JPS6021124B2 - ヘモグロビン−ポリサッカリド錯化合物、それの製法及びそれを含有する血液代用液もしくは血液増量剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明の血液代用液及びその製法に関するものなり。

医術的処理の膨大化に伴なつて血液の需要の急速な増加
のため、血液代用液の開発及び入手可能な供給血液の最
も効果的な使用が要求されている。

この要求は、進歩的医学的技術が実施されている領域並
びに血液貯蔵及び型検定のための経費を要する設備が得
られない領域に於て要求される。従来例えばデキストラ
ンゼラチン、ポリビニルピロリドン及びパーフルオルト
リブチルアミンのようあ過弗素化合物のような多種類の
物質が代用血液として提案された。

これらのものはいずれも酸素結合能力が不充分であり、
又は望ましからぬ又は未知の副作用を有する。ヘモグロ
ビン溶液も又試用された。

ヘモグロビンは脊椎動物の赤血球の主要部分を構成する
、鉄の分子を含む錯蛋白化質合物である。血液の代りに
ヘモグロビン溶液を使用することは、血液型についての
問題も解決される。ヘモグロビンは血液よりも貯蔵が容
易である。ヘモグロビンは血液（動物又は人）から分離
することが出来及び血液よりも更に長時間の貯蔵のため
の凍結乾燥することが出来る。しかしヘモグロビンは患
者から尿として腎臓から速かに排池される。

従って屡々ヘモグロビン溶液の多量の輸注が行なわれね
ばならず、排池の速度が高いことは予じめ腎臓の病気を
有する患者に対して潜在的の危険性の難点を有する。溶
液として輪注によるヘモグロビン投与に就いて、循環か
らの半減期は猿に於ては僅かに１１／独時間でありるこ
とが報告されている。本発明は約５，０００なし、し約
２，０００，０００の分子量を有するデキストラン又は
ヒドロキシェチルポリサッカリドを化学的の共有結合に
よりカップリングされたヘモグロビンの水溶性生成物を
含む血液代用液又は血液増量剤として重要な組成物を提
供する。

ヘモグロビンを溶液として投与した場合、その速かな９
Ｆ池は少なくとも部分的にはその分子量によるものと考
えられる。

ヘモグロビンは約６５，０００の分子量を有するが、こ
のような大きさの分子量では、血液及び血酸と別に供給
した場合には循環系中に於てその適当な期間の滞留を許
容せしめるためには明かに分子量の大きさは不充分であ
る。これに反して本発明による化学的の生成物は身体中
に適当な期間滞留される。本発明による生成物は可逆的
酸素輸送能力を有し及びその他の点でも明かに生理的に
許容され得るものである。デキストラン又はヒドロキシ
ェチル澱粉は殊に約５，０００ないし約２００，０００
の、格別には約２０，０００なし、し７０，０００の分
子量を有する。このような分子量範囲内に於てはヘモグ
ロビンとのイヒ学的のカップリングは速かに行なはれ及
びその反応溶液は取扱いに容易な適当な粘度を有する。
約９０，０００より低い分子量を有するデキストランは
本質上非アレルギー性であることが知られており、従っ
て本発明に使用するものとして好ましい。ポリサツカリ
ドとヘモグロビンとのカップリング生成物は１対１のカ
ップリングであり得るが、又は例えば最高９までの数分
子のヘモグロビンが１分子のポリサツカリドとカップリ
ングしたものであり得る。

これはカップリング反応中に於ける反応剤の比較的の量
によって及びその他の例えば時間、温度及びｐＨのよう
な条件の制御によってコントロールすることが出来る。
本発明による生成物は略７０，０００ないし２，０００
，０００の範囲、最も好ましくは略８５ ０００なし、
し１３５ ０００の範囲の分子量を有する。ヘモグロビ
ンーポリサツカリド錆化合物はカップリング反応から患
者に投与し得る生理的に相客性の水性担体中に回収する
ことが出来、又は収回してから上記のような担体中に溶
解せしめることも出来る。

本発明による生成物を製造する方法は少な〈とも１個の
ヘモグロビン分子の１個のポリサツカリド分子への化学
的の共有結合によるカップリング反応を含む。

反応は２段の主段階で行うのが最もよい。第１段階に於
てはヘモグロビンと化学的に相互作用を有する化学的基
を含む変性されたポリサッカリドが形成される。第２段
階に於ては変性ポリサッカリドはヘモグロビンと反応し
て文発明によ共有結合によりカップリングされた生成物
が形成される。本方法の第１段階に於ては、ポリサッカ
リドは、ポリサッカリドのヒドロキシル基と反応し得る
化学的基（例えばカルボン酸、アシルハラィド、アルキ
ルハライド、アミド、ヒドラジン、イソシアネート又は
−ブロムシアン又は過沃素酸塩のような活性剤の存在下
にヒドロキシル基と反応し得るーァミノ基）を有する試
薬と反応せしめられる。

更にこの試薬は、次いでヘモグロビンと又は−ヘモグロ
ビンと次段の反応をすることが出来る−橋渡しの化合物
と次段の反応を行ない得る基をポリサツカリド‘こつけ
ることが出来るものでなくてはならない。ポリサツカリ
ドを、そのヒドロキシル基の化学的反応により変性せし
めるための方法及び試薬については、よく知られている
。本方法の第２段階に於ては、変性されたポリサッカリ
ドは、ヘモグロビンの官能性側鎖基とこの変性されたポ
リサッカリド‘こ第１段階の反応中についた基との反応
によって、ヘモグロビンと反応せしめられてこれと結合
する。ヘモグロビンは一種の蛋白質であって、アミノ酸
成分に由釆する官能性側鎖基であるアミノ基、フェノー
ル性基、スルフヒドリル基、チオメチル基、ィミダゾ基
、カルボキシル基及びグアニジノ基を含んでいる。これ
ら蛋白質の官能性側鎖基と反応することが出来、及び従
って本方法の第１段階に於てポリサッカリド‘こ附加出
釆る基については蛋白質化学の領域に於てよく知られて
おり一例えばミーンズ（Ｍｅａｎｓ）及びフリーネイ（
Ｆｒｅｅｅｎｅｙ）による「ケミカル・モデイフイケイ
シヨン・オブ・プロティン」ホールデンディ（Ｈｏｌｄ
ｅｎ−ｄａｙ）１９７１年刊行及びティプソン（Ｔｉｐ
ｓｏｎ）及びホルテン（Ｈｏｒｔｅｎ）によるアカデミ
ックプレス刊行「アドバンシス・イン・力ルボヒドレー
ト・ケミストリ−Ｊ第２隻蓋のケネディ（Ｋｅｎ股ｄｙ
）による「ポリサッカーｊド・デリバティブス」の章を
参照されたし、。これらの例としては下記のものが含ま
れる：アシル化基、例えば酸無水物、Ｎ−ァシルィミダ
ゾール、酸アチド、Ｎ−カルボキシアンヒドリド、ジケ
テン、ジアルキルパイロカルボネート、イミドエステル
、０ーアルキルイソウレア、Ｓ−アルキルイソウレア、
スルフオニルハライド、スルフオネートェステル及びカ
ルボジィミド活性化カルポキシル基等のアシル化基。こ
れらは蛋白質上のアミノ基と反応して、アシル又はこれ
に類する結合を含む共有結合が形成されることが知られ
ている；ハロカルボキシル、マレィンィミド活性化ビニ
ル、エチレンイミン、アリールハライド、２ーヒドロキ
シー５−ニトロベンジルプロミド、脂肪族アルデヒド及
びケトンと還元剤（蛋白質のアミノ基と反応性を有す）
とのような、蛋白質上のスルフヒドリル（メルカプト）
、チオメチル、イミダゾ又はアミノ基と反応し得るアル
キル化基；ェステル及びアミド形成性基：蛋白質上のＣ
ＯＯ日と反応し得るアミノ基を共に使用したジアゾカル
ポキシレート及びカルボジイミドのようなェステル及び
アミド形成性基；５，５′ージチオビス（２ーニトロ−
ペンゾエート）基及びアルキルメルカプタン基（沃素の
ような酸化剤の存在下蛋白質のスルフヒドリル基と反応
し得るもの）のような蛋白質上のスルフヒドリル基と反
応し得るジスルフィド形成性基；蛋白質上のグアニジノ
基と反応し得るシクロヘキサンジオン基及びその他の１
，２ージケトン基のようなジカルボニル基；蛋白質分子
上のフェノール性基を反応するジアゾ基；蛋白質上のア
ミノ基と反応し得るプロムシアンとポリサッカリドとの
反応により得られる反応性基；ヘモグロビンのスルフヒ
ドリル基と反応する基を有する変性ポリサッカリドを製
造するのが好ましい。

殊に好ましい基はハロカルボキシレート基である。本発
明により銭化合物のための好ましい合成方法の特定例を
下記に示す；方法１：先ずポリサツカリド（ＰＳ）をブ
ロムシアン（ＣＮＢｒ）と反応せしめて、活性中間体を
形成せしめるが、この中間体はジアミノェタンと反応し
て下記式のアミノエチルーイソウしイドーポリサツカリ
ドが形成される。

エチル基とデキストランとの間の結合はィソウレア型の
結合が最も好ましいが、勿論その他の型の化学的結合も
全く使用出来ないわけでもない。

このようにして得られたアミノェチル−ィソゥレィドー
デキストランは次いでプロムアセチルブロミドによって
アシル化して下記式のブロムアセチルーアミノエチルー
イソウレイドーポリサッカリドが得られる。

このものは次にへモグロビン（ＨＢ）のスルフヒドリル
基との反応によって次式のヘモグロビン−Ｓーアセチル
アミノエチルーイソウレィドーポリサツカリドが形成さ
れる。

方法ロ：先ずポリサッカリド（ＰＳ）を２−クロルェチ
ルアミンと反応せしめて下記式（ＰＳ）−○−ＣＨ２Ｃ
比−ＮＨ２ のアミノェチル−○−ポリサッカリドを形成させる。

これを以下方法１と同様にしてプロムアセチルブロミド
及びへモグ。ビン（ＨＢ）と反応せしめて下記式のヘモ
グロビン−Ｓ−アセチルアミノエチル−○−ポリサッカ
リドを得る。

方法瓜：ポリサッカリド（ＰＳ）を過沃素酸ナトリウム
と反応せしめて下記式ジァルデヒドを形成せしめる。

このジアルデヒドをヘモグロビン（ＨＢ）のアミ／基と
反応せしめて下記式のヘモグロビン−Ｎ−デキストラン
を得る。

変性ポリサッカリドがヘモグロビンと反応するための条
件を適当に調整することによって、得られる残留反応物
からの生成物を分離することを省くことが出来及びカッ
プリングされた錯化合物について９０％以上の収率を得
ることが出来る。例えば変性ポリサッカリドが上記のよ
うにして製造されたＮ−プロムアセチルーアミノエチル
イソウレイドデキストラン（Ｂｒーデキストラン）であ
る場合にはカップリング反応成分溶液中のヘモグロビン
及びＢｒ−デキストランの濃度及び反応時間は、カップ
リングにより得られた生成物について９０％を越す収率
が得られるように調整することが可能である。反応成分
の濃度が余りに濃厚である場合には反応成分の溶液のゲ
ル化を招き、そして通常望ましからぬ極めて高い分子量
を有する架橋結合された生成物が形成されるようになる
。高分子量を有するデキストランを使用した場合には、
ヘモグロビンに対するデキストランのモル比は１に近い
か又は１より小であるのが好ましい。架橋結合された生
成物の形成を阻止するためには、ＰＨ値を低下せしめて
アルキル化反応を停止せしめるか、又はメルカプトェタ
ノール又はシステインを添加してヘモグロビンスルフオ
ヒドリルよりも優勢に反応させるようにする。例１ デキストランーヘモグロビン緒化合物の製造フロムシア
ン０．３夕をアセトニトリル３地中に溶解せしめ、これ
をデキストラン２％溶液１００の【（分子量２００，０
００）中に添加する。

ｐＨ価をＩＭＮａＯＨを以て１０．８に５分間保持せし
める。次にこれにジアミノェタン２奴を添加する。ｐＨ
価は濃塩酸を以て９．５に調整し、反応溶液を一夜放置
する。この混合物は蒸留水に対して完全に透析を行ない
、次いで凍結乾燥する。

この凍結乾燥したアミノデキストランは長期間貯蔵する
ことが出来る。回収された活性化デキストランは総べて
（１．６〜１．７夕）０．１燐酸塩緩衝液（ｐＨ７．０
）５０の‘中に溶解せしめ、これに激しい櫨梓下、２時
間を要してプロムアセチルプロミドを非常にゆっくり添
加する。そのｐＨ価はＩＭＮａＯＨを添加することによ
って常に７．０に保持せしめる。反応が完了した後、混
合物を蒸留水に対して完全に透析処理し、次いで凍結乾
燥する。フロム化されたデキストラン、或いはＢｒ−デ
キストラン１．４夕が回収される。Ｂｒ−デキストラン
１夕を、０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．
５）中の人のヘモグロビンの２〜３％溶液３０泌中に添
加し、一晩反応せしめる。デキストランーヘモグロビン
及び遊離ヘモグロビンはセフアドツクスＧ−２００カラ
ム上で互に分離する。

デキストラン−ヘモグロビンの収率は使用した全体のヘ
モグロビンの７０〜８０％である。例２ラツテによるヘ
モグロビン及びデキストランヘモグロビンの腎臓による
排他血液代用液としての本発明による鈴化合物の効果を
試験するために、例１記載に従って製造されたデキスト
ラン−ヘモグロビン鍔化合物の２％溶液３Ｍをウィスタ
ルラッテに輪注し、動物から排他されたデキストラン−
ヘモグロビンを、生理的食塩水の連続的の流れにより腰
緋を洗総し、洗豚液中に溶解されたヘモグロビンの量を
時間の函数として測定することによって評価した。

２％ヘモグロビン溶液３の‘を使用する以外は、全く上
記と同じ条件で実験を行なった。

上記両者の場合共に、ヘモグロビン含量は４１別ｍに於
ける光学密度を分光光度計を以て測定した。その結果は
第１図に於てグラフにより示した。

これは夫々の試験の時間に対してプロットした光学密度
のグラフによる表示である。このグラフからヘモグロビ
ンの排他の速度はデキストラン−ヘモグロビン銭体の排
池の速度に比して著るしく大なることが示されている。
本試験は、デキストラン−ヘモグロビンは腎臓によるＳ
Ｅ池に対して動物による非常に改良された滞留の点で遊
離のヘモグロビンに比して一層著るしく有効な血液代用
液であることを証明している。

例３ 平均分子量１１０，０００のデキストラン２夕を蒸留水
７５Ｍ中に溶解せしめ、そのｐＨ価を２ＭＮａＯＨを以
て１０．８に調整し、それに室温で損杵下アセトニトリ
ル３の上中に溶解せしめたブロムシァン０．３夕を添加
する。

そのｐＨ価を２ＭＮａＯＨを添加することによって１０
．８に５分間保持せしめる。次いでｐＨ価を濃塩酸によ
り約２．０〜２．５に調整し、更に１分間蝿拝する。ｐ
Ｈ価が９．５より大になるのを防ぐために追加のＨＣＩ
を添加し乍らジアミノェタン３の上を添加し、最終ｐＨ
価は９．５に調整する。この溶液は４℃に於て一夜濃拝
する。形成されたァミノェチルアミノーデキストランは
／ゞイオフアイ／ゞ一５０ビーカー（バイオ一ラツドラ
ボラトリース〔Ｂｉｏ−Ｒａｄｌａめてａｂｒｉｅｓ〕
）中で脱イオン水に対して透析を行ない、ニンヒドリン
により透析物中に遊離のアミンが検出されなくなるに至
らしめる。透析で得られた溶液は凍結乾燥を行ない乾燥
したアミノェチルアミノデキストラン約１．６夕が得ら
れる。これは０．１Ｍ燐酸塩緩衝液（ｐＨ７．０）５０
の上中に溶解し、更にこれにプロムアセチルブロミド３
の‘を、微細に引延したキャビラリーチップを有するバ
ストールピペットを通して６０分を要して添加する。プ
ロムアセチルブロミドを添加している間中は溶液は氷水
裕中で激しく凝洋し及び２ＭＮａＯＨ溶液を以てｐＨ価
定常化装置を使用してｐＨ価を６．６ないし６８に保持
せしめる。その後溶液は脱イオン水に対して透析を行な
い透析物中に硝酸銀により遊離の臭素が検出されなくな
るまでに至らしめる。凍結乾燥より約１．５夕のＢｒー
デキストランが得られる。上記試験は夫々１１０，００
０；７０，０００：４０，０００及び２０，０００の平
均分子量を有する他のデキストランを使用して操返へし
た。合成した種々のＢｒ−デキストランの原素分析によ
り測定した臭素舎量は、臭素原子１個につき９なし、し
１１個のグルコース残基の範囲であった。このようにし
て生成されたＢｒ−デキストランは、ヘモグロビン溶液
（０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム（ｐＨ９．５）中に２．
５ ５又は１０％ヘモグロビンを含む）６泌中に特定し
た量を溶解せしめることによってヘモグロビンとカップ
リングせしめた。

カップリングは常に４℃に於て混合することによって進
行せしめた。カップリング生成物の収率は反応混合物を
セフアデックス９．１５０カラム上０．０９Ｍ燐酸塩緩
衝液（冊７．５）を以て選別して測定した。ヘモグロビ
ン含量は特定波長に於ける吸収により測定した。結果は
表１に示す。表 １ これらの結果からして、いずれのデキストランも実験条
件を適当に選択することによりカップリング生成物を９
０％以上の収率で得ることが出来ることが判明される。

例４方法川こよるデキストランーヘモグロビン鍔化合物
の製造。

デキストラン（分子量４０，０００）１夕を、クロルェ
チルァミン塩酸塩に濃ＮａＯＨ液を添加して上の相に得
られるクロルェチルアミン１の上と完全によく混合させ
る。

この混合物は更に濃ＮａＯＨ液０．４の‘と混合して、
これを蓋を有するチューブ中に入れてオートクレープ中
で１２０ｑｏに１時間加熱する。次にこれにクロルェチ
ルアミン１の【及び濃ＮａＯＨ液０．４叫を添加し、こ
の混合物を再び１２０℃に於て１時間加熱し、この操作
は更に１回繰返えす。冷後混合物を蒸留水に対して完全
に透析処理を行なった後、０．１Ｍ燐酸塩緩衝液（ｐＨ
６．８）１１泌中に添加する。このアミノェチル−○−
デキストランの溶液は、プロムアセチルブロミド０．５
泌を約１時間を要してゆっくり添加することによってァ
シル化する。

これは蒸留水に対して完全に透析を行った後凍給乾燥す
る。凍結乾燥したブロムアセチルーアミノェチル−０−
デキストラン０．１夕を０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩
衝液（ｐＨ９．５）中の５％の人のヘモグロビン１．７
の‘を添加して、これを４℃に４８時間保持せしめる。

セフアデツクスによるクロマトグラフイー処理により９
０％以上のヘモグロビンがデキストラン−ヘモグロビン
の形にカップリングされた。例５方法ｍによるデキスト
ラン−ヘモグロビンの製造過沃素酸ナトリウムの１２％
水溶液１の‘をデキストランの１０％水性溶液１０泌に
添加し、この混合物を階所に於て４℃に一夜放置する。

重亜硫酸ナトリウムの３％溶液を、先ず混合物が褐色に
変り、次いで再び無色になるまで添加する。この混合物
を蒸留水に対して透析処理してデキストランジアルデヒ
ド溶液を得る。次にれを０．３Ｍ炭酸水素ナトリウム緩
衝液（ｐＨ９．５）中の基組織を含まないヘモグロビン
の３％溶液の２容量部中に添加する。デキストランへの
ヘモグロビンのカップリングは４℃に於て一夜進行せし
める。形成されたデキストラン−ヘモグロビン鍔化合物
はセフアデツクスＧ−２００カラム上のクロマトグラフ
ィーによりカップリングされていないヘモグロビンから
分離する。カップリングされた生成物の収率は約６０％
であった。例６ 家兎によるヘモグロビン及びデキストラン−ヘモグロビ
ンの腎臓による排他体重３．３〜３．５ｋ９の雄の家兎
をナトリウムベントタール０．１夕を以て麻酔せしめる
。

２０山Ｃｉ（シクロキユーリ−）の〔３Ｈ〕メトキシー
イヌリンを含む標準腎臓透析用緩衝液〔ラビナ−（Ｒａ
ｂｉ肥ｒ）等の１９６７年、Ｊ・Ｅｘｐ．Ｍｅｄ、１２
６，１１２７〜１１４２による〕中のヘモグロビン又は
本発明によるデキストラン−ヘモグロビン（デキストラ
ンの分子量；２００，０００〜２７５，０００）の溶液
を各動物に耳緑辺の静脈より１．１舷／分の速度で輸注
する。

上記溶液を輸注し終った後、更に尿の生産を保持せしめ
るため同一速度で緩衝液の輸注を継続する。時々、腰脱
中の内容物を、フオーレィ（Ｆｏｌｅｙ）Ｎｏ．８カテ
ーテル（３机）を使用して０．９％の食塩水５の上つつ
で３回洗出し、これを３０００×のこ於て１職１間遠０
分離にかけて沈降性物質を総べて除去し、合一された洗
液中に溶解されているヘモグロビン又はデキストランヘ
モグロビンを５７節ｍに於ける吸光度により測定する。
合一された洗液中の〔３Ｈ〕ィヌリン含量はヘモグロビ
ンの消却の補正を行ったシンチレーション計数管により
測定し、なお消却値の測定のためにはヌクレアー・シカ
ゴ・マークロ計数管外面放射標準器を使用した。ヘモグ
ロビン又デキストラン−ヘモグロビンの血酸濃度は、種
々の時点に於て頚動脈から血液試料を採取し、赤血球を
沈降せしめた後５７印ｍに於ける試料の吸光度測定を行
なって測定した。試料は１％ヘモグロビン又はヘモグロ
ビン１％当量を含むデキストラン−ヘモグロビンの試料
５０の【又は３０地を使用して行なった。

デキストランーヘモグロビン、殊に上記例１及び３記載
の方法により製造されたものは腎臓から排池され及び遊
離ヘモグロビンに比して箸るしく減速された速度で循環
系から排出されることが判明したが、なおこの際デキス
トラン−ヘモグロビン輸注の動物の腎臓機能は、イヌリ
ン排池試験が示すように何ら損傷を受けていない。

更にデキストランーヘモグロビンと遊離ヘモグロビンと
の間の生理的に挙動の相異は、各個の動物について及び
各種の輸圧量の相異の場合について多数操返えし観察さ
れているところであって、各々の物質の本来の性質が異
なることに由来し、例えば試験動物の血液へプトグロビ
ン水準に於ける何らかの機会による変化などに依るもの
ではないことは明らかである。本発明による生成物の酸
素結合能力はべネシユ（Ｂｅ肥ｓｃｈ）等の１９６５年
ＡＭ１，Ｂｉｏｃｈｅｍ，１１，８１〜８方記載の方法
により測定した。

ヘモグロビンと比較した場合、本発明による生成物では
酸素に対する親和性がいくらか大きいことを示す傾向が
示されたが、ヘモグロビン本来の酸素輸送及び放出の性
能を保持していることが判明した。酸素の５０％飽和張
力により測定されたように、上記例１記載の方法に従っ
て製造されたデキストラン−ヘモグロビン錆化合物は遊
離のヘモグロビンと比較して酸素に対する親和力が約２
．針音大きいことが示された。銭化合物の酸素親和性は
、例えば燐酸ピリドキシンと反応せしめ、次いでナトリ
ウムボロヒドリドで還元する方法等により、ポリサッカ
リドと反応せしめる前又は後に於てヘモグロビンの適当
な化学的処理を行なうことによって変化させることが出
来る。

【図面の簡単な説明】 第１図は本発明による鈴化合物及びヘモグロビンを夫々
ラツテに輪注し、これらの体内に滞留する時間を比較す
るため夫々の動物の腎臓から排他される尿中の夫々の成
分の時間の函数に対する濃度を光学的密度を以て示した
グラフである。 縦軸は４１則ｍに於ける光学的密度を示し、横軸は時間
（分）を示す。第１図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記一般式 （ＰＳ）−Ｘ−ＨＢ （式中（ＰＳ）は約５，０００ないし約２，０００，０
   ００の分子量を有するデキストラン又はヒドロキシエチ
   ル澱粉を示し；Ｘは共有結合による化学的ブリツジを示
   し、ＨＢはヘモグロビンを示す）を有することを特徴と
   する、高分子の水溶性化合物。 ２ ヘモグロビンを、約５，０００ないし約２，０００
   ，０００の分子量を有し、デキストランか或いはヒドロ
   キシエチル澱粉かのいずれかよりなるポリサツカリドと
   化学的共有結合的にカツプリングせしめることを特徴と
   する代用血液又は血液増量剤中の酸素輸送物質として有
   用な水溶性高分子生成物の製法。 ３ 第１段階としてポリサツカリドを適当な試薬と反応
   させて変性ポリサツカリド、ただしヘモグロビンの側鎖
   基と反応することが出来る−アシル基、アルキル基、エ
   ステル及びアミド形成性基、ジスルフイド形成性基、ジ
   カルボニル基、ジアゾ基及び、プロムシアンとポリサツ
   カリドとの反応により形成された反応性基から選んだ−
   化学的基を有する変性ポリサツカリド、を形成せしめ、
   次いで第２段階でこの変性ポリサツカリドをヘモグロビ
   ンと反応せしめることを特徴とする特許請求の範囲第２
   項記載の製法。 ４ 第１段階に於ておよびの分子量が２０，０００ない
   し７０，０００であるデキストランをプロムシアンと反
   応せしめ、第２段階に於て第１段階の生成物をジアミノ
   エタンと反応せしめ、第３段階に於て第２段階の生成物
   をブロムアセチルプロミドと反応せしめ、そして第４段
   階に於て第３段階の生成物をヘモグロビンと反応せしめ
   る特許請求の範囲第２項記載の製法。 ５ 第１段階に於て、およその分子量１０，０００ない
   し９０，０００を有するデキストランを過沃素酸塩と反
   応せしめてこれにジアルデヒド基群をつけ、そして第２
   段階に於て第１段階の生成物をヘモグロビンと反応せし
   める特許請求の範囲第２項記載の製法。 ６ 水溶性高分子酸素輸送用物質の水性溶液もしくは懸
   濁液より成る患者又は病気の動物に投与するための血液
   代用液又は血液増量剤として使用するための組成物にし
   て、上記物質がヘモグロビンと約５，０００ないし約２
   ，０００，０００の分子量を有するポリサツカリドとの
   化学的な共有結合によるカツプリングにより製造された
   高分子生成物であり、上記ポリサツカリドはデキストラ
   ンか又はヒドロキシエチル澱粉かのいずれかであること
   を特徴とする上記組成物。 ７ 酸素輸送用物質がヘモグロビンと約２０，０００な
   いし約７０，０００の分子量を有するデキストランとを
   結合させることにより製造された高分子生成物である特
   許請求の範囲第６項記載の組成物。 ８ 酸素輸送用物質が、約５，０００ないし約２００，
   ０００の分子量のＮ−プロムアセチル−アミノエチル−
   イソウレイドデキストランとヘモグロビンとを反応させ
   ることにより製造された高分子生成物である特許請求の
   範囲第６項記載の組成物。