JPS61191675A - 巨大分子物質 - Google Patents
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- JPS61191675A JPS61191675A JP60290918A JP29091885A JPS61191675A JP S61191675 A JPS61191675 A JP S61191675A JP 60290918 A JP60290918 A JP 60290918A JP 29091885 A JP29091885 A JP 29091885A JP S61191675 A JPS61191675 A JP S61191675A
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- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/06—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
- C07D213/70—Sulfur atoms
- C07D213/71—Sulfur atoms to which a second hetero atom is attached
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規なピリジン化合物に関する。本発明による
新規な化合物は二官能性カップリング剤およびチオール
化剤として特に有用である。
新規な化合物は二官能性カップリング剤およびチオール
化剤として特に有用である。
そのうちの少くとも一方が蛋白質またはポリペプチドか
らなる２種の物質の接合体（コンジュゲート）の製造に
おいて接合体の各成分を共有結合でカップリングさせる
ために二官能性剤を使用することは知られておシ、通常
は接合分子中のアミノ基が接合反応のために使用されて
いる。これに関するよく知られた剤はグルタルジアルデ
ヒドである。しかしながら、蛋白質またはポリペプチド
は１個以上のアミノ基を含有しておシ、他方接合体の第
２４分を構成する物質もまた１個以上のアミノ基を含有
している。
らなる２種の物質の接合体（コンジュゲート）の製造に
おいて接合体の各成分を共有結合でカップリングさせる
ために二官能性剤を使用することは知られておシ、通常
は接合分子中のアミノ基が接合反応のために使用されて
いる。これに関するよく知られた剤はグルタルジアルデ
ヒドである。しかしながら、蛋白質またはポリペプチド
は１個以上のアミノ基を含有しておシ、他方接合体の第
２４分を構成する物質もまた１個以上のアミノ基を含有
している。
グルタルジアルデヒドおよび接合分子中のアミノ基を用
いる他の二官能性剤をカップリングさせる場合には、所
定組成の接合体（たとえば各成分の単一分子のみを含有
す２二分子接合体）を生成するため、さらにまた蛋白質
またはポリペプチド中に分子内交叉結合をもたらすかま
たは同一種類の成分の２個の分子または分子の一方ある
いは両方の種類の３個またはそれ以上の分子を有する接
合体の生成をもたらしそしである場合にはまた接合体と
ほぼ同じ大きさであシうる凝集体を生成するようなカッ
プリング剤の重合（たとえばグルタルジアルデヒドが使
用される場合）をもたらす副反応も得られる。すなわち
、もつとも不均質な生成物混合物が得られるのである。
いる他の二官能性剤をカップリングさせる場合には、所
定組成の接合体（たとえば各成分の単一分子のみを含有
す２二分子接合体）を生成するため、さらにまた蛋白質
またはポリペプチド中に分子内交叉結合をもたらすかま
たは同一種類の成分の２個の分子または分子の一方ある
いは両方の種類の３個またはそれ以上の分子を有する接
合体の生成をもたらしそしである場合にはまた接合体と
ほぼ同じ大きさであシうる凝集体を生成するようなカッ
プリング剤の重合（たとえばグルタルジアルデヒドが使
用される場合）をもたらす副反応も得られる。すなわち
、もつとも不均質な生成物混合物が得られるのである。
特定の反応条件を使用しそして反応混合物をたとえばア
フイニテイクロマトグラフイーおよびゲルＰ遍のような
種類の分離方法で精製することによシはじめて充分な単
一性および純度を有する接合体を得ることが可能である
が、しかしこれらの分離方法は多くの労力を要ししかも
かなシ時間がかかる。しかも、収量はしばしば非常に低
い。
フイニテイクロマトグラフイーおよびゲルＰ遍のような
種類の分離方法で精製することによシはじめて充分な単
一性および純度を有する接合体を得ることが可能である
が、しかしこれらの分離方法は多くの労力を要ししかも
かなシ時間がかかる。しかも、収量はしばしば非常に低
い。
本発明にしたがえば、既知の剤の場合におけるような副
反応を起すことなしに穏和な条件下で比較的単一性の二
分子性またはオリゴマー性のホモおよびヘテロの両液合
体を製造するための二官能性剤として使用できる新しい
群の化合物が発見された。この新規なカップリング剤を
使用する場合にはよシ高い収量で所望の接合体が得られ
る。
反応を起すことなしに穏和な条件下で比較的単一性の二
分子性またはオリゴマー性のホモおよびヘテロの両液合
体を製造するための二官能性剤として使用できる新しい
群の化合物が発見された。この新規なカップリング剤を
使用する場合にはよシ高い収量で所望の接合体が得られ
る。
また、新規な化合物はアミノ基含有物質をチオール化す
るためのチオール化剤としても使用されうる。これはア
ミン基を含有しそして水性液体中に可溶性である巨大分
子状物質特にアミン基を含有するバイオポリマーおよび
それの誘導体主として蛋白質、ポリペプチドおよびポリ
サンカライドまたはアミノ基を含有するそれらの誘導体
て関して特に好ましい。
るためのチオール化剤としても使用されうる。これはア
ミン基を含有しそして水性液体中に可溶性である巨大分
子状物質特にアミン基を含有するバイオポリマーおよび
それの誘導体主として蛋白質、ポリペプチドおよびポリ
サンカライドまたはアミノ基を含有するそれらの誘導体
て関して特に好ましい。
本発明による化合物は、式
％式％（
〔式中、Ｒ１は２−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリジ
ルまたは４−ピリジルであシ、Ａは１〜１０個好ましく
は１〜６個の炭素原子を有する炭化水素残基でありモし
て２は基 （式中ｎは２ｔたは３であシ、Ｒ１は前記Ｒ１と同じ定
義を有しそしてそれに等しくそしてＲ２はメチルまたは
エチルである）であるかまたは最後に述べた基の酸付加
塩である〕を有する点に特徴がある。
ルまたは４−ピリジルであシ、Ａは１〜１０個好ましく
は１〜６個の炭素原子を有する炭化水素残基でありモし
て２は基 （式中ｎは２ｔたは３であシ、Ｒ１は前記Ｒ１と同じ定
義を有しそしてそれに等しくそしてＲ２はメチルまたは
エチルである）であるかまたは最後に述べた基の酸付加
塩である〕を有する点に特徴がある。
炭化水素残基Ａは脂肪族残基であるのが好ましいが、ま
た芳香族残基であってもよい。Ａはたとえば直鎖状また
は分枝鎖状のアルキレン残基たとえば−（ＣＢ２）ｍ−
Ｃ式中ｍは整数１〜１０好ましくは１〜６である）たと
えば−（！Ｈ２−（！Ｈ２−である。
た芳香族残基であってもよい。Ａはたとえば直鎖状また
は分枝鎖状のアルキレン残基たとえば−（ＣＢ２）ｍ−
Ｃ式中ｍは整数１〜１０好ましくは１〜６である）たと
えば−（！Ｈ２−（！Ｈ２−である。
式１で表わされる化合物は多数の異なる方法によシ製造
されうる。現在好適とされている方法は以下のとおシで
ある。
されうる。現在好適とされている方法は以下のとおシで
ある。
式！において２が基
である化合物は、縮合剤の存在下で式
％式％（）
（式中Ｒ１およびＡは共に前述の定義を有する）で表わ
されるジスルフィドをｎが２である場合のＮ−ヒドロキ
シスクシンイミド（またはｎが３である化合物を所望す
る場合にはｎが３である類縁化合物）と反応させること
によシ製造される。
されるジスルフィドをｎが２である場合のＮ−ヒドロキ
シスクシンイミド（またはｎが３である化合物を所望す
る場合にはｎが３である類縁化合物）と反応させること
によシ製造される。
この反応は１０〜３０℃の温度で有機溶媒中において行
われる。適当な溶媒の例としてはたとえばメチレンクロ
ライド、エチレンアセテートおよびジオキサンがあげら
れる。反応時間は反応成分および反応温度の選択によシ
変わる。
われる。適当な溶媒の例としてはたとえばメチレンクロ
ライド、エチレンアセテートおよびジオキサンがあげら
れる。反応時間は反応成分および反応温度の選択によシ
変わる。
使用される縮合剤はエステル化反応で一般的な剤たとえ
ば・Ｎ、Ｎ−ジシクロへキシルカルボジイミドであるこ
とができる。
ば・Ｎ、Ｎ−ジシクロへキシルカルボジイミドであるこ
とができる。
弐■で表わされる出発化合物は１式
％式％）
で表わされるメルカプトアルキルカルボン酸ヲ式
％式％）
（式中人およびＲ１は前述の定義を有する）で表わされ
るジピリジルジスルフィドと反応させこことによ＃）製
造されうる。
るジピリジルジスルフィドと反応させこことによ＃）製
造されうる。
この反応は１０〜３０℃の温度で有機溶媒中において行
われる。適当な溶媒の例としてはたとえばエタノール、
酢酸エチルおよびジオキサンがあげられる。反応時間は
反応成分および反応温度の選択により変化する。
われる。適当な溶媒の例としてはたとえばエタノール、
酢酸エチルおよびジオキサンがあげられる。反応時間は
反応成分および反応温度の選択により変化する。
式「において２が基
−Ｃ−８−Ｒ１
である化合物は、前記式［のジスルフィドを対応するチ
オピリドンと有機溶媒中において縮合剤の存在下で最初
は低温たとえば一２０℃で約１〜２時間ついで周囲温度
（約＋２０℃）で反応させることによシ製造される。こ
こでの適当な溶媒はたとえばメチレンクロライド、酢酸
エチルおよびジオキサンである。使用する縮合剤はＮ。
オピリドンと有機溶媒中において縮合剤の存在下で最初
は低温たとえば一２０℃で約１〜２時間ついで周囲温度
（約＋２０℃）で反応させることによシ製造される。こ
こでの適当な溶媒はたとえばメチレンクロライド、酢酸
エチルおよびジオキサンである。使用する縮合剤はＮ。
Ｎ−ジシクロへキシルカルボジイミドであるのが好まし
い。
い。
使用される出発物質は式Ｉで表わされる化合物を式■で
表わされる化合物と反応させることによシ得られる混合
物であるのが好ましい。
表わされる化合物と反応させることによシ得られる混合
物であるのが好ましい。
Ｅ
式１において２が基−Ｃ−０−Ｒ２である化合物は、有
機溶媒中において式 ％式％ （式中Ｒ２およびＡは前述の定義を有する）で表わされ
るチオールイミデートを弐Ｒ１−８−８−Ｒ１（式中Ｒ
１は前述の定義を有する）で表わされるピリジルジスル
フィドと反応させることによシ製造される。溶媒はたと
えば約１０％の氷酢酸を含有するメタノールであること
ができる。
機溶媒中において式 ％式％ （式中Ｒ２およびＡは前述の定義を有する）で表わされ
るチオールイミデートを弐Ｒ１−８−８−Ｒ１（式中Ｒ
１は前述の定義を有する）で表わされるピリジルジスル
フィドと反応させることによシ製造される。溶媒はたと
えば約１０％の氷酢酸を含有するメタノールであること
ができる。
本発明による化合物を二官能性カップリング剤として使
用する場合には次の方法が適用される。例示のために本
発明にしたがってＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピ
リジルジチオ）−プロピオネート のたすけをかシてカップリングさせるために２種の物質
〔各々が少くとも１個のアミン基を反応に提供しうるも
のであり（念とえば蛋白質およびペプチド）、一般的に
Ｂ１−ＮＨ２およびＢ２−ＩＪＨ２として示す〕が選択
された。
用する場合には次の方法が適用される。例示のために本
発明にしたがってＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピ
リジルジチオ）−プロピオネート のたすけをかシてカップリングさせるために２種の物質
〔各々が少くとも１個のアミン基を反応に提供しうるも
のであり（念とえば蛋白質およびペプチド）、一般的に
Ｂ１−ＮＨ２およびＢ２−ＩＪＨ２として示す〕が選択
された。
これらの物質は最初にそれぞれ以下のように補助剤と反
応する。
応する。
訃よび
これら生成物の一方たとえば工程ｂ）からの生成物はつ
いで次式にしたがって酸媒体中でたとえばジチオトレイ
トール（Ｉ）ＴＴ）で還元される・■ ついでこうして得られたチオールは次式にしたがってこ
の場合には工程ａ）からのジスルフィドと反応する。
いで次式にしたがって酸媒体中でたとえばジチオトレイ
トール（Ｉ）ＴＴ）で還元される・■ ついでこうして得られたチオールは次式にしたがってこ
の場合には工程ａ）からのジスルフィドと反応する。
工程ａ）およびｂ）は通常２０〜２５℃の温度で５〜８
のｐＨを有しそして１〜１０容量係のメタールまたはエ
タノールを含有する水溶液中において実施される。
のｐＨを有しそして１〜１０容量係のメタールまたはエ
タノールを含有する水溶液中において実施される。
工程Ｃ）は通常２０〜２５℃の温度でｐＨ３〜５におけ
る水性媒体中（Ｃおいて実施されうる。変性された分子
Ｂ２が本来的なジスルフィド結合を有していない場合に
は還元（よまた別の遷元剤を用いそしてより高いｐＨ値
たとえばｐＨｓ〜ａ５までで実施されうる。
る水性媒体中（Ｃおいて実施されうる。変性された分子
Ｂ２が本来的なジスルフィド結合を有していない場合に
は還元（よまた別の遷元剤を用いそしてより高いｐＨ値
たとえばｐＨｓ〜ａ５までで実施されうる。
工程ｄ）は通常２０〜２５℃でｐＨ４〜８における水性
媒体中で実施される。
媒体中で実施される。
前記物質の一方がすでに反応に関与しうる反応性チオー
ル基（たとえば脂肪族チオール基）を有する場合には前
記工程のｂ）およびＣ）は省略できる。
ル基（たとえば脂肪族チオール基）を有する場合には前
記工程のｂ）およびＣ）は省略できる。
二分子へテロ接合体が所望される場合には２種の物質は
およそモノ置換よシ以上に置換されるべきではない。所
望ならば２分子よシも大きい接合体は２種物質を１分子
当た９１個よシ多い置換基で置換することによシ裏遺さ
れうる。
およそモノ置換よシ以上に置換されるべきではない。所
望ならば２分子よシも大きい接合体は２種物質を１分子
当た９１個よシ多い置換基で置換することによシ裏遺さ
れうる。
ここでは当然これら物質が反応にあずかる相当する数の
７ミノ基を含有するということが必要である。オリゴ接
合体（たとえばトリ接合体およびテトラ接合体）の合成
においてはこれら物質の一つは一般におよそモノ置換以
上に置換されるべきではない。まな、前述と同じ方法で
ホモ接４すなわちＢ１＝Ｂ２）を製造することも可能で
ある。
７ミノ基を含有するということが必要である。オリゴ接
合体（たとえばトリ接合体およびテトラ接合体）の合成
においてはこれら物質の一つは一般におよそモノ置換以
上に置換されるべきではない。まな、前述と同じ方法で
ホモ接４すなわちＢ１＝Ｂ２）を製造することも可能で
ある。
本発明の化合物のチオール化剤としての有用性は前記工
程のｂ）およびＣ）から明らかである。
程のｂ）およびＣ）から明らかである。
これに関しては導入されるチオール基がピリジルジスル
フィド形態で閉塞されているということが特に好ましい
。このようにして導入されたチオール基とその物質（た
とえばその物質がジスルフィド橋を含有する蛋白質また
はポリペプチドである場合）中に存在するジスルフィド
橋との望ましくないチオールジスルフィド交換反応が変
性工程の間そして変性物質たとえば変性蛋白質を貯蔵す
る場合に避けられる。物質（たとえば蛋白質）中に導入
されたＲ１− Ｓ −８−基をチオール基（Ｈ８−）に
変換し九い場合には、これは同時に物質中に存在しうる
本来のジスルフィド橋を還元することなしに選択還元に
よシ実施されうる。これはＲ１−８−８−基とたとえば
蛋白質中の本来の脂肪族ジスルフィド橋との間の化学反
応性の相異によシ可能である。
フィド形態で閉塞されているということが特に好ましい
。このようにして導入されたチオール基とその物質（た
とえばその物質がジスルフィド橋を含有する蛋白質また
はポリペプチドである場合）中に存在するジスルフィド
橋との望ましくないチオールジスルフィド交換反応が変
性工程の間そして変性物質たとえば変性蛋白質を貯蔵す
る場合に避けられる。物質（たとえば蛋白質）中に導入
されたＲ１− Ｓ −８−基をチオール基（Ｈ８−）に
変換し九い場合には、これは同時に物質中に存在しうる
本来のジスルフィド橋を還元することなしに選択還元に
よシ実施されうる。これはＲ１−８−８−基とたとえば
蛋白質中の本来の脂肪族ジスルフィド橋との間の化学反
応性の相異によシ可能である。
すなわち本発明はまた水性液体中に溶解する変性巨大分
子状物質、特にアミノ基を含有するバイオポリマー（ｂ
ｉｏｐｏｌｙｎｅｒ ）およびそれの誘導体、好ましく
はアミノ基を含有する蛋白質、ポリペプチドおよびポリ
サッカライドまたはそれらの誘導体をも包含する。これ
らの変性巨大分子状物質はその中の１個またはそれ以上
のアミノ基（−ＭＨ２）が式−ＭＨ−Ｃ−Ａ−８−３−
１１（式中人およびＲ１は共に前述の定義を有しそして
Ｘは０またはＭＨ１好ましくは０である＞”’ｅ ＊
”−ｒａ ｈた点に特徴がある。これらの基は式 −ＮＨ−ｃ−ＣＨ２−ｃａ２−５−８−Ｒ’ Ｃ式中Ｒ
１は前述の定義を有する）で表わされる基から選択され
るのが好ましく、２−ピリジルが好ましい。
子状物質、特にアミノ基を含有するバイオポリマー（ｂ
ｉｏｐｏｌｙｎｅｒ ）およびそれの誘導体、好ましく
はアミノ基を含有する蛋白質、ポリペプチドおよびポリ
サッカライドまたはそれらの誘導体をも包含する。これ
らの変性巨大分子状物質はその中の１個またはそれ以上
のアミノ基（−ＭＨ２）が式−ＭＨ−Ｃ−Ａ−８−３−
１１（式中人およびＲ１は共に前述の定義を有しそして
Ｘは０またはＭＨ１好ましくは０である＞”’ｅ ＊
”−ｒａ ｈた点に特徴がある。これらの基は式 −ＮＨ−ｃ−ＣＨ２−ｃａ２−５−８−Ｒ’ Ｃ式中Ｒ
１は前述の定義を有する）で表わされる基から選択され
るのが好ましく、２−ピリジルが好ましい。
工程Ｃ）およびｄ）によるチオールジスルフィド交換反
応は、式１で表わされる化合物中の基Ｒ１が還元的に分
裂されて化合物Ｒ１−８Ｒになることができついでこれ
が対応する化合物ＨＲ１＝Ｓに互変異性されることを必
要とする。２−ピリジル基および４−ピリジル基によシ
みたされる外に、その条件はまたチオールジオン互変異
性が破壊されないような位置でかかる型の置換基で置換
される対応する基によってもみたされる。
応は、式１で表わされる化合物中の基Ｒ１が還元的に分
裂されて化合物Ｒ１−８Ｒになることができついでこれ
が対応する化合物ＨＲ１＝Ｓに互変異性されることを必
要とする。２−ピリジル基および４−ピリジル基によシ
みたされる外に、その条件はまたチオールジオン互変異
性が破壊されないような位置でかかる型の置換基で置換
される対応する基によってもみたされる。
５−ニトロ−２−ピリジルがこの置換ピリジル基に属す
ることが見出された。
ることが見出された。
次に本発明による化合物の製法およびこれら化合物の使
用を説明する多くの実施例でさらに本発明を説明する◎ 実施例１ Ｎ−スクシンイミジル−３（２−ピリジルジ
チオ）プロピオネート １．９Ｐ（ａ６ミリモル）の２，２−ジピリジルジスル
フィドを１０−の酢酸エチル中に溶解した。１０−の酢
酸エチル中における０、９５’（ａ６ミリモル）の３−
メルカプトグロピオン酸溶液を攪拌しながら同時に０．
１ ｍ （２滴）のボロントリフルオライドエーテラー
トを反応混合物に加えながら１５分間に滴加した。つい
で振盪させながら室温で２０時間保持し、反応混合物を
蒸発させ（Ｂ１１ｃｈｉ Ｒｏｔａｖａｐｏｒによる。
用を説明する多くの実施例でさらに本発明を説明する◎ 実施例１ Ｎ−スクシンイミジル−３（２−ピリジルジ
チオ）プロピオネート １．９Ｐ（ａ６ミリモル）の２，２−ジピリジルジスル
フィドを１０−の酢酸エチル中に溶解した。１０−の酢
酸エチル中における０、９５’（ａ６ミリモル）の３−
メルカプトグロピオン酸溶液を攪拌しながら同時に０．
１ ｍ （２滴）のボロントリフルオライドエーテラー
トを反応混合物に加えながら１５分間に滴加した。つい
で振盪させながら室温で２０時間保持し、反応混合物を
蒸発させ（Ｂ１１ｃｈｉ Ｒｏｔａｖａｐｏｒによる。
＜４０℃）そして固体の黄色残留物を１０Ｉ１１ｔの冷
酢酸エチル（＋４℃）でスラリーにしついで濾過した。
酢酸エチル（＋４℃）でスラリーにしついで濾過した。
こうして約９０％の２−チオピリドン（ｈ点１２４〜１
２６℃、文献値１２８〜１３０℃）が回収された。２−
カルボキシエチル（２−ピリジル）ジスルフィドの収率
は約６０チであった。１トＮＭＲδ（ＣＤＣ４３） ２
．７ ３．３ （４Ｈ，ｍ、−ＣＨ２ＣＨ２）、Ｓ、
−（！ＯＯＨ）。
２６℃、文献値１２８〜１３０℃）が回収された。２−
カルボキシエチル（２−ピリジル）ジスルフィドの収率
は約６０チであった。１トＮＭＲδ（ＣＤＣ４３） ２
．７ ３．３ （４Ｈ，ｍ、−ＣＨ２ＣＨ２）、Ｓ、
−（！ＯＯＨ）。
ついで０．６８１ｉ’（５ミリモル）のＮ−ヒドロキシ
スクシンイミドを溶液に加え、その後１０ｒｒＬｔの乾
燥酢酸エチル中に溶解されたｔ０３ｙ−（５ミリモル）
のジシクロへキシルカルボジイミドを室温で振盪させな
がら１５分間で滴加した。反応を室温で５時間振盪下で
継続させ、ついで反芯温合物を＋４°Ｃに冷却しそして
沈殿したジシクロへキシルカルボジイミドをＦ遍した。
スクシンイミドを溶液に加え、その後１０ｒｒＬｔの乾
燥酢酸エチル中に溶解されたｔ０３ｙ−（５ミリモル）
のジシクロへキシルカルボジイミドを室温で振盪させな
がら１５分間で滴加した。反応を室温で５時間振盪下で
継続させ、ついで反芯温合物を＋４°Ｃに冷却しそして
沈殿したジシクロへキシルカルボジイミドをＦ遍した。
わずかに黄色の溶液を蒸発させそして油状物をエタノー
ル中に溶解しついで一２０℃で晶出させた。
ル中に溶解しついで一２０℃で晶出させた。
収率は４５％であった。融点は７＆５〜８１５℃であっ
た。
た。
Ｃ１２Ｈ１２Ｎ２０４Ｓ２としての元素分析は次のとお
シである。
シである。
計算値： ｃ ４６．１４、Ｈ３，８３、Ｎａ９７、Ｓ
２Ｑ、５３％実測値： ｃ ４６．１９、Ｈ３，８８
、Ｎ Ｂ９６、ｓ ２０．０２％３ｊ２ （４Ｈ，ｓ
広い、−ｃＨ２−ｃａ２ ）、６．９０−Ｂ８２ （４
Ｈ１実施例２２−チオピリジル−３−（２−ピリジルジ
チオ）プロピオネート １、９ Ｐ Ｃ＆ ６ミリモル）の２，２−ジピリジル
ジスルフィドを６５ｄの酢酸エチル中に溶解した。１０
−の酢酸エチル中における０、９５’（ａ６ミリそル）
の３−メルカプトプロピオン酸の溶液を振盪させながら
１５分間で滴加し、同時に０ｌ−（２滴）のポロントリ
フルオライドエーテラートを反応混合物に加えた。室温
で２０時間放置後溶液を一２０℃に冷却した。その後１
．０３７（５ミリモル）のジシクロへキシルカルボジイ
ミドを１５−の酢酸エチル中に溶解し、これを溶液に強
く攪拌しながら１５分間滴刺した。
２Ｑ、５３％実測値： ｃ ４６．１９、Ｈ３，８８
、Ｎ Ｂ９６、ｓ ２０．０２％３ｊ２ （４Ｈ，ｓ
広い、−ｃＨ２−ｃａ２ ）、６．９０−Ｂ８２ （４
Ｈ１実施例２２−チオピリジル−３−（２−ピリジルジ
チオ）プロピオネート １、９ Ｐ Ｃ＆ ６ミリモル）の２，２−ジピリジル
ジスルフィドを６５ｄの酢酸エチル中に溶解した。１０
−の酢酸エチル中における０、９５’（ａ６ミリそル）
の３−メルカプトプロピオン酸の溶液を振盪させながら
１５分間で滴加し、同時に０ｌ−（２滴）のポロントリ
フルオライドエーテラートを反応混合物に加えた。室温
で２０時間放置後溶液を一２０℃に冷却した。その後１
．０３７（５ミリモル）のジシクロへキシルカルボジイ
ミドを１５−の酢酸エチル中に溶解し、これを溶液に強
く攪拌しながら１５分間滴刺した。
反応を１時間−２０℃で継続させついで室温（約２０℃
）で−夜続けさせた。生成するジシクロへキシルカルバ
ミドをＦ去し、溶液を蒸発させｋ （Ｂ１１ｃｈｉ Ｒ
ｏｔａｖａｐｏｒによる、〈４０℃）０ついで１０−の
冷酢酸エチル（＋４”Ｃりを加え、混合物を再び一過し
てそれによシすべてのジシクロヘキシルカルバミドを除
去できた。生成物は１．５２であった。純度は約９０％
であった。
）で−夜続けさせた。生成するジシクロへキシルカルバ
ミドをＦ去し、溶液を蒸発させｋ （Ｂ１１ｃｈｉ Ｒ
ｏｔａｖａｐｏｒによる、〈４０℃）０ついで１０−の
冷酢酸エチル（＋４”Ｃりを加え、混合物を再び一過し
てそれによシすべてのジシクロヘキシルカルバミドを除
去できた。生成物は１．５２であった。純度は約９０％
であった。
ＩＨ−ＮＭＲ，δ（ＣＤ（！ｔ３） ３．１５ （４Ｈ
，ｅ広い、−ｃａ２−ｃ′Ｈ２）、実施例３ メチル−
４（２−ピリジルジテオ）ブチルイミデート ２０■（０，１２ミリモル）のメチル−４−メルカプト
ブチルイミデート塩酸塩、２６η（０，１２ミリモル）
の２，２′−ジピリジルジスルフィドおよび０．５７！
の氷酢酸を５−のメタノール中に溶解した。反応をＩＨ
−ＮＭＲで行ないそしてすべてのイミデートが反応した
時に（約１２時間）混合物を蒸発乾固させた。ＩＨ−Ｎ
ＭＲ（ＣＤ５０Ｄ）を用いて反応混合物を分析したとこ
ろメチル−４−メルカプトブチルイミデートに基づいて
約２０チの収率を示した。
，ｅ広い、−ｃａ２−ｃ′Ｈ２）、実施例３ メチル−
４（２−ピリジルジテオ）ブチルイミデート ２０■（０，１２ミリモル）のメチル−４−メルカプト
ブチルイミデート塩酸塩、２６η（０，１２ミリモル）
の２，２′−ジピリジルジスルフィドおよび０．５７！
の氷酢酸を５−のメタノール中に溶解した。反応をＩＨ
−ＮＭＲで行ないそしてすべてのイミデートが反応した
時に（約１２時間）混合物を蒸発乾固させた。ＩＨ−Ｎ
ＭＲ（ＣＤ５０Ｄ）を用いて反応混合物を分析したとこ
ろメチル−４−メルカプトブチルイミデートに基づいて
約２０チの収率を示した。
実施例４ Ｎ−スクシンイミジル−２（２−ピリジルジ
チオ）プロピオネート この化合物は３−メルカプトプロピオン酸が２−メルカ
プトプロピオン酸にｆｆ１ｉキ換えられる以外は実施例
１に記載のＮ−スクシンイミジル−３（２−ピリジルジ
チオ）プロピオネートと同じ方法で製造された。さらに
、合成は約１Ａ。
チオ）プロピオネート この化合物は３−メルカプトプロピオン酸が２−メルカ
プトプロピオン酸にｆｆ１ｉキ換えられる以外は実施例
１に記載のＮ−スクシンイミジル−３（２−ピリジルジ
チオ）プロピオネートと同じ方法で製造された。さらに
、合成は約１Ａ。
スケールで実施された。生成物はＩ Ｈ−ＮＭＲで分析
された。
された。
実施例５ Ｎ−スクシンイミジル−３（４−ピリジルジ
チオ）プロピオネート この化合物は２，２′−ジピリジルジスルフィドカ４．
４’−ジピリジルジスルフィドによシ置き換えられる以
外は実施例１に記載のＮ−スクシンイミジル−３（２−
ピリジルジチオ）−プロピオネートと同じ方法で製造さ
れた。さらに合成は’Ａｏスケールで実施された。生成
物は１）！−ＮＭＲで分析された。
チオ）プロピオネート この化合物は２，２′−ジピリジルジスルフィドカ４．
４’−ジピリジルジスルフィドによシ置き換えられる以
外は実施例１に記載のＮ−スクシンイミジル−３（２−
ピリジルジチオ）−プロピオネートと同じ方法で製造さ
れた。さらに合成は’Ａｏスケールで実施された。生成
物は１）！−ＮＭＲで分析された。
実施例６ Ｎ−スクシンイミジル−３（５−二トロー２
−ピリジルジチオ）プロピ オネート この化合物は２，２′−ジピリジルジスルフィドがビス
（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルフィドによシ置き
換えられる以外は実施例１に記載のＮ−スクシンイミジ
ル、−３（２−ピリジルジチオ）プロピオネートと同じ
方法で製造された。さらに合成は’Ａｏスケールで実施
された。
−ピリジルジチオ）プロピ オネート この化合物は２，２′−ジピリジルジスルフィドがビス
（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルフィドによシ置き
換えられる以外は実施例１に記載のＮ−スクシンイミジ
ル、−３（２−ピリジルジチオ）プロピオネートと同じ
方法で製造された。さらに合成は’Ａｏスケールで実施
された。
生成物はＩ Ｈ−ＮＭＲで分析された。
実施例７ α−アミラーゼのチオール化５■のα−アミ
ラーゼ１ｐＨ７，５のα５ｒｎｔの０．１Ｍυん酸ナト
リウムバッファー中に溶解し、これに７５μｔｆ）Ｎ−
スクシンイミジル−３（２−ピリジルジチオ）プロピオ
ネ−）（９９，５％ｚｔｏＨ中における３４ｍＭ ）を
加え念。混合物を激しく振盪させた後反応を＋２３℃で
４０分間継続させた。反応混合物をセファデックスＧ−
２５（発鈴商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃ
ｈｅｍｉｃａ’ｌｓ ＡＢ社裂、エビクロロヒドリンで
交叉結合され之デキストランのビーズ）上でゲル濾過し
た（使用した媒体はｐＨ７，５の０．５ Ｍ りん酸ナ
トリウムバッファーであった）。ついでこうして得られ
たα−アミラーゼ−ピリジルジスルフィド誘導体はゲル
濾過から得られた物質（１，５ｍ／）に５０μｔの５０
ｍＭジチオトレイトール（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏ
ｌ）を加えることによシ還元された。還元は＋２３″Ｃ
で２０分間継続させた。過剰のジチオトレイトールおよ
び他の低分子量取分はセファデックスＧ−２５上〒のゲ
ル濾過により除去された（使用媒体は０．３ ＭＩＪａ
（：ｔであつ７ＩＣ）。このようなチオール化されたα
−アミラーゼは０．７５モルＳＨ１モル蛋白質を含有す
ることが見出された・実施例８ ヒツジ−抗つサギーエ
ｇＧ抗体−α−アミラーゼ接合体の製法 ａ）チオール化α−アミラーゼ チオール化α−アミラーゼは前記実施例７にしたがって
製造された。
ラーゼ１ｐＨ７，５のα５ｒｎｔの０．１Ｍυん酸ナト
リウムバッファー中に溶解し、これに７５μｔｆ）Ｎ−
スクシンイミジル−３（２−ピリジルジチオ）プロピオ
ネ−）（９９，５％ｚｔｏＨ中における３４ｍＭ ）を
加え念。混合物を激しく振盪させた後反応を＋２３℃で
４０分間継続させた。反応混合物をセファデックスＧ−
２５（発鈴商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃ
ｈｅｍｉｃａ’ｌｓ ＡＢ社裂、エビクロロヒドリンで
交叉結合され之デキストランのビーズ）上でゲル濾過し
た（使用した媒体はｐＨ７，５の０．５ Ｍ りん酸ナ
トリウムバッファーであった）。ついでこうして得られ
たα−アミラーゼ−ピリジルジスルフィド誘導体はゲル
濾過から得られた物質（１，５ｍ／）に５０μｔの５０
ｍＭジチオトレイトール（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏ
ｌ）を加えることによシ還元された。還元は＋２３″Ｃ
で２０分間継続させた。過剰のジチオトレイトールおよ
び他の低分子量取分はセファデックスＧ−２５上〒のゲ
ル濾過により除去された（使用媒体は０．３ ＭＩＪａ
（：ｔであつ７ＩＣ）。このようなチオール化されたα
−アミラーゼは０．７５モルＳＨ１モル蛋白質を含有す
ることが見出された・実施例８ ヒツジ−抗つサギーエ
ｇＧ抗体−α−アミラーゼ接合体の製法 ａ）チオール化α−アミラーゼ チオール化α−アミラーゼは前記実施例７にしたがって
製造された。
１１１）２−ピリジルジスルフィド基を含有するとツジ
ー抗うビットーーＧ−抗体 １．２■のヒツジ−抗つサギーＩｇＧ−抗体（免疫吸着
精製によシヒッジの超免疫血清から調製された）をｐＨ
７，５のα５−の０．１ｙｔりん酸ナトリウムバッファ
ー中に溶解し、これに１５μｔのＮ−スクシンイミジル
−３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネ−）（Ｅｔ
ＯＨ中における５、９ｍＭ）を加えた。溶液を激しく振
盪させた後反応を＋２３℃で４０分間行なわしめた。過
剰の試薬および他の望ましくない低分子成分をセファデ
ックスＧ−２５上でのゲルー過によシ除去した（媒体は
α３ Ｍ ＮａＣ２）。
ー抗うビットーーＧ−抗体 １．２■のヒツジ−抗つサギーＩｇＧ−抗体（免疫吸着
精製によシヒッジの超免疫血清から調製された）をｐＨ
７，５のα５−の０．１ｙｔりん酸ナトリウムバッファ
ー中に溶解し、これに１５μｔのＮ−スクシンイミジル
−３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネ−）（Ｅｔ
ＯＨ中における５、９ｍＭ）を加えた。溶液を激しく振
盪させた後反応を＋２３℃で４０分間行なわしめた。過
剰の試薬および他の望ましくない低分子成分をセファデ
ックスＧ−２５上でのゲルー過によシ除去した（媒体は
α３ Ｍ ＮａＣ２）。
こうして変性されたヒツジ−抗つサギーエｇＧ−抗体は
蛋白質１モル当九シ２モルの２−ピリジルジスルフィド
基を含有していることが見出された。
蛋白質１モル当九シ２モルの２−ピリジルジスルフィド
基を含有していることが見出された。
Ｃ）ヒツジ−抗つサギーエＥＧ−抗体−α−アミラーゼ
接合体 １−のｆｌ Ｓ ＭＮａＣｔ中１ｃ オける１゜２１ｑ
のヒツジ−抗つサギーエｇＧ−抗体−２−ビリジルジス
ル、フィト（１７ナノモルの２−ピリジルジスルフィド
基を含有する８ミリモルの蛋白り（前記ｂ）からのもの
）を２−のＣＬ３ＭＮａＣ２中における５■のチオール
化α−アミラーゼ（７５−）／モＭシん酸Ｎａバッファ
ーを加えそして＋４℃で１８時間反応を行なわしめた。
接合体 １−のｆｌ Ｓ ＭＮａＣｔ中１ｃ オける１゜２１ｑ
のヒツジ−抗つサギーエｇＧ−抗体−２−ビリジルジス
ル、フィト（１７ナノモルの２−ピリジルジスルフィド
基を含有する８ミリモルの蛋白り（前記ｂ）からのもの
）を２−のＣＬ３ＭＮａＣ２中における５■のチオール
化α−アミラーゼ（７５−）／モＭシん酸Ｎａバッファ
ーを加えそして＋４℃で１８時間反応を行なわしめた。
反応混合物をセファデックスａ −２００上でゲルテ過
しついで各フラクションを分析したところ使用抗体の８
０％が接合されたことを示した。
しついで各フラクションを分析したところ使用抗体の８
０％が接合されたことを示した。
こうして虫取された接合体は実質的に２分子であった。
また少量の３分子および４分子の物質も観察できた。接
合体は酵素作用および免疫作用の両方を示した。接合体
を含有する各フラクションを一緒にしそして２９０μ？
（接合抗体）／ｍｔに濃縮しついで＋４°Ｃで０．３
Ｍ ＮａＣ２中に保存した。
合体は酵素作用および免疫作用の両方を示した。接合体
を含有する各フラクションを一緒にしそして２９０μ？
（接合抗体）／ｍｔに濃縮しついで＋４°Ｃで０．３
Ｍ ＮａＣ２中に保存した。
実施例９２−ピリジルジスルフィド基を含有するアルカ
リ性りん酸分解酵素 一４Ｗｑのアルカリ性シん酸分解酵素（ホスファターゼ
）（子牛の腸からのもの、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎ
ｎｈｅｉｍ ＡＧ社製品）をｐＨ１５である２ｄの０．
１ｍりん散ナトリウムバッファー中に溶解し、これに１
５０μｔのＮ−スクシンイミジル−３（２−ピリジルジ
チオ）プロピオネ−）（９９，５％エタノール中におけ
る１、７ミリモル）を加えた。
リ性りん酸分解酵素 一４Ｗｑのアルカリ性シん酸分解酵素（ホスファターゼ
）（子牛の腸からのもの、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎ
ｎｈｅｉｍ ＡＧ社製品）をｐＨ１５である２ｄの０．
１ｍりん散ナトリウムバッファー中に溶解し、これに１
５０μｔのＮ−スクシンイミジル−３（２−ピリジルジ
チオ）プロピオネ−）（９９，５％エタノール中におけ
る１、７ミリモル）を加えた。
反応混合物を激しく振盪させた後＋２３°０で４０分間
反応を継続させた。ついで反応混合物をセファデックス
Ｇ−２５上でゲルテ過した（使用媒体は前述と同じシん
酸塩バッファーであった。
反応を継続させた。ついで反応混合物をセファデックス
Ｇ−２５上でゲルテ過した（使用媒体は前述と同じシん
酸塩バッファーであった。
こうして変性されたアルカリ性りん酸分解酵素は蛋白質
１モル当たり１モルのピリジルジスルフィド構造を含有
した。
１モル当たり１モルのピリジルジスルフィド構造を含有
した。
実施例１０ ヒツジ−抗つサギーＩｇＧ−抗体のチオー
ル化 ２．５■のヒツジ−抗つサギーエｇＧ−抗体（Ｎａ２Ｓ
Ｏ４沈殿によりヒツジの血清から製造された）をｐＨ１
５である０、５−の０．１Ｍシん酸Ｎａバッファー中に
溶解し、これに４０μｔのＮ−スクシンイミジｈ−３−
（２−ピリジルジチオ）プロピオネ−）（９９，５％エ
タノール中における１、７ミリそル）を加えた。混合物
を激しく振盪させた後生２３℃で４０分間反応を継続さ
せた。過剰の反応成分および他の望ましくない低分子量
成分をセファデックスＧ−２５上でのゲル濾過により除
去した（使用媒体はｐＨ５である１１Ｍ酢酸ナトリウム
であった）。ついでこうして得られたヒツジ−抗つサギ
ーエｇＧ−抗体−ピリジルジスルフィド誘導体は５０μ
ｔの５０ミリモルジチオトレイトールをゲルー過からの
ボイド物質（約１．５−）に加えることによシ還元され
た。この還元は＋２３℃で３０分間続けられた。過剰の
ジチオトレイトールおよび他の低分子量成分はセファデ
ックスＧ−２５上でのゲル濾過によシ除去された（使用
媒体は０．３ ＭＮａＣ２であった）。こうしてチオー
ル化されたヒツジ−抗つサギーエｇＧ−抗体は蛋白質１
モル当たり２モルのＳＨを含有していた。
ル化 ２．５■のヒツジ−抗つサギーエｇＧ−抗体（Ｎａ２Ｓ
Ｏ４沈殿によりヒツジの血清から製造された）をｐＨ１
５である０、５−の０．１Ｍシん酸Ｎａバッファー中に
溶解し、これに４０μｔのＮ−スクシンイミジｈ−３−
（２−ピリジルジチオ）プロピオネ−）（９９，５％エ
タノール中における１、７ミリそル）を加えた。混合物
を激しく振盪させた後生２３℃で４０分間反応を継続さ
せた。過剰の反応成分および他の望ましくない低分子量
成分をセファデックスＧ−２５上でのゲル濾過により除
去した（使用媒体はｐＨ５である１１Ｍ酢酸ナトリウム
であった）。ついでこうして得られたヒツジ−抗つサギ
ーエｇＧ−抗体−ピリジルジスルフィド誘導体は５０μ
ｔの５０ミリモルジチオトレイトールをゲルー過からの
ボイド物質（約１．５−）に加えることによシ還元され
た。この還元は＋２３℃で３０分間続けられた。過剰の
ジチオトレイトールおよび他の低分子量成分はセファデ
ックスＧ−２５上でのゲル濾過によシ除去された（使用
媒体は０．３ ＭＮａＣ２であった）。こうしてチオー
ル化されたヒツジ−抗つサギーエｇＧ−抗体は蛋白質１
モル当たり２モルのＳＨを含有していた。
実施例１１２−ピリジルジスルフィド基含有アルブミン
ｐＨ７，５である１−のＱ、Ｉ Ｍ！Ｊん酸ナトリウム
バッファー中における８■の人の血清アルブミンを１２
μｔのＮ−スクシンイミジル−３（２−ピリジルジチオ
）プロピオネ−）（９９，５％エタノール中４０ミリモ
ル）と混合させた。＋２３℃で４０分間反応させた後反
応混合物をセファデックスＧ−２５カラム上でゲル濾過
した（使用媒体は前記と同じシん酸塩バッファーであっ
た）。
バッファー中における８■の人の血清アルブミンを１２
μｔのＮ−スクシンイミジル−３（２−ピリジルジチオ
）プロピオネ−）（９９，５％エタノール中４０ミリモ
ル）と混合させた。＋２３℃で４０分間反応させた後反
応混合物をセファデックスＧ−２５カラム上でゲル濾過
した（使用媒体は前記と同じシん酸塩バッファーであっ
た）。
このボイド物質的２−はアルブミン−２−ピリジルジス
ルフィド籾導体を含有してい念。誘導体の還元後に単離
された２−チオピリドンの量を分光光度計で測定したと
ころ置換割合は２．５モルチオール１モルアルブミンで
あった。
ルフィド籾導体を含有してい念。誘導体の還元後に単離
された２−チオピリドンの量を分光光度計で測定したと
ころ置換割合は２．５モルチオール１モルアルブミンで
あった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）その中の１個またはそれ以上のアミノ基（−ＮＨ＿
２）が式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾１は２−ピリジル、５−ニトロ−２−ピリ
ジルまたは４−ピリジルであり、Ａは１〜６個の炭素原
子を有する炭化水素残基でありそしてＸはＯまたはＮＨ
である） で表わされる基に変換されている変性アミノ基を含有す
る水性液体中に可溶性の巨大分子物質。 ２）その物質がプロテインまたはポリペプチドまたはそ
れの誘導体である前記第１項による変性巨大分子状物質
。 ３）その中の１個またはそれ以上のアミノ基が式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ＾１は前述の定義を有する）で表わされる基に
変換されている前記第１項または第２項による変性巨大
分子物質。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE7702462A SE430062B (sv) | 1977-03-04 | 1977-03-04 | Kopplings- eller tioleringsreagens |
| SE7702462-8 | 1977-03-04 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61191675A true JPS61191675A (ja) | 1986-08-26 |
| JPS624368B2 JPS624368B2 (ja) | 1987-01-30 |
Family
ID=20330623
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2406678A Granted JPS53130674A (en) | 1977-03-04 | 1978-03-04 | Novel pyridine compound |
| JP60290918A Granted JPS61191675A (ja) | 1977-03-04 | 1985-12-25 | 巨大分子物質 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2406678A Granted JPS53130674A (en) | 1977-03-04 | 1978-03-04 | Novel pyridine compound |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4149003A (ja) |
| JP (2) | JPS53130674A (ja) |
| DE (1) | DE2808523A1 (ja) |
| FR (1) | FR2382450A1 (ja) |
| GB (1) | GB1597756A (ja) |
| SE (1) | SE430062B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006500364A (ja) * | 2002-08-16 | 2006-01-05 | イムノージェン インコーポレーテッド | 高い反応性と溶解度を有する架橋剤および小分子薬物の標的化送達用コンジュゲートの調製におけるそれらの使用 |
Families Citing this family (49)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2430943A1 (fr) * | 1978-07-13 | 1980-02-08 | Toyo Jozo Kk | Nouveaux derives disulfures |
| SE446184B (sv) * | 1979-01-12 | 1986-08-18 | Toyo Jozo Kk | Polyfunktionell disulfidforening anvendbar som tverbindande medel |
| SE8003732L (sv) * | 1980-05-19 | 1981-11-20 | Pharmacia Diagnostics Ab | Sett vid bestemningsmetoder involverande biospecifika affinitetsreaktioner |
| US4563304A (en) * | 1981-02-27 | 1986-01-07 | Pharmacia Fine Chemicals Ab | Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides |
| SE8102194L (sv) * | 1981-04-06 | 1982-10-07 | Pharmacia Ab | Terapeutiskt aktiv organisk forening och farmaceutisk beredning innehallande denna |
| SE8102193L (sv) * | 1981-04-06 | 1982-10-07 | Pharmacia Ab | Terapeutiskt aktiv organisk forening och dess anvendning |
| US4433059A (en) * | 1981-09-08 | 1984-02-21 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Double antibody conjugate |
| FR2522269A1 (fr) * | 1982-02-26 | 1983-09-02 | Pasteur Institut | Agents antitumoraux, tels que la daunorubicine, a efficacite amelioree, leur obtention et procede pour augmenter l'efficacite des agents antitumoraux |
| FR2523445A1 (fr) * | 1982-03-17 | 1983-09-23 | Sanofi Sa | Nouveaux conjugues associant, par liaison covalente, une enzyme et un anticorps, et associations medicamenteuses utilisant lesdits conjugues |
| US4614712A (en) * | 1983-02-25 | 1986-09-30 | The Upjohn Company | Immunoassays with luciferase labeled ligands or receptors |
| SE8302758L (sv) * | 1983-05-17 | 1984-11-18 | Pharmacia Ab | Sett for uppspjelkning av disulfidbindningar och derigenom erhallen forening |
| GB8334499D0 (en) * | 1983-12-24 | 1984-02-01 | Beecham Group Plc | Derivatives |
| EP0184701B1 (en) * | 1984-12-03 | 1994-06-08 | Hoechst Celanese Corporation | A method for determining a ligand |
| US4797491A (en) * | 1986-03-17 | 1989-01-10 | Cetus Corporation | Compound 1-(3-(2-pyridyldithio)propionamido)-12-(5-hydrazidoglutaramido)-4,9-dioxadodecane |
| US4880935A (en) * | 1986-07-11 | 1989-11-14 | Icrf (Patents) Limited | Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates |
| JPS6391563A (ja) * | 1986-10-07 | 1988-04-22 | Nitsusui Seiyaku Kk | 細菌由来蛋白特異抗原の検査法 |
| US4794082A (en) * | 1987-02-17 | 1988-12-27 | Hoechst Celanese Corporation | Biotinylating agents |
| US4709037A (en) * | 1987-02-17 | 1987-11-24 | Hoechst Celanese Corporation | Biotinylating agents |
| US4798795A (en) * | 1987-02-17 | 1989-01-17 | Hoechst Celanese Corporation | Biotinylating agents |
| JPS63189278U (ja) * | 1987-05-28 | 1988-12-05 | ||
| DE3809986A1 (de) * | 1988-03-24 | 1989-10-05 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verbindungen zur einfuehrung einer sh-gruppe in tyrosin |
| JPH0253770U (ja) * | 1988-10-12 | 1990-04-18 | ||
| JP2619549B2 (ja) * | 1989-06-29 | 1997-06-11 | 日本商事株式会社 | 抗原の定量法およびそれに用いる固相 |
| US5137877B1 (en) * | 1990-05-14 | 1996-01-30 | Bristol Myers Squibb Co | Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production |
| WO1992001938A1 (en) * | 1990-07-20 | 1992-02-06 | City Of Hope | Derivatization of c-terminal proline |
| US5516703A (en) * | 1993-08-20 | 1996-05-14 | The University Of Utah | Coating of hydrophobic surfaces to render them protein resistant while permitting covalent attachment of specific ligands |
| US6284503B1 (en) | 1993-08-20 | 2001-09-04 | University Of Utah Research Foundation | Composition and method for regulating the adhesion of cells and biomolecules to hydrophobic surfaces |
| US6552060B1 (en) | 1997-08-11 | 2003-04-22 | Prolx Pharmaceuticals, Inc. | Asymmetric disulfides and methods of using same |
| US20030176512A1 (en) * | 1998-08-11 | 2003-09-18 | Kirkpatrick D. Lynn | Asymmetric disulfides and methods of using same |
| AR030612A1 (es) * | 2000-09-12 | 2003-08-27 | Smithkline Beecham Corp | Procedimiento e intermedios |
| CA2503490C (en) | 2002-10-21 | 2012-04-03 | Allvivo, Inc. | Medical device surface coating comprising bioactive compound |
| US7858108B2 (en) | 2003-10-21 | 2010-12-28 | Richard Nagler | Elutable surface coating |
| CN101035802A (zh) | 2004-07-02 | 2007-09-12 | 健泰科生物技术公司 | Iap抑制剂 |
| EP1819359B1 (en) | 2004-12-09 | 2015-03-18 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-integrin immunoconjugates, methods of their production and their use |
| EA019420B1 (ru) | 2004-12-20 | 2014-03-31 | Дженентех, Инк. | Пирролидиновые ингибиторы иап (ингибиторов апоптоза) |
| AU2006213662B2 (en) | 2005-02-11 | 2010-08-05 | Immunogen, Inc. | Process for preparing stable drug conjugates |
| US20110166319A1 (en) * | 2005-02-11 | 2011-07-07 | Immunogen, Inc. | Process for preparing purified drug conjugates |
| BRPI0615049B1 (pt) | 2005-08-24 | 2023-04-25 | Immunogen, Inc | Processo para a preparação de um conjugado de anticorpo- maitansinóide |
| CN101374829A (zh) * | 2005-12-19 | 2009-02-25 | 健泰科生物技术公司 | Iap的抑制剂 |
| US20070260041A1 (en) * | 2006-05-03 | 2007-11-08 | David Crich | Allylic disulfide rearrangement and desulfurization method for the preparation of allylic sulfides |
| AU2007337104A1 (en) * | 2006-12-19 | 2008-07-03 | Genentech, Inc. | Imidazopyridine inhibitors of IAP |
| AR066348A1 (es) * | 2007-04-30 | 2009-08-12 | Genentech Inc | Inhibidores de las iap |
| RU2010133548A (ru) * | 2008-01-11 | 2012-02-20 | Дженентек, Инк. (Us) | Ингибиторы iap |
| NZ590550A (en) | 2008-08-02 | 2013-05-31 | Genentech Inc | Inhibitors of Apoptosis (IAP) for treating cancer |
| DK2437790T3 (da) | 2009-06-03 | 2019-05-20 | Immunogen Inc | Konjugeringsfremgangsmåder |
| US8795673B2 (en) | 2011-03-29 | 2014-08-05 | Immunogen, Inc. | Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process |
| CN105209592A (zh) | 2012-10-04 | 2015-12-30 | 伊缪诺金公司 | 使用pvdf膜纯化细胞结合剂细胞毒性剂缀合物 |
| WO2014210267A1 (en) | 2013-06-28 | 2014-12-31 | Immunogen, Inc. | Purification of intermediates used in the preparation of heterobifunctional linkers |
| KR102325753B1 (ko) | 2019-12-20 | 2021-11-11 | 주식회사 포스코 | 흑색 도금 강판 및 그 제조방법 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2872450A (en) * | 1955-12-06 | 1959-02-03 | Bayer Ag | Thio- and dithio-carboxylic acid esters and a process for their manufacture |
| US3950348A (en) * | 1971-12-30 | 1976-04-13 | Merck & Co., Inc. | Process for preparing e-pyridyl-4-methyloxycarbonyllysine |
-
1977
- 1977-03-04 SE SE7702462A patent/SE430062B/xx not_active IP Right Cessation
-
1978
- 1978-02-28 DE DE19782808523 patent/DE2808523A1/de active Granted
- 1978-03-02 US US05/882,546 patent/US4149003A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-03-03 GB GB8456/78A patent/GB1597756A/en not_active Expired
- 1978-03-03 FR FR7806161A patent/FR2382450A1/fr active Granted
- 1978-03-04 JP JP2406678A patent/JPS53130674A/ja active Granted
-
1985
- 1985-12-25 JP JP60290918A patent/JPS61191675A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006500364A (ja) * | 2002-08-16 | 2006-01-05 | イムノージェン インコーポレーテッド | 高い反応性と溶解度を有する架橋剤および小分子薬物の標的化送達用コンジュゲートの調製におけるそれらの使用 |
| JP2011042675A (ja) * | 2002-08-16 | 2011-03-03 | Immunogen Inc | 高い反応性と溶解度を有する架橋剤および小分子薬物の標的化送達用コンジュゲートの調製におけるそれらの使用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE430062B (sv) | 1983-10-17 |
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| FR2382450A1 (fr) | 1978-09-29 |
| JPS624368B2 (ja) | 1987-01-30 |
| JPS6121227B2 (ja) | 1986-05-26 |
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