DE2712861C2 - 17-Acetoxy-6-chlor-15β-hydroxy-1α,2α-methylen-4,6-pregnadien-3,20-dion, Verfahren zu seiner Herstellung und dieses enthaltende Arzneimittel - Google Patents

17-Acetoxy-6-chlor-15β-hydroxy-1α,2α-methylen-4,6-pregnadien-3,20-dion, Verfahren zu seiner Herstellung und dieses enthaltende Arzneimittel

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    • C07J—STEROIDS
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    • C07J53/002—Carbocyclic rings fused
    • C07J53/004—3 membered carbocyclic rings
    • C07J53/005—3 membered carbocyclic rings in position 12
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Description

Die Erfindung betrifft das hydroxylierte 1«,2*-Methylensteroid 1 Z-Acetoxy-ö-chlor-15/?-hydroxy-1 λ,2λ-methylen-4,6-pregnadien-3,20-dion, ein Verfahren zu seiner Herstellung und dieses enthaltende Arzneimittel.
U-Acetoxy-ö-chlor-15/?-hydroxy-la,2A-methylen-4,6-pregnadien-3,20-dion besitzt eine starke antiandrogene Wirkung bei geringer gestagener Wirksamkeit.
Zur Bestimmung der antiandrogenen Wirkung wurde die Hemmung der durch Testosteronpropionat bedingten Zunahme des Samenblasen- und Prostatagewichts von Ratten nach subkutaner Applikation bestimmt. Wie die folgende Tabelle 1 zeigt, ist das erfindungsgemäße 17-Acetoxy-6-chlor-15/?-hydroxy-1 Ä,2«-methylen-4,6-pregnadien-3,20-dion (A) genau so stark antiandrogen wirksam wie das starke Antiandrogen 17-Acetoxy-6-chlor-1 «,2«-methylen-4,6-pregnadien-3,20-dion (B).
Tabelle 1
Verbindung Dosis
(mg/Tag)
Testosteronpropionat-Hemmung Samenblase Prostata
mit Bacillus megaterium (ATCC 13 368) fermentiert
Die 15/?-Hydroxylierung erfolgt mit einer Bakterienkultur von Bacillus megaterium.
Die Durchführung der Fermentation erfolgt unter den gleichen Bedingungen, die man bei den bekannten fermentativen Umwandlungen von Steroiden mit Bakterien- und Pilzkulturen anwendet
So werden zunächst in allgemein üblichen Vorversuchen die günstigsten Fermentationsbedingungen, wie zum Beispiel Auswahl des günstigsten Nährmediums, des geeigneten Substratlösungsmittels, der Substratkonzentration, der technischen Bedingungen — wie Temperatur, Belüftung, ph — und der optimalen Zeiten für Germination, Substratzugabe und Substratkontakt am Enzym des Mikroorganismus analytisch, insbesondere dünnschichtchromatographisch. ermittelt.
Dabei hat sich gezeigt, daß es zweckmäßig ist, Konzentrationen von etwa 50—1000 mg Substrat pro Liter Nährmedium einzusetzen. Der pH-Wert wird vorzugsweise auf einen Wert im Bereich von 5—7 eingestellt. Die Züchtungstemperatur liegt im Bereich von 20—400C, vorzugsweise von 25—35°C. Zur Belüftung werden etwa 1 Liter Luft pro Minute pro Liter Kulturbrühe zugeführt. Die Umwandlung des Substrats wird zweckmäßigerweise durch dünnschichtchromatographische Analyse von Probeextrakten verfolgt. Im allgemeinen haben sich nach 50—100 Stunden ausreichende Mengen an hydroxylierten Steroid gebildet.
Nach erfolgter Fermentation werden die Fermentationsprodukte in an sich bekannter Weise isoliert. Die Isolierung kann zum Beispiel in der Weise erfolgen, daß man die Fermentationsansätze mit einem polaren, nicht wasserlöslichen Lösungsmittel, wie Äthylacetat, Butylacetat oder Methylisobutylketon, extrahiert, die Extrakte einengt und die so erhaltenen Rohprodukte gegebenenfalls durch Chromatographie und/oder Kristallisation reinigt.
Beispiel
1,0
1,0
72%
73%
Im Clauberg-Test nach subkutaner Applikation an Kaninchen ist die erfindungsgemäße 15/?-OH-Verbindung A mit 0,03 mg unwirksam (McPhail = 1,1), das bekannte Antiandrogen B ist noch wirksam mit 0,003 mg (McPhail = 1,5).
Tabelle 2
Verbindung
Dosis (mg)
0,03
0,003
Auf Grund der günstigen Dissoziation zwischen antiandrogener und gestagener Wirksamkeit ist die erfindungsgemäße Verbindung besonders gut geeignet zur Behandlung von Krankheiten, die durch Androgene bedingt oder von Androgenen abhängig sind. So kann die Verbindung beispielsweise in Form der wasserlöslichen Estersalze zur lokalen Behandlung von Akne und Seborrhoe Verwendung finden.
Das Verfahren zur Herstellung von 17-Acetoxy-
pg
3,20-dion ist dadurch gekennzeichnet, daß man 17-Acetoxy-6-chlor-1 *,2i*-methylen-4,6-pregnadien-3,20-dion
72% Ein 2-Liter-Erlenmeyerkolben, der 500 ml einer 30
74% Minuten bei 1200C im Autoklaven sterilisierten Nährlö
sung aus 0,1% Pepton, 0,2% Cornsteep liquor, 0,5% Glukose und 0,5% Hefeextrakt — eingestellt auf ph 7,2 — enthält, wird mit einer Schrägagarröhrchen-Kultur von Bacillus megaterium (ATCC 13 368) beimpft und 48 Stunden bei 300C auf einem Rotationsschüttler geschüttelt.
Mit dieser Vorkultur wird dann ein 20-Liter-Fermenter, der mit 15 Liter eines bei 121°C und 1,1 atü sterili-
sierten Mediums gleicher Zusammensetzung wie die
McPhail Schüttelkolben-Vorkultur gefüllt ist, beimpft. Unter Zu-
gäbe von einigen Kubikzentimetern Silicon SH als Anti-I1I schaummittel wird bei 29° C unter Belüftung (10 l/Min.),
1^5 55 0,7 atü Druck und Rühren (220 U/Min.) 24 Stunden ger-
miniert.
Nun entnimmt man dieser Vorfermenter-Kultur unter sterilen Bedingungen 1,8 1 Kulturbrühe und beimpft damit einen 50-Liter-Fermenter, der 28 1 sterilisiertes Nährmedium der gleichen Zusammensetzung wie die Vorfermenter-Kultur enthält, und germiniert unter den gleichen Bedingungen wie im Vorfermenter (29°C, 30 I Luft/Min., 0,7 atü, 220 U/Min.). Nach einer Anwachszeit von 12 Stunden wird eine Lösung von 6 g Cyproteronacetat (17-Acetoxy-6-chlor- l«,2*-methylen-4,6-pregnadien-3,20-dion) in 45 ml Dimethylformamid zugegeben und weiter gerührt und belüftet.
Nach 88 Stunden Kontaktzeit ist das Optimum der
Umwandlung erreichL Der Fermenterinhalt wird nun zunächst mit der Hälfte, anschließend noch einmal mit einem Drittel des Volumens mit Methylisobutylketon durch Ausrühren extrahiert, die Extrakte vereinigt und im Umlaufverdampfer bei 28° C im Vakuum auf 1 Liter konzentriert Das Konzentrat wird im Rotationsverdampfer bei 500C Badtemperatur im Vakuum zur Trockne eingeengt Der Rückstand wird in Methanol aufgenommen, das nicht gelöste Siliconöl (Antischaummittel) abgetrennt und die methanolische Lösung im Vakuum zur Trockne eingedampft
Zur Aufreinigung des Hydroxylierungsprodukts und Abtrennung unumgesetzten Ausgangsmaterials wird der Rückstand über eine Kieselgelsäure Chromatographien und mittels eines linearen Gradienten Hexan— Hexan/Aceton eluiert Nach Kristallisation aus Aceton/ Isopropyläther schmilzt das reine ^-Acetoxy-e-chior-15/?-hydroxy-l<*,2Ä-methylen-4,6-pregnadien-3,20-dion
bei 276 - 277° C. Die Ausbeute beträgt 43%.
20
25
40
45
50
55
60
65

Claims (3)

Patentansprüche:
1. 1 7-Acetoxy-6-chlor-l5/?-hydroxy-1 «^«-methylen-4,6-pregnadien-3,20-riion.
2. Verfahren zur Herstellung von 17-Acetoxy-6-chlor-15/?-hydroxy-1 «,2a:-methylen-4,6-pregnadien-3,20-dion, dadurch gekennzeichnet, daß man 17-Acetoxy-6-chlor-1 Ä,2*-methylen-4,6-pregnadien-3,20-dion mit Bacillus megaterium (ATCC 13 368) fermentiert.
3. Arzneimittel, gekennzeichnet durch den Gehali an der Verbindung gemäß Anspruch 1.
DE2712861A 1977-03-21 1977-03-21 17-Acetoxy-6-chlor-15&beta;-hydroxy-1&alpha;,2&alpha;-methylen-4,6-pregnadien-3,20-dion, Verfahren zu seiner Herstellung und dieses enthaltende Arzneimittel Expired DE2712861C2 (de)

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