DE2813984A1 - Verfahren zur herstellung eines proteinkonzentrats, welches immunologische faktoren der milch enthaelt - Google Patents
Verfahren zur herstellung eines proteinkonzentrats, welches immunologische faktoren der milch enthaeltInfo
- Publication number
- DE2813984A1 DE2813984A1 DE19782813984 DE2813984A DE2813984A1 DE 2813984 A1 DE2813984 A1 DE 2813984A1 DE 19782813984 DE19782813984 DE 19782813984 DE 2813984 A DE2813984 A DE 2813984A DE 2813984 A1 DE2813984 A1 DE 2813984A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- milk
- casein
- concentrate
- bacteria
- whey
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 title claims description 70
- 239000008267 milk Substances 0.000 title claims description 70
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 title claims description 70
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 title claims description 49
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 7
- 229940088592 immunologic factor Drugs 0.000 title claims description 5
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 title claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 35
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 30
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 24
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 23
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 21
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 20
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims description 15
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 12
- 230000006651 lactation Effects 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 9
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 9
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims description 8
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 8
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 claims description 8
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 claims description 7
- 239000005862 Whey Substances 0.000 claims description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 7
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 claims description 7
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 claims description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 6
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 claims description 6
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 6
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 6
- 238000005352 clarification Methods 0.000 claims description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 4
- 230000007704 transition Effects 0.000 claims description 4
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 claims description 2
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 claims description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 2
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims 1
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 claims 1
- 235000020197 coconut milk Nutrition 0.000 claims 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims 1
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 claims 1
- 238000004094 preconcentration Methods 0.000 claims 1
- 235000020122 reconstituted milk Nutrition 0.000 claims 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 37
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 24
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 17
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 17
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 10
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 10
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 10
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 10
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 9
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 8
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 6
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 5
- 230000022676 rumination Effects 0.000 description 5
- 208000015212 rumination disease Diseases 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 4
- 230000000369 enteropathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 3
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 208000005107 Premature Birth Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 description 2
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000007669 thermal treatment Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 1
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000008192 Lactoglobulins Human genes 0.000 description 1
- 108010060630 Lactoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 108010023244 Lactoperoxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000045576 Lactoperoxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 206010066901 Treatment failure Diseases 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 235000020167 acidified milk Nutrition 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- QZKHGYGBYOUFGK-UHFFFAOYSA-L azocarmine B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(=O)(=O)[O-])=CC=C1NC(C1=CC(=CC=C1C1=NC2=CC=CC=C22)S([O-])(=O)=O)=CC1=[N+]2C1=CC=CC=C1 QZKHGYGBYOUFGK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000007982 barbital buffer Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- DGQLVPJVXFOQEV-JNVSTXMASA-N carminic acid Chemical compound OC1=C2C(=O)C=3C(C)=C(C(O)=O)C(O)=CC=3C(=O)C2=C(O)C(O)=C1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O DGQLVPJVXFOQEV-JNVSTXMASA-N 0.000 description 1
- 229940021722 caseins Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000011552 falling film Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 1
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 1
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 1
- 229940057428 lactoperoxidase Drugs 0.000 description 1
- 208000018773 low birth weight Diseases 0.000 description 1
- 231100000533 low birth weight Toxicity 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003950 pathogenic mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229940108461 rennet Drugs 0.000 description 1
- 108010058314 rennet Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- MHQHHBYRYFICDV-UHFFFAOYSA-M sodium;pyrimidin-3-ide-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].O=C1CC(=O)[N-]C(=O)N1 MHQHHBYRYFICDV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Chemical class 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Chemical class 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/04—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from milk
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
- A23J1/20—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey
- A23J1/205—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey from whey, e.g. lactalbumine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Description
. - ing. G. Weinliausen
D-8 München 22 Widenmayeretraß· 46
Tel. (O 89) as 51 25
SOCIETE-DES PRODUITS NESTLE S.A. Vevey / Schweiz
Verfahren zur Herstellung eines Proteinkonzentrats,
welches immunologische Faktoren der Milch enthält
Brev. JMA/CMS
O.Z. 1011/fS
20.03.1978
O.Z. 1011/fS
20.03.1978
809843/0647
BESCHREIBUNG :
Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung eines Proteinkonzentrats, welches immunologische Faktoren der
Milch, insbesondere aktive Immunoglobuline enthält.
Es wurde schon vorgeschlagen, in dietätische Produkte für Neugeborene und Säuglinge immunologische Faktoren der Milch
einzubauen. Die orale Verabreichung dieser Produkte sollte zum Übergang dieser Faktoren in die Blutbahn des Säuglings
führen. Es wurden jedoch weder über die Art und Weise, noch über Resultate einer solchen generalisierten passiven
Immunisierung Angaben gemacht.
Es ist weiterhin bekannt, Iiranunlactoglobuline aus der Milch von vakzinierten Kühen dadurch zu isolieren, dass man die
Milch koaguliert, das Milchserum abtrennt und die Lactoglobuline mittels Ammoniumsulfat selektiv ausfällt anschliessend
gegen reines Wasser dialysiert, filtriert und dann trocknet. Serumschutzversuche bei Mäusen haben bei diesem Arbeiten gezeigt,
dass die parenterale Injektion dieser immunisierenden Prinzipien einen allgemeinen passiven Schutz gegen gewisse
enteropathogene Bakterien und Viren ergibt, wenn diese' Mikroorganismen den Tieren auf dem gleichen Weg injiziert
werden. :
Es wurde nunmehr ein Verfahren für die industrielle Herstellung eines Immunoglobuline enthaltenden Proteinkonzentrats gefunden,
bei welchem diese Immunoglobuline nicht denaturiert werden. Dieses Produkt verleiht eine passive lokale Immunisation
im Darmkanal, ohne dass eine Resorption oder eine wesentliche Beeinträchtigung seiner Aktivität im Verdauungstrakt erfolgt.
809843/0647
Das erfindungsgemässe Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man Milch von hyperimmunisierten weiblichen Milchtieren
gewinnt, von dieser Milch Rahm und Verunreinigungen abtrennt, die geklärte und entrahmte Milch koaguliert, das Kasein
abtrennt, die Molke filtriert und ultrafiltriert, durch Filtration die Proteine der Molke sterilisiert und das
Produkt unter Bedingungen eindampft und trocknet, unter denen die Immunoglobuline nicht denaturiert werden und ihre
Sterilität bewahrt bleibt.
In der beigefügten Zeichnung sind schematisch die verschiedenen Stufen des Verfahrens dargestellt.
Als weibliche Milchtiere werden insbesondere rinderartige Tiere und ganz besonders Kühe verwendet.
Die zu behandelnde Milch kann verschiedener Art und mehr oder weniger reich an Antikörpern sein. In Frage kommen Kolostralmilch,
Übergangsmilch (Milch der ersten 8 Tage nach dem Kalben) oder Milch am Ende der Laktation (Milch der letzten
beiden Monate der Milchabsonderung).
Es wird bevorzugt,, ein Gemisch dieser Milcharten zu behandeln,
um die Ausbeute an immunologisch aktivem Material pro Kuh möglichst zu erhöhen.
Die Hyperimmunisation der Kuh erfolgt durch eine kombinierte
Vakzinierung, beispielsweise durch intracisternale Instillation in die Milchdrüse, durch parenterale (subkutane oder
intravenöse) Injektion, durch Injektion in das retroiaanunäre
Lymphknotensystem, durch Skarifikation, durch orale Verabreichung oder durch eine Kombination von mehreren
dieser Verfahren.
809843/0647
Es wird bevorzugt, eine Kombination dieser Verfahren entsprechend einem sorgfältig erarbeiteten Immunisierungsschema
zu verwenden, um in jedem verwendeten Milchtyp einen zufriedenstellenden
Antikörpertiter zu erzielen. So erfolgt für die Kolostralmilch und die Übergangsmilch die Vakzinierung während
der 8. bis 2. Woche vor dem Kalben parenteral und intracisternal,
und während der Woche vor dem Kalben oral.
Bei der Milch am Ende der Laktation wählt man eine alternierende parenterale, lokale and orale Vakzinierung,
beginnend 2\ Monate vor dem vermuteten Ende der Milchabsonderung.
Die verwendete Vakzine ist vorzugsweise ein Gemisch aus dem gewählten Antigen mit homologem Blutserum von immunisierten
Kühen als Adjuvans, wodurch eina Detoxifizierung der Vakzine und die Bildung von Immunkomplexen erreicht w_Lrd.
Da eine Kuh als Produktionstier dient, sind die in dem Proteinkonzentrat enthaltenen Ig hauptsächlich IgG (insbesondere
IgG,), im Unterschied zu Muttermilch, welche als Ig überwiegend IgA enthält.
Der Gehalt an Ig im Proteinkonzentrat, in welchem die Proteine 70 bis 80· Gew.-% ausmachen/ beträgt 25 bis 35 Gew.-%.
Einige Vorteile ergeben sich aus der Tatsache, dass bei der Durchführung des Verfahrens die Ig nicht von den anderen Proteinen
des Milchserums abgetrennt werden, welche deshalb ebenfalls im erhaltenen Konzentrat vorliegen. Hierdurch werden selektive
Fällungsoperationen, beispielsweise durch Ammoniumsulfat und anschliessender Dialyse, vermieden.
Darüber hinaus befinden sich gewisse bakteriostatische and antivirale Faktoren, wie z.B. Lactoferrin oder die enzymatischen
Systeme wie Lactoperoxydase und Ribonuklease, welche sich im Milchserum befinden, im Proteinkonzentrat.
809843/0647
Es können die verschiedensten Antigenarten viralen oder bakteriellen Ursprungs verwendet werden; die erhaltenen
Antikörper hängen von der Natur der an die Kuh verabreichten Antigene ab. Es ist beispielsweise möglich, einen Schutz
gegen enteropathogene Bakterien und Viren 2u erzielen, die für eine Gastroenteritis verantwortlich sind, welche von einer
Diarrhöe und von einem starken Wasserverlust begleitet sind, wenn man das Proteinkonzentrat, welches die Ig enthält, mit
irgendeinem für orale Verabreichung geeigneten Träger einverleibt. Dieser Träger kann irgendein Exzipiens sein, ist
aber vorzugsweise ein diätetisches Produkt, wie z.3. eine Milch oder ein Milchpulver für Kleinkinder, eine "humanisierte"
oder eine für Säuglinge adaptierte Milch oder eine Milch, die speziell für eine besondere Gruppe von Neugeborenen adaptiert
ist, wie z.B. eine Milch für Frühgeburten oder Kinder mit geringem Geburtsgewicht.
Wenn man beispielsweise ein Konzentrat, das Ig gegen E. coli enthält, mit einer Milch als Träger prophylaktisch
vorabreichen will, dann fügt man 0,8 bis 3 g des Konzentrats auf 100 g Trockensubstanz zu. Therapeutische Dosen-gehen
bis zu 6 g/100 g Milchpulver.
Für die Durchführung des Verfahrens ist es nötig, darauf zu achten, dass die Entrahmung und die Klärung sehr
weit getrieben werden, um eine nachfolgende Verstopfung der Filter und Ultrafilter zu vermeiden.
Die Entrahmung erfolgt vorzugsweise in zwei Stufen, und zwar zunächst in der Kälte, um den grössten Teil der Fette
und der Verunreinigungen (wie z.B. Blut, das oft in der Kolostralmilch enthalten ist) zu entfernen, und dann in der
Wärme, um eine vollständige Entfernung der Fettbestandteile „
der Milch zu erzielen.
809843/0647
Die Koagulation kann beim isoelektrischen pH des Kaseins in Gegenwart von Lab unter Zugabe von Säure,
wie z.B. Citronensäure, erfolgen. Die Koagulation erfolgt jedoch vorzugsweise durch Zusatz von Säure, wie z.B.
Salzsäure, bis zu einem pH von etwa 4,6 und Erwärmen bis auf +400C.
Der Abtrennung des Kaseins durch Zentrifugation folgt eine Klärung des Milchseruitis, wodurch eine Abtrennung
der Feinstoffe ermöglicht wird.
Andererseits ist es wesentlich, die eine thermische Behandlung erfordernden Operationen' (Eindampfen und Trocknen)
unter schonenden Bedingungen durchzuführen, um eine Inaktivierung der Ig zu vermeiden.
Um die Verluste an Ig zu verringern, von denen ein Teil zusammen mit dem Rahm beim Entrahmen und ein
anderer Teil zusammen mit dem Kasein bei der Abtrennung desselben abgetrennt wird, ist es angezeigt, den Rahm und
das Gerinnungsprodukt mit Wasser zu extrahieren und die Waschwasser, welche die Ig enthalten, zum Zwecke der Rückgewinnung
zu behandeln.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert, in denen die Mengen und Verhältnisse in
Gewicht ausgedrückt sind, sofern nichts anderes angegeben ist.
Kühe verschiedener Rassen wurden entsprechend dem unten stehenden Schema mit einer Vakzine hyperimmunisiert,
deren Herstellung nachstehend angegeben ist. Die Milch der letzten beiden Monate der Milchabsonderung und der ersten
8 Tage nach dem Kalben wurde gesammelt.
3.09843/0647
Es wurden die folgenden enteropathogenen Serotypen von E. coli verwendet :
0 | 18 | : K | 76 | (B | 20) | 0 | 111 | • K | 58 | (3 | 4) |
0 | 20 | : K | 17 | (L) | 0 | 112 | : K | 68 | (B | 11) | |
0 | 26 | ; K | 60 | (B | 6) | 0 | 119 | ■ K | 69 | (B | 14) |
0 | 44 | : K | 74 | (L) | 0 | 124 . | ■ K | 72 | (B | 17) | |
0 | 55 | . K | 59 | (B | 5) | 0 | 125 | K | 70 | (B | 15) |
0 | 78 | : K | 80 | (-) | 0 | 126 | K | 71 | (B | 16) | |
0 | 86 | : K | 61 | (B | 7) | 0 | 127 | . K | 63 | (B | 8) |
0 | 128 | . K | 68 | (B | 12) |
Die verschiedenen Stämme wurden von Kindern mit klinischen
E. coli Gastroenteritiden isoliert. Die Serotypisierung erfolgte mit multi- und monovalenten Antiseren (Difco).
Die Bakterien wurden in einem flüssigen Minimalmedium kultiviert, das 2 % Aminosäuren eines Kaseinhydrolysats
(CasaminoacidS/ Difco)/ und 0,2 % Glucose enthielt. Die Kultivierung erfolgte während 24 st bei +370C ohne
Schütteln der Kulturgefässe. Zur Inaktivierung der Keime
wurden die Kulturen -durch Zentrifugieren in sedimentierte Bakterien und Kulturüberstand getrennt. Die Bakterienzellen
wurden wieder in Suspension gebracht und 24 st bei +37 C in Gegenwart von 0,5 % Formaldehyd inkubiert, währenddessen
der Überstand durch Zugabe von 0,05 % Formaldehyd inaktiviert wurde. Nach einer erneuten Zentrifugierung und
Abtrennung des Überstands wurden die Bakterien im ursprünglichen inaktivierten Überstand wieder in Suspension gebracht.
Dieses Verfahren gestattet es, den überstand, welcher die bakteriellen Exotoxine enthält, für die Vakzine zu konservie-
9 ren. Es wurde eine Vakzine mit 1-2 χ 10 Bakterien/ml erhalten,
die hierauf entsprechend dem Immunisierungsschema verdünnt wurde und mit einer 2%igen Lösung von Al (OH)3 und homologen
Blutserum von immunisierten Kühen vermischt wurde.
809843/0647
Immunisierunasverfahren
A. Immunisierungsschema für die Herstellung von Kolostralmilch
und Übergangsmilch mit anti-E.coli-Ig : Der Tag der vermuteten Kalbung = X
Zeitpunkt der
Vakzinierung
Vakzinierung
Vakzine + eventuelles Adjuvans
Verabreichungsweise
X- 8 Wochen
X- 7 Wochen
X- 6 Wochen
X - 5% Wochen
X- 5 Wochen
X- 4k Wochen
X- 4 Wochen
Wochen
Wochen
Wochen
X-I Woche
X - h Woche
5 ml Vakzine (5 χ
Bakterien/ml)
+ 5 ml Serum+
5 ml Vakzine (5 χ ΙΟ7
Bakterien/inl)
+ 5 ml 2 % Al (OH) ,
+ 5 ml Serum +
10 ml Vakzine (5 χ 10' Bakterien/ml )
20 ml Vakzine ir χ 10'
Bakterien/ml)
+ 10 ml 2 % Al (OH)
40 ml Vakzine (5 χ 10'
Bakterien/ml)
+ 20 ml Serum
24 ml Vakzine (5 χ
Bakterien/ml)
+ 8 ml Serum
40 ml Vakzine (5 χ 10'
Bakterien/ml)
+ 20 ml Serum
10 ml Vakzine (5 χ Bakterien/ml)
5 ml Vakzine (5 χ ΙΟ8
Bakterien/ml)
+ 5 ml 2 % Al (OH) _,
100 ml Vakzine (1 χ 10" Bakterien/ml)
100 ml Vakzine (1 χ 10" Bakterien/ml)
subkutane Injektion
Intravenöse Injektion
subkutane Injektion
Injektion in das r e tr cm airaaär e
Lymphknotensystem
Instillation von 4 χ 15 ml in das Euter durch Zitzenkanäle
subkutane Injektion
Instillation von 4 χ 15 ml in das Euter durch Zitzenkanäle
subkutane Injektion
intravenöse Injektion
orale Verabreichung während des Wiederkauens
orale Verabreichung während des Wiederkauens
808843/0647
+ Diese Serumzugaben erfolgten nur im Falle von Kühen, die zum ersten Mal immunisiert wurden.
++ Diese subkutane Injektion wurde im lymphatischen System wie folgt verteilt :
2x4 ml in die präskapulären Lymphknoten
2 χ 4 ml in die postkapulären Lymphknoten 2x4 ml in die inguinalen Lymphknoten
2 χ 4 ml in die Lymphknoten der Kniekehlen
B. Immunisierungsschema für die Herstellung von Spätlaktatationsmilch
(die letzten beiden Monate der Laktation) mit anti-E.coli-Ig.
Diese Immunisierung erfolgte nur bei Kühen, die bereits während der Kolostralperiode und der Übergangsperiode immunisiert
worden waren.
Vermuteter Tag der Trockenstellung = X
Zeitpunkt der Vakzine + eventuelles Verabreichungs-Vakzinierung Adjuvans weise
χ - 70 Tage 5 ml Vakzine (5 χ 10 intravenöse
Bakterien/ml) Injektion
+ 5 ml 2 % Al (OH)^
X - 65 Tage . 20 ml Vakzine (5 χ 10 Injektion in das
Bakterien/ml) retromammäre
Lymphknotensystem
X - 60 Tage 24 ml Vakzine (5 χ 10 subkutane
Bakterien/ml) Injektion ++
(wie oben unter A) g
X - 55 Tage 100 ml Vakzine (1 χ 10 orale Verabrei-Bakterien/ml)
chung während des
Wiederkauens
X - 50 Tage 40 ml Vakzine (1 χ ΙΟ7 Instillation in
Bakterien/rnl) das Euter wie oben
+ 20 ml Serum unter A
X - 40 Tage 100 ml Vakzine (1 χ 10 orale Verabrei-Bakterien/ml)
chung während des
Wiederkauens
809843/0647
Zeitpunkt der
Vakzinierung
Vakzinierung
Vakzine + eventuelles Adjuvans
Verabreichungsweise
X - 30 Tage
X - 25 Tage
X-IO Tage
20 ml Vakzine (5 χ 10 Bakterien/ml)
40 ml Vakzine (5 χ 10
Bakterien/ml
+ 20 ml Serum
100 ml Vakzine (1 χ ΙΟ5
Bakterien/ml
Injektion in das retromanunäre
Lymphknotensystem
Instillation in das Euter wie oben unter A
orale Verabreichung während des Wiederkauens
■ Die Milch der ersten 8 Tage nach dem Kalben von gemäss
Beispiel 1 vakzinierten Kühen wurde wie folgt behandelt :
Die Entrahmung erfolgte in zwei Stufen : Stufe A in der Kälte und Stufe B in der Wärme.
A. 1100 kg Milch durchliefen kalt eine Entrahmungszentrifuge ,
wurden in einen 2500 1 fassenden Speicherbehälter geleitet und dann in eine Klärzentrifuge mit erhöhter Beschleunigung (ungefähr
H1OOO g) gepumpt, um Blut und Verunreinigungen (Schlammstoffe)
zu entfernen.
B. Die kalte geklärte Milch wurde in einem 2500 1 fassenden
Reservoir aufgefangen und über einen auf 40 C gehaltenen Erhitzer in die gleiche Entrahmungszentrifuge wie oben gepumpt.
Auf diese Weise wurden 110 kg Rahm, die aufbewahrt wurden, und 5 kg Schlammstoffe, die verworfen wurden, erhalten.
Gemäss einer Variante kann man bei der kalten und warmen Entrahmung
eine selbstklärende Rahmzentrifuge und eine Klärzentrifuge zwischen den beiden Vorgängen verwenden, um so die Dauer
des Entrahmens zu verkürzen.
809843/0647
Die entrahmte und geklärte kalte Milch (985 kg) wurde dann in 4 viereckige Koagulationswannen mit jeweils 750 1 Fassungsvermögen
geleitet, welche mit Rührern ausgerüstet waren, um die Koagulation durchzuführen.
Es wurde eine 1 η Salzsäure bei 37 C bis zur Stabilisierung des
pH bei etwa 4,6 zugegeben, worauf die Temperatur 20 min unter Rühren aufrechterhalten wurde. Hierauf wurde auf 15 C abgekühlt.
Anschliessend erfolgte die Abtrennung des Kaseins. Sie erfolgte in zwei hintereinandergeschalteten Zentrifugationen der entrahmten,
koagulierten und geschnittenen Milch. Die erste entfernte den Hauptteil des ausgefällten Kaseins mit Hilfe einer selbstreinigenden
Trommelzentrifuge, wobei 150 kg Kasein abgetrennt wurden und das Milchserum in einen Speicherbehälter geleitet
wurde. Die zweite Zentrifugatxon entfernte noch alle Spuren von Teilchen, welche die nachfolgende Filtration und Ultrafiltration
gestört hätten. Hierzu wurde die im Vorgang A der Entrahmung verwendete Klärzentrifuge herangezogen. Es wurden
854,7 kg geklärtes Milchserum erhalten, welches in ein 2'5OO 1
fassendes Reservoir gepumpt wurde.
Hierauf erfolgte die Filtration und die anschliessende Ultra-' filtration des Milchserums. Die Filtration erfolgte sehr sorgfältig,
um alle Schwierigkeiten bei der Ultrafiltration von vornherein auszuschalten, indem die sehr feinen Kaseinteilchen
abgetrennt wurden. Es wurde ein Seitz-Supra-lOO-Filter mit Platten
von 20 χ 20 cm verwendet. Das Filtrat wurde in einem Reservoir
mit einem Fassungsvermögen von 31OOO 1 aufgefangen und dann zum
.,Ultrafilter gepumpt. Das Ultrafilter arbeitete in 2 oder 3 Stufen
mit Rückführung des Retentats zum Reservoir. Zwei hintereinandergeschaltete Zentrifugalpumpen lieferten den Durchsatz gegen einen
Eintrittsdruck des Ultrafilters von etwa 7 bar, wobei am Austritt des Ultrafilters der Druck auf ungefähr 4,5 bar gehalten wurde.
Um eine Aufheizung des Retentats durch die Pumpen gelieferte Energie zu vermeiden, wurde das Retentat auf etwa 10-120C
abgekühlt.
809843/0647
Die erste Stufe/ die eigentliche Ultrafiltration, gestattete die Abtrennung von gelösten Stoffen mit hohem Molekulargewicht,
nämlich der Proteine, die auf der Membran zurückgehalten wurden und die sich im Retentat befanden, während ein Teil der
Lactose, Vitamine, Mineralsalze und Wasser im Permeat abgeführt wurden. Bei Verwendung einer DDS-Zelle mit der Membran 800
2
(Membranoberflache = 7 m ) wurden 580 kg Permeat I und 274,7 kg Retentat bei einer mittleren Durchflussleistung von 14,17 kg
(Membranoberflache = 7 m ) wurden 580 kg Permeat I und 274,7 kg Retentat bei einer mittleren Durchflussleistung von 14,17 kg
Permeat/m /st erhalten, wobei das Verhältnis Retentat/Permeat etwa 1:3,1 war.
Die zweite Stufe war eine Diafiltration, während welcher kontinuierlich dem Retentat 825 kg Wasser zugegeben wurden
und die Lösung unter den gleichen Bedingungen wie in der ersten Stufe zirkuliert wurde. Die Diafiltration wurde beendet,
nachdem die elektrische Leitfähigkeit des Permeats den gewünschten Wert erreicht hatte, wobei das Verhältnis von
Retentat/zugesetztem Wasser etwa 1:3 betrug. Hierdurch wurden 825 kg Permeat II und 274,7 kg Retentat mit einer mittleren
2 Durchflussleistung von 11,77 kg Permeat/m /st erhalten.
Die dritte Stufe war eine Konzentrierung, die unter Rückführung des Retentats zur Membran durchgeführt werden kann, bis ein
Trockenmässegehalt von etwa 10 % erreicht wurde, und zwar durch Abtrennung von 82,5 kg Permeat III. Auf diese Weise wurden
192,2 kg vorkonzentrierte Lösung erhalten. Gemäss einer Variante kann man die dritte Stufe weglassen und direkt zur Sterilfiltration
übergehen.
Die Sterilfiltration stellte eine wichtige Stufe im gesamten Verfahren dar, da thermische Behandlungen für die Sterilisation
nicht anwendbar sind, da sie zu einer Denaturierung der Ig führen wurden. Durch die Sterilfiltration wurde das Retentat
von Mikroorganismen befreit, die eventuell noch vorhanden waren. (Der Hauptteil derselben wurde bereits während der Abtrennung
des Rahms, des Kaseins und der Schlammstoffe entfernt.) Um eine Verstopfung der Sterilfilter zu vermeiden, war eine Klärung
durch Zentrifugieren und eine Dreifachfiltration des Retentat
• 809843/0647
2013984
nötig. Nach der Klärung wurde das Retentat in einem Reservoir aufbewahrt und einer Serienfiltration unterworfen, die eine
Vorfiltration auf einem Dreifachfilter Seitz Supra 100, EK und
EKS (hintereinandergeschaltet) und dann eine Sterilfiltration auf einem Seitz-Filter Supra 20 und Millipore HA 0,45 y, die
hintereinandergeschaltet und vorher durch überhitztes Wasser sterilisiert worden waren, umfasste. Das sterile Retentat
wurde in einem sterilen 500 1 fassenden Reservoir aufbewahrt. Mit Hilfe von komprimiertem und steril filtriertem Stickstoff
wurde es den nachfolgenden Eindampfungsvorgänge zugeführt. Alle nachfolgen Arbeitsgänge erfolgten unter sterilen Bedingungen.'
Die Eindampfung erfolgte mittels eines Dünnschichtverdampfers
(fallender Film mit 1 m Oberfläche) bei einer Temperatur von 75°C, wobei die Temperatur des Produkts ungefähr 30 C betrug,
bis ein Trockenmassegehalt von mindestens 20 % erreicht war. Um jegliche Infektion zu vermeiden, erfolgte die Überführung
vom Retentatreservoir zum Konzentratreservoir mittels einer Schlauchpumpe, wobei das Konzentratreservoir dem Verdampfer
direkt angeschlossen war. Die Konzentrierung erfolgte somit in einem geschlossenen Kreislauf. Diese Arbeitsweise beeinflusste
die Aktivität der Ig nicht.
Hierauf wurde das Konzentrat (96 kg) in entsprechender Weise getrocknet, zum Beispiel durch Gefrieren und anschliessende
Lyophilisation. Das Gefrieren erfolgte auf Platten bei -40 C. Die Ig konnten bei -30 C 45 Tage ohne Aktivitätsverlust gelagert
werden. Das Produkt wurde bei -30 C auf Platten in einem v verschlossenen Behälter bei 0,5 Torr lyophilisiert, bei' einer
Kondensatortemperatur von -50 C und unter Erwärmung auf +30-35 C. Diese Trocknungsweise beeinflusste die Aktivität der Ig nicht.
Es wurden 19,1 kg trockenes Produkt erhalten, das 25-35 % Ig enthielt. Das Produkt wurde steril verpackt.
809843/0647
2013984
Beispiel 3
Es wurde wie in Beispiel 2 verfahren, wobei die Milch der ersten 8 Tage nach dem Kalben und die während der letzten
4 Wochen der Laktation gesammelte Milch behandelt wurde. Es wurde ein Proteinkonzentrat der folgenden mittleren Zusammensetzung
erhalten :
Proteine 75 - 5 %
30 - 5 % Immunoglobuline
15 - 5 % tf-Lactalbumine
35 - 5 % ß-Lactoglobuline
5 - 2 % Serumalbumin
5 - 2 % andere Spuren-Proteine
Restfeuchtigkeit 4 - 0,5 %
Lactose ' 10 - 2 %
Mineralsalze 5 - 2 %
nicht-proteinische 5-2 %
stickstoffhaltige Substanzen
Es wurde wie in Beispiel 2 verfahren, mit dem Unterschied, dass der Rahm und das Kasein mit Wasser extrahiert wurden,
um einen Teil der verlorengegangenen Ig zurückzugewinnen. Dabei wurden die Waschwasser wieder in den verarbeitungsprozess
zurückgeführt.
Die kalte Entrahmung (Stufe A) erfolgte in einer parallelen
Verarbeitungslinie. Dabei wurde mit Wasser die Ig enthaltende Proteinfraktion, die durch den Rahm mitgeführt worden war,
extrahiert. Der Rahm aus der ersten Zentrifugierung (115 kg) wurde in einem Reservoir mit einem Fassungsvermögen von
1'0OO 1 und mit einem Rührer aufgefangen und m^t 150 kg Wasser
von 400C gemischt, worauf das Ganze 30 min gerührt und dann
809843/0647
in einer Entrahmungsvorrichtung zentrifugiert wurde. Auf diese Weise wurden 115 kg Rahm und 150 kg Lösung voneinander getrennt,
wobei die letztere mit der entrahmten und geklärten Milch vereinigt wurde. Auf diese Weise wurden 1130 kg Flüssigkeit
erhalten, welche der warmen Entrahmung (Stufe B) und der Koagulation
zugeführt wurden.
Die Abtrennung des Kaseins ergab ausgehend von I1145 kg
entrahmter, mit Lab versetzter und angesäuerter Milch 991 kg Milchserum und 154 kg Kasein. In einer parallelen Linie wurde
die Proteinfraktion, welche die Ig enthielt, mit Wasser aus dem ausgefällten Kasein extrahiert. Das ausgefällte Kasein
wurde am Ausgang der selbstreinigenden Trommelzentrifuge in ein mit einem Rührer ausgerüstetes Reservoir eingeführt und mit
300 kg Wasser von 40 C v/ährend 30 min gerührt und dann in eine Kolloidalmühle geführt. Die Suspension des gemahlenen Kaseins
wurde dann in einer selbstreinigenden Trommelzentrifuge abgetrennt. Es wurden 154 kg gewaschenes Kasein und 300 kg
Waschwasser erhalten, welche für die nachfolgenden Arbeitsgänge mit dem Milchserum vereinigt wurden. I1291 kg Milchserum
wurden filtriert und ultrafiltriert, was zu 21OlO kg Permeat-{I,
II und III) und 216 kg Vorkonzentrat führte. Die Eindampfung lieferte 108 kg Konzentrat führte. Die Eindampfung lieferte
108 kg Konzentrat, das beim Trocknen 21,6 kg Produkt ergab. Auf diese Weise v/urden im Verhältnis zum Verfahren von Beispiel
2 zusätzliche 14 % Ig erhalten.
1 kg des gemäss Beispiel 2 oder Beispiel 4 hergestellten
Pulvers bzw. 2 kg des gemäss Beispiel 3 hergestellten Pulvers wurden mit 100 kg Milchpulver homogen vermischt, worauf das
Gemisch steril konditioniert wurde. Dabei wurde ein Produkt erhalten, das bei einer isokalorischen Verabreichung für ein
809843/0647
frühgeborenes Kind von 140 cal/kg/Tag eine prophylaktische
Dosis Ig enthielt, was 250 mg Ig-Konzentrat/kg/Tag bei Herstellung gemäss den Beispielen 2 oder 4 bzw. 500 rag
Ig-Konzentrat/kg/Tag bei Herstellung gemäss Beispiel 3 entspricht.
Es wurden verschiedene Tests in vitro and in vivo mit den Proteinkonzentraten der Beispiele 2 oder 4, die in der Folge
mit "Ig-Konzentrat" bezeichnet werden, durchgeführt/ um
zu zeigen,
dass die Milch-Ig eine Antikörperspezifizität aufweisen, die
man normalerweise bei menschlichen Ig findet, und dass diese im Verlauf des Herstellungsverfahrens bewahrt wird? und
dass die spezifischen Milch-Ig eine schützende Aktivität zeigen, indem sie in die Pathomechanismen der enteropathogenen
Mikroorganismen eingreifen.
Rote Blutkörperchen vom Schaf wurden mit einem Harnstoffextrakt eines spezifischen Serotyp von E.coli sensibilisiert.
Dieser Extrakt wurde gemäss Brodhage (Brodhage H. (1961), J. Hyg., 1961, 148, 94) erhalten. Die Bakterien wurden auf
einem Nähragar (Difco) bei 37°C während 30 st in Roux-Flaschen kultiviert. Die Kultur wurde mit 10 ml phosphat-gepufferter
physiologischer Kochsalzlösung pH 7,2 (8,8 g NaCl + 1,86 g
Na2HPO4.2H2O + fc,43 g KH2PO4/1000 ml H3O) geerntet..Nach
Zusatz von 10 g Harnstoff (Merck) wurde die Suspension 90 st bei 37 C unter massigem Rühren stehen gelassen. Nach Abzentrifugierung
wurde der überstand erschöpfend gegen phosphatgepufferte physiologische Kochsalzlösung pH 7,2 dialysiert, bis
zu einem Gesamtvolumen von 50 ml mit phosphat-gepufferter physiologischer Kochsalzlösung pH 7,2 verdünnt und in kleinen
809843/0647
Portionen bei -20 C gefroren. Die Sensibilisierung der roten Blutkörperchen vom Schaf mit diesem Antigen erfolgte durch
eine Kombination der Verfahren gemäss Avrameas et al.
(Avrameas S., Taudou B., Chuilon S., Immunochemistry, 1969/
J5/ 67) und gemäss Otto et al. (Otto H., Takamiya H., Vogt A.,
J. Immunol. Methods, 1973, 3_, 137). Die roten Blutkörperchen
vom Schaf wurden mit Glutaraldehyd vorbehandelt (Endkonzentration der roten Blutkörperchen vom Schaf 5 % und Giutaraldehyd
0,5 %) , dann gewaschen und in einer phosphat-gepufferten physiologischen Kochsalzlösung, pH 7,2, in eine 20%ige
Suspension gebracht und schliesslich mit dem gleichen Volumen Harnstoffextrakt gemischt. Nach 16 st Inkubationszeit bei 20 C
unter schwachem Rühren wurden die sensibilierten roten Blutkörperchen vom Schaf mehrere Male gewaschen und für die
sofortige Verwendung in eine l%ige Suspension gebracht. Die roten Blutkörperchen vom Schaf konnten in einer 10%igen
Suspension bei 4 C mehrere Wochen gelagert werden.·
Vor der ■ Titration musste jede zu untersuchende Probe mit roten Blutkörperchen vom Schaf, welche mit Glutaraldehyd
vorbehandelt worden waren, absorbiert werden (0,1 ml sedi- ' mentierte rote Blutkörperchen vom Schaf auf 1 ml Ig-Konzentrat,
37°C, 60 min.).
Die Titrationen wurden mit dem System Microtiter (Sever J.L.,
J. Immunol., 1962, _88, 320 und Conrath T.B., Handbook of
Microtiter Procedures, 1972) durchgeführt, wobei Polystyrolplatten mit Kavitäten in Form eines V verwendet wurden.
Es wurde eine Verdunnungsreihe von jeweils 50 μΐ in einem
1/200 verdünnten normalem Serum vom Kaninchen hergestellt, worauf 25 μΐ sensibilisierte rote Blutkörperchen von Schaf
in einer Konzentration von 1 % zu jeder Verdünnung zugegeben wurden. Eine Verdunnungsreihe wurde mit nicht-sensibilisierten
roten Blutkörperchen vom Schaf versetzt zur Kontrolle auf nicht-spezifische Agglutination. Die Resultate wurden nach 2 st
abgelesen, wobei als Hamagglutionationstiter die letzte
Verdünnung verwendet wurde, die zu einer klaren positiven Reaktion führte.
* 809843/0647
Die für 5 E.coli Serotypen erhaltenen Resultate sind in der folgenden Tabelle angegeben :
E.coli Serotyp Agglutinationstiter
0 55 1/256
0 111 I/ 64
. 0 119 1/128
0 127 1/128
0 128 1/ .64
Kontrolle
Es wurde die bakteriostatische Aktivität auf das Wachstum verschiedener E.coli Serotypen durch Zusatz von Ig-Konzentrat
zum Kulturmedium studiert. Es wurde das Microtiter System, das für Kulturzwecke adaptiert worden war, verwendet, was es
gestattete, minimale Mengen der zu testenden Proben zu verwenden und gleichzeitig eine maximale Anzahl von Proben
zu untersuchen.
Jede Kulter hatte ein Endvolumen von 0,25 ml, entweder in einem Minimalmedium, das 1 % Glucose enthielt, oder in einem
reichen Kulturmedium. Für jeden untersuchten Wert der Inkubationszeit wurden zwei Proben entnommen, um das Fehlerrisiko
aufgrund von Veränderungen des Volumens zu verringern. Die Bestimmung erfolgte durch doppelte Zählung von 10 μΐ-'<Aliquots
auf Nähragarplatten. Das Bakterieninokulum bestand aus einer Verdünnung einer 16 st alten Kultur in Minimalmedium, das 1 bis 2 χ 10 Bakterien/ml enthielt. Die Inkuba-•tion
erfolgte in feuchter Atmosphäre bei 37 C. Das Ig-Konzentrat wurde vor der Inokulierung mit 2 χ 10 E.coli/ml entsprechend
einer Endkonzentration von 1 yg/ml, 10 ug/ml, 100 yg/ml
und 1 mg/ml dem Kulturmedium zugesetzt. Es wurde eine
809843/0647
Wachstumsinhibition von E.coli 0 111 : B4 während der ersten 4 st der Inkubation bei einer Konzentration des Ig-Konzentrats
von 10 yg/ml festgestellt. Im Vergleich zum Kontrollversuch, bei dem nur Kulturmedium verwendet wurde, wurde in Gegenwart
von 1 mg/ml Proteinen von normaler Molke, die von nicht-immunisierten Kühen erhalten worden war, ein noch stärkeres Wachstum
beobachtet.
Für jeden Versuch wurden 8 Mäuse (weisse männliche Swiss Mäuse mit 20 bis 24 g) verwendet, und zwar 2. zur Kontrolle und 6 für
3 Versuche, die jeweils doppelt durchgeführt wurden. Alle Mäuse erhielten eine subkutane Injektion von 0,1 ml Heparin
(500 ül/ml). Eine 16 st Kultur von E.coli 0 111 : B4 wurde
1/10 mit einer sterilen physiologischen Kochsalzlösung verdünnt und dann 1/100 verdünnt durch den Zusatz von 1/10 verdünntem
fetalem Kälberserum (Difco) für die Kontrollen und mit 3 ausgewählte Konzentrationen Ig-Konzentrat.0,2 ml der erhaltenen
Lösung -wurden- intravenös in die Schwanzvene injiziert, wobei
jede Maus (2 Mäuse für die Kontrollen und 2x3 Mäuse für die
Teste)etwa 2 χ 10 Bakterien erhielt, nachdem die ursprüngliche
Bakteriensuspension 10 Bakterien/ml enthielt. Unmittelbar nach der Injektion (Zeit t0) und nach 20, 40 und 60 min wurden 50 μΐ
Blut durch Punktion des Orbitalvenenplexus mit Hilfe einer kalibrierten und heparinisierten Kapillare entnommen. Unmittelbar
darauf wurden die Proben in 5 ml sterile physiologische Kochsalzlösung (Blutverdünnung 10 ) überführt, die dann auf
10 und 10 in physiologischer Kochsalzlösung weiter verdünnt wurden. Hierauf wurde mit 1 ml einer jeden Verdünnung eine
Zählung auf Agarplatten (Difco) durchgeführt, worauf der Phagocytose-Index K gemäss Biozzi et al. (Biozzi G., Stiffel, C,
Halpern B.N., Le Minor L., Mauton D., J. Immunol., 1961, £7,
296) bestimmt wurde :
log C1 - log C0
T-T
8098A3/8S471
C, und C„ entsprechen den Zählungen zu den Zeiten T1 und T„.
Dabei wurde eine normale Verringerung der Anzahl der Bakterien durch Elimination im Reticulo-Endothelial-System in Gegenwart
des fetalen Kälberserums beobachtet, während durch Zusatz von 10 yg Ig-Konzentrat zur Injektionslösung ein Verschwinden von
99,6 % der Bakterien aus der Blutprobe in 20 min hervorgerufen wurde.
Die Resultate sind in der folgenden Tabelle angegeben :
Zeit Bakterien in % der Anfangszahl zur Zeit (Minuten nach In- 0 nachfiintravenöser Injektion von
jektion von E.coli) 2 χ 10 E.coli 0 111 : B4
Kontrolle : 1:10 Versuche : Ig-Konzentrat fetales Kälber- 1000 yg 100 yg 10 yg
serum
20 40 60
Die Spezifizität der Opsonisation wurde durch erschöpfende Absorption
von Ig-Konzentrat mit dem E.coli Serotyp 0 111 : B4 kontrolliert, und es wurde festgestellt, dass diese Absorption praktisch
die gesamte Aktivität zur Erhöhung der Phagocytose aufhebt, sogar bei einer Menge von 1 mg Ig-Konzentrat.
In der folgenden Tabelle sind diese Phagocytose-Indizes K angegeben,
die in 20 min erhalten wurden :
Kontrolle 1000 yg nicht- 1000 yg absorbiertes 1:10 fetales absorbiertes Ig-Konzentrat
Kalbsserum Ig-Konzentrat
K . 0,015 0,128 0,039
100 | /8 | 100 | ,14 | 100 | ,22 | 100 | /4 |
27 | /5 | 0 | ,02 | 0 | ,02 | 0 | /12 |
15 | /0 | 0 | ,02 | 0 | ,02 | 0 | ,06 |
10 | 0 | 0 | 0 | ||||
809843/0647
Es wurden logarithmische (log10) Verdünnungen einer Kultur von
E.coli 0 111 : B4 in einem Nährmedium (Difco), das 10 Bakterien/
ml enthielt, in 5%igem Mucin (granuläres Mucin, Type 1701-W
zur Potenzierung der Virulenz der Bakterien, von den Wilson Laboratories, Chicago, Illinois) hergestellt, so dass Verdünnungen
von 10 ,10 , 10 und 10~ erhalten wurden.
Hierauf wurden 3 ml einer jeden Verdünnung mit 0,6 ir.l einer zu
testenden Lösung verdünnt, nämlich mit physiologischer Kochsalzlösung, Ig-Konzentrat-Lösung und Molkenproteinlösung von
normaler Milch (nicht-immunisierte Kühe). Es wurden 5 Mause für
jede Verdünnung verwendet. 0,6 ml des erhaltenen Gemischs wurden auf intraperitonealem Wege in die Mäuse injiziert.
Die Resultate der Bestimmung der Anzahl der toten Mäuse je 5 behandelte Mäuse nach 48 st sind in der folgenden Tabelle
angegeben.
Getestetes Material
Anzahl der toten Mäuse/ 5 behandelte Mäuse
Anzahl der verabreichten Bakterien
Physiologische Kochsalzlösung
10 μ + Ig-Konzentrat
25 V
Ig-Konzentrat
100 μ Ig-Konzentrat
10 Ji
normale Molkenproteine (nichtimmunisierte
Kühe)
25 ji
normale Molkenproteine
100 U
normale Molkenproteine
5 χ 10 5
5 5 0 5
5 x 10" 5
0 5
5 5
809843/064?
5 χ 10 5
5 O' 0 5
5. χ 10 5
Berechnet auf gesamte Proteine, welche 35-45 % Milch-Ig
enthielten.
Es wurde festgestellt, dass 100 μg Ig-Konzentrat einen kompletten
Schutz bei allen getesteten Bakterienzahlen ergaben, während 100 yg Molkenproteine, die aus der Milch von nicht-immunisierten
Kühen erhalten worden waren, keinerlei Schutz ergaben.
I. Eine erste klinische Versuchsreihe zeigte, dass die Milch-Ig einem proteolytischen Abbau in inaktive Bruchstücke
im Intestinaltrakt widerstehen.
11 Kinder (9 Knaben, 2 Mädchen), die aus verschiedenen Gründen im Krankenhaus waren, aber nicht an einer Gastroenteritis
litten, und deren Alter zwischen 2 Wochen und 1 Jahr lag, wurden mit Milch, die ein gemäss Beispiel 2 oder 4 hergestelltes
Ig-Konzentrat enthielt, ernährt, und zwar in einer isokalorischen Dosis entsprechend 2 g/kg Körpergewicht, gleichmässig
verteilt über 24 St. Die erste und letzte Mahlzeit unter Einschluss von Ig-Konzentrat wurde mit 0,2 g Karminrot markiert.
Es wurde vor der Verabreichung des Ig-Konzentrats mindestens
ein Stuhl und dann systematisch während 72 st jeder Stuhl gesammelt. Die Stühle wurde bei -20°C aufbewahrt.
Zur Herstellung von Stuhlextrakten wurden zunächst 2 Teile Stuhl mit 1 Teil einer phosphat-gepufferten Kochsalzlösung,
pH 7,2, versetzt, worauf der Stuhl bei 0 C mit einem Glasstab verrührt wurde. Dann wurde die Suspension 20 min mittels einer
Schüttelmaschine (400 U/min) bei Raumtemperatur geschüttelt. ■Schliesslich wurde die Suspension rasch auf 0 C abgekühlt
und bei dieser Temperatur bei 3500 g 15 min lang zentrifugiert. Hierauf wurde der Oberstand sorgfältig abgehoben.
* 809843/0647
Die Anwesenheit von aktiven Ig in den Stuhlextrakten wurde durch doppelte Immunodiffusion (Test nach Ouchterlony) and
durch Immunoelektrophorese bestätigt. Die bei diesen Tests verwendeten Antiseren wurden durch wiederholte subkutane
und intravenöse Injektion von 1 mg Milchantikörper oder 0,1 mg Ig G. in Kaninchen hergestellt. Beim Ouchterlony-Test wurden
Glasplatten (94 χ 84 mm) mit einer Schicht von l%igem Agar-Gel
in phosphat-gepufferte Kochsalzlösung pH 7,2 beschichtet. In diese Schicht wurden Löcher von 4 mm Durchmesser im Abstand
von 9,5 mm mit Hilfe einer Stanze (LKB-Produktor AE) ausgehoben. Es wurde ein Antiserum gegen die Molkenproteine aus Kuhkolostrum
und ein spezifisches monovalentes Antiserum gegen IgG, aus Kuhmilch verwendet.
Für die Immunoelektrophorese wurden Glasplatten (100 χ 85 mm)
mit 12 ml l%igem Agargel in 0,05 m Barbital-Puffer pH 8,3
(10,3 g Natriumbarbiturat + 0,5 g Citronensäure + 0,5 g
Oxalsäure auf 1 1 Wasser) beschichtet. Die Trennung durch Elektrophorese wurde bei Raumtemperatur während 90 min mit
4 V/cm durchgeführt. Nach Diffusion der Antisera (24 st)
wurden die Platten mit physiologischer Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und mit Azocarmin B entwickelt.
Es wurde die Anwesenheit von Milch-Ig in den Stühlen festgestellt,
trotz beträchtlicher Variationen des Zeitpunkts ihres Auftretens und der Dauer der Ig-Sekretion. Weiterhin wurde
eine gute Übereinstimmung zwischen dem Auftreten und Verschwinden der karminroten Markierung der der Ig festgestellt.
Zur Bestätigung der Aktivität der Milch-Ig wurde der in vivo-Serumschutztest an Mäusen (wie er in Beispiel 6
beschrieben ist) durchgeführt, wobei 6 Stuhlextrakte in jeder Reihe verwendet wurden. Die Resultate sind in der
folgenden Tabelle zusammengefasst :
' 809843/0647
Stuhlextrakte | I TT |
Intensität der Ig im Stuhlextrakt |
Anzahl toter 5 behandelte |
Mäuse/ Mäuse |
5x103 | 5x10 | 5x10 |
Xi IV |
phoretischer Prüfung | 5 C |
5 C |
5 C |
|||
V | Anzahl der verabreichten Bakterien |
3 1 |
D 0 |
0 | |||
Kind M.D. (2 Wochen) |
VI | 5x1O4 . | 0 | 0 | 0 | ||
TV | 5 | 1 | 0 | 0 | |||
XA I TTT |
+ + + + | 2 | C | •5 | . | ||
111 IV |
+ + + + | 0 | D 5 C |
J 5 C |
5 C |
||
VI | + + + | 1 | D 0 |
O 0 |
3 0 |
||
Kind S.G. (1 Monat) |
X | C | 0 | 0 | 0 | ||
. XI | O 5 A |
0 | 1 | 0 | |||
ft 0 |
2 | 0 | 0 | ||||
+ + + + | 0 | ||||||
+ + + + | 3 | ||||||
+ + | 5 | ||||||
Es wurde klar ein Zusammenhang zwischen den positiven Resultaten
der Immunoelektrophorese und dem Schutzvermögen der in den Stuhlextrakten enthaltenen Stoffe festgestellt. Insbesondere
konnte geschätzt werden, dass die Konzentrationen an Milch-Ig
im Extrakt V (Kind M.D.) und IV und VI (Kind S.G.) mindestens
1 mg Ig-Konzentrat/ml entsprachen.
■f II. In einer zweiten klinischen Versuchsreihe wurden die therapeutischen
und prophylaktischen Eigenschaften des gemäss Beispiel 2 oder 4 hergestellten Ig-Konzentrats untersucht.
Diese Studien wurden mit Kindern im Alter bis zu 5 Monaten durchgeführt, die an durch S.coli hervorgerufenen massigen
' 809843/0647
bis schweren Gastroenteritis litten. Bei verschiedenen Versuchsreihen wurden an insgesamt 152 Patienten entweder
2 g Ig-Konzentrat/kg/Tag 5 Tage lang oder Ig/kg/Tag 10 Tage
lang mit der Nahrung verabreicht. Die Patienten erhielten keinerlei Medikamente wie z.B. Sulfonamide oder Antibiotika, und
zwar weder oral noch parenteral. Es wurden Coprokultüren an
jedem auf die Verabreichung folgenden Tag angefertigt, und zwar die letzte zwischen 36 und 4 8 st nach der letzten Verabreichung
des Ig-Konzentrats. 43 Patienten wurden in der gleichen
Weise behandelt, wobei jedoch das Ig-Konzentrat durch Molkeproteine,
die von nicht-immunisierten Kühen stammten, ersetzt wurde.
Es wurden bei 90 Kindern (57,7 %) im Verlauf der Behandlung negative Coprokulturen erhalten. In der Kontrollserie haben
lediglich 14 Kinder (27,7 %) ein spontanes Verschwinden von E.coli in den Coprokulturen gezeigt. Es ist dabei zu berücksichtigen,
dass die nativen Proteine von Molke, die von nicht-immunisierten Kühen stammt, eine schwache Menge Anti-E.coli-Ig
enthalten. Es wurde weiterhin festgestellt, dass ein Misserfolg der Behandlung häufiger in Fällen beobachtet _
wurde, bei denen die höhere Dosis während einer kürzeren Zeit verabreicht wurde.
Die Konsistenz der Stühle wurde in jedem Fall untersucht. Es wurde ein Verschwinden der Diarrhöe und eine merkliche
klinische Besserung in einer grossen Anzahl der Fälle beobachtet, auch wenn die Coprokulturen positiv blieben.
In den Fällen, in denen die Coprokulturen negativ geworden waren, besserte sich die Konsistenz der Stühle rascher, wenn
das Ig-Konzentrat in einer Milchformel,die arm an Lactose
war, verabreicht wurde.
809843/0647
Frühgeburten sind gegenüber einer durch E.coli verursachten Gastroenteritis äusserst empfindlich, weshalb diese Gruppe
für die prophylaktischen klinischen Versuche ausgewählt wurde.
Diese Studie wurde während 6 Monaten in 2 Sälen mit 8 Inkubatoren in jedem Saal durchgeführt. Die Testversuche und
Kontrollversuche wurden in jedem Saal so verteilt, dass alle
Patienten den gleichen Bedingungen ausgesetzt wurden, wobei 4 Inkubatoren für den Test und 4 für die Kontrolle dienten.
Jeder Fall blieb im Mittel 41 Tage, wobei ein nach der Heilung weggenommenes Kind durch ein anderes ersetzt wurde, unabhängig
davon, ob es der Test oder Kontrollgruppe- angehörte. Es wurden 70 Fälle verfolgt, 36 Kontrollen und 34 Tests.
Die Testgruppe erhielt das Ig-Konzentrat mit jeder Mahlzeit
in einer Menge von 0,25 g/kg/Tag über 24 st verteilt. Eine Coprokultur wurde zu Beginn des Versuchs gemacht und
weitere Coprokultüren wurden alle 5 Tage untersucht. Von
insgesamt 666 Coprokultüren gehörten 339 zur Kontrollgruppe und 327 zur Testgruppe. Unter den letzteren zeigten 33 (10,1 %)
die Anwesenheit von E.coli, während 96 der 339 Kontrollkulturen (28,3 %) positiv v/aren. Wenn lediglich der E.coli Serotyp
0 119 : B14 untersucht wurde, der häufig mit schwerer verlaufenden Formen der Gastroenteritis verbunden ist, dann war die
Häufigkeit der positiven Coprokulturen 5,5 % in der Testgruppe gegenüber 23,3 % in der Kontrollgruppe.
-, .Es kann also geschlossen werden, dass der Einbau eines
Proteinkonzentrats, das gegen E.coli spezifische Milch-Ig
enthält, in die Milch für Frühgeburten, in deutlicher Weise die Infektion durch E.coli innerhalb dieser besonders empfindlichen
Gruppe von Neugeborenen verringert.
809843/0647
1 .
Leerseite
Claims (14)
1. Verfahren zur Herstellung eines Proteinkonzentrats, welches immunologische Faktoren der Milch, insbesondere
aktive nicht-denaturierte Immunoglobuline, enthält, dadurch gekennzeichnet, dass man Milch von hyperimmunisierten
weiblichen Milchtieren gewinnt, von dieser Milch Rahm und Verunreinigungen abtrennt, die geklärte und entrahmte
Milch koaguliert, das Kasein abtrennt, die Molke filtriert and ultrafiltriert, durch Filtration die Proteine der Melke
sterilisiert und das Produkt unter Bedingungen eindampft und trocknet, unter denen die Immunoglobuline nicht denaturiert
werden und ihre Sterilität bewahrt bleibt.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass eine Milch von durch Vakzinierung hyperimmunisierter
Kühen verwendet wird, die sich wie folgt zusammensetzt :
- Kolostralmilch des i. und 2. Tages • nach dem Kalben,
- Übergangsmilch des 3. bis 8. Tages nach dem Kalben und
- Milch der letzten 60 Tage vor dem Ende der Laktation.
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Vakzinierungsschema für die Kokostralmilch und die
Obergangsmilch eine Reihe von aufeinanderfolgenden Antigenverabreichungen auf parenteralem und lokalem Weg ungefähr
von der 8. bis zur 2. Woche vor dem Kaiben und auf
. oralem Weg während ungefähr der beiden Wochen vor dem Kalben umfasst und für die Milch am Ende der Laktation
eine Reihe von aufeinanderfolgenden Antigenverabreichungen während ungefähr der letzten 2\ Monate vor dem vermuteten
Ende der Milchsekretion mit Alternlerung zwischen parenteralem,
lokalem und oralem Verabreichungsweg umfasst.
809843/084?
ORIGINAL INSPECTED
4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Vakzine aus Antigenen von Escherichia coli besteht,
welche für die Gastroenteritis bei Neugeborenen verantwortlich sind.
5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Koagulation durch Zusatz von Salzsäure bis zu einem pH
von ungefähr 4,6 und durch Erwärmen bis auf 40 C erfolgt.
6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass zur Vermeidung einer nachfolgenden Verstopfung der Filter
und Ultrafilter die Entrahmung in zwei Stufen, nämlich
in der Kälte und dann in der Wärme erfolgt und dass die
Entrahmung und die Abtrennung des Kaseins von einer
weitgehenden Klärung begleitet ist.
weitgehenden Klärung begleitet ist.
7. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass
die Ultrafiltration der Molke in drei Stufen erfolgt,
• nämlich durch die Ultrafiltration selbst, durch eine
Diafiltration und durch eine Vorkonzentration.
Diafiltration und durch eine Vorkonzentration.
8. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass__
die vorkonzentrierten Moikenproteine einer Vorfiitration
und dann einer Sterilisationsfiltration unterworfen werden.
9. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Eindampfen der vorkonzentrierten und sterilisierten
Molkenproteine in einem geschlossenen Kreislauf unter
sterilen Bedingungen erfolgt.
sterilen Bedingungen erfolgt.
10. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass
das konzentrierte Produkt durch Gefrieren und anschliessende Lyophilisation getrocknet und dann steril konditioniert
wird.
809843/0647
BAD ORIGINAL
11. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass
zum Zwecke der Rückgewinnung der während der Entrahmung und der Separierung des Kaseins verloren gegangenen
Immunoglobuline der Rahm und das Kasein mit Wasser
extrahiert werden und die Waschwasser wieder mit der entrahmten Milch bzw. der Molke vereinigt werden.
12. Produkt mit angereicherten r aktiven, nicht denaturierten
Immunoglobulinen, das nach den Verfahren gexäss den
Ansprüchen 1 bis 11 hergestellt wird.
13. Anwendung des Produktes nach Anspruch 12 als ein Heilmittel gegen Gastrcenteritiden, die bei Neugeborenen
durch E.coli ausgelöst werden.
14. Anwendung nach Anspruch 13 in Gegenwart eines Trägermaterials,
insbesondere eines Milchpulvers^oder rekonstituierter Milch.
309843/064?
BAD ORIGINAL
BAD ORIGINAL
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CH467977A CH627079A5 (en) | 1977-04-15 | 1977-04-15 | Process for preparing a protein concentrate containing immunological factors of milk origin |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE2813984A1 true DE2813984A1 (de) | 1978-10-26 |
DE2813984C2 DE2813984C2 (de) | 1987-11-26 |
Family
ID=4280585
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19782813984 Granted DE2813984A1 (de) | 1977-04-15 | 1978-03-31 | Verfahren zur herstellung eines proteinkonzentrats, welches immunologische faktoren der milch enthaelt |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS53130411A (de) |
AR (1) | AR218482A1 (de) |
AU (1) | AU519091B2 (de) |
CA (1) | CA1101333A (de) |
CH (1) | CH627079A5 (de) |
DE (1) | DE2813984A1 (de) |
DK (1) | DK153521C (de) |
ES (1) | ES468808A1 (de) |
FR (1) | FR2387039A1 (de) |
GB (1) | GB1573995A (de) |
GR (1) | GR64433B (de) |
IT (1) | IT1156193B (de) |
MX (1) | MX5007E (de) |
MY (1) | MY8100294A (de) |
NL (1) | NL187516C (de) |
OA (1) | OA05938A (de) |
PH (2) | PH14031A (de) |
SE (1) | SE448062B (de) |
ZA (1) | ZA781607B (de) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2904044A1 (de) * | 1978-02-06 | 1979-08-30 | Stolle Res & Dev | Verfahren zur behandlung von autoimmunleiden und antikoerper |
DE3432718C1 (de) * | 1984-09-06 | 1986-05-22 | Biotest Pharma GmbH, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung einer Loesung von Milch- und/oder Kolostralimmunglobulinen |
DE4026365A1 (de) * | 1990-08-21 | 1992-02-27 | Biotest Pharma Gmbh | Sterilfiltrierte kolostralmilch |
EP0859552A1 (de) * | 1995-11-08 | 1998-08-26 | Northfield Laboratories Pty. Ltd. | Flüssig-kolostrum für milchprodukte |
Families Citing this family (33)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2460135A1 (fr) * | 1979-07-02 | 1981-01-23 | Liotet Serge | Composition a usage externe a base de colostrum |
EP0064103B1 (de) * | 1981-04-28 | 1985-11-06 | The Stolle Research And Development Corporation | Verfahren zur Herstellung einer entzündungshemmenden Rindermilch |
JP2561234B2 (ja) * | 1981-05-12 | 1996-12-04 | スト−ル・リサ−チ・アンド・デイベロップメント・コ−ポレ−ション | 抗炎症剤 |
JPS58154513A (ja) * | 1982-03-09 | 1983-09-14 | Sendai Biseibutsu Kenkyusho | 予防及び治療薬 |
ZA836349B (en) * | 1982-09-02 | 1985-04-24 | Unilever Plc | Production of antibodies |
JPS6112629A (ja) * | 1984-06-28 | 1986-01-21 | Lion Corp | 口腔内組成物 |
US4834974A (en) * | 1986-01-13 | 1989-05-30 | Protein Technologies, Inc. | Immunologically active whey fraction and recovery process |
US4816252A (en) * | 1985-04-15 | 1989-03-28 | Protein Technology, Inc. | Product and process for transferring passive immunity to newborn domestic animals using ultrafiltered whey containing immunoglobulins |
GB8729031D0 (en) * | 1987-12-11 | 1988-01-27 | Express Foods Group Ltd | Isolation of immunoglobulin rich fraction from whey |
US5258178A (en) * | 1990-07-30 | 1993-11-02 | Abbott Laboratories | Method and product for the treatment of gastric disease |
IE76730B1 (en) * | 1990-07-30 | 1997-11-05 | Abbott Laboraties | Method and product for the treatment of gastric disease |
JPH04169539A (ja) * | 1990-11-01 | 1992-06-17 | Imuno Japan:Kk | 消化器疾患治療・予防剤およびその製造方法 |
US5645834A (en) * | 1992-08-28 | 1997-07-08 | Immuno-Dynamics, Inc. | Method and product for treating failure of passive transfer and improving milk production in bovine species |
US5780028A (en) * | 1993-09-20 | 1998-07-14 | Anadis Ltd. | Method of obtaining immunoglobulins from colostrum and their use in pharmaceutical composition |
FI97269B (fi) * | 1993-10-12 | 1996-08-15 | Viable Bioproducts Ltd | Menetelmä ravintojuoman valmistamiseksi |
ZA949789B (en) * | 1993-12-30 | 1995-10-25 | Immunotec Res Corp Ltd | Process for making undenatured whey protein concentrate |
US5670196A (en) * | 1995-04-12 | 1997-09-23 | Galagen Inc. | Method for microfiltration of milk or colostral whey |
US5707678A (en) * | 1995-04-12 | 1998-01-13 | Galagen Inc. | Method for microfiltration of milk or colostral whey |
CA2165937A1 (en) * | 1995-05-09 | 1996-11-10 | Immunotec Research Corporation Ltd. | Process for producing an undenatured whey protein concentrate |
US5772999A (en) * | 1996-07-30 | 1998-06-30 | Dcv Biologics, L.P. | Method of preventing, countering, or reducing NSAID-induced gastrointestinal damage by administering milk or egg products from hyperimmunized animals |
DE69834490T2 (de) | 1997-05-29 | 2007-03-01 | Agresearch Ltd. | Verfahren zur herstellung von immunoglobulin a in milch |
IE970541A1 (en) † | 1997-07-25 | 1999-01-27 | Michael Anthony Folan | Maternal immune secretions and their use in the treatment and/or prophylaxis of the buccal cavity |
FI110752B (fi) | 1999-05-25 | 2003-03-31 | Novatreat Oy | Menetelmä ternimaidon käsittelemiseksi |
SE0003045D0 (sv) * | 2000-08-29 | 2000-08-29 | Probi Ab | New method |
PT2347654T (pt) | 2001-09-17 | 2019-05-30 | Elanco Us Inc | Formulação para o controlo de piolhos ou carrapatos em bovinos |
DE10158009A1 (de) * | 2001-11-21 | 2003-05-28 | Begerow E Gmbh & Co | Verfahren zur Reduzierung der Gesamtkeimzahl in wäßrigen Dispersionen |
ES2286558T5 (es) | 2004-08-24 | 2013-10-15 | N.V. Nutricia | Composición nutritiva que comprende transgalactooligosacáridos indigeribles y sacáridos de galactosa digeribles |
NL1033696C2 (nl) * | 2007-04-16 | 2008-10-20 | Friesland Brands Bv | Aan melk ontleende antigeen-specifieke antilichamen, werkwijzen voor het bereiden en gebruik ervan. |
WO2009092383A2 (en) | 2008-01-22 | 2009-07-30 | Multimerics Aps | Products and methods to prevent infection |
JP5762951B2 (ja) * | 2008-05-15 | 2015-08-12 | ダブリュ.・ヘルス・エル.ピー.W. Health L.P. | 分泌性免疫グロブリンの豊富な乳画分の製造方法 |
CA2760096C (en) * | 2009-04-27 | 2018-10-30 | Immuron Limited | Anti-lps enriched immunoglobulin preparation for use in treatment and/or prophylaxis of a pathologic disorder. |
US9943597B2 (en) | 2010-08-17 | 2018-04-17 | Immuron Limited | Anti-LPS enriched immunoglobulin preparation for use in treatment and/or prophylaxis of a pathologic disorder |
US10278404B2 (en) * | 2012-09-11 | 2019-05-07 | Al-Urdonia Lemudaddat Al-Ajsam Co | Immunized camel milk-based composition for the treatment or prevention of gastrointestinal infections |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE1022356B (de) * | 1955-04-07 | 1958-01-09 | Berry Campbell | Verfahren zur Herstellung eines spezifischen Schutzstoffes gegen ein Antigen |
DE2047139A1 (de) * | 1969-09-24 | 1971-04-15 | Miles Laboratories Ine , Elkhart, Ind (V St A) | Verfahren zur Gewinnung von Lactose und Protein aus Kasemolke |
DE2243189A1 (de) * | 1971-09-01 | 1973-03-15 | Coca Cola Co | Verfahren zur behandlung von molkeprotein |
US3911108A (en) * | 1973-02-14 | 1975-10-07 | Diamond Shamrock Corp | Process of producing bovine milk products containing specific antibodies |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BE546837A (de) * | ||||
DK87610C (da) * | 1955-04-07 | 1959-07-27 | Berry Campbell | Fremgangsmåde til fremstilling af specifikke beskyttelsesstoffer mod antigene stoffer. |
FR1599671A (de) * | 1966-06-27 | 1970-07-20 | ||
GB1211876A (en) * | 1967-11-23 | 1970-11-11 | Twyford Lab Ltd | Improvements in and relating to prophylactic and therapeutic preparations |
US3930039A (en) * | 1971-07-30 | 1975-12-30 | Molkerei J A Meggle Milchindus | Method of preparing a protein concentrate from whey |
-
1977
- 1977-04-15 CH CH467977A patent/CH627079A5/fr not_active IP Right Cessation
-
1978
- 1978-03-20 ZA ZA00781607A patent/ZA781607B/xx unknown
- 1978-03-21 GB GB11106/78A patent/GB1573995A/en not_active Expired
- 1978-03-22 DK DK131078A patent/DK153521C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-03-24 FR FR7808705A patent/FR2387039A1/fr active Granted
- 1978-03-31 DE DE19782813984 patent/DE2813984A1/de active Granted
- 1978-04-03 MX MX786992U patent/MX5007E/es unknown
- 1978-04-06 AR AR271715A patent/AR218482A1/es active
- 1978-04-10 AU AU34903/78A patent/AU519091B2/en not_active Expired
- 1978-04-10 CA CA300,770A patent/CA1101333A/fr not_active Expired
- 1978-04-11 PH PH20991A patent/PH14031A/en unknown
- 1978-04-13 SE SE7804190A patent/SE448062B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-04-14 OA OA56468A patent/OA05938A/xx unknown
- 1978-04-14 ES ES468808A patent/ES468808A1/es not_active Expired
- 1978-04-14 GR GR55978A patent/GR64433B/el unknown
- 1978-04-14 IT IT48896/78A patent/IT1156193B/it active
- 1978-04-14 NL NLAANVRAGE7804015,A patent/NL187516C/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-04-14 JP JP4409378A patent/JPS53130411A/ja active Granted
-
1979
- 1979-01-29 PH PH22133A patent/PH17782A/en unknown
-
1981
- 1981-12-30 MY MY294/81A patent/MY8100294A/xx unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE1022356B (de) * | 1955-04-07 | 1958-01-09 | Berry Campbell | Verfahren zur Herstellung eines spezifischen Schutzstoffes gegen ein Antigen |
DE2047139A1 (de) * | 1969-09-24 | 1971-04-15 | Miles Laboratories Ine , Elkhart, Ind (V St A) | Verfahren zur Gewinnung von Lactose und Protein aus Kasemolke |
DE2243189A1 (de) * | 1971-09-01 | 1973-03-15 | Coca Cola Co | Verfahren zur behandlung von molkeprotein |
US3911108A (en) * | 1973-02-14 | 1975-10-07 | Diamond Shamrock Corp | Process of producing bovine milk products containing specific antibodies |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Lebensmittelindustrie 1978, S. 261-266 * |
Verfahrenstechnik 1976, S. 25-29 * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2904044A1 (de) * | 1978-02-06 | 1979-08-30 | Stolle Res & Dev | Verfahren zur behandlung von autoimmunleiden und antikoerper |
DE3432718C1 (de) * | 1984-09-06 | 1986-05-22 | Biotest Pharma GmbH, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung einer Loesung von Milch- und/oder Kolostralimmunglobulinen |
US4644056A (en) * | 1984-09-06 | 1987-02-17 | Biotest Pharma Gmbh | Method of preparing a solution of lactic or colostric immunoglobulins or both and use thereof |
DE4026365A1 (de) * | 1990-08-21 | 1992-02-27 | Biotest Pharma Gmbh | Sterilfiltrierte kolostralmilch |
US5147548A (en) * | 1990-08-21 | 1992-09-15 | Biotest Pharma Gmbh | Colostrum filtered sterile |
EP0859552A1 (de) * | 1995-11-08 | 1998-08-26 | Northfield Laboratories Pty. Ltd. | Flüssig-kolostrum für milchprodukte |
EP0859552A4 (de) * | 1995-11-08 | 1999-04-28 | Northfield Lab Pty Ltd | Flüssig-kolostrum für milchprodukte |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NL187516B (nl) | 1991-06-03 |
CH627079A5 (en) | 1981-12-31 |
FR2387039B1 (de) | 1981-07-24 |
JPS6340771B2 (de) | 1988-08-12 |
SE448062B (sv) | 1987-01-19 |
MX5007E (es) | 1983-02-14 |
ES468808A1 (es) | 1978-12-01 |
PH17782A (en) | 1984-12-11 |
AR218482A1 (es) | 1980-06-13 |
NL7804015A (nl) | 1978-10-17 |
MY8100294A (en) | 1981-12-31 |
DK153521B (da) | 1988-07-25 |
DK131078A (da) | 1978-10-16 |
IT1156193B (it) | 1987-01-28 |
AU3490378A (en) | 1979-10-18 |
DE2813984C2 (de) | 1987-11-26 |
JPS53130411A (en) | 1978-11-14 |
ZA781607B (en) | 1979-03-28 |
CA1101333A (fr) | 1981-05-19 |
DK153521C (da) | 1988-12-05 |
FR2387039A1 (fr) | 1978-11-10 |
OA05938A (fr) | 1981-06-30 |
GR64433B (en) | 1980-03-21 |
AU519091B2 (en) | 1981-11-05 |
IT7848896A0 (it) | 1978-04-14 |
SE7804190L (sv) | 1978-10-16 |
GB1573995A (en) | 1980-09-03 |
NL187516C (nl) | 1991-11-01 |
PH14031A (en) | 1980-12-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE2813984C2 (de) | ||
DE60004325T2 (de) | Hypoallergene zubereitung enthaltend tolerogene petide, zur induzierung oraler toleranz | |
AU596632B2 (en) | Immunologically active whey fraction and recovery process | |
CN1052615C (zh) | 乳品组合物的制备方法 | |
US4784850A (en) | Process for preparing antibodies against E. Coli K-99 antigen from bovine milk | |
DE69625477T2 (de) | Verfahren zur mikrofiltration von milch,molke,kolostrum oder kolostrum-molke | |
US3984539A (en) | Bovine immunoglobulin isolation process | |
EP0531142B1 (de) | Hypoallergenische Milchprodukte aus natürlichen und/oder synthetischen Komponenten und Verfahren zur Herstellung derselben | |
US4816252A (en) | Product and process for transferring passive immunity to newborn domestic animals using ultrafiltered whey containing immunoglobulins | |
DE69834490T2 (de) | Verfahren zur herstellung von immunoglobulin a in milch | |
CN102124027A (zh) | 产生富含分泌型免疫球蛋白的乳组分的方法 | |
EP0338229A1 (de) | Präparat mit Antikörperaktivität und breitem Wirkungsspektrum, daraus bestehende oder diese enthaltende Mittel und deren Verwendung zur Behandlung von bakteriell oder toxin-bedingten Erkrankungen und zur Bekämpfung von Protozoen | |
DE1810438A1 (de) | Prophylaktisches oder therapeutisches Praeparat | |
JPH04169539A (ja) | 消化器疾患治療・予防剤およびその製造方法 | |
EP0457370A1 (de) | Verfahren zur Pasteurisierung des Gewebeproteins PP4 | |
Ratner et al. | Anaphylactogenic properties of milk: Immunochemistry of the purified proteins and antigenic changes resulting from heat and acidification | |
DE69919302T2 (de) | Immunomodulator enthaltend bakterielle Zellen oder Abbauprodukte ihrer Zellwände | |
US6251459B1 (en) | Dairy product and method | |
WO2003030918A1 (en) | Pharmaceutical product or food supplement and intermediate product to be used therewith | |
RU2713275C1 (ru) | Способ производства сывороточного изолята для изготовления адаптированных молочных смесей и заменителей грудного молока | |
CN109010367A (zh) | 牛初乳粉及其制备方法、制剂和在制备治疗肿瘤药物中的应用 | |
EP0814668A1 (de) | Verfahren zur herstellung von frühgeborenen-, säuglings- und diätnahrungen | |
RU2738745C1 (ru) | Бактериологически чистый протеиновый продукт с повышенным содержанием минорных белков | |
EP0396597A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines therapeutisch aktiven, insbesondere zur wundheilung oder zur behandlung in der geriatrie verwendbaren wirkstoffes und ein einen solchen wirkstoff enthaltendes therapeutisches präparat | |
DE2001671C3 (de) | Plyvalentes Mastits-Immunglobulin und dessen Verwendung bei der Bekämpfung der Mastits |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8110 | Request for examination paragraph 44 | ||
D2 | Grant after examination | ||
8364 | No opposition during term of opposition |