DE2349974A1 - Pseudodi- und trisaccharide und verfahren zu ihrer herstellung - Google Patents

Description

September 14, 1975 203IX - FTG-2 CG-re

PSEUDODI- UND TRISACCHARIDE

UND VERFAHREN ZU IHRER HERSTELLUNG

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von antibiotisch aktiven Pseudotrisaccbsriden, auf neue, antibiotisch aktive Pseudotrisaccharide, auf Zusammensetzungen, die diese . " enthalten,,:- und auf Zwischenprodukte. Die Pseudotrisaccharide sind aktiv gegen Mikroben, Protozoen, Helminthen und Viren.

Ein Teil der Erfindung bezieht sich auf ein erfinderisches Verfahren zur Herstellung von antibiotisch aktiven Pseudotrisacchariden der allgemeinen Formel

worin R₁ Wasserstoff oder Hydroxy,

R₂ Wasserstoff oder Hydroxy, ^^

R, Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrigalky!amino,

A 0 S 8 1 6 / 1 1 6 2 -2-

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2Q31X-FTG-3 CG-re

Hu Wasserstoff oder Miedrigalkyl, und Rp. Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino bedeuten,

und von deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzen und Schiffsche Base- Oxazolidinderivaten.

Der Ausdruck "Fiedrigalkyl" umfasst Alkylgruppen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, wie Methyl, Aethyl, Propyl, Isopropyl, η-Butyl, i-Butyl, sec.-Butyl oder tert.- Butyl.

Die pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze werden nach bekannten Methoden hergestellt. Geeignete Säuren zur Herstellung der Salze sind organische und anorganische Säuren, wie aliphatischen alicyclische, araliphatische, aromatische oder heterocyclische mono- oder polybasische Karbonsäuren oder Sulfonsäuren. Beispiele sind Ameisensäure, Essigsäure, Propionsäure, Diäthylessigsäure, Oxalsäure, Malonsäure, Bernsteinsäure, Pimelinsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Milchsäure, Weinsäure, Apfelsäure, Aminosäuren, Benzoesäure, Salizylsäure, Phenylpropionsäure,

Zitronensäure, Glukonsäure, Ascorbinsäure, Zimtsäure oder Halogen-Schiff sehe-Base wasserstoff säuren, wie Chlorwasserstoff säure. Die/Oxazolidinderivate der Verbindungen der Formel I können nach bekannten Methoden hergestellt werden (Brit. Patentschrift 1,314,058)

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—3—

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und stellen jene Verbindungen der Formel I dar ^ in denen ein Oxazolidinring an den Garosaminring des Pseudotrisaccharides ankondensiert ist.

Die antibiotisch aktiven Pseudotrisaccharide der allgemeinen Formel

und deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze und

Schiffsche Base-

^Oxazolidinderivate, wobei in der Formel R₂ Wasserstoff oder Hydroxy,

R, Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrigalkyl-

amino,

R₁, Wasserstoff oder Niedrigalkyl, und
R₅ Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrigalkyl-

amino bedeuten, 4098 16/1162

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203IX-PTG-5

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wobei jedoch, wenn R₂ Hydroxy, R₄, Wasserstoff oder Methyl

und R, Amino sind,Rj- monosubstituiertes Niedrigalkylamino " 3 5

bedeutet, und wobei, wenn R₂ und R, Hydroxy und R Wasserstoff oder Methyl sind,R₅ Hydroxy oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino darstellt, sind neue Verbindungen und sind aktiv gegen Helminthen, Protozoen, Mikroben und Viren.

Die neuen Verbindungen der Erfindung können in einschränkender

Weise auch definiert werden als Verbindungen der Formel Ia,

Schiffsehe Basederen pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze und /

Oxazolidinderivate, wobei in der Formel entweder R₂ Wasserstoff,

R Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino,

R^ Wasserstoff oder Niedrigalkyl, und

Rc Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino darstellen, oder

R₂ Hydroxy,

R, Hydroxy.-oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino, Rj, Wasserstoff oder Niedrigalkyl, und

Rc Hydroxy oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino bedeuten.

Eine bevorzugte Gruppe von Verbindungen der Formel Ia, deren

Schiffsche Basepharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze und£Oxazolidin-

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203IX-FTG-6

CG-re

derivate sind jene, worin in der Formel Rp und R^ Wasserstoff sind und R-X und Rp. unabhängig voneinander Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino darstellen.

Besonders bevorzugte Verbindungen der Formel Ia sind 0-2, 6-Diamino-2,3i 6-trideoxy-a-D-glucopyranosyl- (1*4)-garamin, 0-2-Amino-6-N-methylamino-2,3* 6-trideoxy-a-D-glucopyranosyl-(l-»4)-garamin, O-a-D-GLueopyranosyl- (l->4)-garamin, 3^f-Deoxy-2'-N-äthylgentamicin X_?, 3'-Deoxygentamicin Xp, 2'-N-Aethylgentamicin X„, 3'-Deoxygentamiein B und 3^t-Deoxy-6^!-N-methylgentamicin B.

Ferner ist Gentamicin C_Oe eine Verbindung mit wertvollen

d.O.

antimikrobiellen*Eigenschaften. Gentamicin C₂ ist strukturmässig dem bekanntenGentamicin Cp sehr ähnlich und unterscheidet sich von diesem stereochemisch am 6'-Kohlenstoffatom. Gentamicin C_2a ist gekennzeichnet durch die folgende Formel und der [aji:⁵ = + 29°+ 4°.

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205IX-FTG-T

CG-re

NH,

Gemäss dem erfinderischen Verfahren können verschiedene

bekannte und/oder anderwärts beschriebene Pseudotrisaeeharide mit itfertvollen antibiotischen Eigenschaften hergestellt werden. Diese umfassen Gentamicin X₃₅ Gentamicin B, und Gentamicin B₁ (Belgische Patentschrift Nr. 76 87 96, worin Gentamicin X_? als Gentamicin X bezeichnet wird), 0-2,6-Diamino-2,6-dideoxy-a-D-glucopyranosyl"(l-»4)garamin und dessen 6-C-Methyl-Derivat (im folgenden auch Antibiotikum JI-20A und JI-20B genannt, (noch nicht publiziert), Gentamicin C₁, Gentamicin C₁ , Gentamicin C_

J, xa c.

(US-Patentschrift Nr. 3*651,042)und Antibiotikum G-4l8 (Belgisches Patent Nr. 78 77 58) und Antibiotikum JI-25B.

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CG- ce

Die verwendete Nomenklatur kann erläutert werden, wie folgt.

Die Numerierung der einzelnen Kohlenstoffatome in einem Pseudotrisaccharid erfolgt, wie in Formel A gezeigt, wenn als Struktur©lement der allgemein anerkannte Name des Antibiotikums zu Grunde liegt (z.B. Gentamicin Xp, Gentamicin B). Ist jedoch Garamin [0-3~Deoxy-4-C-methyl-5-(N-methylamino)-j3-L-arabinopyran©syl-(l->6)-2-deoxy-D-streptamin 3 das Strukturelement, wird die Numerierung der einzelnen Kohlenstoffatome durchgeführt, wie in Formel B gezeigt. Formel B zeigt .die Struktur von Garamin, welches aus dem 2-Deoxy-D-streptaminring ¹¹S" und dem Garosaminring ⁵¹G⁵¹ zusammengesetzt ist.

2KNH,

5 21X^2

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-8-

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2031X-PTG-9

COr-re

Das erfinderische Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel I ist dadurch gekennzeichnet, dass man ein selektiv blockiertes G-aramin der allgemeinen Formel

NHR_1n

JL/

NHR

12

II,

worin jedes IL ₂ eine Aminoschutzgruppe ist, jedes R-,, Wasserstoff oder eine KCydroxyschutzgruppe bedeutet, und

₁ in Stelllung eine Schutzgruppe bedeuten kann, mit einem Monosaccharid der allgemeinen Formel

worin R_₂ in Stellung 3¹ zusammen mit

R₄CHX

III.

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203IX-FTG-10

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worin R₁, wie oben definiert ist, hai Halogen bedeutet und R₁I, und R₃₁- "unabhängig voneinander Wasserstoff oder -OR₁-,, X die Gruppe -OR₁₅,, —URR₁₂ oder Azido, Y die Gruppe -OR-..,., -NRR₁₂ oder Nitroso, R Wasserstoff oder Niedrigalkyl, R₁₂ eine Aminosehutzgruppe und R-, eine Hydroxy^ schutzgruppe bedeuten, kondensiert und, falls notwendig,

h ■ ' · das erhaltene Pseudotrisaccjarid einer oder zwei der

folgenden Stufen (a) bis (c) in geeigneter Reihenfolge

unterwirft:

(a) Umsetzung einer Oximinogruppe in Stellung 2^: zu der Gruppe -NHR und/oder einer Azidogruppe in Stellung 6' -NH₂, wobei R die obige Bedeutung hat;

(b) Umsetzung einer Oximinogruppe in Stellung 2' zu . Hydroxy, und

(c) Umsetzung einer Gruppe -OR-, in Stellung 6'zu einer Gruppe -NHR, wobei R die obige Bedeutung hat,

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2O?1X-BTG-11

CG- re

und dass man aus dem von der Kondensation oder von einer oder zwei der Stufen (a) bis (o) erhaltenen Pseudotrisaccharid alle vorhandenen Schutzgruppen entfernt und gegebenenfalls

ein pharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz oder Schiffsche Base-/Oxazolidinderivat herstellt.

Der Ausdruck "Aminoschutzgruppe" ist allgemein bekannt und bezieht sich auf Gruppen., die geeignet sind, eine Aminogruppe vor chemischen Umsetzungen zu schützen (zu blockieren), die aber leicht entfernbar sind, nachdem die gewünschte chemische Reaktion an anderen Stellen des Moleküls durchgeführt worden ist. Typisch für solche Gruppen sind unsubstituierte oder substituierte Aryl-, Aralkyl, Acyl-, Alkoxycarbonyl- und

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Aralkoxycarbonylgruppen. Beispiele für Amino schutzgruppe]! sind Benzyl, 4-Nitrobenzyl, Triphenylmethyl, 2,4-Dinitrophenyl.y Acetyl, Propionyl, Benzoyl, Methoxycarbonyl«, Aethoxycarbonyl, 2,2,2- Trichloräthoxycarbonyl, t-Butoxycarbonyl,2-Jodäthoxycarbonyl, Carbobenzoxy, und 4-Methoxybenzyloxycarbonyl. Besonders bevorzugt ist die Carbobenzoxygruppe und, in einigen Fällen, Azetyl oder 2,4-Dinitrophenyl.

Der Ausdruck "Hydroxyschutzgruppe" ist- ebenfalls allgemein bekannt und bezieht sich auf Gruppen, die geeignet sind, eine Hydroxygruppe vor chemischen Umsetzungen zu schützen, die aber leicht entfernbar sind, nachdem die gewünschte chemische Reaktion an anderen Stellen des Moleküls durchgeführt worden ist. Typisch für solche Gruppen sind unsubstituierte oder substituierte Aryl-, Aralkyl-, Acyl-, Alkoxycarbonyl- und Aralkoxycarbonylgruppen. Beispiele für Hydroxyschutzgruppen sind Benzyl, p-Mitrobenzoyl, Tosyl und Azetyl, wobei die Azetylgruppe besonders bevorzugt ist.

Die Monosaccharide der allgemeinen Formel III sind entweder bekannte Verbindungen oder können nach bekannten Methoden hergestellt werden» Jene Verbindungen der Formel III, worin Y eine Nitrosogruppe darstellt, können durch Reaktion eines Nitrosylhalogenides mit dem entsprechenden Monosaccharid, das eine

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1,2-Doppe!bindung enthält, erhalten werden. Das folgende Reaktionsschema illustriert die Herstellung dieser Verbindungen

R₄CHOH

R₄CHOTs

TsCl

R₄CHOTs

falls notwendig

Einführen von R

13

N=O

N=O

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-13-

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Darin hat R,, Ep, R^, R₁^₅, R,^ rind R,^. die obigen Bedeutungen und Is ist Tosyl, welches eine besonders gut geeignete Hydroxysehutzgruppe in Stellung 6 ist.

Der Ausdruck "Nitroso" als 2-Substituent eines Monosaccharides der -Formel III ist zu verstehen als eine Gruppe A (siehe unten), die in eine Gruppe B dissoziieren kann. Das Monosaccharid ist daher als Dimeres und Monomeres im Reaktionsgemisch vorhanden.

MS

N⁺-O" _M„

η , i. _o MS ο

γ N=o

MS

wobei MS Monosaccharid bedeutet.

Bevorzugte Ausgangsverbindungen der Formel III sind jene Verbindungen, worin entweder X die Gruppe -OR,, oder Azido, Y die Nitrosogruppe und hai Chlor bedeuten oder X und Y unabhängig voneinander -OR,, oder -NRR₁₂ und hai Chlor oder Brom darstellen. Ist X und Y unabhängig voneinander -OR,,, oder -NRR₁₀, ist es weiterhin bevorzugt, dass X-NRR₁₂ und Y-OR₁-^ oder X -OR₁, und Y-OR₁, oder-NRR₁₂ ist. Hierbei haben R, R₁₂ und R„

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Jf

die obigen Bedeutungen»

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ca-pe

Bevorzugte Ausgangsverbindungen der Formel II sind solche, worin alle R,, Hydroxyschutzgruppen oder alle Wasserstoff bedeuten, oder solche* worin R₁₁ in den Stellungen 2^f und V oder in den Stellungen 2' und 5 oder in Stellung 2^! Hydroxyschutzgruppen und die übrigen R₁₁ Wasserstoff bedeuten.

Wenn R₁₂ in Stellung 5^S zusammen mit R₁₁ in Stellung 4¹ eine Schutzgruppe darstellt, handelt es sich hierbei um eine Gruppe, die an das Sauerstoffatom in Stellung 4' und an das Stickstoffatom in Stellung 3^f gebunden ist. Die Carbonylgruppe ist ein Beispiel einer solchen Schutzgruppe.

Wird eine Verbindung der Formel III, worin X und Y unabhängig voneinander -OR₁₅ oder -NRR₁ bedeuten, mit einem selektiv bloekerten Garamin der Formel II kondensiert, erfolgt die Reaktion meistens in Gegenwart eines geeigneten Katalysators, wie Quecksilbercyanid, Quecksilberbromid, Silberkarbonat, Silberoxyd, Silberperchlorat oder Silbertosylat, und in einem inerten organischen Lösungsmittel, wie Dioxan, Tetrahydrofuran, Acetonitril, Nitromethan, Toluol oder Benzol.

Wird eine Verbindung der Formel III, die eine Nitrosogruppe in Stellung 2 aufweist, mit einer Verbindung der Formel II

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kondensiert, erfolgt die Reaktion überlicherweise in einem geeigneten, inerten organischen Lösungsmittel, wie Dimethylformamid oder Methylenchlorid.

Die Entfernung aller Schutzgruppen, die in einem Pseudotrisaccharid nach erfolgter Kondensation vorhanden sind, kann nach üblichen Methoden, wie Hydrolyse, vorzugsweise in einem alkalischen Medium, Hydrierung _a oder mittels Hydrazin, erfolgen. Alkalische Hydrolyse wird bevorzugt in einem Reaktionsmedium durchgeführt, das Matriumhydroxyd, Natrium in Ammoniak oder Ammoniumhydroxyd in Methanol enthält. In manchen Fällen kann c?s erwünscht sein, die Schutzgruppen vom Pseudotrisaccharid teilweise zu entfernen, z.B. mit Ammoniumhydroxyd, und dann die übrigen Schutzgruppen in einem stärker alkalischen Medium, wie Natriumhydroxyd,abzuspalten. Beispiele für Verbindungen, die nach der Entfernung der Schutzgruppen werbrolle Antibiotika ergeben, sind 0-[3,4,6-Tri-0-azetyl-2-deoxy-2-^äthylamino-a-D-glucopyranosyl (1—? 4) j -1, 3,3' -tri-^arbobenzoxygaramin, 0-13* 4, ö-Oiri-O-azetyl-a-deoxy-a-N-äthylamino-a-D-glucopyranosyl-(l-»4) 3 -5» 2 % 4' -tri-O-azetyl-1,3*3' - tr i-N-e arbobenzoxygar amin, 0- [ 4,6-Di-0-a2etyl-2,3-dideoxy-2-amino-a-D-glucopyranosyl- (X-* 4) ] -5,2¹,

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203IX-PTG-17 OG -re

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^'-tri-O-a-zetyl-l^^'-tri-N-carbobenzoxygaramin' , O-[4,6-Di-O-aEetyl-S^-dideoxy-S-N-athylamino-a-D-glucopyranosyl-{l-^4)]-5,2'_i4'-tri-0-azetyl-l,3_i3'-tri-N-carbobenzoxygaramin ,0-[3,4,ö-Tri-O-azetyl-a-D-glucopyranosyl (l-?4)J-5,2', k ^! -tri-O-azetyl-1, 3, 3' -tri-N-carbobenzoxygaramin und 0- [2-0-Benzyl-3, ^> β-tri-O-p-nitrobenzoyl-a-D-glucopyranosyl- (1—-$k) J-5,2', 4' -tri-O~azetyl-l, J>,3' -tri-N-earbobenzoxygaramin .

Bilden die Aminoschutzgruppen zusammen mit den zu schützenden Aminogruppen im 2-Deoxy-D-Streptaminring Karbamate und wird die Entfernung der Schutzgruppen in stark alkalischem Medium durchgeführt (z.B. Natriumhydroxyd in Dioxan /Wasser), entsteht zum Teil das entsprechende Harnstoffderivat, also Verbindungen, in denen die beiden Aminogruppen in Stellung 1 und 3 durch eine Carbonylgruppe geschützt sind. Die Carbonylgruppe kann

in einem sehr stark alkalischen Medium und vorzugsweise mit Hydrazin entfernt werden.

In einer bevorzugten Ausführungsform wird eine Nitroso-substituierte Verbindung der Formel III, worin X-OR,, oder die Azidogruppe darstellt, mit einem selektiv blockierten Garamin kondensiert, wobei eineOximinogruppe in Stellung 2' des Pseudotrisaccharides entsteht. In diesem Falle müssen nach der Kondensation die Reaktionen der Stufe (a) oder der Stufe (b) oder der Stufen (a) und (c) oder (b)

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Af

und (c) oder (b) und (a) in der angegebenen Reihenfolge durchgeführt werden. ■

Die Oximinogruppe kann in eine Amino- oder monosubstituierte Niedrigalkylaminogruppe oder in eine Hydroxygruppe übergeführt werden. Die Ueberführung in die Gruppe -NHR, wobei R die obige Bedeutung hat, wird durch Blockieren der Oximinogruppe, vorzugsweise mit Azetyl, und darauffolgende Reduktion, vorzugsweise mit Diboran, erreicht. Soll R im Endprodukt Niedrigalkyl sein, wird die bei der Reduktion entstehende Aminogruppe mit Niedrigalkanoyl aeyliert und das erhaltene Amid reduziert. In einer bevorzugten Weise gelangt man zum Amid dureh die Wahl eines Pseudotrisaccharides, das eine oder mehrere Niedrigalkanoyl-Hydroxyschutzgruppen aufweist, welche durch Migration zu der bei 3er Reduktion gebildeten Aminogruppe gelangen. Das Amid wird zu der gewünschten, die monosubstituierte Niedrigalkylaminogruppe enthaltenden Verbindung mit demselben Reduktionsmittel übergeführt, welches zur Reduktion der blockierten Oximinogruppe Verwendung findet. Die Zahl der Kohlenstoffatome in der Nledrigalkanoyl-Hydroxyschutzgruppe (z»B. Azetyl) entspricht der Zahl der Kohlenstoffatome in der monosubstituierten Niedrigalkylaminogruppe Cz'B. N-Aethylamino).

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Ist ein Endprodukt erwünscht, welches in Stellung 6' eine Aminogruppe und in Stellung 2¹ eine Amino- oder monosubstituierte Niedrigalkylaminogruppe aufweist, kann ein Oximino-substituiertes Zwischenprodukt mit einer 6'-Azidogruppe verwendet werden. Dieses Zwischenprodukt kann durch Verwendung eines geeignet substituierten Monosaccharides der ..Formel III erhalten werden. Es wird dann nach der Reduktion der Oximino-Funktion die Azidogruppe in die Aminogruppe mittels Hydrierung in Gegenwart eines Katalysators übergeführt.

Ist ein Endprodukt mit einer 2^l-Hydroxygruppe erwünscht, kann die Oximinogruppe in eine Ketogruppe und diese in eine Hydroxygruppe übergeführt werden. Die Ueberführung in die Ketogruppe

Salpetrigsaure, erfolgt vorzugsweise mit Lävulinsäurei/Titantrichlorid oder

Thallium (ill) nitrat und die Reduktion der Ketogruppe wird vorzugsweise mit einem Alkaliborhydrid, z.B. Natriumborhydrid,

durchgeführt. - .

Die Umwandlung der Gruppe -OR₁-* in eine Gruppe -NHR, wobei R und R₁-, die obigen Bedeutungen haben, (Stufe (c) des erfinderischen Verfahrens) erfolgt durch Reaktion

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eines Pseudotrisaccharides mit einer 6'-0R..- Gruppe mit RNHp oder "RNHNH₂-, wobei R die obige Bedeutung hat. Wird RNHNHp verwendet, muss das Reaktionsprodukt katalytisch hydriert werden, um die -NH^Gruppe des Hydrazinderivates zu entfernen, pie bevorzugte Hydroxyschutzgruppe R₁- ist Tosyl. Soll die Gruppe -OR₁-, in -NHp übergeführt werden (R = Wasserstoff) kann auch so verfahren werden, dass die Gruppe -OR₁^ durch Reaktion mit einem Azid durch eine Azidogruppe ersetzt wird, welche danach, vorzugsweise durch Hydrierung, zu der gewünschten Aminogruppe übergeführt wird. Das Reaktionsschema auf der folgenden Seite illustriert einige der Möglichkeiten, wie Gruppen in einem Pseudotrisaceharid, das aus der Reaktion einer Verbindung der Formel II mit einer Verbindung der Formel ΪΙΙ erhalten wird (II + III), in andere Gruppen übergeführt werden können. ¹¹PTS" in dem Reaktionsschema bedeutet Pseutrisaccharid und es werden nur die Substituenten in den Stellungen 2¹ und 6' angegeben. Die Substituenten in den Stellungen 2¹ und 6^f in den Endprodukten im Reaktionsschema entsprechen den Substituenten R-, und R_-

J? 5

in den Verbindungen der Formel I.

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h09816/1162

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23A9974

OH PTS NHR

OR,,

PTS

NRR

NHR

I
PTS

NHR

PTS

NHR

to

II + III

^0R

13 6¹

PTS 2¹

NOH

PTS

ΪΟΗ

II + III

OH

PTS OH

OR,

PTS

OH

N.

PTS

OH

NHR

PTS

OH

II + III

40 9 8 16/1162

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September l4, 1973

2031X

CC-re

In dem Reaktionsschema haben R und R,., die obigen Bedeutungen und R₁₀ ist Wasserstoff oder eine Aminosehutzgruppe. ■

Die Erfindung bezieht sich auch auf ein Verfahren zur Herstellung von antibiotisch aktiven Pseudotrisacchariden der allgemeinen Formel I, die wie oben definiert ist, und worin R,, R₂, R_ und R₁. die oben gegebenen Bedeutungen haben und R,- Amino oder monosubstituiertes -_ Niedrigalkylamino darstellt und von deren pharmazeutisch

Schiffsche Baseannehmbaren Säureadditionssalzen und toxazolidinderivaten, welches dadurch gekennzeichnet ist,dass man die Gruppe -O in Stellung 6' einer Verbindung der allgemeinen Formel

R₄CHOR₁₃

NHR,

NHR

IV

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September 14, 1973

205IX-FTG-23 CG-re

worin R und R₁. wie oben definiert sind, Rg und R₇ unabhängig voneinander Wasserstoff oder -OR-,^ sind, R'g die Gruppe -OR₁₁ oder -NRR₁₀ darstellt, R₁₁ Wasserstoff oder eine Hydroxyschutzgruppe, R₁₂ eine Amino schutzgruppe und R₁-, eine Hydroxyschutzgruppe bedeuten und worin R₁₂ in Stellung 3" zusammen mit R₁₁ in Stellung 4" eine Schutzgruppe bedeuten kann, in die Gruppe -NHR überführt, wobei R die oben gegebene Bedeutung hat, und dass, man aus der erhaltenen Verbindung alle vorhandenen Schutzgruppen entfernt und gegebenenfalls ein pharmazeutisch annehmbares

Schiffsche Base-Säureadditionssalz oder£Oxazolidinderivat herstellt.

Dieses Verfahren stellt eine Möglichkeit dar, 6'-Amino- oder β'-monosubstituierte Nledrigalkylamino-Pseudotrisaccharide aus den entsprechenden 6*-Hydroxyverbindungen zu erhalten. Man kann beispielsweise gemäss diesem Verfahren 3'-Deoxygentamicin Xp in 3' -Deoxy-6' -N-methyl-Antibiotikum JI-20A oder in 3^f-Deoxy-Antibiotikum JI-20A, Gentamicin X₂

oder in 6'-N-Methyl-Antibiotikum JI-20A in Antibiotikum JI-20A/_und a-D-Glucopyranosyl—(l-> 4)-garamln

oder o'-N-Methyl-Gentamicin B in Gentamicin B/überführen. In den Verbindungen der Formel IV ist R₁-, vorzugsweise Tosyl und die Umsetzung der Gruppe -OR₁₅ in die Gruppe-NHR wird entweder mittels RNH₂ oder RNHNH₂ (mit anschliessender katalytischer Hydrierung) oder durch Reaktion mit einem Azid und darauffolgender Reduktion

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203IX-PTG-24

CG-re

234997Λ

der Azidogruppe durchgeführt.

Die Verbindungen der Formel IV können hergestellt wenden, indem man die Aminogruppen und zumindest die Hydroxygruppe in Stellung 6' eines entsprechend substituierten Pseudotrisaceharides mit freien Amino- und Hydroxygruppen schützt. Es wird bevorzugt, zunächst alle Aminogruppen eines Pseudotrisaccharides mit,freien Amino- und Hydroxygruppen zu schützen, danach die Hydroxyschutzgruppe in Stellung 6^!, vorzugsweise Tosyl, einzuführen, und dann gegebenenfalls andere Hydroxygruppen zu schützen. Jene Verbindungen der Formel IV, worin alle Aminogruppen und die 6*-Hydroxygruppe Schutzgruppen aufweisen, sind bevorzugt für die Umsetzung mit RNH_p oder RlIHNH₀, während, wenn man über das Azid zur gewünschten Verbindung gelangt, die bevorzugten Ausgangsverbindungen der Formel IV jene sind, in denen entweder alle Amino- und Hydroxygruppen geschützt sind oder alle mit Ausnahme der 5-Hydroxygruppe. Die Tosylgruppe in Stellung 6^! kann auch eingeführt werden, indem man in einem Pseudotrisaecharid, in dem alle Aminogruppen geschützt sind, die 6 ^!-Hydroxygruppe durch Trityl blockiert, danach alle anderen Hydroxygruppen, ausgenommen jenes in Stellung 5, mit Azetyl schützt, und die Tritylgruppe durch Tosyl ersetzt.

k 0 9 8 1 6 / T 1 6 2 -24-

September 14. .1.973 205IX-FTG-25

CC- -re

Die Erfindung- bezieht sich auch auf ein Verfahren zur Herstellung von antibiotisch aktiven Pseudotrisacchariden der allgemeinen Formel Ia, worin Rp, R_,, E₁. und R,_ die obigen Bedeutungen haben, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass man aus einer Verbindung der allgemeinen Formel

CHR₄R₉

NHR,

worin Rj, wie oben definiert ist, R₇ Wasserstoff oder -OR,,, Ro und Rg unabhängig voneinander -OR,·, oder -NRR _Q bedeuten, wobei R für Wasserstoff oder Niedrigalkyl steht, R,_Q Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe und R,, Wasserstoff oder eine Hydroxyschutzgruppe sind, und worin R,_Q in Stellung 3" zusammen mit R,; in Stellung 4" oder beide R,_Q in Stellung 1 und J5 zusammen eine Schutzgruppe bedeuten können, und worin zumindest eine Schutzgruppe vorhanden ist, wobei Jedoch, wenn

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September 25, 197? - 2β

R₇ die Gruppe -OR₁₁* R^, Wasserstoff oder Methyl und Rg sind, Rq die Gruppe -NRR,_Q bedeutet, worin R Niedrigalkyl· ist, und wobei, wenn R₇ und Rg -OR₁₁ ^und % Wasserstoff oder Methyl sind, R_Q die' Gruppe - OR₁₁ oder -NRR₁₀ bedeutet, worin R Niedrigalkyl istj

alle vorhandenen Schutzgruppen entfernt und gegebenenfalls ein

Schiffsche Basepharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz oder ein/Oxazoli-

dinderivat herstellt. .

Bevorzugte Ausgangsverbindungen der Formel V sind jene, worin Ro die Gruppe -OR₁₁ und R_Q die Gruppe -OR₁₁ oder -NHR bedeuten, oder jene, worin Rg die Gruppe -NRRL₀ und Rq die Gruppe -OR-,-, oder -NHR bedeuten» Besonders bevorzugte Ausgangsverbindungen und die bekannten Methoden, gemäss derer die Schutzgruppen entfernt werden, werden weiter oben beschrieben.

Die Verbindungen der Formel V, sowie die Pseudodisaccharide der allgemeinen Formel X

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l-re

KHR,

worin R, _ Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe und. R,, Wasserstoff oder eine Hydroxyschutzgruppe bedeuten und wobei R₁₀ in Stellung 5¹ zusammen mit R,, in Stellung 4* eine Schutzgruppe bedeuten kann, sind ebenfalls ein Teilaspekt der Erfindung.

Die Verbindungen der Formel X sind Zwischenprodukte für die Herstellung von Verbindungen der Formeln I und Ia. Weiters, ist Garamin aktiv als antibakterielles Mittel. Garamin ist jene Verbindung der Formel X, worin alle R,_Q und R,, Wasserstoff bedeuten.

Eine Methode zur Herstellung der Verbindungen der Formel X ist dadurch gekennzeichnet,dass man eine Verbindung der allgemeinen Formel XI

409816/r162

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September l4, 1973

Oü-re

234997^

NHR,

NHR

12

XI '

Worin R Wasserstoff oder Niedrigalkyl, R,- Wasserstoff oder eine Hydroxyschutzgruppe und R _ eine Aminoschutzgruppe bedeuten; selektiv spaltet und gegebenenfalls eine oder mehrere Schutzgruppen entfernt und/oder in das Molekül einführt.

Beispiele für Verbindungen der Formel XI sind N-geschütztes Sisomicin, N-geschütztes Verdamicin I und N-geschütztes Antibiotikum G-52, worin die Hydroxygruppen geschützt sein können. Sisomicin ist 0-2,6-Diamino-2.. J>, 4, 6-tetradeoxy-a-D-glyeerohex-4-enopyranosyl-(1-^4 )-0-[3-deoxy-4-C-methy 1-3- (methylamino) -jS-L-arabinopyranosyl-(1^6)]-2-deoxy-D-streptamin , Verdamicin I ist das 6-C-methyl-Analoge und Antibiotikum G-52 ist das 6-N-Methylamino-Analoge von Sisomicin. Diese Antibiotika können durch mikrobiologische Fermentation hergestellt werden. Die bevorzugte Ver-

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, 2031X-FTG- 29

vbindung der Formel XI ist das Sisomicin-Derivat, weil bei dem Fermentationsverfahren keine anderen Verbindungen in erheblichen' Mengen hergestellt werden, Das mikrobiologische Fermentationsverfahren von Antibiotikum G-52 ist noch unveröffentlicht.

Die Verbindungen der Formel XI werden aus den entsprechenden Verbindungen mit freien Amino und Hydroxygruppen erhalten, indem man nach Standardmethoden die Amino- und Hydroxygruppen blockiert. Geeignete Schutzgruppen sind weiter oben beschrieben und die Gruppen werden durch Reaktion mit reaktiven Derivaten von Verbindungen, die die Schutzgruppen enthalten, in einem inerten organischen Lösungsmittel eingeführt. Die Verbindungen der Formel XI werden dann, durch Hydrolyse, vorzugsweise in saurem Milieu, unter oxidativen Bedingungen oder durch Bestrahlung selektiv gespalten. Die selektive Spaltung der Pseudotrisaccharide der Formel XI zu Verbindungen der Formel X erfolgt unerwartet und die Leichtigkeit, mit der die Spaltung erfolgt, wiederspricht der allgemeinen Lehre.

Wird eine Verbindung der Formel XI hydrolytisch gespalten, führt man die Reaktion ein einem geeigneten, inerten Lösungsmittel durch, wie Tetrahydrofuran, Dioxin, Methanol oder Chloroform. Der pH der Lösung entspricht jenem der verwendeten Standardreagentien,

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»29-

September 14, 19^Γ

20^1X CG-re

Sä

wie p - Toluolsulphonsaure, Schwefelsäure, Chlorwasserstoff-; säure oder saure Ionenaustauscherharze (beispielsweise Amberlit IR 120, H). Wird-die Spaltung unter oxidativen Bedingungen

von durchgeführt, kann _xdiese in Anwesenheit^Unterbromigersäure

und Bariumkarbonat oder in Anwesenheit von Persäuren, z.B. m-Chlorperbenzoesäure, erfolgen.

Ist es erwünscht, aus dem Verfahren Garamin zu erhalten, muss das bei der Spaltung entstandene blockierte Garamin von den Schutzgruppen befreit werden. Die Standardmethoden zur Entfernung von »Schutzgruppen sind weiter oben beschrieben und umfassen katalytIsche Hydrierung und alkalische Hydrolyse. Das blockierte Garamin, das bei der Spaltung entsteht, kann auch als solches zur weiteren Umsetzung mit einer Verbindung der Formel III verwendet werden. Um jedoch besonders geeignete Ausgangsverbindungen der Formel II·zu erhalten, mag es von Vorteil sein, eine oder mehrere Schutzgruppe zu entfernen und/oder in das Molekül einzuführen, wie weiter unten beschrieben.

Die Erfindung bezieht sich' daher auch auf ein Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel II, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass man eine oder mehrere entsprechende Schutzgruppen in eine Verbindung der allgemeinen Formel

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September· 2A, 197.5 203.1 X-FTG-Il CÜ-re

HHR,

NHR

10

XII

worin R₁₀ Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe, R,, Wasserstoff oder eine Hydroxyschutzgruppe und R₁₁, Wasserstoff oder eine Hydroxysehutzgruppej.die leichter als alle anderen Schutzgruppen entfernbar ist, bedeuten, und worin zumindest eines von R₁₀* R-,-, und R,^ Wasserstoff istj einführt und gegebenenfalls eine Hydroxyschut zgruppe R,j, eliminiert.

In einer bevorzugten Äusführungsform dieses Verfahrens wird Garamin als Verbindung der Formel XII verwendet, und die Aminogruppen werden nach Standardmethoden geschützt. Eine weitere bevorzugte Äusführungsform umfasst die Eliminierung einer Hydroxyschutzgruppe, dargestellt durch R-,jti> aus einer Verbindung, worin alle R Atninoschutzgruppen, R in den Stellungen 5, 2¹ undΛ*, oder in den Stellungen 5 und 2¹

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September 14,1973 CG-re

oder in den Stellungen 2' und Λ' oder in Stellung 2^! Hydroxyschutzgruppen, wobei R₁₁ in Stellung 4' zusammen mit R_]Q in Stellung 3¹ eine Schutzgruppe bedeuten kann, und die übrigen R" in den Stellungen 5.» 2¹ und 4' Wasserstoff bedeuten.

Die Hydroxyschutzgruppe, die leichter entfernbar ist als alle anderen Schutzgruppen muss unter den Reaktionsbedingungen stabil sein, unter denen die anderen Hydroxyschutzgruppen in das Molekül eingeführt werden_?und muss selektiv entfernbar sein ohne dass dabei andere Schutzgruppen verändert werden.

Beispiele für diese Art von Schutzgruppen sind 2,2,2rTrichloräthoxycarbonyl oder Alkyliden, vorzugsweise Propyliden, in den Stellungen 4 und 5·

Die Reaktionsfolgen auf den nächsten drei Seiten illustrieren •das Verfahren und auch die Herstellung jener Ausgangsverbindungen, von denen eine Hydroxschutzgruppe, dargestellt durch R-jh* eliminiert wird.

In den Reaktionsfolgen bedeuten R,p eine Aminoschützgruppej, ■^Rr3 ^eine Hydroxyschutzgruppe, ^'iji eine Hydroxy3chutzgruppe_P die leichter entfernbar ist als alle anderen Schutzgruppe^ und R-.J- ist eine Alkylgruppe«.

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CG-re

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-33-

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409816/1 162

September

h 1973

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P 23 49 974.3 Scherico Ltd. 27.11.1973

Die Erfindung umfasst auch ein Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel I und von deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzen und Schiffsche Base- Oxazolidinderivaten, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass man eine Verbindung der allgemeinen Formel XI selektiv spaltet, gegebenenfalls eine oder mehrere Schutzgruppen entfernt und/oder in das Molekül einführt und dass man eine so erhaltene Verbindung der Formel II mit einer Verbindung der Formel III kondensiert und, falls notwendig, das erhaltene Pseudotrisacchrid einer oder zwei der Stufen (a) bis (c) in geeigneter Reihenfolge unterwirft, und dass man aus dem von der Kondensation oder von einer oder zwei der Stufen (a) bis (c)"erhaltenen Pseudotrxsaccharid alle vorhandenen Schutzgruppen entfernt und gegebenenfalls ein pharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz oder Schiffsche Base- Oxazolidinderivat herstellt.

-35A-

409816/1 162

September 14, 1973

Die Ausdrücke "Blockieren" einer Amino- oder Hydroxygruppe oder "Einführen von Hydroxy- oder Aminoschutzgruppen" werden verwendet, um eine Kondensationsreaktion zwischen einem reaktiven Derivat einer Verbindung, die die Schutzgruppe enthält, und einer Verbindung, die eine oder mehrere freie Amino- und/oder Hydroxygruppen aufweist, zu beschreiben. Beispiele für reaktive Derivate sind Anhydride von Säuren oder Verbindungen Pg-Z, worin Pg die Schutzgruppe darstellt und Z eine Gruppe ist, die unter den Reaktionsbedingungen entfernbar ist. Spezifische Beispiele sind Carbobenzoxychlorid, 2,2,2-Trichloräthoxycarbonylehlorid, Essigsäureanhydrid, Tosylchlorid, Tritylchlorid, Benzylbromid,Thiolessigsäure, 2,4-Dinitrofluorbenzol und 2,2-Dimethoxypropan. Die Kondensationsreaktion kann in einem inerten organischen Lösungsmittel und, falls erwünscht,, in Gegenwart eines Säureakzeptors erfolgen. Beide Punktionen v/erden beispielsweise von Pyridin erfüllt. Ist es erforderlich, die Carbonylgruppe als Schutzgruppe für die Stellungen 3 und 4 des Garosaminringes

■ V

(3* und 4' in Garamin) einzuführen, kann eine Verbindung mit einer freien Hydroxygruppe in Stellung 4 und mit einer Aminoschutzgruppe in Stellung 3* die zusammen mit der zu schützenden Aminogruppe ein Karbamat bildet, alkalischen Bedingungen unterworfen werden. Geeignete alkalische Bedingungen werden erhalten durch Ammoniumhydroxyd, Bariumoxyd, Bariumhydroxyd und Natriumhydrid.

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September 14, 1973 20^X-FTG-El

Die folgenden Beispiele illustrieren die Erfindung. (Das SymbolT kennzeichnet ein Gemisch von Rotameren bei Umgebungstemperatur) .'

Beispiel 1

'-Tri-N-carbobenzoxygaramin (20 g.), und 3*^,6- -Tri-O-azetyl^-deoxy^-nitroso-a-D-glucopyranosylchlorid (9.34 g.) werden in wasserfreiem wiederholt destilliertem Dimethylformamid (200 ml) gelöst und die Lösung wird bei 25°C 88 Stunden stehen gelassen. Die Lösung wird im Vakuum eingeengt und mit Chloroform und Wasser extrahiert. Der Chloroformextrakt wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und zur Trockene verdampft. Das erhaltene Produkt wird auf einer Silikagel-Säule (l60x5 cm) mit 3#- igem Methanol in Chloroform als Eluent chromatographiert und es wird 0-[3,4,6-Tri-0-azetyl-2-deoxy-2-oximino-a-D-glucopyranosyl-(l-> 4)3-1,3,3'-tri-N-carbobenzoxy^gararain (8.2 g.) als farbloser amorpher Festkörper erhalten, m.p. 17I-I73⁰ (Gefunden: C, 56.97; H, 5.91; N, 5.65. ^₉H₆₀N₄O₂₀ be^⁶ °

nötigt: C, 57.41; H, 5.9O; N, 5.W), [a]^⁶ + 86.7° (CH₃OH) V max (CHCl,) 3380, 1750, 1720, 1230, 1030, 69^ cm."¹, (CDCl^jt 1.01 (3H, breites S, 4"-CH ), 1.95 (9H, breites

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2011X-FTG-E2 Cü/mk

S, OAz), 3.02 OH, breites S, 3"-NCH₃), 5.02 (βΗ, breites S, C₆H₅), und 7.24 ppm. (15H, breites S, -

0- [3, 4,6-Tri-0-azet3rl-2-deoxy-2-oximino-a-D-glucopyranosyl-(l-*4) J-l,3,3'-tri-N-earbobenzoxy-gararain (1 g.), und Essigsäureanhydrid (1.5 nil) werden in wasserfreiem Pyridin (4 ml) gelöst und die Lösung wird bei 25⁰C 16 Stunden belassen. Das Reaktionsgemisch wird auf Eiswasser gegossen und das feste 0-[2,3,4,6-Tetra-0-azetyl-2-deoxy-2-oximino-a-D~ glucopyranosyl-(l—>4) J-1_S3*3' -tri-N-carbobenzoxy-garamin wird abfiltriert und getrocknet. Das Azetat wird in wasserfreiem Tetrahydrofuran (25 ml) gelöst und auf 0° gekühlt. Eine 1 m Lösung von Diboran in Tetrahydrofuran (18,7 ml), wird zugegeben und die Mischung l6 Stunden bei 25 belassen. Das überschüssige Reagens wird durch vorsichtiges Zufügen von Wasser zerstört und nach vollendeter Gasentwicklung wird eine gesättigte Lösung von Ammoniak in Methanol (100 ml) zugegeben und die Lösung bei 25° bis zur vollständigen Entfernung der Azetatgruppen belassen. Die Lösung wird im Vakuum eingedampft, der Rückstand in Eisessig aufgenommen und in Anwesenheit von 30$ Palladium auf Kohlenstoff bei 25° und 3*7 at l8 Stunden hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und das Piltrat nach Einengung mit Hydrazinhydrat I7 Stunden auf Rückfluss erhitzt. Der Einengung im.Vakuum 4098 16/1162

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September l4, 1973

2031X

CG/mic

folgt Chromatographie des Rückstandes auf einer Silikagelsäule, wobei die untere Phase eines Chloroform-Methanol-Ammoniumhydroxyd-Gemisches (1:1:1) als Eluent verwendet wird, und man erhält.Gentamicin X₂ (84 mg) als farblosen amorphen Peststoff nach der Aufarbeitung mit Amberlit IR 401S-Harz und Gefriertrocknung (Gefunden; C, 44.98; H, 7.77J N, 11.00. C₁₉H₃₈N₁^O₁₀ .HgO benötigt: C, 45.60; H, .8.0Oj N, 11.20$), m/e 483 (M⁺ + l), [α\ψ + 158.8° (HgO)/V max (KCl) 335O₅

1040 cm."¹ $ (D₂O) 1.19 (3H,-S, 4"-CH₃), 2.49 (3H, S, 3"-NCH ) 5.Ο8 (IH, D, J=4Hz, H₁,,), und 5.22 ppm. (IH, D, J=4Hz, H₁

- 12,500 (TACu) und 2'-N-Aethy!gentamicin X_g, welches ein weiteres Mal auf einer Silikagelsäule (110x2*5 cm) mit demselben Eluenten chromatographiert wird und das als farbloser Peststoff (5 mg) nach dem Behandeln mit Amberlit IR401S -Harz und Gefriertrocknung anfälltm/e 510 (Mt), S(D₃O) 1.02 (3H, T, J=7Hz, CH₃CH₂NH-), 1.16 (3H, S, 4"-CH₃), 2.46 (3H, S, 3"-NCH₃), 2.53 (IH, D, J=IO.5Hz, H₃₁,), 2.7I (2H, Q, J=7Hz, CH^CH₀NH-), 3·26 (IH, D, J=12Hz, H_c„ >, 4.07 (IH, D, J=12Hz, H₅M₆), 5.03 (IH, D, J=4Hz, H₁,,) und 5.15 ppm. (IH, D, J=3.5Hz, H₁,), [θ}₂₉₀ -6,010 (TACu).

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September 14, I973

2031X-3TG-E4"

CG/iüc

Beispiel 2

2^l-0-Azetyl-l,3,3'-tri-N-carbobenzoxygaramin (0.91 g.), und 3, 4, o-Tri-O-azetyl^-deoxy^-nitroso-a-D-glucopyranosylchlorid (0.6I g.) werden in wasserfreiem, wiederholt destilliertem Dimethylformamid (4 ml) gelöst und die Lösung wird bei 25 115 Stunden belassen. Die Lösung wird im Vakuum eingeengt und mit Chloroform und Wasser extrahiert. Der Chloroformextrakt wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft. Das erhaltene Produkt wird auf einer Silikagel-Säule (60x2,5 cm) mit j5# Methanol in Chloroform als Eluent chromatographiert und man erhält 0-[3,4,6-Tri-0-azetyl-2-deoxy-2-oximino-a-D-glucopyranosyl-(l-> 4) J-2¹-0-azetyl-l,3,3'-tri-N-carbobenzoxy-garamin (0.53 g) als farblosen, amorphen Pestkörper, m.p. 116-127°, (Gefunden:

C, 56.71,· H, 5.96; N, 5.31. ^c ₅₁ ^H62^N4°2l ^benötle^{fci c}> 57.39; H, 5.82; N, 5.26J0, fa]p⁶ + 92.6° (C₃H OH), V max (CHCl,) 333O, 1740, I7OO, 1210, 1045, 1030, 696 cm."¹, 8 (CDCl ) t I.03 (3H, breites S, 4"-CH ), 1.91-2.17 (12H, breites S, OAZ), 2.9O (3H, breites S, 3"-NCH₅), und 7.21-7.29 ppm. (15H, breites S, -CHgCgH ).

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September 14, 1973

2031X-FTG-5

CG/mk

Das Oxim wird, wie in Beispiel 1 beschrieben, in das Azetat übergeführt, mit Diboran reduziert und chromatographiert, und man erhält Gentamicin X₂ als farblosen, amorphen Festkörper (60 mg) und 2'-N-Aethylgentamicin X_g»

Beispiel 3

(I), 5,2', 4' -Tri-O-azetyl-1,3,3' -tri-N-carbobenzoxy garamin (9.17 g.), 3,4,6-Tri-0-azetyl-2-deoxy-2-nitrosoa-D-glucopyranosylchlorid (7*33 g.) und N,N,2,6-tetramethylanilin (1.5 g) werden in wasserfreiem, wiederholt destilliertem Dimethylformamid (300 mi) gelöst, und die Lösung wird bei 25 95 Stunden belassen. Das Reaktionsgemisch wird sodann auf Eiswasser (5 i) gegossen, und der Niederschlag wird filtriert, getrocknet und auf einer Silikagel-Säule (l60x5cm) mit 1% Methanol in Chloroform als Eluent chromatographiert. Man erhält 0-[3,4,6-Tri-O-azetyl^-deoxy^-oximino-a-glucopyranosyl-(I-* 4) ]-5,2', 4' tri-0-azetyl-l,3,3'-tri-N-carbobenzoxy-garamin (5.0 g.) als farblosen amorphenFeststoff, m.p. 134-139°, (Gefunden: C, 57.61; H, 5.88; N, 4.79. ^G ₅^eeS°23 ^benötlg^{t: 0}^ 57.38; H. 5.78; N, 4.87#), [cc J ^⁶ + 90.0° (CH OH), V max

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September 14, 1973

205IX-FTC-E6 CG/ηώ:

(CHCl₃) 3550, 17^0, 1710, 1220, 1050, 695 cm."¹, δ (CDCl₃) ti.29, 1.39 (3H, breites S, 4"-CH₃), 1.99 (18H, breites^ S, OAz), 2.85 0H, breites S, 3"-NCH , "5.θ8 (OH, breites S, -CH₃C₆H ), 6.I9 (IH, breites S, Η_χ,), uid 3.28 ppm. (15H,

breites S, -CH₃CgH ).

0-[3i4,6-Tri-0-azetyl-2-deoxy-2-oximino-a-D-glucopyranosyl- -(l-*4) J-5,2¹ _a4^l-tri-0-azetyl-l,3,3^! -tri-N-carbobenzoxygarämin (l.O g.) und Essigsäureanhydrid (1,5 ml) werden in wasserfreiem Pyridin (I5 ml) gelöst, und die Lösung wird bei 25° 17 Stunden belassen. Das Reaktionsgemisch wird auf liswasser gegossen und das feste 0-[2,3*4,6-Tetra-O-azetyl^-deoxy^-öximino-a-D-glueopyranosyl-(l-?-4) J-5,2' ,4'-tri-O-azetyl-1,3,3^! -tri-N-oarbobenzoxygäramin (828 mg) wird abfiltriert und getrocknet. Das Azetat wird auf einer Silikagel-Säule (110x2,5 Gm) mit 1% Methanol in Chloroform als Eluent chroma fcographiert und man erhält einen farblosen, amorphen Pestkörper, m.p. 115-123° (Gefunden: C, 57.36; H, 5-96; N, 4.66. C₅₇H₆₈N₄O₃₄ benötigt: C, 57-38; H, 5.75; N, 4.70$), [α]^^β + 88.0° (CH^OH), Vraax (CHCl,), 5338, 1740, 1710, 1220, 1030, 695 cm."¹, S (CDCl₃) t 1.27, 1.37 (3H,-breites S, 4"-CH ), 1.92, 2.01, 2.09, 2.17 (21H,

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September lh, 1973 ?7

234997

breites S, OAz), 2.85 (JH, breites S, 5"-NCH₃), 5.07 breites S, -CH₂CgH₅), and 5·>1 ppm. (15H, breites S,

Das Azetat {386 mg) wird in wasserfreiem Tetrahydrofuran (10 ml) gelöst und auf 0° abgekühlt. Es wird eine 1 M Lösung von Diboran in Tetrahydrofuran (6,67 ml) tropfenweise und unter Rühren zugegen, und das Gemisch wird bei 7° l8 Stunden belassen.

Uebersehüssiges Reagens wird durcti tropfenweise Zugabe von Wasser zerstört bis keine Gasentwicklung mehr auftritt_o Die Lösung wird eingeengt, Benzol zugegeben und azeotrop destilliert. Das erhaltene trockene, amorphe Produkt wird einem Gemisch von Natrium (0,66g) in flüssigem Ammoniak (40 ml) bei -70 zugegeben und die Mischung 2 Stunden gerührt. Die Reaktion iTird durch tropfenweise Zugabe von Wasser unterbunden und das Ammoniak bei 25 über Nacht verdunsten gelassen. Der Rückstand wird in eiskaltem Wasser (70 ml) gelöst und mit Amberlit IRC 50 Harz neutralisiert. Nach zwei Stunden wird die Harzaufschlämmung auf eine Säule gegeben, mit Wasser (ca 1,5 1) gewaschen und Gentamicin X₂ wird mit 1,5 N-Ammoniumhydroxyd eluiert. Das basische Eluat

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September l4, I97j?

2031XH

CG/rak

wird zur Trockene verdampft und der Rückstand auf einer Silikagel-Säule (110x2,5 cm) mit der unteren Phase einer Chloroform-Methanol-Ammoniumhydroxid Mischung (1:1:1) als Eluent chromatographiert. Gentamicin X„ und 2J -N-Aethylgentamicin Xp wird gesammelt, das erste mit Amberlit IR401S Harz aufgearbeitet und gefriergetrocknet, wobei man 34 mg als farblosen, amorphen Festkörper erhält, und das zweite wird nochmals auf eine Silikagel Säule aufgegeben, wobei derselbe Eluent wie früher verwendet wird, danach mit Amberlit IR401S Harz behandelt und gefriergetrocknet. Beide Verbindungen haben identische physikalische Eigenschaften mit den Produkten von Beispiel 1.

(II) 0- [2,3,4, ö-Tetra-O-azetyl^-deoxy^-oximino-a-D-glucopyranosyl-(l-»4)]-5,2^!,4¹-tri-O-azetyl-1,3,3'-tri-N-earbobenzoxygaramin (450 mg) wird in wasserfreiem Tetrahydrofuran (12 ml) gelöst und auf 0° abgekühlt. Eine IM Lösung von Diboran in Tetrahydrofuran (7*75 ml) wird tropfenweise zugegeben und das Gemisch wird bei 7 18 Stunden belassen. Das überschüssige Reagens wird durch vorsichtige Zugabe von Wasser zerstört, bis keine Gasentwicklung mehr auftritt. Die Lösung wird eingeengt, mit Benzol azetrop destilliert, und man erhält das Produkt als trockenen,

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September H₁. 1973 CG/rak

amorphen Feststoff. Dieser wird in Eisessig (70 ml) aufgenommen und über j50# Pd auf Kohlenstoff bei 25° und 3*7 at 17 Stunden hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert, mit Wasser gewaschen, das Filtrat zur Trockene eingedampft und mit Benzol azeotrop destilliert. Der Rückstand wird mit Bariumhydroxyd (5g) in Wasser (50 ml) gelöst und die Lösung wird unter Rückfluss auf 130° 16 Stunden erhitzt. Die Lösung wird sodann gekühlt, mit COp gesättigt, und das Bariumkarbonat wird abfiltriert und mit Wasser gewaschen. Das Piltrat wird über Amberlit IR401S-Harz gegeben, das Eluat eingeengt und auf einer Silikagel Säule (110x2,5 cm) chromatographiert, wobei die untere Phase eines Chloroform-Methanol-Ammoniumhydroxyd Gemisches (1:1:1) als Eluent verwendet wird. Man erhält Gentamicin Xp (24 mg) und 2'-N-Aethylgentamicin Xp als farblosen Peststoff nach der Gefriertrocknung. Beide Verbindungen haben identische physikalische Eigenschaften mit den Produkten von Beispiel 1«

(III) 0-[2,3,4, e-Tetra-O-azetyl^-deoxy^-oximino-a-D-glucopyranosyl-(l-»4) ]-5,2^! ,4'-tri-0-azetyl-l,3,3'-tri~N-carbobenzoxygaramin (500 mg) in wasserfreiem Tetrahydrofuran (20 ml) wird mit IM Diboran in Tetrahydrofuran (4,18 ml)

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September l4, 1973 2CjUX-FTG-SlO

CC-/mic

wie in II reduziert. Das Produkt wird in wässerigem Dioxan (1:1) (40 ml), welches Bariumhydroxyd^ (2g) enthält, aufgenommen und wird unter Rückfluss 17 Stunden auf 1^0 erhitsfc. Die Lösung wird mit Amberlit IRC 50-Harz neutralisiert und das Gemisch auf eine Säule aufgegeben. Das Harz wird mit Wasser gewaschen und Gentamicin Xp mit 1,5 M Ammoniumhydroxyd eluiert. Das basische Eluat wird zur Trockene verdampft, auf einer Silikagelsäule (110x2,5 cm) wie zuvor chromato-. graphiert und man erhält Gentamicin Xp (50 mg) und 2'-N-Aethylgentamicin X_g mit denselben physikalischen Eigenschaften wie in Beispiel 1.

(IV) 0- [2,3,4,6-Tetra-0-azetyl-2-deoxy—2-oximino-a-D-glucopyranosyl-(!-» 4) }5,2^f, 4^s -tri-O-azetyl-1,3,3' -tri-N-earbobenzoxygaramin (500 mg ) in wasserfreiem Tetrahydrofuran (20 ml) wird mit IM Diboran in Tetrahydrofuran (4,18 ml) reduziert wie in (II). Das Produkt wir.d in wässerigem . Dioxan (1:1) (40 ml)* welches 2 g Natriumhydroxyd enthält, aufgenommen und unter Rückfluss 17 Stunden auf I30⁰ erhitzt. Das Reaktionsprodukt wird wie in(III) aufgearbeitet und man erhält Gentamicin X₂ (90 mg) und 2'-N-Aethylgentamicin X₂ mit denselben physikalischen Eigenschaften wie in Beispiel

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September l4, 1973 203IX-FTG-Ell CG/mk

• Beispiel 4

2' -O-Azetyl-l^i^.'-tri-N-carbobenzoxygaramin (1.5 g) in wasserfreiem Toluol. (100 ml) wird mit Drierit (frisch gemahlen und auf einer heissen Platte erhitzt) (8,6 g), Quecksilbercyanid (0,83 g) und 3,4_JJ6-Tri-0-azetyl-2_ramino-2-deoxy-2-N-(2,4-dinitrophenyl)-ά-D-glucopyranosylbromid (1.25 g) gemischt und das Gemisch wird 24 Stunden auf 110° erhitzt. Danach wird abkühlen gelassen, über Infusorienerde filtriert und der Filterkuchen mit Aethylazetat gewaschen. Die vereinigten Filtrate werden eingeengt, in Aethylazetat (300 ml) aufgenommen, mit 20$ Kaliumbromid (3x100 ml) und mit Wasser (3x100 ml) gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Chromatographie auf einer Silikagelsäule (100 g) mit 1$ Methanol in Benzoi-Aether (1:1) ergibt0-[3,4,6-Tri-0-azetyl-2-amino-2-deoxy-2-N-(2,4-dinitro-phenyl)-a-D-glucopyranosyl-(L-*4) J-2'-0-azetyl-l,3,3^f-tri-N-carbobenzoxygaramin (838 rag) welches aus 95$ Aethanol-Wasser kristallisiert , m.p. 128-I30⁰ (Gefunden: C, 56.48; H, 5.17; N, 6.88. C H₆₆N₆O₂₄ benötigt:

C, 56.I6; H, 5.^6; N, 6.89$), [a]^⁶ + 98.0° (CHCl₃), V max (Nujal) 3^8, 3333, 1754-1709, I618, 1592, 1527 cm."¹, S (CDCl -CD OD, 3:l)i~ I.I8 (5H, breites S, 4"-CHL), I.85, 2.02, 2.08 (12H, breites S, OAz), 2.95 (3H, breites S, 3"-CH,),

4 0 9 8 16/1162

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September 14, 197/5

2031X-FTG-21?

CC/n.k

7.55» 7.58 (16H, breites S, CH₂C₆H₅ und DNP), und 8.25, 9.03 ppm. (2H, breit, DNP). Weitere Elution der Säule mit 2% Methanol in Benzol-Aether (1:1) ergab ein Gemisch, welches durch Dünnschichtchromatographie auf Silikagel Platten mit Chloroform-Aethylazetat (1:2) als Eluent weiter gereinigt wird. Man erhält 0-[3,4,6-Tri-0-azetyl-2-amino-2-de oxy—2-N-(2,4-dinitrophenyl)-ß-D-glucopyranosyl-(l-»4]-2'-0-azetyl-l,3,3'-tri-N-carbobenzoxygaramin (150 mg), welches aus 95$ Aethanol-Wasser kristallisiert, m.p₀ 133-135⁰C (Gefunden: C, 56.96,· H, 5.65; N, 6.79. C₅₇H₆₆N₆O₂₄ benötigt: C, 56.16; H, 5-46; N, 6.89*), Γα]*⁹+ 39.5° (CHCl₃), V max (NuJöl) 3^48, 3333, 1754-1709, 1618, 1592, 1527 cm."¹, S (CDCl,) "t" 1.10 (3Η, breites S, 4"-CEL), 1.88, 2.03, 2.10 (12Η, breites S, OAz), 2.-92 (3H, breites S, 3"-NCH ), 7.25, 7.28, 7.30, 7.33 (I6H, breites S, -CHgCgH und DNP), und 8.20, 9.00 ppm. (2H, breit, DNP).

0- [3,4, o-Tri-O-azetyl^-amino^-deoxy^-N- (2,4-dinitrophenyl )-a-D-glucopyranosyl- (1-^-4) ] -2' -0-azetyl-l, 3,3' -tri-N-carbobenzoxygaramin, (I60 mg) wird in Methanol (32 ml) gelöst und die Lösung wird bei 0° mit Ammoniak gesättigt. Nach 16 Stunden bei 25 wird die Lösung eingedampft und man erhält

4098 16/1162

-48-

September l4, 1973

l,3,j5"-Tri-N-carbobenzoxy-2' -W- (2,4-dinitrophenyl)-gentamicin X₂, welches in einem Gemisch von Azeton (20 ml) und Wasser (10 ml) gelöst wird und mit Amberlit IRA 400 Ionenaustauscherharz in der OH-Form (5 ml) behandelt und 16 Stunden bei gerührt wird. Das Gemisch wird filtriert und das Harz mit Azeton-Wasser (2:1) (100 ml) gewaschen. Die kombinierten Filtrate werden eingedampft und man erhält 1,3*3"-TrI-N-carbobenzoxygentamicin Xp. Dieses wird in flüssigem Ammoniak (20 ml) bei -70° (Trockeneis-Azeton Bad) gelöst und Natrium (2JO mg) wird zugegeben. Die blaue Lösung wird bei -70° zwei Stunden gerührt, dann wird Wasser bis zum Ver- schwinden der blauen Farbe zugegeben. Der Ammoniak wird verdampfen gelassen und der Rückstand in Wasser (5 ml) aufgenommen. Die wässerige Lösung wird auf 0° abgekühlt, auf eine Amberlit IRC 50-Ionenaustauschersäule aufgegeben und dort 1 1/2 Stunden belassen. Die neutralen Verunreinigungen werden mit Wasser (l40 ml) eluiert und Gentamicin X₂ (36 mg) wird dann mit 1,5 N Ammoniumhydroxyd eluiert. Das Produkt hat dieselben physikalischen Eigenschaften wie jenes von Beispiel 1.

Beispiel 5

4,6-Di-0-azetyl-l,2,3rtrideoxy-—D-erythrohex-1-enopyranose (4l.7 g) wird in wasserfreiem Aethylazetat (1250 ml) ge-

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September 14, 1973

2031X-FTG-E1*·

CG/mk

so

löst, die Lösung mit Stickstoff gespült und auf 0° abgekühlt. Eine Lösung von Nitrosylchlorid in wasserfreiem Aethylazetat (25,5 g (100 ml) wird zugegeben und das entstandene Gemisch bei -5° zwei Stunden und 45 Minuten belassen. Nach dieser Zeit ist durch Dünnschichtchromatographie vollkommene Umsetzung festzustellen. Die Lösung wird zur Trockene .eingedampft, der Rückstand mit wasserfreiem Aether behandelt und im Vakuum getrocknet. Man erhält 4,6-Di-O-azetyl-2,3-dideoxy-2-nitroso-a-D-glucopyranosylchlorld (54 g) als farblose Substanz (Gefunden: C, 42.91; H, 5.10; N, 4.83; Cl, 12.75. ^c _lo ^Hi4^NO6^{cl beno}'tigt: C, 42.94; H, 5.05; N, 5.01; Cl, 12.68#), [a]^⁶ + 75-5° (CHCl₃), V max (CHCl,) 1740, 1220,1040 cm"¹, S (CDCl,) 2.10 (6H, S, OAz), and 6.70, 6.82 ppm. (IH, D, J=4 Hz) (3:2).

5,2^f ,4'-Tri-O-azetyl-1,3,,3'-tri-N-carbofoenzoxygaramin (7.28 g) und 4,6-Di-0-azetyl-2,3-dideoxy-2-nitroso-a-D-glucopyranosylchlorid (4.8 g) werden in wasserfreiem vxiederholt destilliertem Dimethylformamid (200 ml) gelöst, und die Lösung wird bei 25° 46 Stunden belassen. Das Reaktionsgemisch wird sodann auf Eiswasser gegossen und der Niederschlag filtriert, getrocknet, und auf einer Silikagelsäule (l60x2,5 cm) chromatographiert, wobei 1% Methanol in Chloroform als

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September 14, 1975

2031X-FTG-ElIp

Cfc/rck

Eluent verwendet wird. Man erhält 0-[4,6-Di-0-azetyl-2,3-diäeoxy-2-oximirio-α-D-glucopyranosyl-·· (Ir-* 4) J-5,2',4' tri-O-azetyl-l^^'-tri-N-carbobenzoxygaramin (4.8 g.) "als farblosen, amorphen Feststoff, m.p. 125-133 (Gefunden: C, 58.01; H, 5.72; N, 5.02. C₅₅Hg₁₁Nj₁O₂₁ benötigt:

C-, 58.23; H, 5·9Ο;.Ν, 5.13#), [α3ρ + 117.0 (CH₃OH), Vmax (CHCl₃) 3400, 1740, 1710, 1220, 1030, 695 cm"¹, S (CDCl₅) t Ι.25, Ι.37 (3Η, breites S, 4"-CH₃), I.90, L96, 2.01 (15H, breites S, OAz), 2.83.(3H, breites S, 3"-NCH₃), 5.07 (6H, breites S, -CH₅C₆H₅), und 7.28 ppm, (15H, breites S, -CHgC₆H₅).

0-[4,6-Di-0-azetyl-2_i3-dideoxy —2-oximino-a-D-glucopyranosyl-(l-*4)J-5,2¹,4'-tri-O-azetyl-1,3,3'-tri-N-carbobenzoxygaramin (3*3 g) und Essigsäureanhydrid (4,9 ml) werden in wasserfreiem Pyridin (26 ml) gelöst und die Lösung wird bei 25° l8 Stunden belassen. Das Reaktionsge-

misch wird in Wasser gegossen und 0-[2,4,6-Tri-O-azetyl-2,3-dideoxy-2-rOximino-a-D-glucopyranosyl-{l->4) J-5,2',4¹-tri-0-azetyl-l,3,3'-tri-N-carbobenzoxygaramin (3.2 g,) wird abfiltriert und getrocknet. Das Azetat (3,2 g) wird in wasserfreiem Tetrahydrofuran (100 ml) gelöst und auf 0 abgekühlt. Eine IM Lösung von Diboran in Tetrahydrofuran

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September l4, 1973

205IX-FTG-EI6.

CG/ttft

(42,5 ml) wird tropfenweise zugegeben und das Gemisch bei 7° 18 Stunden belassen, überschüssiges Reagens wird durch tropfenweise Zugabe von Wasser zerstört, bis keine Gasentwicklung mehr auftritt. Die Lösung wird eingeengt und mit Benzol azeotrop destilliert, um das Produkt als trockenen, amorphen Peststoff zu erhalten. Dieser wird in wässerigem Dioxan (1:1) (I60 ml), welches Natriumhydroxyd (JBg) enthält, aufgenommen und 17 Stunden unter Rückfluss auf I3O⁰ erhitzt. Die Lösung wird mit Amberlit IRC 50 Harz neutralisiert und das Gemisch in eine Säule gegeben. Das Harz wird mit Wasser gewaschen und das Produkt mit 1,5 M Ammoniumhydroxyd eluiert. Das basische Eluat wird zur Trockene verdampft und der Rückstand auf einer Silikagelsäule (I60 x2,5 cm) chromatographiert, wobei Chloroform-Methanol-7$ Ammoniumhydroxyd (15s27:15) als Eluent verwendet wird. Man erhält 3'-Deoxygentamicin X_g, das nach der Behandlung mit Amberlit IR401S Harz und Gefriertrocknung als farbloser, amorpher Feststoff anfällt (0.8 g), m.p. 131-l4l° (Gefunden: C,48.72; H, 8.08; N, 11.92. C₁₉H₅₈M₄O₉ benötigt: C,48.91; H, 8.21; N, 12.01<&), m/e 467 (M⁺ + l), [a]^⁶ + 171.6° (H₃O) V max (KCl) 3340, 1030 cm"¹, S (DgO) 1.14 (3H, S, 4"-CH,), 2.45 (3H, S/ 3"-NCH₃), 5.01 (IH, D, J=3.5Hz, H₁"), und 5.04 ppm (IH, D, J=3Hz, Η_χ), [e]_29Q-9,040 (TACu), [0J_29O-7,55O

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September l4, 203LX-FTG-Sl 7

Si

(Cupra A), weiters 3'-Deoxy-2^l-N-äthylgentamiein X₂, das nochmals auf einer Silikagelsäule (l60x2,5 cm) chromatographiert wird, wobei die untere Phase eines Chloroform-Methanol -Ammoniumhydroxyd Gemisches (1:1:1) als Eluent verwendet wird, und das nach Behandlung mit Amberlit IR4O1S Harz und Gefriertrocknung als farbloser, amorpher Peststoff (254 mg) anfällt (Gefunden: C,50.91; H, 8.4l; N, 11.33$. C₂₁H₄₂N₄O₉ benötigt: C, 50.99; H/8.56; N, 11.33$), m/e 495 (M⁺ + 1), [ajp⁶ + 147.9° (H₂O), S(D₂O) 1.00 (3H, T, J=7Hz, ), 1.17 (3H, S, 4"-CH₅), 2.47 (3H, S, 3"-

2.52 (IH, D, J=IO.5Hz, H„), 2.64 (2H, Q, 3=7Hz, CIg 3.28 (IH, D, J=12.5 Hz, Η,-,, ), 3-74 (IH, DD, J=IO.5Hz, J=4Hz, H₂,,), 4.07 (IH,, D, J=12,5Hz, H₅H₆), 5.05 (IH, D, J=4Hz, H₁,,) und 5.14 ppm. (IH, D, J=3.5Hz, H ,), [Θ] _η-7,28θ (Cupra A) -8,800 (TACu), ^{X 29}° - ■

/und weiters das 1,3-Harnstoffderivat von 3^f-Deoxygentamicin

X₂, das nach der Behandlung mit Amberlit IR401S Harz und Gefriertrocknung ebenfalls als amorpher, farbloser Peststoff (1,0g) anfällt (Gefunden: C, 47.62; H, 7·53ί Ν, 11.13. C₂₀H₅₆N₄O₁₀^₂O benötigt : C, 47.05; H, 7.50; N, 10.97^), m/e 493 (M⁺ + 1), [a]^⁶ + 171.6° (H₂O), V max (KCl) 3330, I66O, IO6O, 1030 cm."¹, £ (D₂O) 1.17 (3H, S, 4"-CH^), 2,45 (3H, S, 3"-NCH ), 4.86 (IH, D, J=3_<5Hz, H₁"), 4.96 ppm. (IH, D, J=^Hz, H₁).

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September l4, 1973 2O31X-FTG-5S13

ST

Beispiel 6

1,3,3'-Tri-N-Carbobenzoxygaramin (3.75 s) und 4,6-Di-O-azetyl-2,3-dideoxy-2-nitrosQ-a-D-glucopy2^>anosyl Chlorid
(1·8 g) in wasserfreiem, wiederholt destilliertem Dimethylformamid (30 ml) werden bei 25° 19 Stunden gerührt.
Die Lösung wird im Vakuum eingedampft und der Rückstand
in Chloroform aufgenommen. Die Chloroformlösung wird mit
Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt, und der Rückstand wird auf einer Silikagelsäule

chromatographiert, wobei 4$ Methanol in Chloroform als

O₇[4,6-Di-

Eluent Verwendung findet. Man erhält/0-azetyl-2,3-dideoxy-2-oximino-a-D~glueopyranosyl-(l-> 4) ]-1,3*3'-tri-N-carbobenzoxygaramin (0-8 g) als farblosen, amorphen Feststoff m.p.
112-119°, (Gefunden: C, 58.68; H, 6.11; N, 5.76'. ^c4₇ ^H ₅8^N4°i8 benötigt: C, 58.38; H, 6.05; N, 5.79$ M^ + IO6.3⁰ (C₂H₅OH), \> max (CHCl ) 3330, 174o, 17IO, 1220, 1055, 1030, 695 cm"¹,

£ (CDCl,) tl.00 (3H, breites S, 4"-CH,), 1.92 (3H, breites

1.98(3H. breites S, OAz)
S, OAz),£2.99 (3H, breites S, 3 -NCH ), 5.02 (6H, breites S,

C₆H₅), und 7.23 ppm. (I5H, breites S, -

0- [4,6-Di-0-azetyl-2, ^-dideoxy^-oximino-a-D-glucopyranosyl-(l->-4)3-1,3,3'-tri-N-carbobenzoxygaramin (0.7 g) wird azetyliert, mit Diboran reduziert, und das entstehende Produkt

0 9 8 16/1162
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September 14, 1973

203IX-FTG-EI9

CG/mk

wird mittels alkalischer Hydrolyse wie in Beispiel 5 von den Schutzgruppen befreit. Man erhält 3' -Deoxygentamicin Xp (70 mg) und 3^!-Deoxy-2'-N-äthylgentamicin Xg, beide mit denselben physikalischen Kenndaten wie in Beispiel 5·

Beispiel 7

Das 1,3-Harnstoffderivat von 3'-Deoxygentamicin X„ (3·5 g) wird in Hydrazinhydrat (50 ml) gelöst und die Lösung wird unter Druck 89 Stunden auf 13Ο⁰ erhitzt. Die Lösung wird im Vakuum eingedampft und der Rückstand wiederholt 'zuerst in Wasser und dann Methanol gelöst und durch Eindampfen wieder gewonnen. Der farblose Peststoff wird auf einer Silikagelsäule (l60x2,5 cm) chromatographiert., wobei Chloroform-Methanol-7$ Ämmoniumhydroxyd (1:2:1) als Eluent Verwendung findet. Man erhält 3'-Deoxygentamicin X« als farblosen, amorphen Peststoff nach dem Behandeln mit Amberlit IR401S-Har-z und Gefriertrocknung, Die physikalischen Kenndaten sind wie in Beispiel 5.

Beispiel 8

3,4-Di-O-azetyl-1,2-dideoxy-6-0-tosyl-D-arabinohex-lenopyranose (50 g) wird in Hexamethylphosphoramid (800 ml)

gelöst 4 0 9 8 16/1162

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September l4, 1973 2051TC-PTG-320

23A9974

Natriumazid (34g) wird zugegeben und die Lösung wird bei 25° 24 Stunden gerührt. Das Hexamethylphosphoramid wird im Hochvakuum abdestilliert, und der.Rückstand wird in Chloroform aufgenommen und mit Wasser gewaschen. Der Chloroformextrakt wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wird auf einer Silikagelsäule (150x7,5 cm) chromatographxert, wobei 7$ Azeton in Hexan als Eluent verwendet wird. Man erhält J>,k-Di-O-azetyl-6-azido-l,2,6-trideoxy-D-arabinohex-l-enopyranose (25 g) als farbloses Material, (Gefunden; C, 47.23; H, 5·30; N, 16.37. C₁₀H₁ M₃O₅ benötigts C, 4?.O6; H, 5.13; N, 16.46& [a]^⁶ + 25.1° (CH₅OH), V max (CHCl-) 2110, 1755, I66O, 1220, 1040 cm"¹, 8 (CDCl ) 2.06, 2.09 (6H, S, OAz), 4.9I (IH, DDD, J=6.5 Hz, 3.0 Hz, 1 Hz, H₉), , ,

und 6.53 ppm. (IH, DD, J=6.5 Hz, I.5 Hz, K).

3,4-Di-0-azetyl-6-azido-l,2,6-trideoxy-D-arabinohex-lenopyranose (4.5 g) wird in wasserfreiem Aether gelöst und bei -30 ein Ueberschuss an Nitrosylchlorid der Lösung zugegeben. Das Gemisch wird 75 Minuten bei -30° belassen. Die Lösung wird sodann zur Trockene eingedampft und der Rückstand aus wasserfreiem Aether umkristallisiert« Man erhält 3,4-Di-0-azetyl-6-azido-2,6-dideoxy-2-nitroso-a-D-glucopyranosylehlorid (4.55 g) als farblose Nadeln, m.p.

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September 14, 1973 203IX-FTG-E21

234997A

109-111° (Gefunden: C, 37.39; H, 5.9*5 N, 17-42; CIp,-11.12. C₁₀H N₄O₆Cl benötigt: C, 37.*5i H, 4,O8j N, .ΓΜ7ί Cl, 11.θ6#), [α]ρ⁶ + 248.8° (CHCU), V max (CHCl ) 2100, 1760, 1220, ΙΟ5Ο cm"¹, 6 (CDCl ) 2.00, 2.07 (OH, S, OAz), und 6.70 ppm. (IH, -D, J=3.7 Hz, H₁).

5,2',4'-Tri-O-azetyl-1,3,3¹-tri-N-carbobenzoxygaramin (6 g) und 3,4-Di-0-azetyl-6-azido-2,6-dideoxy-2-nitroso-a-D-glucopyranosylchlorid (4.5 g.) werden in wasserfreiem, wiederholt destilliertem Dimethylformamid (205 nil-) gelöst und die Lösung wird bei 25° 94 Stunden belassen. Das.Reaktionsgemisch wird auf Eiswasser gegossen, der Niederschlag abfiltriert, getrocknet und auf einer Silikagelsäule (l60x2,5 cm) chromatographiert, wobei \% Methanol in Chloroform als Eluent Verwendung findet. Man erhält 0-[3,4-Di-O-azetyl-6-azido-2,6-dideoxy-2-oximino-a-D-glucopyranosyl-(l-*4) ]-5,2',4'-tri-O-azetyl-1,3,3'-tri-N-carbobenzoxygaramin (2.4 g) als farblosen, amorphen Peststoff,m.p. 129-137°, (Gefunden,: C, 55.77; H, 5.591 N, 8.47. C₅₅H₆₃N₇O₂₁ benötigt: C, 56.13; H, 5.6O; N, 8.65$), [αJjJ⁶ + 112.0° (CH₃OH), V max(CHCl ) 3350, 2110, 17*0, 17IO, 1220, 1035 cm"¹,

S (CDCl₃) t I.23, I.36..(5H,"breites S, 4" -CH₃), I.92 (15H,

breites S, OAz), 2.82 (3H^ breites S, 3" -NCH ), 5.02 (6H,

40 98f6/1t6 2

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September 14, 1973 2051X-FTG-S22

breites S, -CH₂C₆H₅), 6.12 (IH, breites S, H₁'), und 7.2? ppm. (15H, breites S, -CHpCgH₅).

O- [3,4-Di-0-azetyl-6-azido-2, (S-dideoxy-S-oximino-a-D-glueopyranosyl-(l-> 4)]-5,2', 4'-tri-O-azetyl-1,3,3'-tri-'N-carbobenzoxygaramin (1.3 g) und Essigsäurehydrid (2 ml) werden in wasserfreiem Pyridin (10 ml) gelöst und die Lösung wird bei 25 l8 Stunden belassen. Das Reaktionsgeraisch wird in Wasser gegossen und 0-[2,3^-Tri-O-azetyl-6-azido-2,6-dideoxy-2-oximino-a-D-glucopyranosyl-(l-^4) ]-5,2^f,4'-tri-O-azetyl-1,3,3'-tri-N-earbobenzoxygaramin wird abfiltriert und getrocknet.

Das Azetat wird in Tetrahydrofuran (45 ml) gelöst und auf 0° abgekühlt. Eine IM Lösung von Diboran in Tetrahydrofuran (18 ml) wird tropfenweise zugegeben,und die Mischung wird 18 Stunden auf 7 gehalten. Ueberschüssiges Reagens wird durch tropfenweise Zugabe von Wasser zerstört (bis zum Aufhören der Gasentwicklung), die Lösung wird zur Trokkene verdampft und der-Rückstand in Methanol aufgenommen. Es folgt Hydrierung in Gegenwart von 30$ Palladium auf Kohle bei 25 , 4at und l8 Stunden lang. Der Katalysator wird abfiltriert und das Piltrat zur Trockene eingedampft. Man er-

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September l4, 1973 2031X-FTG-E23

CG/rnk

S3

hält einen amorphen Feststoff, der in wässerigem Dioxaxi (1:1) (60 ml), das Natriumhydroxyd (3 g) enthält, aufgelöst wird. Die Lösung wird l6 Stunden lang unter Rückfluss auf 120 erhitzt, wird sodann mit Amberlit IRC 50 Harz neutralisiert und das Gemisch wird auf eine Säule gegeben» Das Harz wird mit Wasser gewaschen und das Antibiotikum JI-20A wird mit 1,5M Ammoniumhydroxyd eiuiert, Das basische Eluafc wird zur Trockene verdampft und auf einer Silikagelsäule (110x2,5 cm) chromatographiert, wobei Chloroform-Methanol-7^- Ammöniumhydroxyd (2:1:1) alsEluent verwendet wird. Nach der Behandlung mit Amberlit IR401S Harz und Gefriertrocknung erhält man Antibiotikum JI-20A als farblosen, amorphen Feststoff (34 mg), m.p. I58-I68⁰, (Gefunden: C, 45.44; H, 7-73; N, 13.14. C₁₉H₅₉N₅O₉^O₂ benötigt: C, 45.70; H, .7,48; N, 13.33 %), m/e 482 (M⁺ +1), [a]*⁶ + 149.8° (H₃O), V max (KCl), 3350, 1050- cm"¹, £ (D₂O) 1.16 (JH, S, 4"-CH₃), 2.48 (3H, S, 3"-NCH₅), 5.02 (IH, D, J=4Hz, H₁"), und 5.26. ppm. (IH, D, J=3.5Hz, H₁')> f^eJ₂90" ³^'⁰⁰⁰ (TACu), [θ)-₂₉₍₎-8,84θ (Cupra A).

Beispiel 9

3-Deoxy-D-glucal (2 g) wird in wasserfreiem Pyridin (50 ml) gelöst, und die Lösung wird auf einem Eisbad gekühlt. Es

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September l4, 1973 205IX-FTG-E24

wird Tosylchlorid (8,8 g) in wasserfreiem Pyridin (100 ml) bei 0° Zugegeben und die Lösung wird 22 Stunden auf 7 gehalten. Nach der Zugabe von Essigsäureanhydrid (10 ml) wird das Gemisch weitere I9 Stunden auf 7° gehalten. Das Gemisch wird auf ein sehr kleines Volumen eingeengt, in Wasser gegossen und mit Chloroform extrahiert. Der Chloroformextrakt wird mit Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird mit Toluol azeotrop destilliert und dann auf einer Silikagelsäule (l60x2,5 cm) chromatographier.t, wobei Chloroform als Eluent verwendet wird. Man erhält 4-0-Azetyl-3-deoxy-6-0-tosyl-D-glucal (3.8j5 g) als'farblose Blättchen durch Kristallisation aus Chloroform, m.p. 76-79°, (Gefunden: C, 54.99;>H, 5.81; S, 10.02, ^cx₅ ^Hi8°6^S benötigt: C, 55.20; H, 5.56; S, 9.83#) m/e 327 (M⁺ + l), ^β °

^β + 105.5° (CHy)H), V max (Film) 1740, I66O, I360 1240 cm"¹, S (CDCl ) 2.01 (3H, S, OAz), 2.43 (3H, S, CH C₆H₄SO₂O-), 4.66 (IH, DDD, J=6Hz, J=4.5Hz, J=^Hz, und 6.25 ppm. (IH, DDD, J= 6Hz, J=2Hz, J=2Hz, H₁).

4-0-Azetyl-3-deoxy-6-0-tosyl-D-glucal (Ο.79 g) wird in . wasserfreiem Aethylazetat (50 ml) gelöst und die Lösung'

40 98 16/1162

-60-

September 14, 1973

2031X-FTG-E25

Cv/ηίέ.

auf einem Eisbad gekühlt. Eine Lösung von Nitrosylehlorid in wasserfreiem Aethylazetat (0,25M) (9,7 ml) wird zugegebenund die Mischung 90 Minuten bei 0° gerührt. Die grüne Lösung wird im Vakuum eingedampft und der Rückstand mit wasserfreiem Aether behandelt und getrocknete Man erhält 4-0-Azetyl-2,3-dideoxy-2-nitros.o-6-0-tosyl-a-D-glucopyiⁱanosylchlorid (0*7 g.) als farblose Flocken,, (Gefunden; C₅ 46.21; H, 4.781 M, 3.24,· Cl, 8.02; S, 7.83, C₁₅H₁₈NO₇ClS benötigt; C, 45.9ÖJ H₅ 4.631 N, 3.57J Cl, 9-05; S, 8.l8#),

fajp + 85.3⁰ (CHCl-),-. V max (CHCl₃) 1740, 1360, 122O₅ 1040 cm"¹, S (CDCl₅) 2.02, 309 (3H₅ S-, OAz), 2.45 (3H, S₅ -), 6.53 und 6»65 ppm. (IH, D, J=J-

■5*2.^l,4^l.-Tri-0-azetyl-l,3,3^l-.tri-N-oarbobenzoxygaramln (25o5 g) und 4-.0-Azetyl»2_J)3-dideoxy-2-nitroso-6-0-tosyl-α-D-glucopyranosylchlorid (2Jo5 s) werden in wasssrfreiem wiederholt' destilliertera Dimethylformamid (650 ml) gelöst und die Lösung wird bei ,25° 91 Stunden belassen* Das Reaktionsgemisch wird auf Eiswasser gegossen, der Niederschlag abfiltriert, getrocknet und auf einer Silikagelsäule.(l60x7,5'cm) chromatographiert, wobei O₃,5% Methanol in Chloroform als Eluent verwendet wird. Man erhält 0-[4-0-Azetyl-2_s3-dideoxy-S-oximino-ö-O-tosyl-a-D-glucopyranosyl-(1-* 4)-5,2',4'-tri_r0-azetyl-l,3,3^f-tri-N-carbobenzoxygaramin (l8 g)

■ 40 98-16/TI 6'2

September l4, I973

203IX-FTG-226

GC/ir.k

als farblosen amorphen Feststoff m_ep. 123-132°, (Gefunden:

C₅ 57·70; H, 5.77; N, 4_o64j S, 2.46_O ^C ₅8^H68^N4°22^{S bsnöti}S^t: C, 57.8O1 H, 5.691 N, 4.651 S, 2.66$), [aj^⁶ + Il6.2° (CH₃OH), V max (CHCl ) 3330, 1740, I7IO, I36O, 1220, IO3O cm"¹, δ (CDCl ) ti.23, 1.37 (3H, breites S, 4"-CH,), 1.88, I.90, 1,99 (12H, breites S, OAz), 2_e38 (3H, breites S, CH C₆H^SO₂O-), 2.84 (3H, breites S₃ 3"-NCH₅), 5-02 (6H, breites M, CgHj-CH OCO-), und 7«26 ppm. (15H, breites S, C₆H₅CH₂OCO-).

0- [4-0~Azetyl-2,3~dideo3cy-2-oximino-6-0-tosyl-a-D-gluco-

benzoxygaramin (5 g) und Natriuraazid (5*7 g) werden in Hexamethylphosphoramid (180 ml) gelöst und die Lösung wird bei 25 65 Stunden gerührt„ Das Reaktionsgeinisch wird in Wasser gegossen, rait Aether extrahiert und der Extrakt über Magnesiumsulfat getrocknet. Nach dem Eindampfen erhält man 0-[4-0-Azetyl-6-azido-2_i3_i6-tri-dsoxy-2-oximino-ci-D-glucopyranosyl-(l-^4)]-5,2^I,4'-tri-0-azetyl-l,3,3^l-tri-N-earbobenzoxygaramin als farblosen, amorphen Feststoff.

Das Azid wird in wasserfreiem Pyridin (25 ml) gelöst und Essigsäureanhydrid (5 ml) zugegeben. Das Gemisch wird bei

409816/1162

September l4, 1973 CG/mk

25° 19 Stunden belassen, sodann in V/asser gegossen und das 0-[2,4-Di-0-azetyl-6-azido-2,3,6-trideoxy-2-oximino-a-D-

N-carbobenzoxygaramin in Chloroform aufgenommen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingedampft.

Das Azetat wird in wasserfreiem Tetrahydrofuran (100 ml) gelöst und auf 0° abgekühlt. Eine IM Lösung von Diboran in Tetrahydrofuran (41,5 ^ml) wird tropfenweise zugegeben und das Gemisch bei 7 30 Stunden belassen. Uebersehüssiges Reagens wird durch vorsichtige Zugabe von Wasser zerstört. Die Lösung wird zur Trockene verdampft und der Rückstand in Methanol aufgenommen. Es wird in Gegenwart von Palladium auf Kohle bei 4 at und 25° 19 Stunden hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert, das Filtrat zur Trockene verdampft und der Rückstand in Methanol-^konz. Ammoniumhydroxyd (lt2) (60 ml) aufgenommen und unter Druck 16 Stunden auf 100° erhitzt. Die Lösung wird zur Trockene verdampft und der Rückstand mit 5# Natriumhydroxyd in Wasser (60 ml) l6 Stunden auf Rückfluss gekocht. Das Gemisch wird abgekühlt und mit Amberlit IRC50 Harz neutralisiert. Die Aufschlämmung wird auf eine Säule gegeben, das Harz mit Wasser gewaschen und das Antibiotikum sodann mit 1.5 M Ammoniumhydroxyd (21) eluiert. Das basische Eluat wird zur Trockene verdampft

.4098 167 1162 ' -63-

September· l4, 3 973

2031X-FTG-E28

CG/rak

und zuerst auf einer Silikagelsäule (l60x5 cm) mit Chloroform-Methanol-7# Ammoniumhydroxyd als Eluent und.dann auf einer Silikagelsäule (lOOxlcm) mit der unteren Phase eines Chloroform-Methanol-Ammoniumhydroxyd (1:1:1) Gemisches als Eluent chromatographiert. Nach dem Behandeln mit Amberlit IRA4O1S Harz und Gefriertrocknung erhält man 0-2,6-Diamino-2,3,6-trideoxy-a-D-glucopyranosyl-(l-»4)-garamin (69 mg) als farblosen Feststoff, m.p. lj50° (erweicht bei 52°) (Gefunden: C, 47.85; H, 8H7; N, 13AQ. C₁₉H₅₉N₅Og-CO₂ benötigt:

C, 47.14; H, 7-71; N, 13-75#), m/e ^66 (M⁺ + 1), [α]*⁶ + 158.4° (H₂O), V max (KCl) 328Ο, IO5O, 1020 cm"¹, S (D_g0) 1.14 (3H, S, 4"-CH,), 2.45 (3H, S, 3"-NCH₃), 2.48 (IH, D, J= 10.5Hz, H,,,), 3.23 (IH, D, J=12Hz, H "), 3.71 (IH, DD, J=IO.5Hz, J=4Hz, H₂,,), 3-97 (IH, D, J=12Hz, H^,,),· 5.01 (IH,

D, J=4Hz, H₁,,) und 5.07 ppm. (IH, D, J=3.5Hz, H₁,), -7,970 (TACu), [OJ₂₈₅ -6,480 (Cupra A).

Beispiel 10

4-0-Azetyl-3-deoxy-6-0-tosyl-D-glucal (550 mg) und Natriumazid (550 mg) werden in Hexamethylphosphoramid (50 ml) gelöst, und das Gemisch wird bei 25° 24 Stunden gerührt. Das

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September l4, 1973 2031X-FTG--?29 CG/mk

" Reaktionsgemisch wird in Aether gegossen, mit Wasser extrahiert, und die ätherische Losung Über Magnesiumsulfat getrocknet. Nach dem Einengen wird das Produkt auf einer Silikagelsäule (58x2,5 cm) chromatographiert, wobei 7$ Azeton in Hexan als Elüent verwendet wird. Man erhält 4-0-Azetyl-6-azido-<-3,6-dideoxy-D-glucal (200 mg) als farblose Flüssigkeit (Gefunden: C, 48.84; H, 5.33; N, 21.49. CgH₁₁N₃O benötigt: C, 48.72; H, 5.62; N, 21.31#), [a]^⁶ + I58.6° (CH₃OH), V max (Film) 2100, 1720, 1660, 1220, IO5O cm"¹. 6 (CDCl ), 2.09 (3H, S, -OAz), 4.72 (lH, DDD, J=6Hz, J=4.5Hz, J=3Hz, H₂) und 6.39 ppm. (IH, DDD, J=OHz* J=2Hz, J=2Hz, H₁).

4-0-Azetyl-6-azido-3,6-dideoxy-D-glucal (112 mg) Wird in wasserfreiem Äethylazetat (15 ml) gelöst und die Lösung .auf 0° abgekühlt. Eine Lösung von Nitrosylchlorid (55 mg/ 0,53 ml) in wasserfreiem Äethylazetat wird zugegeben, und das Gemisch wird 30 Minuten gerührt.. Das Gemisch wird zur Trockene verdampft, mit wasserfreiem Aether digeriert und im Vakuum getrocknet. Man erhält 4-0-Azetyl-6-azido-2,3,6-trideoxy-2-nitroso-a-D-Glucopyranosyl chlor id (l46 mgr) als farblosen Stoff" [α]ί:⁶ + 98.8° (CHCl ), V max (CHCl^) 2110, 1750, 1220,- Ϊθ4θ cm'¹, £ (CDCl,) 2.09, 2.11 (3H, S, OAz)

409816/1162

September l4, 1973

2051X-?TG--£50

GG/mk

und 6.71, 6.84- ppm» (IH, D, J=}.5Hz, H₁) (3*2).

5,2' ,4^f-Tri-0-azetyl-l,3,3' -tri-N-earbobenzoxygaramin-(7*1 g) und 4-0-Azetyl-6-azido-2,3,6-trideoxy--2-nitrosoa-D-glucopyranosylchlorid (4.2 g) werden in wiederholt destilliertem Dimethylformamid (l60 ml), das N,N,2,6-r Tetramethylanilin (0,9 g) enthält, gelöst, und die Lösung wird bei 25° 94 Stunden belassen. Die Lösung wird eingeengt, auf Eiswasser gegossen, der Niederschlag abfiltriert, getrocknet und auf einer Silikagelsäule (150x5 cm) chromatographiert, wobei 1$ Methanol in Chloroform als Eluent verwendet wird. Man erhält 0-[4-0-Azetyl-6-azido-2,3*6-trideoxy-2-oximino-a-D-glucopyranosyl-(l—>4) ]-5,2^I,4^f-tri-O-azetyl-l,j5,3^! -tri-N-carbobenzoxygaramin (6.3 g) als farblosen, amorphen Feststoff, m.p. 125-133 * (Gefundene, 57.09; H, 5.82; N, 8.65. C₅₁Hg₁N₇ ⁰X₉ benötigt: C, 56.92, H, 5.71; N, 9.11$) [a]^⁶ +150.5° (CH₅OH), (T max (CHCl ) 33^0, 2110, 1740, 1700, 1220, I030 cm"¹, (CDCl ) fl.27, I.38 (3H, breites S, 4"-CH,), I.9I, 2.01 (12H/ breites S, OAz), 2.86 (3H, breites S, 3"-NHCH₃), 5.04, 5.11, 5.17 (6h, breites S, -CH₂CgH ) und 7.30, 7.31 ppm. (15H, S, -CHgCgH ). Das Azid wird wie in Beispiel 9 weiterreagieren gelassen und man erhält 0-2,6-Diamino-2,3,6-trideoxy-a-D-glucopyranosyl-(1-^ 4)-garamin.

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September l4, 1973

-2031X-FTG-EJl CG/mk

Beispiel 11

O- [3,4-Di-0-azetyl-6-azido_T2,6-dideoxy-2~oximino-a-D-glueopyranosyl-(l-»4) J-5,2' ,4' -tri-0-azetyl-l,3»3^I-tri-N-carbobenzoxygaramin (5OO mg) in Eisess3g(7 ml) wird mit Lävulinsäure (Ig) und IN Chlorwasserstoffsäure ( 1 ml) behandelt und das Gemisch bei 25 l8 Stunden gerührt. Das Gemisch wird in Methylenchlorid aufgenommen, mit wässerigem Natriumbikarbonat und Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird in Dioxan (10 ml), welches Wasser (1 ml) enthält, gelöst und die Lösung auf 5° abgekühlt. Es wird Natriumborhydrid (100 mg) in Dioxan (2 ml) und Wasser (4 ml) tropfenweise und unter Rühren zugegeben. Es wird bei 5° 1/2 Stunde und bei 25° eine Stunde weitergerührt. Die Reaktion wird mit Essigsäure abgebrochen, und es wird zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird in Methanol (40 ml) aufgenommen und in Gegenwart von 10$ Palladium auf Kohle bei 25° und 4 at 90 Stunden hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert, das Filtrat zur Trockene verdampft und in Methanol-konz. Ammoniumhydroxyd (1:2) (40 ml) aufgenommen. Man erhitzt in einer Bombe auf 100° 16 Stunden lang. Die Lösung wird zur Trockene verdampft und der Rückstand mit 5%

AO9816/1162

September I^ 1973 2Ö51X-PTG-EJ2 /

2349374

Matriumhydroxyd In Wasser (30 ail) l6 Stunden unter Rückfluss erhitzt ο Das Gemisch wird abgekühlt ;> Mit Amberlit IRC 50-Harz neutralisiert und das Gemenge auf eine Säule aufgegebene Es "wird mit Wasser gewaschen und das-Anti« blotlkum mit 1,5 M Aimnonlurahydroxyd (1 1) eluiert. Das basische Sluat ΐ-iird zur Trockene verdampft und auf einer Silikagelsäule (1X0x2,5 cm) ehiOmatographlert., wobei die untere Phase eines Chloroform-Methanol-Ansmoniwnhydroxyd (Iilsi) Systems als Elnent verwendet wItcL Man erhält Gen·» tamicin B (40 mg) als farblosen^ amorphon feststoff nach der Behandlung mit Ämberlit IR¹I-OlS-HaI³Z vmü G@frlertroeknung, m.p. 157-159° (Aethanolsolvat) (ßefmadeng C₉ 47.78^ H, 8.38ϊ N, 10*59» ⁰IAsViO^{0 C}2^H5^{0!! feenöti}StS G,

47.7Ο1 E₃ QAls N₅ io.6Oj6), ra/e 485.26665 (M"⁵" + 1,

benötigt m/ e 4S^₀26661), [ajg^ö + 175»8°

[HpO), ymax (KCl)" 3300, 1050 em""¹, 6 (DQ) I₉2g (3H, S,

η ^ , * ' , J=12,5H2

^-CH,), 1.23 -(1H, Q, J=12Hz₂ H_Offiv), 1«98 UH, DT₅ J=3«75Hz, I

H_2eq), S.52 DH, S, 3"-NCH₅), 4o04 (IH, D, J=IS₀5Hz, 5.07 (IH, D, J=4Hz, H₁,,) und 5.31 ppm« H₁,), ieJ₂₉₀-6_a830 (TACu)

Beispiel 12

0- [4-0-Azetyl-2,3-dideoxy=2-oximino-.eo-tosyl-a~D-glucopyranosyl-(1-^ 4)J-5,2·, 4'-tri-O-azetyl-1,3,3'-tri-N-üarbo»

- 409816/1182 '

-68-

Septerncer l4, 1975

205IX-FT&-E53

GG/mk

CV

benz.oxygaramin (5 g) wird in Eisessig (75 ml) gelöst; Lävulinsäure (7, 5 ml) und IN Chlorwasserstoffsäure (10 ml) werden zugegeben und das Gemisch wird bei 25° 20 Stunden belassen. Das Reaktionsgemisch wird mit Methylenchlorid (700 ml) verdünnt und drei Mal mit 5% Natriumbikarbonat in Wasser und dann mit Wasser gewaschen. Das Lösungsmittel wird verdampft und der Rückstand in Dioxan (lOO ml) und Wasser (10 ml) aufgenommen. Die Lösung wird auf 5° abgekühlt, Natriumborhydrid (2 g) in Dioxan (20 ml) und Wasser (40 ml) wird tropfenweise unter Rühren zugegeben, und das Rühren wird für weitere ^O Minuten bei 5° und 1 Stunde bei 25° fortgesetzt. Das überschüssige Natriumborhydrid wird durch tropfenweise Zugabe von Essigsäure zerstört, und die Lösung wird zur Trockene verdampft. Man erhält 0-[^-O- ^-deoxy-o-O-tosyl-a-D-glucopyranosyl-Cl-M) ]-5,2^!,4'-tri-0-azetyl-1,3*3'-tri-N-carbobenzoxygaramin.

Dieses (15O mg) wird in Methanol (40 ml), das bei 0° mit Ammoniak gesättigt ist, aufgenommen und in einer Bombe 16 Stunden auf 100° erhitzt. Die Lösung wird zur Trockene verdampft und der Rückstand in 5#igem Natriumhydroxyd (50 ml) aufgenommen und 16 Stunden unter Rückfluss gekocht. Das

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September l^Ji, 1973 CG/nuc

Reaktionsgemisch wird mit Amberlit IRC50 Harz neutralisiert, das Gemenge auf eine Säule gegeben und mit Wasser (l 1) gewaschen. Das Antibiotikum wird sodann'mit 1,5N Ammonium hydroxyd (1,5 l) eluiert und das Eluat zur Trockene verdampft. Man chromatographiert auf einer Silikagelsäule (l60x2,5 cm) unter Verwendung von Chloroform-Methanol-Ammoniumhydroxyd (7$) (1:2:1) als Eluent und dann auf einer Silikagelsäule (110x2,5 cm) unter Verwendung der unteren Phase eines Chloroform-Methanol-Ammoniumhydroxyd (1:1:1)-

3'-DeoxygentamicinB (9 mg) Systems als Eluent. Man erhältIals farblosen Peststoff

nach dem Behandeln mit Amberlit IR401S und Gefriertrocknung m/e 467 (M⁺ + 1) (C₁₉H₅₃N₄O₉ benötigt M⁺ + 1, 467), 6" (D₃O +

DCl) I.30 (3H, S, 4"-CH₃), 2.89 (3H, S, 5"-NCH ), 5.O8

(IH, D, J₁B ₂«=5.5Hz, H₁,,) und 5.4l ppm. (IH, D, J₁, ₂,=4Hz

Beispiel Γ5

0- [4-0-Azetyl-3~deoxy-6-0-tosyl-a-D-glucopyranosyl-(1-5,2^l,4^l-tri-0-azetyl-l,5_J5^f-tri-N-carbobenzoxygaramin (2.5 g) wird in wasserfreiem Pyridin (25 ml) gelöst,und Essigsäureanhydrid (2,3 ml) werden zugegeben. Die Mischung wird bei 25 18 Stunden belassen, sodann in V/asser gegossen, der

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-70-

September Ik₃ 1973 205IX-FTG-S 35 ■CG/rak

234997

Niederschlag'abfiltrdezi; und getrocknet.» Das Azetat (2,5 s) und Natriiaiaazid (2,8 g) werden in Hexame thylphosphor amid (90 ml) gelöst und die Lösung bei 25° 65 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wird in Wasser gegossen,, rait Aether extrahiert, der Extrakt über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockene verdampft. Man erhält das Azid als farblosen amorphen Feststoff, der in Methanol aufgenommen wird und in Gegenwart von 10$. Palladium auf Kohle bei 25 und 4 at .19 Stunden hydriert wird«. Der Katalysator tfird abfiltriert und das Filtrat zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird in 5/^igem Natriumhydroxyd (100 ml) aufgenommen und 16 Stunden unter Rückfluss gekocht» Das Geraisch wird abgekühlt, mit Araberlit IRC50 Harz neutralisiert und wie in Beispiel 12 aufgearbeitete Man erhält jH'-Deoxygentamicin B mit denselben physikalischen Eigenschaften wie in Beispiel 12.

Beispiel 14

0- [5-Deoxy-2, ^di-O-azetyl-.ö-O-tosyl-a-D-glucopyränosyl-(l-> 4)1-5,2* #V-tri-O-azetyl-1,3,3¹-tri-N-carbobenzoxygaramin (230 mg) wird in Methanol (60 ml), das bei 0° an Methylamin gesättigt ist, gelöst, und das Gemisch wird in einer Bombe 17 Stunden auf lj50° erhitzt. Die. Lösung wird

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September l4, 197*3

203ix-FT'x-:>236

CG/mk

zur Trockene verdampft und der Rückstand in 5$>igem Natriumhydroxyd (45 ml) aufgenommen. Die Lösung wird 16 Stunden unter Rückfluss gekocht, mit Amberlit IRC50 Harz neutralisiert und das Gemenge auf eine Säule aufgebracht. Das Harz wird mit Wasser gewaschen (1 1) und das Antibiotikum mit 1,5N Ammoniumhydroxyd (1,5 1) eluiert. Das Eluat wird zur Trockene verdampft und auf einer SiIikagelsäule(l45x2,5 cm) unter Verwendung von Chloroform-Methanol-7# Ammoniumhydroxyd (1:2:1) als Eluent ehromatographiert. Man erhält J¹-Oeoxy-6¹ -N-methylgentamicin B als farblosen Feststoff (32 mg) nach Behandlung mit Amberlit IR40IS-Harz und Gefriertrocknung, m/e 48l (M⁺ +1), 6* (D₃O) 1.13 (3H, S, 4V-CH₃), 2.25 (3H, S, 6'-NCH₃), 2.44 (3H, S, 3"-NCH ), 5.00 (IH, D, J=3.5Hz, H₁,,) und 5.Ο8 ppm. (IH, D, J=3.5Hz, H₁₁).

Beispiel 15

0- [^^,e-Tri-Ö-azetyl^-deoxy^-oximino-a-D-glucopyranosyl-(l-^4)J-5,2',4¹-tri-0-azetyl-l,3,3'-tri-N-carbobenzoxygaramin (500 mg) in Eisessig (7 ml) wird mit Lävulinsäure (1 g) und 1 N Chlorwasserstoffsäure (1 ml) behandelt, und

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September 14, 1973 2051X-B¹TG-EJ?

co/*

das Gemisch wird bei 25° l8 Stunden gerührt. Das Gemisch wird mit Methylenchlorid extrahiert, Und der Extrakt wird mit wässerigem Natriumbikarbonat und Wasser gewaschen. Es wird über Magnesiumsulfat getrocknet, die Lösung eingedampft und der Rückstand in Dioxan (10 ml)-Wasser (1 ml) aufgenommen und auf 5 abgekühlt. Natriumborhydrid (100 mg) in Dioxan (2 ml) und Wasser (4 ml) wird tropfenweise und unter Rühren zugefügt. Es wird bei 5° 1/2 Stunde und bei 25° eine Stunde weitergerührt, dann wird die Reaktion mit Essigsäure unterbrochen und das Gemisch zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird bei -70 in flüssigem Ammoniak (8o ml) aufgelöst, und Natrium (l g) wird zugegeben. Man rührt bei -70° 3 Stunden, unterbricht die Reaktion durch tropfenweise Zugabe von Wasser und lässt den Ammoniak über Nacht verdunsten. Der Rückstand wird in Wasser aufgenommen, Amberlit IRC50 Harz (200 g) werden zugegeben und 2 Stunden stehen gelassen. Die Harzaufschlämmung wird auf eine Säule gegeben, das Harz mit Wasser gewaschen, und das Produkt mit 1,5. N Ammoniumhydroxyd eluiert. Das basische Eluat wird eingedampft.,und.der Rückstand auf einer Silikagelsäule (160x2.^5, cm) _rmit phIoroform-Methanol-7$A'mmor.iumhydroxyd ^. (1:2:1).,als Eluent chromatographiert. Man erhält 0-a-D-

0 9 8-1-6/116 2 -73- ^;:

3-Frö-£38 CG/mk

gluGopyranosyl(l-»4)-garamin (39 mg) als farblosen, amorphen Feststoff nach der Behandlung mit Amberlit IR401S Harz und Gefriertrocknung (Gefunden: C, 46.93; H,-'7.82; N, 8.87.· ^C19^H37^N3°11 ^benötiS^fc: °> ⁴7.19i H, 7.71; N, 8.69^), m/e 484 (M⁺ + 1), [a]p⁶ + 146.3° (HgO), V max (KCl) 3300, IO5O cm"¹, S (D₂O) I.I6 (3H, S, 4"-CH₃), 2.47 (3H, S, 3"-NCH ), 5.01 (IH, D, J=4Hz,. H₁,,), und 5.12 ppm. (IH, D,

J= 3.5Hz, H₁,), [O]₂₉₀ - 7,380 (TACu).

Beispiel l6

0-f3>4, ö-Tri-O-azetyl-S-deoxy^-oximino-ci-D-glucopyranosyl-(l->4) ]-5,2',4' -tri-O-azetyl-1,3,3' -tri-N-carbobenzoxygaramin (500 mg) wird in Dioxan (10 ml) gelöst, festes Ammoniumazetat (5 g) und 50^ige Essigsäure (2 ml) werden zugegeben, und das Gemisch wird unter Stickstoff gerührt. Es wird Titantrichlorid (20$ige Lösung ) (12 ml) langsam zugegeben, und das Gemisch wird bei 25 eine Stunde gerührt. Es wird Wasser zugefügt und das Reaktionsgemisch drei Mal mit Chloroform extrahiert. Der Chloroformextrakt wird mit Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, und zur Trockene .verdampft. Der Rückstand wird in einem Gemisch von Dioxan (10 ml) und Wasser (l ml) aufgenommen und auf 5 abgekühlt. Natriumborhydrid (100 mg) in Dioxan

AO 9 8-1-6/ 1 162 .

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September l4, 1973

203IX-FT&-E59

CG/mk

(2 ml) und Wasser (4 ml) wird unter Rühren langsam zugegeben. Das Gemisch wird bei 5° l/2 Stunde und bei 25° eine Stunde gerührt., und das überschüssige Hydrid wird durch tropfenweise Zugabe von Essigsäure zerstört. Die Lösung wird zur Trockene verdampft und mit Natrium in flüssigem Ammoniak wie in Beispiel 15 behandelt. Man erhält O-a-D-glucopyranosyl-(l—»4)-garamin (l4 mg) mit denselben physikalischen Eigenschaften wie in Beispiel 15.

Beispiel 17

0- [5, 4, ö-Tri-O-azetyl^-deoxy^-oximino-a-D-rglucopyranosyl-(1_* 4)J-5,2',V-tri-O-azetyl-1,3,3'-tri-N-carbobenzoxygaramin (500 mg) wird in Ij2-Dimethoxyäthan (10 ml) gelöst und Wasser (6 Tropfen) und 70$ Perchlorsäure (8 Tropfen) werden zugegeben. Es wird sodann Thallium (Hl)-nitrat (l,5g) in 1,2-Dimethoxyäthan (10 ml) unter Rühren zugegeben und das Gemisch wird bei 25 19 Stunden gerührt. Es wird danach mit Chloroform verdünnt und mit Wasser gewaschen. Der Chloroformextrakt wird über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird mit Natriumborhydrid reduziert und die Schutzgruppen mit Natrium in flüssigem Ammoniak wie in Beispiel 16 entfernt. Man erhält

409816/1162 -75-

September 14, 1973 2053 X-FT3-S40 CG/mk

0-a-D-glucopyranosyl-(l-»4)-garamin (I5 mg) mit denselben physikalischen Eigenschaften wie in Beispiel 15.

Beispiel l8

5,2',4'-Tri-O-azetyl-1,3,3¹-tri-N-earbobenzoxygaramin (800 mg), 2-0-Benzyl-3,4,6-tri-O-p-nitrobenzoyl-a-D-glucopyränosylbromid (87I mg)jQuecksilbercyanid (4θβ mg) und wasserfreies Calziumsulfat (4,2 g) in wasserfreiem Toluol (75-ml) werden gerührt und unter Stickstoff 2 Tage auf 70° erhitzt. Das Gemisch wird abgekühlt, filtriert und der Rückstand mit Aethylazetat·(200 ml) gewaschen. Die vereinigten Filtrate und Waschflüssigkeiten werden zweimal mit 20#iger Kaliumbromidlösung (JOO ml) und dann mit Wasser (300 ml) ausgeschüttelt und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wird verdampft und der Rückstand auf 15 Silikagel PF-Platten (20x40 cm, 2 mm dick) chromatographiert, wobei Benzol-Aether-Methanol(49,5:49,5:1) als Eluent verwendet wird. Man erhält 0-[2-0-Benzyl-3,4,6-tri-0-p-nitrobenzoyl-a-D-glucopyranosyl-(l-»4)]-5,2',4'-tri-0-azetyl-1,5,3'-tri-N-earbobenzoxygaramin (375 mg),(Gefunden: C, 60.07; H, 5.00; N, 5-68. C₇₇H₇₆N₆O₃₉ benötigt: C, 59·?6; H, 4.92; N, 5.4O#), S (CDCl₃) f 1.28, 1.42 OH, breites S, 4"-CH,),

4098 16/1162 .-76-

September l4, 1973

2031Χ-ΡΤΓχ-Ε4ΐ

CG/mk

1.95, 1.98, 2.05 (9H, breites S, OAz), 2.90 (3H, breites S, 3"-NCH₃), 7.20 (5H, breites S, C₆H₅CHg-O-), 7*35 (15H, breites S, CgH CH_?0C0), und 8.17 ppm, (12H, breites S, p-NOg-benzoat). · ■ .

Das Trisaccharid (320 mg) wird in einem Gemisch aus Methanol (180 ml) und konz.₍Ammoniumhydroxyd (20 ml) gelöst, und die Lösung wird bei 25° l8 Stunden gerührt. Die Lösung wird eingedampft und der Rückstand in flüssigem Ammoniak-(100 ml) aufgenommen und auf einem Trockeneis-Azeton Bad gekühlt. Natrium (400 mg) wird zugegeben und das Gemisch zwei Stunden gerührt. Ueberschüssiges Natrium wird durch sorgfältige Zugabe von Wasser (10 ml) zerstört und die Lösung wird langsam auf 25° gebracht. Der Rückstand wird auf eine Säule mit Biorex 70 Harz (H⁺Form) gebracht, mit destilliertem Wasser (30 ml) gewaschen, um neutrale Verunreinigungen .zu entfernen, und das Produkt wird mit 1,5 M Ammoniumhydroxyd eluiert. Das Eluat wird zur Trockene verdampft, und der Rückstand auf einer Silikagelsäule (5 g) mit der unteren Phase eines Chloroform-Methanol-Ammoniumhydroxyd (lil:l)~ Systems als Eluent chromatographiert. Man erhält 0-a-D-glucopyranosyl-(l-* 4)-garamin (34 mg) als farblosen Peststoff nach der Behandlung mit Amberlit IR401S Harz und Gefrier·? .trocknung. Das Produkt.ist _m±t dem von Beispiel 15 identisch.

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-77- ■

September l4_t 1973 aX- FTC-E42

Beispiel 19

3'-Deoxygentamicin Xp (900 mg) wird in Wasser (25 ml), das Natriumkarbonat (0,5 g) enthält, gelöst,und Carbobenzoxychlorid (4 ml) wird zugegeben. Das Gemisch wird lS.Stunden bei 25° gerührt. Die unlöslichen.Bestandteile werden abfiltriert, getrocknet und auf einer Silikagelsäule (110x2,5 cm) mit 9$ Methanol in Chloroform als Eluent chromatographiert. 1,3,2' ,3^H-Tetra-N-carbobenzoxy-j5^f -deoxygentamicin X_p wurde als farbloser, amorpher Feststoff erhalten (1.06 g) (Gefunden: C₃60.90; H, 6.3ÖJ N, 5·70. ⁰C₁Hg₂N^O₁₇ benötigt: C, 61.07; H,'6.23; N, 5.59Ji), [aj^⁶ + 76.5° (DMSO), V max

(CHCl ) 3300, I69O, 15^0, IO35 cm"¹, 6 (d₆-DMS0)"^"0.90 (3H, breites S, 4"-CIL), 2,98 (JH, breites S, 3"-NCH₃), 5.02 (8H, breites S,.CgH^CHgOCO) und 7.32 ppm (2OH, breites S, C₆H₅CH₂OCO).

1*3*2',3"-Tetra-N-carbobenzoxy^' -deoxygentamicin X₂ (0.99 g) und Tritylchlorid (0,293 g) werden in wasserfreiem Pyridin (10 ml) gelöst, und das Gemisch wird bei 25° belassen. Nach 24 Stunden wird zusätzliches Tritylchlorid (0,il4 g) zugegeben, und nach weiteren 46 Stunden wird das Gemisch auf Eiswasser gegeben und das Tritylchlorid abfiltriert und getrocknet (1,22 g). Dieses wird in wasserfreiem Pyridin

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September l4, I973 2031X-F7G-E43

CG/ml:

auf genommen ,und Essigsäureanhydrid (4 ml)wird zugegeben. Nach l8 Stunden bei 2^³ wird die Lösung in Eiswasser gegossen und der Niederschlag isoliert. Chromatographie auf einer Silikagelsäule (110x2,5 cm) mit 2% Methanol in Chloroform als Eluent ergibt 4',2"-Di-0-azetyl-l,3,2',3^!ltetra-N-carbobenzoxy-^'-deoxy-o'-O-tHbylgentami-. . ein Xg als farblosen, amorphen Feststoff (Ό.9 g).

4^t,2^II-Di-0-azetyl-l,3,2^l,3"-tetra-N-carbobenzoxy-3^!- deoxy-e'-O-tritylgentamiein X~ (0.9 g) wird in Eisessig (35 ml) gelöst und die Lösung wird auf einem Wasserbad drei. Stunden erhitzt. Das Gemisch wird zur Trockene verdampft, der Rückstand in Chloroform aufgenommen, mit Wasser ausgeschüttelt, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingedampft. Man erhält 4' ,^"-Di-O-azetyl-l^^'^'-tetra-N-carbobenzoxy-J'-deoxygentamicin Xp als farblosen, amorphen » Peststoff (0,61 g). Dieser wird in Pyridin (10 ml) gelöst, und Tosylchlorid (0,6 g) wird zugegeben. Das Reaktionsgemische wird bei 25 23 Stunden belassen, darauf auf Eiswasser gegossen und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingedampft. Das Rohprodukt wird auf einer Silikagelsäule (110x2,5 cm) chromatographiert und mit 3,5$ Methanol in Chloroform eluiert. Man erhält 4',2"-Di-0~azetyl-1*3>2',3"-tetra-N-carbobenzoxy-3'-deoxy-6'-O-tosylgentamiein

4098 16/1162 . . -79-

September l4, 1975 CG/mk

X_ als farblosen, amorphen Peststoff (l6j5 rag), (Gefunden:

C, 59.87; H, 5.78; N, 4.26; S, 2.75. ^C62^H72^N4°21^{S benöti}S^t: C, 59.99; H, 5.85; N, 4.51; S, 2.58^) Vmax (CHCl₃) 3400, 33OO, 1725, I5OO, 1220, IO3O cm"¹ , S(CDCl )1"0.99 (3H, ·

'S

breites S, 4"-CH,) I.83 (6H, breites S, 4',2"-0Az), 2.4l

(3H, breites S, CH₃C₆H^SO₂O-), 2.88 (3H, breites S,-3"-NCH₅) 5.02 (8h, breites $, C₅H CH₃OCO) und 7.27, 7.31, 7.69, 7-.'82 ppm (24h, breites S, aromatischer H).

4',2"-Di-O-azetyl-1,3,2',3"-tetra-N-carbobenzoxy-3'_ deoxy— 6'-0-tosylgentamicin Xp (l44 mg) wird in wasserfreiem Methanol (2 ml) gelöst und die Lösung mit Methylamin bei 0° gesättigt. Darauf wird in einer Bombe 18 Stunden auf 135° erhitzt. Die Lösung wird abgekühlt und zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird mit 5$ Natriumhydroxyd ' (3 ml) l8 Stunden unter Rückfluss gekocht, die Lösung wird mit Amberlit IRC50 Harz neutralisiert und das Gemisch auf eine Säule gebracht, auf der das Harz mit Wasser gewaschen wird. Das Rohprodukt wird von Harz mit 1,5N Ammoniumhydroxyd eluiert und die Lösung zur Trockene verdampft. Der Rückstand wird mit Hydrazinhydrat (1 ml) bei 125° 24 Stunden auf Rückfluss gekocht und dann zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird auf einer Silikagelsäule (110x1 cm) chroniatographiert und mit der unteren Phase eines Chloroform-Methanol-konz.

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-80-

September l4, 1975

205IX-FTG-45

CG/mk

Ammoniumhydroxyd- (1:1:1)-»System eluiert. Die vereinigten Fraktionen mit dem Antibiotikum werden mit Amberlit IRA 40lS Harz behandelt und gefriergetrocknet. Man erhält 0-2-Amino-6-methylamino-2,3i β-trideoxy-a-D-glucopyranosyl- (l—»4-) garamin (20 mg) als farblosen, amorphen Feststoff m/e 480 (M⁺ +1).

-81-

409816/1162

2031X-FTG-E-46 CG-re

Beispiel 20

A. Sisomicin (25g) und Natriumkarbonat (IJg) werden in destilliertem Vfasser (625 ml) gelöst., und Carbobenzoxychlorid (100 ml) wird der gerührten Lösung bei 25° zugegeben. Man rührt das Gemisch l6 Stunden, filtriert den Peststoff ab, wäscht gut mit Wasser, trocknet im Vakuum und wäscht danach mit Hexan. Man erhält 1,3,2',^'^"-Penta-N-carbobenzoxy-sisomicin (62 g) (99^) als. farblosen, amorphen Feststoff. Durch Chromatographie auf Silikagelplatten, wobei 40$ Azeton in Benzol als Eluent verwendet wird, erhält man eine analytisch reine Probe, ra.p. 165-173° (dec), (Gefunden: C₃ 63.53,· H, 6.23; N, 6.28. C₅₉H₆₇N₅O₁₇ benötigt: C, 63.²H; H, 5-99; N, 6.27#), [a]^⁶ + 96.2° (CH₃OH),Ymax (CHCl,) 3¹WO, 1720, 1515, 1215, 1050, cm -¹, β (CDCl ) "J" 1.03 (3H, breites Singlet, 4" -CH ), 3-02 (3H, breites Singlet, 3" -N-CH₃), 5.02 (1OH, breites Singlet, ₆Hf-), und 3,28, 3·30 ppm. (25H, breite Singlets,

B. (I) l,3,2^t,6^r _J3^K-Penta-N-carbobenzoxysisomicin (436 g) wird in Tetrahydrofuran (3 Liter) gelöst und Amber lit IR 120 (H ) Harz (1 kg) wird zugegeben. Das Gemisch wird drei Tage lang bei 25° belassen und dann filtriert, wobei das Harz mit Tetrahydrofuran gewaschen wird.

.. . 4098 16/1162

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September l4, I973 2031X-FTG-E--47 CG-re .

Die vereinigten Filtrate werden im Vakuum in der Gegenwart von einigen ml." Wasser eingedampft und das erhaltene Produkt wird auf Silikagel chromatographiert, wobei 10$ Methanol in Chloroform als Eluent dient. Man erhält 1,3,3'-Tri-N-carbobenzoxygaramin (200g.) (71$) als farblosen_tamporphen Feststoff m.p. 104-112°, (Gefunden: C,60.12; H, 5-83; N, 5-63-C^₇H₁₁₅N₅O₁₂-H₂O benötigt: C, 59-92; H, 6.34; N, 5.67$), f 69.6° (C H₅OH), Xmax (OH₃OH) 206 ηιμ (C28.00.0) und (CHCl₅) 3350, 1700, I525, 694 o*"¹,$ (CDCl₅) +0.99 (3H, breites S, 4'-CH₃), 3-00 (3H, breites S₅ 3'-NCH₃), 5.00. (6h, breites S, -CH₂C₆H₅), 7.20 ppm. (15H, Multiplet, . -CH₂C₆H₅), & (DMSO bei 120°) Ο.96 (3H, S, 4'-CH₅), 2.99

(3H, S, 3'-NCH₃), 5.Ο2, 5.05, 5.11 (2H von jeder Gruppe, S, -CH₂C₆H₅), und 3.3I Ppm· (15H, S, -(

(II) l,3,2^l _i6^t,3^ll-Penta-N-carbobenzoxysisomicin (100 mg.)

wird in Tetrahydrofuran (20 ml) gelöst, mit konz. Schwefelsäure auf pH 1 gebracht und die Lösung bei 25° l6 Stunden belassen.

Das Reaktionsgemisch wird über Amberlit IR 45 Harz laufen gelassen, der Eluent. verdampft und der Rückstand auf Silikagelplatten chrom-

atographiert, wobei 10$ Methanol in Chloroform als Eluent

verwendet wird. Man erhält l,3,3^l-Tri-N-carbobenzoxygaramin (4o mg.) (62$) als farblosen, amorphen Peststoff mit denselben

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. -83- ■ -" "■'

September 14, 1973 203IX-FTG-E -48-CG-re

physikalischen Eigenschaften, wie in I beschrieben,

' (III) l,3,2',6',3"-Penta-N-carbobenzoxy-sisomicin (1.25 g·) wird auf Silikagel chromatographiert, wobei 10$ Methanol in Chloroform als Eluent verwendet wird, und man erhält l,3,3^r-Tri-N-carbobenzoxygaramin (450 mg.) (56$>) als farblosen, amorphen Feststoff mit identischen physikalischen Eigenschaften, wie in I beschrieben.

(rv) l,3,2^t,6^!,3"-Penta-N-carbobenzoxy-sisomicin (3 g)i Natriumbikarbohat (0,9 g) und m-Chlorperbenzoesäure (0,9 g) werden in Tetrahydrofuran (75 ml)* das Wasser (5,75 ml) enthält, gelöst,und das Gemisch wird 16 Stund=nbei gerührt. Das Reaktionsgemisch wird eingedampft und der Rückstand in Wasser und Chloroform aufgenommen. Die Chloroformlösung wird über Magnesiumsulfat getrocknet, zur Trockene.verdampft und der Rückstand auf einer Silikagelsäule chromatographiert, wobei 7$ Methanol in Chloroform als EJluent verwendet wird. Man erhält 1,3*3'-Tri-N-carbobenzoxygaramin (O.52 g) (2J#) als farblosen, amorphen Peststoff mit identischen physikalischen Eigenschaften wie in I.

(T) l,3,2',6',3"-Penta-N-carbobenzoxygaramin (3 g) und Bariumkarbonat (0,6 g) in Tetrahydrofuran (100 ml) werden mit Unterbromigersäure (26 ml) (hergestellt aus 3,6 g Brom in 100 ml Wasser) behandelt., und das Gemisch wird

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September 14, 1973

2031X-FTG-E-^-

CG-re

bei 25° ΐβ Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wird eingeengt und der Rückstand in Wasser und Chloroform aufgenommen. Die Chl'oroformlösung wird über Magnesiumsulfat getrocknet, eingedampft und der Rückstand über Silikagel .chromatographiert, wobei 7$ Methanol inChloroform als Eluent 'verwendet wird. Man er- · hält l,3,3^!-Tri-N-carbobenzoxygaramin (84 mg.) (4$) als farblosen, amporphen Feststoff mit identischen physikalischen Daten wie in

Bespiel 21

Sisomicin (2 g) wird in Wasser, das Natriumbikarbonat (4g) enthält, gelöst und Aethoxycarbonylchlorid (5 ml) wird zugegeben. Das Gemisch wird l6 Stunden bei 25° gerührt, sodann mit Chloroform extrahiert, der. Extrakt mit Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wird in Tetrahydrofuran (100 ml) aufgenommen, mit Amberlit IR 120 Harz (30 g) «,behandelt und das Gemisch wird bei 25° 72 Stunden gerührt. Das Produkt wird mit Methanol vom Harz eluiert, das Eluat eingedampft

auf .

und leiner Silikagelsäule (110 χ 2>5 cm) chromatographiert, wobei

Methanol in Chloroform als Eluent verwendet wird. Man erhält !,^,J'-Tri-N-carbäthoxygaramin (1.0 g.) als farblosen, amorphen Feststoff m.p. 128-l4o°, (Gefunden: C,48.63,· H, 7.25; N. 7-64,

₅₅O₁₂ benötigt: C, 49.18; H, Ί.26; N, 7.82Jg), m/e 537 (M⁺),- q +99.2° (CH₃OH),Ymax (CHCl₃) 3330, 17ΟΟ, 1530* I050, 104o em"¹, -§(CDCl₃)fl.2O (12H, breites M, 4'-CH, und -NHCOOCH₂CH₃), 3.01 (3H, breites S, 3'-NCH₃), 6.10 ppm.. (ÖH, breites M, -NHCOOCH₂CH₃).

4 0 9 8 16/1162 · £5-

205IX-FTG-E-50

Beispiel 22.

A. Sisomicin (6 g) und 4-Dimethylaminopyridin (66 mg.) werden in Pyridin (120 ml) gelöst und Essigsäureanhydrid (28 ml) zugegeben. Das Gemisch wird bei 25° 17 Stunden gerührt, dann wird Methanol zugeben und weitere 4 Stunden stehen gelassen. Nach dem Eindampfen wird der Rückstand mit Toluol solang azecferop destilliert, bis er frei von Pyridin ist. Chromatographie auf Silikagel mit 10$ Methanol in Chloroform als Eluent ergibt !^^',ö'^'-Penta-N-azetyl-S^"-di-0-azetylsisomiein (9 g·) (91$) als farblosen, amorphen Peststoff, m.p. 160-175°, (Gefunden: C, 51.85; H, 6.50; N, 9.43· ^C33^H5i^N5°i4 >H₂0benötigt: C, 52.16; H, 7.03, N, 9-22$), m/e 74l (M⁺), [a]^⁶

+ 174.5° (CH₃OH),Ymax (Mujol) 3280, 1750, I65O, 1550, 12^0, IO5O cm"¹, %(CD₃OD) f 1.02, 1.10 (3H, S, 4"-CH₃), 1.88-2.24 (21H, Singlett,

NAz und OAz), 2.88, 3.00 (3H, S, 3'-NCH-,), 5.20 (IH, breites Multiplett, H,_H), und 5.40 ppm. (IH, breites MuItiplett, H₁₁ ]

B. (I) l,3,2^t,6^t,3^H-Penta-N-azetyl-.5,2"-di-0-azetylsisomicin (10 g.) wird in Dioxan (300 ml)-Wasser (15 ml) gelöst, es wird Natriumbikarbonat (3,66 g) und m-Chlorperbenzoesäure (3,66 g) zugegeben, und die Mischung wird bei 25° 22 1/2 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wird mit Methanol (150 ml) verdünnt und durch ein Bett mit basischer Tonerde (10x2 cm) durchgelassen. Das Eluat wird zur Trockene verdampft und der Rückstand auf Silikagel mit

Methanol in Chloroform als Eluent chromatographiert. Man erhält • 4098 16/1162

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203IX-FTG-E-5I CG-re

(2.24 g.) (31$) als farblosen, amorphen Peststoff, sublimiert bei 139 und schmilzt bei 188-195°, (Gefunden C, 50.17; H, 7-.26; N, 8.I7. Cg₅H₅₇N₅O_n •H₂0 benötigt: C, 50.26; H, 7.15; N, 7-65$)* m/e 531 (M⁺), [ct]^ + 102.5° (CH 0H),Ynax (Nu-JoI) 3300, 1740, I65O, 1550, 1235, 1050 cm."¹, 8 (CD₃OD) ti. 01, 1.14(3H, S, 4'-CH₃), 1.87-2.12 (15H, Singletts, NAz und OAz), 2.91 und 3.00 ppm. (3H, S, 3'-NCH₃), S(DMSO bei 130°) 1.00 (3H, S, 4'-CH₃), 1.74, I.8I, 1.92, 2.00 (12H, S, NAz und OAz), und 2.87 ppm. (3H, S, 3'-NCH₃).

(II) 1,3,2' ,6' ,3^w-Penta-N-azetyl-5,2^ll-di-0-a2etylslsomicin (2g) in Wasser (85 ml) wird mit Hypobromiger Säure (25 ral) (hergestellt aus 3*6 g. Brom und 100 ml Wasser) und Bariumkarbonat (0,5 g) behandelt und das Gemisch wird bei 25° 20 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wird im Vakuum konzentriert und der Rückstand auf Silikagel mit 12$ Methanol in Chloroform als Eluent chromatographiert. Man erhält l_P3j>3^s-TPi-N-azetyl-5-0-azetylgaramin (0.66 g) (4l$) als farblosen, amorphen Peststoff mit denselben physikalischen. Kenndaten wie in I. -

Beispiel 23

JU Sisomicin (2g), Natriumbikarbonat (3g) und 2,4-Dinitrofluorbenzoi (8 g) werden in Azeton-Wasser(3si) (50 ml) gelöst s und das Gemisch wird bei 25° 16 Stunden gerührt.

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September l4, 1973

205IX-FTG-B-52

CG-re

Das Reaktionsgemisch wird im Vakuum zur Trockene verdampft und der Rückstand wird wiederholt mit Tetrahydrofuran und Azeton extrahiert. Die unlöslichen , anorganischen Salze werden abfiItriert und die vereinigten Filtrate eingeengt und auf Silikagel mit J>üfo Azeton in Chloroform als Eluent chromatographiert. Nach dem Waschen mit Methanol erhält man 1,3,2^!,6^I,3"-Penta-N-(2,4-dinitrophenyl)-sisomicin (5 g.) (88$) als gelben, amorphen Feststoff,,, m.p. 195-205°, (,Gefunden: C, 45.82; H, 3-7Ij N, 16.62..C₄₉H₄₇N₁₅

benötigt: C,46.20; H, 3.68; N, 16.50$), i^aU⁶ + 90.0 (Aceton), Xmax (Azeton) 351 rau, (ζ 75,6θθ), Yraax 3330, 1630, 15 90, 1050 cm. "¹S.

B. (I) 1,3,2 ■^I,6^l,5^w-Penta-N- (2,4-dinitrophenyl) sisomicin^l g ) wird im Tetrahydrofuran (50 ml) gelöst und der pH der Lösung wird mit Schwefelsäure auf 1 eingestellt.

Die Lösung wird bei 25° 90 Stunden belassen, mit Bleikarbonat

neutralisiert, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wird

auf Silikage!platten chromatographiert, wobei zunächst 4$ Methanol

_88- 409816/1162

September l4, 1973 2031X-FTG-E-53 CG-re

in Chloroform und dann 8$ Methanol in Chloroform als Eluent verwendet wird. Man erhält 1,3,3'-TrI-N-(2,4-dinitrophenyl)-garamin (133 mg.) (21$) als gelben, amorphen Feststoff mit identischen physikalischen Kenndaten wie in II und 1,3-Di-N-(2,4-dinitrophenyl)-2-deoxystreptamin (l8l mg.) (47$) als gelben,amorphen Feststoff.

(il) Garamin (100 mg.) Natriumbikarbonat (250 mg) und 2,4-Dinitrofluorbenzol (500 mg.) werden in Azeton-Wasser (3:1) (10 ml) gelöst und das Gemisch wird bei 25 lö Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockene verdampft, mit Aethylazetat extrahiert, die anorganischen Salze werden abfiltriert und das Filtrat eingeengt. Der Rückstand wird auf Silikagelplatten unter Verwendung von 25$ Methanol in Chloroform als Eluent chromätographiert / Man erhält 1,3,3' -Τγ1-Ν·(2, 4-dinitrophenyl)-garamin (256 mg.) (100$) als gelben, amorphen Feststoff, m.p. 192-205°, (Gefunden: C, 45.23; H,, 4.34; N, 14.21. C₃₁H₃₃N₉O₁₈ benötigt: C, 45.4; H, 4.03; N, 15.4o$), [ α J^⁶ + 5-6° (Azeton), Xmax (Azeton) 356 mu (£ 42,300),Vmax (Nujol) 3^00, !"630, 1590,

: 40981 6/1162 -89-

September l4, 1973

2031X-FTG-E-5²*

CG-re

1050 cm,"¹5(CD^COCD₃)+1.18, I.31, (3H, Singlet*4'-CH₃), 2.82, 2.89 (3H,S, 3'-NCH₅), 5.5O (IH,D, J₁X₉₂I=JHz, H₁,), und 7.35-9.OO ppm. (9H, Gruppen von Multipletts, aromatischer

(III) l,3_i2^!,6',3"-Penta»N-(2,4-dinitrophenyl)-sisomicin (500 mg.), Natriumkarbonat (1 g) und m-Chlorperbenzpesäure (4,5 ml) werden in Tetrahydrofuran (22 ml), das Wasser (0,5 ml) enthält, gelöst, und das Gemisch wird 7 Tage bei 25° gerührt. Das Gemisch wird auf ein kleines Volumen eingeengt in Chloroform aufgenommen und mit 10^ wässerigem Natriumsulfit, dann mit wässerigem Natriumbikarbonat und sodann mit Wasser ausgeschüttelt. Die Lösung wird über Magnesiumsulfat getrocknet, eingeengt und der Rückstand auf Silikagelplatten mit 20$ Methanol in Chloroform als Eluent chromatographiert. Man erhält l_i3_i3^l-Tri-N-(2,¹i-dinitrophenyl)-gars.min (194 mg.) (60$) als gelben,amorphen Feststoff, der mit dem' in I und II identisch ist.

Beispiel 24

A. Sisomicin (βθθ mg) in wasserfreiem Pyridin (60 ml) wird mit Essigsäureanhydrid (12 rnl) behandelt und das Geraisch l6 Stunden auf Rückfluss erhitzt. Das Gemisch wird mit Methanol verdünnt und bei 25 2 Stunden stehen gelassen. Es wird sodann

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September l4, 1973

203IX-FTG-E-55

CG-re

im Vakuum konzentriert und mit Toluol solange azeotrop destilliert, bis das Pyridin entfernt ist. Der Kickstand wird auf Silikagel chromatographiert, wobei 20$ Methanol in Chloroform als Elueht verwendet wird. Man erhält 1,3,2',6',

5^tl-penta-N-azetyl-5,2",V--tri-0-azetylsisomicin (100 mg,) (10$) als farblosen, amorphen Feststoff,, Gefunden: C₅ 48.47; H, 6.50; W₉ lAj>. C₅₅H₅₃N₅O₁₅ benötigt; C₉ 53.63; H, 6.82; N, 8.9^), m/e 783 (M+), [ α )*⁶ + 77.5⁰ (CH₃OH), y_max (Äidol) 33ΟΟ, I75O, 165.0, 1550* 1230, 1050 cm.-¹,. ζ (CD₃OD)ti.36, 1.44 DH, S, 4"-CH₃), 1.88-2.25" (24H, .Singletb§ NAz, ttnd OAz), "2.85, und 2.99 Ppm» (3H₅ S, 3"-N-CH₃), 6(DMSOb₂I 120°) ΙΟΙ (3H, S, 4"-CH^)₅ I.65 (6h, S, NAz,und£>der CAc), 1.75' (3H, S, NAz₅ und/cder- OAz), I.76 (3H, -S, NAz, und/oderOAz), 1.89 (3H, S, NAz, und/oder OAz), 1.91 (5H, S, NAz,uncyafer OAz), 1,93 (^H, s, "HAz, und/ oder oA'z), 2.75 (3H, S, 5¹-HCH,),-5-05 (3H, D, J-,«' _Pn= '2.5Hz, H₁Ii), uid 5.25 ppm. (IH₁ breites S, H₁O, "^nd l,3,2^!,6-^I,3"-penta-N-a2etyl-5,2"-di-0-azetylsisomicln

(390 mg.) (47$) als farblosen,amorphen Feststoff. .

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2051X-FTG-E-56 Od-re

B. Sisomicin (500 mg) werden in Methanol (25 ml) gelöst und Azeton (25 ml) und Essigsäureanhydrid (8 ml) werden zugegeben. Nach einer halben Stunde wird weiteres Methanol (50. ml) zugesetzt, und das Gemisch wird drei Stunden bei 25 belassen. Nach dem Einengen im Vakuum und Chromatographieren auf Silikagel, wobei die untere Phase eines Chloroform - Methanol-konz. Ammoniumhydroxyd (1:1:1)-Systems als Eluent verwendet wird, erhält man 1,3,2^T,6^!, 3"-Penta-N-azetylsisomicin (6βθ mg.) (90$) als farblosen., amorphen Feststoff, m.p. 188-I98⁰ (dec), Gefunden: C, 52.45; H, 7·2β| Ν, 10.44. C₂₉K^ N₅O₁₂ benötigt: C,52.95J H, 7.20; N, 10.65g), m/e 639 (M⁺- l8), [ α ]^⁶ + 194.6° (CH₃OH),Yma3c (Müjol) 3300, 1650, 1550, 1025 Cm^-1^(CD₃OD) \ 1.01, 1.10 (3H, S,. 4"-CH,), I.90, 1.96, 1.99, 2.Ί5 (15H, S, NAz) 3.OI, J. 135 (3H, S, 3"-NCH₃), 5.19 (IH, D, J_lM. ₂„=4Hz, H₁,,), und 5.54 ppm. (IH, D, J₁, ₂,= 2.5Hz, H₁,), ^(DMSO bei ΐ4θ°) 0..97 (3H, S, 4"-QH,), I.76 (3H, S, NAz), 1.79 (3H, S, NAz), 1.82 (3H, S, NAz), 1.86 (3H, S, NAz), 1.99 (3H, S, NAz), 2.97 (3H, S, 3"-NCH₅), 5.09 (IH, Multiplett, H₁,,)* und 5-52 ppm. (IH, D, J₁I^₂I= 2.5Hz, H₁,).

Beispiel 25

(i)Garamin (500 mg.) in Methanol (17 ml) wird mit Essigsäur eanhydr id (2,5 ml) behandelt, und das Gemisch wird bei 25° 20 Minuten belassen. Der Rückstand wird zur Trockene verdampft und auf Silikagelpiatten chromatographiert, wobei die untere

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September l4, 1973

20^iX-FTG-F^57

CO-re

Phase eines Chloroform—Methanol-konz. Ammoniumhydroxyd (1:1:1). Systems als Eluent verwendet wird. Man erhält 1,3,3'-Tri-Nrazetylgaramin (450 mg.) (65$) als farblosen, amorphen Feststoff,, m.p. 190-195°, (Gefunden: C,49-80; H,7-59i Ν, 9-34-

₉₉

fH_o0 benötigt: C, 49-03; H, 7-53; N, 9-03$), m/e 447 (M⁺), [α]²⁶

- τ ^D

+ 101.4° (C₂H₅OH) Vmax (Nujol) 3240, 1650,1150, 1050 cm. ,

OD) ti-02, 1.12 (3H, S, 4'-CH ), 1.93, 1-9Ö, 2.18 (9H, S, NAz), 3.05, 3-17 (3H, S, 3'-NCH,), und 5-22 ppm. (IH, D, J₁, _ot=4Hz, H₁,), ^"(DMSO bei I70⁰) ^1.00, 1.28 (3H, S, 4'-CH₃), I.8I, I.83, 2.03 (9H,' S, NAz), 2.81, 3.OI (3H, S, 3'-NCH₃), und 5.Ϊ3 ppm-(IH, Multiplett, H₁I)_T

(II) Sisomicin (l g) und Thiolessigsäure (2 ml) werden in einem Gemisch aus Methanol (4 ml) und Azeton (2ml) gelöst und das Gemisch wird in einer Quarzröhre bei 35° 90 Stunden photolysiert, wobei eine 3000 Ä-Niederdruck-Quecksilber-LampeTferv/endung findet. Die Lösung wird auf eine Amberlit IR 45 Säule·aufgegeben,und es wird mit Methanol eluiert. Nach dem Eindampfen des Eluates wird auf Silikagel chromatographiert, wobei die untere Phase eines Chloroform-Met hanol-konz. Ammoniumhydroxyd (1:1:1)-Systems als Eluent verwendet wird. Man erhält 1,3,3'-Tri-N-azetylgaramin (0.47 g) (47$) als farblosen Peststoff mit physikalischen Kenndaten wie in I und l,3,2^!,6',3"-Penta-N-azetyl'sisomicin(0.46 g) (31$)'als farblosen, -amorphen Feststoff.

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September l4, 1973 203IX-PTG-E 58 CG-re

Beispiel 26

(I) l^^'-Tri-N-carbobenzoxygaramin (2.02 g) wird in Methanol (100 ml) gelöst, und 10$ Palladium auf Kohle

(1,0 g) zugegeben. Das Gemisch wird bei 25° und J>,h at ΐβ Stunden hydriert, der Katalysator abfiltriert und mit Methanol gewaschen. Das Filtrat wird eingeengt und der Rückstand auf Silikagel chromatographiert, wobei die untere Phase eines Chlor of ona-Methänol-konz. Ammoniumhydroxyd (2:1:1)-Systems als Eluent verwendet wird. Die Garamin enthaltende Fraktion wird im "Vakuum auf ein kleines Volumen eingeengt und auf Amberlit IR45 Harz aufgegeben.

Das Eluat wird im Vakuum auf ein

kleines Volumen konzentriert und die entstehende Lösung wird gefriergetrocknet. Man erhält Garamin (750 mg.) (84$) als'farblosen, amorphen Feststoff, m.p. 89-99°, (Gefunden:C,48.3I;

H, 8.54; N, 12.87. C₁₅H₂₇N₅O₆ benötigt : C, 48.βθ; H, 8.41; N, 13.08$), m/e 322 (M⁺+!)/ [ α ]^ + Ι35Λ⁰ (H₂O), pKa 8.5, Vmax (Hujol) 3300, I060 cm."¹, 5(ϊ>₂0) 1.19 (3H, S, 4'-CH₅), 2.51 (3H, S, 3'-NCH₅), 2.57 (IH, D, J₂._i5i=10.5 Hz, H₅₈)^ 3.3Ο (IH, D, ^»_&ί5ί₀=12.5 Hz, H₅»_a), 3.79 (IH, DD., J₂^₅,=io:5 Hz, J₁I ₂i=* Hz, H₂J, 4.03 (IH, D, J₅₁^₅,_e=12.5 Hz, H₅, _e), 5.Ο6 ppm. (IH₅D,

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September 14, 1973 205IX-FTG-K 59 CG-re

(ll) 1,3,3^s-Tri-N-carbobenzoxygaramin (500 mg.) und Natriumhydroxyd (2g) werden in Dioxan-Wasser(1:1) (4o ml) gelöst und die Lösung l8 Stunden unter Rückfluss gekocht. Die Lösung wird sodann gekühlt und mit Amberlit IRC-50 Harz neutralisiert. Das Harz wird mit Wasser gewaschen und mit 1,5 M Ammoniutnhydroxyd eluiert. Das basische Eluafwird zur Trockene verdampft und wie in I chromatographiert. Man erhält Garamin (215 mg) (97$) mit denselben physikalischen Eigenschaften wie in I.

Beispiel 27 '

A. l,5i3^T-Ti*i-N-carbobenzoxygaramin (l g.) wird in wasserfreiem Pyridin (l8 ml) gelöst und auf 0° abgekühlt. 2,2,2-TrIchloräthylchloroformiat^getrocknet auf einem Molekularieb) (523 mg) wird tropfenweise und unter Rühren zugegeben. Der Tropftrichter wird . mit wasserfreiem Pyridin (4 ml) gespült. Man setzt das Rühren 30 Minuten fort* bis sich der anfänglich gebildete Niederschlag gelöst hat. Darauf wird das Reaktionsgemisch bei 7° 45 Stunden belassen, in Wasser gegossen und der Niederschlag mit Aethylazetat extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser, 2N-Chlorwasserstoffsäure und Wasser ausgeschüttelt, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird mit Toluol azeotrop destilliert, auf ein kleines Volumen eingeengt und mit Chloroform versetzt. Das unlösliche 1,3*3'-Tri-N-carbobenzoxy-4~0-(2,2,2-trichloräthoxyearbonyl)-garamin (1.1 g.) (87$) wird in Form von farblosen Nadeln erhalten m.p. 220-222°, (Gefunden: C, 53.49! H, 5.36;

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2O3IX-PTG-E -

CC-re

N, 4.77- C₄₀H₄₆N₅O₁₄Cl₃ benötigt: 0,53.43; H, 5·1β; N, 4.67$), [α]ρ^β + 65.9° (CH₃OH), Xmax (CH₃QH) 207 mu (£26,200)_J'V^max(^NuJ^o1) 3450, 3280, 1770, 1700, 1680, 1050, 697 Cm^-1^(CDCl,yfl.26 (3H, breites S, V-CSL), 3.Ο5 (3H₁ breites S, 3'-NCH,),. 4.73 (2H, S, Cl^CCHpOCOO-), und 7-33 ppm* (15H, breites S, -

B. (I) 1,3,3^s -Tri-N-carbobenzoxy-^-O- (2,2,2-trichloräthoxycarbonyl)-garamin (16.5 g) wird in Eisessig (500 ml) gelöst und frisch destilliertes Trifluoressigsaureanhydrid (133 ml) und p-Toluolsulfonsäure (750 mg) werden der gerührten Lösung zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wird 20 Stunden bei 25° gerührt, dann in Eiswasser gegossen, und der gebildete Niederschlag wird mit Aethylazetat extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser, 5$ Natriumkarbonat und Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft- Man erhält 5*2',4^!-Tri-0-azetyl-l,3i3'-Tri-N-carbobenzoxy-4-0-(2,2,2-trichloräthoxycarbonyl)-garamin (I8.8 g) (99$) als farblosen, amorphen Feststoff m.p. 92-100°, (Gefunden: C, 5^.23; H, '5-48; N, 4.25; Cl, 9.55. C₄₆H₅₂N₃O₁₇Cl benötigt: C, 54.15; H, 5-11; N, 4.10; Cl, 10.37$), [α]^^β + 69.0° (CHCl₃), Xmax (CH₃OH) 208 mu (£24,950), Ymax (CHCl,) 1770, 1740, 1220, 1055, 695 Cm^-1^S(CDCU) fl.35 (3H, breites S, 4'-CH,), 1-93, 2.04 (9H, breites S, OAz), 2-90 (3H, breites S, 3'-NCH₃), 4.70 (2H, breites S„ OCHgCCl ), und

7.33 PPm. (l5H,breites S, -CH₂C^), 409816/1162

-96- '

September l4, 1973 203IX-FTG-E 6l CG-re

(II) 1,3,3' -

äthoxycarbonyl)-garamin (lg.) wird in Eisessig (50 ml) gelöst,und das Gemisch wird mit Essigsäufeanhydrid (4,5 ml) und konz. Chlorwasserstoffsäure (0,5 ml) versetzt. Die Lösung wird auf einem Wasserbad drei Stunden erhitzt und das Reaktionsgemisch wie in I aufgearbeitet. Man erhält 5,2', 4' -Tri-O-Azetyl-1, J>, 3' -tri-W-earbobenzoxy-4-0- (2,2,2-trichloräthoxycarbony])-garamin (1.12 g.) (99$) als farblosen Peststoff mit denselben physikalischen Daten wie in (I)".

(III) 1,3/3' -Tri-N-carbobenzoxy-4-0- (2, 2₉ 2-trichloräthoxycarbonyl)-garamin (l g) und ein Gemisch" aus Essigsäureanhydrid (9 ml) und konz. Chlorwasserstoffsäure (l ml) werden bei 25° gerührt. Das anfänglich unlösliche Material geht langsam in Lösung, und die Lösung wird l8 Stunden gerührt. Das Gemisch wird in Wasser gegossen und mit Aethylazetat extrahiert. Der Extrakt wird mit 5$ Natriumbikarbonat und Wasser ausgeschüttelt, über Magnesiumsulfat getrocknet, •filtriert und zur Trockene verdampft. Man erhält5/2',4'-Tri-O-azetyl-1,3,3^?-tri-N-carbobenzoxy-4-0-(2,2,2-trichloräthoxycarbonyl)-garamin (l.l g) (98$) als farblosen Peststoff mit denselben physikalischen Eigenschaften wie in

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September 14, 1973 203IX-FTG-E 62 Q.l-re

C. 5,2%4'-Tri-O-azetyl-l,3,3'-tri-N-carbobenzoxy-4~0-(2,2,2-trichloräthoxycarbonyl)-garamin (l6.6 g_o) wird in' 90$iger Essigsäure (650 ml) gelöst und Zinkstaub (100g) wird unter Rühren, zugegeben. Man rührt bei 25 solange weiter, bis durch Dünnschichtchromatographie kein Ausgangsprodukt mehr nachweisbar ist. Das Zink wird abfiltriert und die wässerige Essigsäure im Vakuum entfernt. Der Rückstand wird in Aethylazetat aufgenommen* mit Wasser ausgeschüttelt, über Magnesiumsulfat getrocknet _s filtriert und zur Trockene verdampft. Man erhält 5,2^r,4^! -Tri-O-azety.1-1,3,3' -tri-N-carbobenzoxygaramin, das auf einer Silikagelsäule (100 χ 5 cm) mit \fo Methanol in Chloroform als Eluent ohromatographiert wird, und wobei das Produkt als farbloser,, amorpher Peststoff anfällt. (12.2 g.) (89^) m.p. 101 -105°, (Gefunden: C, 60.86; H, 6.42; N, 4.98. C^₅H₅₁N O₁₅ benötigt: C, 60.77j H, 6.05; N, 4.9W₅ ί^α1^⁶ + ⁸3· 1° (CH₃OH), Xmax (CH₃OH)

207 mu (£26,500),Yraax -(CHCl,) 3¹I-So, 1740, 1710, 1220,

^ 694 cm"¹, 6(CDCl >tI.30, 1.40 (3H, breites S, 4-'-CH,),

1.95, 2.05, 2.08, :(9H,breites S, OAz), 2.88 (3H, breites S,

), und 7·3^ ppm. (15H, breites S, -Clip

Beispiel 28

A. ' (I) l,3_i3^!-Tri-N-carbobenzoxy-4-0-(2,2,2-trichloräthoxyearbonyl)-garamin (4.2 g) wird in wasserfreiem Pyridin

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(100 ml) gelöst und mit Essigsäureanhydrid (42 ml) versetzt. Das Gemisch wird β Tage bei 25° belassen, dann in. Wasser gegossen und mit Chloroform extrahiert. Der Chloroformextrakt wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert, und eingeengt. Der Rückstand wird auf einer Silikagelsäule (160 χ 2,5 cm) mit 2$ Methanol in Chloroform als Eluent chromatographiert. Man erhält 5*2'-Di-0-azetyl-l,3,3'-tri-N-carbobenzoxy-4-0-(2,2,2-trichloräthoxycarbonyl)-garamin (4.3 g.) (96$) als farblosen* amorphen Peststoff m.p„ 115-120° (Gefunden; C, 53-79; H₅ -5.14, N, 3-91; Cl₅ 10.73- C₄₄

benötigt: C, 53·Υβ; H, 5.-13; N, 4.27; Cl-, 10.82$) \α\ψ + 64.2° (CH₃OH),Vrnax (CHCl₃) 3390, 1760, 1720, 1230, !OSO cm"¹, S (CDCl₃) ti.00, 1.10 (3H, breites S₅ 4^! -CH₃), 1,87, 2.03 (6h, breites S, OAz)₅ 2.89 (3H₅ breites S₅ 3'-NCH₃), 5-02 (6h, breites S, -CH₂CgH₅), und 7.25 ppm. (15H₅ breites M, -CH₂C₆H₅).

(II) 1,3*3^f-Tri-N-carbobenzoxy-4-0-(2₅ 2,2-trichloräthoxycarbonyl)-garamin (fSOO mg ) wird in wasserfreiem Pyridin (25 ml) gelöst und Essigsäureanhydrid ( 5*1) zugegeben. Das Gemisch wir l6 Stunden am Wasserbad auf Rückfluss erhitzt. Die Lösung wird auf ein kleines Volumen eingeengt, in Wasser gegossen und mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt

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wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und einge-* dampft. Der Rückstand wird auf einer Silikagelsäule (110 χ 2,5 cm) mit 1$ Methanol in Chloroform als Eluent chromatographiert.. Man erhält 5,2'-Di-O-azetyl-1,3,3¹-tri-N-carbobenzoxy-4-0-(2,2,2-trichloräthoxycarbonyl)-garamin (480 mg) (90$) mit denselben physikalischen Eigenschaften wie in I.

B. . 5*2' -Di-0-aze tyl-1,3,3' -tri-N-carbobenzoxy-4-0-(2,2,2-trichloräthoxycarbonyl)-garamin (lg) wird in 90$iger Essigsäure (100 ml) gelöst, und Zinkstaub (7 g) wird der gerührten Lösung zugesetzt. Das Rühren der Lösung bei 25° wird fortgesetzt, bis kein Ausgangsprodukt mehr vorhanden ist (2 Stunden). Das Zink wird abfiltriert und die wässerige Essigsäure im Vakuum entfernt. Der Rückstand wird in Aethylazetat aufgenommen, mit Wasser ausgeschüttelt, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wird auf einer Silikagelsäule (l6o x 2,5 cm) mit k% Methanol in Chloroform als Eluent chromatographiert und man erhält 5,2'-Di-O^zetyl-l^^'-tri-N-carbobenzoxygaramin (0.8 g) (98$) als farblosen, amorphen Peststoff m.p. 115-122°, (Gefunden C, 60.21; H, 6.07; N, 5-22. C₄₁H₄₉N₅O_{14 benötlgt}.

C, 60.97; H, 6.07; N, 5.20^), [aj^⁶ + 62.8° (CH₇OH),Yraax

-100- 409816/1182

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) 3350, 1720, 1220, 1040 em ^, f (CDCl,) t 0.9&, 1.07 (3H, breites S, 4'-CH,), 1.85, 2.08 (6h, breites S, OAz), 2.87 (3H, breites S, 3'-NCH₃), 5.00 (6h, breites S, -CH₂CgH₅),

und 7.27 ppm. (15H, breites M, -(

Beispiel 29

A. 1,3,3'-Tri-N-carbobenzoxygaramin (5 g), 2,2,-Dimethoxypropan (6.2 ml.) und p-Toluolsulfonsäure (θ,06 g) werden in wasserfreiem Dimethylformamid (30 ml) gelöst, und die Lösung wird vier Stunden unter Rückfluss auf HO⁰ erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird sodann abgekühlt und mit Dowex 1x2 (0H~) Harz behandelt. Das Methanol-Eluat wird konzentriert und mit Wasser versetzt. Das erhaltene Produkt wird auf Silikagel chromatographiert; wobei 2fo Methanol in Chloroform als Eluent dient. Man erhält 1,3,3'-Tri-N-carbobenzoxy-^S-O-isopropylidengaramin (3-72 g) (70$) als farblosen, amorphen Feststoff, m.p. 126-129°, (Gefunden: C, 61»12; H, 6.33; N, 5.OI. C^₀H₄₉N₃O₁₂ .H₂O'benötigt: C,6l.46; H, 6.53i N, 5-38$), [α]^^β + 87-3° (C₂H₅OH), Xmax (CH₃OH) 208 mμ (£24_i800),Ymax (CHCl₃) 3400, 3280, 169Ο, 1540, IO55, ' '

694 cm"¹, S (CDCU) ¹J-I-OJ (3H, breites S, 4'-CH.,)-1.4o

(6h, breites S, (CH.,)^ ), 3.02 (3H, breites S, 3'-NCH₃), 4.82,

-* o-.5.09 (6h, breite Singlett's, -CH₂CgH₅), 7.08, und 7.30 ppm. (15 H, •.Multipletts, -CH₂CgH₅), ^'(DMSO bei l40°) Ο.98 (3H, S, 4'-CH ), -1.40 (6h, S, (CH₃)₂c(_o_), 3.02 (3H, S, 3'-NCH₃), 5.O8 (4h, S, -CH₂CgH₅),

4 0 9816/1 162 -lol-

September l4, 1973

203IX-FTG-E-67

CG-re

5.I2 (2H, S, -CH₂C₆H₅), und 7.33 ppm- (15H, S, -

B. l,3,3^f-^i-N-carbobenzoxy-4,5-0-Isopropylidengaramin (3.6g )in wasserfreiem Pyridin (10 ml) wird rait Essigsäureanhydrid (2 ml) versetzt, und das Geraisch wird 20 Stunden auf 100° erhitzt. Das Gemisch wird sodann auf Eiswasser gegossen, der Peststoff abfil^Jbriert und auf Silikagel ehromatögraphiert, wobei *jfo Methanol in Chloroform als Eluent verwendet wird. Man erhält 2^f-0-Azetyl-l,3,3'-tri-N-carbobenzoxy-4,5~0-isopropylidengaramin (1.22 g) (72^) als farblosen, amorphen Feststoff m.p» 105-108°, (Gefunden: C, ·

62.55; H, 6.52; N, 5-35» ^ci|.2^H5i^N3°13 ^benötlS^t: C, 62.63; H, 6.33; N, 5-22$) [α]^^β + 77-5° (C₂H₅OH), Xmax (CH₅OH) 208 Βΐμ (£25,300),Ymax (CHCl₃) 3400, 3300, 1730, I700, 1520, 1220, 1050, 697 em"¹, 5(CDCU) f I.08 (3H, breites S, V-CEL), I.39 (6h, breites S, (CH₃J₂C^₀J, 1.91 DH, breites S, 2^r-0Az), 2.91 (3K, breites.S, 3'-NCH₃), 4.97-5.17 (6h, breite Singletts,

-CHpC₆H₁-), 7-23, und 7-31 Ppm. (15H, breite Singletts, —- ° ° bei
-CH₂C₆H ), g(DMS0jfl40°) 1.01 (3H, S, 4'-CH₃), 1.37

— ^O-(6h, S, (CH₃)₂C_Kq 1, 1,90 (3H₅ S, 2'-0Az), 2.9Ο (3H, S, 3¹-

5.Ο3, 5.Ο6, 5.13 (6h, Singletts, -CHgCgk ), 5-33 3Hz, H₁,), und 7.32 ppm. (15H, S, -

-102-

4 0 9 8 16/1162

September ±4, 205IX-FTG-E 68 CG-re

C. 2*-0-Azetyl-l,3,3' -tri-N-carbobenzoxy^S-O-isopropylidengaramin (150 mg.) wird in 8o$iger wässeriger Essigsäure (5pl) gelöst und die Lösung bei 25° ]6i3bunden belassen. Das Gemisch wird zur Trockene verdampft und der Rückstand auf Silikagelplatten chromatographiert, wobei Methanol in Chloroform als Eluent verwendet* wird.

Man erhält-2^!-O-Azetyl-1,2,3'-tri-N-carbobenzoxygaramin (II8 mg) (83$) als farblosen., amorphen Feststoff m.p. 103-107°, (Gefunden: C, 60.8l; H, 6.285 N, 5-54. C,_nH_Jir7N,0,, benötigt: C, 61.20; H, 6.14; N₅ 5-W)* [aj^⁶. + 66.6° (C₃H OH)₁ (CH₃OH) 208 mu (ζ 24₅800),Ymax (CHCl₃) 3²HO, 1730, 1700, .1515, 1220, 1040, 696 cm"¹,d(CDCl₃) f 1.04 (3H, breites S,

4'-CH₃), 1.88 (3H, breites S, 2'-0Az), 2.89 (3H, breites S,

3'-NCH₃), 4.98, 5.08 (6h, breite Singletts, -CH₂CgH₅), und

7.23 ppm. (15H, breites 3,-CH₂C₆H ), 6(DMSO l40°), 1.04

(3H, S, 4'-CH₃), I.90 (3H, S, 2'-0Az), 2-90 (3H, S, 3'-NCH₃),

5.02, 5.06, 5-14 (6h, Singletts, -CH₂C₅H₅), 5-33 (IH, D,

,=3nz, H₁,)-, und 7.33 ppm. (15H, S, -

Beispiel 30

A. l_J3,3^l-Tri-N-carbobenzoxy-4,5-0-isopropyliden-

garamin 0-g) wird in wasserfreiem Dimethylformamid (l6 ml) gelöst und Bariumoxyd (1,05 g) und Bariumhydroxyd (1,25 g)

-103- 409816/1162

2031X-PTG-E69 CG-re

werden, zugegeben. Das Gemisch wird gerührt, auf -10 abgekühlt und Benzylbromid (0,75 ml) wird tropfenweise zugegeben. Man lässt das Gemisch auf Umgebungstemperatur anwärmen und nach 24 Stunden wird es mit Chlorofoform versetzt und filtriert. Das Piltrat wird zur Trockene verdampft und die entstehende Masse durch Behandlung mit Wasser in einen Peststoff übergeführt. Dieser wird auf Silikagelplatten chromatographiert, wobei 1% Methanol in Chloroform als Eluent dient. Man erhält 2'-0-Benzyl-l,3-di-N-carbobenzoxy-4,5-0-isopropylidengaramin-3' *4' -oxazolidinon (0.26 g) als farblosen, amorphen Peststoff, (Gefunden: C, 6j5.18; H, 628;

N, 5.97- ^c4o^H47^N3°ll ^benötiS^t: °* ^62j"-²*⁰* ^H' ⁶·31; N, 5-64$), [a]^⁶ + 6^.8° (C₂H OH), Xmax (CH₃OH) 2θ8 ταμ (£23,8θθ), Vmax (CHCl₃) 3^00, 33ΟΟ, 1730, 1200 cm"¹, S (CDCU)-f· 1.24, 1.4θ

/O-

(9H, breite Singletts, V-CH, und (CH,)_C ), 2.78 (3H, breites S, 3'-NCH₃), 7.22 und 7.27 ppm. (15H, Singletts, aromatische Protonen). ..

-104- 4 09816/1162

September l4, 1973 2031X-FTG-E 70 CG-re

B. 2'-0-Benzyl-l,3-di-N-carbobenzoxy-4,5-0-isopropyliden-garamin-3',4'-oxazolidinon (0.15 g) wird in 8o$iger wässeriger Essigsäure (5ml) gelöst?\und die Lösung bei 25° ΐβ Stunden belassen. Sie wird sodann zur Trockene verdampft und man erhält 2' -O-Benzyl-l^-di-N-carbobenzoxygaramin-J'jV-oxazolidinon (102 mg) als farblosen, amorphen Feststoff*. (Gefunden: C, 62-68; H, 6.20; N,

5.93- ^σ37^Η4"5^ΝΛΐ ^benötiS^{t: c}* 63.00; H, 6.10; N, λ max (CH^OH) 2θ8 ΐημ (24,8OO),Y/(CHC1 ) 34θθ, 1740, 1720, 1200 cm"¹, 6(CDCl₃) ti.28 (3H, breites S, 4'-CH ), 2.54 (3H, breites S, 3'-NCH,), 5-05 (4h, breites S, C^-H 7.26 und 7.29 ppm (lOH, Singletts, C^ CH₂OCO-), [α] 55,6° (CHCl₃).

Die neuen Pseudotrisaccharide der Erfindung sind wertvoll für die Behandlung von Krankheiten, die durch Mikroben, Viren, Helminthen und Protozoen verursacht werden. Die Aktivität der Verbindungen kann nach Standardmethoden (in vivo und in vitro) bestimmt werden. Im aligemeinen sind die Verbindungen mit einer ö'-Aminofunktion und 2'-Hydroxygruppe gegen Bakterien, Trichomonas, Amöben und Helminthen, die Verbindungen mit einer 2'-Aminofunktion und einer 6'-Hydroxygruppe gegen Bakterien, Trichomonas, «Amöben und Helminthen, die Verbindungen mit Aminofunktionen in den Stellungen 2' und 6' gegen Bakterien und die Verbindungen mit Hydroxygruppen in

4 0 9 8 16/1162 -105-

2031X-FTG-E71 CG-re

den Stellungen 2' und 6' gegen Trichomonas besonders aktiv.

Besonders bevorzugte antibaktedelle Verbindungen sind 3'-Deoxygentaniicin Xg, 3'-Deoxygentamicin B, 3'-Deoxy-JI-2OA, 3'-Deoxy-6¹-N-methyl-gentamicin B und 3'-Deoxy-6¹-N-methyl-JI-20A. Besonders bevorzugte Verbindungen gegen Trichomonas sind3'-Deoxygentamicin Xp, 3'-Deoxygentamicin B> Glucosylgaramin, 2' N Aethyl-gentamicin Xp und 2'-N-Aethyl-3^!- deoxygentamicin Xp. Die bevorzugten Verbindungen gegen Amoeben sind 3'-Deoxygentamicin Xp, 3'-Deoxygentamicin B, 2'-N-Aethyl-gentamicin. Xp und 2' -N-Aethyl-3' -deoxygentamicin Xp. Die bevorzugten anthelmintischen Verbindungen sind 3' -Deoxygentamicin Xp, 2^! -N-Aethyl-gentamicin Xp,3' -Deoxygentamicin B und 6⁵-N-Methyl-3^! -deoxygentamicin B.

In den folgenden Tabellen wird die Aktivität einiger Verbindungen gegen Bakterien und Protozoen beschrieben.

-106-

409816/1162

Tabelle I

August-8-19

2031X-FT3-" CG/ch

Organismus i	Mindest-Inhibitionskonzentration (mccr/ml) 2 ' -N-A'thyl- 3 ' Hb eoxy- 3' -D eoxy- 3 ' D.eoxy- Gentaraicin Genta- 2'-N-A'thyl- JI-20A X2 . micin XU Gentamicin X,	0.5-7.5	7.5- >25	0.08-0.3	3'-Deoxy- 6' -N- methyl- Gentamicin B
Staphvlococcus aureus	3.0-7.5	' 3.0->25	>25	O.8-7»5	<0.1-0.3
Streptococcus pvoaenes C	3.0->25	0.03	>25	^0.05	<O.1-17.5
Bacillus subtilis	3.0	3.0-7.5	7.5->25	0.08	<0.1
Escherichia coli	3.0->25				<0.1-0.75
Escherichia coli (N,K		3.0-7.5	17.5	0.08-0.8
resistent) Escherichia coli (G	>25	>25	>25	>25	0.75-17.5
resistent ) Escherichia coli (T	17.5->25	17.5 . 3.0-7.5	3.0 3.0->25.	17.5 0.08-0.8	7.5->25
resistent ) Pseudoraonas aeruainosa	>25 17.5^->25				>25 * <0.1-3.0
* Pseudomonas aerticrinosa			>25	>25 4
(G resistent) ; Klebsiella pneumoniae	>25	0.8-3.0	3.0-7-5	0.08	3,O->25
(N,K resistent) Klebsiella pneumoniae	>25 .	. >25 >25	>25 >25	. 7.5->25 >2'5	^0.3-0.75 CO
(G resistent) Providence	>25 >25	7.5	>25	0.3	CD>25 CD ii3.0
Proteus mirabilis	>25	■♦>■ 0.75-3.0

August-8-1973 203IX-PTB-73 CG/eh

Tabelle I (Fortsetzung)

Organismus	Mindest-Inhibitionskonzentration 2'-N-'Äthyl- 3'-Deoxy- 3'-Deoxy- Gentamicin Gentamicin 2'-N->\thyl- X* X0- : Gentamicin X2	3.0	7.5	3' -Deoxy- JI-20A	3'-^eoxy- 6'-N- methyl™ Gentamicin B
Salmonella typhiimirium		0.8	3.0	0.3	0.75
Sercafcia marcessans	>25	3.0	3.0 ^

K G T

N eomycin K anamycin

Garamycin Tobramycin

/03

Tabelle II

In vitro Aktivität

	Mindeste Hemmkonzentraoian (99Si)	Mindest-Abtötungs konzentration (mcg/mlj	48 hr.
Verbindung	24 hr. 48 hr.	24 hr.	2.5
2 ■ -N-'Athylgenta- micin X«	<1O <2.5	10	10
3'-Deoxygenta- micin X£	10 <LO	10	<2.5
3'-Deoxy-2'-N- ^•thylgentamicin X2	<2.5 <2.5	<2.5	10
O-a-D-Glucopyranosyl- (1—)4) -garamin.	t IO <1O	25

. ^:4 0 9 8 16/1 162

2051X-FTG-11Q CG/mk

Die neuen Verbindungen dieser Erfindung sind wertvoll zur Behandlung von Krankheiten, die durch gegen diese Verbindungen empfänglich? Mikroorganismen in Mensch und Tier hervorgerufen werden. Weiters sind die Verbindungen nützlich als Konservierungsmittel für medizinische, veterinärmedizinische und kosmetische Zusammensetzungen. Die Erfindung umfasst daher auch ein Verfahren zum Konservieren von Zusammensetzungen, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass man eine Verbindung der Formel Ia einer Zusammensetzung zugibt.

Werden die neuen Verbindungen der Formel I a topisch oder lokal verabreicht, können Dosisformen verwendet werden, in denen sich die Verbindungen zu ca 1 bis ca 10 Gew$ befinden. Bei oraler Verabreichung können die Verbindungen zu Dosen von ca 10 bis ca 100 mg pro kg Körpergewicht und Tag verabreicht werden, während bei parenteraler Verabreichung ca 2 bis ca 10 mg pro kg Körpergewicht und Tag geeignet erscheinen.

Zusammensetzungen, die die Verbindungen der Erfindung enthalten, können diese als alleinige Wirkstoffe oder in Verbindung mit anderen Wirkstoffen enthalten.

4098 16/1162

-110-

September Ί4, 1973

203IZ-FTG-Hl CG/'mk

70$ des /benötigten Wassers v/erden in ein geeignetes Mischgefäss gegeben und auf 7O⁰C erhitzt. Das Methyl- und Aethylparaben wird darin aufgelöst und dann auf 25-30° C abgekühlt. ' Die Lösung wird mit Stickstoff gespült und 3'-Deoxygentamicin X wird darin aufgelöst. Die Lösung wird auf ihr endgültiges Volumen gebracht, über ein geeignetes Sterilisationsfilter laufen gelassen und in sterile Behälter abgefüllt» Sämtliche Massnahmen werden unter aseptischen Bedingungen vorgenommen.

Formulierung 2

Oraler Sirup.	pro Liter
3'-Deoxy-JI-20A	100 g
Granulierter Zucker	550 g
Sorbitollösung	200 g
Schutzmittel, ausreichend	-
Reines Wasser* auf	1.0 Liter

Das Antibiotikum 3'-Deoxy-JI-20A, der granulierte Zucker, die Sorbitollösung und die Schutzmittel werden zu ca 350 ml reinem Wasser in einem geeigneten Rührgefäss gegeben. Man rührt, bis alles in Lösung ist,

setzt das restliche Wasser zu und filtriert.

409816/1162 .

-ill-

September l4, I973 2031X-FTGi- 112
CG/mk

Die pharmazeutischen Zusammensetzungen, die die Verbindungen der Erfindung enthalten, werden Je nach erwünschter Verabreichungsart formuliert. Trägerstoffe für topische Verabreichung sind z.B. Cremen, Lotionen, Lösungen, Salben, Puder, Gele ,Suspensionen und Aerosole, Andere Dosisformen umfassen Vaginalsuppositorien, Tabletten, Kapseln, Lösungen zur Behandlung von Augen, Nasen und Ohren, Haarwaschmittel und Injektionslösungen. Die Verbindungen der Erfindung können Tieren auch zusammen mit dem Futter verabreicht werden.

Die folgenden Formulierungen illustrieren erfindungsgemässe pharmazeutische Zusammensetzungen und Verfahren zu ihrer Herstellung:

Formulierung 1

PARENTERALE LOESUNG mg/ml

3'-Deoxygentämicin Xg " ^O bis200 mg. Methylparaben 1.8 mg.

Propylparaben 0.2 mg.

Wasser für Injektionszwecke auf 1.0 ml.

409816/1162

-112-

September 14, 1973

2031X-B¹TG-Il^

CG/mk

Formulierung 3

Creme pro kg

3'-Deoxygentamicin X_g 10 g Aethoxylierter Cetyl/ Stearylaikohol 20 g

Cetylalkohol 35 g

Stearylaikohol 35 g

Petrolatum 200 g

Mineralöl . 50 g

Puffer, ausreichend Schutzmittel, ausreichend

Reines Wasser, auf 1.0 kg

Cetylalkohol, Stearylaikohol, äthoxylierter Cetyl/ Stearlyalkohol, Petrolatum und Mineralöl werden in einem Rührgefäss auf 80°C erhitzt und die Schmelze wird gerührt. Die Schutzmittel, der Puffer und, 3'-Deoxygentamicin Xp in ungefähr 95$ des benötigten Wassers, das auf 8O⁰C erhitzt ist, werden gemischt. Das geschmolzene Wachs wird mit der wässerigen Phase' gemischt xmd auf ca. 40° C abgekühlt. Das restliche Wasser wird zugegeben, und es wird gut gerührt, bis das Gemisch erkaltet ist.

4 0 9 8 1 6 / Π 8 2

September ΐΛ, 197J5

2031X-PTG-Il^

CG/mk

Formulierung 4

Salbe pro kg

jJ'-Deoxygentamicin Xp 10 g - 100 g

Weisses Petrolatum auf 1.0 kg

Das Petrolatum wird bei 50° in einem Rührgefäss erschmolzen und ein Teil davon mit J5'-Deoxygentamicln Xg angerührt. Das Gemisch wird in einer Kolloidmühle solange gerührt, bis eine einheitliche Dispersion vorliegt. Die Dispersion wird dem restlichen Petrolatum zugegeben und gut gemischt.

Formulierung 5

Tabletten pro Tablette 3^!-Deoxygentamicin Xp . 25.0 mg

Laktose, sehr fein gemahlen 190.0 mg

Maisstärke 25.0 mg

Polyvinylpyrrolidon 7.5 mg

Magnesiumsteärät 2,5 rag Alkohol q.s.

409816/1162

September 14, 1975 203IX-FTG-115 CG/mk

3^!-Deoxygentamicin X₀, Laktose und die Maisstärke werden in einem geeigneten Gefass gemischt. Mit einer Lösung von Polyvinylpyrrolidon in Alkohol wird eine feuchte Masse aus den Pulvern hergestellt. Diese wird granuliert und getrocknet. Das Granulat wird auf eine bestimmte Teilchengrösse gebracht, Magnesiumstearat wird zugesetzt und das Granulat zu Tabletten verpresst.

Formulierung 6

Hartgelatinkapseln pro Kapsel

5'-Deoxygentamicin X₂ 25.O rng

Laktose fein gerieben 224.0 mg

Magnesiumstearat 1.0 mg

5'-Deoxygentamicin X_g und die Laktose werden in ein geeignetes Mischgefäss gegeben, vermischt und gemahlen. Ein Teil des gemahlenen Produktes wird mit Magnesiumstearat vorgemischt und dann das vorgemischte Produkt mit dem Rest des gemahlenen Pulvers vermischt. Das Produkt wird in Gelatinekapseln abgefüllt.

409816/1162 -115-

Claims (1)

1. September l4, 1975 203IX-FTG- 116

   PATENTANSPRÜCHE

   1. Verfahren zur Herstellung von antibiottsch aktiven Pseudotrisacchariden der allgemeinen Formel

   worin R Wasserstoff oder Hydroxy; Rp Wasserstoff oder Hydroxy; R., Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrig-

   alkylamino;
   Ru Wasserstoff oder Niedrigalkyl; und

   R,_ Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrig-O

   alkylamino darstellen;

   und von deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzen und Schiffsche Base-Oxazolidinderivaten, dadurch gekennzeichnet, dass man ein selektiv blockier tes Garemin der allgemeinen Formel

   9816/1162

   -116-

   20J1X-FTG- 11? CG/mk

   -II,

   ^RH?/' XH

   worin jedes R,- eine" Amindschutzgruppe ist, jedes R,, Wasserstoff oder eine Hydroxyschützgruppe bedeutet,und worin R-ρ in Stellung J5' zusammen mit R₁₁ in Stellung 4' eine Schutzgruppe bedeuten kann, mit einem Monosaccharid der allgemeinen Formel

   R₄CHX

   O₁

   ,hai

   XII₁

   -OR₁-,, X die Gruppe -OR.,,,

   worin R₂, wie oben definiert ist, hai Halogen bedeutet und R_n,, und R_{1 c} unabhängig voneinander Wasserstoff oder

   -NRR₁₂ oder Azido, Y die Gruppe oder Nitroso, R Wasserstoff oder Niedrigalkyl, R, ρ eine Amxnoschutzgruppe und R,-, eine Hydroxyschützgruppe bedeuten, kondensiert und, falls notwendig, das erhaltene'Pseudotrisaccharid einer oder"zwei der

   8 3 6 / ί 1 6 2.

   -117 -

   September 14, . 205IX-FTG-II8 CG/mk

   folgenden Stufen (a) bis(c) in geeigneter Reihenfolge unterwirft:

   (a) Umsetzung einer Oximinogruppe in Stellung 2' zu der Gruppe -NHR und/oder einer Azidogruppe in Stellung 6' zu -NHp, wobei R die obige Bedeutung hat^

   (b) Umsetzung einer Oximinogruppe in Stellung 2¹ zu Hydroxy, und

   (c) Umsetzung einer Gruppe -OR.·, in Stellung 6' zu einer Gruppe -NHR, wobei R die obige Bedeutung hat,

   und dass man aus dem von der Kondensation oder von einer oder zwei der Stufen (a) bis (c) erhaltenen Pseudotrisaccharid alle vorhandenen Schutzgruppen entfernt und gegebenenfalls ein pharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz oder Schiffsche Base-Oxazolidinderivat herstellt.

   2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass jedes R--, in dem Garamin der Formel II eine Hydroxyschutzgruppe bedeutet»

   3. Verfahren nach Anspruch l_s dadurch gekennzeichnet, dass jedes R,, in dem Garamin der Formel II Wasserstoff bedeutet.

   409816/1182 -118- ■

   September 14, 1973 203IX-FTG-119 CG/iBk

   4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass beide R,, in den Stellungen 2' und 4¹ oder 2' und 5 des Garamins der Formel II Hydroxyschutzgruppen und das dritte R., Wasserstoff bedeuten·

   5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R₁₁ in Stellung 2' des Garamins der Formel II eine Hydroxysuhutzgruppe ist_; und die beiden R₁₁ in Stellungen 5 und 4' Wasserstoff bedeuten.

   6. Verfahren nach Anspruch L₃ dadurch gekennzeichnet, dass R₁- in Stellung 3' zusammen mit R,- in Stellung 4' des Garamins der Formel II eine Carbonylgruppe bedeutet und R₁₁

   in Stellung 2' eine Hydroxyschutzgruppe ist.

   7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass eine Verbindung der Formel III eingesetzt wird, worin X -OR, ^, oder eine Azidogruppe bedeutet und Y eine Nitrosogruppe darstellt, wobei R die in Anspruch 1 gegebene Bedeutung hat, und dass nach der Kondensation die Reaktionen der Stufe (a) oder der Stufe (b) oder der Stufen (a) und (c) oder (b) und (c) oder (b) und (a) in der angegebenen Reihenfolge durchgeführt werden.

   8. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet« dass in einer Verbindung der Formel III hai Chlor bedeutet.

   409816/1162

   -119-

   September l4* 197.3

   2031X-FTG- iso

   349974

   9« Y-arfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, da-. durch gekennzeichnet, dass to einer Verbindung der Formel III X und Y unabhängig voneinander die Gruppen -OR-., oder -NRR,p bedeuten, wobei R, R,p und R,_ die in Anspruch 1 gegebenen Bedeutungen haben.

   10. Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass in einer Verbindung der Formel III X die Gruppe -NRR,_? und Y die Gruppe -»OR,- darstellt, wobei R, R-« und R,.. die in Anspruch 1 gegebenen Bedeutungen haben»

   11. Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass in einer Verbindung der Formel III X die Gruppe -OR,,

   und Y die Gruppe -OR,, oder -NRR,« darstellt, wobei R, R₁₂ und Η,., die in Anspruch 1 gegebenen Bedeutungen haben.

   12. Verfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 11, dadurch gekennzeichnet, dass hai in einer Verbindung der Formel III Chlor oder Brom bedeutet.

   13. Verfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass die Kondensation in Gegenwart eines Katalysators durchgeführt wird.

   14. Verfahren nach Anspruch I5, dadurch gekennzeichnet, dass der Katalysator Quecksilbercyanid, Quecksilberbromid,

   409816/1162

   -=120-

   September l4, 1973 203IX-FfG-121 CG/mk

   Silberkarbonat, Silberoxyd, Silberperchlorat oder Silbertosylat ist.

   15. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass jede Amino- und Hydroxyschutzgrüppe in einer Verbindung der allgemeinen Formeln II und HI unsubstituiertes oder substituiertes Aryl, Aralkyl, Acyl, Alkoxycarbonyl oder Aralkoxycarbonyl ist.

   16.. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 15, dadurch gekennzeichnet, dass eine Aminoschutzgruppe in einer Verbindung der allgemeinen Formeln II und III Carbobenzoxy, t-Butoxyearbonyl, 2,4-Binitrophenyl, 2,2,2-Trichloräthoxycarbonyl,Aethoxycarbony1, Methoxycarbonyl, Azetyl, Benzoyl, 2-Jodäthoxycarbonyl oder p-Methoxycarbobenzoxy ist»

   17. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis l6, dadurch gekennzeichnet, dass eine Aminoschutzgruppe in einer Verbindung der allgemeinen Formel II Carbobenzoxy und in einer Verbindung der allgemeinen Formel III Azetyl, 2,4-Dinitrophenyl oder Carbobenzoxy ist.

   18. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 17, dadurch gekennzeichnet, dass eine Hydroxyschutzgrüppe in einer Verbindung der allgemeinen Formeln II und III Benzyl, p-Nitrobenzoyl, Tosyl oder Azetyl ist.

   -121-409816/1182

   At*

   September 14, 1975 203IX-FTG- 122

   19. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis l8 dadurch gekennzeichnet, dass eine Hydroxyschutzgruppe in einer Verbindung der allgemeinen Formel II Azetyl ist.

   20. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8 und 15 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass in Stufe (a) die Umsetzung der Oximinogruppe in die Gruppe -NHR, wobei R wie in Anspruch 1 definiert ist, durch Blockieren der Oximinogruppe und darauffolgende Reduktion erfolgt, wobei, wenn R Nfedrigalkyl bedeuten soll, die bei der Reduktion gebildete Aminogruppe durch Niedrigalkanoyl acyliert wird und man das erhaltene Amid reduziert.

   21. Verfahren nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, dass das Amid durch Migration von Niedrigalkanoyl-Hydroxysehutzgruppen zur Aminogruppe gebildet wird.

   22. Verfahren nach einem der Ansprüche 20 und 21, dadurch gekennzeichnet, dass die Oximinogruppe acetyliert wird, eine oder mehrere Hydroxyschutzgruppen im Pseudotrisaceharid Azetyl sind,und die Reduktion mit Diboran erfolgt.

   23. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8 und 15 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass in Stufe (a) die Umsetzung der Azidogruppe. in die Aminogruppe durch Hydrierung erfolgt.

   409818/1162 -322-

   203IX-FTG-125 CG/mk

   24c Yerf-ahren nach Anspruch 2J₅ dadurch gekennzeichnet, dass die Umsetzung der Azidogruppe in die Aminogruppe nach der Umsetzung der Oximinogruppe im die Gruppe -NHR, wobei R die in Anspruch 1 gegebene Bedeutung hatj erfolgt.

   25. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8 land 15 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass in Stufe (h) die Oximinogruppe in eine Ketogruppe und diese in eine Hydroxygruppe übergeführt wird.

   26. Verfahren nach Anspruch 25* dadurch gekennzeichnet, dass die Umsetzung der Oximinogruppe in üle Ketogruppe mittels Lävulinsaureoder Salpetrigsaure erfolgt.

   27. Verfahren nach Anspruch 25, dadurch gekennzeichnet, dass die Umsetzung der Oximinogruppe in die Ketogruppe mittels Titantrichlorid oder Thal 1 ium(IH)-nitrat erfolgt.

   28. Verfahren nach Anspruch 25, dadurch gekennzeichnet, dass die Umsetzung der Ketogruppe in die Hydroxygruppe mittels eines Alkaliborhydrides erfolgt.

   29. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8 und 15 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass in Stufe (c) die

   4 0 9 816/1162

   -123-

   September l4, 1973 2031X-FTG-124 CG-ml:

   Umsetzung der Gruppe -OR₁, in die Gruppe -NHR mittels RNH₂ oder RNHNH_p erfolgt, wobei R und R₁--die in Anspruch 1 gegebenen Bedeutungen haben.

   30. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8 und 15 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass in Stufe (c) die Umsetzung der Gruppe -OR₁₃ in die Gruppe -NH₂ durchgeführt wird, indem man die Gruppe -OR₁, durch eine Azidogruppe ersetzt und diese reduziert, wobei R₁-, die in Anspruch 1 gegebene Bedeutung hat.

   31. Verfahren nach einem der Ansprüche 29 und 30, dadurch gekennzeichnet, dass R₁, Tosyl ist.

   32. Verfahren nach einem der Ansprüche 30 .dadurch gekennzeichnet, dass die Umsetzung der Gruppe -O in die Azidogruppe durch Reaktion mit einem Azid und die darauffolgende Reduktion durch Hydrierung erfolgt.

   33· Verfahren zur Herstellung von antibiotisch .aktiven Pseudotrisacchariden der allgemeinen Formel I, die wie in Anspruch 1 definiert ist, und worin R₁, R₂, R™ und Rj, die in Anspruch 1 gegebenen Bedeutungen haben und R₁- Amino oder monosubstituiertes-Niedrigalkylamino darstellt und von deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzen und Schiffsche Base-Oxazolidinderivaten, dadurch gekennzeichnet, dass man die Gruppe -OR₁- in Stellung 6¹ einer Verbindung der allgemeinen Formel

   409816/1162 -124-

   September 14, 1973

   LX-FT(I-125 CG/mk

   NHR,

   NHR

   IV

   ^OR

   11

   worin R. und IU wie in Anspruch 1 definiert sind, Rg und R₇ unabhängig voneinander Wasserstoff oder -OR,, sindj, R^ die Gruppe -OR₁₁ oder -NRR₁₂ darstellt, R₁₁ Wasserstoff oder eine Hydroxyschutzgruppep R₁₂ eine Aminoschutzgruppe und R₁, eine Hydroxyschutzgruppe bedeuten, und worin R₁₂ in Stellung 3" zusammen mit R₁₁ in Stellung 4" eine Schutzgruppe bedeuten kann, in die Gruppe -MRR überführt, wobei R die in Anspruch 1 gegebene Bedeutung hat, und dass man aus der erhaltenen Verbindung alle vorhandenen Schutzgruppen entfernt und gegebenenfalls ein pharmazeutisch

   annehmbares Säureadditionssalz oder Schiffsche Base-Oxazolidinderivat herstellt» .

   net, dass

   Verfahren nach Anspruch 33j> dadurch gekennzeich-R₁, Tosyl ist. .

   35· Verfahren nach einem der Ansprüche 33 oder 34, dadurch gekennzeichnet_rf dass die Umsetzung mittels RNEL oder RNHNH₂ erfolgt, wobei R die in Anspruch 1 gegebene Bedeutung hat. . .

   4098 16/1162

   -125-

   September l4, 1973

   2031X-P7G-12C

   CG/ml:

   36. Verfahren nach einem der Ansprüche 33 und J>k, dadurch gekennzeichnet, dass die Gruppe -NHR Amino darstellt und die Umsetzung durch Ueberführvng von -OR-,-ζ in Azido und darauffolgende Reduktion erfolgt.

   37. Verfahren zur Herstellung von antibiotisch
   aktiven Pseudotrisacchariden der allgemeinen Formel

   CHR. R
   4 5

   Ia

   und von deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzen und Schiffsche Base-Oxazolidinderivaten, wobei

   in der Formel

   Rg. Wasserstoff oder Hydroxy;

   R-, Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Miedrigalkylamino;

   Rj, Wasserstoff oder Niedrigalkyl; und
   R,- Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrigalkyl amino darstellen;

   wobei, wenn Rp Hydroxy, R₁^ Wasserstoff oder Methyl und R-, Amino sind, R₁- monosubstituiertes Niedrigallcylamino

   -I26- 4098 16/1162

   September 14, 1975 2Qj51X-j?TG- ¹²7 CG/mli

   und R, Hydroxy und

   Wasserstoff

   bedeutet und, wenn
   oder Methyl sind, R,- Hydroxy oder monosubstituiertes Niedrigalkylaraino darstellt, dadurch gekennzeichnet, dass man aus einer Verbindung der allgemeinen Formel

   NHR.

   NHR

   10

   worin I
   Ro und

   ^0Eii

   wie oben definiert ist, R₁₇. Wasserstoff oder ₃ unabhängig voneinander -OR₁₁ oder -NRR₁₀ bedeu

   ten, wobei R für Wasserstoff oder Niedrigalkyl steht, R

   Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe und R

   11

   10 Wasserstoff

   in Stellung in Stellung

   oder eine Hydrcxysehutzgruppe sind, und worin R₁₀ 5" zusammen mit R₁₁ in Stellung 4" oder beide R₁₀ 1 und 3 zusammen eine Schutzgruppe bedeuten können, und

   worin zumindest eine Schutzgruppe vorhanden ist, wobei jedoch, wenn R₇ die Gruppe -OR₁₁, R₂, Wasserstoff oder Methyl und Rg -NHR₁₀ sind, R_Q die Gruppe -NRR₁₀ bedeutet, worin R Niedrigalkyl ist, und wobei, wenn R₇ und Ro -OR₁₁ und R₂, Wasserstoff oder Methyl sind, R_Q die Gruppe -OR₁₁ oder ₀ bedeutet, worin R Niedrigalkyl ist;

   4 0 9 8 16/1162

   -127-

   September 20?1Χ-ΚΛ}

   CG/mk

   alle vorhandenen Schutzgruppen entfernt und gegebenenfalls ein pharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz oder ein Schiffsche Base-Oxazolidinderivat herstellt«

   38. Verfahren nach Anspruch 37, dadurch gekennzeichnet, dass jede Amino- und Hydroxyschutzgruppe in einer Verbindung der Formel V unsubstituiertes oder substituiertes Aryl, Aralkyl, Acyl, Alkoxycarbonyl oder Äralkoxycarbonyl ist.

   39. Verfahren nach einem der Ansprüche 37 und 38, dadurch gekennzeichnet,dass eine Aminoschutzgruppe Carbobenzoxy, t-Butoxycarbonyl, 2,4-Dinltrophenyl, 2,2,2-Trichloroäthoxycarbonyl, Aethoxycarbonyl, Methoxycarbonyl,, Azetyl, Benzoyl, 2-Jodäthoxycarbonyl oder p-Methoxycarbobenzoxy ist.

   4o. Verfahren nach einem der Ansprüche 37 bis 39, dadurch gekennzeichnet, dass eine Hydroxyschutzgruppe Benzyl, p-Nitrobenzoyl oder Azetyl ist.

   4l. Verfahren nach einem der Ansprüche 37 bis 4o, dadurch gekennzeichnet, dass eine Aminoschutzgruppe Carbobenzoxy ist.

   Verfahren nach einem der Ansprüche 37 bis 4l, dadurch gekennzeichnet, dass eine Hydroxyschutzgruppe Azetyl

   409816/1162

   September ]Λ, 1973 205 3X-FTG-129-

   C&/mk

   43. Verfahren nach Anspruch 57, dadurch gekennzeichnet, dass R,_o in Stellung 5" zusammen mit R₁- in Stellung 4" einer Verbindung der Formel -V eine Carbonylgruppe darstellt.

   44. Verfahren nach einem der Ansprüche 37 bis 43, dadurch gekennzeichnet, dass Rg in einer Verbindung der Formel V -OR₁₁ und R_g -OR₁₁ oder -NHR darstellt, wobei R₁₁ und R wie in Anspruch 37 definiert sind.

   45. Verfahren nach einem der Ansprüche 37 bis 43, dadurch gekennzeichnet, dass Rg in einer Verbindung der For

   mel V -NRR₁₀ und R_g -OR₁₁ oder -NHR darstellen,, wobei R₁₁ und R wie in Anspruch 37 definiert sind»

   46. Verfahren nach Anspruch 37* dadurch gekennzeichnet, dass in einer Verbindung der allgemeinen Formel V beide R,-in. den Stellungen 1 und 3 zusammen eine Carbonylgruppe bilden und wobei alle anderen Aminogruppen und alle Hydroxygruppen in freier Form sind,

   47. Verfahren nach einem, der Ansprüche 37 bis 45 _s dadurch gekennzeichnet _r dass die Schutzgruppen durch Hydrolyse oder Hydrierung entfernt werden.

   48. Verfahren nach Anspruch 46, dadurch gekennzeichnet, dass'die Carbonylgruppe unter stark alkalisohenBedingungen entfernt wird.

   . '40 98 16/ 1162 *^?

   September 14, 1975

   203iX-5TG-130

   CG/mk

   49. Verfahren nach Anspruch 46, dadurch gekennzeichnet, dass die Carbonylgruppe mittels Hydrazin entfernt wird.

   50. Verfahren nach Anspruch 37* dadurch gekennzeichnet, dass die Schutzgruppen aus 0-[3,4,6-Tri-0-azetyl-2-deoxy-2-N-äthylamino-a-D-glucopyranosyl (1—^4) j-1,3,3' tri-N-carbobenzoxygaramin oder aus 0-[3,4,6-Tri-0-azetyl-2-deoxy-2-N-äthylamino-α-D-glucopyranosyl-(l—»4)J-5,2¹, 4-tri-O-azetyl-l,3*3' -tri-N-carbobenzoxygaramin entfernt werden.

   51 · Verfahren nach Anspruch 37» dadurch gekennzeichnet, dass die Schutzgruppen aus Q~[4,6-Di-0-azetyl-2,3-dideoxy-2-amino-a-D-glucopyranosyl-(l—i4) -5, 2', 4' -tri-0-azetyl-l,3*3'-tri-N-carbobenzoxygaramin entfernt werden.

   52. Verfahren nach Anspruch 37* dadurch gekennzeichnet, dass die Schutzgruppen aus 0-[4,6-di-0-azetyl-2,3-dideoÄy-2-N-äthylamino-a-D-glucopyranosyl-(1-^4) \$, 2', 4 '■-tri-O-azetyl-1,3,3¹-tri-N-carbobenzoxygaramin entfernt werden.

   53·- Verfahren nach Anspruch 37* dadurch gekennzeichnet, dass die Schutzgruppen aus 2-0-Eenzyl-3,4,6-tri-pnitrobenzoyl-a-D-glucopyranosyl-(l-i-4) J-5,2¹,4'-tri-O-azetyl-1,3* 3' -tri-N-carbobenzoxygaramin entfernt werden.

   4 0 9816/1162

   -130-

   September l4_f 1973

   2051X-FTG-I3I-CG/mk

   54. Verfahren nach Anspruch 37* dadurch gekennzeichnet, dass die Schutzgruppen aus O-[3j4,6-Tri-0--azetyl-a-D-glucopyranosyi-(l->4)J-5*2',4'-tri-ö-azetyll,3i3^f-tri-N-carbobenzoxygaramin entfernt werden.

   55. Das Verfahren nach einem der Ansprüche 1, 33 und yj, wie beschrieben.

   56. Das Verfahren nach einem der Ansprüche 1, 33 und 37» wie, in den Beispielen beschrieben.

   57· Antibiotisch aktive Pseudotrisaecharide der allgemeinen ,For me I

   CHR..R
   1 **

   und deren pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze und Schiffsche Base-Oxazolidinderivate, worin

   4 0 9 8 16/1162

   -131-

   September 14, 1975

   203IX-FTG-I32--

   CG/mk

   Rp Wasserstoff oder Hydroxy;

   R, Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino;

   Eu Wasserstoff oder Niedrigalkyl; und

   Rp. Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrig- . alkylamino darstellen;

   wobei, wenn R₃ Hydroxy, R^ Wasserstoff oder Methyl und R, Amino sind, Rp- monosubstituiertes Niedrigalkylamino bedeutet und, wenn R₂ und R., Hydroxy und R₁, Wasserstoff oder Methyl sind, Rp. Hydroxy oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino darstellt.

   58. Verbindungen der Formel Ia nach Anspruch 57* deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze und Schiffsche Base-Oxazolidinderivate, wobei in der Formel entweder

   ~ RT Wasserstoff;

   R_ Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino;
   Rn Wasserstoff oder Niedrigalkyl; und

   R,- Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino sind; oder
   R₂ Hydroxy;

   R, Hydroxy oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino; Rj, Wasserstoff oder Niedrigalkyl; und R₅ Hydroxy oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino - sind.

   40981 6/1162

   September 14, l° 203 XX-FTG-1^3 /

   59. Verbindungen der Formel la nach Anspruch 57, deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzeund Schiffsche Base-Oxazolidinderivate, wobei in der Formel entweder Wasserstoff und R, und R,- unabhängig voneinander Hydroxy, Amino oder monosubstituiertes Niedrigalkylamino darstellen.

   60, Verbindungen der Formel la nach Anspruch 57 und deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze, wobei in der Formel R" und R. Wasserstoff und entweder R-. Amino und R^. Hydroxy oder Amino oder R-, Hydroxy und Rf-N-Methylamino darstellen.

   61. 0-[2,6-Diamino-2,3,6-trideoxy-a-D-glucopyranosyl-(l->4)]-garamin. .

   62. 0-[2-Amino-6-N-methylamino-2,3*6-trideoxy-a-D-glucopyranosyl-(l-> 4)]-garamin und 0-[2-Amino-6-N-methylamino-2,6-dideoxy-a-D-glucopyranosyl-(l-*4)]-garamin.

   63. 0-a-D-Glucopyranosyl-(l->4)-garamin.

   64. 3^I-Deoxy-2'-N-äthylgentamicin

   65. ^'-Deoxygentamicin

   4098 16/1162

   -133-

   September 14. 1975

   2O/51X13^

   CG/nöc

   J&

   66. 2' -N-Ae thy !gentamicin X₃. 2 3 4 ° 9 7

   67. 3^! -Deoxygentamiein B und 6' -N-methylgentamicin B.

   68. 3' -Deoxy-6' -M-methylgentamicin B.

   69. Gentamicin Cp .

   70. Verbindungen nach einem der Ansprüche 57 bis 68, erhalten nach einem Verfahren nach einem der Ansprüche bis 56.

   71. Verbindungen nach einem der Ansprüche 57 erhalten nach einem Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 32, 55 und 56.

   72. Verbindungen nach einem der Ansprüche 57 bis 62 und 67 bis 69, erhalten nach einem Verfahren nach einem der Ansprüche 33 bis 36, 55 und 56.

   73. Gentamicin Xp, Gentamicin B, 0-2,6-Diamino-2,6-dideoxy-a-D-glucopyranosyl-(l-^4)-garamin, Gentamicin C,, Gentamicin C-, und Gentamicin C_, erhalten nach einem Verfahren nach einem de*· Ansprüche 1 bis 32, 55 und 56.

   409816/1162

   -13%-

   September l4, 1973 203IX-PTG-135 CG/mk

   74. Gentamicin B, O^o-

   glucopyranosyl- (l-*4)-garamin, Gentamicin C₁, Gentamicin

   C_la und'Gentamicin C₃, erhalten nach einem Verfahren nach einem der Ansprüche j53 bis 36, 55 und 56.

   75. Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend als Aktivsubstanz zumindest eine Verbindung nach Anspruch 57 zusammen mit einem pharmazeutischen Trägerstoff.

   76. Zusammensetzung nach Anspruch 75 in Form von Dosiseinheiten.

   77· Zusammensetzung nach Anspruch 75*. in Form von Suspensionen, Aerosolen, Pudern, Gelen, Lösungen, Emulsionen oder Salben.

   78. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 75 77* worin die Aktivsubstanz eine Verbindung nach einem der Ansprüche 6l bis 69 ist. .

   79· Pharmazeutische Zusammensetzungen nach Anspruch 75, wie beschrieben.

   80. Verfahren zur Herstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen nach einem der Ansprüche 75 bis 79* da-

   409816/1182 . -155-

   September 14, 1973 2053X-FTG-CG/rak

   durch gekennzeichnet, dass die Aktivsubstanz mit einem pharmazeutischen Trägerstoff gemischt wird.

   8l. Pharmazeutische Zusammensetzungen, erhalten nach dem Verfahren nach Anspruch 80.

   dadurch gekennzeichnet,
   Dosis einer ü

   83. Verbindungen der allgemeinen Formel

   CHR₄R₉

   NHR,

   NHR

   IO

   worin R₁, Wasserstoff oder Niedrigalkyl, R₇ Wasserstoff oder -ORn₁* Rg ^Tln^ R_Q unabhängig voneinander -ORti oder

   geändert

   409816/1162

   -136-

   MMAOHQEReIONT]

   ^{p 23 49} 974.3-Scherico Ltd. 27.11.1973

   Verfahren nach Anspruch 8o, wie beschrieben.

   409816/1162

   September l4, 1973

   203Iy-FTG-

   CC/mk

   ₁₀ bedeuten, wobei R für Wasserstoff oder Niedrigalkyl steht, R₁₀ Wasserstoff oder eine Amineschutzgruppe und R,., Wasserstoff oder eine Hydroxyschutzgruppe sind, und worin R₁₀ in Stellung 3".zusammen mit R., in Stellung 4" oder beide R₁₀ in Stellung 1 und 3 zusammen eine Schutzgruppe bedeuten können, und worin zumindest eine Schutzgruppe vorhanden ist, wobei jedoch, wenn R₇ die Gruppe R_21-Wasserstoff oder Methyl und Rg -NHR₁₀ sind, B. die Gruppe -NRR₁₀ bedeutet, worin R Niedrigalkyl ist, und wobei, wenn R₇ und Rn -Ό^ιη ^⁰ % Wasserstoff oder Methyl sind, R_Q die Gruppe -OR₁₁ oder -NRR₁₀ bedeutet, worin R Niedrigalkyl ist.

   84. Verbindungen nach Anspruch 83, worin eine Aminoschutzgruppe Carbobenzoxy, t-Butoxycarbonyl, 2_a 4-Dinitrophenyl, 2,2,2-Trichloräthoxycarbonyl, Aethoxyearbonyl, Methoxycarbonyl, Azetyl, Benzoyl, 2-iTodäthoxycarbonyl oder p-Methoxyearbobenzoxy und eine Hydroxyschutzgruppe Benzyl, p-Nitrobenzoyl oder Azetyl ist, und worin R₁₀ in Stellung 3" zusammen mit R₁₁ in Stellung 4" oder beide R₁₀ in Stellung 1 und 3 zusammen eine Carbonylgruppe sein können«

   85. 0-[4,6-Di-0-azetyl-2,3-dideoxy-2-amino-a-D-glucobenzoxygaramin nach Anspruch 83»

   86. Pseudodisaccharide der allgemeinen Formel

   4 09816/1162
   -137- -

   NHR,

   September 14, 1973 20.3 VT-FTG--CG/ak

   2343974

   worin jedes R₁₀ Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe und jedes R₁₁ Wasserstoff oder eine Hydroxyschutzgruppe bedeuten und wobei Rioin Stellung 3' zusammen mit R-., In Stellung 4^f eine Schutzgruppe sein kann;

   87. Verbindung der Formel X nach Anspruch 86, worin R^₀ und R₁₁ Wasserstoff sind, welche Verbindung Garamin ist.

   88, Verbindungen der Formel X nach Anspruch 86,

   worin jedes R₁₀ 4 Wasserstoff bedeutet.

   eine Aminoschutzgruppe und R,, in Stellung

   Verbindungen nach Anspruch 88, worin jedes R.

   11

   in den Stellungen 5/2' und 4' eine Hydroxyschutzgruppe ist. r

   90. Verbindungen nach Anspruch 88, worin jedes in den Stellungen 5*2' und 4' Wasserstoff ist.

   -158-409816/1162

   September l4, 1973

   2CJiIX-FTG-

   CG/rak

   91. Verbindungen nach Anspruch 88, worin R₁- in Stellung 2' eine Hydroxyschutzgruppe und eines von R₁₁ in den Stellungen 5 und 4¹ Wasserstoff und das andere eine Hydroxyschutzgruppe ist.

   92. Verbindungen nach Anspruch 88, worin R₁₁ in Stellung 2* eine Hydroxyschutzgruppe und R₁₁ in den Stellungen 5 und 4' Wasserstoff sind.

   93. Verbindungen der Formel X nach Anspruch 86, worin R₁₀ in Stellung 3¹ zusammen mit R₁₁ in Stellung 4' eine Carbonylgruppe darstellt, R₁₀ in den Stellungen und 3 Aminoschutzgruppen, R,, in Stellung 2' eine Hydroxyschutzgruppe und R₁₁ in Stellung 4 Wasserstoff darstellen.

   94. Verbindungen nach einem der Ansprüche 86 und bis 93, worin eine Amino- und Hydroxyschutzgruppe unsubstituiertes oder substituiertes Aryl,. Aralkyl, Acyl, Alkoxycarbonyl oder Aralkoxycarbonyl ist.

   95. Verbindungen nach einem der Ansprüche 86 und 88 bis 94, worin eine Aminoschutzgruppe Carbobenzoxy, t-Butoxycecrbonyl, 2,4-Dinitrophenyl, 2,2,2-Trichloräthoxycarbonyl, Aethoxycarbonyl, Methoxycarbonyl, Azetyl, Benzoyl, 2-Jodäthoxycarbonyl oder p-Methoxycarbobenzoxy ist.

   -139-409816/1162

   September I4, 1973 203IX-FEG-CG/mk

   96. Verbindungen nach einem der Ansprüche 86 und 88 bis 95* worin eine Aminoschutzgruppe Carbobenzoxy ist.

   97. Verbindungen nach einem der Ansprüche 88 bis 96, worin eine Hydroxyschutzgruppe Benzyl, p-Nitrobenzyl oder Azetyl ist.

   98. Verbindungen nach-einem der Ansprüche 88 bis 97, worin eine Hydroxyschutzgruppe Azetyl ist.

   99· Verbindungen nach einem der Ansprüche 86 und 88 bis 98, worin R^₁ in Stellung 4 2,2,2-Trichloräthoxycarbonyl istν

   100. Verfahren zur Herstellung von Pseudodioacchariden der allgemeinen Formel

   NHR,

   H.C

   4 0 9 8 16/1182 -14ο-

   September l4, 1973

   5 CG/mk

   2349374

   worin R₁₀ Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe und R₁₁ Wasserstoff oder eine Hydroxyschutzgruppe sind, und worin R₁₀ in Stellung 3' zusammen mit R,, in Stellung 4¹ eine Schutzgruppe darstellen kann, dadurch gekennzeich net, dass man eine Verbindung der allgemeinen Formel

   NHR,

   NHR

   12

   worin R Wasserstoff oder Niedrigalkyl, R₁₁ Wasserstoff oder eine Hydroxyschutzgruppe und R, ρ eine Aminoschutzgruppe bedeuten; .

   selektiv spaltet und gegebenenfalls eine oder mehrere Schutzgruppen entfernt und/oder in das Molekül einführt,

   101. Verfahren nach Anspruch 100, dadurch gekennzeichnet, dass als Verbindung der Formel XI N-geschütztes Sisomicin verwendet wird, worin R,, wie in Anspruch 100-definiert ist und die Aminoschut2;gruppen Carbobenzoxy sind.

   -141-409816/1162

   September 14_Λ 1973 , 2031³C-FTG-.

   102. Verfahren nach einem der Ansprüche 100 und 101, dadurch gekennzeichnet, dass eine Verbindung der Formel XI durch Hydrolyse oder unter oxidativen Bedingungen selektiv gespalten wird»

   103. Verfahren nach einem der Ansprüche 100 und 101, dadurch gekennzeichnet,dass eine Verbindung der Formel XI durch Einwirkung von Strahlung selektiv gespalten wird.

   104. Verfahren nach einem der Ansprüche 100 bis lOjjJ, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen der Formel X hergestellt werden^ wie in einem der Ansprüche 87 bis 99 definiert.

   I05. Verfahren nach Anspruch 100 wie beschrieben, mit spezieller Berücksichtigung der Beispiele.

   106. Verfahren zur Herstellung von Pseudodisaeehariden der allgemeinen Formel

   NHR₁

   409816/1162

   -142-

   203IX-Fi¹U-Ca/mk

   eine Aminoschutzgruppe und R . Wasserstoff oder

   eine Hydroxyschutzgruppe bedeuten und worin R, ~ in Stellung 3'.zusammen mit R,, in Stellung 4¹ eine Schutzgruppe be- . deuten kann, dadurch gekennzeichnet, dass man eine oder mehrere entsprechende Schutzgruppen in eine Verbindung der allgemeinen Formel

   NHR

   XQ

   XII,

   ^H3

   worin R₁₀ Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe, R,, Wasserstoff oder eine Hydroxyschutzgruppe und ILj, Wasserstoff oder eine.Hydroxyschutzgruppe, die. leichter als alle anderen S-chutzgruppen entfernbar ist, bedeuten, und worin zumindest eines von R-iq* R₁

   q* R₁₁I und R, κ Wasserstoff ist; einführt und gegebenenfalls eine Hydroxyschutzgruppe eliminiert.

   -143-

   409816/1162

   September 14_Λ 1973 202 L'<-

   107. Verfahren nach Anspruch 106, dadurch gekennzeichnet,das if? man eine Verbindung der allgemeinen Formel XII, worin R₁₀, R₁₁ und R-^, Wasserstoff sind, an den. Aminogruppen schützt. ' . ■

   108. Verfahren nach Anspruch 106, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Hydroxyschutzgrüppe, dargestellt durch R-. 2,* aus einer Verbindung entfernt, worin alle R₁₀ Aminoschutzgruppen, R₁₁ in den Stellungen 5>2' und 4' oder in den Stellungen 5 und 2^f oder in den Stellungen 2' und 4' oder in der Stellung 2^! Hydroxyschutzgruppen und die übrigen R₁₁ in den Stellungen 5,2' und 4' Wasserstoff bedeuten.

   109· Verfahren nach Anspruch I08, dadurch gekennzeichnet, dass eine Hydroxyschutzgrüppe in den Stellungen 5,2' und 4¹ Azetyl oder Benzyl ist, wobei R₁₀ in Stellung J¹ zusammen mit R,- in Stellung 4^f eine Carbonylgruppe sein kann, und dass R-, u 2,2,2-Trichloräthoxycarbonyl oder zusammen mit R₁₁ in Stellung 5 eine Alkylidengruppe ist*

   -144-

   16/1162

   110. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel I nach Anspruch 1 und von deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditxonssalzen und Schiffsche Base- Oxazolidinderivaten, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der allgemeinen Formel XI nach Anspruch 100 selektiv spaltet, gegebenenfalls eine oder mehrere Schutzgruppen entfernt und/oder in das.Molekül einführt und dass man eine so erhaltene Verbindung der Formel II nach Anspruch 1 mit einer Verbindung der Formel III nach Anspruch kondensiert und, falls notwendig, das erhaltene Pseudotrisacchari-d einer oder zwei der Stufen Ca) bis Cc), wie in Anspruch 1 definiert, in geeigneter Reihenfolge unterwirft, und dass man aus dem von der Kondensation oder von einer oder zwei der Stufen (a) bis Cc) erhaltenen-Pseudotrisaccharid alle vorhandenen Schutzgruppen entfernt und gegebenenfalls ein pharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz oder Schiffsche Base- Oxazolidinderivat herstellt.