DE2810279A1

DE2810279A1 - Verfahren zur herstellung hochviskoser saurer polysaccharide und diese enthaltende mittel

Info

Publication number: DE2810279A1
Application number: DE19782810279
Authority: DE
Inventors: Norio Matsumoto; Hiroo Sasaki; Masaki Tamura
Original assignee: Unilever Bestfoods North America
Current assignee: Unilever Bestfoods North America
Priority date: 1977-03-09
Filing date: 1978-03-09
Publication date: 1978-09-21
Also published as: ES467652A1; GB1557755A; FR2383231B1; IT7821058A0; YU56378A; NL7802573A; FR2383231A1; YU41585B; DE2810279C2; JPS5646400B2; BE864687A; IT1093755B; JPS53113090A

Description

Verfahren zur Herstellung hochviskoser saurer Polysaccharide und diese enthaltende Mittel

Die Erfindung "bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung hochviskoser saurer Polysaccharide und diese enthaltende Mittel.

Erfindungsgemäß wird ein neu aus dem Boden isolierter Mikroorganismus, Bacillus lentus, isoliert und in einem Kulturmedium gezüchtet, das verschiedene Kohlenhydrate als Kohlenstoffquelle enthält; dann wird die Bildung hochviskoser Polysaccharide in der Kulturflüssigkeit ausgelöst, wobei es das Ziel ist, saure Polysaccharide aus billigen Ausgangsmaterialien nach einem industriell anwendbaren Verfahren, leicht und mit hoher Ausbeute und von überlegener Beständigkeit gegenüber Säure, Alkali und Wärme zu bilden«

Polysaccharid ist zusammen mit Nukleinsäure-Protein und Lipiden ein Bestandteil, der eine lebenswichtige Funktion in einer Familie/Serie lebender Hochpolymerkörper erfüllt. Dank ihrer Eigenschaften wie Haftung und Klebrigkeit besitzen viskose Polysaccharide eine breite Anwendbarkeit

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und werden auf vielen Gebieten verwendet, wie als Zusätze für Nahrungsmittel und Kosmetika, Schlichtmittel, Gefrierstabilisatoren, Suspendierhilfsmittel, Schmier- oder Gleitmittel, beim Suspensionsabbau von Mineralien, als Bohrschlammzusätze, bei der Ölgewinnung auf Ölfeidern. Auf dem medizinischen Bereich ist eine breite Verwendung bekannt als Folge der Erkenntnis der pharmakologischen Wirkung einiger Polysaccharide gegen Tumore und gegen Blutdruck in den letzten Jahren,

Herkömmlicherweise liegt die Bezugsquelle für solche Polysaccharide in der Flora und Fauna, so daß der Produktionsnachschub nicht konstant war und die Qualität stark schwankte. Daher wurde nach einer leicht steuerbaren Quelle bei Mikroorganismen gesucht, die eine große Zahl von Polysacchariden zu bilden vermögen.

Mit diesem Hintergrund wurden breit angelegte analytische Untersuchungen von Mikroorganismen der ganzen Erde vorgenommen, um Bakterien zu erhalten, die in der Lage sind, hochviskose Polysaccharide aus Saccharid-Ausgangsmaterialien zu erzeugen. So wurde gefunden, daß der zur Gattung Bacillus gehörende Bacillus lentus D-228 viskose saure Polysaccharide hoher Viskosität bei geringen Dichten bildet.

Seine bakteriologischen Eigenschaften sind:

I. Morphologische Eigenschaften

1) Gestalt vegitativer Zellen: Stäbchen (0,6-0,8 μΐη χ

1,2-3,0 μπι) , keine Bildung von Kettenzellen.

2) Sporen und Sporangien: Endosporen, elliptisch (0,7-

0,9 μπι χ 1,2-3,0 μπι), Position zentral oder vorne. Sporangium nicht merklich aufgeweitet.

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3) Motilität: liegt vor

4) Flagella: Oberflächenhaare

5) Gram-Stairan: positiv

6) Säurebeständigkeit: negativ

II. Kultureigenschaften

1) Agarbrühe-Schräg-

kultur: geringes Wachstum

2) Glucose-Agarbrühe-

Schrägkultur: mäßiges Wachstum jedoch

Bildung viskoser Polysaccharide in großer Menge

3) Glucose-Casaminosäuren-

Schrägkultur: Wachstum schwächer als mä

ßig; etwas Bildung viskoser Polysaccharide

4) Glucose-, Proteose-, Pepton-,

Agar-Schrägkultur: Wachstum geringer als mäßig;

etwas Bildung viskoser Polysaccharide.

III. Physiologische Eigenschaften

1) Gelatineverflüssigung:

2) Hydrolyse von Casein:

3) Indolbildung:

4) Ammoniakbildung (Pepton/ Wasser- und Sonley's Argininhalbfest-Kulturmedium):

5) Hydrogensulfid-Bildung (Cystein, Pepton-Kulturmedium und Kligler·s Eisen-Agar-Kulturmedium):

6) Urease: +

7) Reduktion von Nitraten: sehr gering

8) Lackmus-Milchkultur: keine Änderung

9) Stärkehydrolyse: +

10) Bildung von Kohlendioxid

(Glucose) ϊ - ORlGIMAL INSPECTED

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11) Methylrot-Test:

12) Voges-Proskauer-Test

(Ac e tyl-me thylc arbinol-Bildung):

13) Zitronensäure-Verbrauch:

14) Katalase:

15) Qxydase:

16) Phenylalanin-De s aminas e:

17) Ornithin-Decarböxylase:

18) Lysin-Decarboxylase:

19) Bildung von Fluoreszenzfarbstoff:

20) Denitrierung von

Nitrat

21) Bildung von Polysacchariden:

22) Salzbeständigkeit:

G-lucosebrühe-Kulturmedium ohne NaCl:

1-3 % NaCl-Zusatz zum Kulturmedium:

5 % NaCl-Zusatz zum Kulturmedium:

23) Wachstumsbedingungen: Temperatur- ^Ar~ ⁱⁿ⁰ bildet große Mengen viskoser Polysaccharide aus verschiedenen Kohlenhydraten, wie Glucose, Maltose, Dextrin, hydrolysierten Stärken, verschiedenen stärkeartigen Ausgangsmaterialien, Saccharose usw.

geringfügiges Wachstum gutes Wachstum kein Wachstum

15-40 C Wachstumsbereich 25-35°C optimal

45 C kein Wachstum pH: 6-8 Wachstumsbereich 6,5-7,5 optimal

aerob günstig

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24) Zucker-Verwertung

	Zersetzung	Fermentation	-	lisation
Kohlenstoffquelle	Oxydation	Säure Gas
	Säure Gas	-		-
Glycerin	-	-	+
Xylose	gering		+
Saccharose	gering	-	+
Glucose	gering	-	+
Lactose	gering	-	+
Stärke	gering	-	+
Fructose	-	-	+
Galactose	gering	-	+
Mannose	-	-	+
Arabinose	gering	-	+
Maltose	gering	-
Mannit	-
Sorbit

Die obigen Eigenschaften vnirden auf der Grundlage von "Laboratory Methods in Microbiology", W.F. Harrigan et al. und des "Manual of Microbiological Method", American Microbiological Society, geprüft. Nach einer Durchsicht des "Bergey's. Manual of Determinative Bacteriology" 7. Auflage (1957), 8. Auflage (1974) nach Bakterien mit diesen Eigenschaften wurde auf der Grundlage der nachfolgend aufgeführten Informationen bestimmt, daß dieses Bakterium Bacillus lentus ist und D-228 als "Bacillus lentus D-228" bezeichnet wird.

1. Bildet Endosporen.

2. Die Sporen sind oval, liegen zentral oder vorne in Kulturzellen.

3. Sporangium nicht erkennbar ausgedehnt oder aufgebläht.

4. Gram-positiv.

5. Hydrolysiert Stärke, jedoch keine Reduktion von Kasein

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— ο —

oder Verflüssigung von Gelatine festgestellt.

6. Bildet Urease.

7. Wächst nicht in Kulturmedium mit 5 % NaCl-Zusatz.

8. Wächst nicht bei 45⁰C.

Dieses Bakterium ist beim Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, unter Nr. 3337 registriert.

Es liegen keine Berichte darüber vor, daß dieses Bakterium viskose Saccharide erzeugt, und insbesondere darüber, daß in einem vergleichsweise einfachen Kulturmedium mit stärke als Ausgangsmaterial dieses Bakterium große Mengen hochviskoser Polysaccharide anhäuft, die hinsichtlich ihrer Beständigkeit gegenüber Säure und Wärme überlegen sind, d.h., eine völlig neue Erkenntnis.

Die Erfindung beruht auf der Grundlage der vorstehenden Erkenntnis und liegt in einem Verfahren zur Herstellung hochviskoser saurer Polysaccharide und zeichnet sich dadurch aus, daß aus Kulturen von Bacillus lentus, das beim Züchten in Kulturmedium hochviskose saure Polysaccharide zu erzeugen vermag, hinsichtlich der Beständigkeit gegenüber Säure, Alkali und Wärme überlegene saure Polysaccharide isoliert werden, wobei die Hauptbestandteile Glucose, Galactose, Mannose und Glueuronsäure sind.

Erfindungsgemäß verwendbare Bakterien sind nicht auf Bacillus lentus D-228 beschränkt; es können alle Bacillus lentus-MikrοOrganismen verwendet werden, die das gewünschte Polysaccharid zu erzeugen vermögen.

Als im erfindungsgemäßen Kulturmedium verwendete Kohlenstoff quelle sind Glucose, Saccharose, Maltose, Stärke-Saccharide und alle Arten von Stärke wirksame Ausgangsmaterialien, und Dextrin liefert besonders gute Ausbeuten. Als Stickstoffquelle sind Maisquellwasser, Pepton und Hefeextrakt, Profro/Pleischsaftextrakt usw. für die Erzeugung

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-D-

von hochviskosen Polysacchariden äußerst wirksam, und Art und Dichte können je nach der verwendeten Kohlenstoffquelle variiert werden. Wirksame anorganische Salze sind Phosphate, Magnesium-, Calcium-, Eisensalze usw., die die PoIysaccharid-Erzeugungund -Viskosität verstärken.

Günstige Kulturbedingungen für diese Bakterien sind Temperaturen von 20-40, vorzugsweise 23-5O⁰C, ein Anfangs-pH des Kulturmediums von 5-8, vorzugsweise 7-7»5, Schüttelkultur oder Kultur durch. Zugbewegung. Nach 24 η stellt man das Schäumphänomen der Kulturflüssigkeit fest, und mit weiterer Kulturdauer beginnt die Produktion von Polysacchariden. Nach 60-90 h geliert die Kulturflüssigkeit und erreicht einen maximalen Viskositätswert. Mit weiterem Züchten fällt der pH der Kulturflüssigkeit, bis schließlich bei 5,2-5»4 die Kultur endet, um Polysaccharid maximaler Viskosität mit den überlegensten Eigenschaften zu ergeben. Ferner ist die Menge an Organismen viel kleiner als bei anderen Polysaccharid erzeugenden Bakterien. Die Isolierung der Polysaccharide aus der Kulturflüssigkeit kann nach bekannten Methoden erfolgen. Beispielsweise werden nach dem Verdünnen der Flüssigkeit mit einer geeigneten Menge Wasser die Organismen und unlösliches Material abzentrifugiert, und nach Zusatz von 1-2%Kaliumchlorid zu der überstehenden Flüssigkeit werden die Polysaccharide durch Zusatz von Methanol, Äthanol oder Aceton als Fällungsmittel ausgefällt, gewaschen und mit Aceton entwässert und zu einer faserigen Masse vakuumgetrocknet. Die Ausbeute beträgt 85-95 % des Saccharid-Ausgangsmaterials.

Das nach diesem Verfahren erhaltene rohe, viskose Polysaccharid wird erneut gelöst, wärmebehandelt, zum Entfernen einer kleinen Menge an Organismen und unlöslichem Material zentrifugiert, wiederholt mit Aceton oder so ausgefällt, daß hochreine, weiße, fadenförmige, raffinierte, viskose Polysaccharide anfallen. Auch durch Fällung mit Cetyl-tri-

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- ίο -

methylammoniumhydroxid (CTA-Behandlung), Dialyse und die Verwendung Ionenaustauscher-Harzes usw. kann ein hochreines, superraffiniertes Produkt erhalten werden.

Die Eigenschaften des nach diesem Verfahren erhaltenen sauren Polysaccharids sind folgende:

1. Schmelzpunkt: Im allgemeinen haben Polysaccharide kei

nen Schmelzpunkt; der Zersetzungspunkt ist 210-218⁰C.

2. Viskosität: In Wasser wird zu einer klebrigen Flüssig-

. keit gelöst. In 1 ?oiger wässriger Lösung beträgt die Viskosität 4 000-5 000 cp (25⁰C). Fig. 1 gibt einen Vergleich der Viskosität dieses Saccharids und der von Xanthan-Harz und natürlichen Polysacchariden.

3. Löslichkeit in organischem Lösungsmittel: Unlöslich in

normalen Fällungsmitteln für Polysaccharid, wie Methanol, Äthanol, Aceton usw.

4. Reaktion mit Cetyl-trimethylammoniumhydroxid: Bildet

weiße Fällung; also saure Polysaccharide.

5. Stabilität in Säure und Alkali: Verhältnismäßig stabile

Viskosität im Bereich von pH 3-11.

6. Stabilität in Salzen: Hohe Viskosität in Gegenwart zwei

wertiger Metallsalze, wie Kalium-und Magnesiumsalzen, und auch in Meerwasser.

7. IR-Absorption > wie Fig. 2 zeigt, liegt Absorption bei

Wellenlängen von 5,8 und 6,25 um vor, aufgrund des Vorhandenseins von Ester- und Säurerest.

8. Farbe und Form: Das raffinierte Produkt ist weiß, faden

artig.

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9. Bestandteilbildendes Saccharid; Gemäß gaschromatographischer Analyse sind die Hauptbestandteile Glycose, Galactose, Mannose und Glucuronsäure.

Herkömmlicherweise bekannte bestandteilbildende Saccharide saurer, durch Bacillus-Mikroorganismen erzeugter Polysaccharide sind von Rhamnose, Galactose, Mannose und Glucuronsäure abgeleitete, von Glucose und Uronsäure abgeleitete, von Glucose, Mannose und Uronsäure abgeleitete, von Fucose, Glucose, Galactose und Glucuronsäure abgeleitete, von Glucose, Mannose, Xylose und Uronsäure abgeleitete, aber die bestandteil-bildenden Saccharide Glucose, Galactose, Mannose und Glucuronsäure für die erfindungsgemäß erhaltenen sauren Polysaccharide waren bislang nicht bekannt. Ferner hat, wie Fig. 1 klar zeigt, dieses saure Polysaccharid in 1 Soiger wässriger Lösung eine sogar noch höhere Viskosität als Xanthan-Harz (von Xanthomonas-Mikroorganismen erzeugtes saures Polysaccharid), das die höchste Viskosität unter den von MirkrοOrganismen erzeugten sauren Polysacchariden aufweist. Fig. 1 zeigt auch die Viskositäten der natürlichen Polysaccharide "Guar"- und "Karaya"-Harz.

Die vorstehenden Tatsachen bestätigen, daß die erfindungsgemäß erhaltenen sauren Polysaccharide von den herkömmlicherweise bekannten Polysacchariden abweichen. Die erfindungsgemäß erhaltenen sauren Polysaccharide wurden (vorläufig) mit D-228 bezeichnet.

Aufgrund ihrer hohen Viskosität können die erfindungsgemäß erhaltenen Polysaccharide als viskositätserhöhende Mittel für Nahrungsmittel und bei der Gewinnung von Öl aus Ölbohrungen verwendet werden. Sie können auch als äußerliche Arzneimittelträger, Textilschlichtemittel, Toiletteproduktzusätze usw. Verwendung finden.

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Beispiel 1
Zusammensetzung eines Kulturmediums für Schrägkultur:

Glucose 0,5%, Pepton 1%, Fleischsaftextrakt 1%, Natriumchlorid 0,5%, Agar-Agar 1,5%, pH 7,4.

Zusammensetzung eines Vorkulturmediums:

Glucose 0,5%, Pepton 0,5%, Hefeextrakt 0,2%, Fleischsaftextrakt 0,1%, pH 7,4.

Zusammensetzung eines Kulturmediums für die Hauptkultur (Produktion):

Maisstärke 3%, Maisquellwasser 0,5%, Pepton (oder Hefeextrakt) 0,1%, K₂HPO₄ 0,05%, pH 8,0. Die Schrägkultur- und Vorkulturmedien wurden 15 min. bei 110⁰C dampfsterilisiert, das Produktionsmedium 15-30 min. bei 120⁰C. Nach 48-stündigem Züchten von Bacillus lentus in dem Schrägkulturmedium bei 28⁰C wurde eine Schleife des Bacillus lentus eingeimpft in 50 ml Vorkulturmedium in einen mit einer Schulter versehenen 500 ml-Kolben und 12-14 h bei 28⁰C der Schüttelkultivierung unterworfen.

1-5 ml dieser yorkulturflüssigkeit werden mit 50 ml Produktionskulturmedium in einem 500 ml-Schulterkolben zusammengebracht und 72 h "bei 25-28⁰C und 200 Umdrehungen/min, schüttelkultiviert. Nach 15-20 h Züchtung tritt das Schäumphänomen auf; dann beginnt die Polysaccharid-Bildung, die Viskosität der Kulturflüssigkeit steigt mit fortschreitender Züchtung an, bis sie nach 60-72 h geliert und ihre Viskosität einen Maximalwert erreicht. Mit zunehmender Viskosität ist auch eine zunehmende Ansammlung an Polysaccharid zu erkennen, und der pH der Kulturflüssigkeit fällt von 7,3 auf 5,5-5,3.

Ist die Kultur beendet, wird 1 1 Kulturflüssigkeit maximaler Viskosität gewonnen, mit einer geeigneten Menge Wasser verdünnt, bei 10 000 UpM abzentrifugiert und die Bakterien

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entfernt. War jedoch die Menge der ursprünglichen Bakterien sehr klein, besteht keine Notwendigkeit zur Verwendung einer Zentrifuge, um die Polysaccharid-Bestandteile zu erhalten. Daher wird die Kulturflüssigkeit mit einer geeigneten Menge Wasser verdünnt, und nach Zusatz von 1 % Kaliumchlorid wird unter Rühren eine gleiche Menge Aceton zur Fällung des faserigen Polysaccharids zugesetzt, dieses mit wasserfreiem Aceton entwässert und vakuumgetrocknet. Die Ausbeute an dem erhaltenen weißen, faserigen Mittel betrug 26 g (87 %). Zur Reinigung wurde genügend Wasser zugesetzt, um 10 g dieses Mittels zu lösen, dann wurde 5 min bei 90⁰C wärmebehandelt und nach dem Abkühlen zum völligen Entfernen restlicher Bakterien und unlöslichen Materials zentrifugiert. Die überstehende Flüssigkeit wurde unter Rühren mit CTA-Lösung versetzt, worauf saure Polysaccharide ausfielen.

Nach dem Entfernen des CTA wurde das Polysaccharid in Wasser erneut aufgelöst und wieder mit Aceton ausgefällt. Die Fällung wurde gewaschen und mit Aceton entwässert und zu 8,5 g eines reinen, weißen, fadenartigen gereinigten Produkts getrocknet.

Beispiel 2
Herstellung eines Kulturmediums für die Produktion.

1. Sirup mit 5 % Maltose (Trockengewicht), Pep.ton 8 %_t Maisquellwasser 0,15 %, K₂HPO₄ 0,15 %, MgSO₄^H₂O 0,015 %, FeCl₅-6H₂O 0,008 %, CaCl₂ 0,008 ?£, pH 8,0 (110⁰C, 20 min Dampf sterilisation).

2. Sirup mit 3 % Maltose (Trockengewicht), »Profro"

0,3 °/o, Maisquellwasser 0,2 %, K₂HPO₄ 0,1 %, MgSO₄-TH₂O 0,01 %, FeCl₃ «6H₂0 0,005 % CaCl₂ 0,005 ^c/i, pH 8,0 (110⁰C, 20 min Dampfsterilisation).

3. Glucose 3 %, Pepton 0,5 %, Maisquellwasser 0,1 %,

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K₂HPO. 0,1 %, MgS0^-7H₂0 0,01 %, FeCl₅»6H₂O 0,005 %, CaCl₂ 0,005 %, pH 8,0 (11O⁰C, 20 min Dampfsterilisation)·

4. Dextrin (DE 30) 3 %, Maisquellwasser 0,5 %_t Hefeextrakt 0,1 %, K₂HPO₄ 0,05 %, pH 8,0 (12O⁰C, 15 min Dampf sterilisation) ,

5. Maisstärke 5 So, Maisquellwasser 0,83 %_t Hefeextrakt 0,165 ⁰A, K₂HPO₄ 0,083% pH 8,0 (120⁰C, 30 min Dampfsterilisation) ·

6. Maisstärke 2 %, Maisquellwasser 0,6 %, pH 8,0 (120⁰C, 30 min Dampfsterilisation).

Mit 70-80-stündiger Kultivierung wie in Beispiel 1 unter Verwendung des Produkt_ionskulturmediums 1-5 des obigen Beispiels 2 wurden Polysaccharide aus dem geleeartigen Kulturmaterial wie in Beispiel 1 gewonnen. Die mit den Kulturmedien dieses Beispiels erhaltenen Polysaccharide entsprachen grob denen des Beispiels 1« Ausbeuten und gewonnene Mengen sind in der folgenden !Tabelle wiedergegeben:

Produktions- Ausbeute gewonnene Züchtungskulturmedium (%) Menge (g) zeit (h)

1	50	25	80
2	50	15	72
3	43	12,9	72
4	56	16,8	72
5	87	43,6	80
6	97	19,4	60
4. Kurze	Erläuterung der	Figuren

Pig. 1 ist eine graphische Darstellung, die die Beziehung zwischen Konzentration und Viskosität für das PoIysaccharid D-228 in wässriger Lösung zeigt, erhalten nach dem erfindungsgemäßen Verfahren.

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Fig. 2 ist das IR-Absorptionsspektrum für Polysaccharid D-228, erhalten nach dem erfindungsgemäßen Verfahren.

In Fig. 1 gilt die Kurve 1 für Polysaccharid D-228, Kurve 2 für Guar, Kurve 3 für Xanthan, Kurve 4 für Karaya, die Ordinate bedeutet die Viskosität (cp) und die Abszisse die Konzentration (%).

Fig. 2 gibt auf der oberen Abszisse die Wellenlänge, auf der unteren Abszisse die Wellenzahl (cm ) und auf der Ordinate die Durchlässigkeit (in %) an.

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Claims

PATENTANWÄLTE

DR. A. VAN DERWERTH DR. FRANZ LEDERER REINER F.MEYER

DlPL-ING. 0934-1974) DIPL-CHEM. DIPL-ING.

8000 MÜNCHEN LUCILE-GRAHN-STRASSE

TELEFON: (089) 472947 TELEX: 524624 LEDER D TELEGR.: LEDERERPATENT

9. März 197 3149

CPC INTERNATIONAL INC. International Plaza Englewood Cliffs, N.J. 07632 USA

Patentansprüche

1. Verfahren zur Herstellung hochviskoser saurer Polysaccharide, dadurch gekennzeichnet, daß ein Mikroorganismus des Typs Bacillus lentus in einem Kulturmedium, das ein oder mehrere Kohlenhydrate als Kohlenstoff quelle enthält, kultiviert wird und Polysaccharide, in denen die Hauptbestandteile Glucose, Galactose, Mannose und Glucuronsäure sind, isoliert werden.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Mikroorganismus Bacillus lentus D-228 kultiviert wird.

3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es mit einem Kulturmedium, das als Kohlenstoffquelle Glucose, Saccharose, Maltose, Stärkesaccharide, Stärke, Dextrin oder deren Gemische enthält, durchgeführt wird.

4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß es mit einem Kulturmedium, das zusätzlich Maisquellwasser, Pepton, Hefeextrakt, Pleisch-

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saftextrakt oder deren Gemisch als Stickstoffquelle enthält, durchgeführt wird.

5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 "bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß es mit einem Kulturmedium, das zusätzlich eines oder mehrere anorganische Salze aus der Gruppe Phosphat, Magnesium-, Calcium- oder Eisensalz einer Mineralsäure enthält, durchgeführt wird.

6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 "bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß der Mikroorganismus bei 20 bis 4O⁰C kultiviert wird.

7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß es bei einem Anfangs-pH des Kulturmediums von 5 bis 8 durchgeführt wird.

8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß es zu einem Polysaccharid mit einer Viskosität von 4 000-5 000 cp, gemessen in 1 %iger wässriger Lösung bei 25°C, durchgeführt wird.

9. Mittel, enthaltend ein hochviskoses saures Polysaccharid, erhalten gemäß einem der Ansprüche 1 bis 8, dessen Hauptbestandteile Glucose, Galactose, Mannose und GIucuronsäure sind und das in 1 ^iger wässriger Lösung eine Viskosität von 4 000-5 000 ep (25⁰C) aufweist.

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