DE2243554A1 - Antibiotikum violamycin, dessen aglycon sowie verfahren zu ihrer herstellung - Google Patents

Antibiotikum violamycin, dessen aglycon sowie verfahren zu ihrer herstellung

Info

Publication number
DE2243554A1
DE2243554A1 DE2243554A DE2243554A DE2243554A1 DE 2243554 A1 DE2243554 A1 DE 2243554A1 DE 2243554 A DE2243554 A DE 2243554A DE 2243554 A DE2243554 A DE 2243554A DE 2243554 A1 DE2243554 A1 DE 2243554A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
violamycin
antibiotic
mycelium
culture
fraction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
DE2243554A
Other languages
English (en)
Inventor
Werner Dipl Biol Dr Rer Fleck
Wolfgang Dipl Chem Koch
Peter Dr Med Kramer
Helmut Dipl Biol Prauser
Dietrich Dipl Chem Dr Strauss
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jenapharm GmbH and Co KG
Original Assignee
VEB Jenapharm
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by VEB Jenapharm filed Critical VEB Jenapharm
Priority to DE2243554A priority Critical patent/DE2243554A1/de
Priority to DK442872AA priority patent/DK140899B/da
Priority to AT785172A priority patent/AT315374B/de
Priority to CS726394A priority patent/CS171514B1/cs
Priority to FI722653A priority patent/FI50965C/fi
Priority to SU721835325A priority patent/SU663724A1/ru
Priority to NO3648/72A priority patent/NO137904C/no
Publication of DE2243554A1 publication Critical patent/DE2243554A1/de
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
    • C07H15/252—Naphthacene radicals, e.g. daunomycins, adriamycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C17/00—Preparation of halogenated hydrocarbons
    • C07C17/093—Preparation of halogenated hydrocarbons by replacement by halogens
    • C07C17/16—Preparation of halogenated hydrocarbons by replacement by halogens of hydroxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C17/00—Preparation of halogenated hydrocarbons
    • C07C17/093—Preparation of halogenated hydrocarbons by replacement by halogens
    • C07C17/20—Preparation of halogenated hydrocarbons by replacement by halogens of halogen atoms by other halogen atoms
    • C07C17/202—Preparation of halogenated hydrocarbons by replacement by halogens of halogen atoms by other halogen atoms two or more compounds being involved in the reaction
    • C07C17/208—Preparation of halogenated hydrocarbons by replacement by halogens of halogen atoms by other halogen atoms two or more compounds being involved in the reaction the other compound being MX
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C245/00—Compounds containing chains of at least two nitrogen atoms with at least one nitrogen-to-nitrogen multiple bond
    • C07C245/12—Diazo compounds, i.e. compounds having the free valencies of >N2 groups attached to the same carbon atom
    • C07C245/14—Diazo compounds, i.e. compounds having the free valencies of >N2 groups attached to the same carbon atom having diazo groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C255/00—Carboxylic acid nitriles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/56—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds from heterocyclic compounds
    • C07C45/57—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds from heterocyclic compounds with oxygen as the only heteroatom
    • C07C45/58—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds from heterocyclic compounds with oxygen as the only heteroatom in three-membered rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C57/52—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing halogen
    • C07C57/58—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing halogen containing six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C57/52—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing halogen
    • C07C57/58—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing halogen containing six-membered aromatic rings
    • C07C57/60—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing halogen containing six-membered aromatic rings having unsaturation outside the rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C57/64—Acyl halides
    • C07C57/76—Acyl halides containing halogen outside the carbonyl halide groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/42—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups
    • C07C59/56—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups containing halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D303/00—Compounds containing three-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D303/02—Compounds containing oxirane rings
    • C07D303/48—Compounds containing oxirane rings with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D307/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/32—Oxygen atoms
    • C07D307/33—Oxygen atoms in position 2, the oxygen atom being in its keto or unsubstituted enol form
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/54—Quaternary phosphonium compounds
    • C07F9/5407—Acyclic saturated phosphonium compounds

Description

  • Verfahren zur Gewinnung eines neuen Antibioticums Violamycin sowie seines Aglycons.
  • Die Erfindung betrifft ein -Verfahren zur Gewinnung eines bisher unbekannten Pigmentantibioticums mit cancerostaticher, virostatischer und insbesondere mit neuartiger und überraschender Wirksamkeit gegen verschiedepe Erreger von Mycoplasma-Infektionen, das als Violamycin bezeichnet wird. Gegen Tumorkrankheiten und durch Viren hervorgerufene Krankheiten bei Mensch und Nutztier gibt es nur wenige bzw unzureichende Mittel.
  • Es ist ein Nachteil, daß die gegen Mycoplasmen-Erkrankungen eingesetzten Chemotherapeutioa keine bakterizide Wirkung auf die Erreger zeigen.
  • Zweck der Erfindung ist die Herstellung eines. Heilmittels gegen Tumor-, Virus- und Mycoplasma-Krankheiten.
  • Ihr liegt die Aufgabe zugrunde, ein geeignetes Herstellungsterfahren anzugeben.
  • Es wurde gefunden, daß in den Fermentationslösungen des Stammes IMET JA 6844 ein für die Therapie von neoplastischen, viralen und insbesondere durch Mycoplasmen -hervorgerufenen Erkrankungen geeignetes neues Antibioticum, das als Violamycin bezeichnet wurde, in guter Ausbeute gebildet wird und unter den im folgenden beschriebenen Verfahrensbedingungen isoliert werden kann.
  • Der Mikroorganismus zur Gewinnung des Violamycins ist in der Stammsammlung des Zentralinstitus für Mikrobiologie und experimentelle Therapie, Jena, der Deutschen Akademie der Wissenschaften zu Berlin unter der Stammsammlungs-Nummer IMET JA 6844 hinterlegt.
  • Der Wildtyp des Bildners wurde 1958 aus einer Erdprobe von der Schwellenburg bei Elxleben (Erfurt) isoliert. Der Stemm gehört zur Gattung Streptomyces und entspricht der Diagnose von Streptomyces violaceus (Rossi~Doria 1891, Kraszilnikov 1941, Waksman 1953) wie sie nach Untersuchung des Neo-Typ-Stammes ISP 5082 (-IMI-I, RIA 565, ATCC 15888) im Internationalen Streptomyces Project von Shirling und Gottlieb (Int. J. syst. Bect. 19:497(1969) gegeben wird. Der Stamm hat folgende Merkmale: Das Substratmycel ist auf den verschiedenen Medien und zu verschiedenen Zeiten rot, violett oder blau gefärbt, Das Pigment, das auch in die Agar-Medien diffundieren kann, hat Indikatoreigenschaften: sauer-rot, alkalisch-blau. Das Luftmycel ist blaßrosa, rosa oder graurosa gefärbt. Die Sporenketten sind in mehr oder weniger regelmäßigen, meist offenen Spiralen an z.T. langen Haupthyphen angeordnet. Die Sporenoberfläche ist stachelig. Auf Pepton bzw. Tyrosin-haltigen Medien diffundiert ein braunes bis blauschwarzes Pigment in den Agar. Der Stamm wächst auf Basalmedium mit Zusatz von D-Glucose, L-Arablnose, D-Xylose, m-Inosit, D-Mannit, D-Fructose, Rhamnose, Saccharose und Raffinose.
  • Das erfindungsgemäße Verfahren besteht darin, daß unter aeroben Kulturbedingungen in einem flüssigen Nährmedium mit entsprechenden Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie Mineralsalzen der Streptomaces violaceus-Stamm IMET JA 6844 oder seine Mutanten und Varianten gezüchtet werden. Die Züchtung wird in geeigneten N§hrmedien bei einer Temperatur von 25-37 0C während 2 bis 6 Tagen unter Belüftung und RUhrung durchgeführt. Nach Abtrennen des Mycels aus der Kulturlösung wird das Antibioticum Violamycin mit organischen Lösungsmitteln aus dem Kulturfiltrat und Mycel extrahiert. Die Extrakte werden bis zur wässrigen Phase konzentriert und aus den Rohkonzentraten wird das Antibioticum erneut in die organische phase überführt und aus den Extraktkonzentraten durch Ausfällen mit einer Fraktion niedrigsiedender kohlenwasserstoffe gewonnen und durch geeignete chromatographische Verfahren gereinigt.
  • Die Kultvierung des Stammes BEET JA 6844 sowie- seiner Mutanten und Varianten erfolgt unter aeroben Bedingungen. An Erde lyophil getrocknetes Sporenmaterial des Stammes wird in geeignete Agar nährböden und nachfolgend in flüssige, vorher szerilisierte Nächmedien geimpft und das entstehende Mycel wird in an sich bekannter Weise bei einer Tanperatur zwischen 25 und 37 oO (vorzugsweise 28 °c) über einen Zeitraum von 2 bis 6 Tagen (vorzugsweise 4 Tagen) bei einer Acidität, die zu Beginn des Fermentationsprozesse zwischen pH 6,2 und 7,0 und am Ende zwischen pH 7,5 und 8,3 liegt, kaltiviert. Das Nährmedium besteht aus Kohlenstoff- und Stickstoffquellen, sowie aus anorganischen Salzen. Als Kohlenstoffquellen-können Stärke, Glucose, Glycerin, Mannit, Dextrin, Saccharose, Sojaöl und Soaamehl werwendet werden.-Als Stickstoffquellen können außer den oben erwähnten stickstoffhaltigen Substraten auch Trockenhefe, Fleischpepton und Casein in Trage kommen, Gute Fermentationsergebnisse können bei Zusatz von Mineralsalzen erzielt werden. Letztere begünstigen den Verlauf der Fermentation je nach dem verwendeten Nährmedium. In komplexen Medien, die ver- -schiedene Mehle enthalten, haben sich Zusätze von Kalziumkarbonat, Na-Phosphat bzw. K-Phosphat als vorteilhaft erwiesen. Die Permentation des Bildners kann in Steilbrustflaschen und Rundkolben verschiedenen Inhalts, im Glasfermenter sowie in V2A-Tanks durchgeführt werden.
  • Die Isolierung des Pigment-Antibioticums Violamycin wird in der kreise durchgeführt, daß das Antibioticum aus dem Kulturfiltrat mit organischen, mit Wasser nicht oder wenig mischbaren, und aus dem Mycel mit organischen, mit Wasser mischbaren Lösungsmitteln extrahiert, nach Konzentrieren der Extrakte in die wässrige Phase überfährt, aus der wässrigen Phase bei pH 3,0 bis pH 9,0 (vorzugsweise bei pll 8,2 )mit organischen, mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmitteln erneut extrahiert und aus den Extraktkonzentraten durch Versetzen mit Petroläther oder Benzin unter Ruhen ausgefällt, vom Lösungsmittel durch Filtration befreit, in Chloroform gelöst, vom unlöschlichen Rückstand filtriert, die Lösung mit Wasser gewarohen erneut konzentriert und durch Versetzen mit Petroläther die Fraktion A gefällt und in niederen Alkoholen gelöst säulenchromatographisch gereinigt und in den biologisch inaktiven Chromo.-phor Violamycinon A und den biologisch aktiven Antibioticakomplex Violwnycin A getrennt wird. Die Fraktion B wird au dem Waschwasser des Chloroformextrakts durch Extraktion bei pH 6 bis pH 9 mit Butanol reextrahiert, der Reextrakt wird konzentriert und das Gemisch mit Petroläther gefällt, die Fraktion B in niederen Alkoholen gelöst und in das Antibioticum Violamycin B und den biologisch inaktiven Chromophorkomplex Violamyo inon B chromatographisch getrennt.
  • Violamycin A und B unterschieden sich durch den Gehalt an Zuckerverbindungen und können papierchromatographisch in 6 verschiedene Komponenten getrennt werden. Die Hydrolysate von Violamycin A und B geben das gleiche Chromophorgemisch, jedoch mit quantitativen Unterschieden der einzelnen Komponenten. Die Ohromophorkomplexe von Violamyoinon A und B unterschieden sich ebenfalls in der Qualität der Chromophorkomponenten.
  • Die aus den Hydrolysaten gewonnenen Chromophorgemisohe werden säulenchromatographisch getrennt, die Chromophore Violamycinon A1 - A6 bzw. B1-B6 miteinander verglichen und ihre Zugehörigkeit zur chemischen Strukturklasse der Anthracyclinone bestimmt0 Das Antibioticum Violamycin A ist ein Komplex amorpher rotbrauner Substanzen, der sich gut in Chloroform, Aceton und Alkoholen, wenig in Benzol und nicht in Äther und Wasser löst. Das Antibioticum Violamycin A besitzt Indikatoreigenschaften und ist in sauren Lösungen rot, in alkalischen blau.
  • Das Antibioticum Violamycin B ist ein Komplex amorpher rotbrauner Substanzen, der sich gut in Wasser, niederen Alkoholen, Aceton und Chloroform, dagegen nicht in Benzol, Petroläther und Äther löst. Das Antibiobicum besitzt Indikatoreigenschaften und ist in sauren Lösungen rot, in alkalischen blau.
  • Violamycinon A1 (B1) und A2 (B2) haben wie das bekannte Rhodomycinon bzw. Isorhodomycinon in C C10-Stellung eine OH-Gruppe und entsprechen damit dem Typ des #'-Rhodomycinons bzw. ß-Isorhodomyeines. Violamycinon A3 (B3), A4 (B4), A5 (B5) und A6 (B6) haben in C10-Stellung eine Carbomethoxygruppe und entsprechen dem Typ des #'-Rhodomycinons bzw. -Isorhodomycinons, die bisher als Bestandteile eines Äntibioticums unbekannt sind. A3 (B3) und A5 (B5) sind nach ihrer UV-Absorbtion die Isorhodomycinon-Verbindngen, A4 (34) und A6 (B6) \ die Rhodomycinon-Verbindungen.
  • Violamycinone zeigen folgende Absorptionsmaxima im sichtbaren Bereich des elektromagnetischen Spektrums: A1 (B1) Absopbtion bei = 564; 551; 524; 495 mµ A3 (B3) " " = 564; 551; 524; 495 mµ A5 (B5) " " = 564; 551s 524; 495 mu A2 (B2) " " = 529; 516; 495; A4 (B4) " " = 529; 516; 495; A6 (B6) It = 529; 516; 495; Sowohl frische Fermentationsbrühen dea Violamycin-Bildners als auch das aus ihnen isolierte Antibioticum wirken wachstumshemmend auf prampositive Bakterien und mycobakterien, in geringerem Maße auf Vertreter granmegativer Batterien, dagegen werden Hefen und Pilze nicht- antibiotisch beeinflußt Gegen Säugerzellen in vitro und gegen tierexperimentelle Tumoren der Maus entfaltet Violamycin catostatische bzw. cancerostatische Aktivität, Untersuchung der cancerostatischen Wirkung des Antibioticums Violamycin.
  • In der 1. Stufe des Cancerostatica-Tests (Bereich Experimentelle Therapie des ZIMET Jena) entfaltet das Rohprodukt des Violamycins an Mäusen, denen die experimentellen Leukämien L 1210 und LAJI bzw. das Sarkom 180 übertragen wurden, Wirksamkeit gegen das Sar-Icom 180. Bei einmaliger i.p.-Applikation von 5 bzw. 2,5 mcg Violamycin-Rohprodukt pro 20 g Maus wird das Wachstum des soliden Tumors im Vergleich zu unbehandelten Kontrollen um 48,9 bzw.
  • 53,6% gehemmt.
  • Bakterielle Viren werden ebenso viie Vertreter animalischer Viren intrazellulär durch das Antibioticum in ihrer Vermehrung gehemmt, ohne gleichzeitiges Blockieren aes Wirt szell stoffwechsels. Eine besonders starke Wirksamkeit übt Violamycin auf die Zellteilung und den Ruhe stoffwechsel von Mycoplasma-Artcn aus, Untersuchung der bakteriostatischen und bakteriziden Wirkung des Antibioticums Violamycin auf Mycoplasmen Die Wirkung des Antibioticums wurde an 2 in der Landwirtschaft, inobusondere in der Viehzucht und Nutztierhaltung bedeutsamen Tierseuchenerregern geprUft. Violamycin A u. B zeichnen sich durch eine überraschexü starke bakteriostatische und gleichzeitig auch bakterizide Aktivität gegen Mycoplasma gallispeticum (Stamm S 6) und Mycoplasma hydrohinis aus. Die vergleichende Untersuchung der biologischen Aktivität der Antibioticakomplexe Violamycin A u. B ergibt nach Auswertung des Verdünnungstests auf Bouillon-Nährboden folgende Wirkungsspektrum: Tabelle 1 Testorganismus Minimale Hemmkonzentration bakteriostatisch (mcg/ml) bakterizid mcg/ml Violamycin: Violamycin: A B A B Mycoplasma gallisepticum 0,03 0,15 0,76 0,76 Stamm S 6 Mycoplasma hyorhinis 0,15 0,15 19,0 0,76 Die in Tabelle 1 aufgeführten Resultate zeigen, daß Violamycin A gegen M.gallisepticum (Stamm S 6) stärker bakteriostatisch wirksam ist als Violamycin B, dafür aber Violaycin B eine stärkere bakterizide Aktivität gegen M.hyorhinis entfaltet als Violamycin A. Beide Violamycine unterscheiden sich von den bisher bekannten Naturstoffen mit Wirksamkeit gegen Mycoplasmen durch ihre mehrhundertfach stärkere bakterizide Wirkung.Eine derartige biologische Aktivität gegen Vertreter der Mycoplasmen, die bei Nutztieren Krankheitssymptome hervorrufen können, ist bisher für Anthrycyclin-Antibiotica nicht beschrieben und überraschend.
  • Das neue Antibioticum Violamycin und seine Derivate können als potentielle chemotherapeutica gegen Mycoplasma-Erkankungen von Mensch und Nutztier, gegen Tumor- sowie Viruskrankheiten angesetzt werden.
  • Die folgenden Beispiele dienen dazu, die Erfindung zu erläutern, ohne sie hierauf zu beschränken.
  • Beispiel 1 Zwei 500 ml-Steilbrustflaschen enthalten je 80 ml des folgenden Vorzuchtmediums: Glucose 1,5 % sojamehl . 1,5 % Na-Chlorid 0,5 % Ca-Karbonat 0,1 % primäres K-Phosphat 0,03 % in Leitungswasser Sterilisation: 35 Min. bei 110 °C. Nach Sterilisation liegt die Acidität bei pH 6,3.
  • Jede Steilbrustflasche wird mit einer Sporen- und Mycelsuspension beimpft, welche mit steriler, isotonischer Kochsalzlösung von einer im Reagenzglas auf folgendem Anzucht-Nährboden gezüchteten, 10 bis 14 Tage alten Kultur des Violamycin-Bildners hergestellt wird: Hafermehl 1 % Haferflocken, gemahlen 1 % Agar-Agar 2 % in Leitungswasser Sterilisation: 35 Min. bei 120 OC, natursauer.
  • Die beimpften Vorzuchtkulturen werden 48 Stod. bei 28 0C auf einem Schüttelgerät mit einer Frequenz von 180 U/min. bebrütet. 8 ml einer so bebrüteten Vorzuchtkultur dienen zur Beimpfung von 500 ml -Steilbrustflaschen, die je 80 ml des folgenden Produktions-Mediums enthalten: Glucose 2,0 % Sojamehl 2,0 % Na-Chlorid 0,5 % Ca-Karbonat 0,3 fo in Leitungswasser 0,3 % Sterilisation: 35 Min. bei 115 °C. Die Acidität beträgt nach Sterilisation pH 6,3. Die Temperatur während der Fermentation liegt bei 28 OC und die Schüttelfrequenz bei 180 U/Minute.
  • Nach 72-stündiger Fermentation zird der höchste Gehalt an Violamycin erreicht (125 mcg/ml). Die Aktivitätsbestimmung erfolgt mit Hilfe einer Reihe bekannter und neuer mikrobiologischer Agardiffusions-Testverfahren. Bei letzteren dient die Hemmwirkung des Violamycins auf die Vermehrung bakterieller Viren in ihren Wirtszellen als Maßstab für die Aktivität des antibioticums (Fl&ck,W.
  • 1968, Allg.Mikrobiol. 8 (2), 139 ).
  • Beispiel 2 Man verfährt wie im Beispiel 1 mit dem Unterschied, daß das Produktionsmedium folgende Zusammensetzung hat: Glucose 1 % Stärke 1 % Sijamehl 1 % Bäckerhefe 0,5 % Na-Chlorid 0,5 % Ca-Karbonat 0,3 % in Leitungswasser Sterilisation: 40 Min. bei 116 °C. Die ;.ciditAt liegt nach dem Sterilisieren bei pH 6,2. Der höchste Gehalt an Violemycin wird nach 90 Std. erreicht (100 mcg/ml).
  • Beispiel 3 Mit einer Kultur des Violamycin-Bildners von einem festen Nährboden, wie im Beispiel 1 beschrieben, beimpft man 80 ml des im Beispiel 1 angeführten flüssigen Vorzucht-mediums, welches in einer 500 ml-Steilbrugtflasche enthalten ist. Man bebrütet 24 Std.
  • bei 280C auf einem Schüttelgerät mit einer Frequenz von 180 U/Min.
  • 12 ml der so erhaltenen Kulturbrühe dienen zur Beimpfung von 400 ml des gleichen Vorzucht-Mediums, welches in einem 2 l-Glaskolben enthalten ist. Man bebrütet weitere 24 Std. bei 28 0 und bei einer Schüttelfrequenz von 180 U/min., ehe die so erhaltenen 400 ml Kulturbrühe zur Beimpfung von 20 1 des im Beispiel 1 beschriebenen Produktions-Mediums dienen. Letzteres ist in einem 32 1-Glasfer;nenter enthalten. Während der Fermentation, die mit einer Rührgeschwindigkeit von 400 U/Min. und m:it einer Luftzufuhr von 15 1/Min. ausgeführt wurde, wird die Schaumbildung durch Zusatz kleiner Mengen von Sonnenblumenöl oder anderer, silikonhaltiger Schumschutzm1ttel kontrolliert. 20 1 Kulturlösung werden mit Salzsäure auf pH 5,0 eingestellt und nach Separieren des Mycels werden 18 1 Kulturfiltrat erhalten. Der Butanol-Extrakt des Kulturfiltrates wird im Vakuum auf 1:10 des Ausgangsvolumens eingeangt und mit dem butanolreextrakt des Mycelextraktkonzentrates vereinigt. Zuvor wird das Mycel mit Methanol-zweimal im Verhältbis 1:6 ausgerührt. Die vereinten Extrakte werden unter vermindertem Druck bis auf 1/20-des Methanolvolumens eingeengt und die dabei entstehende wässrige Lösung wird mit Butanol erschöpfend extrahiert. Die vereinten Butanolextrakte werden zusammen mit dem Butanolestrakt des Kulturfiltrates auf 1/25 des Kulturlösungs-Volumens gebracht. Aus dem Endkonzentrat werden unter Zufügen des 3-fachen Volumens an Petroläther 300 g biologisch aktives Rohprodukt (A 6844) pro m3 Kulturlösung erhalten.
  • Beispiel 4 Das Verfahren unterscheidet sich von demjenigen des Beispiels 3 dadurch, daß der Violamycin-Bildner nach Vorzucht in einem 2 1-Glaskolben anstatt in einem 32 l-Glasfermenter in einem 400 1-V2Ä-Tank überimpft wird, der das im. Beispiel 1 beschriebene Produktionsmedium enthält. Die Rührgeschwindigkeit beträgt 280 U/Min.
  • und die Luftzufuhr wird auf 400 l/Min. eingestellt.
  • Aus 300 1 Kulturlösung werden nach dem im Beispiel 3 beschriebenen Verfahren 300 g Rohprodukt A 6844/m3 gewonnen Das Rohprodukt A 6844 wird für die Gewinnung der biologisch aktiven Komplexe Violamycin Ä u. B benutzt.
  • Beispiel 5 200 g Rohprodukt A 6844 werden in 5 1 Chloroform suspendiert und nach 1 stündigem Rühren wird die Lösung vom unlöslichen Rückstand abgetrennt, Die Chloroformlösung wird 5 bis 6 mal mit der hälfte des Volumens Wasser gewaschen und dadurch von wasserlöshohen Pigmenten vollständig befreit. Nach dem Trocknen wird die Chloroformlösung unter vermindertem Druck auf 1/50 des Ausgangsvolumens konzentriert und mit der lOfachen Menge an Petroläther verrührt. Dabei fällt die biologisch aktive Violamycin-Fraktion A aus. Die Fraktion A wird abfiltriert, mit reinem Petroläther gewaschen und unter vermindertem Druck im Exikkator Uber konz.
  • Schwefelsäure getrocknet. Die Ausbeute an Fraktion A betritt 16 g.
  • Die Violamycin-Fraktion A wird säulenchromatographisch in das Antibioticum Violamycin A und den biologisch inaktiven Chromophorkomplex Violamycinon A getrennt. Aus 10 g Violamycin-Fraktion A werden 5 g Violamycin A erhalten.
  • Die Violamycin-Fraktion B ist aus dem Waschwasser des Chloroformextraktes nach Einstellen der Acidität auf pH 8,5 durch Butanolextraktion zu gewinnen. Nach Konzentrieren der Butanolextrakte und nach deren Verrühren mit Petrläther wird der entstehende Niederschlag abfiltriert und getrocknet. Die Ausbeute an Violamycin-Fraktion B beträgt 25 g pro 200 g Rohprodukt A 6844.
  • Die Fraktion B läßt sich analog zu Fraktion A in das Antibioticum Violamycin B und den biologisch inaktiven Chromophorkomplex Violamycinon B trennen, Aus 10 g der 'Fraktion B werden 9,5 g des Antibioticums Violamycin B erhalten.

Claims (1)

  1. Patentanspruch
    Antibiotikum Violamycin und dessen Aglycon, dadurch gekennzeich net, daß Streptomyces violaceus IMET JA 6844 in einem flüssigen Nährmedium mit geeigneten Kohlenstoff- und Stickstoffquellen wowie Mineralsalzen bei Temperaturen von 25 bis 37 0 während 2 bis 6 Tagen unter Belüftung und Rührung gezüchtet und das gebildete Antibiotikum nach an sich bekannten Methoden durch Ixtraktion aus dem Kulturfiltrat und dem Myzel gewonnen, gereinigt und in seine Komponenten getrennt wird
DE2243554A 1972-09-05 1972-09-05 Antibiotikum violamycin, dessen aglycon sowie verfahren zu ihrer herstellung Withdrawn DE2243554A1 (de)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2243554A DE2243554A1 (de) 1972-09-05 1972-09-05 Antibiotikum violamycin, dessen aglycon sowie verfahren zu ihrer herstellung
DK442872AA DK140899B (da) 1972-09-05 1972-09-08 Fremgangsmåde til fremstilling af et antibiotikum violamycin.
AT785172A AT315374B (de) 1972-09-05 1972-09-13 Verfahren zur Gewinnung des neuen Antibioticums Violamycin sowie seines Aglycons
CS726394A CS171514B1 (en) 1972-09-05 1972-09-19 Method of new antibiotic violamycine and its aglycone winning
FI722653A FI50965C (fi) 1972-09-05 1972-09-27 Menetelmä uuden antrasykliiniantibiootin, violamysiinin, sen osakompon enttien sekä aglykonikomponenttien valmistamiseksi.
SU721835325A SU663724A1 (ru) 1972-09-05 1972-10-06 Способ получени антибиотика
NO3648/72A NO137904C (no) 1972-09-05 1972-10-11 Fremgangsmaate til fremstilling av en ny antracyklinglykosid-antibiotikumblanding, violamycin, dens delkomponenter, samt blandinger av dens aglykonkomponenter

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2243554A DE2243554A1 (de) 1972-09-05 1972-09-05 Antibiotikum violamycin, dessen aglycon sowie verfahren zu ihrer herstellung

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE2243554A1 true DE2243554A1 (de) 1974-03-14

Family

ID=5855528

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2243554A Withdrawn DE2243554A1 (de) 1972-09-05 1972-09-05 Antibiotikum violamycin, dessen aglycon sowie verfahren zu ihrer herstellung

Country Status (7)

Country Link
AT (1) AT315374B (de)
CS (1) CS171514B1 (de)
DE (1) DE2243554A1 (de)
DK (1) DK140899B (de)
FI (1) FI50965C (de)
NO (1) NO137904C (de)
SU (1) SU663724A1 (de)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI119993B (fi) 2007-07-13 2009-05-29 Matti Jaervinen Suksivoide ja voidepinnoite

Also Published As

Publication number Publication date
NO137904B (no) 1978-02-06
NO137904C (no) 1978-05-16
CS171514B1 (en) 1976-10-31
FI50965C (fi) 1976-09-10
DK140899B (da) 1979-12-03
SU663724A1 (ru) 1979-05-25
DK140899C (de) 1980-05-19
AT315374B (de) 1974-05-27
FI50965B (de) 1976-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2455230A1 (de) Lipiarmycin, verfahren zu seiner herstellung, mikroorganismus zur durchfuehrung des verfahrens und arzneimittel
CH634853A5 (de) Schwefelhaltige metabolite, ihre herstellung und verwendung in arznei- und futtermitteln.
DE2243554A1 (de) Antibiotikum violamycin, dessen aglycon sowie verfahren zu ihrer herstellung
CH581189A5 (en) Antibiotic violamycin - with antitumour, virucidal and antimycoplasma activity
DE2737944C2 (de) Verfahren zur Herstellung von Maltopentaose und Maltohexaose
AT285817B (de) Verfahren zur Herstellung eines neuen antibiotischen Komplexes
AT200259B (de) Verfahren zur Herstellung eines neuen Antibiotikums
AT266316B (de) Verfahren zur Herstellung eines neuen Antibiotikums
AT200258B (de) Verfahren zur Herstellung neuer Antibiotika
DE941013C (de) Verfahren zur Herstellung von Erythromycin B
AT246924B (de) Verfahren zur Herstellung des neuen Antibioticums SP-30 und dessen Komponenten SP-30 A bis SP-30 D
DE834582C (de) Verfahren zur Herstellung eines Antibiotikums
DE1792819C2 (de) Tenebrimycin-Antibiotikum VI und ein Verfahren zu dessen Herstellung
DE2044004C3 (de) Verfahren zur Herstellung des Antibiotikumkomplexes Polyfungin
DE2608337A1 (de) Neue organische verbindung, ihre herstellung und verwendung
DE939397C (de) Verfahren zur Herstellung und Gewinnung eines Produktes mit antiviraler Aktivitaet
DE1792589A1 (de) Antibiotikum Tetramycin
DE2138588A1 (de) Antibiotikum CP 21 635 und Verfahren zu seiner Herstellung
DE2637545A1 (de) Antibiotica bm123 und ihre herstellung
DE1039198B (de) Verfahren zur Herstellung und Gewinnung von Antibiotika
DD251574A1 (de) Verfahren zur herstellung von aklanonsaeure
CH553851A (de) Verfahren zur herstellung eines antibiotikum-glykosids.
DE1138510B (de) Herstellung und Gewinnung des Antibiotikums Rufomycin
DE1160982B (de) Verfahren zur Herstellung von 6-Desmethyltetracyclin
EP0022425A2 (de) Antibiotika, Verfahren und Zwischenprodukte zu deren Herstellung und deren Verwendung als pharmazeutische Präparate

Legal Events

Date Code Title Description
OD Request for examination
8130 Withdrawal