DE2517854A1 - Wurmmittel - Google Patents

Description

Priorität: 22. April 1974, V.St.A., Nr. 462 689

Patenten

r u c h

Wurmmittel, g e k e B^h zeichnet durch elften Gehalt an dem Antibiotikum Streptothricin und/odejxS 15-1 und/oder 156 B-1 und^Öbl4.chen Trägerstoffen un£/oder Verdünnungsmitteln und/oder Hilfsstoffen.

Die Erfindung betrifft den im Anspruch gekennzeichneten Gegenstand.

Bandwürmer (Cestoden) verursachen weit verbreitete und ernste Infektionen bei Säugetieren, wie Hunden, Katzen, Schafen oder

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Ziegen. Die infizierten Tiere stellen eine gesundheitliche Bedrohung für den Menschen dar und verursachen gleichzeitig einen ernstzunehmenden wirtschaftlichen Verlust.

Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zu Grunde, wirksame Mittel gegen Bandwurmbefall zu schaffen. Die Lösung der Aufgabe beruht auf dem überraschenden Befund, daß die Antibiotika Streptothricin, S 15-1 und 156 B-1 aus der Streptothricinfamilie sich als wirksame Mittel gegen Cestoden erwiesen. Das Antibiotikum 156 B-1 wird in der Literatur auch als Verbindung 24010 B-I bezeichnet.

Es sind verschiedene Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums Streptothricin bekannt. Ebenso bekannt sind die physikalisch chemischen und biologischen Eigenschaften dieses Antibiotikums .

Der zur Erzeugung des Antibiotikums S 15-1 verwendbare Mikroorganismus ist ein Stamm der Gattung Streptomyces griseocarneus, Er wurde aus einer Bodenprobe isoliert, die aus einer Vorstadt von Sendai City, Miyagi Prefecture, Japan, entnommen wurde. Eine Lebendkultur dieses Mikroorganismus wurde bei der Culture Collection of the United States Department of Agriculture, Northern Regional Research Laboratory (Peoria_s Illinois) V.St.A., unter der Nummer NRRL 5311 hinterlegt. Proben dieses Mikroorganismus sind von diesem Institut erhältlich. Nachstehend ist der Mikroorganismus näher beschrieben: .

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I. Morphologische Eigenschaften;

Wachstum in Nährmedien unter Ausbildung von Hyphen, wie allgemein bei den Actinomycetes beobachtet. Das Luftmycel ist lang und fädig oder stark verzweigt, vereinzelt leicht hakenförmig. Keine Wirtel oder Spiralen. Mindestens 10 kettenförmig aufgereihte Konidien auf der Spitze des Luftmycels; ellipsoid oder zylindrisch (0,6 bis 0,7 x 1,1 bis 1,3 Mikron). Sporen glattflächig.

II. Verhalten auf verschiedenen Nährboden

(1) Czapek-Dox-Nähragar bei 27°Ci

Wachstum cremefarben. Spärliches weißes Luftmycel. Kein lösliches Pigment.

(2) Glucose-Asparagin-Agar bei 27 C:

Wachstum farblos, weißes, pulverförmiges spärliches Luftmycel. Kein lösliches Pigment.

(3) Synthetisches Stärke-Agar bei 27⁰C:

Wachstum farblos. Gut ausgebildetes graustichig-weißes Luftmycel. Spärliches graues lösliches Pigment. Stärke wird lebhaft hydrolysiert.

(4) Calciummalat-Agar bei 27⁰C:

Wachstum farblos. Spärliches, weißes Luftmycel. Kein lösliches Pigment.

(5) 0,2 % Natriumnitrat-Pepton-Lösung in Wasser bei 30⁰C: Wachstum farblos in großer Menge am Gefäßboden. Kein lösliches Pigment. Nitrate werden zu Nitriten reduziert.

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(6) Fleischbrühe-Schrägagar bei 27⁰C:

Wachstum graustichig-gelb, gerunzelt. Kein Luftmycel. Blaßbraunes lösliches Pigment.

(7) Zucker enthaltender Fleischbrühe-Schrägagar bei 27°C: Wachstum gelbst ichig--grau, gerunzelt. Spärliches weißes Luftmycel. Blaßbraunes lösliches Pigment.

(8) Koagulierter Loeffler-Serum-Schrägnährboden bei 27°C: Wachstum weiß bis aschegrau. Kein Luftmycel. Graues bis grauschwarzes lösliches Pigment. Keine Verflüssigung. Kein Wachstum bei 37⁰C

(9) Bennett's-Agar bei 27⁰C:

Wachstum gelb. Dickes rosastichig graues Luftmycel. Blaßbraunes lösliches Pigment. Kein Wachstum bei 37°C

(10) Gelatine-Stichkultur bei 12⁰C:

Wachstum farblos bis blaßbraun. Weißes, dickes Luftmycel im Einstich. Langsame Verflüssigung. Blaßbraunes lösliches .Pigment.

(11) Milch-Agar bei 30⁰C:

Wachstum ringförmig, cremefarben braun. Kein Luftmycel. Blaßbraunes lösliches Pigment. Wird vom oberen Teil der Schicht durchsichtig. Schwache Peptonisierung.

(12) Kartoffel-Nährboden bei 27°C:

Wachstum graustichig-gelb, gerunzelt. Weißes, pulverförmiges, spärliches Mycel. Graustichig-braunes bis grauschwarzes lösliches Pigment.

(13) Tyrosin-Schrägagar bei 27°C:

Wachstum cremefarben. Schwarzes lösliches Pigment.

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-¹S-

III. Biologische Eigenschaften:

Tyrosinasebildung: positiv

Nitritbildung: positiv

Koagulation von Magermilch: negativ

Peptonisierung von Magermilch: positiv (schwach)

Stärkehydrolyse: positiv (stark)

Gelatine-Verflüssigung: ■ positiv (schwach)

Löslichkeit im koagulierten . negativ. Loeffler-Serum-Nährboden:

IV. Verwertung von Kohlenstoffquellen:

Arabinose +

Dextrin +

Fructose +

Glucose +

Glycerin · +

Maltose +

Mannose +

Xylose +

Natriumacetat +

Natriumeitrat +

Natriumsuccinat +

Inosit

Inulin

Lactose

Mannit - -

Salicin

Raffinose (-)

Rhamnose (-)

Saccharose (-)

Trehalose . (-)

Anmerkungen: + = positive Verwertung

- = negative Verwertung (-) = Verwertung unsicher.

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Aus den vorstehenden Ergebnissen geht hervor, daß der Stamm Streptomyces griseocarneus ein Luftmycel bildet, das frei von Wirtein und Spiralen ist. Der Stamm bildet glattflächige Konidien und gehört zur chromogenen Gruppe. Er bildet ein weißes bis blaß-rotes Luftmycel aus, das später aschegrau wird. Sein Wachstum auf dem Czapek-Nähragar ist cremefarben, während der Stamm ein farbloses Wachstum auf einem Glucose-Asparagin-Agar, einem synthetischen Stärke-Agar oder auf einem Calciummalat-Agar zeigt. Der Stamm verwertet die verschiedensten Kohlenstoffquellen.

Auf Grund der vorstehenden Charakteristiken des Stammes Streptomyces griseocarneus ergeben sich folgende homologe Stämme:

Streptomyces cinnamonensis,'Streptomyces bikiniensis, Streptomyces antibioticus und Streptomyces griseocarneus. Streptomyces cinnamonensis unterscheidet sich vom S 15-1-bildenden Stamm dadurch, daß der erstere auf einem Glucose-Asparagin-Agar ein lachsfarbenes Luftmycel bildet, während der letztere ein farbloses Wachstum zeigt. Streptomyces bikiniensis unterscheidet sich vom S 15-1-Stamm durch die Bildung eines bernsteinfarbenen Pigments auf einem Glucose-Asparagin-Agar und durch Bildung eines blaßbraunen Pigments auf einem synthetischen Nähraedium. Streptomyces antibioticus unterscheidet sich vom Stamm S 15-1 dadurch, daß er ein weißes Wachstum auf einem synthetischen Nährmedium zeigt, ein grünstichig graues Luftmycel auf 'einem Milch-Agar ausbildet und auf einem Kartoffel-Nährboden ein blaustichiges Pigment bildet und ein braunes

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Wachstum zeigt. Der bekannte Stamm Streptomyces griseocarneus unterscheidet sich mehr oder weniger vom S 15-1-Stamm bezüglich der Nitrat-Reduzierung und der Verwertung von Kohlenstoff quell en. Beide Stämme stimmen jedoch in anderen Eigenschaften gut überein. Aus den vorstehenden Ergebnissen konnte man schließen, daß der S 15-1-Stamm der Art Streptomyces griseocarneus angehört. Er läßt sich gut vom bekannten Stamm unterscheiden und wurde Streptomyces griseocarneus S 15-1 bezeichnet.

Die Eigenschaften von Streptomyces griseocarneus S 15-1 sind vorstehend beschrieben. Jedoch können sich die Eigenschaften dieses Stammes leicht verändern, wie an anderen Stämmen der Gattung Streptomyces beobachtet wird. Die Veränderung kann in künstlicher Weise erfolgen, · beispielsweise durch UV-Bestrahlung, Röntgenstrahlen, radioaktive Bestrahlung oder Chemikalien. Alle daraus hervorgehenden Varianten eignen sich ebenfalls zur Herstellung der erfindungsgemäßen Wurmmittel soweit sie der Art Streptomyces griseocarneus angehören und die Fähigkeit besitzen, das Antibiotikum S 15-1 herzustellen.

Die Herstellung des Antibiotikums S 15-1 aus dem vorstehend beschriebenen Stamm erfolgt in an sich bekannter Weise. Auch sind die Charakteristika dieses Antibiotikums, beispielsweise dessen physikalisch chemische und biologische Eigenschaften bekannt, bgl. "The Journal of Antibiotics", Bd. 25, Seiten bis 392 und 471 bis 472.

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Der zur Herstellung des Antibiotikums 156 B-1 (24010 B-1) verwendbare Mikroorganismus ist ein Stamm der Gattung Streptomyces. Der Stamm wurde aus Bodenproben in Ikeda City, Osaka, Japan, isoliert. Es wurden Lebendkulturen des Mikroorganismus bei der Culture Collection of the United States Department of Agriculture, Northern Regional Research Laboratory (Peoria, Illinois, V.St.A.) unter der Nummer NRRL 5319 hinterlegt. Proben dieses Mikroorganismus sind von diesem Institut erhältlich.

Nachstehend wird der Mikroorganismus näher beschrieben:

I. Morphologische Eigenschaften:

Stärke-anorganische Salze-Nährmedium und Kartoffel-Glucose-Nährmedium. Kräftiges Wachstum mit verzweigtem Substratmycel. Kräftiges Luftmycel mit spiralenförmigen Enden (mindestens zwei Spiraldrehungen). Sporenträger bilden keine ¥irtel. Sporen oval, 0,8 bis 0,9 χ 1,2 bis 1,4 Mikron, glattflächig.

II. Verhalten auf verschiedenen Nährböden:

(1) Czapek-Nähragar: Gutes Wachstum, weißer Oberflächenumfang mit blaustichig aschegrauem Innenraum und elfenbeinfarbener Rückseite. Luftmycel blaustichig weißliches Pulver,reichlich vorhanden. Kein lösliches Pigment.

(2) Glucose-Asparagin-Agar: Wachstum teilweise unterdrückt. Farblose, glänzende Oberfläche. Kein Luftmycel. Keine Pigmentbildung.

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(3) Calciummalat-Agar: Gutes Wachstum, im wesentlichen farblos, später in ein helles aschgrau übergehend. Luftmycel pulverförmig und aschgrau. Keine PigmentMldung.

(4) Glucose-Czapek-Fleischbrühe-Nährboden: Mittleres Oberflächenwachstum, dunkelgrau. Spärliches Luftmycel, aschgrau. Keine PigmentMldung.

(5) Nähragar: Mäßiges, flaches Wachstum, beigefarben, kein Luftmycel. Spärliches braunes Pigment.

(6) Loeffler-Serum-Nährboden: Schlechtes Wachstum, blaustichig-schwarz am ersten und zweiten Tag, anschließend beigefarben. Kein Luftmycel. Keine Bildung eines löslichen Pigments.

(7) Pepton-Glucose-Agar: Gutes Wachstum mit gerunzelten Kolonien, graustichig-blaßbraun. Kein Luftmycel. Spärliches gelbstichig-braunes Pigment.

(8) Ei-Albumin-Agar: Graustichig-weißes Wachstum mit pulverförmigem, aschgrauem Mycel. Keine PigmentMldung.

(9) Gelatine: Schwach bräunlich-weißes Oberflächenwechstum. Gelatineverflüssigung. Spärliches braunes Pigment.

(10) Stärke-Agar: Gutes Wachstum, gelbstichig-grüne Rückseite und schwach weißliche Umrandung. Starkes Luftmycel, blaßpurpurrot, pulverförmig. Keine PigmentMldung.

(11) Tyrosin-Agar: Wachstum auf dünne, kleine Kolonien beschränkt. Luftmycel schwach gräulich, pulverförmig. Beachtliche Melaninbildung.

(12) Lackmusmilch: Oberflächenwachstum graustichig-cremefarben. Peptonisierung der Milch ohne Koagulation.

(13) Cellulose-Nährboden: Kein Wachstum.

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III. Verwertung von Kohlenstoffquellen:

Glucose ++

Sucrose ++

Galaktose . * ++

Maltose ++

Xylose +

AraMnose +

Fructose +

Rhamnose + Raffinose . +

Mannit +

Inosit (-)

Lactose +

Inulin +

Sorbit +

Natriurasuccinat (-)

Natriumeitrat (-) Salicin
Natriumacetat

Anmerkungen: ++ = stark positive Verwertung

+ = positive Verwertung

- = negative Verwertung

(-) = Verwertung unsicher.

Aus den vorstehenden Ergebnissen geht klar hervor, daß der untersuchte Mikroorganismus Eigenschaften aufweist, die ihn der Gattung Streptomyces zuordnen. Diese Eigenschaften wurden mit den Eigenschaften zahlreicher Mikroorganismen der Gattung Streptomyces verglichen, die in Bergey's "Manual of Derterminative Bacteriology", 7. Auflage, 1957 und in Waksman's "The Actinomycetes", 2. Auflage, 1961, beschrieben sind. Es ergibt sich, daß bezüglich der morphologischen Merk-

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male der untersuchte Mikroorganismus den Arten Streptomyces albus und Streptomyces calvus aufgrund nachstehender Merkmale ähnelt: Die Sporenträger sind nicht verzweigt und bilden keine Wirtel sondern bilden an ihren Enden Spiralen mit mehreren Spiraldrehungen in einem Nährmedium aus Stärke und anorganischen Salzen und im Kartoffel-Glucose-Nährmedium; ferner sind die Sporen glattflächig und ellipsoid und es besteht in proteinhaltigen Nährböden eine äußerst geringe Fähigkeit zur Pigmentbildung und in synthetischen Nährböden praktisch keine Fähigkeit hierzu. Dagegen weist der untersuchte Mikroorganismus eine hohe Fähigkeit zur Melaninbildung in einem Tyrosin-Agar auf, während die vorstehend genannten Vergleichsarten kein Melanin erzeugen. Weiterhin ist der vorstehend untersuchte Mikroorganismus durch Ausbildung eines hell purpurfarbenen oder leicht rosastichig hell purpurfarbenen Luftmycels in einem Stärke-Agar gekennzeichnet, während die vorstehend genannten bekannten Arten im gleichen Nährmedium ein weißes, oder ein graustichiges Luftmycel ausbilden. Durch diese Eigenschaften kann der zur Herstellung des im erfindungsgemäßen Wurmmittel eingesetzten Antibiotikums 156 B-1 vorstehend beschriebene Mikroorganismus eindeutig von den beiden vorstehend beschriebenen Vergleichsarten unterschieden werden.

Es wurde gefunden, daß Stämme von Streptomyces lavendulae und Varianten wasserlösliche basische Antibiotika erzeugen können, die dem Antibiotikum 156 B-1 ähneln. Diese Stämme weisen in Bezug auf morphologische und physiologische Eigenschaften eine" Ähnlichkeit mit dem vorstehend beschriebenen Mikroorga-

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nismus (nachstehend als Streptomyces Nr. 156.bezeichnet) auf. Jedoch können die genannten Stämme eindeutig vom untersuchten Mikroorganismus durch nachstehende Eigenschaften unterschieden werden: Die Stämme von Streptomyces lavendulae erzeugen in proteinhaltigen Nährböden stets große Mengen an braunen Pigmenten, während der untersuchte Mikroorganismus eine äußerst geringe Neigung zur Pigmentbildung in proteinhaltigen Nährböden aufweist. Bezüglich der Farbe des auf verschiedenen Nährböden gebildeten Luftmycels bilden die Stämme von Streptomyces lavendulae ein dunkel gefärbtes Luftmycel aus. Beispielsweise ist es graustichig-braun, gelbstichig-braun oder blaß purpurrot gefärbt. Dagegen bildet der untersuchte Mikroorganismus in anderen als Stärke-Nährböden in den meisten Fällen ein graustichig-weißes Luftmycel aus.

Daher wurde der untersuchte Mikroorganismus einem neuen Stamm zugeschrieben. Er erhielt die Bezeichnung Streptomyces Nr. 156.

Zur Bildung des im erfindungsgemäßen Wurmmittel eingesetzten Antibiotikums 156 B-1 können außer dem Stamm Streptomyces Nr. 156 auch dessen natürliche oder künstlich erzeugte Mutanten eingesetzt werden. Die Herstellung des Antibiotikums 156 B-1 (24010 B-1) aus diesem Stamm erfolgt in an sich bekannter Weise. Auch sind die Eigenschaften dieses Antibiotikums, beispielsweise die physikalisch chemischen oder biologischen Eigenschaften bekannt, vgl. "The Journal of Antibiotics", Bd. 25, Seiten 604 bis 606.

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Die erfindungsgemäßen Wurmmittel eignen sich wirkungsvoll bei der Bekämpfung von Cestoden in Säugetieren. Vorzugsweise werden die Wurmmittel bei Hunden, Katzen oder Schafen eingesetzt.

Die erfindungsgemäßen Wurmmittel können in den üblichen pharmazeutischen oder veterinärmedizinischen Darreichungsformen verabreicht werden. Sie können in Form von Tabletten, Pillen, Suspensionen, oder abgefüllt in Kapseln, hergestellt werden.

Die Verabfolgung kann bei Tieren auch in Form von Futterzusätzen einer erwünschten Konzentration im betreffenden Tierfutter erfolgen. Die erfindungsgemäßen Wurmmittel können auch mit anderen Anthelminthica, wie beispielsweise Dichlorvos oder Thiabendazol, gemeinsam verabreicht werden.

Die bevorzugte Dosierungseinheit zur Behandlung eines Bandwurmbefalls hängt weitgehend von der Art des in den erfindungsgemäßen Wurmmitteln eingesetzten Antibiotikums, der Stärke der Infektion und der Art des zu behandelnden Säugetiers ab. Beispielsweise ist eine annehmbare Dosierung bei Wiederkäuern wie Schafen höher als bei anderen Tieren, wie Hunden oder Katzen. Die erfindungsgemäßen Wurmmittel enthalten in einer täglichen Dosierungseinheit zur Verabfolgung an Tiere etwa 5 bis etwa 200 mg, vorzugsweise 25 bis 100 mg Antibiotika pro kg Körpergewicht. Die Verabfolgung kann auf einmal

unterteilten
oder in mehreren Dosen erfolgen. Gegebenenfalls kann die Be-

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handlung über eine Dauer von mehreren Tagen durchgeführt werden, wobei die bevorzugte tägliche Dosierung gesenkt werden kann. Vorzugsweise erfolgt die Verabreichung der erfindungsgemäßen Wurmmittel oral.

Die Beispiele erläutern die Erfindung.

Beispiel 1

Wirksamkeit des Antibiotikums S 15-1 gepen den natürlichen Befall mit Taenia taeniaeformis, Dipvlidium caninum und Spirometra mansonoides bei Katzen

Es wurden 23 weibliche und 14 männliche, natürlich befallene Katzen getestet. Der Nachweis des Bandwurmbefalls vor der Behandlung erfolgt bei Jeder einzelnen Katze durch Feststellung von Bandwurm-Proglottiden in den.Faeces oder von Bandwurmeiern auf Zuckerflotation. Den Katzen wurde über Nacht vor der Verabfolgung der Wurmmittel die Nahrung entzogen. Drei Stunden nach der Verabfolgung wurde die normale Fütterung aufgenommen. Kurz vor der Zugabe der Wurmmittel wurden die Katzen gewogen. Das Antibiotikum S 15-1 wurde auf 5 mg genau abgewogen und in Gelatine-Kapseln abgefüllt. Daraufhin erfolgte bei jeder Katze eine einzelne orale Verabfolgung. Es wurden anschließend während 7 Tagen die gesamten Faeces jeder einzelnen Katze gesammelt. Zur Gewinnung der Würmer (Scolices, ausgewachsene Bandwürmer und Proglottiden) wurden die Faeces 1 bis 2 Stunden im Wasser aufgeweicht und anschließend durch ein Sieb von 0,42 mm lichter Maschenweite unter Verwendung eines Wassersprühgeräts durchgewaschen. Die Katzen wurden 7 Tage nach Verabfolgung des

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Wurmmittels getötet,nachdem ihnen zuvor über Nacht die Nahrung entzogen worden war. Die Därme wurden isoliert und nach Würmern untersucht. Der Darminhalt und die abgeschabten Schleimhäute wurden durch ein Sieb von 0,42 mm lichter Maschenweite gewaschen und mit Hilfe eines Seziermikroskops (10 bis 30-fache Vergrößerung) nach Würmern untersucht.

Die Wirksamkeit gegen Cestoden beruht auf einer völligen Entfernung der Bandwürmer. Praktisch gesehen, muß eine Behandlung wiederholt werden, wenn über 90 % der Bandwürmer von einer Katze entfernt werden, da die restlichen Würmer sich wieder vermehren. Daher sind die untersuchten Tiere nicht als wurmfrei zu bezeichnen, wenn bei der Sektion ein Scolex oder ein Bandwurm entdeckt wird. Zur Berechnung der Wirksamkeit des eingesetzten Antibiotikums wird nachstehende Formel verwendet:

Prozentuale Anzahl der wurmfrei gemachten Katzen

_der behandelten Katzen

Die Wirksamkeit des verwendeten Antibiotikums gegen Cestoden und damit vergleichbare Werte sind in den nachstehenden Tabellen I und II zusammengefaßt.

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	Zugabe dosis mg/kg Körper gewicht	Anzahl der be handel ten Katzen	Geschlecht männl. weibl.	6	Tabelle	I	Identifizierte vor der Behandlung T. taeniae- D. caninum formis	- 16 -	1	caninum
				1 3	Körpergewicht, kg			Bandwurmarten Bei Sektion	0 0
	15*	9	3	7		5	T. taeniae- D. formis	0	1
	22,5 30	4 8	VJl VjJ	6	durchschn. 3,1 (1,8 - 5,0)	3 7	Anzahl der Katzen		0
	37,5	8	•1	durchschn. 3,7 (2,7 - 4,7) durchschn. -3,3 (2,6 - 3,9)	3	5		2
cn ο to Cö ■Ρ*	45	8	2	durchs chn. 2,4 (1,8 - 3,2)		1 3		1
ö to cn				durchschn. 2,7 (2,3 - 3,4)	6
		8

* S. mansonoides wurde in einer Katze dieser Gruppe gefunden (vor der Behandlung)

und war bei der Sektion nicht mehr anwesend.

Tabelle II - 17 -

Zugabedosis T. taeniaeformis Wirk- D, caninum Wirk- Mischwurmbefall

mg/kg Kör- Anzahl der Katzen sam- Anzahl der Katzen sam- -T. taeniaeformis und D. caninum

pergewicht _behandelt wurmfrei k®¹*' behandelt wurmfrei ^ke _o)_o ^tj Anzahl der Katzen _Wirksam_

' behandelt wurmfrei keit. %

17 94 23 17 74 " 37

13 100 18 . 13 72 28

10 100 17 ' 12 71 24

3 100 14 11 .79 16

8 7 88 8

* 100 % Wirksamkeit gegen S. mansonoides

	15	und	18
		mehr *
	22	und	13
cn		mehr
O
CO	30	und	10
ÖO		mehr
-uf
er»	37	und	3
CD		mehr
(£> G)	45	und
K>		mehr

31	84
24',	86
20	83
13	81
7	88

Beispiel 2

Wirksamkeit des Antibiotikums S 13-1 gegen den natürlichen Befall mit Taenia pisiformis und Dipylidium caninum bei Hunden Zur Untersuchung dienten 49 weibliche und 29 männliche an natürlichem Wurmbefall erkrankte Mischlingshunde verschiedenen Alters. Die Anwesenheit von taenia pisiformis wurde in 43 Fällen, die von Dipylidium caninum in 25 Fällen festgestellt. Beide Bandwuraarten waren in 10 Hunden anwesend. Die Wirksamkeit, des Antibiotikums gegen Cestoden bei doppeltem Befall wurde gegen jede einzelne Bandwurmart berechnet, so daß die Gesamtzahl der Behandlungen bei Taenia pisiformis und Dipylidium caninum größer ist als die Gesamtzahl der behandelten Hunde.

Die Feststellung eines Bandwurmbefalls vor der Behandlung, die Verabreichungsform des Antibiotikums, die Isolierung der Würmer sowie die Anwendung der Formel bezüglich der prozentualen Wirksamkeit erfolgen gemäß Beispiel 1

In den nachstehenden Tabellen III und IV sind die Ergebnisse der vorstehenden Versuchsreihe zusammengefaßt.

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	Zugabe	Anzahl	Geschlecht	weibl.	Tabelle III	-	19 -	vor der	Behandlung	bei	der Hunde 2	Sektion	•	251
	dosis mg/kg Körper gewicht	der be- VioTori al _	männl.		Körpergewicht,	Identifizierte Bandwurmarten	T. pisi- formis	3. caninum T. pisi- formis	0	D. caninum		00 cn
	9	XldXlUc-L— ten Hunde		6	kg	4	Anzahl 6	0	2
	12,5	8	2	1		0	2	0	1
	15	2	1	4	durchschn. 10,1 (7,7 - 12,6)	5 '	4	1	3
	18	7	3	1	durchschn. 10,45 (10,4 - 10,5)	1	0	0	0
OI CD	20	1		9	durchschn.1 9,6 (7,9 - 11,3)	13	4	0	3 ic
00	25	16	7	7	8,2	8	3	0	1
CfJ	30	8	1	VJl	durchschn. 10,4 (6,7 - 14,1)	6 '	4	0	0
σ>	35	10	5	8	durchschn. 10,0 (7,8 - 12,2)	10	3	0	1
K>	50	11	3	6	durchschn. 10,2 (7,2 - 13,2)	3	8	0	0
	100	11	5	1	durchschn. 8,4 (5,9 - 11,Oj	1	0		0
	200	1		1	durchschn. 8,7 (5,4 - 12,0)	2	1	0
		3	2		14,8
				durchschn. 11,0

Tabelle IV - 20 -

Zugabe- Taenia pisiformis Wirk- Dipvlidium caninum Wirk- Mischwurmbefall dosis Anzahl der Hunde sam- Anzahl der Hunde sam- T. pisiformis und D. caninum

, p/^kS behandelt wurmfrei ¹S¹*' behandelt wurmfrei *ψ> ^^{zahl der Hunde} Wirksamgewicht ' behandelt wurmfrei keit, %

18 und

weniger 10 8 80 12 6 50 18 11 61

20 und

mehr 43 42 98 23 18 78 60 55 ■ 92 cn
ο 25 und

Φ mehr 30 30 100 20 18 90 44 42 ' 95 oo

S 30 und

S: mehr 22 .22 1.00 16 15 94 36 35 97

to 35 und

cn mehr 16 ' 16 100 13 '12 92 26 25 96 co

50 und ·

mehr 6 6 100 9 9 100 15 15 100

8	80	12
42	98	23
30	100	20
22	1.00	16
16	100	13
6	100	9

6	50	18
18	78	60
18	90	44
15	94	36
'12	92	26
9	100	15

Beispiel 3

Wirksamkeit des Antibiotikums S 15-1 gegen den natürlichen Befall mit Moniezia expansa und Moniezia benedeni bei Schafen Zwei mit Moniezia expansa und Moniezia benedeni natürlich infizierte Schafe erhielten eine Einzeldosis von 25 mg/kg Körpergewicht des Antibiotikums S 15-1 abgefüllt in Gelatine-Kapseln, nachdem ihnen zuvor über Nacht die Nahrung entzogen worden war. Gemäß der Versuchsdurchführung aus Beispiel 1 wurde die Entfernung der Strobila festgestellt. Bei einem weiteren Schaf, dem 35 mg Antibiotikum pro kg Körpergewicht verabfolgt wurde, erfolgte eine vollständige Entfernung der Bandwürmer, wobei bei der Sektion keine Skolices aufgefunden wurden.

Beispiel 4

Wirksamkeit des Antibiotikums 156 B-1 (2A010 B-1) gegen den natürlichen Befall mit Taenia pisiformis und Dipylidium caninum bei Hunden

Ein mit Taenia pisiformis natürlich infizierter Hund erhielt eine einzelne Dosis von 50 mg/kg Körpergewicht des Antibiotikums 156 B-1, abgefüllt in Gelatine-Kapseln, nachdem ihm zuvor über Nacht die Nahrung entzogen wurde. Die gesamten Faeces wurden zweimal täglich über 7 Tage gesammelt und nach abgegangenen Bandwürmern untersucht. 7 Tage nach Verabreichung des Antibiotikums wurde der Hund getötet. Der Darminhalt und die abgeschabten Schleimhäute wurden unter dem Seziermikroskop nach Würmern untersucht. Bei der ,Sektion wurden keine Würmer festgestellt.

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Ein weiterer mit Taenia pisiformis und Dipylidium caninum natürlich infizierter Hund erhielt eine einzelne orale Verabreichung von 25 mg/kg Körpergewicht des Antibiotikums 156 B-1. Bei der Sektion wurden keine Bandwürmer der Art Taenia pisiformis gefunden, jedoch ein ein Bandwurm der Art Dipylidium

caninum ohne Strobila

Beispiel 5

Wirksamkeit des Antibiotikums Streptothricin Kegen Hymenolepls nana bei Mäusen

16 bis 18 g schwere weibliche Mäuse wurden oral mit dem Bandwurm Hymenolepis nana infiziert. Jede Maus erhielt 500 Parasiten und deren Eier. 16 Tage nach der Infektion der Mäuse wurde ihnen an drei aufeinanderfolgenden Tagen mit Hilfe einer Sonde 200 mg/kg Körpergewicht pro Tag des Antibiotikums eingegeben. Die Ergebnisse sind in nachstehender Tabelle zusammengefaßt:

1) Untersuchte Verbindung Dosis, Festgestellte Würmer '

: . Nr. des Tiers

1 £ 2 4

Streptothricin 3 x 200 +²^ DS DS

Kontrolle - + + + +

' + = Keine Verminderung der Würmer DS = Entfernung der Strobila - s= Keine Würmer vorhanden

' Starb nach einmaliger Dosis

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Beispiel6

Wirksamkeit des Antibiotikums Streptothricin_T hergestellt aus Streptomyces lavendulae, gegen Hymenolepis nana bei Mäusen Der Stamm Streptomyces lavendulae ATCC 8664 ist bekannt. Dieser Stamm wurde bei der American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, V.St.A., unter der Nummer ATCC 8664 hinterlegt und ist dort erhältlich. Es ist bekannt, daß der Stamm das Antibiotikum Streptothricin erzeugt. Das anschließende Verfahren zur Isolierung des Streptothricins wird unter Anwendung von Ionenaustauscher-Chromatographie durchgeführt. Dieses Verfahren ist bei der Isolierung von Antibiotika der Streptothricin-Reihe gebräuchlich.

Z\ir Herstellung des Antibiotikums werden Schrägröhrchen mit einem Tomatenmark-Hafermehl-Agar mit Streptomyces lavendulae ATCC 8664 beimpft. Sodann werden die Schrägröhrchen 10 bis

von 14 Tage inkubiert und anschließend zum Beimpfen/100 ml eines

Nährmediums folgender Zusammensetzung verwendet:

Geröstetes Sojabohnenmehl 15

Hi-Stärke ' 15

Glucose 50 CoCl₂.6H₂O 0,005

CaCO₃ 10 Destilliertes Wasser auf 1000 ml.

Das Nährmedium wird 30 Minuten bei 121⁰C sterilisiert. Die

bei 25°C
Sporulierkolben werden 96 Stunden/auf einer Drehschüttelma-

echine inkubiert, die mit einem Hub von 5 cm und 280 UpM betrieben wird.

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Aus dem Sporulierkolben wird eine 5volumenprozentige Übertragung in 500 ml fassende Erlenmeyer-Kolben durchgeführt, die 100 ml des in den Sporulierkolben verwendeten Nährmediums enthalten. Die Kolben werden in der gleichen Weise wie die Sporulierkolben bebrütet und geschüttelt. Nach 168 Stunden Inkubation wird der Inhalt der Kolben vereinigt und die vereinte Kulturbrühe durch Zugabe von'6 η-Salzsäure auf einen pH-Wert von 3 eingestellt. Die Trennung der Zellen von der überstehenden Flüssigkeit erfolgt durch Zentrifugieren. Die überstehende Flüssigkeit wird durch Zugabe von konzentriertem Ammoniumhydroxid auf einen pH-Wert von 7 eingestellt. 8 Liter der überstehenden Flüssigkeit (KuIturfiltrat) werden auf eine mit einem Ionenaustauscher IRC-50 (NH^)⁺-Form, 5 cm χ 60 cm, gefüllte Säule gegeben. Nach dem Auswaschen der Säule mit 8 Liter Wasser wird das Antibiotikum mit 1 n-Ammoniurahydroxid eluiert. Mit allen 15 ml enthaltenden chromatographischen Fraktionen wird in üblicher Weise der Agar-Diffusionstest mit Escherichia coli ATCC 10536 auf Papierscheiben durchgeführt. Die aktiven Fraktionen werden vereint (200 ml) und unter vermindertem Druck auf etwa 50 ml eingeengt. Das Konzentrat wird mit der 20-fachen Volumenmenge an Aceton versetzt und die entstandene Suspension 16 Stunden bei 5⁰C inkubiert. Anschließend wird die überstehende Flüssigkeit dekantiert und zentrifugiert. Der Rückstand wird in ca. 5 ml Wasser gelöst und ergibt eine konzentrierte Lösung des Antibiotikums.

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Gemäß Beispiel 5 infizierte Mäuse werden an drei aufeinanderfolgenden Tagen durch eine Sonde mit einer täglichen Dosis von 0,5 ml der vorstehend erhaltenen konzentrierten Streptothricinlösung behandelt. Die Ergebnisse sind in nachstehender Tabelle zusammengefaßt:

untersuchte Verbindung Dosis Festgestellte Würmer Wirk-

Nr. des Tiers 12 3 4

Streptothricin

Konzentrat . 3x0,5il - - - -

Kontrolle - + + + + —

- = Keine Würmer vorhanden + = Keine Verminderung der Würmer

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Claims (1)

1. 'ft

   Patentanspruch

   Wurmmittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt an dem Antibiotikum Streptothricin und/oder S 15-1 und/oder 156 B-1 und üblichen Trägerstoffen und/oder Verdünnungsmitteln und/oder Hilfsstoffen.

   7'

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