DE2153873A1 - Hydroxocobalaminderivate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als arzneimittel - Google Patents

Description

53, Avenue Vercingetorix

AULNAY-sous-BOIS (Seine-St-Denis)/Frankreich

Unser Zeichen; B 1432

Hydroxocobalaminderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel

Die Erfindung betrifft neue Derivate von Hydroxocobalamin, ein Verfahren zur Herstellung dieser Derivate und ihre Verwendung als Therapeutikum.

Bekanntlich ist Hydroxocobalamin ein Homologes von Vitamin B^p ( auch Cyanocobalamin genannt ) und man erhält es durch Ersatz der Cyanidgruppe in-dessen Molekül durch eine Hydroxylgruppe. Mit anderen Worten kann man das Cyanocobalamin durch die abgekürzte Formel wiedergeben:

X Co - C

N,

und das Hydroxocobalamin kann in seiner nicht-ionisierten Form als der folgenden Formel entsprechend angesehen v/erden

Dr.Ha/Mk

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X Co - OH

Man weiß auch, daß das Hydroxocobalamin in wässriger Lösung gleichzeitig sowohl in ionisierter als auch in nichtionisierter Form vorliegt und zwar auf Grund einer Gleichgewichtsreaktion, die wie folgt ausgedrückt werden kann:

H₂O

H₂O _r + Co - OH J I_> Z^H2°» ^CoX-/ ^0H (D *~ . (2)

Die nicht-ionisierte'Form (1) überwiegt in alkalischem Milieu und die ionisierte Form (2) in saurem Milieu

f. Smith J.L. und Mitarb.,The Analyst, 87, 183 (1962)/

Wenn man die Neutralisationskurve von Hydroxocobalamin durch Messung mit einem pH-Meter bestimmt, stellt man die Anwesenheit einer basischen Funktion zwischen pH 6,2 und pH 8,5 fest; der isoelektrische Punkt liegt bei etwa pH 7,2.

Man kennt bereits Salze des Hydroxocobalamins mit Mineralsäuren oder organischen Säuren und insbesondere Salze, die ausgehend von Aminosäuren durch Salzbildung der (oder einer) Säuregruppe dieser Säuren mit dem Hydroxocobalamin, einer basisch reagierenden Verbindung, erhalten wurden.

Die vorliegende Erfindung beruht auf der Feststellung, daß neue Hydroxocobalaminderivate durch Reaktion dieser Base mit Aminosäuren erhältlich sind, wobei Komplexe gebildet werden, in denen die Hydroxylgruppe des Hydroxocobalamins anscheinend durch den Aminorest der Aminosäure blockiert ist.

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Die Struktur der neuen erfindungsgemässen Derivate unterscheidet sich somit grundlegend von derjenigen der bekannten Derivate, die durch Neutralisation der basischen Gruppe des Hydroxocobalamins durch die (oder eine) Säuregruppe der Aminosäure erhalten wurden.

Die erfindungsgemässen neuen Hydroxocobalaminderivate kennzeichnen sich dadurch, daß sie Komplexen entsprechen, in welchen die Hydroxylfunktion des Hydroxocobalamins durch die Aminfunktion einer Aminosäure der folgenden allgemeinen Formel

(A) H₂ N - (CHR)_n - COOH

blockiert ist, wobei in der Formel R ein Wasserstoffatom bedeutet wenn η gleich 1 oder 2 ist und ein? Methylgruppe, eine -CH₂ COOH -rGruppe oder eine -CH₂-CH₂ COOH -Gruppe, wenn η gleich 1 ist.

Ohne daß die Erfindung auf diese Auslegung beschränkt ist, scheint es doch, daß man diesen Komplexen die eine der beiden folgenden Formeln geben kann:

(B) . X Co - NH - (CHR)_n - COOH und

(C) X Co - OH, H₂N - (CHR)_n - COOH

in welchen R und N eine der vorstehnd angegebenen Bedeutungen besitzen und X den dem Cyanocobalamin und dem Hydroxocobalamin gemeinsamen Rest bedeutet.

Entsprechend den unterschiedlichen Bedeutungen von R und η

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wird als Aminosäure Glykokoll, a-Alanin, β-Alanin, Asparaginsäure oder Glutaminsäure gewählt.

Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung der vorstehend definierten Hydroxocabalaminderivate. Dieses Verfahren kennzeichnet sich dadurch, daß man in wässriger Lösung bei. Raumtemperatur unter partieller Neutralisation bis zu einem pH-Wert zwischen 6,2 und 8,6 eine Aminosäure der allgemeinen Formel

(A) H₂ N - (CHR)_n - COOH,

in welcher R und N eine der vorstehend angegebenen Bedeutungen besitzen, mit einer höchstens äquimolaren Menge Hydroxocobalamin reagieren läßt, worauf man nach beendeter Reaktion durch Zugabe mehrerer Volumina eines mit Wasser mischbaren, Jedoch Hydroxocobalamin nicht lösenden Lösungsmittels die Kristallisation bewirkt .

Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform verwendet man als solches Lösungsmittel Aceton und zwar in einer Menge von mindestens 4 Volumina.

P- Insbesondere ist die verwendete Aminosäure, je. na cn den verschiedenen Bedeutungen von R und η in der vorstehenden Formel (A) Glykokoll,α-Alanin, β - Alanin, Asparaginsäure oder Glutaminsäure.

Bei Durchführung des vorstehend definierten Verfahrens und zur Erfüllung der bereits angegebenen Bedingungen muß der Ausgangs-pH-Wert des Reaktionsgemisch über 6,2 liegen und darf höchstens 8,6 betragen; der optimale

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Wert hängt von der Art der verwendeten Aminosäure ab.

Damit die Reaktion vollständig abläuft, muß man laufend vermeiden, daß während des ,Verfahrens der pH-Wert unter die Schwelle von 6,2 absinkt, welche der basischen Funktion des Hydroxocobalamins entspricht. Es soll daher der pH-Viertverlauf überwacht und gegebenenfalls durch Zusatz eines alkalisch reagierenden Mittels korrigiert werden.

Die Reaktion wird auch durch Arbeiten in möglichst konzentrierten Lösungen begünstigt. Die Konzentration der als Ausgangsmaterial verv/endeten Hydroxocobalaminlösung liegt vorzugsweise zwischen 5 und 20 mg/cm (g/l).

Unabhängig von der verwendeten Aminosäure muß zur Erzielung eines vollständigen Reaktionsablaufs die Aminosäure in einem Überschuß gegenüber dem Hydroxocobalamin verwendet v/erden.

Die gesamten Carboxylgruppen können nämlich durch eine starke Base nur bei Erreichen eines pH-Werts zur Salzbildung gebracht werden, der zu hoch ist, daß die Reaktion stattfinden kann.

Gemäß der Erfindung wird daher die Anwesenheit dieser unversalzten Carboxylgruppen dadurch ausgeglichen, daß man die Aminosäure in einem Überschuß gegenüber der stöchiometrisch erforderlichen Menge verwendet; dieser Überschuß soll umso größer sein, je mehr Carboxylgruppen die Aminosäure aufweist. So muß man im Falle der Asparaginsäure oder der Glutaminsäure, deren Moleküle zwei -COOH-Gruppen auf eine einzige -NHp-Gruppe besitzen, einen größeren Überschuß anwenden als im Fall des Glykokolls und des α- oder ß-Alanins, welche Monosäuren

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mit nur einer Aminogruppe sind.

Wie vorstehend angegeben, soll die Reaktion bei Raumtemperatur ablaufen, um jede Gefahr einer Zersetzung des Hydroxocobalamins durch Wärme zu vermeiden.

Unter diesen Bedingungen ist die Reaktion nach 4 bis 5 Stunden praktisch beendet. Man läßt jedoch zweckmäßig 12 bis 36 Stunden^ vom Einsatz der Reaktionsteilnehmer an gerechnet, verstreichen, bevor man die Kristallisation ^ der neuen Verbindung durch Zusatz mehrerer Volumina ™ Aceton oder eines anderen analogen Lösungsmittels zu dem Reaktionsgemisch bewirkt.

Nach dieser Zugabe läßt man die Mischung 24 Stunden bei etwa 0° ruhen, worauf man die Kristalle abfiltriert.

Die Untersuchung der so erhaltenen kristallisierten neuen Stoffe läßt die Bildung definierter chemischer Einheiten annehmen. Tatsächlich ist :

1. Die Löslichkeit der Kristalle in reinem Wasser doppelt so groß wie diejenige des Hydroxocobalamins.

2. Die Farbe der wässrigen Lösungen dieser Kristalle bei gleicher Konzentration viel-violetter als diejenige einer wässrigen Hydroxocobalaminlösung.

3. Die Löslichkeit der Kristalle in Methanol, absolutem Äthanol oder Äthanol mit 95° GL wesentlich höher als diejenige von Hydroxocobalamin, wie dies die folgende Tabelle zeigt:

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untersuchte Verbindung

Löslichkeit g/l

Methanol

Äthanol absolut

95 GL

Hydroxocobalamin
Derivat von Glykokoll Derivat von α-Alanin Derivat von β-Alanin Derivat von Asparaginsäure Derivat von Glutaminsäure

120 >200

> 200

40 ^ 200 >100 >200 > 60 ^100

200 1^100

60

100

4. Zeigt die Untersuchung der Kristalle unter dem Mikroskop eine homogene Struktur und unterscheidet sich gleichzeitig von derjenigen der Hydroxocobalaminkristalle.

5. Ist die dem"Absorptionsmaximum der bisherigen Lösimg entsprechende Wellenlänge im UV-Spektrofotometer in allen Fällen anders als die für die Hydroxocobalaminbase · beobachtete. Während sie nämlich für diese letztere 351 mu beträgt, erreicht sie für die gebildeten Derivate ausgehend von Glykokoll bzw. α-Alanin, bzw. Asparaginsäure und Glutaminsäure etwa 357 mu und 355,5 mn im Fall von P-Alanin.

6. Zeigt die Entwicklung des pH-Werts, wie sie an der Neutralisationskurve wässriger Lösungen beobachtet wurde, daß das Kydroxocobalamin nicht mehr in Form einer freien Base zugegen ist. Die wässrige Lösung jeder der neuen Verbindungen zeigt einen etwa neutralen pH-Wert und wenn man bis zu einem pH-Wert von 9,5 alkalisch macht

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und anschliessend bis pH-Wert 4 ansäuert, stellt man fest, daß keine Stufe existiert, welche den sonst einmal mit freiem Hydroxocobalamin und zum anderen mit freier Aminosäure beobachteten Pufferzonen entspricht. Wenn außerdem die Lösungen dieser Kristalle bis zum einem pH-Wert von 2,5 oder 3 ansäuert und sie dann mehrere Stunden stehen läßt, stellt man fest, daß diese Verbindungen dann durch Hydrolyse unter Rückbildung der Ausgangsstoffe zersetzt sind und eine neue potentiometrische Titration bis zu - einem pH-Wert von 9»5 ergibt dann eine Kurve, deren ™ Verlauf die charakteristischen Stufen der Pufferzonen zeigt, wie sie für die basische Funktion des freien Hydroxocobalamins und der freien Aminosäure typisch sind.

7. Ergibt die an Kodakpapier Typ 511 V durchgeführte

Chromatographie der hydroalkalischen Lösungen (Mischung Methanol/Wasser 130/30) für diese neue Verbindung ein anderes R- wie Hydroxocobalamin sowie das für die verwendete Aminosäure, dessen Lokalisierung durch Behandlung mit Ninhydrin sichtbar gemacht wird. Kein Farbfleck erscheint an der dem reinen Hydroxocobalamin ) entsprechenden Stelle und andererseits stellt man nach Entwicklung mit Ninhydrin fest, daß der der Aminosäure entsprechende Farbfleck sich nicht mehr an der Stelle des R~ dieser Aminosäure im freien Zustand bildet, sondern daß er im Gegenteil sich praktisch über der Stelle des ersten, vor dieser Entwicklung erhaltenen violetten Farbflecks befindet.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung, ohne sie jedoch darauf zu beschränken.

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Beispiel 1

Man löst in 500 ecm Wasser 10 g Hydroxocobalaminbase, gibt dann 600 mg Glykokoll zu und stellt den pH-Wert auf 8,3 ein. Dann überläßt man das Reaktionsgemisch sich selbst. Nach 5 Stunden ist der pH-Wert auf 7,2 abgesunken und hält sich dann auf diesem Viert. Nach dem gleichen Zeitraum beobachtet man im Spektrofotometer, daß das Absorptionsmaximum dann der Wellenlänge von 357 mu gegenüber 351 mu der Anfangslö sung, entspricht.

12 Stunden nach Beginn der Reaktion versetzt man mit 6 Volumina Aceton, läßt 24 Stunden in einem Kühlschrank stehen und filtriert denn 8,6 g rote Kristalle mit homogener Textur ab, die eine wässrige Lösung von violetter Farbe ergeben .

Der pH-Wert der wässrigen Lösung beträgt bei einer Konzentration von 5000 Gamma/cm zwischen 6 und 7.

Die Untersuchung der pH-Wertkurve zeigt, daß die basischen Gruppen maskiert sind.

Wenn man die chromatographische Analyse an Kodakpapier Typ 511 V unter. "Verwendung eines Gemischs aus 130 Teilen Methanol auf 30 Teile Wasser als Lösungsmittel durchführt, stellt man einen anderen R--Wert fest, als er der Hydroxocobalaminbase entspricht und an der dieser letzteren entsprechenden Stelle erscheint praktisch kein Farbfleck.

Die Behandlung des Chromatogramms mit Ninhydrin macht an der Stelle des Hauptfarbflecks die Anwesenheit von Aminosäure

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sichtbar, was die Kombination des Glykokolls mit Hydroxocobalamin bestätigt.

Auf 500 mg gelösten Stoff muß man nach Säurehydrolyse für einen Übergang von pH 6 auf pH 10 5,75 ecm wässrige Lösung 1/10 normale Natronlauge zugeben. Ermittelt man hingegen die pH-Wertkurve des in Form von Kristallen wie vorstehend erhaltenen Stoffs, so stellt man fest, daß zum Übergang von pH 6 auf pH 10 0,6 ecm 1/10 normale Natronlauge genügen, was die Kombination des Hydroxocobalamins mit der Aminosäure über deren Aminogruppe bestätigt.

Die Bestimmung der biologischen Wirksamkeit des Stoffs mittels des Colibazillus zeigt, das diese Wirksamkeit größer ist wie diejenige des Ausgangshydroxocobalamins.

Beispiel 2

Man löst 5 g Hydroxocobalamin in 500 ecm Wasser, gibt dieser Lösung 400 mg α-Alanin zu und stellt den pH-Wert auf 8,2 ein. Nach zwölfstündigem Stehen stellt man •fest, daß der pH-Wert auf 7,4 abgesunken ist und daß die dem Absorptionsmaximum entsprechende Wellenlänge von 351 mu auf 357 mu gewechselt hat.

Man bewirkt dann durch Zugabe von Aceton die Kristallisation und läßt 24 Stunden im Kühlschrank stehen. Dann filtriert man 4,0 g schöne Kristalle ab.

Wenn man diese Kristalle in einer Konzentration von 5000 Garnip.a/ccm in Wasser löst, erhält man eine Lösung mit

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~ 11 -

einem pH-Wert von 7,2. Die pH-Wertkurve bestätigt das Verschwinden der basischen Funktion des Hydroxocobalamins und der Aminogruppe der Aminosäure.

Bei der PapierChromatographie unter den gleichen Bedingungen, wie sie in Beispiel 1 beschrieben sind, erhält man praktisch den gleichen R~-Wert wie für das entsprechende, ausgehend von Glykokoll, erhaltene Derivat.

Die Bestimmung der biologischen Wirksamkeit mittels des Colibazillus ergibt eine größere Aktivität wie das Hydroxocobalamin.

Beispiel 3

Man bringt 5 g Hydroxocobalaminbase in 1 Liter Wasser in Lösung. Dann gibt man 500 mg β-Alanin zu und erhält einen pH-Wert von 8. Nach dreitägiger Kontaktzeit sinkt der pH-Wert bis auf 7,8 ab und man stellt im Spektrofotometer fest, daß das Absorptionsmaximum bei der Wellenlänge von 355j 5 mu anstelle von 351 mu für die Ausgangslösung liegt.

Man gibt 5 Volumina Aceton zu und läßt auskristallisieren. Man erhält 4 g Komplex, die in Lösung bei 5000 Gamma/ccm einen pH-Wert von 7,2 ergeben. Die Pufferzonen zwischen pH 5 und pH 9»5 sind verschwunden und man findet nach der Hydrolyse die dem Hydroxocobalamin und der HHp-Gruppe den β-Alanins entsprechenden basischen Zonen wieder.

Um von einem pH 6 auf pH 10 zu gelangen, muß man auf 500 g gelöstes Produkt nach der Säurehydrolyse 4,7 ecm wässrige 1/10 normale Natronlauge zugeben. Wenn man hingegen

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die pH-Kurve des wie vorstehend beschriebenen erhaltenen Stoffs in kristallinem Zustand aufzeichnet, stellt man fest, daß man für einen Übergang von pH 6 auf pH 10 nur 0,62 ecm 1/10 normale Natronlauge braucht, was die Kombination des Hydroxocobalamin mit dem" β-Alanin über die Aminofunktion desselben bestätigt.

Die Bestimmung der biologischen Wirksamkeit des Stoffs mittels des Colibazillus zeigt, daß diese Wirksamkeit größer ist als die des als Ausgangsprodukt verwendeten Hydroxocobalamin. So findet man für den Komplex von β-Alanin mit einem Feuchtigkeitsgehalt von I?/!), d.h. 77/0 Hydroxocobalamin, in zwei Bestimmungsreihen 92 Gamma und 96 Gamm, d.h. ein Mittel von 94 Gamma: hingegen findet man für die Hydroxocobalaminbase mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 7O?o, d.h. für 83>o Hydroxocobalamin, für 100 Gamma ein Mittel von 83 Gamma.

Beispiel 4

^ Man löst 10 g Hydroxocobalamin in 500 ecm Wasser, gibt 1,5 g Asparaginsäure zu und stellt mit einer 1/10 normalen wässrigen Natriumhydroxycllösxmg den pH-Wert der Mischung auf 8,4 ein.

Nach zv.^röl.i stündigem Ruhon beträgt der pH-Wert nur noch 8,0 u:od die dem Absorptionsinarinum entsprechende Wellenlänge ist νου 351 niu cuf 357 i-;u übergegangen,

Danach gibt ....an 6 Volumina Acator. ?λι und läßt wäJ.:."L-.::v.i 2.4 Stund e3i in Kühlschrank au.vkristallisieren, f:^:.lv.v:-Grt ab

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BAD OBIGINAL

und erhält dabei 9,5 g rote Kristalle mit homogener Textur.

Der pH-Wert der wässrigen Lösung mit 5000 Gamma/ccm beträgt etwa 7. Das Fehlen von Stufen in der pH-Wertkurve zeigt, daß sehr wohl eine Kombination der beiden Reaktionsteilnehmer stattgefunden hat. Führt man dann bei pH 2,5 die Hydrolyse durch und trägt wiederum die pH-Wertkurve auf, so beobachtet man diesmal die den Ausgangsverbindungen entsprechenden Stufen.

Die Bestimmung der biologischen Wirksamkeit mittels des Colibazillus ergibt eine höhere Aktivität als die des Hydr oxo c ob alainin.

Beispiel 5

Man löst 2 g Hydroxocobalamin in 200 ecm Wasser, gibt 0,7 g Glutaminsäure zu und stellt den pH-Wert auf 8 ein. Nach 12 Stunden ist der pH-Wert auf 7,2 abgesunken und die dem Absorptionsmaximum entsprechende Wellenlänge ist von 3,51 auf 3,57 mn angestiegen.

Nach Auskristallisation durch Zusetzung von Aceton erhält man 1,8 g Kristalle, deren wässrige Lösung mit einer Konzentration von 5000 Gamma/ecm einen pH-Wert von 6,8 besitzt.

Die vor und nach Säurehydrolyse aufgenommenen pH-Wertkurven führen zu den gleichen Schlüssen wie in den vorhergehenden Beispielen. Das gleiche gilt für die Chromatographische Analyse.

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Die Feststellung der biologischen Aktivität mittels des Colibazillus ergibt eine bessere Aktivität wie das Hydroxocobalamin.

Ein weiteres Ziel der Erfindung besteht darin,ein neues Medikament zur Behandlung pathologischer Zustände oder Reizungen zu liefern, gegen welche Hydroxocobalamin verabreicht wird.

Gemäß der Erfindung besteht dieses neue Medikament als " aktive Substanz aus einem der vorstehend beschriebenen Derivate von Hydroxocobalamin und Aminosäure.

Man hat festgestellt, daß die vorstehend beschriebenen neuen Verbindungen in wässrigem Medium hydrolysieren, ebenso in neutralem oder leicht alkalischem Medium, daß jedoch diese Hydrolyse viel langsamer λ>όγ sich geht als in saurem Medium. Da das Blut ein auf natürliche Weise auf einen pH-Wert von 7»2 gepuffertes wässriges leicht alkalisches Medium darstellt, folgt somit, daß die neuen Verbindungen, wenn sie parenteral in den Organismus eingeführt werden, eine analoge therapeutische Wirkung ausüben wie das Hydroxocobalamin, jedoch den zusätzlichen Vorteil besitzen, daß, da das Hydroxocobalamin sehr allmählich freigesetzt wird, man so einen Verzögerungseffekt erzielt, der in gewissen Fällen sehr günstig und interessant ist.

Obwohl die Erfindung nicht auf diese Interpretation beschränkt ist, ist doch wahrscheinlich, daß die geringe Hydrolysegeschwindigkeit in schwach-basischem iiilieu der neuen Komplexe aus Hydroxocobalamin und Aminosäuren durch die Werte der iso-elektrischen Punkte der Aminosäuren

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erklärt werden kann. Damit nämlich ihre Hydrolyse so langsam wie möglich verläuft, muß der pH-Wert ihres Milieus so nahe wie möglich bei dem iso-elektrischen Punkt der Aminosäure liegen.

Diese Bedingung ist für die angegebenen Aminosäuren in der vorliegenden Erfindung erfüllt; die iso-elektrischen Punkte von Glykokoll liegen bei 2,34 und 9,60, diejenigen von α-Alanin bei 2,35 und 9,87 und diejenigen von β-Alanin bei 3,10 und 10,19.

;-ie man daraus entnehmen kann, scheinen die Werte der iso~olßlr.trischeii Punkte betreffend das β-Alanin die I ünstigsten zu sein und das wird tatsächlich durch die nachstellende Erfahrung bestätigt.

Beispiel 6

Getrennt hergestellte Lösungen von Komplexen des β-Alanin und dos Glykokolls werden ohne Zugabe weiterer Stoffe auf einen pH-Wert von 7,2 und eine Konzentration von KX ' :-i:xia/ccm eingestellt. Man verfolgt im Spoktrofotosioter irr; '.]:<!werden von sich aus dem Komplex selbst bildenden ;to:^r " Ujvl Dan sieht nach einigen Stunden, daß sich das ^jC.:.. ~ eouulamin von dem Glykokoll abtrennt im die Ar;u3"jLO?-:.lure und die Bydroxocobalaminbase zurückzubilderij '„'ahrtr-d der ausgehend von β -Alanin erhaltene l'osple:: zur y'rr:.v" ■-.:\ΐ£ des gleichen Ergebnisses mehr als drei 'f^ge

• ίϊ'.-u :f'olf;t, daß der aus ß-·Alanin und Hydrcrr.ocbalaminbase '■..'."2if,;^:_l--;.-ie Komplo:: ein grösseroG Interesse besitzt.

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BAD

Außerdem ist die grössere Löslichkeit der erfindungsgemässen Derivate gegenüber dem Hydroxocobalamin für ihre Absorption durch den Organismus und ihr Hindurchtreten durch die Zellen günstiger.

Diese Vorteile werden beim Menschen auf folgende Weise sichtbar gemacht:

Man verabreicht an verschiedene Personen oral auf einmal einerseits eine vorherbestimmte Dosis Hydroxocobalaminbase und andererseits erfindungsgemässe Derivate und stellt anschliessend das in den Urinen wiedergefundene Hydroxocobalamin fest.

Diese Dosierungen haben gezeigt, daß die Abscheidung des Hydroxocobalamin rascher vor sich geht, wenn es in Form der Hydroxocobalaminbase verabreicht wird als wenn es in Form der erfindungsgemässen Derivate eingenommen wurde. Die in den Organismus eindringende Cobalaminraenge ist daher in diesem letzteren Fall grosser und seine Wirkung dauert langer gegenüber derjenigen der Hydroxocobalaminbase.

Die nachstehende Tabelle veranschaulicht das einmal mit dem Komplex aus β-Alanin und trydroxocobalamin und zum anderen mit der Hydroxocobalaminbase erzielte Resultat":

Art des verabreich ten Produkts	verabreichte Menge Hydroxo cobalamin	im Urin festge stellte Menge Hyd r ο χ ο c ο b η. "J. ο η i n j
Hydroxocobalaminbase Hydroxocobalaiain- ß-Alanin	25.000 25.000	7.000 j 13.000 ι I

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Die Hydroxocobalaminderivate besitzen außerdem noch diesen Vorteil, daß nach ihrer Verabreichung auch die Aminosäure gleichzeitig in dem Organismus freigesetzt wird und dort ihren eigenen therapeutischen Effekt ausübt, der an sich bekannt ist, und der sich so der Wirkung des Hydroxocobalamin überlagert.

Die erzielten therapeutischen Wirkungen sind somit einmal die dem Hydroxocobalamin eigene Vitaminwirkung und zum anderen die entgiftende und übertragende Wirkung (Abtrennung der Nitrilgruppe (CN), von Prote'inresten, Toxinen usw.).

Zu diesen Vorteilen muß man noch zählen, daß die Giftigkeit der neuen Derivate besonders gering bleibt. Diese ist im wesentlichen gleich derjenigen des Hydroxocobalamin.

Da die Versuche die geringe Hydrolysegeschwindigkeit der neuen erfindungsgemässen Produkte im Blut beweisen haben, was einen besonders interessanten Verzögerungsefi'ekt im Organismus ermöglicht, kann das Medikament somit in vorteilhafter V/eise in injizierbaren Ampullen angeboten v/erden. Das Medikament kann jedoch auch in Form von trinkbaren Ampullen oder in Form fester Produkte, z.B. Tabletten, verabreicht werden, da gezeigt wurde, daß die orale Verabreichung der erfindungsgemässen Derivate dank einer besseren Eindringung in den Organismus eine verlängerte Wirkung auf den letzteren mit sich bringt.

Die täglich einzunehmende Menge des neuen Medikaments liegt vorzugsweise zwischen 1000 und 25000 Gamma, d.h.

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-ie- 2153B73

1 und 25 mg aktive Substanz, unabhängig von der Art seiner Verabreichung.

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Claims (10)

1. 2153073

   Patentansprüche

   \~\. Derivate aus Hydroxocobalamin und Aminosäuren, dadurch gekennzeichnet, daß sie Komplexe darstellen, in welchen die Hydroxylgruppe des Hydroxocobalamin durch die Aminofunktion einer Aminosäure der allgemeinen Formel

   (A) H₂ N-(CHR)_n - COOH

   blockiert ist, wobei in der Formel R ein Wasserstoffatom bedeutet, wenn η 1 oder 2 ist und eine Methylgrurpe, eine CH₂ COOH oder eine -CH₂ - CH₂ COOH Gruppe bedeutet, wenn η gleich 1 ist.
2. 2. Derivate nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Aminosäure Glykokoll, α-Alanin, ß~Alanin, Asparaginsäure oder Glutaminsäure ist.
3. 3· Verfahren zur Herstellung der Hydroxocobalaminderivate nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in wässriger Lösung bei Raumtemperatur unter partieller Neutralisation bis zu einem pH-Wert zwischen 6,2 und 8,6 eine Aminosäure der allgemeinen Formel

   (A) H₂N - (CHR)_n - COOH, _{in welcher R}

   wenn η 1 oder 2 ist, Wasserstoff und wenn η gleich 1 ist eine Methylgruppe, eine -CH₂ COOH - Gruppe oder eine -CIi₂-CH₂ COOH-Gruppe bedeutet, mit einer höchstens äquimolaren Menge Hydroxocobalamin reagieren läßt und daß man nach beendeter Reaktion durch Zugabe mehrerer Volumina eines mit Wasser mischbaren oragnischen

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   Lösungsmittels, welches jedoch das Hydroxocobalamin nicht löst, die Kristallisation bewirkt;
4. 4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, . - daß man die Neutralisation mittels einer wässrigen Natriumhydroxydlö sung vornimmt.
5. 5· Verfahren nach Anspruch 3» dadurch gekennzeichnet, daß man als mit Wasser mischbares organisches Lösungsmittel Aceton verwendet,
6. 6. Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 5, dadurch m . gekennzeichnet, daß man die Kristallisation durch Zugabe von mindestens k Volumina Aceton zu der Reaktionslösung bewirkt.
7. 7. Medikament zur Behandlung pathologischer Zustände oder von Krankheiten, gegen die Hydroxocobalamin verabreicht wird, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff ein Derivat gemäß einem der Ansprüche 1 oder 2 enthält.
8. 8. Medikament nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß seine Gewichtsmenge an aktiver Substanz zwischen 1 und 25 mg beträgt.
9. 9. Medikament nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß es in Form injizierbarer oder trinkbarer Ampullen vorliegt.
10. 10. Medikament nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß es in Tablettenform vorliegt.

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