DE2760116C2 - Verfahren zur Bestimmung von Serinproteasen - Google Patents

Verfahren zur Bestimmung von Serinproteasen

Info

Publication number
DE2760116C2
DE2760116C2 DE2760116A DE2760116A DE2760116C2 DE 2760116 C2 DE2760116 C2 DE 2760116C2 DE 2760116 A DE2760116 A DE 2760116A DE 2760116 A DE2760116 A DE 2760116A DE 2760116 C2 DE2760116 C2 DE 2760116C2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
arg
gly
ile
pna
groups
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired
Application number
DE2760116A
Other languages
English (en)
Inventor
Leif Erik Dr. Särö Aurell
Karl Göran Dr. Claeson
Leif Roger Dr. Hisings-Backa Simonsson
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Phadia AB
Original Assignee
Kabi AB
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kabi AB filed Critical Kabi AB
Application granted granted Critical
Publication of DE2760116C2 publication Critical patent/DE2760116C2/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
    • C12Q2337/10—Anilides
    • C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/802—Chromogenic or luminescent peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/28—Bound to a nonpeptide drug, nonpeptide label, nonpeptide carrier, or a nonpeptide resin

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

in der sämtliche Aminosäurereste, ausgenommen GIy, die L-Konfiguration aufweisen, sowie
R1 eine Acylgruppe und
R2 eine Gruppe, die bei der Bestimmung eine Verbindung R2NPh ergibt, deren Absorptionsmaximum sich von dem des Tetrapeptide unterscheidet, bedeuten,
dadurchgekennzeichnet, daß man als Tetrapeptid eine Verbindung der allgemeinen Formel 11
R'-Ile-NH-CH-CO-Gly-Arg-NH-R2 (II)
CO-X
in der ρ die Zahlen 1 oder 2 und die Gruppe —CO—X eine eine niedrige Alkyl-, Hydroxyalkyl-, substituierte Aminoalkyl- oder Cycloalkylgruppe enthaltende Esterfunktion, eine mit niedrigen Alkyl-, niedrigen Hydroxyalkyl- oder niedrig-substituierten Aminoalkylgruppen substituierte primäre oder sekundäre Amidfunktion oder ein Morpholid, Piperidid oder Piperazid bedeutet, verwendet.
Die Erfindung betrifft eine Verfahren zur Bestimmung von Serinproteasen gemäß dem Patenanspruch.
Die Aktivierung des Faktors X veranlaßt die Bildung des proteolytischen Enzyms, des Faktors Xa, der direkt für die Umwandlung von Prothrombin zu Thrombin verantwortlich ist. Diese Umwandlung durch den Faktor Xa schließt die Spaltung von zwei Peptidbindungen im Prothrombinmolekül ein. Vor diesen beiden Orten der Spaltung iritt genau die gleiche Aminosäuresequenz auf, nämlich -Ile-Glu-Gly-Arg-.
Für diagnostische Zwecke ist ein einfaches Verfahren zur Bestimmung des Koagulationsfaktors Xa besonders wertvoll. Das bisher am besten geeignete Reagenz für die Xa-Bestimmung besteht aus chromogenen Peptidsubstraten mit einer Aminosäuresequenz -Ile-Glu-Gly-Arg-, die derjenigen Sequenz entspricht, die den Spaltungsstellen des natürlichen Substrates Prothrombin vorangeht.
Das Substrat Benzoyl-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitroanilid (S-2222), das das beste Substrat in dieser Reihe ist, weist
eine Aminosäuresequenz auf, die mit dem oben erläuterten Teil des natürlichen Substrats identisch ist. Dieses Substrat ist bereits in klinischen Versuchen angewendet worden, z. B. bezüglich des Antifaktors Xa und Heparin
(A. N. Teien, M. Lie und U. Abildgaard, Thrombosis Research 8, 413, 1976). Diese Verfahren beruhen auf der folgenden Reaktion:
Y.
Bz-Ile-Glu-Gly-Arg-pNA Bz-Ile-Glu-Gly-Arg-OH+pNA.
Das freigesetzte p-Nitroanilid (pNA) weist ein Lichtabsorptionsmaximum auf, das sich von dem des Substrats unterscheidet. Die enzymatische Reaktion kann leicht verfolgt werden, indem man die Zunahme der Absorption bei 405 nm verfolgt, die proportional der Menge des aktiven Faktors Xa ist.
Es ist bereits eine große Anzahl von synthetischen Substraten für den Faktor Xa beschrieben worden, und zwar von L. Aure!1, G. Claeson, G. Karlsson und P. Friberger in »Peptides 1976, S. 191, Proc. from the XIVth European Peptide Symposium«, Weipon, Belgien, 1976. Dabei wurden die Aminosäuren in der natürlichen Sequenz variiert. Sie wurden abwechselnd durch andere ähnliche Aminosäuren ersetzt, wobei jedoch in keinem Falle ein besseres Substrat als S-2222 erhalten wurde. Sogar sehr geringe Änderungen in der natürlichen Sequenz, z. B. den Ersatz von He durch Leu, ergibt Substrate mit einer stark herabgesetzten Empfindlichkeit.
Im folgenden werden die Reste R1 und R2 der für die in dem Verfahren der Erfindung zu verwendenden Tetrapeptide im Patentanspruch angegebenen allgemeinen Formeln näher erläutert.
Die Acylgruppe R1 bedeutet aliphatische Acylgruppen mit 2—5 Kohlenstoffatomen, insbesondere Acetyl-, i- oder n-Propanoyl, n-, i- oder tert-Butanoylgruppen; weiterhin alicyclische Acylgruppen, insbesondere Cyclobutane^ ' Cyclopentanoyl- oder Cyclohexanoylgruppen, die gegebenenfalls mit niedrigem Alkylsubstituiert sein könne,ι, z. B. 4-Methylcyclohexanoyl- oder 4-Ethylcyclohexanoylgruppen. Der alicyclische Rest kann dabei auch über niedere Alkylengruppen mit 2—4 Kohlenstoffatomen mit der Carboxylgruppe verbunden sein, Beispiele hierfür sind Cyclohexylacetyl- oder Cyclohexylpropionylgruppen. Die Gruppe R1 kann weiterhin aromatische Acy'gruppen, insbesondere Benzoyl, 4-Methylben/oyl- oder 4-iVlethoxyben2Oylgruppeii, oder arylaliphatischc Acylgruppen, z. B. Phenylacetylgruppen, bedeuten.
Die Gruppe R2 steht für einen Rest, der bei der Spaltung eine chromogene oder fluoreszierende Verbindung
ergibt, deren Absorptionsmaximum von dem des Substrats verschieden ist Hierzu gehören Phenyl-, Nitrophenyl-, Methylnitrophenyl-, Dinitrophenyl-, Naphthyl-, Nitronaphthyl-, Chinolyl-, Nitrochinolyl- und Methoxynaphthylgruppen, insbesondere 4-Nitrophenyl-,^-Napthyl- und 4-Methoxy-^naphthylgruppen.
Die Esterfunktion —CO—X kann dabei mit den folgenden Gruppen —X gebildet sein:
niedrige Alkylgruppen mit 1—5 Kohlenstoffatomen, insbesondere Methyl-, Ethyl-, η- oder i-Propyl-, n-Butyl-, selo-Butyl- oder tert-Butylgruppen;
niedrige Hydroxyalkylgiruppen der Formel
-CH2-(CHi)n-OH
in der π die Zahlen 1 —4 bedeutet, insbesondere 1 oder 2; substituierte Aminoalkylgruppen der Formel
-CH2-(CH2J01-NR3R"
in der m die Zahlen 1 —4, insbesondere 1 oder 2, R3 oder R4 jeweils eine niedrige Alkylgruppe mit 1 —4 Kohlenstoffatomen, insbesondere Methyl oder Ethyl, bedeuten, wobei R3 oder R4 auch Wasserstoff sein kann.
Cycloalkylgruppen: ein aliphatischer Rest mit 4—6 Kohlenstoffatomen im Ring, z. B. Cyclobutyl-, Cyclopentyl- oder Cyclohexylgruppen, die gegebenenfalls mit niederen Alkylgruppen mit 1 —Λ Kohlenstoffatomen substituiert sein können, z. B. 4-Methylcyclohexyl-, 4-Ethylcyclohexyl-, 3-MethylcyclopentyI- oder 3-Ethylcyclopentylgruppen.
Die Bedeutungen der für die Amidfunktion vorgesehenen Substituenten, d.h. niedriges Alkyl, niedriges Hydroxyalkyl und niedrig-substituiertes Aminoalkyl, sind die gleichen wie vorstehend für die Esterfunktion angegeben, wobei jedoch zu berücksichtigen ist, daß hier eine Mono- oder Disubstitution vorliegen kann.
Zu den in dem Verfahren der Erfindung zu verwendenden Tetrapeptiden gehören weiterhin deren Salze, insbesondere Additionssalze.
In den in dem Verfahren der Erfindung zu verwendenden Tetrupeptiden ist die natürliche ^-Carboxylgruppe des GIu bzw. Asp, die bei einem biologischen pH-Wert eine negative Ladung aufweist und hydrophil ist, durch eine erheblich größere Gruppe, die neutral und lipophil ist, ersetzt Da früher vorgenommene Änderungen der natürlichen Sequenz, -Ile-Glu-Gly-Arg-, lediglich unterlegene Substrate ergaben (L Aurell et al. s. o.), ist es sehr überraschend, daß die vergleichsweise großen Änderungen an dein Molekül zu Substraten führen, die erheblich bessere Eigenschaften (vgl. Tabelle I) als das bisher beste Substrat S-2222, aufweisen. Die drastische Erniedrigung der Michaelis-Konstante (Kn) überrascht dabei am meisten und ist für das Arbeiten in der Praxis die wichtigste Verbesserung. Kn, ist als diejenige Subsratkonzentrtion definiert die für das Erhalten der halben Maximalgeschwindigkeit (VmaK) erforderlich ist Die bisher verwendeten Substrate und auch die erfindungsgemäß zu verwendenden Substrate weisen begrenzte Löslichkeiten auf, und aus diesem Grunde sollte die Substratkonzentration unterhalb von 1 mM sein, wenn man in Pufferlösung und Blutplasma unter praktischen Bedingungen arbeitet. Mit S-2222, das eine Kn, von 0,83 mM aufweist kann man lediglich die Hälfte der Vmax ausnutzen, wogegen man mit den erfindungsgemäß zu verwendenden Substraten, deren Kn, zwei- bis fünfmal niedriger ist, die maximale Geschwindigkeit wesentlich besser ausnutzen kann. Es ergeben sich somit offensichtliche Vorteile, wenn man mit diesen Substraten die Aktivität des Faktors Xa bestimmt. Ihre Empfindlichkeit ist einige 100 Mal größer als die von S-2222, so daß man eine wesentliche höhere Genauigkeit bei einer erheblich herabgesetzten Empfindlichkeitsgrenze und einem stark herabgesetzten Volumen der Blutprobe erreichen kann.
Enzymuntersuchungen mittels chromogenen Substraten sind besonders zur Verwendung in automatischen Analyseeinrichtungen geeignet. Die höhere Empfindlichkeit der in dem Verfahren der Erfindung zu verwendenden Substrate ermöglicht eine kürzere Reaktionszeit in der Vorrichtung und bietet zudem die Möglichkeit, daß mehr Proben in der Zeiteinheit analysiert werden können.
Zu den in dem Verfahren der Erfindung einzusetzenden Tetrapeptiden gehören die Verbindungen der folgenden Aufstellung, wobei in der folgenden Beschreibung die dort genannte Nummerierung verwendet wird.
Nr. Tetrapeptid
1 Bz-Ile-Glu(OMe)-Gly-Arg-pNA · HCl
2 Bz-Ile-GIu(OEt)-Gly-Arg-pNA · HCl
3 Bz-Ile-GIu(OiPr)-Gly-Arg-pNA ■ HCl
4 Bz-Ile-GluiO-CyclohexyO-Gly-Arg-pNA · HCl
5 Bz-Ile-Glu(O-CH2CH2NMe2)-Gly-Arg-pNA · HCl
6 Bz-Ile-Glu(NH-CHMe2)-Gly-Arg-pNA · HCl
7 Bz-Ile-Glu(N-Piperidid)-Gly-Arg-pNA · HCl
8 Bz-He-Glu(N(CH2CH2-OH)2-Gly-Arg-pNA · HCl
9 Bz-Ue-Asp(O-iPr)-Gly-Arg-pNA) · HCl
10 Bz-Ile-Asp(OEt)-Gly-Arg-pNA · HCl
11 Bz-Ile-Asp(NH-CHMe2)-Gly-Arg-pNA · HCl
12 Bz-IIe-Asp(N-Morpholid)-Gly-Arg-pNA · HCl
13 Bz-Ue-GIu(OMe)-GIy-Arg-/?-N A · HCl
14 Bz-Ile-Glu(NH-CHMe2)-Gly-Arg-4MeOv$'-NA · HCl
15 Bz-!le-Cl!i(N-Morpholid)-Gly-Arg-pNA ■ HCl
16 Ac-Ile-Glu(N-Piperidid)-Gly-Arg-pNA · HCl
Die Herstellung der vorgenannten Tetrapeptide ist in der DE-PS 27 53 653 beschrieben. Weiterhin wird in der folgenden Beschreibung auf die folgenden, aus der DE-AS 25 52 570 bekannten Vergleichsverbindungen Bezug genommen.
A = Bz-Ile-Glu-Gly-Arg-pNA (-S-22
B - Bz-Ue-Asp-Gly-Arg-pNA
C = Bz-Ile-Glu-Gly-Arg-pNA
D - Bz-Ile-Asn-Gly-Arg-pNA
E = Ac-Ile-Glu-Gly-Arg-pNA
F = Bz-Ile-Glu-Gly-Arg-^-NA
G - Bz-Ile-Glu-Gly-Arg-4MeO-/?-NA
irAmion/ietfin Δ nl^fifTilncT^n ποη^ιΊ /ι
16 oben
Ac		 VCrWcnUClCIl /\UKUI £UIJgCIl UdUCiI U
= Acetyl
Arg = Arginin
Asp = Asparaginsäure
Bz = Benzoyl
Et = Ethyl
GIu = Glutaminsäure
GIy = Glycin
Ue = Isoleucin
iPr = i-Propyl
Me = Methyl
NA = Napthylamid
pNA = p-Nitroanilid
Die in dem Verfahren der Erfindung einzusetzenden Tetrapeptide werden nachfolgend mit den aus der DE-AS 25 52 570 bekannten verglichen.
Bestimmung von Km und Vmax
Km und Vmax werden mittels der Lineweaver-Burk-Gleichung 35 _ = -5^L- · — H —
v0 "max "5O 'max
erhalten.
Enzym i'nd Substrat werden in einer Pufferlösung gemischt; die Geschwindigkeit der Hydrolyse wird spektro-40 photometrisch gemessen. Die Substratkonzentration (Sq) wird verändert, während die Enzymkonzentration
konstant gehalten wird. Die reziproke Geschwindigkeit — wird anschließend gegen die reziproke Substratkonzentration -£- aufgetragen. Aus dem erhaltenen Lineweaver-Burk-Diagramm werden Km und Vmax geschätzt
Reagenzien: Puffer Tris[tris(hydroxymethyl)aminomethan]
0,05 Moi/I, pH = 8,3,1 = 0,25 (NaCl) Enzym Diagen (6,4 Denson U) (diagnostisches Reagenz)
Eine Ampulle wird in 2 ml Wasser gelöst, so Substrat Das Substrat wird in Wasser auf 2 mMoi/1 gelöst.
Verfahren Puffer, +37° C 2400-1850 μΐ ]
Enzym, +200C 50 μΐ [ 2500 μΐ
Substrat, +37° C 50- 600 μΐ j
Vermischen und Ablesen der Änderung der Absorption (Δ OD/min) bei 405 nm und bei 37° C.
Relative Aktivität: Puffer, +373C 2200 μΐ
60 Enzym, +200C 50 μΐ
Substrat, +37° C 250 μΐ
Vermischen und Ablesen der Absorption (z/ OD/min) bei 405 nm und bei 37°C°.
Die ermittelten relativen Reaktivitäten (Vergleichsverbindung = 100) gegenüber der Serinprotease FX3 sind in
der Tabelle I zusammengefaßt. Dabei zeigt z. B. die Messung der Verbindung 9, daß beim Übergang von Asp auf
Asp-^-OiPr eine vierfache Reaktivitätssteigerung erreicht wird; entsprechend bewirkt der Übergang von Asp
auf Asp-morpholid (Verbindung 12) eine Reaktivitätssteigerung um 30%.
Tabelle I ; Vergleichsverbindung rel. Reaktivität 230
A 200
Relative Reaktivitäten A 220
A 180
A 150
(Vergleichsverbindung= 100) gegenüber FXa A 340
Verbindung A 280
1 C 300
2 A 250
3 C 130
4 C 400
5 B 350
6 B 170
6 D 130
7 D 160
7 F 200
8 G 240
9 C 210
10 C 230
11 E
12
13
14
15
16
16
Bei der Bestimmung der Serinproteasen Trypsin und FXIIf wurden in analoger Weise die in Tabelle II
zusammengefaßten relativen Reaktivitäten erhalten, wobei als Vergleichsverbindung die oben genannte Verbindung A (S-2222) verwendet wurde.
Tabelle II
Relative Reaktivitäten gegenüber Trypsin und
FXIIf (Vergleichsverbindung A (S-2222) = 100)
" "" 40
Die Tabelle III schließlich zeigt die Ergebnisse eines Vergleiches von Km Vmax und VmaxIKm für ausgewählte, in V dem Verfahren der Erfindung einzusetzende Tetrapeptide und Vergleichsverbindungen. Es zeigt sich, daß bei
dem Verfahren der Erfindung die Messung von FX, bei niedrigen Substratkonzentrationen (Kn, möglichst If
niedrig) und erhöhter Empfindlichkeit (Vm1x möglichst hoch) im Vergleich zu dem Verfahren mit den Vergleichs- 55 >|
verbindungen A und C gestattet. ff
Beispiel Trypsin FXIIf
1 170 380
2 150 390
3 130 330
6 140 380
7 130 520
9 170 280
12 110 260
15 140 530
16 140 520
Tabelle III
Vergleich von Kn,, Vmsx und Vmax/Km
Nr./ Km ■ 10" Vmax · 108 K1n
Vergleichsverbindung Mol/l mol/min · K 0,7
A 8,3 6 1,0
C 8,0 8 3,1
1 2,6 8 2,8
2 2,9 8 3,8
3 2,1 8 3,2
6 2,8 9 5,3
7 1,7 9 4,5
15 2,0 9 3,2
16 2,2 7

Claims (1)

  1. Patentanspruch:
    Verfahren zur Bestimmung von Serinproteasen mittels chromogenen oder fluorogenen Tetrapeptiden der allgemeinen Formel la bzw. Ib
    5
    R'-Ile-Glu-Gly-Arg-NH-R2 (Ia)
    R'-Ile-Asp-Gly-Arg-NH-R2 ' (Ib)
DE2760116A 1976-12-01 1977-12-01 Verfahren zur Bestimmung von Serinproteasen Expired DE2760116C2 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE7613463A SE437153B (sv) 1976-12-01 1976-12-01 Specifika kromogena enzymsubstrat for serinproteaser

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE2760116C2 true DE2760116C2 (de) 1985-09-12

Family

ID=20329625

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2760116A Expired DE2760116C2 (de) 1976-12-01 1977-12-01 Verfahren zur Bestimmung von Serinproteasen
DE2753653A Expired DE2753653C2 (de) 1976-12-01 1977-12-01 Tetrapeptide

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2753653A Expired DE2753653C2 (de) 1976-12-01 1977-12-01 Tetrapeptide

Country Status (23)

Country Link
US (2) US4207232A (de)
JP (1) JPS5369693A (de)
AT (1) AT358203B (de)
AU (1) AU514768B2 (de)
BE (1) BE861295A (de)
CA (1) CA1098428A (de)
CH (1) CH637627A5 (de)
DD (1) DD136896A5 (de)
DE (2) DE2760116C2 (de)
DK (1) DK155333C (de)
ES (1) ES464117A1 (de)
FI (1) FI773242A (de)
FR (1) FR2372798A1 (de)
GB (1) GB1565154A (de)
HU (1) HU176983B (de)
IL (1) IL53187A (de)
IT (1) IT1092154B (de)
NL (1) NL178600C (de)
NO (1) NO774092L (de)
PL (2) PL110803B1 (de)
SE (1) SE437153B (de)
SU (1) SU736889A3 (de)
ZA (1) ZA776460B (de)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE7801373L (sv) * 1978-02-07 1979-08-08 Kabi Ab Lett spjelkbara substrat for kvantifiering av proteaser
US4275153A (en) * 1978-08-03 1981-06-23 American Hospital Supply Corporation Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes
US4409140A (en) * 1979-04-23 1983-10-11 Smith Robert E Substrates and method for determining enzymes
CA1161432A (en) * 1980-02-12 1984-01-31 Lars G. Svendsen Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes
ATE8130T1 (de) * 1980-08-25 1984-07-15 Kabivitrum Ab Peptidsubstrate zum bestimmen der proteaseaktivitaet.
US4510241A (en) * 1981-09-03 1985-04-09 Mallinckrodt, Inc. Peptide-type substrates useful in the quantitative determination of endotoxin
US4406832A (en) * 1981-09-03 1983-09-27 Mallinckrodt, Inc. Peptide-type substrates useful in the quantitative determination of endotoxin
US4448715A (en) * 1981-11-02 1984-05-15 University Of Miami Tagged pyroglu-L-Phe-L-Arg derivatives, substrates and assays for kallikrein
DE3211254A1 (de) * 1982-03-26 1983-09-29 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zum nachweis des vorliegens einer allergie und zum spezifischen nachweis des fuer die allergie verantwortlichen allergens
JPH04501460A (ja) 1988-09-30 1992-03-12 ザ ユニバーシティ オブ バーモント アンド ステイト アグリカルチュラル カレッジ 触媒活性セリンプロテアーゼに関する免疫検定法
WO1995004281A1 (en) * 1993-07-27 1995-02-09 THE UNITED STATES GOVERNMENT, represented by THE ADMINISTRATOR OF THE NATIONAL AERONAUTICS AND SPACE ADMINISTRATION Quantitative method of measuring cancer cell urokinase and metastatic potential
US6297024B1 (en) 1998-10-15 2001-10-02 Cell Activation, Inc. Methods for assessing complement activation
US6235494B1 (en) 1999-02-08 2001-05-22 The Scripps Research Institute Substrates for assessing mannan-binding protein-associated serine protease activity and methods using the substrates
US20060166891A1 (en) * 2003-04-22 2006-07-27 Sircar Jagadish C Mediators of reverse cholesterol transport for the treatment of hypercholesterolemia
US20050159362A1 (en) * 2003-04-22 2005-07-21 Sircar Jagadish C. Mediators of reverse cholesterol transport for the treatment of hypercholesterolemia
WO2007059511A2 (en) * 2005-11-15 2007-05-24 The Children's Hospital Of Philadelphia Compositions and methods for modulating hemostasis
US9244073B2 (en) 2011-02-25 2016-01-26 Wellstat Diagnostics, Llc Assays for detecting enzymatic activity

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2552570B2 (de) * 1974-12-05 1980-01-10 Ab Kabi, Stockholm Tri- und Tetrapeptide und deren Verwendung zur Bestimmung von Serinproteasen

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2527932C2 (de) * 1974-07-02 1983-04-21 Pentapharm AG, 4052 Basel Säureadditionssalze von Tripeptidderivaten und deren Verwendung als Substrate zur Bestimmung von Plasmakallikrein
CH622286A5 (de) * 1975-06-23 1981-03-31 Pentapharm Ag
US4137225A (en) * 1975-07-11 1979-01-30 Ab Kabi Novel chromogenic enzyme substrates
US4061625A (en) * 1975-07-11 1977-12-06 Ab Kabi Novel chromogenic thrombin substrates

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2552570B2 (de) * 1974-12-05 1980-01-10 Ab Kabi, Stockholm Tri- und Tetrapeptide und deren Verwendung zur Bestimmung von Serinproteasen

Also Published As

Publication number Publication date
ES464117A1 (es) 1978-09-01
DE2753653A1 (de) 1978-06-08
DD136896A5 (de) 1979-08-01
BE861295A (fr) 1978-03-16
JPS578720B2 (de) 1982-02-17
IT1092154B (it) 1985-07-06
AT358203B (de) 1980-08-25
DK155333C (da) 1989-09-04
NO774092L (no) 1978-06-02
AU3077177A (en) 1979-05-24
NL178600C (nl) 1986-04-16
HU176983B (hu) 1981-06-28
PL109588B1 (en) 1980-06-30
US4276375A (en) 1981-06-30
DK155333B (da) 1989-03-28
SE7613463L (sv) 1978-06-02
FR2372798B1 (de) 1983-11-10
AU514768B2 (en) 1981-02-26
IL53187A (en) 1981-02-27
DE2753653C2 (de) 1983-07-21
GB1565154A (en) 1980-04-16
CH637627A5 (de) 1983-08-15
PL110803B1 (en) 1980-08-30
NL7711791A (nl) 1978-06-05
FR2372798A1 (fr) 1978-06-30
ZA776460B (en) 1978-08-30
FI773242A (fi) 1978-06-02
US4207232A (en) 1980-06-10
SE437153B (sv) 1985-02-11
PL202501A1 (pl) 1978-12-04
JPS5369693A (en) 1978-06-21
SU736889A3 (ru) 1980-05-25
ATA859677A (de) 1980-01-15
IL53187A0 (en) 1977-12-30
CA1098428A (en) 1981-03-31
DK535377A (da) 1978-06-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2760116C2 (de) Verfahren zur Bestimmung von Serinproteasen
EP0034122B1 (de) Tripeptidderivate und deren Verwendung zur Bestimmung von Enzymen
EP0018002B1 (de) Neues Bestimmungsverfahren für Proteasen und Antiproteasen
EP1157029B1 (de) Oligopeptidderivate zur elektrochemischen messung der aktivität von proteasen
EP0158254A1 (de) Reagenz zur Bestimmung der Thromboplastinzeit
DE2627925A1 (de) Chromogenes bzw. fluoreszierendes substrat
EP0034320B1 (de) Verfahren und Reagens zur Bestimmung der biologischen Aktivität von Heparin im Plasma
EP0110306A2 (de) Chromogene Verbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
DE2812943A1 (de) Verfahren und reagens zur bestimmung des biologisch aktiven heparins im plasma
CH619983A5 (de)
EP0040799B1 (de) Stabilisiertes Thrombinpräparat
DE2724211C2 (de) Tripeptidderivate und deren Verwendung
DE3700908A1 (de) Aminoluciferine, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung bei der bestimmung von enzymaktivitaeten
EP0537490A2 (de) Funktioneller Test und Reagenz zur Bestimmung von Fibrinogen
EP0078764B1 (de) Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Blutgerinnungsfaktor XII in Humanplasma
DE2919545A1 (de) Neue l-leucyl-4-hydroxyanilid-derivate, verfahren zu deren herstellung, sowie verwendung derselben
DE3045430C2 (de) α-Hydroxyacyl-L-prolyl-L-arginyl-p-nitroanilide und deren Verwendung
EP1684071B1 (de) Stabiles, chromogenes Testreagenz und dessen Verwendung in gerinnungsdiagnostischen Tests
EP0408075B1 (de) Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Antithrombin III
EP0863995B1 (de) Verbessertes verfahren zur bestimmung von lipase
EP0190299A1 (de) NEUE p-PHENYLENDIAMIN-PEPTIDE UND DIESE ENTHALTENDE REAGENZIEN ZUR BESTIMMUNG VON PROTEASEN DES BLUTGERINNUNGSSYSTEMS
DE102012014339A1 (de) Verwendung eines Substrats in einem Verfahren zur Messung der Aktivität von vorhandenen proteolytischen Enzymen
DE3034618A1 (de) Verfahren zur bestimmung der aktivitaet des angiotensin-konvertierenden enzyms
DE68915216T2 (de) Substrate zur Bestimmung der enzymatischen Aktivität.
DE102012014337A1 (de) Verwendung eines Substrats in einem Verfahren zur Messung der Aktivität von proteolytischen Enzymen

Legal Events

Date Code Title Description
Q172 Divided out of (supplement):

Ref country code: DE

Ref document number: 2753653

8110 Request for examination paragraph 44
8181 Inventor (new situation)

Free format text: CLAESON, KARL GOERAN, DR. AURELL, LEIF ERIK, DR., SAEROE, SE SIMONSSON, LEIF ROGER, DR., HISINGS-BACKA, SE

AC Divided out of

Ref country code: DE

Ref document number: 2753653

Format of ref document f/p: P

D2 Grant after examination
8364 No opposition during term of opposition
8339 Ceased/non-payment of the annual fee