 6,4 g 1-n-Butylamin-ldesoxy-D-erythrit-hydrochlorid als Rohprodukt erhalten werden. 6,4 g des genannten Rohproduktes und 3 g Triethylamin werden in 40 ml Methanol gelöst Zu der Lösung gibt man tropfenweise bei 0 bis 5°C 3,2 g 2-Chlorethylisocyanat Das Reaktionsgemisch wird, wie in Beispiel 3 a) beschrieben, behandelt Man erhält 5,0 g 1 -(2-Chlorethyl)-3-n-butyl-3 -(I -desoxy-D-erythrityl)-harnstoff als farbloses Öl.

fern"¹): 3320,1620, 1540, 1260, 1070

b) 3,1 g l-(2-Chloretnyl)-3-n-Diiyi-3-(l-desoxy-D-erythrityl)-hamstoff werfen in 10 ml Ameisensäure gelöst; dazu gibt man 1,4 g Natriumnitrit Das Gemisch wird 3 Stunden bei 0 bis 5°C gerührt Nach der Reaktion behandelt man das Gemisch, wie im Beispiel 3 b) beschrieben. Man erhält 2,0 g l-(2-Chlorethyl)-l-nitroso-3-n-butyl-3-(I-desoxy-D-eiythrityi)-harnstoff als gelbes Öl.

(cm-¹): 3400,1680,1080
NMR(CDCl₃) δ: 0,80-1,80 (m, 7 H,
CH₂CH₂CH₃)

[α]? -23,5° (C = 0,9, Methanol)

Beispiel 5

a) Man läßt ein Gemisch aus 3,3 g 3-Chk>r-l,2-dihydroxy-n-propan und 8 g n-Propylamin bei Raumtemperatur 5 Tage stehen. Das Reaktionsgemisch wird dann im Vakuum zur Trockne eingedampft, wobei 5,0 g N-n-Propyl-2,3-dihydroxy-n-propylamin-hydrochlorid als Rohprodukt erhalten werden. 5,0 g des genannten Rohproduktes und 3 g Triäthylamin werden in 40 ml Methanol gelöst Zu dieser Lösung gibt man bei 0 bis 5°C 3,2 g 2-Chlorethylisocyanat. Dann behandelt man die Reaktionslösung, wie im Beispiel 3 a) beschrieben. Man erhält 3,0 g l-(2-Chlorethyl)-3-n-propyl-3-(2,3-dihydroxy-n-propyl)-narnstoff als farbloses Öl.

(cm"¹): 3300, 1620, 1530, 1260, 1050
Mass {m/e): 238 (M⁺ sehr schwach), 171 (B⁺)

b) 3 g l-(2-Chlorethyl)-3-n-propyl-3-(2,3-dihydroxyn-propyl)-harnstoff werden in 10 ml Eisigsäure gelöst. Dazu gibt man unter Rühren 1,5 g Natriumnitrit. Das Gemisch wird dann 4 Stunden bei der gleichen Temperatur gerührt Nach der Reaktion behandelt man das Gemisch, wie in Beispiel 3 b) beschrieben. Man erhält 1,7 g 1-(2-αΗ1θΓ6ΐΗγ1)-1-ηϊΐΓθ5θ-3.η-ρΓοργ1.3=(2,3-£ΐΐΗγ-droxy-n-propyl)-harnstoff als gelbes Ö.¹.

IRvÜ (cm"¹): 3400, 1685, 1080
NMR(CLVCl₃) <5: 0,90 (t, 3 H, -CH₂CH₃),

1,30-2,00 (m, 2 H,

-CH₂CH₂CH₃)

Zur Glaubhaftmachung, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen nützliche therapeutische Wirkungen gegenüber dem Wachstum bösartiger Tumorzellen bei Warmblütlern aufweisen, wurden die Anti-Tumor-Aktivitäten dieser Verbindungen gegenüber Aszites-Tumor und Leukämie in Mäusen in Vergleichsversuchen festgestellt. Die Wirkung der getesteten Verbindungen auf die Lebensdauer von Mäusen, denen Leukämie-L-1210-Tumorzellen implantiert waren, wurden nach der Methodik des National Cancer Centers, Tokyo, Japan (A. Hoshi et al, Farumashia Vol. 9 (1973), Seiten 464-4-68) untersucht. Die Präventivwirkung der dem Test unterworfenen Verbindungen gegenüber dem Wachstum von Ehrlich Aszites Karzinom wurde nach der Methr.dik von K. Sugiura (Cancer Research Vol. 19 (1959), Seiten 438-445) geprüft.

Methodiken und Ergebnisse dieser Vergleichsversuche sind nachstehend aufgeführt:

Methodik *°

(A) Wirkung auf die Lebensdauer von Mäusen denen Leukämie-Zellen L-1210 implantiert wurden

10⁵ Leukämie-Zellen L-1210 wurden intraperitoneal ;s bei einer Gruppe von 4 bis 6 männlichen Mäusen, BDF,-Mäuse, Körpergewicht: 18 bis 23 g) inokuliert. Die zu prüfende Verbindung wurde in physiologischer Kochsalzlösung aufgelöst und den Mäusen intraperitoneal verabreicht. Die Verabreichung der zu prüfenden ω Verbindung wurde 24 Stunden nach der Inokulierung der Leukämie-Zellen begonnen und einmal täglich während eines Zeitraums von 5 Tagen durchgeführt. Sodann wurde die Anti-Tumor-Wirkung der Versuchsverbindung nach der folgenden Formel berechnet: J5

Zunahme der ₌ P -C Lebenszeit (ILS, %) _ri

100

Therapeutischer Index = optimale Dosis/ILS₃₀

Optimale Dosis = die Tagesdosis, bei der die maximale Zunahme der Lebenszeit der Mäuse erfolgt, die mit Leukämie-Zellen inokuliert wurden.

ILS₃₀ = Die minimale tägliche Dosis, die eine 30%ige Zunahme der Lebenszeit der Mäuse bewirkt

(B) Präventiv-Wirkung gegenüber dem Wachstum von Ehrlich Aszites Tumor

10⁶ Tumor-Zellen des Ehrlich Aszites Karzinom wurden intraperitoneal bei einer Gruppe von S weiblichen Mäusen (ICR-Mäuse, Körpergewicht 19 bis 23 g) inokuliert. Die Versuchsverbindung wurde in physiologischer Kochsalzlösung aufgelöst und den Mäusen intraperitoneal verabreicht. Die Verabreichung der Versuchsverbindung begann 24 Stunden nach der Inokulierung der Tumor-Zellen und wurde einmal täglich während S Tagen durchgeführt. Das Volumen der Aszites bei den behandelten Mäusen wurde, nachdem das Experiment während 7 Tagen durchgeführt wurde, bestimmt. Hierbei wurde die Anti-Tumor-Aktivilät der Versuchsverbindung entsprechend der folgenden Formel berechnet:

7"¹ = die mittlere Überlebenszeit in Tagen der behandelten Mäuse

C¹ = die mittlere Überlebenszeit in Tagen einer Kontrollgruppe von Mäusen (d. h. einer Gruppe von Mäusen, die keine Medikamente erhielten, jedoch mit Leukämie-Zellen inokuliert wurden)

Der therapeutische Index der Versuchsverbindung wurde nach folgender Formel bestimmt:

Zunahmeverhältnis (%)

C²-T²

100

C² =

durchschnittliches Volumen an Aszites bei den behandelten Mäusen

durchschnittliches Volumen von Aszites bei einer Kontrollgruppe von Mäusen (d. h. Mäusen, die mit Tumor-Zellen implantiert, jedoch ohne Medikamente waren).

Schließlich wurde der therapeutische Index der Versuchsverbindung nach der folgenden Formel berechnet:

Therapeutischer Index = MTD/MED

MTD = maximal tolerierte Dosis (d. h. die maximale Dosis, die eine 100%ige Inhibierung des Ehrlich Aszites Tumors in den Mäusen ohne Bewirkung des Ahlebens der Mäuse herbeiführt)

MED = minimale wirksame Dosis (d. h. die minimale Dosis, die eine 100%ige Inhibierung des Wachstums der Aszites Tumore ergibt).

50

Ergebnisse

Das Ergebnis der Versuche ist in den folgenden Tabellen 1 und 2 wiedergegeben:

ίο

Tabelle 1

Wirkung auf die Lebenszeit der	Mäuse, denen	Leukämie L-1210-Zellen implantiert waren	ILS	64.3	Überlebende	1
Versuchsverbindung	Dosis	Überlebens tage	OX)	> 592.9	nach	Therapeutischer \|jj
			> 682.9	60 Tagen	Index Sj
	(mg/kg/Tag)	_ri_/c.	97.1		(optimale ffl
			78.6	0/4	Dosis/ ILS₃₀) B
l-(2-Chlorethyl)-l-nitroso-	50	11.5/7.0	57.1	3/4	22.7 1
3,3-bis(2-hydroxyethyl)- hamstofT	25	>48.5/7.0	4U.0	3/4	(12.5/0.55) 1
	12.5	> 54.8/7.0	21.4	0/4	I
	6.25	13.8/7.0	85.7	0/4	I
	3.12	12.5/7.0	>432.9	0/4	I
	1.56	11.0/7.0	107.1	0/4	j
	0.78	9.8/7.0	85.7	0/4	I
	0.39	8.5/7.0	71.4	0/4	1
1 -(2-Chlorethyl)- l-nitroso-	25	13.0/7.0	54.3	2/4	27.8 §
3-methyl-3-(2,3-dihydroxy- n-propyl)harnstoff	12.5	>37.3/7.O	25.7	0/4	(12.5/0.45) §
	6.25	14.5/7.0	-5.4	0/4	1
	3.12	13.0/7.0	> 278.4	0/4	1
	1.56	12.0/7.0	100.0	0/4	I
	0.78	10.8/7.0	59.5	0/4	I
	0.39	8.8/7.0	52.7	0/4	I
1-(2-Chlorethyl)-l-nitroso-	50	7.0/7.4	35.1	1/4	22.7 I
3-n-butyl-3-( 1 -deoxy-D- erythritolyl)harnstofF	25	> 28.0/7.4	25.7	0/4	(25/1.1) I
	12.5	14.8/7.4		0/4
	6.25	11.8/7.4	70.8	0/4
	3.12	11.3/7.4	> 198.6	0/4
	1.56	10.0/7.4	73.6	0/4
	0.78	9.3/7.4	45.8
(Bekannte Verbindung)			29.2	0/6 .
H2-Chlorethyl)-l-nitroso-	12.5	12.3/7.2	13.9	1/6	7.8
3-D-gIucopyranosyl-harnstofF	6.25	>21.5/7.2		0/6	(6.25/0.8)
	3.12	12.5/7.2	40.0	0/6
	1.56	10.5/7.2	> 290.0	0/6
	0.78	9.3/7.2	157.1	0/6
	0.39	8.2/7.2	78.6
(Bekannte Verbindung)			32.9	0,4
H2-Chlorethyl)-l-nitroso-	25	9.8/7.0	11.4	1/4	11.4 f 1 1 C /t t \
S-lO-fl^D-glucopyranosyl- (1 -»4>D-glucopyTanosyl]-	123	>27.3/7.0	0/4	(123/1.1)
narnstoff	6.25	18.0/7.0	0/4
	3.12	123/7.0	0/4
	136	9.3/7.0	0/4
	0.78	7.8/7.0

Fortsetzung Versuchsverbindung

Dosis (mg/kg/Tag)

Überlebenstage _ri_/ci

ILS

12

Überlebende Therapeutischer nach Index

60 Tagen (optimale

Dosis/ ILS₃₀)

(Bekannte Verbindung)

1 -(2-ChlorethylH -nitroso- 3-D-galactopyranosyl- harnstofT	25 12.5 6.25	8.5/7.5 >6O.O/7.5 > 34.5/7.5	13.3 > 700.0 > 360.0	0/4 4/4 2/4
	3.12	15.0/7.5	100.0	0/4
	1.56	12.3/7.5	57.3	0/4
	0.78	9.8/7.5	30.7	0/4
	0.39	8.0/7.5	6.7	0/4
(Bekannte Verbindung)
1 -(2-Chlorethy I)-1 -nitroso- 3-D-xylopyranosyl-harnstofi"	12.5 6.25	9.0/7.7 >48.8/7.7	16.9 >533.8	0/4 3/4
	3.12	>27.5/7.7	>257.1	1/4
	1.56	14.0/7.7	81.8	0/4
	0.78	11.8/7.7	53.2	0/4
	0.39	10.0/7.7	29.9	0/4
	0.19	9.5/7.7	23.4	0/4
(Bekannte Verbindung)
1 -{2-Chlore thyl)-1 -nitroso- S-fO-./f-D-galactopyrar.osyl- (1 — 4)-D-glucopyranosyl]- harnstofF	25 12.5 6.25	9.3/7.5 >38.0/7.5 > 38.0/7.5	24.0 >406.7 >406.7	0/4 2/4 2/4
	3.12	>36.0/7.5	> 380.0	2/4
	1.56	11.3/7.5	S0.7	0/4
	0.78	9.3/7.5	24.0	0/4
(Bekannte Verbindung)
1 -{2-Chlorethy I)-I -nitroso- 3-D-mannopyranosyl- harnstoff	25 12.5 6.25	8.3/7.5 13.5/7.5 13.0/7.5	10.7 80.0 73.3	0/4 0/4 0/4
	3.12	12.0/7.5	60.0	0/4
	1.56	10.3/7.5	37.3	0/4
	0.78	9.8/7.5	30.7	0/4
	0J9	8.5/7.5	13.3	0/4

16.2 (12.5/0.77)

15.6 (6.25/0.4)

13.7 (12.5/0.9)

16.2 (12.5/0.77)

Anm: Überlebende nach 60 Tagen = Anzahl der Mäuse, die 60 Tage überiebten/Anzahl der verwendeten Mäuse. Tabelle 2

Präventiv-Wirkung gegenüber dem Wachstum von Ehrlich Aszites Karzinom

Testverbindungen	Dosis (mg/kg/Tag)	Aszites Volumen (g) *T²ZC²*	Inhibierungs- MTD verhältnis (%)	MED	Thera peutischer Index
l-(2-Chlorethyl)-l-nitroso- 3,3-bis(2-hydroxyethyl)- harnstofr	100 50 12.5	0.0/4.8 0.0/4.8	Toxic (5/5)* 50 100 100	0.78	64
	3.12	0.0/4.8	100
	0.78	0.0/4.8	100
	0.39	1.5/4.8	68.7
	0.19	4.2/4.8	12.5
1 -(2-Chlorethyl)-l -nitroso- 3-methyI-3-(2,3-dihydroxy- n-propyl)-hamstofT	50 25 6.25	0.0/4.8 0.0/4.8	Toxic (5/5)* 25 100 100	0.39	64
	1.56	0.0/4.8	100
	0.39	0.0/4.8	100
	0.19	3.7/4.8	22.9
1 -(2-Chlorethy I)-1 -nitroso- 3 -n-buty l-3-( 1 -deoxy-D- erythritolylVharnstofT	100 50 12.5	0.0/4.1 0.0/4.1	Toxic (5/5)* 50 100 100	0.78	64
	3.12	0.0/4.1	100
	0.78	0.0/4.1	100
	0.39	3.4/4.1	17.1
(Bekannte Verbindung)
1 -(2-Chlorethy IV1 -ni troso- 3-D-glucopyranosyl-harnstofT	25 12.5	0.0/4.8	Toxic (5/5)* 12.5 ieo	0.39	32
	3.12	0.0/4.8	100
	0.78	0.0/4.8	100
	0.39	0.0/4.8	100
	0.19	1.0/4.8	79.2
	0.09	4.6/4.8	4.2
(Bekannte Verbindung)
l-(2-Chlorethyl)-l-nitroso- 3-tO-ff-D-glucopyranosyl- (1 -*4VD-glucopyranosyl]- harnstoff	50 25 6.25	0.0/5.7 0.0/5.7	Toxic (5/5)* 25.0 100 100	0.39	64
	1.56	0.0/5.7	100
	0.39	0.0/5.7	100
	0.19	3.1/5.7	45.6
	0.09	5.3/5.7	7.0

Γ	(Bekannte Verbindung)	Dosis	28 58 078	Inhibieruhgs-	16	MED	Thera	I	32	'
I ¹⁵	H2-Chlorethyl)-l-nitroso-			verhältnis			peutischer			I
Fortsetzung	3-D-xylopyranosylbarnstofr	(mg/kg/Tag)		(%)	MTD		Index	32 "J₁
Testverbindungen			Asates					Sj-'t
		25	Volumen (g)	Toxic (5/5)*		039	32	'■■\
		ns	*T²IC²*	100
(Bekannte Verbindung)		3.12		100	123			*f;.*
l-(2-ChlorethylH-nitroso-		0.78	—	100				)■■
I 3-D-galactopyranosyl- I harnstoff	(Bekannte Verbindung)	039	0.0/5.7	100
■	H2-Chlorethyl)-l-nitroso-	0.19	0.0/5.7	54.4
	3-(O-j8-D-galactopyranosyl- (1 -» 4)-D-glucopyranosyl]-	0.09 1	0.0/5.7	iü.5			16 K
	harnstofF		0.0/5.7
		25	2.6/5.7	Toxic (1/5)*		039
		12.5	5.1/5.7	100
	3.12		100	12.5
(Bekannte Verbindung)	0.78	-	100
l-(2-Chlorethyl)-l-nitroso-	0.39	0.0/43	100			1
3-D-mannopyranosylhamstofF	0.19	0.0/43	72.1
	0.09	0.0/43	18.6
		0.0/43
	25	1.2/4.3	Toxic (1/5)*		0.78
	12.5	3.5/4.3	100
	3.12		100	12.5
	0.78	-	100
	0.39	0.0/5.7	84.2
	0.19	0.0/5.7	10.5
	0.0/5.7
25	0.9/5.7	Toxic (2/5)*		039
12.5	5.1/5.7	100
3.12		100	12.5
0.78	-	100
0.39	0.0/5.7	100
0.19	0.0/5.7	61.4
0.09	0.0/5.7	7.0
0.0/5.7
2.2/5.7
5.3/5.7

Anmerkung: * Anzahl der gestorbenen Mäuse/Anzahl der verwendeten Mäuse,

Claims

Patentansprüche:

1. 2-Chlorethyhiitrosohamstoffe der allgemeinen Formel:

R¹

N—C —Ν—CH₂CH₂Cl

/ Il I R² O NO