JPS5899420A - 人工血液用酸素運搬剤 - Google Patents
人工血液用酸素運搬剤Info
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- JPS5899420A JPS5899420A JP56195301A JP19530181A JPS5899420A JP S5899420 A JPS5899420 A JP S5899420A JP 56195301 A JP56195301 A JP 56195301A JP 19530181 A JP19530181 A JP 19530181A JP S5899420 A JPS5899420 A JP S5899420A
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、人工血液用の新規酸素運搬剤に関する。
本発明者は、ヘモグルビン−イヌリン結合体が次の諸性
貢を有し、人工血液用酸素運搬剤としてすぐれているこ
とを見出し、本発明を完成した。
貢を有し、人工血液用酸素運搬剤としてすぐれているこ
とを見出し、本発明を完成した。
■ 血管内滞留時間が長い。
■ ヘモグービンと同程度の酸素運搬能力を有する。
■ 人体蓄積性がない。
■ 無害である。
本発明に使用するへそグルビン−イヌリン結合体の製造
に使用するヘモグービンは、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ
、ウマ、イヌ、サル、ウサギ、ニワトリ勢ヘモグリビン
を有する動物由来のものであればいずれでもよい。本明
細書中でへそグロビンというときはへそグービン誘導体
、例えば、ヘモグロビンとピリドキサール替ン酸、ピリ
ドキサール硫酸、２．３−シリン酸化グリセリン酸、イ
ノシトールリン酸、糖リン酸エステル、ホスホエノール
ピルビン酸との共有結合物、グルコース等単糖あるいは
多糖との共有結合物、およびアミノ糖との共有結合物を
含む。このなかで、ビリドキす−ルリン酸、ピリドキサ
ール硫酸等ビリドキす一ル誘導体で修飾されている誘導
体が、特【優れた酸素運搬能を有する目的語金体を与え
るという点で好ましい。
に使用するヘモグービンは、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ
、ウマ、イヌ、サル、ウサギ、ニワトリ勢ヘモグリビン
を有する動物由来のものであればいずれでもよい。本明
細書中でへそグロビンというときはへそグービン誘導体
、例えば、ヘモグロビンとピリドキサール替ン酸、ピリ
ドキサール硫酸、２．３−シリン酸化グリセリン酸、イ
ノシトールリン酸、糖リン酸エステル、ホスホエノール
ピルビン酸との共有結合物、グルコース等単糖あるいは
多糖との共有結合物、およびアミノ糖との共有結合物を
含む。このなかで、ビリドキす−ルリン酸、ピリドキサ
ール硫酸等ビリドキす一ル誘導体で修飾されている誘導
体が、特【優れた酸素運搬能を有する目的語金体を与え
るという点で好ましい。
一方、イヌリンは特に限定されないが、分子量ｚｏｏｏ
〜（０００のものが好ましく、また分校ｋｍするもので
あってもよい。
〜（０００のものが好ましく、また分校ｋｍするもので
あってもよい。
へそグルビンとイヌリンとの結合方法は、どのような方
法であってもよいが、化学結合剤を使用し共有結合せし
めるのがよい。
法であってもよいが、化学結合剤を使用し共有結合せし
めるのがよい。
例えば、臭化シアン等の化学結合剤を使用し、ヘモグー
ビンの７ミノ基とイヌ替ンの水酸基との閣を結合させた
り、塩化シフｙＬル、２，２°−ジクールベンジジン、
ｐ ｔ ｐ’−ジフルオロ−ｍ、ｍ’−ジニトロジフェ
ニルスルホン、２，４−ジクロルニトロベンゼン等の化
学結合剤により結合せしめる方法がある。
ビンの７ミノ基とイヌ替ンの水酸基との閣を結合させた
り、塩化シフｙＬル、２，２°−ジクールベンジジン、
ｐ ｔ ｐ’−ジフルオロ−ｍ、ｍ’−ジニトロジフェ
ニルスルホン、２，４−ジクロルニトロベンゼン等の化
学結合剤により結合せしめる方法がある。
特に、化学結合剤としてはカルボン酸がよく、例工ば、
ハロゲン化モノカルボンａｔ、７４／ａｔ有モノ力ルボ
ン酸等モノカルボン酸、コ１１り醸、グルタル酸、アジ
ピン酸等のカルボキシル基以外の官能基を有さないジカ
ルボン酸、リンゴ酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等
のカルボキシル基以外の官能基を有するジカルボン、ニ
トリロ三酢酸、トリカルバリリッタ酸等トψカルボン酸
、エチレンジアミン四酢酸その他のポリカルボン酸があ
げられる。
ハロゲン化モノカルボンａｔ、７４／ａｔ有モノ力ルボ
ン酸等モノカルボン酸、コ１１り醸、グルタル酸、アジ
ピン酸等のカルボキシル基以外の官能基を有さないジカ
ルボン酸、リンゴ酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等
のカルボキシル基以外の官能基を有するジカルボン、ニ
トリロ三酢酸、トリカルバリリッタ酸等トψカルボン酸
、エチレンジアミン四酢酸その他のポリカルボン酸があ
げられる。
例えば、覇−ド酢酸、タール酢酸、ブーム酢酸等のハロ
ゲン化モノカルボン酸を使用する場合、イヌリンの水酸
基との間で脱ハｎｙン化水素を行わしめ、カルボキシル
基を有するイヌリン誘導体を製造し、これとへそグ讐ビ
ンとを結合せしめるとよい。
ゲン化モノカルボン酸を使用する場合、イヌリンの水酸
基との間で脱ハｎｙン化水素を行わしめ、カルボキシル
基を有するイヌリン誘導体を製造し、これとへそグ讐ビ
ンとを結合せしめるとよい。
また、ポリカルボン酸を使用する場合、その酸無水物を
、イヌ替ンの水酸基と一合せしめて同様にカルボキシル
基を有するイヌリン誘導体を製造し、これとへそグービ
ンとを結合せしめるとよい。
、イヌ替ンの水酸基と一合せしめて同様にカルボキシル
基を有するイヌリン誘導体を製造し、これとへそグービ
ンとを結合せしめるとよい。
ここで、ヒト−キシジカルボン酸及びアミノジカルボン
酸等のカルボキシル基以外の官能基を有スるポリカルボ
ン酸を使用する場合は、あらかじめその官能基を各官能
基を保護するものとして慣用されている保護試薬で保護
して、例えば、水酸基やアミノ基は、カルボベンジルオ
キシタ冑うイド等で保護して上記反応を行うのが望まし
い。もちろん、その保護基は、水添等の脱保護方法とし
て慣用している方法により脱離せしめることができる。
酸等のカルボキシル基以外の官能基を有スるポリカルボ
ン酸を使用する場合は、あらかじめその官能基を各官能
基を保護するものとして慣用されている保護試薬で保護
して、例えば、水酸基やアミノ基は、カルボベンジルオ
キシタ冑うイド等で保護して上記反応を行うのが望まし
い。もちろん、その保護基は、水添等の脱保護方法とし
て慣用している方法により脱離せしめることができる。
次に、カルボキシル基が導入されたイヌ讐ン誘導体とへ
そグ鍔ビンとをアミド結合を形成せしめる方法としては
Ｎ−ヒドロキシコハタ酸イｌド、ｐ−二トロフェノール
、ペンタクーロフェノール、フハク酸イミド、Ｎ−ヒト
ジキシフタル酸イミド、カルボジイミダゾール、イミダ
ゾール等のペプチド合成におけるカルボキシル基活性化
剤による活性エステルとし、これとへそグービンを反応
させアミド結合を形成せしめることがで者る。また、例
えばカルボキシル基に塩化チオニル、オキシ塩化リン等
酸ハｐゲン化剤を作用せしめ、酸ハーゲン化物とした後
、ヘモグービンと反応せしめることができる。
そグ鍔ビンとをアミド結合を形成せしめる方法としては
Ｎ−ヒドロキシコハタ酸イｌド、ｐ−二トロフェノール
、ペンタクーロフェノール、フハク酸イミド、Ｎ−ヒト
ジキシフタル酸イミド、カルボジイミダゾール、イミダ
ゾール等のペプチド合成におけるカルボキシル基活性化
剤による活性エステルとし、これとへそグービンを反応
させアミド結合を形成せしめることがで者る。また、例
えばカルボキシル基に塩化チオニル、オキシ塩化リン等
酸ハｐゲン化剤を作用せしめ、酸ハーゲン化物とした後
、ヘモグービンと反応せしめることができる。
本発明に使用するへそグｐビンーイヌｒン結１体は、ヘ
モグロビンにイヌリンが、へそグービンすプユニット当
りｌ〜ＩＳ個程度結合したもの、イヌリンにヘモグロビ
ンが１−１０Ｉｌ程度結合したもの、イヌリンとヘモグ
ービンが互いに架橋したもの、あるいはこれらの混合物
等いずれも使用できる。
モグロビンにイヌリンが、へそグービンすプユニット当
りｌ〜ＩＳ個程度結合したもの、イヌリンにヘモグロビ
ンが１−１０Ｉｌ程度結合したもの、イヌリンとヘモグ
ービンが互いに架橋したもの、あるいはこれらの混合物
等いずれも使用できる。
本発明の人工血液用酸素運搬剤には、実質的にへそグロ
ビン−イヌリン結合体より成るもの、これと他の酸素運
搬能を有するものとの混合物、あるいはこれらに血漿増
量剤、グルブース、塩ｌｌ譬を混合したもの替ヘモダー
ビンーイヌリン結合体な含有する人工血液用酸素運搬剤
であればすべて含まれる。
ビン−イヌリン結合体より成るもの、これと他の酸素運
搬能を有するものとの混合物、あるいはこれらに血漿増
量剤、グルブース、塩ｌｌ譬を混合したもの替ヘモダー
ビンーイヌリン結合体な含有する人工血液用酸素運搬剤
であればすべて含まれる。
以下、実施例により本発明の詳細な説明する。
実施例１
イヌリン１０ｔ（０，００２モル）（東京化成■）を水
１００ｗｊに溶解し１氷冷下、臭化シアン！ｆ（０，０
１モル）を１０＋ｄのジオキサンに溶解したものを滴下
した。このとぎ、２Ｎカセイソーダ水溶液によりそのｐ
Ｈ値を９〜１０（保った。約３０分で滴下し、その後２
００分間攪拌た。この反応液を氷冷ア、七ドア４００ｄ
中に加え、前記調製した活性化イヌリンを沈澱させた。
１００ｗｊに溶解し１氷冷下、臭化シアン！ｆ（０，０
１モル）を１０＋ｄのジオキサンに溶解したものを滴下
した。このとぎ、２Ｎカセイソーダ水溶液によりそのｐ
Ｈ値を９〜１０（保った。約３０分で滴下し、その後２
００分間攪拌た。この反応液を氷冷ア、七ドア４００ｄ
中に加え、前記調製した活性化イヌリンを沈澱させた。
しばらく静置後、上清を除去し、残存臭化シアンを氷冷
アセトン３００−で洗浄した。アセトンを完全に除去し
た後、水冷下ヘモグロビン１１．ｚ ｔ （ｏ、ｏ ｓ
Ｚ ｕモル）を含む水溶液（ｓｏｄ）を加え、４時間
損性後、アミコン（ｋｔｍｓｃｏｎ ）社製ｒｘｕ−ｔ
ｏｏ」練を用いて透析および濃縮を行った。生成物を東
洋ソーダ■製水系ゲル［Ｇ−３０ＱＯ８ＷＪカラムを用
いた高速液体クーマドグラフィーでチェックし、必要に
よりファルマシア社製「セファデックスＧ−１００Ｊを
用いたゲル濾過により分子量分画を行い、二種の両分（
以下、［イヌリン−）１ｂｌＪおよび［イヌリン−〇ｂ
ｊｌＪという。）を得た。
アセトン３００−で洗浄した。アセトンを完全に除去し
た後、水冷下ヘモグロビン１１．ｚ ｔ （ｏ、ｏ ｓ
Ｚ ｕモル）を含む水溶液（ｓｏｄ）を加え、４時間
損性後、アミコン（ｋｔｍｓｃｏｎ ）社製ｒｘｕ−ｔ
ｏｏ」練を用いて透析および濃縮を行った。生成物を東
洋ソーダ■製水系ゲル［Ｇ−３０ＱＯ８ＷＪカラムを用
いた高速液体クーマドグラフィーでチェックし、必要に
よりファルマシア社製「セファデックスＧ−１００Ｊを
用いたゲル濾過により分子量分画を行い、二種の両分（
以下、［イヌリン−）１ｂｌＪおよび［イヌリン−〇ｂ
ｊｌＪという。）を得た。
実施例２
仁ｇｐｙｓｒ（ｏ、ｏｏ１＋ル）を水１００ｄＣ溶解し
た溶液に、塩化シアヌルｓ ｔ （ｏ、ｏ ｏ ｓそル
）を、水１０ｓ７と７七トン２０ｄｆ）混合溶媒に溶解
した溶液を滴下した。この、とき、２Ｎ力（イソーメ水
溶液によりそのｐｉｉ値、を１Ｏ−１１Ｃ保った。滴下
終了後５分間攪拌した後、２Ｎ塩酸によりそのｐＨ値を
３Ｃした。これにアセトンｓＯ〇−を加えて生成する沈
澱を濾別し、さらｃ７セトンでよく洗浄した。アセトン
をよく除去した後、０２Ｍホウ酸緩衝液１００ｍ１を加
えた彼、これにＳ、１１１１Ｇ８１ＦＨ＃１液１５ｍを
加え、水冷下３時間攪拌した。以談の外理は実施ｊｊＨ
と同様に行った。
た溶液に、塩化シアヌルｓ ｔ （ｏ、ｏ ｏ ｓそル
）を、水１０ｓ７と７七トン２０ｄｆ）混合溶媒に溶解
した溶液を滴下した。この、とき、２Ｎ力（イソーメ水
溶液によりそのｐｉｉ値、を１Ｏ−１１Ｃ保った。滴下
終了後５分間攪拌した後、２Ｎ塩酸によりそのｐＨ値を
３Ｃした。これにアセトンｓＯ〇−を加えて生成する沈
澱を濾別し、さらｃ７セトンでよく洗浄した。アセトン
をよく除去した後、０２Ｍホウ酸緩衝液１００ｍ１を加
えた彼、これにＳ、１１１１Ｇ８１ＦＨ＃１液１５ｍを
加え、水冷下３時間攪拌した。以談の外理は実施ｊｊＨ
と同様に行った。
ゲル濾過により分子量分画を行い、二種の画分（以下、
「化１ンー１１３Ｊおよび［イヌリン−Ｈｂ４Ｊという
。）を得た。
「化１ンー１１３Ｊおよび［イヌリン−Ｈｂ４Ｊという
。）を得た。
実施例３
！［ｆｉ ２ Ｋおいで１ヘモグｐビンの代わりに６．
３φピリドキす一ルリン酸化ヘモグロビン！３．３−を
用いて一実施例２と同じ反応を行い、イヌリン−ヘモグ
ロビン−ピリドキサールリン酸結合物（［イヌリン−Ｈ
ｂ’ ５ Ｊという。）を得た。
３φピリドキす一ルリン酸化ヘモグロビン！３．３−を
用いて一実施例２と同じ反応を行い、イヌリン−ヘモグ
ロビン−ピリドキサールリン酸結合物（［イヌリン−Ｈ
ｂ’ ５ Ｊという。）を得た。
実施例４
イヌリンａ、ｏ ｔ （ｏ、ｏ Ｏ１モル）と無水コハ
ク酸３ ｆ （０，０３モル）をピリジン５０−中に溶
解し、２時間加熱還流した。冷却後、ヘキすン２００Ｉ
Ｉｔを加え、生じた沈澱をろ過した。この沈澱２．８２
とＮ−ヒドーキシコＩす１イミドＬ４ ｆ （０，０２
１毫ル）およびクシクーカルポジイミド４．２２嶽をろ
別した後、ろ液にヘヤサン３００ｓ＃加えるとイヌリン
サクシイミジルサクシネートの結晶３．５ｆが得られた
。この結晶２．１ Ｆ （０，０００４モル）を、１１
１へそグービン溶液（０，２Ｍ、ホウ酸緩衝液、ｐＨ１
１，５）に攪拌しつつ加えた。４Ｃで１６時間攪拌した
後、アミスン社ｒＰＭ−３０Ｊ膜により限外３過で未反
応のイヌリン及び塩類を除いた後、濃縮してイヌリン−
ヘモグロビン結合物（［イメリンーＨｂ６Ｊという。）
を得た。
ク酸３ ｆ （０，０３モル）をピリジン５０−中に溶
解し、２時間加熱還流した。冷却後、ヘキすン２００Ｉ
Ｉｔを加え、生じた沈澱をろ過した。この沈澱２．８２
とＮ−ヒドーキシコＩす１イミドＬ４ ｆ （０，０２
１毫ル）およびクシクーカルポジイミド４．２２嶽をろ
別した後、ろ液にヘヤサン３００ｓ＃加えるとイヌリン
サクシイミジルサクシネートの結晶３．５ｆが得られた
。この結晶２．１ Ｆ （０，０００４モル）を、１１
１へそグービン溶液（０，２Ｍ、ホウ酸緩衝液、ｐＨ１
１，５）に攪拌しつつ加えた。４Ｃで１６時間攪拌した
後、アミスン社ｒＰＭ−３０Ｊ膜により限外３過で未反
応のイヌリン及び塩類を除いた後、濃縮してイヌリン−
ヘモグロビン結合物（［イメリンーＨｂ６Ｊという。）
を得た。
実施例５
実施例４において、へそグービンの代わりにピリドキサ
ールリン酸結合へそグービンを用いて、実施例４と同様
に反応を行い、イメリンーへそグービン−ピリドキサー
ルリン酸結合物（「イヌリン−１１ｂ７Ｊという。）を
得た。
ールリン酸結合へそグービンを用いて、実施例４と同様
に反応を行い、イメリンーへそグービン−ピリドキサー
ルリン酸結合物（「イヌリン−１１ｂ７Ｊという。）を
得た。
実施例６
仁リン１０ ｆ （０，００２七ｋ）と無水：２／−り
酸６．ｆｌ Ｆ （０，０６２モル）を４０ｄのジメチ
ルホルムアミドと４−のピリジンの混合溶媒に懸濁させ
て、１１０ｒで２時間攪拌を行った。冷却後アセシンを
加えて生成する結晶をろ過し、イヌリンすクシネートの
結晶８ｔを得た。この結晶８ｔ（０，００１３モル）と
Ｎ−にドーキシコハタ酸イｉ）’１．７＠ｆ（０，６１
５４４）を６０ｄｆ）ＤＭＦに溶解し、これｃ ａ、ｔ
ｓ ｔ （ｏ、ｏ ｔ ａそル）のジシクロヘキシル
カルボジイミドをｍ＊室温にて一夜攪拌した。沈澱物を
ろ過後、ろ液にエチルエーテル１２０ｍ＃を加えるとイ
ヌリンサタシイミジルサクシネート５．２ｔを得た。こ
れを１３％へそグービン溶液！ＩＯａｇ（０，００００
６モル）と０．１ Ｍホウ酸緩衡液（ｐＨ８，１ｉ）２
００ｄに溶解し、これに上記イヌリンサタシイミジルす
タシネート３Ｆ（０，０００＠そル）を加え、４ＵＣて
１時間攪件した。反応液を蒸留水に対して透析した後、
分子量阻止３万の膜（Ａｍｉ＠＋ｓａ社製 ｒＰＭ３０
Ｊ）による限外ろ過に上り脱塩及び濃縮を行い、引き続
きＭｉｌｌｉｐ６ｒｅ社製「Ｇ８」膜により無−ろ過を
行い、仁１ンーヘモグロビン結合物（「イヌリン−Ｈｂ
＠Ｊという。）を得た。
酸６．ｆｌ Ｆ （０，０６２モル）を４０ｄのジメチ
ルホルムアミドと４−のピリジンの混合溶媒に懸濁させ
て、１１０ｒで２時間攪拌を行った。冷却後アセシンを
加えて生成する結晶をろ過し、イヌリンすクシネートの
結晶８ｔを得た。この結晶８ｔ（０，００１３モル）と
Ｎ−にドーキシコハタ酸イｉ）’１．７＠ｆ（０，６１
５４４）を６０ｄｆ）ＤＭＦに溶解し、これｃ ａ、ｔ
ｓ ｔ （ｏ、ｏ ｔ ａそル）のジシクロヘキシル
カルボジイミドをｍ＊室温にて一夜攪拌した。沈澱物を
ろ過後、ろ液にエチルエーテル１２０ｍ＃を加えるとイ
ヌリンサタシイミジルサクシネート５．２ｔを得た。こ
れを１３％へそグービン溶液！ＩＯａｇ（０，００００
６モル）と０．１ Ｍホウ酸緩衡液（ｐＨ８，１ｉ）２
００ｄに溶解し、これに上記イヌリンサタシイミジルす
タシネート３Ｆ（０，０００＠そル）を加え、４ＵＣて
１時間攪件した。反応液を蒸留水に対して透析した後、
分子量阻止３万の膜（Ａｍｉ＠＋ｓａ社製 ｒＰＭ３０
Ｊ）による限外ろ過に上り脱塩及び濃縮を行い、引き続
きＭｉｌｌｉｐ６ｒｅ社製「Ｇ８」膜により無−ろ過を
行い、仁１ンーヘモグロビン結合物（「イヌリン−Ｈｂ
＠Ｊという。）を得た。
実施例７
仁１ン１０ ｔ （０，００鵞七ル）および無水プハタ
酸４ Ｆ （０，０４モル）を用い実施例・と同様Ｃし
て、イヌリンサタシネー）Ｓ、ｌＦを得、さらにこれと
Ｈ−ヒドーキシコハタ酸イミ）１ｔ（０，００ＩＩ ７
モル）からイヌリンす？シイミジルサタ′シネート４．
８ｆを得た。このイヌリンｔタシイミジルサタシネート
を用いて実施例６と同様の反応によりイヌリン−へそグ
ービン結合物（「イヌリン−ＩＩｂ９Ｊという。）を得
た。
酸４ Ｆ （０，０４モル）を用い実施例・と同様Ｃし
て、イヌリンサタシネー）Ｓ、ｌＦを得、さらにこれと
Ｈ−ヒドーキシコハタ酸イミ）１ｔ（０，００ＩＩ ７
モル）からイヌリンす？シイミジルサタ′シネート４．
８ｆを得た。このイヌリンｔタシイミジルサタシネート
を用いて実施例６と同様の反応によりイヌリン−へそグ
ービン結合物（「イヌリン−ＩＩｂ９Ｊという。）を得
た。
実施例口
実施例６と同様に無水クハタ酸２ Ｆ （０，０ｆｆｉ
４ル）およびＮ−ヒトー中シフハタ鐵イミドｏ、７３
Ｆ （０，００６３モル）かう、イヌリンサタシイミジ
ルす？シネート４．４ｔを得た。さらにこれを用いて実
施例６と同様の反応により仁１ンーヘモタ―ヒン結合物
（「イ・ヌリンーＨｂｌＯＪという。）を得た。
４ル）およびＮ−ヒトー中シフハタ鐵イミドｏ、７３
Ｆ （０，００６３モル）かう、イヌリンサタシイミジ
ルす？シネート４．４ｔを得た。さらにこれを用いて実
施例６と同様の反応により仁１ンーヘモタ―ヒン結合物
（「イ・ヌリンーＨｂｌＯＪという。）を得た。
実施例９
実施例６と同様に無水コハク酸１ Ｆ （０，０１モル
）およびＮ−ヒドロキシコハタ酸イミド０ＳＳｔ （ｏ
、ｏ ｏ ｓそル）から、イヌリンサタシイミジルす！
シネート４．１ｆを得た。さらに、これを用いて実施例
６においてヘモグロビンのかわりにビリドキす一ルリン
酸化へそグービン（１１％１４１１ｄ）を用いて実施例
６と同様の反応を行うことによりイヌリン−ヘモグービ
ン結合物（「イヌリン−Ｈｂ １１．Ｊという。）を
得た。
）およびＮ−ヒドロキシコハタ酸イミド０ＳＳｔ （ｏ
、ｏ ｏ ｓそル）から、イヌリンサタシイミジルす！
シネート４．１ｆを得た。さらに、これを用いて実施例
６においてヘモグロビンのかわりにビリドキす一ルリン
酸化へそグービン（１１％１４１１ｄ）を用いて実施例
６と同様の反応を行うことによりイヌリン−ヘモグービ
ン結合物（「イヌリン−Ｈｂ １１．Ｊという。）を
得た。
実施例１Ｇ
注射用蒸留水２２５ ｗｄｒ−１ｌン酸２水素カリウム
１．７ ｆと１３．２−ヘモグルビン溶液２ｆｉ、６ｄ
（０，００００Ｉｓ ４モル）を加えた後、これを２Ｎ
カセイソーダ水溶液でｐ）ＩＩ、８に−節した。これに
、ピリドキサール５′−リン酸５１１１ｇ（０，０００
２モル）を加えて４でで１時間攪拌した後、これに水素
化ホウ素ナトリウム３６■（ｏ、ｏ ｏ ｏ ｓフモル
）を加えた。さらに、１時間攪拌した後、こｈを２Ｎカ
セイソーダ水溶液でｐＨ１ｌＪに調節しつつ、水冷下実
施例４に記載の方法で調製したイヌリンサタシイルルサ
クシネー） ｓ ｒ（ｏ、ｏｏｔｘそル）を添加した。
１．７ ｆと１３．２−ヘモグルビン溶液２ｆｉ、６ｄ
（０，００００Ｉｓ ４モル）を加えた後、これを２Ｎ
カセイソーダ水溶液でｐ）ＩＩ、８に−節した。これに
、ピリドキサール５′−リン酸５１１１ｇ（０，０００
２モル）を加えて４でで１時間攪拌した後、これに水素
化ホウ素ナトリウム３６■（ｏ、ｏ ｏ ｏ ｓフモル
）を加えた。さらに、１時間攪拌した後、こｈを２Ｎカ
セイソーダ水溶液でｐＨ１ｌＪに調節しつつ、水冷下実
施例４に記載の方法で調製したイヌリンサタシイルルサ
クシネー） ｓ ｒ（ｏ、ｏｏｔｘそル）を添加した。
これを４Ｃで一夜攪拌した後、ミリボア （Ｍｌｌｌｉ
ｐｏｒｓ ）社製［ペリコン（Ｐ＊ｌｌｌ＠ｏｎ）Ｊ濃
縮装置で限外ろ過及び濃縮を行い、イヌリン−ヘモグロ
ビン結合物（「イヌリン−Ｈｌ５１２Ｊという。）のＬ
ｉｌ５＠液を得た。
ｐｏｒｓ ）社製［ペリコン（Ｐ＊ｌｌｌ＠ｏｎ）Ｊ濃
縮装置で限外ろ過及び濃縮を行い、イヌリン−ヘモグロ
ビン結合物（「イヌリン−Ｈｌ５１２Ｊという。）のＬ
ｉｌ５＠液を得た。
実施例１１
前記に得られたイヌリン−へそダロビン結合物について
、ヘモグ賞ビンナプエニット当すのイヌリンの結合数を
求め、サブエニット当たりの分子量を求めた。また、同
試料について血管内滞留時間およびＳＯ＠酸素解離圧を
求めた。
、ヘモグ賞ビンナプエニット当すのイヌリンの結合数を
求め、サブエニット当たりの分子量を求めた。また、同
試料について血管内滞留時間およびＳＯ＠酸素解離圧を
求めた。
シアンメトヘモグロビン法（Ｄ、 Ｄｒａｂｋｌｍ、
Ａｍ。
Ａｍ。
Ｊ、Ｍ・ｄ、 ｇｅｌ、、マ・１２１？ 、 ７１Ｇ
−７１１（１９４９））によユ濃度を決定したイヌ替ン
ーヘモグロビン結合体溶液（濃度Ｃｏ ）の一定量（Ｖ
ｏ ）をと９、凍結乾燥後、重量を測定した。使用した
イヌリンの平均分子量をＭＩ％へそグービンの分子量を
Ｍ、Ａすると、イヌリンの結合数ａは次式【より求めら
れる。
−７１１（１９４９））によユ濃度を決定したイヌ替ン
ーヘモグロビン結合体溶液（濃度Ｃｏ ）の一定量（Ｖ
ｏ ）をと９、凍結乾燥後、重量を測定した。使用した
イヌリンの平均分子量をＭＩ％へそグービンの分子量を
Ｍ、Ａすると、イヌリンの結合数ａは次式【より求めら
れる。
（ｍｓ−Ｃ＠Ｖｏ ）／ＭＩ
ＣｏＶ・／ＭＷ
但し、分子量はすプユニット当たりの平均値である。こ
れより、イヌリン−ヘモグロビン結合物の分子量Ｍを次
式により求めた。
れより、イヌリン−ヘモグロビン結合物の分子量Ｍを次
式により求めた。
Ｍ＝ＭＨ十勤Ｍｌ
〔血管内滞留時間〕
二試料につきラット２匹を用い、ラットの体重に対し５
ｄ／＆ｙの４〜６チ試料な静注後、５分、３０分、６０
分、９０分および１２０分経過時に０．５ｄずつ採血し
、遠心上清中の試料の濃度をシアンノドヘモグービン法
で定量した。そのグラフから注入した試料の血漿中での
半減期を計算した。
ｄ／＆ｙの４〜６チ試料な静注後、５分、３０分、６０
分、９０分および１２０分経過時に０．５ｄずつ採血し
、遠心上清中の試料の濃度をシアンノドヘモグービン法
で定量した。そのグラフから注入した試料の血漿中での
半減期を計算した。
同試料溶液について奇弁らの方法（Ｋ、 ！ｍａｌ。
Ｈ，Ｍｏｒｉａｚｏｔ＠＋ Ｍ、 Ｋｏｔａｎｌ＊ Ｈ
，Ｗａｔａｒｉ＋■、 Ｗａｋａ＊ｍａｄ Ｍ、 Ｋｕ
ｒｏｄａ＋ Ｂｉｏｃｂ１ｍ＋、 Ｂｉｏｐｋｙｉ、
Ａｅｔａ＋ｌ旦０，１８Ｇ−１９６（１９７０））によ
り、酸素平衡曲線を描き、それよりｓｏ＊ａｍ素解離圧
（Ｐ、。）を求めた。
，Ｗａｔａｒｉ＋■、 Ｗａｋａ＊ｍａｄ Ｍ、 Ｋｕ
ｒｏｄａ＋ Ｂｉｏｃｂ１ｍ＋、 Ｂｉｏｐｋｙｉ、
Ａｅｔａ＋ｌ旦０，１８Ｇ−１９６（１９７０））によ
り、酸素平衡曲線を描き、それよりｓｏ＊ａｍ素解離圧
（Ｐ、。）を求めた。
結果を表１ｇ−示した。
表 １
イη−−Ｈｂ１ １．７個 ２．５万ダルトン
９０分２．Ｏ５ｍｍＨｇ＃ ２ ｇ、８ Ｓ、１１１
０１４＠ ＃ ３３．９３Ｊ １１Ｇ ０．９４ ＃ ４７．４６．４１２００．７２ ＃ ５４．！！ ３．７１００ ｉ＋２５＃ ＩＩ ３
．Ｏｓ、ｔ ｓｏ ｓｓ５〃７雪Ｊ ！、’９ ８０
４Ｊ０ −一【グロビン（ＭｉＡ） １
．６ ４０ ６４０デ午式ト
ランーＨｂ 側照） ５・８ ７０ １４Ｏ実施例
１！ イヌリｙ−Ｈ１＋１２を腎臓還流液（ＮａＣ１５７０Ｉ
ｆ ／ ｄｔ、ＮａＨＣＯｌ ４１１．８ 叩／ ｄ
ｊ、ＫＣ） ４．９１１／＃％ＣａＣ１５４，、＠
Ｑ／ ｄｌ、 Ｍｇｃｔ、 ｓｓｎ、ｏ ２
．４ ｓｇ／ ｄｔｓグル：ｌ−Ｘ ｌ 、 ８ ｔ
／ ｄｌ ） Ｆ） ５．７ Ｔｏ １１１ 液トシ
タ後、ラットに交換輸血実験を行った。交換は、ｓＤ系
ラットの尾静脈にポリエチレンチューブ（外径＝＋■）
でカニニレを挿入して行った。そこから１分かけて血液
１ｄを脱血した後、同カニニレから１分かけてｌｓｊの
試料液を注入し、更にその後１分間休むという操作を２
０〜３０回繰返して交換を行い、８５ｓの交換まで行っ
た。
９０分２．Ｏ５ｍｍＨｇ＃ ２ ｇ、８ Ｓ、１１１
０１４＠ ＃ ３３．９３Ｊ １１Ｇ ０．９４ ＃ ４７．４６．４１２００．７２ ＃ ５４．！！ ３．７１００ ｉ＋２５＃ ＩＩ ３
．Ｏｓ、ｔ ｓｏ ｓｓ５〃７雪Ｊ ！、’９ ８０
４Ｊ０ −一【グロビン（ＭｉＡ） １
．６ ４０ ６４０デ午式ト
ランーＨｂ 側照） ５・８ ７０ １４Ｏ実施例
１！ イヌリｙ−Ｈ１＋１２を腎臓還流液（ＮａＣ１５７０Ｉ
ｆ ／ ｄｔ、ＮａＨＣＯｌ ４１１．８ 叩／ ｄ
ｊ、ＫＣ） ４．９１１／＃％ＣａＣ１５４，、＠
Ｑ／ ｄｌ、 Ｍｇｃｔ、 ｓｓｎ、ｏ ２
．４ ｓｇ／ ｄｔｓグル：ｌ−Ｘ ｌ 、 ８ ｔ
／ ｄｌ ） Ｆ） ５．７ Ｔｏ １１１ 液トシ
タ後、ラットに交換輸血実験を行った。交換は、ｓＤ系
ラットの尾静脈にポリエチレンチューブ（外径＝＋■）
でカニニレを挿入して行った。そこから１分かけて血液
１ｄを脱血した後、同カニニレから１分かけてｌｓｊの
試料液を注入し、更にその後１分間休むという操作を２
０〜３０回繰返して交換を行い、８５ｓの交換まで行っ
た。
同交換率では対照として用いたデ中ストランフ０＠液で
は６分以内に死亡するのに対し本試料溶液では２時間以
上生存していた。
は６分以内に死亡するのに対し本試料溶液では２時間以
上生存していた。
以上の結果より、ヘモグービン−イヌリン結合体は、血
中からの消失速度（半減期）はへそグロビンの２倍に延
長し、かつ酸素親和性の点でもへそグービンと同程度の
値を維持しており、人工血液用の酸素運搬剤として好適
であることが理解される。
中からの消失速度（半減期）はへそグロビンの２倍に延
長し、かつ酸素親和性の点でもへそグービンと同程度の
値を維持しており、人工血液用の酸素運搬剤として好適
であることが理解される。
特許出願人 味の素株式会社
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 へそグロビン−イヌリン結合体を含有スる人工血
液用酸素運搬剤。 ２ 酸素運搬活性成分が実質的にヘモグーピンーイヌリ
ン結合体より成る特許請求の範囲第１項記載の酸素運搬
剤。 龜 へモグービンが、ピリドキサール誘導体で修飾され
ている特許請求の範囲第１項記載の酸素運搬剤。 （へそグロビン−イヌリン結合体の結合剤がカルボン酸
である特許請求の範囲第１項記載の酸素運搬剤。 □
。 Ｅ カルボン酸が、七ツバｐゲン化カルボン酸およびジ
カルボン酸□からなる群より選ばれたカルボン酸である
特許請求の範囲第４項記載の酸素運搬剤。 ・
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56195301A JPS5899420A (ja) | 1981-12-04 | 1981-12-04 | 人工血液用酸素運搬剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56195301A JPS5899420A (ja) | 1981-12-04 | 1981-12-04 | 人工血液用酸素運搬剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5899420A true JPS5899420A (ja) | 1983-06-13 |
| JPH029564B2 JPH029564B2 (ja) | 1990-03-02 |
Family
ID=16338871
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56195301A Granted JPS5899420A (ja) | 1981-12-04 | 1981-12-04 | 人工血液用酸素運搬剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5899420A (ja) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5251016A (en) * | 1975-10-22 | 1977-04-23 | Wong Jeffrey Tze Fei | Blood substitute liquid based on hemogulobin |
| JPS52154515A (en) * | 1976-04-23 | 1977-12-22 | Biotest Serum Institut Gmbh | Hemoglobin preparation strengthening oxygen release property |
-
1981
- 1981-12-04 JP JP56195301A patent/JPS5899420A/ja active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5251016A (en) * | 1975-10-22 | 1977-04-23 | Wong Jeffrey Tze Fei | Blood substitute liquid based on hemogulobin |
| JPS52154515A (en) * | 1976-04-23 | 1977-12-22 | Biotest Serum Institut Gmbh | Hemoglobin preparation strengthening oxygen release property |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH029564B2 (ja) | 1990-03-02 |
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