SE417973B - Sett att framstella i 15-stellning hydroxylerade 1alfa,2alfa-metylensteroider tillhorande pregnanserien - Google Patents

Description

7803167-1 to fl _ i 2 i vilken R1 och R2 är lika eller olika och betecknar väte, alka- lnoyl~ eller karboxialkanoylgrupper med 1 - 12 kolatomer, och R2 dessutom kan beteckna en kloracetyl-, dietylaminoacetyl- eller mo- nosulfiatgrupp, samt fysiologiskt fördragbara salter av de estrar som är i stånd till saltbildning. to För esterbildning kan man använda de inom steroidkemin van- ligen använda syrorna. Sådana syror är exempelvis organiska alifa- tiska karbon- och sulfonsyror med 1 - 12 kolatomer. De kan även vara afiüiade och/eller flerbasiska och/eller på brukligt sätt sub- stituerade. Som exempel på substituenter skall nämnas aminogrup- per_ochhalogenatomer. I 'D ' Såsom karbonsyror skall exempelvis nämnasí myr-,_ättik-, propion-, smör-, isosmör-, valerian-, isovale- rian-, kapron-, önant-, kapryl-, pelargon-, kaprin- och undecylsy- ra, mono- och triklorättiksyra, oxal-, malon-, bärnstens-I'adipin-, pimelin-, kork-, aminoättik- och díetylaminoättiksyra. I 7Förenin§arned den allmänna formeln I är framför allt även fysiologiskt fördragbara salter av dikarbonsyrahalvestrar med ba- ser och fysiologiskt.fördragbara salter av aminokarbonsyraestrar med.syror.

Dessutom kommer i synnerhet i 15-ställning estrar av oorga- 'niska syror, företrädesvis estrar av svavelsyra, ifråga samt fysio- logiskt fördragbara salter av hemisulfatestrar med baser.

Såsom fysioloniskt fördragbara salter av baser kan alkali-l metall- och jordalkalimetallsalter, isynnerhet natriumsalter, tjä- ,na.' ' I ' För bildning av syraadditionssalter lämpar sig fysiologiskt íördragbara salter av syror, som man vanligtvis använder vid orga- 'niska kväveföreningar. För saltbildning lämpade syror är exempelvis _ klorväte-, bromväte-, fosfor-, ättik-, propion-,_mjölk-, vin-, bärn- stens-, citron-, bensoe-, salicyl-, nikotin-, adamantankarbonsyra etc. ' * De hydroxylerade 1u,2u-metylensteroiderna med den allmänna formeln I är farmakologiskt verksamma substanser. Sålunda har de 7803167-1 nya föreningarna exempelvis en stark antiandrogen verkan med en ringa gestagen verkan.

För bestämning av den antiandrogena verkan bestämdes hämnin- gen av den medelst testosteronpropionat betingade ökningen av sä- desblåse- och prostatavikten hos råttor efter subkutan administrering.

Såsom framgår av nedanstående tabell är föreningen 17-acetoxi-6-klor- -153-hydroxi-1a,2a-metylen-4,6-pregnadíen-3,20-dion (A) enligt upp- finningen exakt lika starkt antiandrogent verksam som den antiandro- gent starkt verksamma föreningen 17-acetoxi-6-klor-1u,2u-metylen-4,6- -pregnadien-3,20-dion (B)- Taoell 1 1 Testosteronpropionat-hämning Förening Dosering mg/dagv _;v_ Sädeshlåsawï _ Prostata A 1,0 12% 'i w ns B 1,0 73% 74% I Clauberg-test är efter subkutan administering på små kaniner 158-OH-föreningen A enligt uppfinningen overksam vid en dosering av 0,03 mg (McPhail = 1,1), under det att den kända föreningen B med antiandrogen verkan fortfarande är verksam vid en dosering av 0,003 mg (McPhail = 1,5).

Tabell 2 Förening Dosering McPhail A - 0,03 1,1 B 0,003 1,5 På grund av den gynnsamma dissociationen mellan antiandrogen och gestagen verkan lämpar sig föreningarna enligt uppfinningen sär- skilt väl för behandling av sjukdomar, som betingas av androgener eller är beroende av androgener. Sålunda kan föreningarna exempelvis finna användning i form av vattenlösliga estersalter för lokal be- handling av akne och seborrë.

Förfarandet för framställning av hydroxylerade 1u,2u-metylen- steroider med den allmänna formeln I kännetecknas av att man fermen- terar en förening med den allmänna formeln II 780316791 'salter,' "II i vilken R1 betecknar detsamma som i formeln I, med Bacíllus megate- ,rium'(ATCC 13568) och, alltefter den slutligen önskade betydelsen av *R1 och-R2 i slutföreningen med formeln I, eventuellt förestrar fria hydroxigrupper i 17- och/eller 15-ställning och överför sura estrar 'med baser och basiska estrar med syror till fysiologiskt fördragbara 'Utförandet av fermenteringen sker under samma förhållanden, som man använder vid de kända fermentativa omvandlingarna av steroi- der med bakterie- och svampkulturer. 1 0 Sålunda bestämmer man först analytiskt, i synnerhet tunn- skiktskrdmatografiskt, medelst allmänt brukliga förförsök de gynn- sammaste fermenteringsförhållandena, exempelvis valet av det gynn- sammaste näringsmediumet, det lämpligaste substratlösningsmedlet, substratkonèentrationen, de tekniska förhållandena, t.ex. temperatur, luftníng, pH-värdet, och de optimala tiderna för germinering, substrattillsättning och substratkontakt till mikroorganismens enzym. 7 Det har därvid visat sig, att det är lämpligt att använda iakoncentrationer av ca 50-1 000 mg substrat per liter näringsmedium.

Mediets pH-värde inställes företrädesvis på ett värde inom området 5-7. Odlingstemperaturen ligger inom området 20-UOOC, företrädesvis 025-35°C. För luftning tillför man ca 1_liter luft per minut per liter ikulturbuljong. Omvandlíngen av substratet följes lämpligen medelst tunnskiktskromatografisk analys av provextrakt. I allmänhet har till- - räckliga mängder av hydroxylerad steroid bildats efter 50-100 timmar.

Sedan fermenteringengslutförts isolerar man på i och för _sig känt sätt fermenteringsprodukterna. Isoleringen kan exempelvis ske - '7803167-1 på så sätt, att man extraherar fermenteringssatserna medelst ett polärt, icke vattenlösligt lösningsmedel, t.ex. etylacetat, butyl- acetat eller metylisobutylketon, indunstar extrakten och eventuellt renar de sålunda erhållna râprodukterna genom kromatografering och/eller kristallisering.

För förestringen kommer de vanligtvis inom steroidkemin använda förfaringssätten ifråga. Då den sekundära hydroxígruppen i 15-ställning och den tertiära hydroxigruppen i 17-ställning uppvisar olika reak- tionsförmåga, så kan hydroxigrupperna även förestras stegvis. Det är dessutom ofta lämpligt att man utgår från föreningar, som redan är förestrade i l7u-ställning, i synnerhet då drastiska förhållanden är nödvändiga för förestring av 17-hydroxigruppen, exempelvis vid för- estring med oorganiska syror eller vid framställning av aminoacylat av motsvarande kloracylat. Den partiella förestringen i 15-ställning åstadkommas företrädesvis i närvaro av en basisk katalysator vid rums- temperatur. Som baser kommer företrädesvis tertiära aminer, t.ex. trietylamin, pyridin, kollidin, eventuellt med tillsats av ü-dimetyl- aminopyridin, ifråga. Som förestringsmedel lämpar sig reaktionsbenägna syraderivat, t.ex. syrahalogenider eller syraanhydrider, av monokarbonsyror.

Förestringen av hydrokigruppen i 17-ställning med en monokarbon- syra utföres medelst härför kända förfaranden. Såsom exempel kan man nämna omsättning med den önskade syrans anhydrid eller halogenid i närvaro av en starkt sur katalysator, t.ex. perklorsyra, p-toluen- sulfonsyra, trifluorättiksyra, vid rumstemperatur eller i närvaro av en basísk katalysator, t.ex. pyridin, kollidin, kinolin, eventuellt med tillsats av U-dimetylaminopyridin, vid temperaturer över rumstem- peratur upp till basens kokpunkt.

Förestringen av hydroxigrupperna i 15- och 17-ställning lyckas även med den fria karbonsyran i närvaro av trifluorättiksyraanhydrid.

Då vid den sura förestringen samtidigt en 3-enolester bildas, så kan enolestergrupperingen selektivt avspaltas på i och för sig känt sätt, exempelvis genom behandling med mineralsyror eller även med p-toluensulfonsyra i alkoholisk lösning.

Förestringen av de fria hydroxigrupperna med dikarbonsyror ut- föres enligt en föredragen utföringsform med en blandning av trifluor- ättiksyraanhydrid och den önskade dikarbonsyran. Man förestrar lämpli- gen i närvaro av ett gentemot reaktionskomponenterna inert lösnings- medel vid en temperatur av l0-50°C. Som lösningsmedel kan såväl med _7ao316?-1 6 vatten blandbara lösningsmedel, t.ex. tetrahydrofuran och dioxan, som även med vatten icke blandbara lösningsmedel, t.ex. bensen, an- vändas. ' " En särskild betydelse har vattenlösligheten av lämpliga salter av föreningar, som är förestrade med en eller två dikarbonsyror. För saltbildning löses de sura halvestrarna ekempelvis i alkohol och neutraliseras med en bas, i synnerhet natronlut. _. För förestring med en oorganisk syra och för framställning av aminoacylat utgår man företrädesvis från föreningar, som redan är iförestrade i l7u-ställning; Sålunda överföras 15-hemisulfat-alkali- metallsalter medelst i och för sig kända förfaranden av l5-hydroxi- föreningar först genom inverkan av pyridin-svaveltrioxid-addukten d till de sura 15-svavelsyraestrarna och dessa sistnämnda överföres därefter på känt sätt med baser till de fysiologiskt fördragbara psalterna; Såsom baser lämpar sig särskilt alkalimetallhydroxider och -alkoholat, i synnerhet natriumhydroxid och -alkoholat.ai idïfivaminoacylaten enligt uppfinningen, exempelvis dietylamino-, piperidino- och morfolinoacetat, kan erhållas medelst kända för- faranden av motsvarande lšehydroxiföreningar medelst en halogen* fettsyraanhydrid eller -halogenid i närvaro av en organisk bas, t.ex. pyridin; via 15-halogenacylat och därpå följande omsättning med den önskade aminen. Som aminer kommer företrädesvis sekundära alifatiska och cykliska aminer ifråga, t.ex.pdietylamin, pyrrolidin, piperidin, piperazin,ïN-metylpiperazin, morfolin etc. i Omsättningen av 15-halogenaoylatet med aminen åstadkommas på ett enkelt sätt därigenom att man upphettar komponenterna med varandra. i Härvid tjänar lämpligen ett överskott av amin som lösningsmedel. _Reaktionen kan principiellt även företagas i utspädd lösning. De sålunda erhållna 15-aminoacylaten kan medelst kända förfaranden över- föras till motsvarande syraadditionssalter. i I Exempel 1 W oEn 2-liter erlenmeyerkolv, som innehåller 500 ml av en i autoklav under 30 minuter vid 120°C steriliseradinäringslösning be- stående av 0,1$ pepton, 0,2$ majsstöpvätska, 0;5% glukos och-0¿5% jästextrakt, inställd på pH 752, ympas med en lutande provrörkultnri av Bacíllus megaterium (ATCC 13 368) och skakas Ä8 timmar vid 30°C på en rotationsskakare.

Med denna föl-kultur vmpas därefter ett QO-liter fermenterings- * kärl; som är fyllt med 15 liter av ett vid l21°C och 1,1 atö steriliserat_medinm med samma sammansättning som skakkolvförkulturen. o Med tillsats av några kubikoentimeter Silicon SH som antiskummedel Eermíneras blandningen vid 29°C med luftning (10 liter/minut), 7803167-1 0,7 atö och omrörning(220 varv/minut) under 2ü timmar.

Från denna förfermenteringskultur tager man nu under sterila förhållanden 1,8 liter kulturbuljong och ympar därmed ett 50 liter fermentcringskärl, som innehåller 28 liter steriliserat näringsmedium med samma sammansättning som förfermenteringskulturen, och germinerar under samma förhållanden som i förfermenteringskärlet (29°C, 30 liter luft/minut, 0,7 atö, 220 varv/minut). Efter en tillväxttid av 12 timmar tillsättes en lösning av 6 g cyproteron-acetat (l7-acetoxi- -6-klor-lu,2a-metylen-4,6-pregnadien-3,20-dion) i M5 ml dimetylformamid och blandningen omröres och luftas.

Omvandlingens optimum har uppnåtts efter en kontakttid av 88 timmar. Innehållet i fermenteringskärlet extraheras först med hälften, därefter ännu en gång med en tredjedel, av dess volym med metylisobutylketon genom utrörning; Extrakten förenas och koncentreras i rotationsevaporator vid 28°C i vakuum till 1 liter. Koncentratet indunstas i rotationsevaporator i vakuum vid en badtemperatur av 5000 till torrhet. Återstoden tages upp i metanol och icke löst silikonolja (antiskummedel) avskiljes och den metanoliska lösningen indunstas i vakuum till torrhet.

För rening av hydroxyleríngsprodukten och avskiljning av icke omsatt utgångsmaterial kromatograferas återstoden på en kiselgel- kolonn och elueras med en linjär gradient hexan-hexan/aceton. Man- erhåller efter kristallisering från aceton/isopropyleter ren l7-acetoxi-6-klor-156-hydroxi-la,2a-metylen-H,6-pregnadien-3,20-dion.

Utbyte: N31. smp.= 276-277°c.

Exemgel 2 Man bereder - under de i exempel 1 beskrivna odlings- och fermenteringsförhållandena - ett 50-liter fermenteringskärl med 28 liter av en Bacillus megaterium-knltur och därtill sättes efter en tillväxttid av 12 timmar 6 g cyproteron (6-klor-l7-hydroxi-lu,2a- -metylen-H,6-pregnadien-3,20-dion) löst i H00 ml dimetylsulfoxid.

Innehållet i fermenteringskärlet extraheras efter en kontakttid av 60 timmar med metylisobutylketon och upparbetas såsom beskrives i exempel l. Man kromatograferar den erhållna râprodukten på en kisel- gelkolonn med användning av lösningsmedelgradienten metylenklorid- ~metylenklorid/aceton och omkristalliserar från aceton/hexan, varvid man erhåller ren 6-klor-156,17-dihydroxi-lm,2u-metylen-H,6-pregnadien- -3,20-dion. i Utbyte: 36%. smp.= 251-253°c. __'?803167~1 8 Exemgel É _ D de av f a) H0 g adipinsyra suspenderas i 300 ml bensen och 120 ml av- destilleras*för_att avlägsna vatten. Därefter kyles blandningen till 500 och vid denna temperatur tillsättes med omrörning 75 g trifluorättiksyraanhydrid. Reaktionsblandningen röres därefter ytterligare 1 timme vid rumstemperatur, varvid en klar lösning bildas. Därefter tillsätter man ing n-acetoxi-s-klor-lsß- -hvdroxi-la,2u-metylen-Ä,6-pregnadien-3,20-dion och rör om den nu mörkbruna lösningen 5 timmar_vid rumstemperatur. Lösningen upparbetas genom att man rör in den i l'liter isvatten, rör om blandningen 15 minuter med ískylning och ställer in pH-värdet medelst 5-normal natriumhydroxidlösning till pH 5. Därefter ertraheras blandningen 3 till 5 gånger med l/2 liter ättikester -varje gång; Extrakten förenas och koncentreras genom indunstning i vakuum till ca l liter. I I * För rening av hemiadipinatet extraheras ättikesterlösningen 5 gånger med 750 ml 3Zig natriumvätekarbonatlösning varje gång och de förenade natriumvätekarbonatlösningarna tvättas 2 gånger med 300 ml ättikester varje gång. Därefter surgör man natriumväte- karbonatlösning med omrörning medelst 5-normal klorvätesyra till ett pH-värde av 3,5-H55 och extraherar 4 gånger med 1/2 liter ättikester varje gång, De förenade ättikesterfaserna tvättas slntligen med en ringa mängd dest. vatten fria från adipinsyra och torkas över natriumsulfat. Man erhåller efter indunstning i vakuum 15-hemiadipinat i form av en gul, oljeartad återstod 'i(l3,5 g). Man erhåller efter omkrístallisering från eter ren l7-acetoxi-l5ß-adipoyloxi-6-klor-la,2u-metylen-H,6-pregnadien- -3,20-dion. ' esmp.= 172-17u°c. _ b) 10 , 2 g 17-acetoxi-lsgß-adipcyioxi-s-klor-lu , za-metylen-u , 6- pregnadien-3,20-dion löses i 50 ml etanol. Lösningen kyles till 5°C och inställes vid denna temperatur med omrörning medelst n/10-normal natriumhydroxidlösning på ett pH-värde av 8,0. Där- iefter fylles lösningen med dest. vatten till en volym av 150 ml. l g aktivt kol tillsättes och blandningen omröres 1 timme vid rumstemperatur. Blandningen filtreras därefter 2 gånger genom ett veckfilter och filtratet destilleras i vakuum vid en bad- temperatur icke överstigande 30-35°C så länge att huvudmängden fav alkohol avlägsnas. Därefter fryser man den färglösa lösningen 7803167-1 9 i ett kylbad till -70°C med roterande rörelse i en rundkolv och frystorkar lösningen, varvid man erhåller 9,8 g l7-acetoxi-l58- -adipoyloxi-6-klor-la,2u-metylen-H,6-pregnadien-3,20-dion, natriumsalt. smp.= 180-2oo°c (sönaeraeining).

Exempel H 1,5 g malonsyra i bensen omsättes under de förhållanden som beskrives í exempel 3a) med 2 ml trifluorättiksyraanhydrid. l g 17-acetoxi-6-klor-156-hydroxi-la,2a-metylen-H,6-pregnadien-3,20-dion tillsättes och blandningen omröres 15 minuter och hälles därefter i isvatten. Man ställer in blandningens pH-värde på 5 och extraherar flera gånger med eter och indunstar de förenade eterlösningarna till torrhet. Man kromatograferar återstoden på en kiselgelkolonn med an- vändning av en linjär lösningsmedelgradient metylenklorid-metylen- klorid/aceton. Man erhåller efter indunstning av huvudfraktionen 665 mg l7-acetoxi-6-klor-156-malonyloxi-la,2u-metylen-H,6-pregnadien- -3,20-dion som en ljus olja, som efter digerering med isopropyleter kristalliserar. smp.: 185-189°c.

Det erhållna hemimalonatet överföras analogt med exempel 3b) till motsvarande natriumsalt. Man erhåller 600 mg 17-acetoxí-6-k1or- -låß-malonyloxi-la,2a-metylen-U,6-pregnadien-5,20-díon, natriumsalt. smp.= 193-195°c.

Exempel 5 H g adipinsyra i 50 ml bensen omsättes under de i exempel 3a) beskrivna förhållandena med 5 ml trifluorättiksyraanhydríd. Därefter tillsätter man 3 g 6-klor-158,17-dihydroxi-la,2u-metylen-4,6-pregna- dien-3,20-dion och rör om blandningen 3 timmar vid 15000. Man uppar- betar blandningen såsom beskrivas i exempel 3a) och kromatograferar den erhållna råprodukten ännu en gång på en kiselgelkolonn (gradient: metylenklorid-metylenklorid/aceton). Man erhåller l5ß-adipoyloxi-6- -klor-17-hydroxi-la,2a-metylen-Ä,6-pregnadien-3,20-dion i form av ett halvkristalliniskt skum (2,2 g), som smälter inom ett område av 1oo-15o°c.

Det erhållna hemiadipinatet omvandlas analogt med exempel 3b) till natriumsalt, varvid man erhåller 2 g 15ß-adipoyloxi-6-klor-l7- hydroxi-lu,2a-metylen-4,6-pregnadien-3,20-dion, natríumsalt. smp.= 160-18o°c (sönaeraelning). _7aol1s?~1 _10 * 2,6 g adipinsyra i 20 ml bensen omsättes under deli exempel 3a) beskrivna förhållandena med 3,3 ml trifluorättiksyraanhydrid.

Därefter tillsätter man 2 g 6-klor-lsß,17-aihyaroxi-la,za-mecylen-u,6- -pregnadien-3,20-dion och rör om blandningen 5 timmar vid rumstempe- ratur. Man upparbetar blandningen såsom beskrivas i exempel 3a) och kromatograferar den erhållna råprodukten för vidare rening ännu en gång på en kiselgelkolonn och eluerar med lösningsmedelgradienten metylenklorid-metylenkloríd/aceton och med tillsats av några droppar konc. klorvätesyra. Man indunstar huvudfraktionen till torrhet och kristalliserar återstoden från en blandning av eter/ättikester/hexan, varvid man erhåller 1,3 g ren 158,17-diadipoyloxi-6-klor-la,2a- , -metylen-H,6-pregnadien-3;20-dion; i v i i " smp.= 130-luo°c (sönaeraelnlng). ai I Det erhållna dihemiadipinatet omvandlas analogt med exempel Éb) till dinatriumsalt, varvid man slutligen erhåller 1,3 g l5B,l7-di- adipoyloxi-6-klor-la¿2a-metylen-U,6-pregnadíen-3,20-dion, dinatrium- dsalt.f' _ eSmp.: 20000 (sönderdelning).

Exemgel 7 7 7 Z I Z _ - 500 mg 17-acetoxi-Gëklor-l58-hydroxi-la;2o-metylen-H,6-pregna- dien-3,20-dion löses ia20 ml pyridin och därtill sattes 10 mlr acetanhydrid samt 500 mg Steglich-bas (4-dimetylamino-pyridin) och blandningen omröres 16 timmar under kvävwgas vid rumstemperatur. Där- efter häller man hlandningen i iskvld 8%ig svavelsyra, extraherar med ättikester, tvättar extraktet neutralt och indunstar det i vakuum till torrhet. Man erhåller, efter kristallisering av återstoden från ättikester/isopropyleter i närvaro av aktivt kol,_üU0 mg ren 158,lïediacetoxi-6-klor-la,2u-metylen-H,6-pregnadien-3,20-dion.; ïaSmp.: 285-287PC._ _ iExemnel 8 d a a dlo ml abs. pyrlain kyles till -15°c och därtill sattes långsam: ddroppvis med omrörning 0,8 ml svaveltrioxid, så att ínnertemperaturen icke överstiger -5°. I denna suspension införes 2,5 g l7-acetoxi-6- -klor-153-hvdroxi-la,2a-metylen-H,6-pregnadien-3,20-dion i 5 ml pyridin. Reaktionsblandningen omröres 30 minuter vid rumstemperatur, spådes därefter med 50 ml vatten och blandningens pH-värde inställes slutligen medelst 9 ml 1-normal natriumhydroxídlösning på 9. Man extraherar blandningen med metylenklorid för att avlägsna pyridinet, 7803167-1 ll inställer pH-värdet medelst l-normal natriumhydroxídlösning på 8 och indunstar blandningen i vakuum. Återstoden löses i metanol, olöst, bildat natriumsulfat avfiltreras, lösningen behandlas med aktivt kol, filtreras och filtratet indunstas på nytt till torrhet, varvid man erhåller 2,1 g natrium-(17-acetoxi-6-klor-la,2c-metylen-3,20-dioxo- -M,6-pregnadien-158-yl)-sulfat.

Smp.: 88-9000.

Exempel 9 En lösning av 2,5 g l7-acetoxi-6-klor-158-hydroxi-la,2a-metylen- -Ä,6-pregnadien-3,20-dion i 12 ml pyridin omröres under kväv/gas vid en temperatur av 0-5°C och därtill sättes 1,5 g klorättiksyraanhydrid i 9 ml abs. eter. Man rör om blandningen ytterligare 5 timmar och låter badtemperaturen så småningom stiga till rumstemperatur. Därefter tillsätter man 0,3 ml vatten och fäller produkten efter 5-10 minuter genom att hälla reaktionslösningen i isvatten. Man suger av och tvättar successivt med Siig klorvätesyra, utspädd natriumvätekarbonat- lösning och vatten, varvid man erhåller 2,9 g råprodukt. Man om- kristalliserar råprodukten tvâ gånger från eter, varvid man erhåller ren l7-acetoxi-6-klor-158-kloracetoxi-la,2a-metylen-H,6-pregnadien- -3,20-dion. smp.: 225-228°o. 1,5 g l7-acetoxi-6-klor-158-kloracetoxi-la,2u-metylen-H,6- -pregnadien-5,20-dion upphettas vid koktemperatur med Ä0 ml dietyl- amin 3 timmar under kväv/gas. Man kyler blandningen till rumstempera- tur, späder den med kloroform och indunstar den i vakuum. Återstoden tages upp i kloroform och tvättas med en utspädd natríumvätekarbonat- lösning och med vatten. Man torkar lösningen över natriumsulfat och indunstar den i vakuum, varvid man erhåller 1,3 g 17-acetoxi-15ß- -dietylaminoacetoxi-6-klor-la,2a-metylen-4,6-pregnadien-3,20-dion som en seg olja.

Denna olja tages upp i 300 ml eter, filtreras genom kol och till det klara filtratet sättes en eterlösning av klorvätesyra till kongosur reaktion. Man erhåller 1,6 g 17-acetoxi-15ß-dietylamino- acetoxi-6-klor-la,2a-metylen-N,6-pregnadien-3,20-dion-hydroklorid.

Smp.: ca 230°C (sönderdelning).

Exempel 10 500 mg 17-acetoxi-6-klor-156-hydroxi-la,2a-metylen-Ä,6- 0-pregnadien-3,20-dion omsättes analogt med exempel 7 medelst önant- syraanhydrid och laurinsyraanhydrid, varvid man erhåller: A7aøz1s7-1 12 f 17-acetoxi-6-klor-15B-heptànbyloxi-la , êa-metylen-ll , ó-pregnadien- -3,20-díon som olja resp. j I 17-acetoxí-6-klor-158-dodekanoyloxí-la,2a-metylen-U,6-pregnadíen- . -3,20-dion sqm olja. A ua '

Claims (1)

1. '7803167-1 _ i un." Patentkrav Sätt att framställa hydroxylerade 1d,2m-metylensteroider med den allmänna formeln I on' I 3 C=O där H1 och R2 är lika eller olika och betecknar väte, alkanoyl- eller karboxialkanoylgrnpper med 1-12 kolatomer och H2 även kan beteckna en kloracetyl~, dietylamínoacetyl- eller monosulfatgrupp, samt fysiologiskt fördragbara salter med baser eller syror av de för saltbildning benägna estrarna, k ä n n e t e c k n a t av att man fermenterar en förening med den allmänna formeln II CH I 3 C=O II i vilken R1 betecknar detsamma som i formeln I, med Bacillus megaterium (ATCC 13368) och, alltefter den slutligen önskade betydelsen av R1 och R2 i slutföreningen med formeln I, even- tuellt förestrar fria hydroxigrupper i 17- och/eller 15-stäl1- ning och överför sura estrar med baser och basíska estrar med syror till fysiologiskt fördragbara salter. ÅNFÖRDA PUBLIKATIONER: