NO774092L - Spesifikke kromogene enzymsubstrater - Google Patents
Spesifikke kromogene enzymsubstraterInfo
- Publication number
- NO774092L NO774092L NO774092A NO774092A NO774092L NO 774092 L NO774092 L NO 774092L NO 774092 A NO774092 A NO 774092A NO 774092 A NO774092 A NO 774092A NO 774092 L NO774092 L NO 774092L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- glu
- group
- naphthyl
- hydroxyalkyl
- asp
- Prior art date
Links
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims description 30
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- -1 3-naphthyl Chemical group 0.000 claims description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 12
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 9
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 7
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 5
- 230000009435 amidation Effects 0.000 claims description 5
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 claims description 5
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 claims description 5
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 5
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 5
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000004193 piperazinyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 claims description 3
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 claims description 3
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 claims description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 14
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 13
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 9
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 4
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 4
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 4
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HYOUYNIRTMZPLG-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxyethyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC(O)[NH+](C)C HYOUYNIRTMZPLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 108010031969 benzoyl-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitroanilide Proteins 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- ZYECEUZMVSGTMR-LBDWYMBGSA-N (4s)-4-[[(2s,3s)-2-benzamido-3-methylpentanoyl]amino]-5-[[2-[[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound N([C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=1C=CC(=CC=1)[N+]([O-])=O)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZYECEUZMVSGTMR-LBDWYMBGSA-N 0.000 description 1
- KQJTXYQXRHCWKW-PJSBSAQXSA-N (4s)-4-[[(2s,3s)-2-benzamido-3-methylpentanoyl]amino]-5-[[2-[[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-5-oxopentanoic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.N([C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=1C=CC(=CC=1)[N+]([O-])=O)C(=O)C1=CC=CC=C1 KQJTXYQXRHCWKW-PJSBSAQXSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- FOYWCEUVVIHJKD-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-5-(1h-pyrazol-5-yl)pyridine Chemical compound C1=NC(C)=CC=C1C1=CC=NN1 FOYWCEUVVIHJKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PPWHTZKZQNXVAE-UHFFFAOYSA-N Tetracaine hydrochloride Chemical compound Cl.CCCCNC1=CC=C(C(=O)OCCN(C)C)C=C1 PPWHTZKZQNXVAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- GRVDJDISBSALJP-UHFFFAOYSA-N methyloxidanyl Chemical group [O]C GRVDJDISBSALJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- XUWVIABDWDTJRZ-UHFFFAOYSA-N propan-2-ylazanide Chemical compound CC(C)[NH-] XUWVIABDWDTJRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 150000004992 toluidines Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
- C12Q2337/10—Anilides
- C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/802—Chromogenic or luminescent peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/28—Bound to a nonpeptide drug, nonpeptide label, nonpeptide carrier, or a nonpeptide resin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår nye kromogene substrater for serin protease. De nye substrater er egnet for bestemmelse av faktor Xa (E.C. 3,4, 21.6) eller for studium av reaksjoner som bevirker at Xa dannes, inhiberes'eller forbrukes eller også for bestemmelse av slike faktorer som influerer eller deltar i slike reaksjoner.
Faktor X er en nøkkelforbindelse i en serie reaksjoner
som fører til koagulering av blod. Aktiveringen av faktor X for-årsaker dannelsen av det proteolytiske enzym, faktor Xa, som er direkte ansvarlig for overføringen av prothrombin til thrombin. Overføringen av prothrombin til thrombin med faktorXa innbefat-
ter splitting av to peptidebindinger i prothrombinmolekylet. Dis-
se to splittingssteder finner sted efter nøyaktig^ den samme amino-syresekvens: -Ile-Glu-Gly-Arg-.
En enkel metode for bestemmelse av koagulasjonsfaktor Xa
er meget verdifull for diagnostiske formål. De hittil best egne-
de reagenser for bestemmelse av faktor Xa består av kromogene pep-tidsubstrater med en aminosyresekvens,-Ile-Glu-Gly-Arg-, svarende til den sekvens som går forut for splittingsstedene i naturlig prothrombinsubstrat.
Substratet Benzoyl-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitroanilid (S-
2222), som er det beste substrat i denne serie, har en aminosyre-sekvens identisk med den ovenfor angitte del av det naturlige substrat. Dette substrat har allerede funnet anvendelse innen kliniske tester på f.eks. antifaktor Xa og Heparin (A.N. Teien,
M. Lie og U. Abildgaard, Thrombosis Research 8, 413, 1976). Me-todene er basert på den følgende reaksjon:
Det frigitte p-nitroanilid (pNA) har et svakt absorpsjons-maksimum forskjellig fra substratets, og en enzymreaksjonen kan lett følges ved måling av økningen i absorpsjon ved 405 nm, hvilken er proporsjonal med mengden av aktiv faktor Xa.
Et stort antall syntetiske substrater for faktor Xa er blitt beskrevet av L. Aure 1.1-, G. Claeson, G. Karlsson og P. Friberger i Peptides 1976, side 191, Proe. from the XlVth European Peptide Symposium, Weipon, Belgia, 1976. Aminosyrene i den naturlige sekvens ble variert. Disse ble i sin tur er.stattet med andre lignende aminosyrer, men ikke i noe tilfelle ble et bedre substrat enn S-2222 erholdt. Selv meget små forandringer i den naturlige sekvens, slik som erstatning av Ile med Leu, gir substrater med meget lavere sensitivitet.
De nye kromogene substrater ifølge oppfinnelsen er representert ved den følgende generelle formel:
eller salter derav, hvor R, er acyl, fortrinnsvis acetyl eller benzoyl, R2er p-nitrofenyl, 3-nafthyl eller 4-methoxy-3-nafthyl, dys. aromatiske grupper som gir en kromofor eller fluorescent forbindelse, R-NH2, ved enzymatisk hydrolyse; A er Asp eller Glu, substituert i carboxylgruppen fortrinnsvis ved forestring eller amidering. Egnede estere inneholder en kort alkyl-, hydroxyalk- . yl- , substituert aminoalkyl- eller cycloalkylgruppe. Egnede amider inneholder mono- eller disubstituerte korte alkyl-, hydroxyalkyl- eller substituert aminoalkylgruppe, eller en heterocyclisk gruppe hvori amidonitrogenet danner endel av en piperidin-, morfolin- eller piperazinring.
Den naturlige y-carboxygruppe av Glu, som ved biologisk pH har en negativ ladning og er hydrofil, er ifølge oppfinnelsen blitt erstattet med en betydelig større gruppe, som er nøy-tral og lipofil. Da tidligere forandringer av den naturlige sekvens -Ile-Glu-Gly-Arg- bare har gitt dårlige substrater
(L. Aurell, G. Claeson, G. Karlsson og P.Friberger i Peptides 1976, side 191, Proe. from the XlVth European Peptide Symposium,
Weipon, Helgia, 1976) er det meget overraskende at den relativt store forandrin som foretas ifølge oppfinnelsen har resultert i substrater med fundamentalt bedre egenskaper (se tabell 1) enn det tidligere beste substrat, S-2222. Den drastiske nedsettelse av Michaelis konstant (Km) er den mest slående, og for praktisk arbeide den viktigste forbedring som oppnåes med de nye substrater. Km er definert som den . substratkonsentrasjon som kreves for oppnåelse av halvparten av den maksimale hastighet (Vmax). De tidligere substrater og også substratene ifølge oppfinnelsen har begrenset oppløselighet, og av denne grunn skal. substratkonsentrasjonen bære under 1 mM når man arbeider i bufferoppløsning og blodplasma under praktiske betingelser. MedS-2222, som har Km = 0,83 mM, kan man bare gjør full bruk av halvparten av Vmax, mens man med substrater ifølge oppfinnelsen, som har en 2 - 5 ganger lavere Km, kan gjøre bruk av den maksimale hastighet. Således oppnåes store fordeler ved måling av faktor Xa aktivitet med de nye substrater. Deres følsomhet er flere hundre prosent høyere enn for S-2222, hvilket muliggjør en meget større nøyaktighet, en betydelig lavere følsomhetsgrense og sterkt nedsatt volum av blod-prøven.
Enzymforsøk ved hjelp av kromogene substrater er meget egnet for bruk i autoanalyseringsanordninger, og den høyere føl-somhet for disse nye substrater bevirker kortere reaksjonstid i apparaturen, og gi også mulighet til å analysere flere prøver pr. tidsenhet.
De nye substrater ifølge oppfinnelsen kan fremstilles av kromogene eller fluorogene substrater inneholdende aminosyrese-kvensene -Ile-Glu-Gly-Arg- og -Ile-Asp-Gly-Arg- ved forestring eller amidering av den frie y~eller 3-carboxylgruppe med metoder som er vel kjent og alminnelig brukt i peptidkjemien.
De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.
. I tynnskiktskromatografisk analyse av eluater og produk-ter ble der anvendt glassplater med silicågel F_c. (Merck) som
Z d4 absorpsjonsmedium. Det anvendte oppløsningsmiddelsystem er klo-roform, methanol, eddiksyre og vann i volumforholdet 34:4:9:2.
Efter tynnskiktskromatografien ble platene, først studert i UV-lys (254 nm), og derefter ved anvendelse av klor/toluidin-reaksjonen (G. Pataki, Dunnschichtchromatografie- in der Amino-saure- und Peptidchemi, Walter de Gruyter & Co. Berlin, side 125, 1966) som fremkallende metode.
Betydningene av de efterfølgende anvendte forkortelser er som følger:
Aminosyrer:
Disse forkortelser angir aminosyrerester. Den frie ami-nosyre eller peptid er angitt ved hjelp av H- ved aminogruppen, og -0H ved carboxylgruppen.Aminogruppen er alltid angitt til-venstre, og carboxylgruppen tilhøyre.
Om ikke annet er angitt, har alle de anvendte aminosyrer
L-konf igurasj on.
Arg = Arginin
Asp = Aspartinsyre
Glu. = Glutaminsyre
Gly = Glycin
Ile = Isoleucin
Leu = Leucin
Ytterligere forkortelser:
Ac = Acetyl
AcOH = Eddiksyre
Bz = Benzoyl
DCCI = Dicyclohexylcarbodiimid
DMF =.Dimethylformamid
Et^N = Triethylamin
HOBT = a-hydroxybenzotriazol
HOSu = N-hydroxysuccinimid
MeOH = Methanol
OEt = Ethyloxy
OMe = Methyloxy
OpNp = p-nitrofenoxy
OisoPr = Isopropyloxy
pNA = p-nitroanilid
OAE = Kvartær aminoethylsefarose (Pharmacia Fine 0__t m, . ,. , ■ Chemicals)
S0C12 = Thxonylklorid
Eksempel 1 Bz- Ile- Glu ( OMe) - Gly- Arg- pNA • HCl ( M. w. 748 . 2)
Under f uktighetsf rie betingelser, ved 0°C, ble 30/Ul destillert S0C12tilsatt til 0,5 ml absolutt methanol. Efter den første kraftige reaksjon fikk oppløsningen stå ca. 15 minutter ved romtemperatur, og 75 mg (0,10 mmol) Bz-Ile-Glu-Gly-Arg-pNA
HCl (S-2222) ble tilsatt. Oppløsningen ble omrørt 5 timer og derefter fordampet. Den erholdte olje ble oppløst i en liten mengde methanol og renset ved gelkromatografi på en kolonne inneholdende "Sephadex LH-20" (Pharmacia Fine Chemicals) i methanol med methanol som elueringsmiddel. Den rene methylester erholdt efter fordampning av methanolen, ble oppløst i vann og lyofilisert. Utbytte: 30 mg (40 %).
Homogent i henhold til TLC, Rf = 0,33.
[a]p° -40.3° (c 0.5, 50 % -HOAc/H 0)
Eksempel 2 Bz- Ile- Glu( QEt)- Gly- Arg- pNA • HCl ( M. W. 762. 2)
Under fuktighetsfrie betingelser, ved -10°C, ble 60 jXl destillert S0C12tilsatt til 1,0 ml absolutt ethanol. Efter 30 minutter ved romtemperatur ble 150 mg S-2222 tilsatt. Da reaksjonen var fullført efter ca. 15 timer (i henhold til TLC), ble oppløsningen fordampet. Den erholdte olje ble oppløst i en liten mengde 30 % HOAc i H20 og renset ved kromatografi på en kolonne bestående av "Sephadex G 15" (Pharmacia Fine Chemicals) i 10 % HOAc i H20. Den rene ethylester fra eluatet ble lyofilisert.
Utbytte: 70 mg (46 %) .
Homogent i henhold til TLC, Rf = 0,40
[a]^° -37.7° (c 0.5, 50 % H0Ac/H20)
Eksempel . 3 Bz- Ile- Glu( OisoPr)- Gly- Arg- pNA • HCl ( M. w. 776 . 3)
Syntesen ble utført i henhold til den metode som er beskrevet i eksempel 2, men absolutt isopropanol ble anvendt i stedet for ethanol. Reaksjonen ble fullført efter 16 timer. Kromatografi og lyofil^isering ble utført i henhold til de prosedyrer som er beskrevet i eksempel 2.
Utbytte: 90 mg (58 %)
Homogent i henhold til TLC, Rf = 0,44
[a]^° -36.4° (c 0.5, 50 % H0Ac/H20)
Eksempel 4 Bz-Ile-Glu(O-cyclohexyl)-Gly-Arg-pNA-HCl (M.w.
833. 3)
60 pl S0C12ble tilsatt til 1,0 ml tørr cyclohexanol, og efter 1 time ved romtemperatur ble 200 mg S-2222 tilsatt. Når reaksjonen var fullført efter ca. 12 timer, ble oppløsningen fordam-...... pet og kromatograf ert i henhold til prosedyrene beskrevet i eksempler 1 og 2, hvorpå produktet ble lyofilisert. Utbytte: 170 mg (75%). Homogent i henhold til TLC, Rf=0.50 [a^° -38.6° (c 0.5, 50 % H0Ac/H20)
Eksempel 5 Bz-Ile-Glu(0-CH9CH N(CH,),)-Gly-Arg-oNA • HCl
( M. w. 859. 8)
75 mg (0,10 mmol) S-2222 og 100 mg (0,8 mmol) dimethyl-aminoethanol-hydroklorid ble oppløst i 1,0 ml tørr destillert DMF, hvorpå 10 /Ul pyridin, 10 mg HOBT (0,074 mmol) og tilslutt 25 mg (0,12 mmol) DCCI ble tilsatt. Den dannede dicyclohexylurea ble filtrert efter 24 timer, og DFM oppløsningen ble fordampet under redusert trykk. Den gjenværende olje ble oppløst i en liten mengde 95 %'s MeOH - 5 % H20 og renset på en kolonne inneholdende QAE-25 ionebytterharpiks i kloridform. Den samme oppløsningsmiddel-blanding ble anvendt som elueringsmiddel. Ved denne prosedyre ble hydrokloridet av dimethylaminoethylesteren'erholdt fri for andre peptider, men inneholdt noen mindre forurensninger, f.eks. dimeth-ylaminoethanol-hydroklorid. Fraksjonen inneholdende dimethylamino- . ethylesteren ble fordampet og renset ved kromatografi på en kolonne inneholdende "Sephadex G 15" (Pharmacia Fine Chemicals) i 10 H0Ac/H20. Oppløsningen av den rene ester ble lyofilisert.
Utbytte: 60 mg (58 %). Homogent i henhold til TLC, Rf = 0,50.
[a]^° -35.0° (c 0.5, 50 % H0Ac/H20)
Eksempel 6
240 mg (0,33 mmol) S-2222 og 45 mg (0,39 mmol) HOSu ble oppløst i 1 ml tørr destillert DMF. Oppløsningen ble avkjølt til
-5°C, og 120 ml (0,58 mmol)DCCI ble tilsatt. Temperaturen fikk stige til romtemperatur, og efter 4 timer ble oppløsningen igjen avkjølt til 0°C, og den utfeldte dicyclohexylurea ble filtrert og vasket. DMF oppløsningen (ca. 2 ml) ble avkjølt til 0°C, og 0,1 ml rent isopropylamin ble tilsatt. Efter ca. 70 timer ved romtemperatur ble oppløsningen fordampet under redusert trykk, blandet med 5 ml vann og fordampet igjen. Produktet ble oppløst i cal 4 ml 50 %'s H0Ac/H20 og renset ved kromatografi på en kolonne inneholdende "Sephadex G15" (Pharmacia FineChemicals) i 33 " H0Ac/H20. Den samme oppløsningsmiddelblanding ble anvendt som elueringsmiddel. Fraksjonen inneholdende det rene isopropylamid ble fordampet og ionebyttet på en kolonne inneholdende kvartært aminoethylsepha-rose,"QAE25" (Pharmacia Fine Chemicals) i kloridform i 95 %
MeOH 5 % H20. Eluatet ble fordampet,' oppløst i vann og lyofilisert.
Utbytte: 120 mg (47 %). Homogent i henhold til TLC, Rf = 0,3 9
[a]p<5>-30.6° (c 0.5,. MeOH)
Eksempel 7 -
Syntesen ble utført i henhold til fremgangsmåten i eksempel 6, men piperidin ble anvendt i stedet for isopropylamin.
Utbytte: 105 mg (40 %). Homogent i henhold til TLC, Rf = 0,50
[a]^5 -34° (c 0.5, MeOH)
Eksempel 8
Syntesen ble utført i henhold til fremgangsmåten i eksem- . pel 6, men diethanolamin ble anvendt i stedet for isopropylamin.
Utbytte: 120 mg (45 %). Homogent i henhold til TLC, Rf = 0.25
[a]p<5>-31° (c 0.5, MeOH)
Eksempel 9 . ' Bz- Ile- Asp( OisoPr)- Gly- Arg- pNA- HCl ( M. w. 762. 3) 30 jud destillert S0C12ble tilsatt til 0,5 ml tørr isopropanol, og efter 30 minutter ved romtemperatur ble 73 mg (0,10 mmol) Bz-Ile-Asp-Gly-Arg-pNA • HCl (M.w. 720.2) tilsatt. Når reaksjonen var fullført efter ca. 18 timer, ble oppløsningen fordampet, kromatografert og lyofilisert i henhold til prosedyrene beskrevet i eksempler 2, 3 og 4.
Utbytte: 32 mg (42 %)
Homogent i henhold til TLC, R£. = 0.4 6
[a]p<3>-22.7° (c 0.5, 50 % H0Ac/H20)
Eksempel 10 Bz- Ile- Asp ( OEt) - Gly- Arg- pNA * HCl ( II. w. 748 . 2)
Syntesen ble utført i henhold til fremgangsmåten i eksempel 9,'men ethanol ble anvendt i stedet for isopropanol.
Utbytte: 28 mg (37 %). Homogent i henhold til TLC, Rf = 0.40
[a]p<3>-23.5° (c 0.5, 50 % H0Ac/H20)
Eksempel 11
Syntesen ble utført i henhold til fremgangsmåten i eksempel 6,'men Bz-Ile-Asp-Gly-Arg-pNA • HCl ble anvendt som utgangsma-teriale i stedet for S-2222.
Utbytte: 100 mg (40 Homogent i henhold til TLC, Rf = 0.40 , ,25
LCXJD -20.1° (c 0.5, MeOH)
Eksempel 12
Syntesen ble utført i henhold til fremgangsmåten i eksempel 11, men morfolin ble anvendt i stedet for isopropylamin.
Utbytte: 95 mg (35 %)'. Homogent i henhold til TLC, Rf = 0.46
[a]^5 -24.2° (c 0.5, MeOH)
Bestemmelse av Km og Vmax
Km og Vmax ble erholdt ved hjelp av Linev/eaver-Burk-lig-.ningen:
Enzym og substrat ble blandet i en bufferoppløsning, og hydrolysegraden målt spektrofotometrisk. Substratkonsentrasjonen (SQ) ble variert mens enzymkonsentrasjonen ble holdt konstant. Den resiproke hastighet —^— ble derefter nedtegnet mot den resiproke substratkonsentrasjon 1 , og Km og Vmax ble bestemt (tabell 1) fra det erholdte o Lineweaver-Burk diagram.
Claims (3)
1. Spesifikke kromogene enzymsubstrater for serin protease, karakterisert ved at de har den generelle formel:
hvor er acyl, fortrinnsvis acetyl eller benzoyl, R2 er p-nitrofenyl, 3-nafthyl eller 4-methoxy-3-nafthyl, A er Asp eller Glu, substituert i carboxylgruppen fortrinnsvis ved forestring eller amidering, hvor estrene er beregnet å inneholde en kort alkyl, hydroxyalkyl, substituert aminoalkyl eller cycloalkylgruppe, og amidene er beregnet å inneholde en mono- eller disubstituert kort alkyl, hydroxyalkyl, substituert aminoalkylgruppe eller en heterocyclisk gruppe hvori amidonitrogenet danner en del av en piperidin-, morfolin- eller piperazinring.
2. Fremgangsmåte for laboratoriediagnose av serin protease, karakterisert ved at der anvendes spesifikke kromogene enzymsubstrater representert ved den generelle formel:
hvori R^ er acyl, fortrinnsvis acetyl eller benzoyl, R2 er p-nitrofenyl, 3-nafthyl eller 4-methoxy-3-nafthyl, A er Asp eller Glu, substituert i carboxylgruppen fortrinnsvis ved forestring eller amidering, hvor estrene er beregnet å inneholde en kort alkyl, hydroxyalkyl, substituert aminoalkyl eller cycloalkylgruppe, og amidene er beregnet å inneholde mono- eller disubstituert kort alkyl, hydroxyalkyl, substituert aminoalkylgruppe eller en heterocyclisk gruppe i hvilken amidonitrogenet danner endel av en piperidin-, morfolin- eller piperazinring.
3. Fremgangsmåte for fremstilling av spesifikke kromogene enzymsubstrater av generell formel:
hvori R-^ er acyl, fortrinnsvis acetyl eller benzoyl, R2 er p-nit-rofényl-3-nafthyl eller 4-methoxy-3~ nafthyl, A er Asp eller Glu, substituert, i carboxylgruppen fortrinnsvis ved forestring eller amidering, hvor estrene er beregnet å inneholde en kort alkyl,
hydroxyalkyl, substituert aminoalkyl eller cycloalkylgruppe, og amidene, er beregnet å innehoJ.de mono- eller disubstituert kort alkyl, hydroxyalkyl, substituert aminoalkylgruppe eller en heterocyclisk gruppe i hvilken amidonitrogenet danner endel av en piperidin-, morfolin- eller piperazinring, karakterisert ved at en forbindelse svarende til den generelle formel, men hvor A er usubstituert Asp eller Glu, over-føres til ester eller amidform ved omsetning av den frie carboxylgruppe i Asp eller Glu med alkoholen eller.aminet svarende til det resulterende substrat ved metoder som er vel kjent og alminnelig anvendt i peptidkjemien.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE7613463A SE437153B (sv) | 1976-12-01 | 1976-12-01 | Specifika kromogena enzymsubstrat for serinproteaser |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO774092L true NO774092L (no) | 1978-06-02 |
Family
ID=20329625
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO774092A NO774092L (no) | 1976-12-01 | 1977-11-30 | Spesifikke kromogene enzymsubstrater |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4207232A (no) |
| JP (1) | JPS5369693A (no) |
| AT (1) | AT358203B (no) |
| AU (1) | AU514768B2 (no) |
| BE (1) | BE861295A (no) |
| CA (1) | CA1098428A (no) |
| CH (1) | CH637627A5 (no) |
| DD (1) | DD136896A5 (no) |
| DE (2) | DE2760116C2 (no) |
| DK (1) | DK155333C (no) |
| ES (1) | ES464117A1 (no) |
| FI (1) | FI773242A (no) |
| FR (1) | FR2372798A1 (no) |
| GB (1) | GB1565154A (no) |
| HU (1) | HU176983B (no) |
| IL (1) | IL53187A (no) |
| IT (1) | IT1092154B (no) |
| NL (1) | NL178600C (no) |
| NO (1) | NO774092L (no) |
| PL (2) | PL109588B1 (no) |
| SE (1) | SE437153B (no) |
| SU (1) | SU736889A3 (no) |
| ZA (1) | ZA776460B (no) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE7801373L (sv) * | 1978-02-07 | 1979-08-08 | Kabi Ab | Lett spjelkbara substrat for kvantifiering av proteaser |
| US4275153A (en) * | 1978-08-03 | 1981-06-23 | American Hospital Supply Corporation | Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes |
| US4409140A (en) * | 1979-04-23 | 1983-10-11 | Smith Robert E | Substrates and method for determining enzymes |
| CA1161432A (en) * | 1980-02-12 | 1984-01-31 | Lars G. Svendsen | Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes |
| WO1982000641A1 (en) * | 1980-08-25 | 1982-03-04 | Ab Kabivitrum | Peptide substrates for determination of protease activity |
| US4510241A (en) * | 1981-09-03 | 1985-04-09 | Mallinckrodt, Inc. | Peptide-type substrates useful in the quantitative determination of endotoxin |
| US4406832A (en) * | 1981-09-03 | 1983-09-27 | Mallinckrodt, Inc. | Peptide-type substrates useful in the quantitative determination of endotoxin |
| US4448715A (en) * | 1981-11-02 | 1984-05-15 | University Of Miami | Tagged pyroglu-L-Phe-L-Arg derivatives, substrates and assays for kallikrein |
| DE3211254A1 (de) * | 1982-03-26 | 1983-09-29 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zum nachweis des vorliegens einer allergie und zum spezifischen nachweis des fuer die allergie verantwortlichen allergens |
| JPH04501460A (ja) | 1988-09-30 | 1992-03-12 | ザ ユニバーシティ オブ バーモント アンド ステイト アグリカルチュラル カレッジ | 触媒活性セリンプロテアーゼに関する免疫検定法 |
| WO1995004281A1 (en) * | 1993-07-27 | 1995-02-09 | THE UNITED STATES GOVERNMENT, represented by THE ADMINISTRATOR OF THE NATIONAL AERONAUTICS AND SPACE ADMINISTRATION | Quantitative method of measuring cancer cell urokinase and metastatic potential |
| US6297024B1 (en) | 1998-10-15 | 2001-10-02 | Cell Activation, Inc. | Methods for assessing complement activation |
| US6235494B1 (en) | 1999-02-08 | 2001-05-22 | The Scripps Research Institute | Substrates for assessing mannan-binding protein-associated serine protease activity and methods using the substrates |
| AU2004233333A1 (en) * | 2003-04-22 | 2004-11-04 | Avanir Pharmacueticals | Mediators of reverse cholesterol transport for the treatment of hypercholesterolemia |
| US20050159362A1 (en) * | 2003-04-22 | 2005-07-21 | Sircar Jagadish C. | Mediators of reverse cholesterol transport for the treatment of hypercholesterolemia |
| US8329168B2 (en) | 2005-11-15 | 2012-12-11 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Compositions and methods for modulating hemostasis |
| EP2712423A4 (en) * | 2011-02-25 | 2015-06-10 | Wellstat Diagnostics Llc | ANALYZES FOR DETECTING ENZYMATIC ACTIVITY |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2527932C2 (de) * | 1974-07-02 | 1983-04-21 | Pentapharm AG, 4052 Basel | Säureadditionssalze von Tripeptidderivaten und deren Verwendung als Substrate zur Bestimmung von Plasmakallikrein |
| SE407058B (sv) * | 1974-12-05 | 1979-03-12 | Kabi Ab | Nya kromogena enzymsubstrat for serinproteaser |
| CH622286A5 (no) * | 1975-06-23 | 1981-03-31 | Pentapharm Ag | |
| US4137225A (en) * | 1975-07-11 | 1979-01-30 | Ab Kabi | Novel chromogenic enzyme substrates |
| US4061625A (en) * | 1975-07-11 | 1977-12-06 | Ab Kabi | Novel chromogenic thrombin substrates |
-
1976
- 1976-12-01 SE SE7613463A patent/SE437153B/xx unknown
-
1977
- 1977-10-21 IL IL53187A patent/IL53187A/xx unknown
- 1977-10-27 NL NLAANVRAGE7711791,A patent/NL178600C/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-10-31 ZA ZA00776460A patent/ZA776460B/xx unknown
- 1977-10-31 FI FI773242A patent/FI773242A/fi not_active Application Discontinuation
- 1977-11-14 IT IT51808/77A patent/IT1092154B/it active
- 1977-11-14 ES ES464117A patent/ES464117A1/es not_active Expired
- 1977-11-16 US US05/852,006 patent/US4207232A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-11-18 AU AU30771/77A patent/AU514768B2/en not_active Expired
- 1977-11-21 GB GB48288/77A patent/GB1565154A/en not_active Expired
- 1977-11-29 CH CH1461877A patent/CH637627A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-11-29 PL PL1977202501A patent/PL109588B1/pl unknown
- 1977-11-29 PL PL1977216410A patent/PL110803B1/pl unknown
- 1977-11-29 DD DD77202299A patent/DD136896A5/xx unknown
- 1977-11-29 BE BE183005A patent/BE861295A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-11-29 FR FR7735870A patent/FR2372798A1/fr active Granted
- 1977-11-30 NO NO774092A patent/NO774092L/no unknown
- 1977-11-30 SU SU772548501A patent/SU736889A3/ru active
- 1977-11-30 CA CA292,077A patent/CA1098428A/en not_active Expired
- 1977-12-01 JP JP14334077A patent/JPS5369693A/ja active Granted
- 1977-12-01 DE DE2760116A patent/DE2760116C2/de not_active Expired
- 1977-12-01 DE DE2753653A patent/DE2753653C2/de not_active Expired
- 1977-12-01 HU HU77KA1497A patent/HU176983B/hu unknown
- 1977-12-01 DK DK535377A patent/DK155333C/da not_active IP Right Cessation
- 1977-12-01 AT AT859677A patent/AT358203B/de not_active IP Right Cessation
-
1979
- 1979-10-22 US US06/086,970 patent/US4276375A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO774092L (no) | Spesifikke kromogene enzymsubstrater | |
| EP0097630B1 (en) | New thrombin inhibiting compounds | |
| NO135245B (no) | ||
| US4070245A (en) | Substrate for the quantitative determination of proteolytic enzymes | |
| US4508644A (en) | Chromogenic compounds, a process for their preparation and their use | |
| US4457866A (en) | Chromogenic compounds and their use as enzyme substrates | |
| US5035999A (en) | Aminoluciferin derivatives, processes for the production thereof and their application in the determination of enzyme activities | |
| Segal | Kinetic investigation of the crystallographically deduced binding subsites of bovine chymotrypsin Aγ | |
| JPS63173600A (ja) | プロテア−ゼの定量方法およびそれに使用する試薬 | |
| EP0000063B1 (en) | Dipeptide derivatives of 7-(n-alpha-substituted or non-substituted x-arginyl)-amino-4-methyl-coumarin | |
| US4190574A (en) | Substrate for the quantitative determination of plasminogen activators | |
| US4221706A (en) | Chromogenic substrates | |
| US4388233A (en) | Synthetic substrates for enzyme analysis | |
| US4217269A (en) | Dipeptide chromogenic substrates | |
| US4568636A (en) | Tripeptide derivatives | |
| JPS585674B2 (ja) | アルファヒドロオキシジペプチド受媒質類 | |
| CN103558199B (zh) | 蛋白酶荧光检测方法 | |
| US4443367A (en) | Peptide and peptolide substrates for mammalian collagenase | |
| JPS6126917B2 (no) | ||
| GB2140423A (en) | A method capable of determining cathopsin B in the presence of other proteolytic enzymes and compounds useful therefor | |
| US6121239A (en) | Peptide substrates for the identification of factor Xa | |
| DK171845B1 (da) | Tripeptidderivater og fremgangsmåde til fremstilling af samme samt fremgangsmåde til bestemmelse af serinproteaser eller komponenter, der kan samvirke med serinproteaser | |
| CN111196838A (zh) | 一种精氨酸衍生物Cbz-Phe-Arg-AMC的合成方法及应用 | |
| CN111269206A (zh) | 一种精氨酸衍生物Bz-Arg-AMC的合成方法及应用 | |
| JP2660864B2 (ja) | アミノアセトフェノン誘導体及びそれを用いた酵素活性測定法 |