DE2301540A1 - 5-0-(5-amino-5-deoxy-d-pentofuranosyl)n hoch 1-(4-amino-2-hydroxy-butyryl)-4-0(2,6-diamino-2,6-dideoxy-d-gluco-pyranosyl)2-deoxystreptamine - Google Patents

Description

5-0-(5-Amino-5-de oxy-D-pentofuranoxyl') -N -(4-amino-Z-hydroxybutyryl)-4-0-(2,6-diamino-2,6-dideoxy-D-glucopyranosyl)-2-

deoxy-streptamine

Die vorliegende Erfindung betrifft Deoxystreptamine. Sie betrifft besonders 5-0-(5-Amino-$-deoxy-D-xylofuranosyl)-N (4-amino-2-hydroxybutyryl) -4-0-( 2,6-diamino-2,6-dideoxy-D-glucopyranosyl)-2-deoxystreptamin, 5-0-(5-Amino-5-deoxy-D-ribofuranosyl)-N^^-(4-amino-2-hydroxybutyryl)-4-0-(2,6-diamino-2,6-dideoxy-D-glucopyranosyl)-2-deoxystreptamin, deren Säureadditionssalze und Verfahren zu deren Herstellung.

In der US-PS $ 541 0?8 ist eine chemische Verbindung beschrieben, die zur Zeit als Ambutyrosin bezeichnet wird (sowie dessen einzelne Komponenten Ambutyrosin A und Ambutyrosin B). Zur Zeit werden diese Verbindungen häufiger als Butirosin bezeichnet (und die einzelnen Komponenten Butirosin A und Butirosin B) und diese letztere Bezeichnung- wird hier manchmal verwendet. Als freie Base besitzt Butirosin A die chemische

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- 2 - 42 451 .

Struktur N¹ -(4-Ατηχηo-2-hydroxybutyryl) -4-0-(2,6-diamino-2,6-dideoxy-D-glucopyranosyl) -5-0-D-xylof uranosyl-2-deoxystreptamin. Als freie Base besitzt Butirosin B die chemische Struktur N (4-Amino-2-hydroxybutyryl) -4-0- ( 2,6-diamino-2,6-dideoxy-D-glucopyranosyl)-5-O-D-ribofuranosyl-2-deoxystreptamin. Butirosin A und Butirosin B sind sowohl als freie Basen als auch in Form ihrer Säureadditionssalze bekannt.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können mit Hilfe der systematischen chemischen Nomenklatur bezeichnet werden, die in dem ersten Absatz angegeben ist. Wahlweise können sie auch bezeichnet werden als Aminodeoxybutirosin (und die einzelnen Komponenten als Aminodeoxybutirosin A und Aminodeoxybutirosin B).

5-0-(5-Amino-5-deoxy-D-xylofuranosyl)-N -(4-amino-2-hydroxybutyryl) -4-0-(2,6-diamino-2, e-dideoxy-D-glucopyranosyl) -2-deoxystreptamin, das auch als Aminodeoxybutirosin A bekannt ist, besitzt in Form der wasserfreien freien Base die empirische Formel ^21^42^6^1Ί ^un<^ ^^e Strukturformel

H₂NH₂
L

— -5 CH₂NH₂

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- 5 - 42 4-51

«4

5-0- (5-Amino-5-deoxy-I)-ribof uranosyl) -IT -*(4~amino-2-hydr oxybutyryl) -4-0- (2,6-diamino-2,6-dide oxy-D-gluc opyr ano syl) 2-deoxystreptamin, das auch als Aminodeoxybutirosin B bekannt ist, besitzt als freie wasserfreie Base die empirische Formel

3H

-Tc H-C-OH
CH₀NHp H-C-OH

CH₂NH₂

Damit sind Aminodeoxybutirosin A und Aminodeoxybutirosin j B Isomere, die sich in ihrer Konfiguration an einem Kohlen- _; stoffatom in der Pentoseeinheit unterscheiden. !

Erfindungsgemäß kann Aminodeoxybutirosin hergestellt wer- j den durch Umsetzung des IT, N*, N^tf, N¹''-Tetra(trifluoracetyl)- ! derivates von Aminodeoxybutirosin mit einer Base in einem wässrigen Medium und Isolieren des Produktes als freie Base oder als Säure additions salz. Wenn das Ausgangsmaterial das N, Ν^ν,

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2 3015 4 D

- 4- -

■Ϊ¹¹, H¹ * '-TetraCtrif luoracetyl>-derivat von 5-0-(5-deoxy-D-xylofuranosyl)-N -(4~amino-2-nydroxybutyryl)-4—0-(2 y6-diamino-2,6-dideoxy-D-glucopyranosyl) -2-deoxystreptamin ist, der Formel

CH₂NHZ

C 0_χ

h/h \

6 CH-O

HO\OH H

H-C-OH CH₂NHZ HO-C-H '

H-C

CH₂NH₂

Z = -C-CF₃

ist das Produkt Aminodeoxybutirosin A. Wenn das Ausgangsma— terial das IT, N¹, N¹ ' , N¹ ' '-TetraCtrifluoracetyl)-derivat von 5-0- ( 5-Ainino-5-deoxy-D-ribofuranosyl)-N - (4—amino-2-hydroxybutyryl) -4—0- ( 2,6-diamino-2, ö-dideoxy-D-glucopyranosyl) -2-deoxystreptamin ist, der Formel

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- 5 - 4-2

H-C-OH
CH₂NHZ H-C-OH

H-C

OH₂NH₂

Il

Z = -C-CF3

ist das Produkt Aminodeoxybutirosin B. Wenn das Ausgangsmaterial ein Gemisch der "beiden speziellen Ausgangsmaterialien ist, ist das Produkt ein Gemisch, aus Aminodeoxybutirosin A und Aminodeoxybutirosin B. In jedem Falle kann das Ausgangsmaterial zu dem Ee akti ons gemisch als solches zugegeben werden oder es kann in situ gebildet werden z.B. durch Hydrierung der entsprechenden 5-Azidoverbindung oder-verbindungen in Gegenwart von Palladium auf Kohle als Katalysator. Einige Beispiele für geeignete Basen für die Reaktion sind Alkalihydroxide wie Natriumhydroxid und Kaliumhydroxid und Erdalkalihydroxide wie

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Bariumhydroxid und Magnesiumhydroxid. Eine bevorzugte Base ist Natriumhydroxid oder ein anderes Alkalihydroxid. Eine bevorzugte Konzentration für die Base beträgt 0,1 bis 4,0 n. Geeignete Lösungsmittel sind Wasser und wässrige niedere Alkano-Ie. Die Reaktion läuft leicht bei Kaumtemperatur ab und damit sind die Reaktionszeit und Temperatur nicht besonders kritisch. Im allgemeinen wird die Reaktion bei einer Temperatur von ungefähr 0 bis 50°C innerhalb von 15 Minuten bis 8 Stunden durchgeführt, wobei die kürzeren Reaktionszeiten den höheren Temperaturen und höheren Basenkonzentrationen entsprechen. Temperaturen von mehr als 5O°C sind ungünstig. Wenn man als Base 0,25 bis 0,75 -O- wässriges Natriumhydroxid verwendet, ist die Hydrolysereaktion im wesentlichen innerhalb von 3 Stünden bei Raumtemperatur vollständig. Das Produkt wird direkt als freie Base oder nach Behandlung mit einer Säure als Säureadditionssalz isoliert. Eine bevorzugte Art, das Produkt zu isolieren, be-, steht darin, daß man eine Losung des Produktes in Form der freien Base auf eine Säule aufgießt, die ein schwach saures Kationenaustauscherharz in Form der freien Säure enthält und das Produkt als freie Base durch Elution der Säule mit wässrigem Ammoniak gewinnt.

Die Ausgangssubstanzen für das oben beschriebene Verfahren können nach einer Anzahl von Verfahren aus Butirosin-entweder Butirosin A oder Butirosin B oder einem Gemisch von Butirosin A und Butirosin B-hergestellt werden. Nach einem derartigen Verfahren wird Butirosin umgesetzt mit Äthyltrifluoracetat und dann mit Trifluoressigsäureanhydrid unter Bildung von N, N' , N¹¹, N¹*^I-Tetra(trifluoracetyl)butirosin. Diese zuletzt genannte Verbindung wird umgewandelt in den 5-Cp-Toluolsulf onat)-ester oder den 5-(2,4,6-Trimethylbenzolsulfonat)ester durch Umsetzung mit dem entsprechenden Arylsulf onylchlorid und der so gebildete Ester wird umgesetzt mit Natriumazid, um die SuIfonat estergruppe durch die Azido gruppe zu ersetzen. Durch kata-

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lytische Hydrierung der Azidogruppe erhält man dann das für das erfindungsgemäße Verfahren angewandte Ausgangsmaterial.

Die erfindungsgemäßen freien Basen bilden Säur eadditi onssalze mit jeder von einer Vielzahl anorganischer und organischer Säuren. !Pharmazeutisch geeignete Säureadditionssalze werden gebildet mit Säuren wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Kohlensäure Essigsäure, Bernsteinsäure, Zitronensäure, Maleinsäure, Apfelsäure und Pamoasäure. Die freien Basen und ihre Säureadditionssalze sind durch Einstellung des pH-Wertes ineinander überführbar. Sie unterscheiden sich in den Löslichkeitseigenschaften aber sind sonst für die erfindungsgemäßen Zwecke äquivalent.

Die erfindungs gemäßen Verbindungen können in wasserfreier Form sowie in solvatisierter,einschließlich hydratisierter, Form vorliegen. Im allgemeinen sind die hydratisierten und die mit pharmazeutisch geeigneten Lösungsmitteln solvatisierten Formen den wasserfreien oder nicht solvatisierten Formen für die erfindungsgemäßen Zwecke äquivalent.jDie erfindungsgemäßen Verbindungen sind sowohl als einzelne Isomere als auch als Gemische und sowohl als freie Basen als auch als Säureadditionssalze geeignet als antibakterielle Mittel mit einem weiten antibakteriellen WirkungsSpektrum. Als Beispiel ist die antibakterielle Wirksamkeit für ein Produkt enthaltend einen größeren Anteil (75 % oder darüber) Aminodeoxybutirosin A und einen kleineren Anteil (25 % oder darunter) Aminodeoxybutirosin B gegenüber repräsentativen Mikroorganismen in der folgenden Tabelle angegeben. In dieser Tabelle ist die in vitro antibakterielle Aktivität angegeben in Werten für die minimale hemmende Konzentration gemessen in Mikrogramm freie Base pro cm Medium, gegen verschiedene Arten von Bakterien. Die in der Tabelle angegebenen Daten wurden erhal-

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tin unter Anwendung Üblicher Stäffime der jeweiligen

Minimale

Staphyloöoecus aureus 0,25

giäphylo coccus au2?eüS 1Ö,Ö

Pseudomohas äeimginosa 1-₄5

Ischericliiä coli 2,0

Shigella soiinei > 2,5

tuberculosis 5»O

Bei Verweildung eines ähnlichen Gemisches von ■butirosin A und Aminodeoxybutirosin B wurde ein hoher Grad von antibakterieller in vivo Aktivität bei einem VerBuch an aJteut infizierten Mäusen gezeigt. Die Mäuse wurden mit der 100-fachen mittleren lethalen Dosis (100 LDc₀) von Pseudomonas aeruginosa intraperitoneal mit Hucin als Zusatz infi^- 2ieft. Gleichzeitig wurde ^jederMaus eine Einzeldosis Aminodeösqfbutirosin subfoitan verabreicht* Die Doeis wur"de in zuaehfflenden Mengen verabreicht und die Anzahl der Tiere ^ die starben und überlebten, wurde über einen Zeitraum Von 7 Tagen notiert. Die Dosis Aminodeoxybutirosin, die erforderlich war, um 50 % der Tiere von einer tödlichen Infektion (PD^q) 2u schützen, wurde als 19 iag/kg bestimmt. Der entsprechende Wert für PD_t-g für Butirosin betrug um 4-5 mg/kg. Damit sind die erfindungsgemäßen Verbindungen wertvoll aufgrund ihrer sntibakterlelien Wirksamkeit ia allgemeinen und ihre Aktivität gegenüber Pseudomonas aeruginosa besonders* Sie können entwedei oral, parenteral oder lokal verabreicht werden.

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Aufgrund ihres breiten antibakteriellen Spektrums sind die erfindungsgemäßen Verbindungen geeignet als antibakterielle Mittel für in vitro Anwendungen wie zum Sterilisieren von Laborgeräten und Oberflächen zum Sterilisieren pharmazeutischer Produkte und zur Aufrechterhaltung steriler Bedingungen während pharmazeutischer Arbeit. Zum Sterilisieren von Laborgeräten und Oberflächen u.a. in vitro Anwendungen können die Verbindungen in Form einer 0,1 bis 1,0 %-igen wässrigen Lösung angewandt werden.

Die Erfindung wird durch das folgende Beispiel näher erläutert .

Beispiel

Ein geeignetes Ausgangsmaterial ist ein Gemisch, enthaltend einen größeren Anteil (75 % oder darüber) des N, N¹ , N¹ ' , Ή¹ ' ^l-Tetra(trifluoracetyl)-derivates von Ii -(4-Amino-2-hydroxybutyryl)-5-0-(5-azido-5-deoxy-D-xylofuranosyl)-4-0-(2,6-diamino-2,6-dideoxy-D-glucopyranosyl)-2-deoxystreptamin und eine kleinere Menge (25 % oder weniger) des N, N', N¹¹, N¹ ' '-Tetra-(trifluoracetyl)-derivates von N -(4-Amino-2-hydroxybutyryl)-5-0-(5-azido-5-deoxy-D-ribofuranosyl)-4-0-(2,6-di amino-2,6-dideoxy-D-glucopyranosyl)-2-deoxystreptamin. Ein Gemisch von 2 g

■χ -ζ

dieser Ausgangssubstanz, 100 cm/ Methanol, 25 cnr Wasser und 200 mg 20 % Palladium auf Kohle als Katalysator wurde gerührt, während Wasserstoffgas 2 Stunden lang durchgeleitet wurde. Das Gemisch wurde filtriert, um den Katalysator zu entfernen und das Filtratunter vermindertem Druck eingedampft, wobei man ein Produkt erhielt, bestehend aus einem größeren Anteil (75 % oder darüber) des N, K¹, H¹¹, N¹'^l-Tetra(trifluoracetyl)-deri^ vats von 5-0-(5-Amino-5-deoxy-D-xylofuranosyl)-N -(4-amino-2- ■ hydroxybutyryl)-4-0-(2,6-diamino-2,G-dideoxy-D-glucopyranosyl)-2-deoxystreptamin und einem kleineren Anteil (25 % oder weniger)

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des N,-K¹, N", N¹ · ^l-Tetra<trifluoracetyl)-derivats von 5-0-(5-Amino-5-deoxy-D-ribofuranosyl)-N -(4-amino-2-hydroxytoutyryl)-4-0-(2,6-diamino-2,6-dideoxy-D-glucopyranosyl)-2-deoxystreptamin. Dieses rohe Produkt wurde auf ein Volumen von 36 cm -mt Wasser und 6 cnr 2 η wässrigem Natriumhydroxid verdünnt und 3 Stunden "bei Raumtemperatur gehalten. Die entstehende Lösung wurde auf eine Säule gegossen, die gepackt war mit 30cnr eines schwach sauren Kationenaustauscherharzes in Form der freien Säure. Ein Harz wie Amberlit IRC-5Q ist geeignet. Die Säule wurde mit Wasser gewaschen und das Produkt dann aus der Säule durch Eluieren mit 200 cnr 2 η wässrigem Ammoniak entfernt. Das Eluat wurde unter vermindertem Druck auf 'ein kleines Volumen Lösung eingedampft, das dann gefriergetrocknet wurde, um das Produkt als festen Rückstand zu erhalten. Dieses Produkt "bestand aus einem größeren Anteil (75 % oder darüber) von 5-0-( 5~Amino-5-deoxy-D-xylofuranosyl)-H -(4—aminö-2-hydröxybutyryl)-4-0-( 2 j 6-diamino-2, ö-dideoxy-D-glucopyranosyl) -2-deoxystreptämin und einem kleineren Anteil (25 % oder weniger) von 5-0-( 5-Amino-5-deoxy-D-ribofuranosyl) -N - (4-amino-2-hydroxybutyryl) 4-0-(2,6-diamino-2,6-dideoxy-D-glueopyranosyl)-2-deoxystreptamin. Die spezifische Drehung föC] ^ (0,96 % in Wasser) =4-25,7⁹. Dünnschichtchromatographie über Silicagel unter Verwendung von 1:1 Methanol 2 η wässriger Ammoniak zeigte einen einzelnen Punkt beim Auf sprühen von Ninhydrin. R^ ungefähr 0,06.

Das oben als freie Base erhaltene Produkt besitzt die empirische Formel Cpi^t-2^6^11 · ^Es reagiert leicht mit Kohlendioxid, wenn es der Luft ausgesetzt wird, wobei sich ein Dicarbonat der Formel C_o.H.,_oN_c0^ *2H_oC0_a bildet. Das Dicarbonat wandelt sich beim Erhitzen auf 170 C wieder in die freie Säure um. Eine Lösung von 2,0 g der freien Base in 100 cnr Wasser wurde mit 2 η Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 6,5 titriert und gefriergetrocknet, wobei man als Rückstand das Disulf at-Trihydrät erhielt. Die spezifische Drehung ^₀Q _D (1 % in Wasser) = +23,8°.

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- 11 - 42

Beim Trocknen dieses Produktes bei 100 C unter vermindertem Druck erhielt man das wasserfreie Disulfat C~*H^pNgG-**2BUSÖk *

Die oben erhaltene freie Base kann auch durch Umwandlung in das N₁ N¹, N¹¹, jf¹ * '-Penta(trifluoracetyl)-derivat identifiziert werden, Für diesen Zweck wurden 2 car S-Äthylthiotrifluoraeetat zu einer Lösung von 100 mg der oben angegebenen freien Base in 2 car Methanol zugegeben. Die Lösung wurde 16 Stunden bei Baumtemperatur gehalten und dann unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde in 100 ear Acetonitril gelöst und 1 g pulverförmiges Calciumcarbonat zugegeben* Unter äußerem Kühlen wurde das entstehende Gemisch bei 0 bis 5°C gerührt und 0,6 car Trifluoressigsäureanhydrid zugetropft. Das Gemisch wurde 3 Stunden bei 0 bis 5°0 gerührt, 2 Tage bei 0° gehalten und filtriert. Das FiItrat wurde unter vermindertem Druck eingedampft und der Bückstand in 8 ear Methanol und 2 car Wasser gelöst. Die Losung wurde bei 0 bis 5°C gerührt und Calciumhydroxid zugegeben, bis ein pH-Wert von 5 erhalten blieb. Das Gemisch wurde unter vermindertem Druck eingedampft und der Bückstand in 12 car⁵ Ithylacetat gelöst. Die Äthylacotatlösung wurde 3 mal mit ^e 1 car Wasser gewaschen, getrocknet und eingedampft. Man erhielt als Bückstand das N, N¹ ,Ii" ,N"¹ U« ^MI-Penta(trifluoracetyl)-derivat. Das Infrarotabsorptionsspektrum zeigte charakteristische Maxima bei 1710, 1660 und 1560 em~ . Durch DünnschichtChromatographie über Silicagel unter Verwendung eines 4 : 1-Gemisches von Benzol und Methanol erhielt man einen einzelnen Punkt, der durch Aufsprühen von Phosphormolybdat entwickelt wurde. B^ ungefähr 0,23. Das N, IT * ^ N^rf, Ν¹¹·, N¹·*'-Penta(trifluoracetyl)-derivat kann durch Lösen in Ithylacetat und wieder Ausfällen mit Äther weiter gereinigt werden.

Nach dem Verfahren des ersten Absatzes dieses Beispiels, aber unter Verwendung des N, N*_t N'% N¹.¹'-Tetra-(trifluor-

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acetyl)-derivats von N -(4-amino-2-hydroxybutyryl)-5-0-(5-azido-5-deoxy-D-xylofuranosyl)-4-0-(2,6-diamino-2,6-dideoxy- D-glucopyranosyl)-2-deoxystreptamin ist das durch Hydrierung erhaltene" Produkt das N, N¹ , N¹ · , N¹ · '-TetraCtrifluoracetyl)-derivat von 5-0-(5-Amino-5-deoxy-D-xylofuranosyl)-N ^(4-amino-2-hydroxybutyryl) -4-0-(2,6-diamino-2,6-dideoxy-D-glucopyranosyl)-2-deoxystreptamin. Dieses wurde durch Umsetzung mit wässrigem Natriumhydroxid in der oben beschriebenen Weise umgewandelt in 5-0-(5-Amino-5-deoxy-D-xylofuranosyl)-N -(4-amino-2-hydroxybutyryl)-4-0-(2,6-diamino-2, G-dideoxy-D-glucopyranosyl) ■ 2-deoxystreptamin.

Nachjdem in dem ersten Absatz beschriebenen Verfahren, aber unter Verwendung des N, N¹, N¹', N¹''-TetraCtrifluoracetyl)-derivats von N -(4-Amino-2-hydroxybutyryl)-5-0-(5-azido-5-deoxy-D-ribofuranosyl)-4-0-(2,6-diamino-2,6-dideoxy-D-glucopyranosyl)-2-deoxystremptamin ist das durch Hydrierung erhaltene Produkt das N, N¹, Ν¹¹, M"¹ ''-Tetra(trifluoracetyl)-derivat von 5-0-(5-Amino-5-deoxy-D-ribofuranosyl)-N -(4-amino-2-hydroxybutyryl) -4-0- ( 2,6-diamino-2, ö-dideoxy-D-glucopyranosyl) -2-de oxystreptamin. Dieses wird durch Umsetzung mit wässrigem Natriumhydroxid in der beschriebenen Weise umgewandelt in 5-0-(5-Amino-5-deoxy-D-ribofuranosyl)-N -(4-amino-2-hydroxybutyryl)-4-0-(2,6-diamino-2,ö-dideoxy-D-glucopyranosyl)-2-deoxystrept amin.

Jede der oben beschriebenen freien Polyaminobasen wurde umgewandelt in das Hydrochlorid, Sulfat, Phosphat, Haleat und Citrat durch Umsetzung mit Salzsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Maleinsäure bzw. Zitronensäure.

Herstellung der Ausgangssubstanzen

Der Einfachheit und Klarheit wegen werden die verschiedenen chemischen Zwischenprodukte in diesem Abschnitt nach der Buti-

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rosin-Ierminologie bezeichnet, wie oben erläutert. In diesem Abschnitt bedeutet der Ausdruck "Butirosin" entweder Butirosin A, Butirosin B oder ein Gemisch, von Butirosin A und Butirosin B* Die spezifischen physikalischen Konstant en, die angegeben sind, beziehen sich auf die Derivate entsprechend einem größeren Anteil (75 % oder .darüber) Butirosin A und einem kleineren Anteil (25 % oder weniger) Butirosin B.

Eine lösung von 8,83 g Butirosin in 1ÖO cur Methanol und 40 cnr Athyltrifluoracetat wurde 3 Stunden unter Rückfluß erhitzt und unter vermindertem Druck eingedampft* Der rohe Rückstand (14,5 g) wurde in 200 cur Acetonitril gelöst und 33 g pulverförmiges Galciumcarbonat wurden zugegeben. Das entstehende Gemisch wurde bei O bis 5°G gerührt, während 22 cnr Srifluoressigsäureanhydrid innerhalb von 90 Minuten zugetropft wurden.. Das Gemisch wurde weitere 30 Minuten bei 0 bis 5°ö gerührt und dann 3 Stunden bei Raumtemperatur. Es wurde filtriert und das ITiltrat unter vermindertem Druck eingedampft. Der sirupartige Rückstand wurde in 100 cnr Methanol und 25 cnr Wasser gelöst und die Lösung bei 0 bis 5°C gerührt, während Calciumhydroxid in Anteilen zugegeben wurde, bis ein pH-Wert von 5 bis 6 erhalten blieb. Das Gemisch wurde dann unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand zwischen 300 cur Äthyl ac et at und 25 cnr Wasser verteilt. Die organische Phase wurde abgetrennt, 3 mal mit ge 30 cnr Wasser gewaschen, getrocknet und eingedampft, wobei man einen Rückstand von N, H', N¹¹, N¹¹¹-Tetra(trifluoracetyl)-butirosin erhielt. Das Infrarotabsorptions spektrum zeigte charakteristische Maxima bei I710, 1660

—1
und I56O cm . Bei DünnschichtChromatographie auf Silicagel mit einem 4 : 1-Gemisch von Benzol und Methanol und anschliessende Behandlung mit Phosphormolybdatspray erhielt man einen einzelnen Fleck (R~ ungefähr 0,1).

- 14 -

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- 14 - . 42 451

Eine Lösung von ?,20 g von N, H¹, JM ·, N" '-a}etra(trifluoracetyl)-butirosin in 100 cnr trockenem Pyridin, die auf -10 bis -5°C untei* Stickstoffatmosphäre, gehalten wurde, wurde . unter Rühren mit 2,2 g p-Toluolsulfonylchlorid, das in einzelnen Anteilen innerhalb 1 Stunde zugegeben wurde, behandelt. Das Gemisch wurde eine weitere Stunde bei -10°C gerührt und dann 18 Stunden bei O⁰C stehen gelassen. Es" wurde unter vermindert em Druck eingedampft und der Rückstand zwischen 200 car Ithylacetat und 30 cnr Wasser verteilt. Die organische Phase wurde abgetrennt mit einzelnen Anteilen verdünnter Salzsäure und mit gesättigter wässriger Natriumchloridlösung gewaschen, getrocknet und eingedampft. Der Rückstand

-χ -z

wurde in 8 car Methanol und 16 cur Benzol gelöst und die Lösung auf eine Säule, enthalt end 200 g Silicagel, gegossen. Die Säule wurde mit einem 5 * 1-Gemisch von Benzol und Methanol eluiert und das Eluat in 10 cnr Fraktionen gesammelt. Diejenigen Fraktionen, die einen einzelnen Fleck (beim Aufsprühen von Phosphormolybdatspray) R^. 0,29 bei der Dünnschichtchromatographie auf Silicagel mit einem 4 : 1-Benzol- und Methanolgemisch ergaben, wurden zusammengegeben und unter vermindertem Druck eingedampft. Man erhielt als Rückstand den N, N¹, N¹¹, U¹ ' '-Tetra(trifluoracetyl)-butirosin 5-(p-toluolsulfonat)-ester. Dieses Produkt zeigt ein Ultravioletabsorptionsmaximum bei 261 nm, E>, = 6,24 und Infrarotabsorptionsmaxima bei 1710, 1660, 1550 und 1350 cm" . Die spezifische Drehung [£] -q (0,94 % in Methanol) = +18,5°.

Nach einem unterschiedlichen Syntheseverfahren wurden 2,0 g 2,4,6-Trimethylbenzolsulfonylchlorid nach und nach unter Rühren zu einer Lösung von 8,33'gK, K', N", I" '-Tetra(trifluor- . acetyl)-butirosin in 100 crn^ trockenem Pyridin, die auf 0 bis 5⁰C gehalten und vor Feuchtigkeit geschützt wurde, zugegeben. Das Gemisch wurde 16 Stunden bei 0⁰C,5 Stunden bei 15°C und Stunden bei Raumtemperatur stehen gelassen. Es wurden weitere

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0,10 g 2,4,6-Trimethylbenzolsulfonylchlorid zugegeben und das Gemisch weitere 16 Stunden stehen gelassen. Es wurde dann unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand zwischen 250 cnr Äthylacetat und 20 cnr Wasser verteilt. Die organische Phase wurde abgetrennt mit 20 cnr kalter 3 n Salzsäure und mit gesättigter wässriger Natriumchloridlösung gewaschen, getrocknet und eingedampft. Der Bückstand wurde in 8 cnr Methanol und 16 cnr Benzol gelöst und die Lösung auf eine Säule gegossen, enthaltend 200 g Silicagel. Die Säule wurde mit einem 5 J 1-Gemisch von Benzol und Methanol eluiert und das Eluat in Anteilen von 10 cur gesammelt. Diejenigen Fraktionen, die einen einzelnen Fleck (beim Aufsprühen von Phosphormolybdat) bei R_f 056 bei der Dünnschicht Chromatographie auf Silicagel mit einem 4 : 1-Gemisch von Benzol und Methanol zeigten, wurden zusammen gegeben und unter vermindertem Druck eingedampft. Man erhielt einen Rückstand des N, N¹, N¹', N¹ « *-Tetra(trifluoracetyl)-butirosin - 5-(2,4,6-Trimethylbenzolsulfonat)-estern. Es wurden Ultravioletabsorptionsmaxima beobachtet bei 285 nm, E^j = 16,1; 277 nm, E^j = 15,7; und 231 nm, Έ_Λ = 86,5· Das Infrarotabsorptionsspektrum zeigte charakteri-

—1 stische Maxima bei 1710, 1655 und 1555 cm .

Ein Gemisch von 2,83 g N, N¹, N", N" '-Tetra(trifluoracetyl)-butirosin, 5-(p-Toluolsulfonat)-ester und 1,50 g Natriumazid in 75 cnr Ν,Ν-Dimethylformamid wurde 4 Stunden auf 94 bis 100°C erhitzt und dann unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand würde zwischen I50 cnr Äthylacetat und 20 cnr Wasser verteilt. Die organische Phase wurde abgetrennt, 2 mal mit je 10 cnr Wasser gewaschen, getrocknet und eingedampft, wobei man das 5-A.zidoderivat erhielt. Das gleiche Produkt wurde erhalten unter Anwendung einer äquivalenten Menge des 5-(2,4,6-Trimethylbenzolsulfonat)-esters anstelle des 5-(p-Toluolsulfonat)-esters. Das 5-Azidoderivät, das auf diese Weise erhalten wurde, und einen größeren Anteil (75 % oder darüber) des N, N¹, N¹¹, N¹'^f-.Tetra(trifluoracetyl)-derivates

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- 16 - 42 451

von IT -(4-Amino-2-hydro3cybutyryl)-5-0-(5-azido-5-deoxy-D-xylöf uranosyl)-4-O-( 2,6-diamino-2, o-dideoxy-D-glucopyranosyl) 2-deoxystreptamin und einen kleineren Anteil (25 % oder weniger) des N, N¹, N¹',. N¹'*-Tetra(trifluoracetyl)-derivats von

1 ■

H" -(4-Amino-2-hydroxybutyryl)-5-0-(^-azido-^-deoxy-D-ribofuranosyl)-4-0-(2,6-diamino-2,e-dideoxy-D-glucopyranosyl)-2-deoxystreptamin, nat eine spezifische Drehung fcLT jP (0,566 % in Methanol) = +32,4°. Das Infrarotabsorptionsspektrum zeigte

—1 charakteristische Maxima bei 2100, 1710, 1660 und 1555 cm . Bei DünnschichtChromatographie auf Silicagel mit einem 3:1-Gemisch von Benzol und Methanol erhielt man einen einzelnen Fleck (beim Aufsprühen von Phosphormolybdat) E^. ungefähr 0,30.

Patentansprüche

62XXV

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Claims (1)

1. IJU. ING. F. WUKSTIlO FF

   UU.K.T.PECHMANN DR. ING. D. BKIIIlENS DIPL.. ING. K. GOKTZ

   PATENTANWÄLTE

   8 MÜNCIIKN OO schweioehstkas.se

   TXLKPOH (OBIl) 0(1 iiO SI TKLEX 524 070

   TBLEOIlAMMKt PBOTJtCTPATKNT

   1A-42 451

   Patentanspruch

   5-0-(5~Amino-5-deoxy-D-pentofuranosyl)-N -(4-amino-2-hydroxybutyryl)-4-0-(2,6-diamino-2,6-dideoxy-D-glucopyranosyl)-2-deoxystreptamine der Formel

   OH₂NH₂

   CH-O

   in der R die Gruppe

   H-C-OH HO-C-H H-C ' CH₂NH₂

   Ah .

   H-C-OH ^Oder H-ό-ΟΗ

   ,0 bedeutet,

   CH₂NH₂

   und deren Säureadditionssalze.

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