SE446184B - Polyfunktionell disulfidforening anvendbar som tverbindande medel - Google Patents

Polyfunktionell disulfidforening anvendbar som tverbindande medel

Info

Publication number
SE446184B
SE446184B SE8000146A SE8000146A SE446184B SE 446184 B SE446184 B SE 446184B SE 8000146 A SE8000146 A SE 8000146A SE 8000146 A SE8000146 A SE 8000146A SE 446184 B SE446184 B SE 446184B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
group
compound
dithio
reaction
polyfunctional
Prior art date
Application number
SE8000146A
Other languages
English (en)
Other versions
SE8000146L (sv
Inventor
K Kontani
N Nakagawa
K Ohyama
S Watanabe
T Fujii
Original Assignee
Toyo Jozo Kk
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP54003507A external-priority patent/JPS6052745B2/ja
Priority claimed from JP4173779A external-priority patent/JPS55133382A/ja
Application filed by Toyo Jozo Kk filed Critical Toyo Jozo Kk
Publication of SE8000146L publication Critical patent/SE8000146L/sv
Publication of SE446184B publication Critical patent/SE446184B/sv

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/89—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/70—Sulfur atoms
    • C07D213/71—Sulfur atoms to which a second hetero atom is attached
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/60—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D277/62—Benzothiazoles
    • C07D277/68—Benzothiazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 2
    • C07D277/70—Sulfur atoms
    • C07D277/76—Sulfur atoms attached to a second hetero atom
    • C07D277/78—Sulfur atoms attached to a second hetero atom to a second sulphur atom
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Inorganic Compounds Of Heavy Metals (AREA)

Description

15 20 25 30 8000146-4 Den polyfunktionella föreningen [I] enligt föreliggande uppfin- ning kan användas, beroende på dess aktivitet hos dess funktionel- la grupper, genom valfrihet, val och kombination med en förening med en tiolgrupp, såsom föreningar med immunsystem, bärare eller deras tiolmodifierade derivat, för framställning av märkta öm- nen för ummunitetsprover, en kombination av enzym och föreningar i immunsystem, immobiliserade enzymer, en kombination av enzym och olösliga bärare, en fast fas för immunitetsprövningar, en kombination av ämnen i immunitetssystem och olösliga bärare, en börare för affinitetskromatografi eller haptenkombinationer för antikroppsbildning bestående av hapten och proteinbörare.
Det har visat sig att en polyfunktionell förening [I] erhållen ur en reaktion mellan ett karboxylsyraderivat med formeln [II] R-S-S-CH2~CH2-COOH [II] dör R tidigare definierats och ett aminderivat med formeln [III] Cš:fl_s-s-cH2-CH2-NH2 [III] har en stegvis S-S-utbytesreaktivitet där en S-S-grupp bunden till 2-benzotiazolyl eller 2-pyridyl-N-oxid-gruppen visar en första ordning S~S-utbytesreaktion för en förening med en tiol- grupp och den andra S-S-gruppen bunden till 2-pyridylgruppen visar en andra ordningens S-S-utbytesreaktion.
Vidare kan två typer av föreningar med tiolgrupper stegvis få reagera med föreningen [I] och följaktligen ör föreningen [I] en användbar förening för olika reagens där föreningar in- nehållande tiolgrupp kvantitativt bindes till båda önddelarna 10 15 20 25 30 8000146-4 av föreningen [I].
'Ett annat förfarande för framställning av den polyfunktionella föreningen [I] ör att 2,2'-ditio-bis-(bensotiazol) och 2,2'-ditio- bisf(pyridin) får reagera med ditiolföreningen med formeln [IV] HS-X-SH [IV] där X [IV] i ett inert medium. har tidigare definierats (nedan kallad ditíolföreningen Den oolyfunktíonella föreningen [I] enligt föreliggande uppfinning kan erhållas exempelvis genom att låta ett funktionellt_derivat av karboxylsyroderivatet med formeln [ll] reagera med aminderi- vatet med formeln_[III] i ett inert medium, vid varje ekvimolört farhauqnae vid _20 fm +ao°c under 10 iminum- fm s timmer.
'Exempel på inerta medier är dimetylformamid, kloroform, bensen, etylacetat, metylenklorid, tetrahydrofuran eller blandningar därav.
Produkten, det polyfunktionella derivatet [I] kan erhållas genom konventionella separations-, ísolerings- eller reningsförfaranden.
Ovanstående karboxylsyraderivat-med formeln [II] kan erhållas exempelvis genom det förfarande som beskrivas i den japanska patentansökan 53-85900. 2,2'-ditio-bis;(bensotiazol) eller 2,2'- ditio-bis-(pyridin-N-oxid) får'exempelvis reagera med 3-merkap: i ekvimolårt förhållande eller lätt överskott av topropionsyra kloroform, koltetrakloríd, ace- 3-merkaptopropionsyra i bensen, ton, metanol eller etanol , vid 10-70°C under 10 minuter till 5 timmar. Därefter kan karboxylsyraderivatet med formeln [II] erhållas genom konventionella isoleríngsförfaranden, såsom kyl- ning, koncentration eller vakuumtorkning. Nämnda karboxylsyra- 10 15 20 25 30 8000146-4 derivat utbytes mot sin aktiverade ester genom behandling av nämnda syraderivat med N-hydroxisuccinimid eller p-nitrofenol och dicyklohexylkarbodíimid i ett lösningsmedel, såsom dimetyl- I formamid, etylacetat, tetrahydrofuran eller dioxan, eller ut- bytes mot sin syraklorid genom reaktion med tionylklorid som ett reaktivt derivat av karboxylsyraderivatet med formeln [II].
Nämnda reaktiva derivat utsättes för en kondensationsreaktíon med aminderivatet med formeln [III], eller kan direkt reagera med nämnda aminderivat med ett kondensationsmedel såsom dicyklo- hexylkarbodiimid. Ytterligare exempel på aminderivat med formeln [III] beskrives i The Journal of Organic Chemistry, 29, 1635 (1964), där 2-merkaptoetylamin oxideras med vöteperoxid för erhållande av 2-aminoetyl-2'-aminoetantiolsulfonat och nämnda förening får reagera med 2-merkaptopyridin under bildning av nämnda aminderivat. Det kan också erhållas genom reaktion mellan 2,2'-ditio-bis-(pyridin) och 2-merkaptoetylamin.
Ett annat förfarande för framställning av den polyfunktionella föreningen [I] är att 2,2'-ditio-bis-(bensotiazol) eller 2,2'- ditio-bís-(pyridin) får reagera med ditiolföreningen [IV] i ett inert medium som ovan visats. Exempel på inerta medier är lös- ningsmedel, vilka kan lösa 2,2'-ditio-bis-(bensotíazol), 2,2'- dítia-bís~(pyridin) och ditiolföreningen [IV] exempelvis alko- holer som metanol eller etanol, tetrahydrofuran, dioxan, etyl- eter, dimetylformamid, dimetylsulfoxid, aceton, bensen eller ~ blandningar därav. Blandningar av ovanstående organiska lösnings- medel och vatten eller buffertlösning kan också nämnas.
Exempel på ditíolförening [IVH är en förening i vilken en alkylengrupp är direkt bunden till dess tiolgrupp. Nämnda alkylen- grupp kan vara en rak eller grenad kedja eller kan vara substi- 10 15 20 25 30 g 8000146-4 tuerad med hydroxyl, aminer, karboxyl eller dess skyddade deri- vat eller kan vara bunden med en etergrupp. Exempel på ditiol- föreningar med 2-10 kolatomer, är 1,2-dimerkaptoetan, 1,4-dimerkapf “' toetan, 1,6-dimerkaptohexan, 1,8-dimerkaptooktan, 1,9-dimerkape tononan, 1,10-dimerkaptodekan, 2,3-dímerkapto-1-propanol, di(2- merkaptoetyl)eter, ditiaerytrytol eller ditíotreitol.
Upplösning av 2,2'-ditio-bis-(bensotíazol), 2,2'-ditio-bis-ßyri- din) och ditiolföreningen [IV] kan ha skett tidigare eller sam- tidigt. Förhållandet mellan varje reagens ör mer ön en mol och företrädesvis 1-1,5 mol 2,2'-ditio-bis-(bensotiazol) och mer än en mol eller företrädesvis 5-30 mol 2,2'-ditio-bis-(pyridin) per mol ditiolföreníng [IV]. Reaktionstemperaturen är 0-40°C. Reak- tianstiden kan variera beroende på reaktionstemperaturen eller använt lösningsmedel och ör vanligen 2-240 minuter. Isolering av den polyfunktionella föreningen [I] kan ske genom konventionell separation , isolering eller med reningsförfarande, såsom lös- ningsmedelsextraktion eller kolonnkromatografi.
Den palyfunktionella föreningen [I] har S-S-grupper på båda sidor av dess skíljande grupp och en 2-bensotiazolylgrupp, en 2-pyrí- dyl-N-oxíd-grupp eller en 2-pyridylgrupp ör bunden till varje 5-5- grupp. Nämnda skiljande grupp ör identisk med gruppen X i ditiol- föreningen [IV] och utgöres av en grupp med en alkylengrupp direkt bunden till S-S-gruppen. Nämnda alkylengrupp kan ha en rak eller grenad kedja och kan innefatta substituenter, amídbryggor eller eterbryggor. Skiljande grupper innefattar exempelvis 2~10 kolatomer.
S-S-utbyresreaktiviteten has den polyfunktíonella föreningen en- ligt föreliggande uppfinning belyses i tabell 1. 10 15 20 25 30 8000146-4 I tabellen användes föreningar med formeln [Ia] och [Ib] angiv- na nedan, som polyfunktionella derivat i enlighet med förelig- gande uppfinning. s\-s-s-cn -cn -co-nn-cn -cn -s-SÛ (n) N/ 2 2 2 z u ::ïLs-s-cnz-cflz-co-nu-caz-cn2~s-sd::] [Ib] 0 .
Glutation kan utgöra en förening med tiolgrupp och användes i molärt förhållande av 0,5 till 2,0 gånger överskattsmöngd av den polyfunktionella föreningen avsedd att bestämma S-S-utbytes- reaktiviteten hos föreningarna [Ia] och [Ib] . Koncentrationen belyses i tabell 1; Reaktionen genomfördes i en 0,1 M fosfat- buffert innehållande 1 mM av EDTA, ett pH-värde på 7,2 som reak- tionsmedium vid 25°C under 30 minuter.
Maximum-absorption vid 310 , 333 och 343 nm av på så sött bil- dad 2-merkaptobenzatiazol, 2-merkaptapyridin-N-oxid eller 2-mer- kaptopyridin uppmättes vid en koncentration av 50 gångers ut- spödning av vardera reaktionsblandningen.
I de fall högre mängder än ekvimolärt överskott av glutation användes skedde reaktionen först genom att man tillsatte en ekvimolör mängd av glutation och efter produktens närvaro be- kröftats tillsattes återstoden av glutation. - .A A i tabellen visar skillnaden mellan absorbans och varje maximal absorptionsvåglöngd mellan och efter reaktionen.
Den molära absorptionskoefficienten vid maximumabsorptionsvåg- längd mellan ooh efter och före reaktionen. r-r' 10 15 20 25 30 8000146-4 Den molöro absorptionskoefficienten vid moximumobsorptionsvög- löngd följer nedan. U 2-merkoptopyridin-N-oxid: 2830 (333 nm), 3190 (343 nm). 2-merkaptobenzotiazol: 19300 (310 nm), 160 (343 nm). 2-merkaptopyridin: 3170 (310 nm), 7270 (333 nm), 8130 (343 nm).
Den polyfunktionella föreningen [I] enligt föreliggande uppfin- ning är en ny förening med S-S-utbytesreoktivitet , vilken visar två stegvisa reaktioner för en förening med tiolgrupper. Nämnda S-S-utbytesreaktivitet ör konstant för reaktionen och ör kvanti- totiv.
En annan S-S-utbytesreaktivitet kan exempelvis observeras genom att den polyfunktionello föreningen [I] upplöses i 0,1 M fos- fatbuffert (pH 7,5) innehållande 10%-ig dimetylformamid och varvid 2-merkaptoetanol-tillsättes. Mängden bildad 2-merkaptobenzotia- zol och 2-merkaptopyridin-analyseras, varvid S-S-utbytesreaktivi- tet hos föreningen bekröftas.
Den polyfunktionella föreningen enligt föreliggande uppfinning har olika användningsområden; exempelvis som tvörbindningsreagens för bundna komplex av enzymer och hopten, antigen, antikroppar eller receptorer i enzym-immuno-tester och enzym for antigen- bildning, immobiliserande medel för immobilisering av fasta böra- re och hapten, antigen, antikropp eller receptorer vid imunnologis- ka tester. Immobiliseringsmedel för bundna komplex av enzym och bärare i immobiliserade enzymer eller immobiliserande reagens för hapten, antigen, antikropp eller receptor och bärare i affinitets- kromatografi. Även reaktivo derivat av ovanstående fysiologiskt aktiva ämnen eller börare med S-S-utbytesoktivitet kan erhållas genom reaktion mellan dessa ömnen eller bärare och den polyfunk-~ tíonella föreningen. 8 8000146-4' .. il» 1lfå....ia|vilrxåí.z.iiišælef . _ nål 11x18!!! . »f lä... m>Hu ÉHHHQ mHHw MHQ ~°m=fl=XHwE=< 3 QX. . m* .Xx ~.H\z m»o_ X @.~u m«@_o H ~ _ _ E Xmw.@ n fi@m< X w-_ø H www< X. -,_o U mmw< n wmo_@ u mwm<.< mx wx Nx. px . ~.H\z XIQP X @__Q @«~.o H @«@< /_ X-_ø N m+@<,« m_ø_o H ~ MoHu m@@.o H o~m< @X:«o N oF@< 1 _o@_o"o_m ficoflacnæcwucoxv ñ.H\X w|o~ X -mU O., + o_, m.H\z m-@~ X <_- m.~\: X1 @_ X @__u m_@ + Q_~ 0_fi COfi www mcficwumm m.~\z w-o_ X w.oU m~o ^cofl~unæ:mu:oxv Amucufifimzuwwfiosv ¥«uw~Hfl« wmcwz _.. -qlw om s-w-hflw.-. , _ ,, 10 15 20 25 souo14e-4 9 X1 endast absorption av 2-merkaptobensotiazol observerades, X2 absorption av omkring 3% 2-merkaptopyridin observerades, X efter tillsats av en mol glutation, stark absorption av 2- merkoptopyridin observerad och ingen absorptionsündring av 2-merkaptobensotiazol kunde iakttogas, X4 endast absorption av Zèmerkaptopyridin-N-oxid observerades, x5 absorption av omkring 1,4X 2-merkaptopyridin observerades, X6 Efter tillsats av en mol glutation observerades stark absorp- tion av 2-merkaptopyridin och ingen förändring av 2-merkapto- pyrídin-N-oxid observerades.
Anmärkningar: (I) S-S-utbytesreaktion dör nästan all glutotion reagerade med S-S-grupp bunden till 2-bensotiazolyl eller 1-pyridyl-N-oxid- grupp. Högt utbyte vid reaktivitet observerades.
(II)Nästan kvantitativ S-S-utbytesreaktion för S-S-grupp bunden 2-benzotiazolyl eller Zepyrídyl-N-oxid observerades med undan- tag av S-S-utbytesreaktion av åtskilliga procent med glutation för S-S-grupp bundet till 2-pyridylgrupp observerades.
(III) Vid tillsats av en mol glutatíon erhölls S-S-utbytesreaktiön för S-S-grupp bunden till 2-bensotiazolyl eller 2-pyridyl- N-oxíd-grupp. Ytterligare tillsats av glutation föranledde att reaktionen stegvis fortsatta med återstående S-S-grupp ' bunden till 2-pyridyl-grupp.
(IV) Se ovan (III). 10 15 20 25 30 sooo14e-4 ,o Föreningen enligt föreliggande uppfinning kan erhållas genom reaktion i ett inert lösningsmedel, såsom vatten, fosfat- buffert, dimetylformamid, tetrahydrofuran eller blandade lösningsmedel därav vid omgivningens temperatur under 10minu- ter till 24 timmar.
Ovan nämnda fysiologiskt aktiva ämnen och bärare är inte be- gränsade till den förening som har tiolgrupper, exempelvis en- zymer som B-galaktosidas eller ureas eller kommersiellt till- gängliga bärare med tiolgrupper som akrylamidpolytiol eller glasföreningar med tiolgrupper. Fysiologiskt aktiva ämnen och bärare, såsom protein eller peptider med S-S-grupper i mole- kylen kan användas efter reduktion av nämnda S-S-grupper.
Tiolgruppen kan införas i funktionella grupper såsom amino- grupp, exempelvis genom användning av S-acetylmerkapto-bärn- stenssyraanhydrid [Arch. Biochem. Biophys., 96, 605 - 612 (1962) ].
Funktionella derivat av disulfidderivat med 2-bensotiazolyl eller 2-pyridyl-N-oxid-grupp får reagera med aminogrupp i det fysiologiskt aktiva ämnet eller bäraren (Japanska patent- ansäkan 53-85900) och därefter klyves nämnda S-5-grupp genom behandling med ditiotritol eller alkali, såsom ett vatten- haltigt medium med mer än pH-värdet 9,5 för införande av tiol- gruppen.
Följande exempel belyser föreliggande uppfinning men avses ej begränsa densamma.
Exempel 1. (1) Till 2,2'-ditio-bis-(bensotiazol) (40 g) tillsattes bensen 10 15 20 25 8000146-4 11 (1,5 ml) och 3-merkaptopropionat (8,0 g) varefter reaktionen fick ske med 70°C under 3 timmar under omröringr Därefter kyl- des reaktionsblandningen till rumstemperatur., koncentrerades i vakuum och tilläts stå över natten vid 5°C för föllning av arena kristaller, vilka omkristalliserades ur bensen, varvid' erhölls 3-(2'-bensotiazolylditio)propianatkristaller (16,25 g).
S - - V " 0 \.S..S.LCH -CR -Cggg z SmdlfpUnkf 163-164 C. \ ”d” z 2 Till 3-(2'-bensotiazolyl-ditía)-propionat (8,13 9) i dímetyl- formamid (80 ml) tillsattes N-hydroxisuccinimid (34,5 g) och di- cyklohexylkarbodiimid (6,8 g) , varefter blandningen omrördes under iskylning under en timme och vid omgivningens tempera- tur i 2 timmar. Den utföllda dicyklohexylkarbamiden avfiltre- rades och filtratet.sattes till 10 volymer vatten och den bil- dade Föllningen frånfiltrerades, tarkades och omkristallisera- des upprepade gånger ur bensen, varvid erhölls kristaller av 3-(2'-bensotíazelyl-ditio)propionat-N-succinimidester (7,18 g). 0 _ s f) 1 >s-s-cflz-caz-coon o ¿ N - smöltpunkt 122-123 C. 0 max vid 270 nm [dimetylformamid : fosfatbuffert (0,1 M, pH-värde 7,5) = 1:5 ] Rf-vörde = 0,53 (kiselgel tunnskiktskromatografi, bensen: etylacetat = 3:1) 10 15 20 25 30 8000146-4 12 (2) Till 2-merkapto-etylamin-hydroklorid (10,0 g) upplöst i vatten (40 ml) sattes drappvis 30%-íg vattenlösning av vöte- peroxid (4,5 ml) under omröring och kylning i 30 min. En 30%-ig vattenlösning av vöteperoxid (9,0 ml) tillsattes och blandningen tilläts stå vid rumstemperatur under 24 timmar.
Reaktionsblandningen konéentrerades i vakuum, varvid erhölls en sirap och därefter tillsattes en vattenfri etanol, varvid erhölls oreno kristaller (10,7 g) , vilka omkristalliserades ur isöttiksyra till ett utbyte av 2-amino-etyl-2'-aminoetan- tiolsulfonat-2-hydroklorid som vita nålkristaller (9,77 g).
[HZN-CH2-CH2$02-S-CH -CH2-NH2 . 2HCl: smöltpunkt 165-166°C] 2 Till 2-aminoetyl-2'-ominoetan-tiolsulfonat . 2HCl (7,7 g) upplöst i en vattenlösning (12 ml) innehållande 3 ml kon- centreradf saltsyra sattes droppvis en etanollösning (12 ml) av 2-merkaptopyridin (3,33 g) under omröring vid rumstempe- ratur. Efter omröring 20 timmar avdestillerades etanol från* reaktionsblandningen vid förminskat tryck och kloroform till- sattes för att extrahera icke reagerat ämne. Kyld vatten- lösning innehållande kaliumhydroxid (8,4 g) tillsattes och extraherades med klorofarm, varefter den extraherades ytter- ligare två gånger med kloroform. Dessa extrakt skakades ome- delbart med koncentrerad HC1.
De koncentrerade saltsyrafaserna sammanslogs och koncentrera- des varvid erhölls sírapsliknande ämnen. Vattenfri etanol tillsattes och utföllning av oren"kristallinmassa (4,9l g), vilken omkristalliserades ur vattenfri etanol, varvid erhölls 2-pyridyl-2'-aminoetyl-dísulfid . 2 HCl (3,68 g).
.,I.~».~w-.V..~ , 10 15 20 25 30 aooo14e-4 '13 '\ ÛS-S-Cflz-CHZ-NHZ* 2 HC1 = smöltpunkt 150°C (3) 2-pyridyl-2'-aminoetyldísulfid .2 HC1 (2,0 Q) upplöstes i vatten (20 9). Efter justering av 1ösníngensdpH-värde fill 10 genom tillsats av 1 N vattenlösníng av kalíumhydroxíd extraherades denna med etylacetat. 'Etylacetatfasen tvöttades med vatten och torkades med vattenfrítf natrlumsulfaf. Till etylacetatfasen saftes droppvís etylacetatlösníng av 3-(2'- bensotíazalyl-diiia)propíonaf-N-succínímidester (2,27 g) under kylning och omröríng i 90 minuter, varefter reaktíonsbland- .ningen fíltrerades ach den bildade föllníngen torkades. Üenna upplöstes åfer i kloroform, tvöttades med 5%-ig vattenlös- ning av natríumvötekarbonat under ískylning, tvöttades med vakten och forkudes med vottenfríff natriumsulfat och nämnda kloraformfas kancentrerudes. Hexan tíllsatfes till kancentrafef varvid erhöllš N-[2-(2'-pyrídyl-dífío)ety1]-3-(2'~bensotiazaly1- dítío)~propíonamíd (2,07 g) " l s - .i <]]:N>-s~s-cfi,~c}x,-co~un-on§-cn;s-s-© i . i ¶ I )\ max = 282 nm, E1% = 235 [dímetylformamid:0,1 M fosfatbuffert (pH 7,5) =1:9] 1 cm " Rf-värde: 0,41 (kloroform:etylacetat'š 1:1, kíselgel tunnskíkts~ kromatografi) RF-värde: 0,12 (bensen:efylacetat=3:1, kiaelgel tunnskiktskromato- grafí) Reaktivitei och användning av denna förening framgår klart av följande.
LH 10 20 25 30 8000146-4 '14 Till O,15M (Û.85%) NeC1 innehållanifi anti-insu]innnf'}rø;; «Ie^' (2,0 mg) och fosfatbuffert innehållande 1 mM EDTA (nedan kallat PBS) (O,Ül M, pH-värde 7,2) (2,0 ml) sattes 10% dimetylFcrmc~ midlösning av PBS (0,0l N, pH-värde 7,2) innehållande 50/ug/ml lösning av N-:Z-(2'-pyridyl-ditio)etyl]-3-(2'-bensotia2alyl- ditia)p:apionumid (365/ul) och fick reagera vid 25°C under 30 minuter. Ahsorption vid 310 nm och 343 nm uppmättes hos reak~ tíonshlandningen. 96% av 2~merkaptobensotiazol och 3% av 2~merkcptopyridín i N-[2-(2'-pyridyl-ditio)etyl]-3-(2'-bcnso- tiazolyl-ditio)propionamid upptäcktes i reuktionsblandningen.
Till ett annat prov av denna raaktionsblandníng sattes 2-mer- kaptaetanol. Ingen ökning av cbsarptionen av 2-merkaptabenso- tiozol kunde observeras , men absorptionen av 2-merkapiopyridin kunde emellertid observeras och 93% av denna bildades.
Som ett resultat därav fick 96% av anti-insulin-antikrapp-Fab' reagera vid S~S-utbytesreaktionen med S-5-gruppen för bindning av 2-bensotiazolylgrupp.
Efter justering av reaktionsblandningen (0,5 ml) med 0,1 N vattenhaltig Na0H vid pH-värdet 8,5 upplöstes en lösning av 3-galaktosidas (4,37 mg) i PBS (0,0l M, pH-värde 8,5) och in- kuberades vid 25°C under 1 timme. Gelfiltrering (framkallare: PBS (0,0l N, pH~vörde 7,2)] med användning av Sephadex G-50 (varumärke, Pharmacia Finechemiculs Ca.) kolonn (1,5 X 34 cm) varvid fraktionerna ll-13 på vardera 5 ml uppsamlades, Dessa fraktioner innehöll 4,6% icke-reagerad B-galaktosidas och oreagerad anti-insulin-antikropp -Fab' kunde inte upptäckas.
Från dessa resultat bands i denna framkallning antí-insu1in- .. .c , .-.__- -_ . .._.~-. ....... . 10 15 20 25 30 f~ www nu» -wmwmrvwwuww M w... N... . *" ""' " r<~ -ww--~~~ 'www-Rem ...,...., __ r. _... ,.,_, 8000146-4 .15 antíkropp-Fab' med ett förhållande av 1:1 till B-galaktosidas.
SH-grupperna i anti-insulín-antikropp-Fab' fick reagera genom S-S-utbytesreaktion med S-S-gruppen bunden till 2-bensotiazalyl- gruppen och SH-gruppen i ß-galaktosidas fick reagera genom -S- utbytesreaktion med S-S-gruppen bunden till 2-pyridylgruppen.
Ovanstående anti-insulin-antíkropp-Fab' framställdes på Följande sött.
Till IgG innehållande anti-insulin-antikropp (50 mg) upplöst i 0,1 n qcefqfbuffeff (pnwarde 4,5 , 2 m1) fillwfles pepsin (1 mg, Sigma Co.) , varefter blandningen inkuberades vid 37°C under 16 timmar. Lösningen utsattes för gelfiltrering med an- vändning av Sephadex G-150 (varumärke) en kolonn [1,5 x 50 cm, framkallare: 0,1 M boratbuffert (pH-vörde 8,0)] varvid erhölls en aktiv fraktion innehållande F(ab')2. Fraktionerna koncen- trerades med kolloidon-pack och díalyserades mot 0,1 M acetat- buffertlösning (pH-värde 5,0) vid 4°C över natten. Till den inre lösningen sattes merkaptoetanolamin vid 10 mM koncentra- tion och blandningen inkuberades vid 3700 under 90 minuter.
Reaktionsblandningen behandlades genom gelfiltrering med an- vöndning av Sephadex G-25 (varumärke) i en kolonn [1,5 x 50 cm, framkallare: 0,1 M acetatbuffert (pH-värde 5,0)] och varvid erhölls Fab' fraktion (15 mg). SH-grupperna per mol av sålunda erhållet anti-insulin-antikropp-Fab' var omkring 0,95 mol.
[J. immunal., 116 (6) ,1554 (1976)].
Exempel 2. 2,2'-ditio-bis-(pyridin-N-oxid) (5,05 g) upplöstes i kloroform (200 ml) och sattes droppvis till-3-merkaptopropianat (2,55 g) och blandningen fick reagera vid 40°C under en timme. Reaktions- 10 15 20 25 8000146-4 16 blandningen kyldes och de orena kristallerna utfölldes och omkristalliserades Ur kloroform, varvid erhölls kristaller av 3-(2'-pyridyl-N-oxid-ditio)propionat (3,72 g) [Qf-värde 0,63 (tunnskiktskromatografi, kiselgel, n-butano1:öttík- syrazvatten = 4:1:1)] 2-pyridyl-2'-amínoetyldisulfid .2 HCl (20 g) erhållen vid samma förfarande som i exempel 1 upplöstes i vatten (20 ml) justerades till pHfvördet 10 under ískylning genom tillsats av en vattenhaltig Na0H, extraherades med kloroform och kloroformfasen uppsamlades, tvöttades med vatten, torkades med vattenfritt natriumsulfat varefter den koncentrerades i vakuum.
Till ovanstående 3-(2'-pyridyl-N-oxid-ditio)propionat (1,19 g) upplöst i tetrahydrofuran (50 ml) sattes droppvis tetrahydro- furanlösning (2 ml) av dícyklohexylkarbodiimid (1,06 g) under kylning och omrörning. Efter 20 minuter blandades denna lösning och ovanstående koncentrerade lösning under omröring och ís- kylning i en timme,vid rumstemperatur under 3 timmar.
Utfölld dicyklohexylkarbamid avlögsnades genom filtrering , varefter vatten tillsattes och filtratet extraherades med kloroform. Kloroformfasen tvöttades med 5%-ig,saltsyra, 5%-ig vattenlösning av natriumvötekarbonat och vatten, torkades med vattenfritt natriumsulfat och därefter avdestillerades kloroform- en för erhållande av en N-[2-(2'-pyrídyl-ditio)etyl]-3~(2'-pyridyl- N-oxíd~ditio)propionamid. < S-S-Cl-Iš-CI-Iš-C O-I-'H- CH2-CH2-S-_S- x “ i 0 .._____..-__...~_-a-- -ann-n- -. 10 15 20 25 30 8000146-4 17 Rf-värde = 0,55 (övre fasen av n-butunol:pyridin:ättiksyru: vatten = 10:3:O,1:11, kiselsyragel-tunnskiktskromato- grofi) Exempel 3. 1111 2,2'-difio-bas-(bensofiuzon (zo mg) uppnàsf 1 0,1 M fosfatbuffert (pH-värde 6,4, innehållande 1 mM EUTA) (3 1.) innehållande 40%-ig etanol sattes droppvís 2,2'-ditio-bis- (pyridin) (397 mg) upplöst i 0,1 M fosfatbuffert (pH-värde 6,4, innehållande 1 mM EDTÅ) ( 1 1.) innehållande 401 etanol och 1,2-dimerkaptoetan (5,7 mg) upplöst i samma buffertlösnings- blandning (1 1.) under omröring 60 minuter. Efter reaktionen av- destillerades etanol och extraherades tre gånger med kloroform, varvid kloroformfasen uppsamladeš, torkades med vattenfritt natriumsulfat och koncentrerades. Koncentratet överfördes på en kiselgelkolonn (1,0 x 40 cm) och eluerades med bensenzetyl- acetat (20:1). De aktiva fraktionerna uppsamlades ochtorkades i vakuum, varvid erhölls 1-(2'-bensotiazo1y1-ditio)-2-(2'- pyridyl-ditio)etan (13,2 mg).
Fysikalisk-kemiska egenskaper ör följande. Å max = 279 nm [dimetylformamid:0,1 M fosfatbuffert (pH-vörde 7,5) = 1:9] Rf-värde = «0,51 (kiselgeltunnskiktskromatografi, bensen: etylacetat= 1021) ' íjfifys~s~cnfßnzfsßß g 10 15 20 25 30 8000146-4 18 Till 0,1 M fosfatbuffert (pH-värde 7,5) innehållande 0,030 mM av denna förening upplöst i 10% dimetylformamid sattes 2-mer- kaptoetanol i en mängd av 0,1%. 2-merkaptobensotiazol (0,029 mM) och 2-merkaptopyridín (0,028 mM) frígjordes.
Exempel 4.
Till en lösning av 2,2'-ditio-bis-(bensotiazol) (20 mg) upp- löst i 0,1 M fosfatbuffert (pH-värde 6,4, innehållande 1 mM EDTA ) (3 1.) innehållande 40% etanol och 2,2'-dítio-bis- (pyrídin) (132 mg) upplöst i samma buffertlösning (1 l.) till- sattes droppvis 1,10-dimerkaptodekan (12,4 mg) upplöst i samma buffertlësning (1 1.) vid rumstemperatur under omröring och fick reagera i 90 minuter.
Efter reaktionen avdestillerades etanol i vakuum och bland- ningen extraherades tre gånger med kloroform. Kloroformfasen uppsamlades, torkades med vattenfritt natriumsulfat och kon- centrerades. Koncentratet överfördes på en kolonn kiselgel (1,0 x 20 cm), eluerades med bensenzetylacetat (20:1), varef- ter aktiva fraktioner uppsamlades och torkades i vakuum, varvid erhölls 1-(2'-bensotiazolyl-ditio)-10-(2'-pyridyl- ditio)-dekan (19,5 mg).
Fysikalisk-kemiska egenskaper: _ ?\maxà 279 nm [dimetylformamid:0,1 N fosfatbuffert (pH-värde" 7,5) = 1:9] Rf~värde = 0,51 (bensen:etylacetat å 10:1, híselsyragel tunn- skiktskromatografi) Rf-värde: 0,75 (bensen:etylacetat= 3:1, kiselsyragel tunn- skiktskromatografi) QQ>s-s-cHL-(cHJs~cHZ-S-ÉQ o 10 15 8000146-4 ,19 Till lösningen av detta ämne (0,03O N) i 0,1 M fcsfotbuffert (pH-värde 7,5) innehållande 10% dímeiylformomid sattes 2- merkoptoetanol till en koncentration av 0,12. 2-merkopto- bensotíozol (0,029 mM) och 2-merkuptøpyridin (0,029 mM) frigjordes.
Exempel 5-12. 2,Zldítío-bis-(bensofiozol) och 2'-difio-bis-(pyrídin) och följande dítiolföreníng [IV] användes, varvid förforundef uffördes som i exempel 3,vurvíd erhölls vardera motsvarande polyfunktionell förening [I].
Använda dífíolföreningur [IV] ör: 1,4~dímerkoptobuTun, 1,6-dímerkoptohexun, 1,8-dímerkcptookfon, 1,9-dímerkaptononun, dí(2-merkopto-etyl)-eter, ditíoerytritol och dítíotreífol.
- - ~~ -- I --.-_-.__....._______.- __.-_-.__.à_-. fiwonmovusouxnvxflxnc::+HmmHøwwx __"O~n«u«oooH>«o"cwNcwn Hwunmovuëoux |n«x«xmcca+Hmmfluø«x _m“~ufm_ß Iuv +hommanvuwmow 2 ~_O"¶MEnsuawH>+mEw¶ 20 -__.______ “T _______ ___,__ *_ ___ -ñš 8000146-4 ...så ïewv>ßvi ...|\|\F!..|.|III..L\- ||||É r _ . f.
~Hu mcwcunmw fifivcofi»xcaw>Aoa wmcms ¶cm>cu ^c«¶Mn>nv vmcms wcm>:o ^floNuw«oNcvnv åfificfimïw_N¿%_-QHQ.MQ|.Nä DS QÉQSQQHQQQMQ u _ . vw . .. .n u I I . . . _ M H Q M \ _ :Q Q Q mo.%0»fiouvoHvA¶ _W _ Gå Qëvš mm ä w ÄwQWN/Q W 1, mafilånil. ._ - l_ w Q .Q Q Q \ Q HQQLHB _3032” _ _ Qï._._.zwfi.$3 _ _- .-.z -_ ; . ._ :_ W QQ¿ Q Q .Q .. _.. Q Q. _ f. _ Q Ewfišmopfluxhßsèï.. w wmaöš “IYTQÅÖ _ Tai: _ _ _ å .. -..I -i w fi.G w G \ _ 0 cococoæmuxnmsflw. . _ Gæ.__ï^._ë-~§- .ÄJQ . ._ _ . .. .w . | .Å imo.o.|..!.| I!! SMS h.~.\ .. o covooa -. . qw.w.~=uußl__uf~=u.m|m. v_ w ovwdeâ Q _ _ ä... _ Q ïQ l. Q Üw¶xY.Q=sL5.w.Q.AMÖ Q QQXQQQPQQXHQEQQ .É U _ . _ :___ w . . - - u _ \ .Q Q _» a \ Û-ÉÉ ^._sv,...â.w.w.Awö Q .Q cuvQßowQuxbßsfimš; _ I' v ^HoEEV Umcmë vcw>cu :oo n: k v I I A ~ “WHU ,,,,,,_._ _,_,,,_ mm M_V___,,___v___,_ ~ »sf 7” 2 annons-l» Xäïf-P 7% /W Ovunsfående polyfunktionellu förening [I] i 0,1 M fosfutbuf- fertlösning (pH-värde 7,5) innehållande 10flLig dímetylformu- mid frigjorda 2-merkupfo-benzoiiazol och 2-merkupfopyridin motsvarande 97-93% molüru mängd av den polyfunktionellu föra- ningen [I] genom tillsats av 2-merkaptoetunol.

Claims (2)

800Û146-4 F. /" 22 P A T E N T K R A V
1. Polyfunktionell disulfídföreníng med formeln R-S-S-X-S-S fiïh (I) N v (I) där R betecknar 2-benzotiazolyl eller 2-pyrídil-N-oxid och X betecknar en skíljande grupp med en alkylengrupp med 2-10 kolatomer direkt bunden till S-S-grupperna, vilka- kan inne- hålla eterbíndningar, amidbindníngar och hydroxisubstitutenter.
2. Förening enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av att X i den skíljande gruppen utgöres av -cH2-cH2- -cH2- -cH2-u-cH2- -cnz- -CH2-(CH2)7-CH2- -CH2-(CH2)8-CH2- -CH2-CH2_S -NH-CH2-CH2- O fiH2OH -CH-CH2- -CH2-CH2-Q-CH2~CH2- OH OH I \ -CH ~CH~CH-CH2- 2 eller on | -cH2-cH-en-cH2- OH
SE8000146A 1979-01-12 1980-01-09 Polyfunktionell disulfidforening anvendbar som tverbindande medel SE446184B (sv)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP54003507A JPS6052745B2 (ja) 1979-01-12 1979-01-12 新規な化合物
JP4173779A JPS55133382A (en) 1979-04-05 1979-04-05 Novel polyfunctional compound

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SE8000146L SE8000146L (sv) 1980-07-13
SE446184B true SE446184B (sv) 1986-08-18

Family

ID=26337098

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8000146A SE446184B (sv) 1979-01-12 1980-01-09 Polyfunktionell disulfidforening anvendbar som tverbindande medel

Country Status (7)

Country Link
US (1) US4287345A (sv)
CA (1) CA1134830A (sv)
DE (1) DE3000879A1 (sv)
FR (1) FR2446287A1 (sv)
GB (1) GB2040935B (sv)
NL (1) NL8000188A (sv)
SE (1) SE446184B (sv)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE8003732L (sv) * 1980-05-19 1981-11-20 Pharmacia Diagnostics Ab Sett vid bestemningsmetoder involverande biospecifika affinitetsreaktioner
SE8102194L (sv) * 1981-04-06 1982-10-07 Pharmacia Ab Terapeutiskt aktiv organisk forening och farmaceutisk beredning innehallande denna
SE8102193L (sv) * 1981-04-06 1982-10-07 Pharmacia Ab Terapeutiskt aktiv organisk forening och dess anvendning
US4671958A (en) * 1982-03-09 1987-06-09 Cytogen Corporation Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites
US5140104A (en) * 1982-03-09 1992-08-18 Cytogen Corporation Amine derivatives of folic acid analogs
US4867973A (en) * 1984-08-31 1989-09-19 Cytogen Corporation Antibody-therapeutic agent conjugates
US4741900A (en) * 1982-11-16 1988-05-03 Cytogen Corporation Antibody-metal ion complexes
US4879249A (en) * 1983-02-25 1989-11-07 Baldwin Thomas O Linker compounds, linker-compound-ligands and linker-compound-receptors
GB8334499D0 (en) * 1983-12-24 1984-02-01 Beecham Group Plc Derivatives
US4647529A (en) * 1984-06-01 1987-03-03 Rodland Karin D Hybridization method of detecting nucleic acid sequences with probe containing thionucleotide
FR2580666B1 (fr) * 1985-04-19 1988-01-15 Elf Aquitaine Perfectionnement a l'immobilisation d'enzymes
US4797491A (en) * 1986-03-17 1989-01-10 Cetus Corporation Compound 1-(3-(2-pyridyldithio)propionamido)-12-(5-hydrazidoglutaramido)-4,9-dioxadodecane
US4970303A (en) * 1988-02-03 1990-11-13 Xoma Corporation Linking agents and methods
US5426208A (en) * 1992-05-21 1995-06-20 Cryodyne Technologies, Inc. Method of purification of acetonitrile

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS486467U (sv) * 1971-06-04 1973-01-24
US3869435A (en) * 1971-11-19 1975-03-04 Monsanto Co Method for cross-linking rubber
CH623568A5 (en) * 1975-10-01 1981-06-15 Givaudan & Cie Sa Process for the preparation of novel perfumes and/or flavourings
US4053606A (en) * 1975-05-19 1977-10-11 Merck & Co., Inc. Mercaptoalkylpyridine disulfides
US4049665A (en) * 1975-12-24 1977-09-20 Colgate-Palmolive Company Unsymmetrical disulfides as antimicrobial agents
SE430062B (sv) * 1977-03-04 1983-10-17 Pharmacia Fine Chemicals Ab Kopplings- eller tioleringsreagens
FR2434392A1 (fr) * 1978-04-28 1980-03-21 Toyo Jozo Kk Nouveau compose disulfure utile dans la chromatographie de covalence

Also Published As

Publication number Publication date
DE3000879A1 (de) 1980-07-24
CA1134830A (en) 1982-11-02
GB2040935A (en) 1980-09-03
SE8000146L (sv) 1980-07-13
NL8000188A (nl) 1980-07-15
FR2446287B1 (sv) 1985-03-29
DE3000879C2 (sv) 1989-08-31
US4287345A (en) 1981-09-01
FR2446287A1 (fr) 1980-08-08
GB2040935B (en) 1983-05-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SE446184B (sv) Polyfunktionell disulfidforening anvendbar som tverbindande medel
EP0574782A2 (en) Dual analyte immunoassay
US4149003A (en) Pyridine disulfide compounds
US4563304A (en) Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides
US3878187A (en) Polypeptide derivatives of amphetamine and analogs for immunoassays
EP0375422B1 (en) Composition and methods for determining the presence of amphetamines in a sample suspected of containing amphetamine and/or methamphetamine
US5514559A (en) Immunologically active conjugates and method for their preparation
US8822695B2 (en) Violet laser excitable dyes and their method of use
JP3667753B2 (ja) ５（６）−メチル置換のフルオレスセイン誘導体
US20150044693A1 (en) Levetiracetam Immunoassays
CA2482232A1 (en) Protease inhibitor conjugates and antibodies useful in immunoassay
JPH09510789A (ja) ミコフェノール酸のイムノアッセイ
SE448631B (sv) Disulfidforening av en berare med s-s-utbytesreaktivitet
WO1993020070A1 (en) Novel tetrahydrocannabinol derivatives and protein and polypeptide tetrahydrocannabinol derivative conjugates and labels
KR20170027791A (ko) 비타민 d에 관한 조성물
JP3879866B2 (ja) 生物体液中のバンコマイシンの検出および定量化用試薬および方法
JPH09501233A (ja) 液体試料中のテストステロンを検出し定量するための試薬及び方法
Mattingly Preparation of 5-and 6-(aminomethyl) fluorescein
KR20170014013A (ko) 비타민 d 에피머에 특이적인 결합 파트너
US4954637A (en) Certain maleimide-N-alkylenecarboxylate-ortho-nitrobenzenesulfonic acid esters and derivatives useful for coupling biological materials
EP1733230A1 (en) Assays for amphetamine and methamphetamine using stereospecific reagents
FI87560C (sv) Indolderivat och deras användning samt förfarande för framställning av dem
US5089388A (en) Antibodies for salicylate and their preparation
WO1995019976A1 (fr) Derives chemoluminescents heterocycliques
US5646302A (en) Heterotrifunctional compounds for photoaffinity labelling

Legal Events

Date Code Title Description
NUG Patent has lapsed

Ref document number: 8000146-4

Effective date: 19910805

Format of ref document f/p: F