SE448631B - Disulfidforening av en berare med s-s-utbytesreaktivitet - Google Patents

Disulfidforening av en berare med s-s-utbytesreaktivitet

Info

Publication number
SE448631B
SE448631B SE7903673A SE7903673A SE448631B SE 448631 B SE448631 B SE 448631B SE 7903673 A SE7903673 A SE 7903673A SE 7903673 A SE7903673 A SE 7903673A SE 448631 B SE448631 B SE 448631B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
group
formula
thiol
residue
dithio
Prior art date
Application number
SE7903673A
Other languages
English (en)
Other versions
SE7903673L (sv
Inventor
T Okuyama
T Fujii
N Nakagawa
K Kotani
Original Assignee
Toyo Jozo Kk
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP4995878A external-priority patent/JPS54158488A/ja
Priority claimed from JP16490978A external-priority patent/JPS5512178A/ja
Application filed by Toyo Jozo Kk filed Critical Toyo Jozo Kk
Publication of SE7903673L publication Critical patent/SE7903673L/sv
Publication of SE448631B publication Critical patent/SE448631B/sv

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/70—Sulfur atoms
    • C07D213/71—Sulfur atoms to which a second hetero atom is attached
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/89—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/08—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D277/12—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/16—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/60—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D277/62—Benzothiazoles
    • C07D277/68—Benzothiazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 2
    • C07D277/70—Sulfur atoms
    • C07D277/76—Sulfur atoms attached to a second hetero atom
    • C07D277/78—Sulfur atoms attached to a second hetero atom to a second sulphur atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0036—Galactans; Derivatives thereof
    • C08B37/0039—Agar; Agarose, i.e. D-galactose, 3,6-anhydro-D-galactose, methylated, sulfated, e.g. from the red algae Gelidium and Gracilaria; Agaropectin; Derivatives thereof, e.g. Sepharose, i.e. crosslinked agarose
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/814—Enzyme separation or purification
    • Y10S435/815—Enzyme separation or purification by sorption

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)

Description

448 631 2 varande uppfinning visat sig, att en ny disulfidförening av en bärare som har S-S-utbytesreaktivitet, som faller under den ovan angivna allmänna formeln I och som i fortsättningen be- tecknas som S-S-utbytesreaktív bärare I, reagerar specifikt snabbt och kvantitativt med föreningar innehållande tiolgrupp.
Den S-S-utbytesreaktiva bäraren I enligt förevarande upp- finning reagerar med en tiolföreníng på sätt som åskâdliggöres i följande reaktionsschema: R-S-S-X1-X2-A B-SH B-S-S-Xl-X2-A där B är tiolrest av föreningen innehållande tiolgruppen och R, X1, X2 och A har ovan angivna betydelse.
Immobiliserat enzym erhålles om enzym användes som tiol- förening, och när hapten, antigen eller antikropp användes sâf som tiolförening erhålles en immobiliserad immunkomponent använd- bar som bärare vid affinitetskromatografering för utvinning och rening av fasta bärare eller immunkomponenter.
En bärare med tiolgrupp kan också erhållas, om den S-S-ut- bytesreaktiva bäraren I behandlas med 5-S-bindningsspjälkande reagens, exempelvis ditiotreitol eller en vattenlösning med pH 9-ll enligt följande: R-S-S-X1-X2-A S-S-gruppspjälkande reagens HS-X1-X2-A där R, X1, X2 och A har ovan angivna betydelse.
Såsom ovan angives är den S-S-utbytesreaktiva bäraren I enligt förevarande uppfinning en ny och användbar förening.
Ett ändamål med uppfinningen är att tillhandahålla en ny disulfidföreníng användbar som S-S-utbytesreaktiv bärare I. h! 448 631 I disulfidföreningen användbar som S-S-utbytesreaktiv bä- rare I är R, såsom ovan angives, en 2-bensotiazolyl- eller 2-pyridyl-N-oxidgrupp och X1 är den ovan angivna mellanrums- gruppen. Nämnda molekylkedjor kan eventuellt innehålla amino-, karboxyl- eller hydroxylgrupper eller dessa grupper skyddade med skyddsgrupper, eller eventuellt grenade eller raka. Före- dragna exempel är alkylengrupper, eller alkylengrupper, som är direkt bundna i ändställningen vid S-S-gruppen och som inne- håller minst en amidgrupp.
I bäraren är X2 en bindande grupp och såsom inledningsvis angivits en av följande grupper, nämligen amid (-CONH-), ester (-C00-), eter (-O-), imino -NH och amidíno (-CïNä_). Nämnda bindande grupp X2 kan vanligtvis bildas genom att man valfritt ändrar en sådan grupp som amino, hydroxyl, karboxyl, cyano eller nitro i en bärare till sin funktionella grupp genom omsättning med nämnda funktionella grupp eller ett reaktivt derivat därav, exempelvis aktiv ester eller syraklorid av karboxylgruppen, terminal aminering av nämnda grupp medelst hexametylendiamin eller dodekametylendiamin, imidering av nitril eller amineríng genom reduktion av nitril.
A är såsom ovan angivits en bindande rest av en olöslig bärare. Bäraren innefattar immobiliserade bärare med minst en funktionell grupp, såsom amino, imino, amid, hyroxyl, karboxyl eller nitril. Exempel på sådana bärare är polysackarid, såsom cellulosa, aminoderivat av cellulosa, dextrin eller dextran, eller dess i vatten olösliga bärare, eller vattenolöslig bärare med hydroxyl- eller aminogrupp, såsom aminerad polyamid, polyakrylnitril eller silan. Bland bärarna ingår även kända eller nya föreningar, som kan användas som en bärare för ändamålet enligt föreliggande uppfinning. Som exempel på nya föreningar med aminogrupp kan nämnas X"- aminopropylerad polyamid, aminoderivat av polyakrylnitril- polymer eller polyakrylnitrilgrupp-polymer. En \f-amino- propylerad polyamid framställes genom upphettning av polyamid- bärare, såsom 6,6-nylon och 6-nylon i \/-aminopropyl-trietoxi- silan vid l00°C i 3 timmar för partiell införing av §(-amino- propylgrupp i polyamidföreningens amidgrupper. Aminoderivaten av polyakrylnitrilpolymer eller polyakrylnitrilgrupp-polymer 448 631 1: kan framställas genom upphettning under återflöde av en poly- akrylnitrilpolymer eller polyakrylnitrilgrupp-polymer i närva- ro av litiumaluminiumhydrid i ett sådant medium som dietyleter, dioxan eller tetrahydrofuran i l-H8 timmar för bildning av ami- nogrupp genom particll reduktion av nitrílgruppen.
Den S-S-utbytesreaktiva bäraren I kan framställas exempel- vis genom att en förening R-S-S-R II där R har ovan angiven betydelse, exempelvis 2,2'-ditio-bis- (bensotiazol) eller 2,2'-ditio-his-(pyridin-N-oxid) i ett inert lösningsmedel, exempelvis bensen, tolucn, kloroform, koltetra- klorid, dimetylformamid, aceton, etanol eller metanol eller en blandning av tvâ eller flera av dessa lösningsmedel, omsättes med en ekvimolar mängd av en förening med formeln HS-X1-X3 III där X3 är en grupp som kan reagera med bäraren eller en grupp som kan ändras så, att den reagerar med bäraren, och X1 har ovan angiven betydelse. Reaktionen genomföras vid 10-70°C under en reaktionstid av mellan 10 minuter och 5 timmar. Produkten utvin- nes och renas på känt sätt.
Gruppen X3 i föreningen R-S-S-X1-X3 IV där R, X1 och X3 har ovan angivna betydelser, kan eventuellt ändras till en reaktiv grupp som kan reagera med bäraren.
Karboxylgrupp kan ändras till aktiv ester, exempelvis succin- imidester eller p-nitrofenylester eller syraklorid, och nitril- grupp kan omvandlas till imidatgrupp. Detta kan åstadkommas medelst känd aktíveringsmetod.
Föreningen IV omsättes med bäraren i ett inert medium, exempelvis vatten, aceton, etanol, metanol, dímetvlformamid, dioxan eller ett vattenhaltigt medium därav under kylning eller vid rumstemperatur i 1-M0 timmar, varpå produkten avfiltreras och tvättas.
Den så erhållna S-S-utbytesreaktiva bäraren I är den an- vändbara och nya föreningen innehållande bensotiazol-2'-yl-di- tio- eller pyridin-N-oxid-2'-yl-ditiogrupp. Nämnda förening I är aktiv för S-S-utbytesreaktion för kombination av häraren med en förening innehållande tiolgrupp, exempelvis enzym, såsom peroxidas, katalas, /9-galaktosídas eller alkaliskt fosfatas 448 631 5 eller hapten, antigen och antilropp för ínföring av tiolgruppen genom S-acetylmarkapto-bürnstenssyra~anhydrid (Arch. Biochem.
Bíophys., 96, 605-G12 (l962)).
Ytterligare utföríngsformer av förevarande uppfinning för framställning av den S-S-utbytcsreaktiva häraren I är följande: En tiol-agarosförening V som i fortsättnínnen betecknas som tiolagarosföreníng V: /'°\\ -CH -CH-N=C . I \\0// 7 2 çO COOH NH-CH2-COOH ns-cn?-en-NH-co-cn [A] V där [Ä] är en agarosmolekylrest, omsättes med disulfídreagens för framställning av den nya disulfidföreningen: 0 f' \*[A7 I' R-S-S-CH -CH-NH-CO-CH -CH -CH-N=C _ 2 2 \ O/I 2 I 1 co-nu-cn?-coon coon Tiol-agarosföreningen V kan framställas på känt sätt (se exempelvis Biøchem. J. lââ, 573-58% (1973), "Practice and App- lication; Affinity Chromatography, p. GU-65, Kodansha Publisher, 1976 (på japanska)") eller genom reduktion av i handeln tillgäng- ligt aktiverat tiolsefaros med ditiotreitol. Som agarosmolekyl- rest kan man använda en agaros framställd på känt sätt eller i handeln tillgängligt agarospärlgel Sepharose'2B (agaroshalt cirka 2%, svälld kornstorlek cirka 50-250 pm), handelsnamn, Pharmacia Fine Chemicals Co.), Sepharose UB (agaroshalt cirka 4%, svälld kornstorlek cirka H0-190 pm) eller Sepharose ßß (agaroshalt cirka 6%, svälld kornstorlek cirka H0-210 pm). Pärl- gelagaros (pürlgel utgöres av ett vattenolösligt, tredimensio- nellt fackverk) användes företrädesvis på grund av sin permea- bilitet.
Tiol-agarosföreningen omsättes med dísulfídreaktíonskompo- nenten, exempelvis 2,2'-ditio-bis-(pyridin~N-oxid) eller 2,2'- ditío-bis-(bensotiazol) och vattenhaltíg etanol innehållande EDTA i tris-UCl-buffert under omrörning hela natten. Produkten I' avfiltreras (poröst glasfílter), tvättas, om så erfordras, med etanol, bensen eller avjoniserat vatten. Produkten förvaras suspenderad i 0,l% agaroslösníng i frysskåp. 448 631 6 Här nedan angíves resultaten av jämförelser mellan hastig- heterna dv 3~S-uthytusrunhtionurna vid omsättning av föreningar innehållande tíolgrupp å ena sidan och ä den andra föreningarna enligt uppfinningen resnektive den kända föreningen aktiverad tiol-Sepharose NB. Föreningarna med tíolgrupp är glutation och Oxserumalbumin (BSA). Försöksmetoderna är följande: 1,5 ml di- sulfídförening I eller aktiverad tiol-Sepharosc UB i 0,l% agaros sättas i l,H5 ml av l mH EDTA i 0,2 H tris-HCI-buffert (DH 7,5) eller i natriumkarbonatbuffert (pH 9,5). Därtill sättas 50 pl av en 10 mH glutaiion eller 200 pl av en 2,5 mM BSA och man mätte den ökade absorptíoncn per minut för nlutation eller per 20 minuter för BSA vid var och en av våglängderna för maximal absorption. Resultaten är sammanställda i tabellerna 1 och 2 Tabell l. (glutation) R pn 7,5 pu 9,5 våglängd reaktions- våglängd reaktions- (nm) hastighet (nm) hastighet (nmol/min) (pmol/min) \ N/' 3||3 8,7 SNB 23,2 r-i r-l o Q "_" x ä r- _ 321» 52,0 287 71,9 3 \ / N\ . 276 2,? 2ß1 1u,3 ff m U :cm m c x Låg' / \ 333 92,8 333 131 3-5 -z-1 8%. “O m n. w«ø x kompenserad reaktionshastighet för dísulfidföreningens nedbrytning vid pH 9,5. 1 448 631 Tabell 2 (BSA) R pn 7,5 pa 9,5 våglängd reaktions- våglängd reaktions- (nm) hastighet (nm) hastighet (pmol/min) (umol/min) <\__I>.. 3113 0,96 303 7,20 I - 320 1,00 207 12,0*** S \___/ g _ ä , ß /l K 050 0,00 363 7,33 \\ z/ \ 333 3,10 333 00,7* ::} Q O CCD u' f' .EPÉ / °\ 310 7,05 309 f* 0:: 1 ' L Q \\ N” 20 D. 14-11 -x kompenserad reaktionshastighet för dísulfidföreningens nedbrytning vid pH 9,5. xx icke bestämd på grund av snabb nedbrytning av dísulfid- föreningen. ' xxx reaktionshastigheten beräknad genom ßSA-koncentrations- minskningen.
Såsom framgår av tabellerna 1 och 2 är föreningarna enligt förevarande uppfinning bättre än kända disulfider för S-S-ut- bytesreaktionshastigheter.
I följande exempel belyses uppfinningen, men denna är givet- vis icke begränsad till de i exemplen angivna detaljerna.
Exempel l. Tiol-Sepharose GB pärlor (1,6 g, vâtvikt) med formeln . o zas-crfz-êii-Nlx-co-cii -cn -cr-r-rhc/ \_/'/x'_7 V. | 0 2 2 boon *o/ 'NH-CH?-COOH där [Ål] är resten av pärlgelagarosmolekylen (Sepharose MB) innehållande cirka #% agarøs satsades i en 50 ml flaska av polyeten och 10 mM 2,2'-dítio-bis-(pyrídin-N-oxíd) beh SO % - etanol innehållande 1 mM EDTA i 448 631 8 0,2 M trís-HCl-buffert (pH 7,5) (M0 ml) tillsattes. Efter mild omrörning hela natten filtrera- des reaktionsblandníngen genom ett noröst glasfilter, tvättades tre gånger med 50 % etanol (H0 ml) och fem gånger med avjonise- rat vatten (HU ml), varigenom man erhöll disulfidföreníngen med formeln o / -s-s-cxaz-cH-xen-co-CH.-cnz-cn-ruc/ \[A'] I' l “ l \ / --N\_, CO coon -o 0 _ :Su-crfz-coolx' där [Ä'] har ovan angiven betydelse.
UV-absorptionsspektrum för disulfidföreningen I' i 1,5 ml av en 0,2 M trís-HCl-buffert (pH 7,5) innehållande 1 mM EDTA i 0,1 % agaroslösníng visas i fig. l (den streckade kurvan). Även absorptionsspektrum för den med 0,1 M ditiotreitol (50 pl) re- ;erade formen av disulfidföreningen I' visas i fíg. l (den hel- dragna kurvan). H,85 pmol av 2-tiopyridin-N-oxid (molekylextínk- tionskoefficient 3830 vid 333 nm: pH 7,5) per 76,4 mg (torrvikt) disulfidföreníng I' frigjordes, varigenom man beräknade att det förelåg 63,5 pmol 2-pyridyl-N-oxíd-glutation-disulfídgrupp i 1 gb (torrvikt) av disulfidföreningen I'.
Exempel 2.
Det i exempel l beskrivna förfarandet upprepades men med användning av 2,2'-ditio-bis-(bensotiazol) i stället för 2,2'- ditío-bis-(pyridin-N-oxíd). Produkten avfiltrerades genom ett poröst glasfílter, tvättades tre gånger med etanol (H0 ml), tre gånger med bensen (H0 ml), tre gånger med etanol (no ml), fem gånger med avjoniserat dcstillerat vatten (HD ml) och man erhöll som produkt en förening med formeln S O \ \\-S-S-CH -CH~NH-CO-CH ~CH-N=C// [A'] I" // 2! 2' \0/ N ?O COOH NU~CH2-COOH där [Ä'] har ovan angiven betydelse.
UV-absorptionsspektrum för disulfídföreningen I" och redu- cerad form därav angives i fig. 2 som streckad resp. heldragen kurva. 448 631 1,88 pmol 2-tiobensotiazol (molekylarextinktionskoeffi- cient 19300 vid 310 nm) per 60,3 mg (torrvikt) av disulfidföre- ningen I" frigjordes. På grundval härav beräknades 31,2 pmol 2-bensotiazol-glutationdisulfidgrupp i 1 g (torrvikt) disulfid I".
Utgångsmaterialet tiol-Sepharose HB med den ovan angivna formeln V' framställdes på följande sätt: 2-PGD-Sepharose HB (Lot No. 3196, Pharmacia Pine Chemicals Co.) (10 g, vàtvikt) suspenderades i 30 mM ditiotreitol och 0,2 M tris-HCl-buffert (pH 7,5) innehållande l mM BDTA. Efter 20 minuter filtrerades reaktionshlandningen genom ett poröst glasfilter och den ovan beskrivna reaktionen upprepades tre gånger för fullständig re- duktion. Piltreringen genom poröst glasfilter upprepades på an- givet sätt, varpå filtratet tvättades med avjoniserat, destil- lerat vatten (100 ml) för avlägsnande av återstående ditio- ltol och utvinning av tiol-Sepharose HB med formeln V'. UV- absorptionsspektrum för föreningen V' framgår av fig. 3.
Exempel 3. 6,8-nylonpärlor (diameter 0,8 mm, 100 g) suspenderade i Q?-aminopropyltrietoxisilan (100 ml) upphettades vid 10000 i tre timmar. Efter upphettningen avfiltrerades pärlorna, tvätta- des med vatten och torkades, varigenom man erhöll Yramino- propylerade pärlor. [ffïaminopropylerat förhållande per en pärla: SU y”sekun- därt antikropp-protein var bundet.
Försöksmetod: De på ovan angivet sätt framställda pärlorna fick stå i dimetylformamidlösning (150 ml) innehållande bärnstens- syraanhydrid (20 g) över natten. Sedan fällningen avfiltrerats och tvättats omsattes den med dicyklohexylkarbodiimid (20 g) och N-hydroxisuccinimid (ll,S g) i dimetylformamid (150 ml) hela natten, varpå tvättning genomfördes med dimetylformamid.
De erhållna pärlorna tvättades tre gånger med 0,05 M fos- fatbuffert (pH 7,0) innehållande 0,1 % NaN3, 3 mM MgCl2 och 0,15 M NaC1, varpå sekundär antikropp (antimarsvin från kanin IgG: förk. Abz) tillsattes och det hela omsattes vid 5°C i 17 timmar. Pärlorna med bunden Ab2 avfiltrerades och tvättades tre gånger med 0,05 M fosfatbuffert (pH 7,0) innehållande 0,1 % Mans, 0,25 s øxserumaibumin, a mn Mgclz och 0,15 M Nacl (som: 448 651 l0 fortsättningen betecknas som antigen-antikroppsreaktionsbuffert), Till 2 pärlor därav sattes 1 ml med /5-galaktosidas tvärbundet marsvinsantioxinsulin (2\f) och det hela fick stå i 20 timmar vid S°C och tvättades därefter med antigen-antikroppsreaktions- buffert. 200 pl reagens för ,ß-galaktosidas färgreaktion bestående av 5 mg/ml o-nitrofenylgalaktosid i 0,1 M fosfatbuffert (pH 6,7) innehållande 0,1 % oiserumalbumin och 10 mM merkaptoetanol om- sattes därmed vid RHOC. Efter 20 minuter tillsattes glycinbuffert (pH 10,5, 2,5 ml), varigenom reaktionen avbröts. Genom kolori- metrisk mätning vid N20 nm bestämdes av enzymimmunometoden bunden Abz.
Med /3-galaktosidas tvärbundet antioxinsulin framställdes genom omsättning av en dimetylformamidlösníng av 3-(bensotiazol- -2'-yl-ditio)-propionat-succinimidester med 0,1 M veronalbuffert- lösning (pH 7,5) av antioxinsulin i ekvimolart förhållande vid rumstemperaturen i N timmar. Reaktionskomponenten utfälldes genom isoelektrisk fällning, avcentrifugerades och löstes i fosfat- buffert (pH 7,5). Till lösningen sattes en ekvimolar mängd 23-galaktosidas och reaktion genomfördes vid rumstemperaturen i 1 timme, varpå den aktiva fraktionen uppsamlades medelst Sephadex G-100. Man erhöll det tvärbundna antioxinsulinet och.ß-galakto- sidaskonjugat,]J' De 7-aminopropylerade pärlorna (20 pärlor) sattes till di- metylformamid (5 ml) och det hela försattes med 3-(bensotiazol- -2'-yl-ditio)propionat-succinimidester (2,0 mg) i dimetylform- amid (l ml) och fick reagera vid rumstemperaturen i U timmar.
Reaktionsblandningen filtrerades och tvättades med dimetylform- amid - 0,1 M fosfatbuffert (pH 7,5) och man erhöll S-S-utbytes- reaktiva pärlbärare, i vilka 3-(bensotiazol-2'-y1-ditio)propio- nylgrupp införts i T=aminogrupp. . _ Till dessa S-S-utbytesreaktiva pärlor sattes /5-galaktosidas (3 mg) i 0,1 M fosfatbuffert (pH 7,5) och omsattes vid rumstem- peraturen i 2 timmar, varpå pärlorna avfiltrerades och tvätta- des och man erhöll immobiliserade A5-galaktosidaspärlor. Produk- ten hade en aktivitet av 6 enheter A3-galaktosidas per en pärla -bestämd genom 23-galaktosidas-kolorimetrísk reaktion. .._.....__..._...._.._, _" La, 448 631 li Den ovannämnda 3-(bcnsotiazol-2'-yl-ditio)-propionat-succín~ ímídestnrn framställdes på följande sätt: Till 2,2'-ditiu-»is-(bensotíazol) (13,2 3) sattes bensen (400 ml) och 3-merkaptopropionat (E Q) och det hela omsattes vid 70°C i tre timmar under omrörning. Därefter kyldes reaktíonsbland- ningen i ett isbad för fällníng av de råa kristallerna (l3,8 g) vilka omkristallíserades i bensen. Nan erhöll 3-(bensotíazol-2'- -yl-ditío)-propiongtkristaller (12 g) Q //” .
I //,-s-s-eng-cm?-coon = smp. 162-1ßu°c.
Q h Till 3-(bcnsotiazol-2'-yl-ditio)-propionat (3 g) i etyl- acetat (200 ml) sattes N-hydroxisuccinimíd (l g) och dicyklo- hekylkarbodiimíd (1,7 g), och det hela omrördes-vid rumstempera- turen i tre timmar. Den utfällda dicyklohexylkarbamíden avfiltre- rades och filtratet tvüttades med fosfatbuffert (DH 7,5) för av- lägsnande av oumsatt fri syra. Etylacetatfasen dehydratiserades genom tillsats av vattenfrítt natriumsulfat, torkades och om- kristallíserades i het petroleumeter. Man erhöll kristaller av 3-(bensotiazol-2'-yl-ditio)-propionat-succinimídester (2,H g) 2 °\ S I -s-s-cnz-on?-coon' H = amp. 11u-11s°c, \\\ N 04% U korrigerat värde: 121-12s°c.
Exempel U.
Det i exempel 3 beskrivna förfarandet upprepades men í stället för du ï=amïnonropylerade yürlorna användes porös, granulfir eller Fíhrüs substans med fria amino- och nitrilgrupper.
Denna substans hade framställts på här nedan angivet sätt. Reak- tionen genomfördes under-de betingelser som anfiives i exempel 3 och man erhöll den granulära eller fibrösa S-S-utbytesreaktiva bärföreningen, i vilken 3-(bensotiazol-2'-yl-dítío)~propíonyl- grupp införts_i fri amínogrupp. 448 631 12 En 500 mlzs kolv med tre halsar nlacerades i ett vatten- bad med en temperatur av 3500 och genomhlåstes med kvävgas i 15 minuter. Destillerat vatten (120 ml), natriumalkylsulfonat (2 g), akrylnitril (80 g), natriumpersulfat (0,1 g) och natrium- vätesulfit (0,033 g) tillsattes och det hela omrördes i ungefär tre timmar, varigenom man erhöll en emulsion. Denna hälldes i vatten (500 ml) och natriumklorid tillsattes för utfällning av produkten. Fällningen avfiltrerades, tvättades med vatten och lufttorkades, varigenom man erhöll polyakrylnitril. (Logarit- misk viskositet vid 30oC, 0,5 % i dimetylformamidz cirka 10,5.) Polyakrylnitríl (10 g) löst i dimetylformamíd (l50 ml) formades till porös, fihrös polyakrylnitril. Även polyakrylnitríl (10 g) droppades i en 20 % vattenlös- ning av dimetylformamid med användning av en finfördelningsan- ordning för framställning av porös granulär polyakrylnitril.
I kolven med tre halsar satsades litiumaluminiumhydrid och torr eter (100 ml) under omrörning och dessutom tillsattes den på ovan angivet sätt framställda porösa ßranulära poly- akrylnitrilen (2 g) och det hela kokades under återflöde vid 5000 i sexton timmar. Därpå tillsattes droppvis vatten under ískylning i och för sönderdelníng av oomsatt litiumaluminium- hydrid, som löstes genom droppvis tillsats av l N-HCl. Amin- derivatet av polyakrylnitril avfiltrerades, tvättades med l N-HCl, med vatten, med l N-NaOH, med vatten och med 0,1 M-fos- fatbuffert i nämnd ordningsföljd för erhållande av porös granu- lär substans med fria amino- och nitrílgrupner.
Den ovan beskrivna porösa granulära polyakrylnítrilen ut- bytes mot porös fibrös polyakrylnitríl för framställning av porös fibrös substans med fria amino- och nitrilgrupper.
Kvantitativ analys för aminogrupperna i dessa substanser genomfördes på följande sätt: Den porösa substansen innehållande fria amino- och nitril- grupper omsättes med 12,5 % glutaraldehyd-boratbuffert (pH 8,5) vid OOC i 20 minuter. Reaktionsblandningen filtreras, tvättas med boratbuffert och sättes därefter till 7-ADCA (7-aminodes- acetoxicefalosporansyra) i 0,1 N-fosfatbuffert (pH 7,5) och om- 448 631 13 sättas vid BUOC i G0 minuter under omrörning. Mängden 7-ADCA som kvarstår i den övre vätskefasen bestämmas genom vätskekro- matografering. Vid flenomfürande av detta förfarande erhölls som resultat att 33-35 pH 7-ADCA kan bindus ner 1 g porös sub- stans.
Den ovannämnda glutaraldehydbehandladu substansen behandla- des också med 0,2 M-hcxametylendiamín (pH 9,5) vid rumstempera- turen i 2 timmar, omsattes vidare med glutaraldehyd och därefter med 7-ADCA. Mängden bunden 7-ADCA visade sig vara N2-H6 pH/g.
Exempel 5.
Det i exempel 3 beskrivna förfarandet upprepades men i stället för 3-(bensotíazol-2'-yl-dítío)-propíonat användes det här nedan beskrivna 3-(pyridin-N-oxid-2'-yl-dítío)-propíonat.
Reaktíonen genomfördes under de i exempel 3 angivna betingelser- na och man erhöll den S-S-utbytesreaktíva pärlsubstansen, i vilken 3-(pyrídín-N-oxíd-2'-yl-ditio)-propionylgrupp införts i Y-amínopropylerade pärlor.
Till 2,2'-dítio-bís-(pyrídín-N-oxíd) (U,3 g) sattes kloro- form (200 ml) och 3-merkaptopropíonat (3 g) och det hela omsat- teë vid 70OC i 3 timmar. Reaktíonsblandnlngen kyldes, varvid råa kristaller utföll. Dessa omkristallíserades í kloroform och man erhöll kristaller av 3-(pyrídín-N-oxíd-2'-yl-dítio)-propíonat (H,l g) / š-s-s-crxfcnfcoon: amp. 12s-12a°c.
\% En aktiv ostar, 3-(pvrídín-N-oxíd-2'-yl-dítio)-proníonat- suucínímídester, framställdes genom omsättning av den fría sy- ran med N-hydroxísuccinimid och dicyklohexvlkarbodlímid.
UV-absorption: Åmax = 260 nm i metanol, RF = 0,25 (tunnskíkts- kromatografering, kiseldloxidgel; bensen:etylacetat = 3:1).
Exempel 6.
Följande här nedan närmare beskrivna föreningar (1) - (29) kan vid de i de ovanstående exemplen beskrivna förfarandena an- vändas í stället för 3-(bensotiazol-2'-yl-dítio)-propíonat och 3-(pyrídín-N-oxid-2'-yl-dítio)'P¥opionnt. n 448 631 'HI Vid omsättningen av de nämnda föreningarna med häraren innehållande funktionell grupp, företrädesvis amíno, kan känd kondensationsreaktion tillämpas för framställning av fördel- aktiva S-S-utbytesreaktiva bärföreningar. (1) 3-(bensotínzol-2'-yl-ditío)-propionat (3 g) framställt på sätt som angiven i exempel 3, p-nitrofenol (1,2 g) och dícyklo- hexylkarbodiimíd (2,1 ß) löst i etylacetat (20 ml) omrördes vid rumstemperaturen i 3 timmar. För övrigt förfors på sätt som an- gives i exempel 3 och man erhöll 3-(bensotíazol-?'-yl-diti0)- propionat-n-nitrofenvlcster (18,5 g) i form av kristaller S /, -s-s-cn2-cn2-coo-<í_>>~uo2 N smp.: 113-11u°c. (2) 3-(bensotiazol-2'-yl-ditio)-propionat (3 3) löst i tionyl- klorid (10 ml) cmsattcs vid ?50C i 2 timmar, varpå tionvlklorí- den avlägsnades i vukuum och man erhöll 3-(bcnsotíazol-2'-y1- dítio)-propionylklorid i form sv en oljeartad substans S / N -S-S-CH?-CH7C0C1 Åmax = 272 nm (metano1); Rf = 0,25 (tunnskiktskromato- grafering, bensen). (3) 3-(bensotiazol-2'-yl-ditio)-propionat-succínímidester (1,3 g) framställt på sätt som anniven i exempel 3 och f-amino- kaprnnsyra (0,0 ß) tillsattes i tetrahvdrofnran (åß ml) och det hela cmsattes vid rumstemperaturcn över natten. Därefter av- lägsnudes tetrahydrofuvanen i vakuum och indunstningsåtersto- den löstes i het ísopropanol. Lösningen kyldes, varigenom man erhöll krisfallcr av 6-N-[§~(bensotiazol-2'-yl-ditío)propionyl?- aminohexansyra (0,8 g) S ;>~S-S-CH2-CH2-CONH-CH2-(CH2)3-CH2-COOH N fhax : 272 nm (i metanol), Rf : 0,07 (tunnskiktskromatografering ._._..,.. ...__u M 448 651 På kíâflldioxidgcl, bensen : etvlncetnt = l:?).
(N) Den på ovan angivet sätL framställda föreningen (500 mg), H-hydroxisuccinimid (200 mg) och dícyklohexylkarbodiímid (300 mg) lösfa i tetrahydrofuran (10 ml) nmnattes vid rumstem- peraturen i 3 timmar, varpå den utfällda dicyklohexylkarbamiden avfíltrerades och tetrahydrofuranen avdestillerades från filtra- tet. Återstoden löstes í het pctroleumeter och lösningen kyldes, varigenom man erhöll kristaller av B-H-[Ü-(bensotiazol-2'-yl- ditio)-propionyL]-aminøhexansyra-succinímidester (H30 mg) f" :J -S-S-CH2-Cfl2-CONHCH2-(CH2)3-CH?'C00-N / N/// 0,/ Åmax : 271 nm; Rf : 0,02 (tunnskiktskromatograferíng, kiseldioxidgel, bensen : etylacetat = 3:1). (5) 2,2'-ditiu-bis-(bensotiazol) (1,1 g) och 3-merkuptopropio- nitril lösta i bunscn (50 ml) omsattes vid 70OC i 3 timmar un- der omrörning. Reaktíonsblandningen kyldes í ett isvattenbad för utfällning av råkristaller. Dessa omkrístalliserades i ben- sen och man erhöll 3-(bensotiazol-2'-vl-ditío)-propíonítril (750 mg). 700 mg därav sattes till metanol (50 ml) innehål- lande HCl (19 g) och omsattes vid SOC över natten, varpå lös- ningsmedlet avdestíllerades i vakuum och man erhöll ett rått pulver. Detta tvättades med bensen och man erhöll metvl-3- (bensutiazol-2'-yl-ditio)-propionimídat-hydroklorid (720 mg) s / :fn cl' \ . , // 2 . /-_.-.\-cn7-cr17-c\ \ N/ " ' ocnß Åßmx : 272 nm (metanolg Rf : 0,05 (tunnskiktskromatogra- feríng, kiseldioxidgel, bensen : etylacetat = 1:2).
De ovan beskrivna föreningarna 2,2'-ditio-bis-(bensotíazol) eller 2,Z'-ditio-bís-(pyrídín-N-oxid) användes tillsammans med tioglykolsyra, tíomjölksyra, cysteín, tíoäpplesvra, penicil- amin, N-(2-merknptopropíonyl)-filycin eller ßlutation under sam- ma reaktionsbetingclser som ovan angivcs, varvid de här nedan 448 631 1G angivna föreningarna erhölls. Dessa kan användas för omsätt- ning av bäraren innehållande funktionella grupper. De i exemplen angivna värdena för RF har erhållits genom tunn- skiktskromatografcríng på kiseldíoxídgel. (s) s 1/ | -s;-s-cn,_,coou \ ./ I Åmax : 272 nm (metanol); Rf 2 0,36 (bensenrmetanol = 1:2) S-S-utbytcsreaktionshastíghet : 35,6 ymnl/min. (7) _ÅmaX : 272 nm; Rf : 0,38 (bensenzmetanol = 1:2). (ß) -S-S-CH?-CH-COOH / Jm N 2 Åmax : 271 nm (mctanol); Rf : 0,08 Cbensenzmetanol = 1:2) 0,60 (övre fas; butanolzättík- syrazvatten = H:1:5). (9) / S l >-s-s-íc1z-coon \ F/ cnzcoou Ãmax : 271 nm (metanol); Rf 0,15 (bensenzctylacçtat = 1:2) (10) S lcn3 -S-S-C - çfl - COOH H C113 NU? ;\max : 271 nm (pH 7,5, fosfatbuffert) Rf : 0,60 (butanolzättiksyra:vatten = H:1:5; övre fas) P 448 651 (11) ,,a f"a /f \\\ l -S-S-c - en - coon / | 1 \“ *\n/// cn wnz-ncl 3 Ämax : 771 nm (metanol) Rf : 0,30 (övre fas; butanol:ättík5VPä=V“Tï@n = "1ï15) S-S-utbytcsrcaktionshastígheter : 35,5 pmol/min.
S CH3 f/ | \\ ~ " Å rn roon '-3 ' L* " i' ., " .4 \ I l (III Flïí 2 NH? omn- Änmx : 971 um, H18 nm (matanul) RE : 0,?3 (övrn fas; butnnolzïttíksyrazvatten = H:l:5).
O (13) 3 ,/ §\»___. >4S -S -ïfíï~ C00 -N' \\ rr cn3 fv;/ V Åmnx : ?7l nm (motnnoí) RF : 0,HR (hcnsenzetyïacetat = 3:1). (lä) 3 - S - 9 - CH ~ C0'NH - CU -(CH )'-CH -COOH 47 än 2 2 3 2 H ' 3 Åmax : 271 nm (metanol) Rf : 0,12 (bcnsenzetylacetat = 3:1) S-S-utbytesreaktíonshastighet : 35,5 ymol/min. 448 631 (LS) “ s Ü \- s - s - flm - cøo-Q-r-Ioz C113 i Åmax : 278 nm Rf = 0,80 (bcnscn:etylacetat = 3:1) (16) S / | \ - s - s - nu - cormcfaïcooll \ rf/ Äng Åmax : 271 nm (metanol) Rf : 0,15 (hcnsenzetylacetat = 3:1) S-S-utbytcsreuktiunshastighet : 36,6 ymnl/min. 0 (17) /, ïx\ §§§____ | //\.-s - s - en - cowncrgcoo - n/ \ \N C113 / n Ånmx : 271 nm (metanol) Rf : 0,80 (benscn:ctylacetat = 3:1) (18) ,S / .
I >§-S-S-ÉH-CONHCH2CONH(CH2)¿CH7C00H \\ _ '/. \ _ . \//'\íJ H3 Åmax : 271 nm (metanol) RF : 0,10 (hcnsunzetylucutat = 3:1) S-S-utbytesreaktíonshastighet : 35,7 ymol/min. (m) S ïfla >-s-s-c - c - cocl / l l \ I* cn3 m1, -ncl a) Åmax : 271 nm (metanol); Rf : 0,05 (bcnsenzetylacctàt = 3:1) 448 631 19 - S - S - CH? - çfl - CONUCHZCOOH .// HHCOCH2CH7?H-C003 NHÛ I. (20) Åmax : 272 nm (metanol) Rf : 0,31 (övre fas; butanol:ättiksyra:vatten = H:l:5) S~S-utbytesvedktíonshastíghet : 35,2 Pmol/min. ~ / ~ s-s-crgcøon x: $ o (21) Åmax : 270 um (metanol) Rf : 0,7 (övre fas; butanolzñttíkßyrazvntten = Hzlzl) S-S-utbytcuvuaktionshautiflhet : 92,8 ymol/min. (22) / \ l -s-s-cn-cooxx n å, cua Åmax : 270 nm (metanol) Rf : 0,66 (butanol:ättíksyrd:vatten = U:l:1; övre fas) S-S-utbytcsreaktionshastighet : 93,2 pm~l/min. (23) / \\ |-s-s-c11-coo--no2 'fl/ l __ J CH3 0 ,\max : 3l0 nm (metanol) Rf : 0,8? (bcnscnzctylacctat = 3:1) 448 631 (214) -fš-S - (!IIïC0ï11ïClï2(CH2) aClízC-OOII C113 Åmax : 271 um (metanol) Rf : 0,H1 (butanolzättíksyrazvatten = Nzlzl) S-S-utbytesvcaktionshastíghet 92,6 Pmol/min. (25) / -, \ I-s-s-cn -cncoon uff 2 $ nnz 71 nm (meLanQl) 2 Rf : 0,25 (butanolzättiksyrazvatten = u:l:1) (26) -S-S~CH-COOH $ cuqcnon O Å Åmax : 270 nm (metanol) Rf : 0,32 (butanolzättíksyrazvatten ' H:1:1) S-S-uLbytesrefiktíonshastlßhet 90,1 pmol/min. (27) 1/ \_ I -S--fš-CIIZ -CI-í-CO-IJIICIIZCOOII N | + uucocnzcn cncoon o 21 NII2 Ämax : 270 nm Rf : 0,20 (butanol:ättíksyra:vatten = Uzlzl) S-S-utbytcsreaktionshastighet S 91,5 pmol/min. Ål ('28) (29) AIfläX 448 21 CH NÜ Cl 3 f) -S-S-C _ C Cïï OCH O 3 3 27 0 um OJll (butanol:åíttiksyrazvatten = Uzl: 0,?5 (bulguxolz-'ittikuyrazvzfttelw = 'H1 631 1) 11).

Claims (5)

448 651 '21 P A T E N T K R A V y .___________________
1. Dísulfidförening av en bärare med S-S-utbytesreakti- f vitet, k ä n n e t e c k n a d av formeln R-S-S-X1-X2 där R betecknar 2-bensotiazolyl- eller 2-pyridyl-N-oxid, -A där X1 betecknar en mellanrumsgrupp, direkt bunden till -S-S- och bestående av 1-20 kolatomer i en rak eller grenad kedja, där X2 betecknar en amid-, en imino-, en ester-, en eter- eller en amidino-bindande grupp och där A betecknar en rest av en olöslig bärare, som utgöres av en polysackarid, en , polyamid, en polyakrylnitril eller en silan med åtminstone en funktionell grupp vald bland amino-, imino-, amid-, hydroxyl-, karboxyl- och nítrilgrupper.
2. Förening enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av formeln /°\ {__\ -s-s-cnz-ca-NH-co-cuz-fa-N=o\o/5 \b co _ coon NH-CH2-COOH _ där A är en pärlgelsagarosrest.
3. Förening enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av formeln s ' -s-s-ca -CH-NH-co-CH -CH -CH-N=Q: A N oo coon ' nu-cn -coon 2 där A är en pärlgelsagarosrest. i!! 23 448 631 H.
Förening enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av formeln S -S-S-CH2-CH -CO-A 2 där A är en ïßaminopropylerad nylonpårlrest eller en rëstgrupp av partiellt reducerad polyakrylnitril i form av porösa granu- ler eller fibrer. '
5. Förening enligt krav l, k ä n n e t e c k n a d av formeln -s-s-cfl2-ca2-co-A --N y _ 0 där A har i krav H angiven betydelse.
SE7903673A 1978-04-28 1979-04-26 Disulfidforening av en berare med s-s-utbytesreaktivitet SE448631B (sv)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP4995878A JPS54158488A (en) 1978-04-28 1978-04-28 New disulfide compound
JP16490978A JPS5512178A (en) 1978-12-28 1978-12-28 Carrier having s-s exchange reactivity

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SE7903673L SE7903673L (sv) 1979-10-29
SE448631B true SE448631B (sv) 1987-03-09

Family

ID=26390392

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE7903673A SE448631B (sv) 1978-04-28 1979-04-26 Disulfidforening av en berare med s-s-utbytesreaktivitet
SE8603748A SE456991B (sv) 1978-04-28 1986-09-08 Disulfidderivat foer anvaendning som baerare med s-s-utbytesreaktivitet foer kovalent kromatografering

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8603748A SE456991B (sv) 1978-04-28 1986-09-08 Disulfidderivat foer anvaendning som baerare med s-s-utbytesreaktivitet foer kovalent kromatografering

Country Status (5)

Country Link
US (1) US4237267A (sv)
DE (1) DE2917001A1 (sv)
FR (1) FR2434392A1 (sv)
GB (1) GB2033917B (sv)
SE (2) SE448631B (sv)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE446184B (sv) * 1979-01-12 1986-08-18 Toyo Jozo Kk Polyfunktionell disulfidforening anvendbar som tverbindande medel
SE8102193L (sv) * 1981-04-06 1982-10-07 Pharmacia Ab Terapeutiskt aktiv organisk forening och dess anvendning
SE8102194L (sv) * 1981-04-06 1982-10-07 Pharmacia Ab Terapeutiskt aktiv organisk forening och farmaceutisk beredning innehallande denna
US4487838A (en) * 1982-01-12 1984-12-11 Massachusetts Institute Of Technology Radio-labelled cross-linking reagents
ZA832844B (en) * 1982-05-18 1984-03-28 Smithkline Beckman Corp Oligopeptide prodrugs
US4427582A (en) * 1982-06-08 1984-01-24 Smithkline Beckman Corporation Antimicrobial disulfide prodrugs
US4879249A (en) * 1983-02-25 1989-11-07 Baldwin Thomas O Linker compounds, linker-compound-ligands and linker-compound-receptors
US4614712A (en) * 1983-02-25 1986-09-30 The Upjohn Company Immunoassays with luciferase labeled ligands or receptors
SE8302758L (sv) * 1983-05-17 1984-11-18 Pharmacia Ab Sett for uppspjelkning av disulfidbindningar och derigenom erhallen forening
GB8414354D0 (en) * 1984-06-05 1984-07-11 Biogen Nv Purifying protein
DE3808048A1 (de) * 1988-03-11 1989-09-21 Behringwerke Ag Verfahren zum affinitaetschromatografischen reinigen von faktor xiii
CA2015938C (en) * 1989-05-02 1999-09-07 Kevin M. Knigge Covalent attachment of specific binding members to a solid phase
GB9007384D0 (en) * 1990-04-02 1990-05-30 Duncan Ruth Coupling between polymers and other organic molecular entities utilising thiol-specific reactive groups
IE914007A1 (en) * 1990-11-19 1992-05-20 Univ Illinois A protein being genetically engineered to provide¹orientability and a substrate having an oriented layer of¹proteins
US5789578A (en) * 1996-01-11 1998-08-04 Massey University Methods for the preparation of resins with ligands attached thereto through a linking group comprising sulfide, sulfoxide or sulfone functionality

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2510893A (en) * 1946-12-20 1950-06-06 Velsicol Corp Production of organo-thiyl compounds

Also Published As

Publication number Publication date
FR2434392A1 (fr) 1980-03-21
FR2434392B1 (sv) 1984-03-16
SE7903673L (sv) 1979-10-29
GB2033917A (en) 1980-05-29
SE456991B (sv) 1988-11-21
SE8603748D0 (sv) 1986-09-08
SE8603748L (sv) 1986-09-08
US4237267A (en) 1980-12-02
GB2033917B (en) 1982-09-22
DE2917001A1 (de) 1979-11-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SE448631B (sv) Disulfidforening av en berare med s-s-utbytesreaktivitet
US4232119A (en) Reagent for use in immunochemical assay methods
US5514559A (en) Immunologically active conjugates and method for their preparation
US3878187A (en) Polypeptide derivatives of amphetamine and analogs for immunoassays
DE60111628T2 (de) Metallchelatisierende gemische
US4563304A (en) Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides
EP2295407A1 (en) Hydrazine-based and carbonyl-based bifunctional crosslinking reagents
US5744627A (en) Boronic compound complexing reagents and complexes
JPS6121227B2 (sv)
US6602692B1 (en) Method for immobilizing biomolecules and affinity ligands on polymer carriers
US4794082A (en) Biotinylating agents
US4287345A (en) Polyfunctional disulfide compounds having S--S exchange reactivity
US4258193A (en) Disulfide derivatives having S--S exchange reactivity
JP2648162B2 (ja) ビオチニル化剤
JPH08176159A (ja) カルボジイミド誘導体
US4798795A (en) Biotinylating agents
Gorecki et al. Polymer-bound dihydrolipoic acid: A new insoluble reducing agent for disulfides
CA2262451C (en) Boronic compound complexing reagents and complexes
EP1539702B1 (en) Hydrophilic chemiluminescent acridinium labeling reagents
EP0234799A2 (en) Method of protein detection or isolation
US4954637A (en) Certain maleimide-N-alkylenecarboxylate-ortho-nitrobenzenesulfonic acid esters and derivatives useful for coupling biological materials
GB2029825A (en) Benzothiazolyl- and pyridyl-N- oxide-disulphide derivatives
JPS6058232B2 (ja) 新規なジスルフイド誘導体
US4943636A (en) Certain pyridyl-di-sulfide-alkylenecarbonxylate-ortho-nitro-phenylsulfonic acid esters useful for coupling biological materials
US5869623A (en) Boronic compound complexing reagents and complexes

Legal Events

Date Code Title Description
NUG Patent has lapsed

Ref document number: 7903673-7

Effective date: 19910117

Format of ref document f/p: F