DE2646854A1 - Substanz zur verwendung als blutersatz oder blutstrecker, makromolekulare, wasserloesliche verbindung sowie verfahren zur herstellung eines wasserloeslichen makromolekularen produkts, insbesondere als das sauerstofftransportmaterial in einem blutersatz oder blutstrecker - Google Patents

Substanz zur verwendung als blutersatz oder blutstrecker, makromolekulare, wasserloesliche verbindung sowie verfahren zur herstellung eines wasserloeslichen makromolekularen produkts, insbesondere als das sauerstofftransportmaterial in einem blutersatz oder blutstrecker

Info

Publication number
DE2646854A1
DE2646854A1 DE19762646854 DE2646854A DE2646854A1 DE 2646854 A1 DE2646854 A1 DE 2646854A1 DE 19762646854 DE19762646854 DE 19762646854 DE 2646854 A DE2646854 A DE 2646854A DE 2646854 A1 DE2646854 A1 DE 2646854A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
hemoglobin
groups
dextran
blood
polysaccharide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE19762646854
Other languages
English (en)
Other versions
DE2646854C2 (de
Inventor
Jeffrey Tze-Fei Prof Wong
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
WONG JEFFREY TZE FEI PROF
Original Assignee
WONG JEFFREY TZE FEI PROF
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by WONG JEFFREY TZE FEI PROF filed Critical WONG JEFFREY TZE FEI PROF
Publication of DE2646854A1 publication Critical patent/DE2646854A1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE2646854C2 publication Critical patent/DE2646854C2/de
Granted legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
    • C08B37/0021—Dextran, i.e. (alpha-1,4)-D-glucan; Derivatives thereof, e.g. Sephadex, i.e. crosslinked dextran
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/08—Plasma substitutes; Perfusion solutions; Dialytics or haemodialytics; Drugs for electrolytic or acid-base disorders, e.g. hypovolemic shock
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
    • C07K14/805—Haemoglobins; Myoglobins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B31/00—Preparation of derivatives of starch
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/102499—Blood gas standard or control
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/104998—Glucose, ketone, nitrate standard or control
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/105831—Protein or peptide standard or control [e.g., hemoglobin, etc.]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/108331—Preservative, buffer, anticoagulant or diluent

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

^. Oktober 1976
Frankenforster Straße 137 ^
5060 Bensberg-Refraft
Jeffrey Tze-Fei Wong
Don Mills, Ontario, Kanada
Substanz zur Verwendung als Blutersatz oder Blutstrecker, maakromolekulare, wasserlösliche Verbindung sowie Verfahren zur Herstellung eines wasserlöslichen makromolekularen Produkts.insbesondere als das Sauerstofftransportmaterial in einem Blutersatz oder Blutstrecker
Me Erfindung betrifft eine Substanz* zur Verwendung als Blutersatz oder Blutstrecker, eine makromolekulare, wasserlösliche Verbindung so wie ein Verfahren zur Herstellung eines wasserlöslichen makromolekularen Produkts^insbesondere als das Sauerstofftransportmaterial in einem Blutersatz oder Blutstrecker.
Wegen des schnell steigenden Bedarfs an Blut mit der Ausweitung von medizinischen Behandlungen besteht ein Bedarf zur Entwicklung von Blutersatz und zum effektivsten Gebrauch von verfügbaren Blutvorräten. Dieser Bedarf besteht sowohl in Bereichen, in denen fortgeschrittene medizinische Behandlungsmethoden praktiziert werden, als auch in Bereichen, in denen kostspielige Einrichtungen zur Blutkonservierung und -typisierung nicht verfügbar sind.
Die verschiedensten Substanzen sind schon als Blutersatz vorgeschlagen worden, beispielsweise Dextrangelatin, Polyvinylpyrolidon und Perfluorom-Verbindungen wie Perfluorotributylamin. Diese haben entweder unbefriedigende Sauerstoffbindeeigenschaften oder unerwünschte oder unbekannte Nebeneffekte .
Hämoglobinlösungen sind ebenfalls versucht worden. Hämoglobin ist ein komplexes Proteinmaterial, das Eisenmoleküle enthält, welche einen Großteil von roten Blutkörperchen bei Wirbeltieren bilden. Die Verwendung einer Hämoglobinlösung anstelle von Blut überwindet das Blutgruppenproblem. Hämoglobin ist einfacher als Blut zu lagern. Hämoglobin läßt sich von Blut (tierisch oder menschlich) isolieren und zur Konservierung viel länger als Blut gefriertrocknen.
Hämoglobin wird jedoch schnell aus der Niere im Urin vom kranken Patienten ausgeschieden. Häufige massive Transfusionen von Hämoglobinlösung müssen deshalb erfolgen, und das hohe Haß an Ausscheidung stellt eine
709818/1054
potentielle Gefahr für Patienten mit vorher bestehender Nierenerkrankung dar. Es ist berichtet worden, daß die Halbabgangszeit aus dem Kreislauf von durch Transfusion verabreichtem Hämoglobin nur anderthalb Stunden bei Affen beträgt.
Die Erfindung sieht eine Substanz vor, die als Blutersatz oder Blutstrecker brauchbar ist und die durch das wasserlSjöliche Produkt von chemisch kovalent bindendem Hämoglobin mit Dextran oder Hydroxyäthylstärkepolysaccharid gekennzeichnet ist, das ein Molekulargewicht von etwa 5.000 bis eta 2.000.000 hat.
Die schnelle Ausscheidung von Hämoglobin bei Verabreichung als Lösung dürfte mindestens teilweise auf sein Molekulargewicht zurückzuführen sein. Hämoglobin hat ein Molekulargewicht von etwa 65*000, was offenbar nicht hoch genug ist, um dessen Beibehaltung im Kreislaufsystem für eine angemessene Zeitdauer zu ermöglichen, wenn es getrennt von roten Blutkörperchen und Plasma zugeführt wird. Das chemische Produkt gemäß der Erfindung wird jedoch in angemessener Weise im Körper beibehalten. Das Produkt gemäß der Erfindung hat eine reversible Sauerstoff transportfähigkeit, und es ist offensichtlich auch sonst biologisch akzeptabel. Das Dextran oder die HydroXyäthylstärke hat vorzugsweise ein Molekulargewicht von etwa 5·000 bis etawa 200.000, und noch besser von etwa 20.000 bis 70.000. Innerhalb solcher Molekulargewichtsbereiche geht eine chemische Bindung mit Hämoglobin schnell vonstatten, und die Reaktionslösungen haben geeignete Viskositäten zur leich-
709818/10S4
A-
ten Handhabung. Dextrane mit einem Molekulargewicht von unter 90.000 sind als im wesentlichen nicht allergie-erzeugend bekannt, und sie sind deshalb zur Verwendung im erfindungsgemäßen Zusammenhang wünschenswert.
Das gebundene Produkt aus dem Polysaccharid und Hämoglobin kann eine Eins-zu-Eins-Bindung sein, oder es können, z.B. bis zu 9» Moleküle des Hämoglobins mit einem Molekül des Polysaccharids gebunden sein. Das kann durch die relativen Mengen an Heaktionsmitteln in der Bindungsreaktion und durch die Kontrolle anderer Reaktionsbedingungen wie der Zeit, der Temperatur und des pH-Werts bestimmt werden. Die Produkte gemäß der Erfindung haben Molekulargewichte im Bereich von etwa 70.000 bis 2.00g.000 und vorzugsweise im Bereich von etwa 85.000 bis 135.ΟΟΟΘ.
Der Hämoglobin-Polysaccharid-Komplex kann aus der Bindungsreaktion in einem physiologisch akzeptablen wässrigen Träger fertig zur Verabreichung an einen Patienten gewonnen oder gewonnen und in einem solchen Träger wiederaufgelöst werden.
Bei Verfahren zur Herstellung des erfindungsgemäßen Produkts erfolgt die chemisch covalente Bindung mindestens eines Hämoglobin-Moleküls mit einem Polysaccharid-Molekül. Die Reaktion wird am besten in zwei Hau ptschritten durchgeführt. Im ersten Schritt wird ein modifiziertes Polysaccharid gebildet, das chemische Gruppen enthält, die zur chemischen Wechselwirkung mit dem Hämoglobin in der Lage sind. Beim zweiten Schritt wird das modifizierte Polysaccharid zur Reaktion mit dem
709818/10S4
Hämoglobin gebracht, um das covalent gebundene Produkt gemäß der Erfindung entstehen zu lassen.
Beim ersten Verfahrensschritt tritt das Polysaccharid in Reaktion mit einem Reaktionsmittel, das eine chemische Gruppe hat, die mit den Hydroxyl -Gruppen am Polysaccharid in Reaktion tritt (z.B. Carboxylsäure, Acylhalogenid, Alkylhalogenid, Amido, Hydrazin, Isocyanat oder Amino, das mit den Hydroxylen in Gegenwart eines Aktivators wie Cyanogenbromid oder Perjodat in Reaktion tritt). Darüber hinaus muß dieses Reaktionsmittel in der Lage sein, das das Polysaccharid Gruppen anfügen zu können, die anschließend mit Hämoglobin oder mit einer überbrückenden Verbindung, die anschließend mit Hämoglobin in Reaktion treten kann, reagieren können. Methoden und Reaktionsmittel zum Modifizieren von Polysacchariden durch chemische Reaktion der Hydroxylgruppen daran sind bekannt .
Beim zweiten Verfahrensschritt wird das modifizierte Polysaccharid mit Hämoglobin zur Bindung damit zur Reaktion gebracht, und zwar durch Reaktion von funktionalen Seitengruppierungen am Hämoglobin mit Gruppen, die an das modifizierte Polysaccharid während der Reaktion im ersten Schritt angefügt worden sind. Hämoglobin ist ein Protein und enthält die funktionalen Seitengruppierungen Amino, Phenol, Sulfhydryl, Thiomethyl, Imidazo, Carboxyl und Guanidino, die von Aminosäurebestandteilen abgeleitet sind.
709818/10S4
•5.
Chemische Gruppen, die mit diesen Protein-Funktionalseitengruppierungen in Reaktion treten können und die deshalb beim ersten Verfahreneschritt an das Polysaccharid angesetzt werden können, sind in der Proteinchemie bekannt - siehe zum Beispiel "Chemical Modification of Proteins" von Means & Freeney, herausgegeben von Holden-Day, 1971» und "Advances in Carbohydrate Chemistry", Band 29, Tipson and Horten, herausgegeben von Academic Press, Kapitel von Kennedy über Polysaccharidderivate. Zu Beispielen gehören:
Acylierende Gruppen, zum Besipiel Säureanhydrid, ΪΓ-Acylimidazol, Säureazid, N-Carboxyanhydrid, Diketen, Dialkylpyrocarbonat, Imidoester, 0-Alkylisoharnstoff, S-Alkyl-Isoharnstoff, Sulfonylhalogenid, Sulfonatester und carbodiimid-aktivierte Carboylngruppen. Von diesen ist bekannt, daß sie mit Aminogruppen an Proteienen reagieren, um covalente Bindungen entstehen zu lassen, bei denen Acyl- oder ähnliche Kopplungen vorhanden sind;
Alkylierende Gruppen, die mit Sulfhydryl-(Mereapto), Thiomethyl-, Imidazo- oder Aminogruppen am Protein reagieren, wie zum Beispiel HaIocarboxyl, Maleimid aktiviertes Vinyl, Ithylenimin, Arylhalogenid, 2-Hydroxy-5-Nitrobenzylbromid, aliphatisches Aldehyd und Ketongruppen mit Reduktionsmitteln (die mit der Aminogruppe des Proteins reagieren);
Ester und Amid bildende Gruppen wie Diazocarboxylat und Carbodiimid- und Amingruppen zusammen, die ait COOH am Protein reagieren;
709818/1054
Disulfid bildende Gruppen, die mit den Sulfhydrylgruppen am Protein reagieren, wie 5t5'-Dithiobis-(2-lTitrobenzoat)-Gruppen und Alkylmercaptangruppen (die mit den Sulfhydrlgruppen am Protein in Gegenwart von Oxidationsmitteln wie Jod reagieren);
Dicarbonlygruppen wie Cyclohexandiongruppen und andere 1,2-Diketongruppen, die mit den Guanidinoarten von Protein reagieren;
Diazogruppen, die mit Phenolgruppen am Proteinmolekül reagieren;
Reaktionsgruppen aus der Reaktion von Cyanogenbromid mit dem Polysaccharid, die mit Aminogruppen am Protein reagieren;
Vorzugsweise wird ein modifiziertes Polysaccharid mit Gruppen erzeugt, die mit den Sulfhydrylgruppen des Hämoglobins reagieren. Besonders bevorzugte Gruppen sind die Halocarboxylatgruppen.
Spezielle Beispiele von bevorzugten Methoden zur Herstellung des Komplexes gemäß der Erfindung sind wie folgt:
Methode I; Das Polysaccharid (PS) zunächst mit Cyanogenbromid CNBr zur Reaktion bringen, das eine aktiviertes Zwischenprodukt bildet, das mit Diaminoäthan reagiert, um die folgende Verbindung entstehen zu lassen:
( PS ) -O -C -NH-CH2CH2 -NH2
Aainoäthyl-Isoureido-Polysaccharid
709818/1054
Die Bindung zwischen der Ähylgruppe und Dextran ist mit größter Wahrscheinlichkeit eine Isoharnstoff-Bindung, obgleich andere Arten chemischer Bindungen nicht völlig ausgeschlossen werden. Das auf diese Weise erhaltene Aminoäthyl-Isoureido-Detran wird dann durch Bromacetylbromid acyliert, um Bromacetyl-Aminoäthyl-Isoureido-Polysaccharid entstehen zu lassen:
+ 0
fln „
(PS)-O-C-NH-CH2CH2-NH-C-CH2-Br
Dieses wiederum reagiert mit den Sulfhydrylgruppen von Hämoglobin (HB), um Hämoglobin-S-Acetylaminoäthyl-Isoureido-Polysaccharid zu bilden:
4NH 0
η η
(PS)-0-C-NH-CH2CH2-NH-C-CH2-S-(HB)
Methode II: Das Polysaccharid (PS) zunächst mit 2-Chloräthylamin zur Reaktion bringen, um Aminoäthyl-O-Poleysaccharid zu bilden:
(PS)-O-CH2CH2-NH2
Ähnlich wie in der Methode I entsteht durch eine sukzessive Reaktion davon mit Bromacetylbromid und Hämoglobin (HB) Hamoglobin-S-Acetylaminoäthyl-O-Polysaceharid:
(PS)-O-CH2CH2-NH-C-CH2-S-(Hb)
709818/1054
Methode III; Das Polysaccharid (PS) mit Hatriumperjodat zur Reaktion bringen, um das Dialdehyd zu bilden:
OH CHO
(PS)
+ Perjodat (PS) OH CHO
Die Reaktion zwischen dem Dialdehyd und den Aminogruppen von Hämoglobin (HB) ergibt Hämoglobin-N-Dextran:
Ή (HB)
Durch richtige Einstellung der Bedingungen, unter denen das modifizierte Polysaccharid mit dem Hämoglobin zur Reaktion gebracht wird, läßt sich eine Ausbeute von mehr als 90$ gebundenen Komplexprodukts erhalten, was die Trennung des Produkts von Rückstands-Reaktionsmitteln unnötig macht. Wenn das modifizierte Polysaccharid beispielsweise N-Bromacetyl-Aminoäthylisoureido-Dextran (Br-Dextran) ist, das nach der vorstehenden Beschreibung hergestellt worden ist, können die Konzentrationen des Hämoglobins und von Br-Dextran in der Bindungs-Reaktionsmittellösung und die Reaktionszeit eingestellt werden, um Ausbeuten von mehr als 9Ο9έ gebundener Produkte zu liefern. Eine zu hohe Konzentration von Reaktionsmitteln führt zur Gelierung der ReaktionsmittelBsung und zur Bildung eines quervernetzten Produkts mit einem exzessive hohen MoIe-
- 10 -
709818/1054
kulargewicht, was gewöhnlich unerwünscht ist. Vorzugsweise wird ein Molverhältnis von Br-Deitran zu Hämoglobin benutzt, das nahe bei 1 liegt oder das unter 1 liegt, wenn ein Dextran mit hohem Molekulargewicht benutzt wird. Die Bildung eines quervernetzten Produkts läßt sich auch durch Senken des pH-Werts unterbinden, um die Alkylierungsreaktion zu stoppen, oder durch Zusetzen von Mercaptoäthanol oder Cystein, um mit dem Br-Dextran im Wettstreit mit den Hämoglobin-SuIfhydrylen zu reagieren.
Beispiel 1 - Herstellung des Dexträn-Hämoglobing)mplexes
0,3 g Cyanogenbromid wird in 3 ml Acetonitril aufgelöst lind 100 ml 2$iger Dextranlösung (Molekulargew. 200.000) zugesetzt. Der pH-Wert wird auf 10,8 mit 1 M NoOH für die Dauer von 5 Minuten gehalten. Dann werden 2 ml Diamino*äthan zugegeben. Der pH-Wert wird auf 9t5 mit konzentrierter HCl eingestellt, und dieses Reaktionsgemisch läßt man über Nacht stehen.
Das Gemisch wird gründlich gegen destilliertes Wasser dialysiert und gefriergetrocknet. Das gefriergetrocknete Aminodextram kann lange Zeit gelagert werden.
Alles aktivierte Dextran, das gewonnen worden ist (1,6 bis 1,7 g), wird in 50 ml 0,1-Phosphat-Pufferlösung, pH-Wert 7,0 aufgelöst, und 2 ml Bromacetylbromid werden sehr langsam zugegeben, und zwar unter heftigem
- 11 -
709818/1054
Umrühren für die Dauer von 2 Stunden. Der pH-Wert wird konstant auf 7fO durch die Zugabe von 1M NaOH gehalten. Wenn die Reaktion beendet ist, wird das Gemisch gründlich gegen destilliertes Wasser dialysiert und dann gefriergetrocknet. Man erhält 1,4 g bromiertes Dextran bzw. Br-Dextran.
1 g Br-Bextran wird 30 ml einer 2 bis 3$igen Lösung menschlichen Hämoglobins in 0,1 M Hatriumbicarbonat-Pufferlösung, pH-Wert 9»5» zugegeben, und die Reaktion läßt man über Nacht vonstattengehen.
Dextran-Hämoglobin und freies Hämoglobin werden an einer Sephadex-G-200-Säule voneinander getrennt. Die Ausbeute von Dextran-Hämoglobin beträgt 70 bis 80/6 des gesamten zugesetzten Hämoglobins.
Beispiel 2 -Nierenausscheidung von Hämoglobin und Dextran-Hämogücbin durch Ratten
um die Wirksamkeit des Komplexes gemäß der Erfindung als Blutersatz zu testen, wurden 3 ml einer 2^igen Dextran-Hämoglobin-Komplexlösung, die nach Beispiel 1 hergestellt worden war, in eine Wistar-Ratte infundiert, und die Menge an vom Tier ausgeschiedenen Dextran-Hämoglobin wurde durch Waschen der Blase mit einem ständigen Strom physiologischer Sole und durch Messen der Menge an aufgelöstem Hämoglobin in der Spülung als eine Punktion der Zeit geschätzt. Ein genau gleiches Kontrollexperiment wurde durchgeführt, außer daß 3 ml einer 2^igen Hämoglobinlösung
- 12 -
709818/1054
benutzt wurden. In beiden Fällen wurde der Hämoglobingehalt sepektrophotometrisch in Einheiten der optischen Dichte bei 415 fcm bestimmt.
Die Ergebnisse sind graphisch in der beigefügten Darstellung gezeigt. Es handelt sich dabei um eine graphische Wiedergabe der optischen Dichte, bezogen auf die Zeit, für die jeweiligen Experimente. Wie zu sehen ist, ist die Ausscheidungsrate von Hämoglobin viel höher als die Ausscheidungsrate des Dextram-Hämoglobin-Complexes.
Dieses Experiment demonstriert, daß Dextran-Hämoglobin potentiell ein viel braichbarerer Blutersatz als freies Hämoglobin bezüglich seiner wesentlich besseren Rückbehaltung durch das Tier gegen eine Nierenausscheidung ist.
Beispiel 3
2 g Dextran mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht von 110.000 wurden in 75 ml destilliertem Wasser aufgelöst, der pH-Wert wurde auf 10,8 mit 2M KaOH eingestellt, und diesem wurde 0,3 g Cyanogenbromid, aufgelöst in 3 ml Acetonitril, unter Umrühren bei Raumtemperatur zugesetzt. Der PH-Wert wurde fünf Minuten lang durch Zusetzen von 2 M NaOH auf 10,8 gehalten. Der pH-Wert wurde dann auf etwa 2,0 bis 2,5 mit konzentrierter HCl eingestellt, und die Lösung wurde eine weitere Minute lang umgerührt. 3 ml Diaminoäthan wurden zusammen mit zusätzlicher HCl zugegeben, um zu verhindern, daß der pH-Wert 9f5 überschritt. Der endgültige pH-Wert wurde auf 9,5 eingestellt. Die Lösung wurde über Nacht
- 13 -
709818/10 54
bei 4 Tungerührt. Das entstandene Aminoäthylamino-Dextran wurde in einen Bio-3?iber-50-Beeher (Bio-Bad Laboratories) gegen entionisiertes Wasser dialysiert, bis durch Ifinhydrin kein freies 1min in dem Dialysat entdeckt werden konnte. Die dlalysierte Lösung wurde lyophilisiert, um ca. 1,6 g getrockneten Aminoäthylamino-Hexträn zu liefern. Das wurde in 50 ml 0,1 M Phesphat-Pufferlösung alt einem pE-¥ert von 7,0 aufgelöst, und 3 ml Bromacetylbromid wurden durch eine Pasteuer-Pipette mit einer fein gezogenen Kapillarenspitze während einer Zeitdauer von 60 Hinuten zugesetzt. Während der gesamten Zeit wurde die Lösung heftig in einem Eiswasserbad umgerührt und auf einem pH-¥ert τοη 6,6 bis 6,8 mittels eines ρΞ-Stats durch Zugabe von 2 M HaOH-Lösung während der Zugabe von Broaacetylbromid gehalten. Danach wurde die Lösung gegen entionisiertes Wasser dialysiert, bis in dem Dialysat durch Silbernitrat kein freies Brom entdeckt werden konnte. Ca. 1,5 g Br-Bextram wurden bei der Lyophilisierung erhalten. Das Experiment wurde unter Yerwendung von anderen Bex tränen mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht von 110.000, 70*000, 40.000 und 20.000 wiederholt. Der Bromgehalt der verschiedenen synthetisierten Br-Dextrame, bestimmt auf der Basis der Elementenanalyse, lag im Bereich von 9-11 Glucoserückständen pro Brom*torn.
Das in dieser Weise gebildete Br-Dextran wurde mit Hämoglobin gebunden, indem eine vorgeschriebene Menge in 6 ml Hämoglobinlösung aufgelöst wurde (die 2,5, 5 oder IO96 Hämoglobin in 0,1 M Hatriumbicarbonat, pH-Wert 9*5» enthielt). Di« Bindung wurde unter ständigem Umrühren bei 40C vonstattengehen gelassen. Die Ausbeuten an gebundenen Produkten wurden
- 14 -
709818/1054
-A
duerch Durchleiten des Reaktionsgemisches an einer Sephadex-9,150-Säule mit einer O^SM-Phosphat-Pufferlösung, ph-Wert 7»5t bestimmt. Der Hämoglobingehalt wurde durch Absorption bei vorgeschriebenen Wellenlängen bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 angegeben.
Diese Ergebnisse zeigen, daß mit jedem Dextram über 90$ Ausbeuten von gebundenem Produkt durch geeignete Wahl von Experimentbedingungen erhalten werden können.
Beispiel 4 - Herstellung von Dextran-Hämoglobin-Komplex durch Methode II
1 g Dextram (Molekulargewicht 40.000) wurde gründlich mit 1 ml Chloräthylamin gemischt, das als die obere Phase von einer Zugabe konzentrierten NaOH zu Chloräthylaminhydrochlorid erhalten wurde. Das Gemisch wurde mit 0,4 ml konzentrierten NaOH weiter gemischt, in eine verschlossene Röhre gesetzt und bei 120 C eine Stunde lang im Autoklaven behandelt. Dann wurde 1 ml Chloräthylamin und 0,4 ml konzentrierten NaOH zugesetzt, und das Gemisch wurde wiederum eine Stunde lang bei 120° im Autoklaven behandelt. Das wurde noch einmal wiederholt. Nach dem Kühlen wurde das Gemisch gründlich gegen destilliertes Wasser dialysiert und schließlich in 11 ml 0,1 M Phosphat-Pufferlösung gegeben, pH-Wert 6,8.
Diese Lösung aus Aminoäthyl-0-Dextran wurde mit langsamer Zugabe von 0,5 ml Bromacetylbromid während einer Zeit von etwa einer Stunde acyliert. Sie wurde gegen destilliertes Wasser gründlich dialyisert und gefriergetrocknet.
- 15 -
709818/1054
0,1 g des gefriergetrockneten Bromacetyl-Aminäthyl-O-Dextrans wurde 1,7 ml 5$ menschlichen Hämoglobins in 0,1 M Natriumbicarbonat-Pufferlösung, pH-Wert 9i5i zugesetzt und 48 Stunden langauf 4°C gehalten. Die Chromatographie nach Sephadex zeigte, daß über 90% des Hämoglobins in der Form von Dextran-Hämoglobin in Bindung war.
Beispiel 5 - Herstellung von Dextran-Hämoglobin-Komplex nach Methode III.
1 ml einer 12$igen wässrigen Lösung Natriumperjodat wurde 10 ml einer 10$igen wässrigen Lösung ^extran zugegeben, und das Gemisch lißeß man über Nacht im Dunkelen bei 4 C stehen. Eine 3$ί£β Lösung Natrlumbisulfit wurde zugegeben, bis das Gemisch braun wurde, und dann, wiederum, farblos. Das Gemisch wurde gegen destilliertes Wasser dialysiert, um die Dextrandialdehyd-Lösung zu ergeben. Es wurde dann 2 Volumen 3^igen stromafreien Hämoglobins in 0,3 M Natriumbicarbonat-Pufferlösung, pH-Wert 9*5» zugesetzt. Eine Bindung von Hämoglobin mit Dextran ließ man bei 4 C über Nacht vonstattengehen. Der entstandene Dextran-Hämoglobin-Komplex wurde von nicht gebundenem Hämoglobin durch Chromatographie mit einer Sephadex-G-200-Säule getrennt. Man erhielt eine Ausbeute von ca. 60$ gebundenen Produkts.
Beispiel 6 - Nierenausscheidung von Hämoglobin und Dextran-Hämoglobin durch Kaninchen
Männliche Kaninchen mit Körpergewichten von 3,3 bis 3»5 kg wurden mit
- 16 -
709818/1054
0,1 g ITatriunpentothal narkotisiert. Eine Lösung Hämoglobin oder Bextran-Hämoglobin (Molekulargewicht von Dextran: 200.000 bis 275.000) gemäß der Erfindung in einer Standard-Nierendialysierungs-Pufferlösung (nach Babiner et al, 1967» J· Exp. Med. 126, II27-II42) mit eine» Gehalt von 20 »Ci (Mikro-Curie) H Methoxyinulin, wurde in jedes Tier durch die Sandohrader mit 1,1 al Minute infundiert. Nach dem Infundieren der !lösung wurde die Infusion mit der gleichen Bate mit der Pufferlösung fortgesetzt, um den urinären Ausgang beizubehalten. In Intervallen wurde die Blase mit drei 5-»l-Partien Obiger Sole unter Verwendung eines Katheters Foley Ho. 8 (3 ml) ausgespült, und nach einem Schleudern bei 3OOO x g für die Sauer von 10 Minuten zum Entfernen eventuellen absetzbaren Materials wurde das aufgelöste Hämoglobin oder Bextran-ESmoglobin in den kombinierten Spülungen auf der Basis der Absorption bei 576 um bestimmt. Der H -Inulingehalt in den kombinierten Spülungen wurde durch Skintillationszählung mit einer Korrektur für die Abschreckung durch Hämoglobin gemessen; ein Fremdstrahlungsstandard im Chicago-Mark-II-Nuklearzähler wurde zum Bestimmen der Abschreckung benutzt. Sie Plasmakonzentration von Hämoglobin oder Sextran-Hämoglobin wurde zu verschiedenen Zeiten durch Abnehmen von Blutproben aus der Halsschlagader und Durchführung von Absorptionsmessungen mit den Proben bei 576 na nach Sedimentierung der Erythrozyten bestimmt.
Teste wurden unter Verwendung von 50-ml- oder 30-ml-Proben von Hämoglobin oder Sextran-Hämoglobin durchgeführt, das das Äquivalent von 156 Hämoglobin enthielt.
- 17 -
709818/1054
Es ist festgestellt worden, daß das Dextran-Hämoglobin, besonders das, das durch die Methode nach Beispiel 1 und 3 hergestellt worden ist, durch die Nieren in einer wesentlich geringeren Rate ausgeschieden wird und aus dem Kreislauf wesentlich langsamer entfernt wird als freies Hämoglobin, obwohl die Nierenfunktion bei den Tieren, die mit Dextran-Hämoglobin infundiert wurden, wie durch Inulin-Exkretion nachgewiesen, unbeeinträchtigt war. Ferner wurde seitdem wiederholt beobachtet, daß bei verschiedenen Tieren und mit verschiedenen Infusionsdosierungen dieses ungleiche physiologische Verhalten von Dextran-Hämoglobin und freiem Hämoglobin auf die unterschiedliche Natur der Substanzen zurückzuführen ist, nicht auf irgendeine Änderung beispielsweise im Bluthaptoglobingehalt der Versuchstiere.
Die Sauerstoffbindeeigenschaften von Produkten gemäß der Erfindung werden durch die Methode von Benesch et al (1965) Anal. Biochem. V^, 81,87 bestimmt. Es ist festgestellt worden, daß im Vergleich zu Hämoglobin die Produkte gemäß der Erfindung dazu neigen, eine etwas größere Affinität auf Sauerstoff zu zeigen, die essentielle Sauerstofftransport- und Lösefähigkeit von Hämoglobin jedoch bewahren. Wie durch die HaIbeättigungs-Sauerstoffspannung gemessen, zeigt derDExtran-Hämoglobin-Komplex, der nach der vorstehend beschriebenen Methode I hergestellt worden ist, eine etwa 2,5-fach» größere Affinität auf Sauerstoff im Vergleich zu freiem Hämoglobin. Die Sauerstoffaffinität des Komplexes kann durch geeignete chemische Behandlung des Hämoglobins geändert werden, und zwar vor oder nach der Bindung mit dem Polysaccharid, bei-
- 18 -
709818/1054
spielsweise durch Reaktion desselben mit Pyridoxalphosphat und durch Reduktion mit Natriumborohydrid.
Tabelle 1
Dextran
Molekular
gewicht		 $Br-Dextran
in Reakt.-m.
Soln 		io Hämoglobin
in Reakt-B.
Soln 		Molverh.
Dextran/
Hämoglobin		 Reakt.-
zeit		 Viskos.
(Centi-
stoke)		 io Ausbeute
gebunden.
Produkt
200.000 3,33 5,0 0,21 24 35,19 96
200.000 3,33 5,0 0,21 48 geliert
200.000 3,33 2,5 0,43 24 9,86 97
200,000 1,66 5,0 0,11 24 7,56 92
200,000 1,66 5,0 0,11 48 8,47 96
110,000 3,33 5,0 0,39 24 20,94 95
110,000 3,33 5,0 0,39 48 45,29 97
110.000 3,33 5,0 0,39 72 geliert
110,000 3,33 2,5 0,78 24 7,43 97
110,000 1,66 5,0 0,19 24 6,43 85
110.000 1,66 5,0 0,19 48 7,39 93
110.000 1,66 5,0 0,19 72 8,07 95
70.000 3,33 5,0 0,61 24 19,40 99
70.000 3,33 2,5 1,22 24 6,72 98
70.000 1,66 5,0 0,31 24 5,81 87
70.000 1,66 5,0 0,31 48 6,49 94
70.000 1,66 5,0 0,31 72 6,90 96
40.000 3,33 10,0 0,54 24 15,37 83
40.000 3,33 10,0 0,54 48 20,10 90
40.000 3,33 10,0 0,54 72 22,65 94
40.000 3,33 5,0 1,07 24 6,32 96
40.000 3,33 2,5 2,15 24 4,14 99
40.000 1,66 5,0 0,54 72 4,29 92
20.000 3,33 10,0 1,07 48 8,91 97
20.000 3,33 10,0 1,o7 72 10,24 98
20.000 1,66 5,0 1,07 72 3,07 94
709818/1054
Leerseite

Claims (7)

P atentansprüche
1. Substanz zur Verwendung als Blutersatz oder Blutstrecker zum Verabreichen an Menschen- oder Tierpatienten, bestehend aus einer wässrigen Lösung oder einer Suspension eines waasserlöslichen-makromolekularen^. Sauerstoff transportierenden Stoffs, dadurch gekennz e i c h ne t , daß der Stoff das makromolekulare Produkt ist, das durch eine chemisch covalente Bindung von Hämoglobin und eines Polysaccharide entsteht, mit einem Molekulargewicht von etwa 5*000 bis etwa 2.000.000, wobei das Polysaccharid entweder Dextran oder Hydroxyäthylstärke ist.
2. Substanz nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Stoff das makromolekulare Produkt ist, das durch Bindung von Hämoglobin mit Dextran mit einem Molekulargewicht von etwa 20.000 bis etwa 70.000 entsteht.
3· Substanz nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Stoff das makromolekulare Produkt ist, das durch Reaktion von N-Bromacetyl-Aminoäthyl-Isoureido-Dextran mit einem Molekulargewicht von etwa 5»000 bis etwa 200.000-mit Hämoglobin entsteht.
4* Verfahren zur Herstellung eines wasserlöslichen makromolekularen Produkts/, verwendbar als das Sauerstoff transportierende Material in einem Blutersatz oder Blutstrecker, dadurch gekenn-
- 20 -
709818/1054 original inspected
zeichnet, daß das Hämoglobin chemisch covalent mit einem PoIysaccharid gebunden wird, das ein Molekulargewicht von etwa 5·000 bis etwa 2.000.000 hat, wobei es sich bei dem Polysaccharid entweder um Dextran oder um Hydroäthylstärke handelt.
5· Verfahren nach Anspruch 4» dadurch gekennzeichnet, daß in einem ersten Schritt das Polysaccharid mit einem geeigneten Reaktionsmittel zur Bildung eines modifizierten Polysaccharids mit chemischen Gruppen zur Reaktion gebracht wird, die zur Reaktion mit Seitengruppen am Hämoglobin fähig sind und aus acylierenden Gruppen, alkylaierenden Gruppen, ester- und amid-bildenden Gruppen, disulfidbildenden Gruppen, Dicarbonylgruppen, Diazogruppen und reaktiven Gruppen ausgesucht werden, die durch Reaktion von Cyanogenbromid mit dem Polysaccharid gebildet werden, und daß in einem anschließenden Schritt das modeifizierte Polysaccharid mit Hämoglobin zur Reaktion gebracht wird.
6. Verfahren nach Anspruch 4» dadurch gekennzeichnet, daß in einem ersten Schritt Dextran mit einem angenäherten Molekulargewicht von 20.000 bis 70.000 mit Cyanogenbromid zur Reaktion gebracht wird, daß in einem zweiten Schritt das Produkt aus dem ersten Schritt mit Diaminoäthan zur Reaktion gebracht wird, daß in einem dritten Schritt das Produkt aus dem zweiten Schritt mit Bromacetylbromid zur Reaktion gebracht wird und daß in einem vierten Schritt das Produkt aus
- 21 -
709818/1054
— Sn —
dem dritten Schritt mit Hämoglobin zur Reaktion gebracht wird.
7. Verfahren nach Anspruch 4» dadurch gekennzeichnet, daß in einem ersten Schritt Dextran mit einem angenäherten Molekulargewicht von 10.000 bis 90.000 mit einem Perjodat zum Anlegen von Dialdehydgruppierungen daran zur Reaktion gebracht wird und daß in einem zweiten Schritt das Produkt aus dem ersten Schritt mit Hämoglobin zur Reaktion gebracht wird.
f 8.)Makromolekulare, wasserlösliche Verbindung, gekennzeichnet durch die allgemeine Formel
(PS) - X - HB,
in der (PS) Dextran oder Hydroxyäthylstärke mit einem Molekulargewicht von etwa 5·000 bis 2.000.000 darstellt, X eine covalent gebundene chemische Brücke darstellt und HB Hämoglobin darstellt.
709818/1054
DE19762646854 1975-10-22 1976-10-16 Substanz zur verwendung als blutersatz oder blutstrecker, makromolekulare, wasserloesliche verbindung sowie verfahren zur herstellung eines wasserloeslichen makromolekularen produkts, insbesondere als das sauerstofftransportmaterial in einem blutersatz oder blutstrecker Granted DE2646854A1 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CA238,305A CA1055932A (en) 1975-10-22 1975-10-22 Blood substitute based on hemoglobin

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE2646854A1 true DE2646854A1 (de) 1977-05-05
DE2646854C2 DE2646854C2 (de) 1989-05-03

Family

ID=4104351

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19762646854 Granted DE2646854A1 (de) 1975-10-22 1976-10-16 Substanz zur verwendung als blutersatz oder blutstrecker, makromolekulare, wasserloesliche verbindung sowie verfahren zur herstellung eines wasserloeslichen makromolekularen produkts, insbesondere als das sauerstofftransportmaterial in einem blutersatz oder blutstrecker

Country Status (11)

Country Link
US (1) US4064118A (de)
JP (1) JPS6021124B2 (de)
AU (1) AU510466B2 (de)
BE (1) BE847462A (de)
CA (1) CA1055932A (de)
DE (1) DE2646854A1 (de)
FR (1) FR2328478A1 (de)
GB (1) GB1549246A (de)
IL (1) IL50697A (de)
NL (1) NL185131C (de)
SE (1) SE429404B (de)

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3029307A1 (de) * 1980-08-01 1982-03-04 Dr. Eduard Fresenius, Chemisch-pharmazeutische Industrie KG, 6380 Bad Homburg Haemoglobin enthaltendes blutersatzmittel
EP0201618A1 (de) * 1983-06-09 1986-11-20 Wolfgang Prof. Dr.Dr. Barnikol Verfahren zur Polymerisation von Hämoglobin mittels verknüpfender Reagenzien
WO1998001158A3 (de) * 1996-07-08 1998-03-19 Fresenius Ag Hämoglobin-hydroxyethylstärke-konjugate als sauerstoff-transport-mittel
DE10237442A1 (de) * 2002-08-16 2004-03-11 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Hochverzweigte, niedrig substituierte Stärkeprodukte
EP1671654A2 (de) 2001-03-16 2006-06-21 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hydroxyalkylstärke-Wirkstoff-Konjugate
EP1681303A1 (de) 2002-09-11 2006-07-19 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylierte Polypeptide, besonders HASyliertes Erythropoietin
US7538092B2 (en) 2002-10-08 2009-05-26 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Pharmaceutically active oligosaccharide conjugates
US7541328B2 (en) 2002-03-06 2009-06-02 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Coupling proteins to a modified polysaccharide
EP2095829A1 (de) 2008-02-27 2009-09-02 LEK Pharmaceuticals D.D. Selenhaltige Modifizierungsmittel und Konjugate
WO2010099003A2 (en) 2009-02-26 2010-09-02 Oncolix, Inc. Compositions and methods for visualizing and eliminating cancer stem cells
EP2316850A2 (de) 2002-09-11 2011-05-04 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hasylierte Polypeptide, besonders hasyliertes Erythropoietin
US8017739B2 (en) 2004-03-11 2011-09-13 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
WO2012068282A1 (en) 2010-11-17 2012-05-24 Oncolix, Inc. Use of prolactin receptor antagonist and chemotherapeutic drug for treating ovarian cancer
US8404834B2 (en) 2007-12-14 2013-03-26 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Hydroxyalkyl starch derivatives and process for their preparation

Families Citing this family (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6023084B2 (ja) * 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
JPS5716815A (en) * 1980-07-02 1982-01-28 Ajinomoto Co Inc Oxygen transporting agent for artificial blood
US4343715A (en) * 1980-10-10 1982-08-10 Duke University Immobilized hemoglobin, and processes for extracting oxygen from fluids using the same
US4427416A (en) 1980-10-10 1984-01-24 Duke University Processes for extracting oxygen from fluids using immobilized hemoglobin
US4401652A (en) * 1980-12-31 1983-08-30 Allied Corporation Process for the preparation of stroma-free hemoglobin solutions
JPS5899420A (ja) * 1981-12-04 1983-06-13 Ajinomoto Co Inc 人工血液用酸素運搬剤
GB8328917D0 (en) * 1983-10-28 1983-11-30 Fisons Plc Blood substitute
DE3501349A1 (de) * 1985-01-17 1986-07-17 Battelle-Institut E.V., 6000 Frankfurt Blutersatz
US4584130A (en) * 1985-03-29 1986-04-22 University Of Maryland Intramolecularly cross-linked hemoglobin and method of preparation
FR2600894B1 (fr) * 1986-07-02 1989-01-13 Centre Nat Rech Scient Conjugues macromoleculaires d'hemoglobine, leur procede de preparation et leurs applications
DE3636590A1 (de) * 1986-10-28 1988-05-26 Braun Melsungen Ag Blutersatzmittel
US5753616A (en) * 1986-11-10 1998-05-19 Biopure Corporation Method for producing a stable polymerized hemoglobin blood-substitute
US5955581A (en) * 1986-11-10 1999-09-21 Biopure Corporation Method for producing a stable polymerized hemoglobin blood-substitute
GB8712240D0 (en) * 1987-05-23 1987-07-01 Fisons Plc Pharmaceutical formulation
FR2630329B1 (fr) * 1988-04-20 1991-07-05 Merieux Inst Conjugues macromoleculaires d'hemoglobine, leur procede de preparation et leurs applications
IL90188A0 (en) * 1988-05-18 1989-12-15 Cryopharm Corp Process and medium for the lyophilization of erythrocytes
US5045446A (en) * 1988-08-26 1991-09-03 Cryopharm Corporation Lyophilization of cells
US5055259A (en) * 1988-07-29 1991-10-08 Sanraku Incorporated Bloodless blood typing training kit
US6187744B1 (en) 1992-03-11 2001-02-13 Michael W. Rooney Methods and compositions for regulating the intravascular flow and oxygenating activity of hemoglobin in a human or animal subject
US5783214A (en) * 1994-06-13 1998-07-21 Buford Biomedical, Inc. Bio-erodible matrix for the controlled release of medicinals
US5888822A (en) 1995-10-04 1999-03-30 Hycor Biomedical Inc. Erythrocyte sedimentation rate control
US5981507A (en) * 1995-12-14 1999-11-09 Advanced Magnetics, Inc. Polymeric carriers linked to nucleotide analogues via a phosphoramide bond
US5895760A (en) 1997-02-04 1999-04-20 Hycor Biomedical, Inc. Erythrocyte sedimentation rate control
US6054427A (en) * 1997-02-28 2000-04-25 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for optimization of oxygen transport by cell-free systems
CA2233725A1 (en) * 1998-03-31 1999-09-30 Hemosol Inc. Hemoglobin-hydroxyethyl starch complexes
US6159682A (en) * 1999-04-30 2000-12-12 Streck Laboratories, Inc. Blood control and system for erythrocyte sedimentation measurement
US6124089A (en) 1999-04-30 2000-09-26 Streck Laboratories, Inc. Blood control and system for erythrocyte sedimentation measurement
US6531321B1 (en) 2000-09-15 2003-03-11 Streck Laboratories, Inc. Blood control and system for erythrocyte sedimentation measurement
CA2319966A1 (en) * 2000-09-19 2002-03-19 Dextro-Sang Corporation Improved dextran-hemoglobin conjugate as potential blood substitute
DE10155781A1 (de) * 2001-11-14 2003-05-22 Deutsches Textilforschzentrum Verfahren zur Herstellung von reaktiven Cyclodextrinen, ein damit ausgerüstetes textiles Material und deren Verwendung
US20050164915A1 (en) 2002-04-01 2005-07-28 Sangart, Inc. Compositions for oxygen transport comprising a high oxygen affinity modified hemoglobin
WO2003059286A2 (en) * 2002-01-11 2003-07-24 Sangart, Inc. Methods and compositions for oxygen transport comprising modified hemoglobin in plasma
US20030153491A1 (en) * 2002-01-11 2003-08-14 Winslow Robert M. Methods and compositions for oxygen transport comprising a high oxygen affinity modified hemoglobin
DE10209822A1 (de) * 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid
JP3912206B2 (ja) * 2002-07-05 2007-05-09 株式会社日立製作所 筒内直接燃料噴射装置用燃料ポンプ
DE10242076A1 (de) * 2002-09-11 2004-03-25 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh HAS-Allergen-Konjugate
BRPI0412671A (pt) * 2003-08-08 2006-10-03 Fresenius Kabi De Gmbh conjugados de um polìmero e uma proteìna ligados por um grupo de ligação de oxima
US8754031B2 (en) 2004-03-08 2014-06-17 Oncolix, Inc. Use of prolactin receptor antagonists in combination with an agent that inactivates the HER2/neu signaling pathway
AR048035A1 (es) 2004-03-11 2006-03-22 Fresenius Kabi De Gmbh Conjugados de almidon de hidroxialquilo y una proteina, preparados por aminacion reductora
TW200603818A (en) * 2004-03-11 2006-02-01 Fresenius Kabi De Gmbh Conjugates of hydroxyethyl starch and erythropoietin
US20090118195A1 (en) * 2004-11-10 2009-05-07 Hans-Georg Frank Molecules Which Promote Hematopoiesis
US7589063B2 (en) * 2004-12-14 2009-09-15 Aplagen Gmbh Molecules which promote hematopoiesis
CA2648732A1 (en) * 2005-06-23 2006-12-28 Aplagen Gmbh Supravalent compounds
EP1762250A1 (de) * 2005-09-12 2007-03-14 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Konjugate welche durch chemische Ligation zwischen Hydroxyalkylstärken und aktiven Substanzen mit Bildung eines Thiazolidin-Ringes entstehen
EP3669894A3 (de) 2006-06-30 2020-08-26 Syntab Therapeutics GmbH Neuartige multifunktionale verbindungen für pharmazeutische zwecke
CN101199856B (zh) * 2006-12-15 2011-04-20 天津协和生物科技发展有限公司 一种携氧抗休克药物
EP2070951A1 (de) * 2007-12-14 2009-06-17 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Verfahren zur Herstellung eines Hydroxyalkylstärkederivats mit zwei Linkern
WO2011098095A1 (en) 2010-02-09 2011-08-18 Aplagen Gmbh Peptides binding the tpo receptor
GB201609083D0 (en) 2016-05-24 2016-07-06 Syntab Therapeutics Gmbh Synthetic compound
CN114617957B (zh) * 2022-03-10 2024-01-16 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 羟乙基淀粉血红蛋白偶联物及其制备方法与应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB736354A (en) 1952-01-28 1955-09-07 Boehringer & Soehne Gmbh Process for the production of preparation suitable as a blood plasma substitute
GB1126628A (en) 1966-06-18 1968-09-11 Bayer Ag Blood volume replacement medium
US3925344A (en) * 1973-04-11 1975-12-09 Community Blood Council Plasma protein substitute
US4001401A (en) * 1975-02-02 1977-01-04 Alza Corporation Blood substitute and blood plasma expander comprising polyhemoglobin
US4001200A (en) * 1975-02-27 1977-01-04 Alza Corporation Novel polymerized, cross-linked, stromal-free hemoglobin

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
C.A.73,1970,53713y *

Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3029307A1 (de) * 1980-08-01 1982-03-04 Dr. Eduard Fresenius, Chemisch-pharmazeutische Industrie KG, 6380 Bad Homburg Haemoglobin enthaltendes blutersatzmittel
EP0201618A1 (de) * 1983-06-09 1986-11-20 Wolfgang Prof. Dr.Dr. Barnikol Verfahren zur Polymerisation von Hämoglobin mittels verknüpfender Reagenzien
WO1998001158A3 (de) * 1996-07-08 1998-03-19 Fresenius Ag Hämoglobin-hydroxyethylstärke-konjugate als sauerstoff-transport-mittel
EP1671654A2 (de) 2001-03-16 2006-06-21 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hydroxyalkylstärke-Wirkstoff-Konjugate
US7816516B2 (en) 2001-03-16 2010-10-19 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and an active agent
US7541328B2 (en) 2002-03-06 2009-06-02 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Coupling proteins to a modified polysaccharide
DE10237442B4 (de) * 2002-08-16 2004-08-19 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Hochverzweigte, niedrig substituierte Stärkeprodukte
DE10237442A1 (de) * 2002-08-16 2004-03-11 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Hochverzweigte, niedrig substituierte Stärkeprodukte
EP1681303A1 (de) 2002-09-11 2006-07-19 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylierte Polypeptide, besonders HASyliertes Erythropoietin
EP2316850A2 (de) 2002-09-11 2011-05-04 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hasylierte Polypeptide, besonders hasyliertes Erythropoietin
US7538092B2 (en) 2002-10-08 2009-05-26 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Pharmaceutically active oligosaccharide conjugates
US8017739B2 (en) 2004-03-11 2011-09-13 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
US8404834B2 (en) 2007-12-14 2013-03-26 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Hydroxyalkyl starch derivatives and process for their preparation
EP2095829A1 (de) 2008-02-27 2009-09-02 LEK Pharmaceuticals D.D. Selenhaltige Modifizierungsmittel und Konjugate
WO2009106239A1 (en) 2008-02-27 2009-09-03 Lek Pharmaceuticals D.D. Selenium containing modifying agents and conjugates
WO2010099003A2 (en) 2009-02-26 2010-09-02 Oncolix, Inc. Compositions and methods for visualizing and eliminating cancer stem cells
WO2012068282A1 (en) 2010-11-17 2012-05-24 Oncolix, Inc. Use of prolactin receptor antagonist and chemotherapeutic drug for treating ovarian cancer

Also Published As

Publication number Publication date
GB1549246A (en) 1979-08-01
BE847462A (fr) 1977-02-14
IL50697A0 (en) 1976-12-31
IL50697A (en) 1979-10-31
NL7611580A (nl) 1977-04-26
FR2328478B1 (de) 1979-03-02
NL185131B (nl) 1989-09-01
JPS6021124B2 (ja) 1985-05-25
SE429404B (sv) 1983-09-05
SE7611797L (sv) 1977-04-23
CA1055932A (en) 1979-06-05
FR2328478A1 (fr) 1977-05-20
JPS5251016A (en) 1977-04-23
US4064118A (en) 1977-12-20
NL185131C (nl) 1990-02-01
DE2646854C2 (de) 1989-05-03
AU1885276A (en) 1978-04-27
AU510466B2 (en) 1980-06-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2646854C2 (de)
DE60116137T2 (de) Derivatisierung von proteinen in wässrigem lösungsmittel
DE2417619C2 (de) Intramolekular vernetztes Hämoglobin, Verfahren zu dessen Herstellung und seine Verwendung
DE2449885C3 (de) Verfahren zur Herstellung von chemisch modifizierten haltbaren Hämoglobinpräparaten sowie das nach diesem Verfahren hergestellte modifizierte Hämoglobinpräparat
DE69231935T2 (de) Konjugat enthaltend ein geradkettiges organisches polymer mit gebundenen sulfatierten glukosaminoglukanen wie zum beispiel heparin, seine herstellung, verwendung und ein entsprechendes substrat
EP0078961B1 (de) Verfahren zur Herstellung eines lagerstabilen, vernetzten Hämoglobinpräparates mit hoher Sauerstoff-Transportkapazität, sowie das nach diesem Verfahren hergestellte Hämoglobinpräparat
DE2610698C2 (de)
EP0265865B1 (de) Blutersatzmittel
DE3486341T2 (de) Derivate von Dextran mit antikoagulierenden und antikomplementären Eigenschaften, ihre Herstellung und ihre biologischen Anwendungen.
DE2655361C2 (de) Dextranderivat-Gel
DE2433883C2 (de) Verwendung von physiologisch aktiven Polypeptiden
DE2430357C2 (de) Verfahren zur qualitativen oder quantitativen Feststellung von Immunoglobulin der IgG-Klasse
DE68901944T2 (de) Makromolekulare haemoglobinkomplexe, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendungen.
DE3876997T2 (de) Konjugate von superoxiddismutase.
DE3789432T2 (de) Hochmolekulare Verbindung, bestehend aus einer Einheit einer zum Asialoglykoproteinakzeptor leitenden Verbindung und aus einer Einheit einer chelatformenden, an dieser chemisch gebundenen, Verbindung, und ihre Verwendung.
DE2542255A1 (de) Mittel zur intravaskulaeren verabreichung
EP1294385B1 (de) Verfahren zur herstellung künstlicher sauerstoffträger aus kovalent vernetzten hämoglobinen mit verbesserten funktionellen eigenschaften durch vernetzung in anwesenheit chemisch nicht reagierender effektoren der sauerstoffaffinität der hämoglobine
EP1476470B1 (de) ST RKEDERIVATE, ST RKE−WIRKSTOFF−KONJ UGATE, VERFAHREN ZU IHRER HERSTELLUNG UND IHRE VERWENDUNG ALS ARZNEIMITTEL
DE3150318A1 (de) "verfahren zur herstellung eines polysaccharidderivats des fibrinolysins"
DE69030553T2 (de) Verfahren zur Herstellung modifizierter Superoxid-Dismutase
DE3873524T2 (de) Iodierte polymere, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als kontrastmittel.
DE2457047C3 (de) Verfahren zur Herstellung eines Derivates der leichten Kette des Tetanustoxins, dessen Verwendung zur Tetanusprophylaxe
DE3543942A1 (de) Hydrogele mit roentgenkontrast, ihre herstellung und ihre verwendung
DE1940130C2 (de) Verfahren zur Reinigung von Insulin, nach diesem Verfahren gereinigtes Insulin und dessen Verwendung
DE69019086T2 (de) Verfahren zur Herstellung von künstlichen N-verbundenen Glycoconjugaten.

Legal Events

Date Code Title Description
OGA New person/name/address of the applicant
OD Request for examination
D2 Grant after examination
8363 Opposition against the patent
8331 Complete revocation