DE2154436B2

DE2154436B2 - Als Partricin-methylester (SPA-S-160) bezeichneter Antibiotikakomplex mit Polyenstruktur

Info

Publication number: DE2154436B2
Application number: DE2154436A
Authority: DE
Inventors: Tiberio Bruzzese; Rodolfo Ferrari
Original assignee: SPA-SOCIETA PRODOTTI ANTIBIOTICI SpA MAILAND (ITALIEN)
Current assignee: SPA-SOCIETA PRODOTTI ANTIBIOTICI SpA MAILAND (ITALIEN)
Priority date: 1970-11-03
Filing date: 1971-11-02
Publication date: 1978-12-21
Also published as: DE2154436C3; CA972349A; US3780173A; GB1359473A; AU3525171A; CY932A; JPS5550960B1; FR2112426B1; DE2154436A1; BE774862A; ES396597A1; AU469517B2; MY7800206A; NL154513B; ZA717326B; FR2112426A1; NL7115123A

Description

(a) kristalliner gelber bis dunkelgelber Feststoff, enthaltend die Elemente Kohlenstoff, Wasserstoff, Stickstoff und Sauerstoff in den folgenden Gewichtsprozenten:

Kohlenstoff	63,30/0
Wasserstoff	7,8%
Stickstoff	3,2%
Sauerstoff	24,8%

10

15

(b) IR-Absorptionsmaxima bei 3360, 1715, 1640, 1595, 1175, 1060, 1000, 848 und 763 cm-' gemessen in Kaliumbromid;

(c) UV-Absorptionspeaks bei 401. 378. 359 und 340 nm, in Ethanol bei einer Konzentration von etwa 0,01 mg/ml, die sich unter Einwirkung von UV-Licht auf 4 nm höhere Wellenlängen verschieben;

(d) einen Rf-Wert, von etwa 0,8 an SiC>2-Gel, gelöst in einem Gemisch aus 2 TeWen Butanol, 5 Teilen Ethanol, 1 Teil Aceton und 3 Teilen einer 25%igen Ammoniumhydroxidlösung;

(e) Peaks im ^l3C-NMR-Spektrum in Deuterodimethylsulfoxid bei 208,2; 196,6; 173,1; 170,2; 153,8; 130,5; 125,i; 110,5; 97,6; 97,3; 51,4; 17,9; 16,4 und 12,8 ppm;

(f) einer durchschnittlichen MHK von 0,12 μg/ml gegenüber Candida albicans-: tämmen;

(g) einer LD» p.o. bei Mäusen oberhalb 2000 mg/kg;

(h) sehr wenig löslich in Wasser und wäßrigem Alkali sowie Ether, Peirolether, Benzol;
mäßig löslich in Aceton und Alkoholen;
sehr gut löslich in Dimethylsulfoxid, Pyridin, Dimethylformamid und Dimethylacetamid.

2. Partricin-methylester nach Anspruch 1, erhältlich durch Umsetzung von Diazomethan mit Partricin (SPA-S-132), einem Antibiotikakomplex mit Heptaenstruktur, bestehend aus 2 Komponenten, Partricin A und B, wobei Partricin A sich von Partricin B durch die Anwesenheit einer zusätzlichen Methylgruppe, gebunden an ein Seitenkettenstickstoffatom, unterscheidet, der durch Kultivierung von Streptomyces aureofaciens NRRL 3878 unter aeroben Bedingungen bei 23 bis 30⁰C in einem wäßrigen Nährmedium, das eine assimilierbare Kohlehydratquelle und eine assimilierbare Stickstoffquelle enthält, gebildet wird.

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Die Erfindung betrifft einen als Partricin-methylester (SPA-S-160) bezeichneten Antibiotikakomplex mit Polyenstruktur (Heptaen), der gekennzeichnet ist durch die folgenden Eigenschaften:

(a) kristalliner gelber bis dunkelgelber Feststoff enthaltend die Elemente Kohlenstoff, Wasserstoff,

h^r>

Kohlenstoff	63,3%
Wasserstoff	7,8%
Stickstoff	3,2%
Sauerstoff	243%

(b) IR-Abnorptionsmaxima bei 3360, 1715, 1640, 1595, 1175, 1060, 1000, 848 und 763 cm-' gemessen in Kaliumbromid;

(c) UV-Absorptionspeaks bei 401,378,359 und 340 nm, in Ethanol bei einer Konzentration von etwa 0,01 mg/ml, die sich unter Einwirkung von UV-Licht auf 4 nm höhere Wellenlängen verschieben;

(d) einen Rf-Wert von etwa 0,8 an SiO₂-GeI, gelöst in einem Gemisch aus 2 Teilen Butanol, 5 Teilen Ethanol, 1 Teil Aceton und 3 Teilen einer 25%igen Ammoniumhydroxidlösung;

(e) Peaks im ^l3C-NMR-Spektrum in Deuterodimethylsulfoxid bei 208,2; 196,6; 173,1; 170,2; 153,8; 130,5; 125.1:110.5:97.6:97.3:51.4:17.9:16.4und 12.8 ppm:

(f) einer durchschnittlichen MHK von 0,12μg/ml gegenüber Candida albicans-Stämmen;

(g) einer LDm p.o. bei Mäusen oberhalb 2000 mg/kg;
(h) sehr wenig löslich in Wasser und wäßrigem Alkali sowie Ether, Petrolether, Benzol;

mäßig löslich in Aceton und Alkoholen;

sehr gut löslich in Dimethylsulfoxid, Pyridin, Dimethylformamid und Dimethylacetamid.

Der erfindungsgemäße Antibiotikakomplex weist einerseits eine sehr hohe Wirksamkeit gegen Pilze, insbesondere gegen Candida albicans, sowie eine Wirksamkeit gegenüber Trichomonas, andererseits eine wesentlich geringere Toxizität als die üblicherweise therapeutisch verwendeten, bekannten polyenischen Antibiotika auf.

Der erfindungsgemäße Antibiotikakomplex wird vorliegend mit der USAN-Bezeichnung Partricin-methylester oder auch mit der internen Bezeichnung SPA-S-160 benannt (USAN = United States Adopted Name, d. h. in den V.St.A. von staatlicher Seite geprägte Arzneimittelbezeichnung).

Die polyenischen Antibiotika sind eine große Klasse von Verbindungen, die von verschiedenen Mikroorganismen, beispielsweise Actinomyceten, weitverbreitet als Metabolite hergestellt werden. Aufgrund ihrer stark ungesättigten Struktur mit konjugierten Doppelbindungen, die durch ihr charakteristisches UV-Spektrum angezeigt werden, können sie als Tetraene, Pentaene, Hexaene und Heptaene klassifiziert werden. Diese Verbindungen sind häufig äußerst interessant wegen ihrer hohen Wirksamkeit gegenüber verschiedenen Pilzen und Hefen und werden daher weitgehend therapeutisch angewendet, obwohl sie im allgemeinen nur eine geringe oder gar keine Wirksamkeit gegenüber Bakterien besitzen. Die Tatsache, daß die sensitiven Mikroorganismen nicht leicht Stämme bilden, die gegenüber diesen polyenischen Antibiotika resistent sind, und daß andererseits weder in der Gruppe der Sulfonamidverbindungen noch unter den Penicillinen und Tetracyclinen befriedigende Mittel zur Heilung von Infektionen, die durch Pilze und Hefen verursacht werden, sind, hat dazu geführt, daß an diesen Produkten ein weiteres Interesse besteht.

Eine weitverbreitete Anwendung dieser polyenischen Antibiotika wurde jedoch durch ihre Toxizität verhin-

dert, die sich bei parenteraler Verabreichung in Kopfschmerzen, Übelkeit, Erbrechen und in einem gleichzeitigen Ansteigen des Blutspiegels des Harnstoff-Stickstoffs oder des Nichtprotein-Stickstoffs und in der Erscheinung von Nierenschäden und hämoiytischer Anämie zeigt

Der c-findungsgemäße Partricin-methylester ist erhältlich durch Umsetzung von Diazomethan mit Partricin (SPA-S-132), einem Antibiotikakomplex mit Heptaenstruktur, bestehend aus 2 Komponenten, Partricin A und ß, wobei Patricin A sich von Partricin B durch die Anwesenheit einer zusätzlichen Meihylgruppe, gebunden an ein Seitenkettenstickstoffatom, unterscheidet, der durch Kultivierung von Stnptomyces aureofaciens NRRL 3878 unter aeroben Bedingungen bei 23 bis 30⁰C in einem wäßrigen Nährmedium, das eine assimilierbare Kohlehydratquelle und eine assimilierbare Stickstoffquelle enthält, gebildet wird.

Die Umsetzung von Diazomethan mit Partricin wird durchgeführt, indem man eine Lösung von SPA-S-132 in einem geeigneten organischen Lösungsmittel mit einem geringen Überschuß an Diazomethan behandelt, um die mögliche Bildung von Produkten mit größer ?n Reaktionsgraden zu verhindern, und dann das Reaktionsgemisch einige Stunden oder mindestens so lange, bis die Entwicklung von Stickstoff, die anzeigt, daß die Reaktion stattfindet, beendet ist, stehenläßt und anschließend das Reaktionsprodukt durch Zusatz eines geeigneten Lösungsmittels ausfällt. Die Umsetzung wird vorteilhaft in Gegenwart basischer Substanzen, vorzugsweise organischer Basen wie Ammoniak und Triethylamin, in katalytischen bis stöchiometrischen Mengen im Vergleich zu Partricin durchgeführt. Obwohl der Reaktionsmechanismu? nicht vollständig bekannt ist, scheint die Gegenwart dieser Substanzen die Bildung gewisser sekundärer Reaktionsprodukte, die sonst mittels Dünnschichtchromatographie erkannt werden, zu verhindern oder zu begrenzen, so daß ein Produkt mit hoher Reinheit und mikrobiologischer Wirksamkeit erhalten wird.

Nach der aⁿgewandten Methode und dem angewandten Reaktionsmittel und in Anbetracht der in der Literatur beschriebenen Syntheseverfahren ist voraussichtlich dem erhaltenen Produkt die Struktur eines Methylesters des Antibiotikakomplexes Partricin zuzuschreiben, was durch die physikalisch-chemischen und die analyt'schen Eigenschaften btstätigt wird. Bei geeigneter Variation der Reaktionsbedingungen erhält man das vorstehende Produkt in unveränderter Reinheit und Ausbeute, die im allgemeinen fast quantitativ ist.

Als Lösungsmittel werden für die Reaktion vorzugsweise Diimhylsulfoxid, Dimethylformamid, Dimethylacetamid. Formamid, Ethylcellosolve, Pyridin und

KNII

H₁C ClI₁

OH

O OH

zahlreiche andere organische Lösungsmittel verwendet, die die Fähigkeit zur Lösung von Partricin besitzen.

Das verwendete Diazomethan, das ein giftiges gelbes Gas darstellt, das potentiell explosiv ist, wird im allgemeinen in etherischer Lösung angewendet, es können jedoch auch die vorstehenden Lösungsmittel sowie andere Lösungsmittel, z. B. Alkohole oder Benzol, eingesetzt werden. Die Gegenwart eines Überschusses an Diazomethan wird nach Methoden kontrolliert, die für ähnliche Verfahren bekannt und in der Literatur beschrieben sind. Die Reaktion ist gewöhnlich in etwa 1—15 Stunden abgeschlossen und wird vorzugsweise bei einer Temperatur von 0—40⁰C, insbesondere bei Raumtemperatur, durchgeführt.

Als Lösungsmittel zum Ausfällen des Reaktionsproduktes eignen sich am besten Diethylether, Benzol und Wasser zugesetzt im Überschuß, sowie zahlreiche andere Lösungsmittel, die eine geringe Lösungsfähigkeit für das Produkt haben. Das so erhaltene Produkt, SPA-S-160 oder Partricin-methylester, kann dann gegebeneivraüs unter Anwendung gepigneter Lösungsmittelgemische gereinigt werden. Vrnhlweise kann die Reinigung für analytische oder präpaiative Zwecke auch m.i Hilfe der Säulenchromatographie über Silicagel durchgeführt werden, wobei als EIuLrUn₆ ,mittel verschiedene Lösu.igsmittelgemische, z. B. ein Gemiscii aus Pyridin und Petrolether im Verhältnis 8 : 2. eingesetzt werden.

Hinsichtlich der Eigenschaften des neuen Komplexe·, bleibt die polyenische Struktur von Partricin unverändert, wie durch das charakteristische UV-Spektrum angezeigt wird, so daß sie als ein Heptaen klassifiziert werden kann. Sie unterscheidet sich von Partricin dadurch, daß sie keine freien Carboxylgruppen enthält und statt dessen einen Methylesterrest aufweist, wie durch das IR-Spektrum (aufgezeichnet in Suspension in Nujol) gezeigt wird, das eine Absorptionsbande bei 1715 cm-' enthält, die auf die Streckschwingung der C —O-Bindungdes Esters zurückzuführen ist, die jedoch im Ausgangsmaterial nicht vorhanden ist, oder wie auch durch das kernmagnetische Resonar.zspektrum gezeigt wird das in Lösung in Dimethylsulfoxid durchgeführt wurde, und in dem bei 3.25 ppm die charakteristische Spitze eines Methylrestes in einer Estergruppe vorhanden ist.

Der erfindungsgemäße Partricin-methylester dürfte auch analog anderen polyenischen Antibiotika, für die das in der Literatur beschrieben wurde, einen lactonischen, makrocyclischen Kern, eine Aminogruppe und einige Hydroxylgruppen enthalten.

Wie inzwischen ermittelt wurde, kann Partricin in die Komponenten A Uiid B aufgetrennt weiden. Für die Einzelbestandteile werden folgende Teilstrukture.i vorgeschlagen:

O OH

H₂N

Partricin Λ. R CIl
Partricin H. R-Il

I OH i OH OH

CO, H

; : 3
I H\dro\\ 1- und
! ei nc Ketogruppe

Der erfindungsgemäße Ester ist weiterhin dadurch gekennzeichnet, daß er nur die Elemente Kohlenstoff, Wasserstoff, Stickstoff und Sauerstoff, und zwar etwa in den folgenden Gewichtsmengen enthält:

Kohlenstoff	63,3%
Wasserstoff	7,8%
Stickstoff	3.2%
Sauerstoff	24,8%

wie in einer Probe, die frei von Feuchtigkeit und Asche war, bestimmt wurde. Außerdem ist der Ester dadurch gekennzeichnet, daß er, gelöst in Ethanol in Konzentrationen von etwa 0,01 mg/ml im UV-Licht die folgenden Absorptionsspitzen aufweist:

Maximum	Minimum
401 πιμ	391 πιμ
378 ιημ	367 mn
359 mn	348 ιτιμ
340 mil

und schließlich durch die Tatsache, daß sein IR-Spektrum in Kaliumbromid (vgl. Figur) bei den folgenden Frequenzen IR-Absorptionsmaxima aufweist: 3360, 1715.1640. 1595, 1175,1060, 1000,848 und 763 cm¹.

Als weiteres Mittel zur Kennzeichnung des neuen Komplexes und zu seiner Unterscheidung von ähnlichen polyenischen Verbindungen einschließlich des bereits genannten Partricins hat dieser Ester bei der Dünnschichtchromatographie, die auf Silicagel-Streifen und unter Verwendung eines Gemisches aus Butanol. Ethanol, Aceton und 25%iger Ammoniumhydroxidlosung im Verhältnis 2:5:1:3 als Eluierungsmittel durchgeführt wurde, einen Rf-Wert von etwa 0,8. Die Flecken sind leicht zu identifizieren, indem man sie UV-Licht aussetzt. Besonders interessant ist das Verhalten des Produktes im Licht. Wenn man die UV-Absorption einer verdünnten Lösung mißt, die längere Zeit dem Licht ausgesetzt ist, so beobachtet man. daß sich das gesamte Spektrum auf Wellenlängen verschiebt, die etwa 4 πιμ höher sind, und dann die Intensität der Absorptionsspitzen verändert wird. Dieses durch Licht induzierte, veränderte UV-Spektrum dürfte zeigen, daß SPA-S-160 ursprünglich nicht in der ausschließlichen »Trans«-Form vorliegt, sondern daß wahrscheinlich eine oder mehrere »Cis«-Doppelbindungen vorhanden sind, die wie bei anderen bekannten Heptaenen leicht eine Stereoisomerisierung durch Licht zur »Trans«-Form eingehen.

Der Antibiotikakomplex Partricin-methylester oder SPA-S-160 ist ein gelber bis dunkelgelber, kristalliner Feststoff, der sehr wenig löslich in Wasser und wäßrigem Alkali (Abwesenheit von Säurefunktionen) sowie in Ether, Petrolether, Benzol u. dgl, mäßig löslich in anderen Lösungsmitteln, wie Aceton und Alkoholen, und sehr gut löslich in Dimethylsulfoxid, Pyridin, Ethylenglykolmonoethylether, Formamid, Dimethylformamid und Dimethylacetamid ist. Mit einigen dieser Lösungsmittel, z. B. Methylformamid und Pyridin, bildet der neue Komplex anscheinend Molekülkomplexe, die ihm eine größere Löslichkeit in vielen wäßrigen und organischen Lösungsmittelsystemen verleihen.

Hinsichtlich der mikrobiologischen Wirksamkeit hat Partricänmethylester oder SPA-S-160 eine geringe oder gar keine Wirksamkeit gegenüber grampositiven und gramnegativen Bakterien, ist jedoch sehr wirksam

gegenüber zahlreiche η pnihogpnen Pilzen, insbesonden gegenüber Candida albicans: die minimale llcmmkon zentration (MHK), bestimmt an 6 Stämmen vor Candida albicans. betrug auf einem Agarmcdium nacl 24 bzw. 48 Stunden Inkubation bei 35"C 0,12 bzw 0,25 ng/ml. Im Vergleich dazu betrugen die MHK de bekannten Amphotericin B 0,25 bzw. l^ig/ml und dif des bekannten Nystatin 4 bzw. 8 ^ig/ml. Darüber hinau hat sich Partricin-methylester als wirksam gegenübe Trichomonas vaginalis erwiesen, wobei die MHK gegenüber 6 Stämmen von T.vaginalis 2 ;ig/ml um gegenüber 2 weiteren Stämmen 4 |ig/nl betrug während die MHK des besten bekannten Mittel gegenüber T.vaginalis. nämlich Metronidazol, gegen über 4 Stämmen von T.vaginalis 0,25 iig/ml um gegenüber 4 weiteren Stämmen 0,5 ^ig/ml betrug.

Im Gegensatz zu ähnlichen polyenischen Antibiotik; ist die Toxizität des neuen Antibiotikakomplexes seh gering; die LDyi(minimale Dosis, die erforderlich ist, un die Hälfte der getesteten Tiere zu töten) beträgt übe 4000 mg/kg bei Mäusen nach oraler Verabreichung Ähnliche Toxizitätsergebnisse wurden für das neu Produkt bei anderen Tieren, z. B. Ratten, erhallen; diesi Dosen sind außergewöhnlich hoch, wenn man sie mi allen bisher bekannten polyenischen Antibiotika ver gleicht.

Es wurden auch klinische Versuche durchgeführt. di< zeigten, daß Partricin-methylester von besonderen Interesse zur Behandlung einer Vaginitis ist, die durcl gemischte Organismen, d. h. C.albicans und T.vaginali« hervorgerufen wurde, da Patricin-methylester sowoh gegenüber C.albicans als auch gegenüber T.vaginali wirksam ist. Bisher wurde zur Behandlung derartige gemischter Infektionen ein Kombinationspräparat au; Nystatin und Metronidazol eingesetzt. Partricin-methyl ester erwies sich diesem Kombinationspräparat gegen über als überlegen.

Die örtliche Anwendung von Patricin-methylester au normale und skarifizierte Kaninchenhaut, sowie auf di< Bindehaut-Mucosa und auf das Hornhaut-Epithel ergab daß der Ester ausgezeichnet toleriert wurde. Die minimalen hämolytischen Konzentrationen an roter Zellen in Kaninchen betragen etwa 40 bis 80 y/ml nacl· einer Stunde, was zu den höchsten Werten zählt, die füi Substanzen mit polyenischer Struktur und insbesondere mit heptaenischer Struktur bisher angegeben wurden.

Die vorstehend beschriebenen zahlreichen mikrobio logischen und pharmakologischen Eigenschaften ma chen den Antibiotikakomplex Partricin-methylester äußerst interessant in der Therapie zur Bekämpfung vieler Krankheiten, die durch Pilzinfektionen Se Menschen, Tieren und Pflanzen verursacht werden Besonders interessant ist die örtliche Anwendung des neuen Esters in Form einer Tinktur oder Salbe zui dermatoiogischen Anwendung und von Suppositorier oder Zäpfchen zur vaginalen Anwendung bei Pilzinfektionen und Infektionen durch Trichomonas. Be Pflanzen kann die Substanz aufgesprüht oder mil Düngemitteln vermischt werden.

Die Beobachtung einer geringen Absorption de; neuen Antibiotikakomplexes durch die Darmwand um se^;ne hohe Wirksamkeit gegenüber Candida albican« machen es besonders brauchbar zur Bekämpfung vor Darminfektionen durch orale Verabreichung. Dies« Infektionen treten beim Menschen besonders häufig nach längerer Behandlung mit Antibiotika, wie bei spielsweise Tetracyclinen und Chloramphenicol, mil antibakterieller Wirksamkeit auf.

Außerdem wurde beobachtet, dab clic Anwendung bestimmter Molekiilkomplexc von SPA-S-160. z. B. mit Dimethylacetamid, die Absorption des Komplexes verbessern kann, was wahrscheinlich auf die erhöhte Fähigkeit zur Lösung und Diffusion zurückzuführen ist. Daher kann die Verbindung auch zur Bekämpfung zahlreicher allgemeiner Infektionen nach oraler oder parenteraler Verabreichung von großem Interesse sein.

Für j-r.e Anwendungen wird die neue Substanz mit einer geeigneten Menge eines pharmazeutisch brauchbaren, festen oder flüssigen Trägers vermischt. Die Präparate schließen Tabletten. Brausetabletien, Pulver. Granulate, Kapseln und Suspensionen in Ol oder andere Formen ein. die besonders zur oralen Verabreichung geeignet sind.

Der neue Antibiotikakomplex kann auch parenteral. d. h. durch Injektion, verabreicht werden, wobei flüssige, sterile Träger verwendet werden. Die Präparate können sterile Lösungen in z. B. Dimethylacetamid oder Ruiykuilosuivc oder auch Suspensionen in 'wasser oder in injizierbaren ölen einschließen.

Die folgenden Beispiele erläutern die F.rfindung; einige Beispiele enthalten auch pharmazeutische Präparate, die SPAS-160 enthalten.

Beispiel I

35 g Partricin wurden in 280 ml Dimethylsulfoxid gelöst und tropfenweise mit 250 ml einer 2°/oigen etherischen Lösung von Diazomethan versetz.t, die nach den in der Literatur angegebenen üblichen Methoden erhalten worden war. Der Zusatz erfolgte bei Raumtemperatur unter langesamem Rühren, wobei die wegen der giftigen und gefährlichen Natur von Diazomethan erforderlichen Vorsichtsmaßnahmen ergriffen wurden. Es erfolgte sofort eine heftige Reaktion, wobei Stickstoff entwickelt wurde, die dann allmählich nachließ und beendet war, als die zugegebene Menge an Diazomethan einen stöchiometrischen Überschuß ausmachte.

Das so erhaltene Gemisch wurde unter Lichtausschluß über Nacht stehengelassen, wonach so viel Ether zugesetzt wurde, daß das Reaktionsprodukt ausgefällt wurde. Dieses Material wurde durch Filtration gesammelt und gewaschen, indem man es zuerst mit Ether bedeckte und dann mit Ether digerierte. Die so erhaltene Substanz, Partiicin-methylester oder SPA-S-160, wurde im Vakuum bei Umgebungstemperatur auf ein konstantes Gewicht getrocknet, wobei eine fast quantitative Ausbeute erhalten wurde. Geringe Mengen an restlichem Lösungsmittel, die etwa vorhanden waren, konnten leicht durch Waschen mit Wasser entfernt werden.

Falls erforderlich konnte die Substanz gereinigt werden, indem man sie mit geeigneten Lösungsmittelgemischen, wie Dimethylsulfoxid — Ether, Dimethylsulfoxid — Aceton — Ether, Dimethylacetamid — Wasser od. dgl., behandelte.

Beispiel 2

10 g Partricin wurden in 100 ml Dimethylacetamid gelöst und tropfenweise bei einer Temperatur von 26" C mit 70 ml einer 2%igen etherischen Lösung von Diazomethan versetzt Das Reaktionsgemisch wurde bei der gleichen Temperatur 6 Stunden lang langsam gerührt und dann mit soviel Äther versetzt daß das Reaktionsprodukt ausgefällt wurde. Der Niederschlag wurde abfiltriert und sorgfältig mit Ether gewaschen und anschließend im Vakuum getrocknet wobei eine fast quantitative Ausbeute von SPAS-160 erhaltei wurde.

Beispiel 3

50 g Partricin wurden in 500 ml Dimethylsulfoxk gelöst, dann wurden unter Rühren 3 ml konzentrierte: Ammoniumhydroxid zugegeben, was ausreichte, um der pH-Wert der Lösung auf 9-9,2 zu bringen. Diesel wurde nach Verdünnung einer Probe auf 1% durch

m Zusatz eines Gemisches von Dimethylsulfoxid unc Wasser im Verhältnis I : I gemessen. Dann wurder 350 ml einer etwa 2%igen etherischen Lösung vor Diazomethan zu dem Reaktionsgemisch gegeben, unc dieses wurde 6 Stunden bei Raumtemperatur langsarr

ι . gerührt. Nach dieser Zeit wurde ein Überschuß an Ethei zugesetzt, um das Reaktionsprodukt auszufällen, das au« dem Lösungsmittelgemisch isoliert und unter Rührer mit 250 ml Aceton und dann mit überschüssigem Ethei behandelt wurde. Das auf diese Weise in Suspensior

■π erhaltene kristalline Produkt wurde ablütriert und mn Ether gewaschen, wobei das gewünschte Produki erhalten wurde.

Beispiel 4

Eine Lösung von 50 g Partricin in 500 ml Dimethylsulfoxid wurde unter Rühren mit einer praktisch stöchiometrischen Menge an konzentriertem Ammoniumhydioxid, d. h. einer ausreichenden Menge, um den pH-Wert der Lösung auf etwa 11 zu bringen, versetzt.

in Dieser pH-Wert wurde nach Verdünnen einer Probe auf 1 % durch Zusatz eines Gemisches von Dimethylsulfoxid und Wasser im Verhältnis 1 : 1 gemessen. Anschließend wurden tropfenweise rasch 350 ml einer etwa 2°/oigen etherischen Lösung von Diazomethan zugesetzt und

r. anschließend weiter nach der Arbeitsweise von Beispiel 3 verfahren, um den Methylester von Partricin zu erhalten.

Beispiel 5

πι Es wurde eine Lösung von 100 g Partricin in 1000 ml Dimethylsulfoxid hergestellt und unter Rühren bei Raumtemperatur mit 6 ml konzentriertem Ammoniumhydroxid und 700 ml einer 2%igen etherischen Lösung von Diazomethan versetzt. Das Reaktionsgemisch

r, wurde 8 Stunden bei Raumtemperatur langsam gerührt; anschließend wurde der größte Teil des Ethers und das überschüssige Diazomethan unter vermindertem Druck abdestilliert, und dann wurde ein Überschuß an Wasser zugesetzt, um das Reaktionsprodukt auszufällen. Der

,(ι Niederschlag wurde dann durch Filtration abgetrennt, sorgfältig mit Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet. Das erhaltene Produkt wurde mit 95%igem wäßrigem Aceton aufgeschlämmt, um etwaige Verunreinigungen und Fraktionen giftigerer Substanzen zu extrahieren, anschließend wurde der gewaschene Feststoff filtriert und getrocknet wobei eine hohe Ausbeute an Partricin-methylester in Form eines dunkelgelben kristallinen Feststoffs erhalten wurde.

Beispiel 6

20 g Partricin wurden in 160 ml Dimethylsulfoxid gelöst und anschließend mit 7 ml Triethylamin und 140 ml einer 23%igen etherischen Lösung von Diazomethan versetzt Das Gemisch wurde 6 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und anschließend nach der Arbeitsweise von Beispiel 3 weiter verarbeitet, wobei der gewünschte Methylester von Partricin erhalten wurde.

Beispiel 7

Eine Lösung von 20 g Partricin in 250 ml Pyridin wurde rasch tropfenweise mit einem Überschuß einer 2,5%igen ätherischen Lösung von Diazomethan versetzt. Das Gemisch wurde über Nacht bei etwa 25"C stehengelassen, unJ anschließend wurde das Reaktionsprodukt nach der in Beispiel I beschriebenen Arbeitsweise isoliert und gereinigt.

Beispiel 8

12 g Partricin-methylester, die nach einer der in den vorstehenden Beispielen beschriebenen Arbeitsweisen erhalten wurden, wurden in 60 ml Pyridin gelöst, und die erhaltene Lösung wurde durch eine chromatographische Säule aus 400 g Silicagel (0,05 bis 0,20 mm) in einem Gemisch von Pyridin und Petroläther im Verhältnis 8 : 2 geschickt. Das gleiche Lösungsmiiteigemisch wurde bei der anschließenden Eluierung verwendet. Während der Chromatographie wurden 100-ml-Fraktionen des Eluats gesammelt und zusammengegeben, nachdem man sie getrennt mittels Dünnschichtchromatographie (Platte auf Basis Kieselsäuregel mit Fluoreszenzindikator; Lösungsmittelsystem: Butanol — Ethanol — Aceton — konzentriertes Ammoniumhydroxid im Verhältnis 2:5:1 :3) auf ihre Reinheit getestet hatte. Die das reine Produkt enthaltende Lösung wurde mit überschüssigem Ether versetzt, um den gelösten Stoff auszufällen, dann wurde der Niederschlag durch Filtration gesammelt und sorgfältig mit Ether gewaschen, wobei ein praktisch reiner Partricin-methylester in Form eines mikrokristallinen gelben Pulvers erhalten wurde. Für analytische Zwecke konnte er, wenn nötig, weiter mit geeigneten Lösungsmittelgemischen, ζ. B. Dimethylsulfoxid — Ether, Dimethylsulfoxid — Wasser, Dimethylacetamid — Wasser, behandelt werden.

Beispiel 9 Vaginal-Suppositorien Jedes Vaginal-Suppositorium enthält:

SPA-S-160 (Partricin-methylester) 0,025 g

Dimethylacetamid 0,065 g

Polyethylenglykol-1540-monostearat 1,200 g

Cetylalkohol 0,610 g

Beispiel 10 Vaginal-Suppositorien Jedes Vaginal-Suppositorium enthält:

SPA-S-160 (Partricin-methylester) 0,025 g

Dimethylsuifoxid 0,075 g

Polyethylenglykol-1540-monostearat 1,200 g

Cetylalkohol 0,600 g

Beispiel 11 Vaginal-Suppositorien Jedes Vaginal-Suppositorium enthält:

SPA-S-160 (Partricin-methylester) 0,025 g

Dimethylacetamid 0,065 g

Polyethylenglykol-1540-monostearat ί _;200 g

Polyethylenglykol 4000 0,610 g

Beispiel 12 \ dginal-Suppositorien Jedes Vaginal-Suppositorium enthält: SPA-S-160(Partricin-methylester) 0,025 g

Fettsäure-triglyceride 1,775 g

Beispiel 13

Salbe

Zusammensetzung:

SPA-S-l60(Partricin-methylester) 3 g

Dimethylacetamid 5 g

Lanolin 20 g

Cetylalkohol 32 g

Oleylalkohol 7,5 g

Sorbitantrioleat 7,5 g

Polyethylenglykol-1540-monostearat 25 g

Beispiel 14

Salbe

Zusammensetzung:

SPA-S-160 (Partricin-methylester) 3 g

Dimethylsulfoxid 6 g

Lanolin 20 g

Cetylalkohol 31 g

Sorbitantrioleat 10 g

Polyethylenglykol-1540-monostearat 30 g

Beispiel 15

Salbe

Zusammensetzung:

SPA-S-160(Partricin-methylester) 3 g

Dimethylsulfoxid 6 g

Lanolin 20 g

Cetylalkohol 31 g

Oleylalkohol 10 g

Polyethylenglykol-1540-monostearat 30 g

Beispiel 16

Salbe

Zusammensetzung:

SPA-S-160 (Partricin-methylester) 3 g

Vaseline 70 g

Weißöl 27 g

Beispiel 17

Das als Ausgangsmaterial verwendete Partricin kann hergestellt werden, indem man Streptomyces aureofaciens NRRL 3878 etwa 24 bis 168 Stunden unter submersen aeroben Bedingungen bei einer Temperatur von 23 bis 30⁰C in einem wäßrigen Nährmedium züchtet, das eine assimilierbare Kohlehydratquelle und eine assimilierbare Stickstoffquelle enthält Beispiele für geeignete Kohlehydratquellen schließen Saccharose, Glukose, Melassen, Stärke, Dextrin, Maismehl u. dgl. ein. Beispiele für geeignete Stickstoffquellen schließen Hefe, Maisquellwasser, Sojabohnenmehl, Erdnußmehl, Ammoniumsulfat, Ammoniumchlorid, Nitrate, Harnstoff und andere übliche bekannte Substanzen ein. Das Nährmedium enthält auch Mineralsalze und Calciumcarbonat als Puffersubstanz.

kg Mycel, das durch die vorstehend genannte submerse aerobe Züchtung von Streptomyces aureofaciens NRRL 3878 erhalten wurde, wird nach Ansäuern

Π 12

auf einen pH-Wert von 1,8 his 2 und anschließender Butanol-Fraktion wird durch Filtration abgetrennt und

Filtration isoliert. Das feuchte Myccl, das vorzugsweise mit 1,5 I Wasser mit einem pH-Wert von 1.5 gewaschen,

DiatomeeriPrde oder andere geeignete Filterhilf en und das n-Butanol wird im Vakuum auf etwa 150 ml

enthält, wird in 3 I n-Butanol suspendier·, und das eingeengt. Bei rascher Kühlung fällt das Partricin aus

Gemisch wird durch Zusatz von Ammoniumhydroxid > und wird dann nacheinander mit Butanol und dann mit

auf einen pH-Wert von 9,5 bis 10 gebracht. Die Petrolether gewaschen.

Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

Claims

Patentansprüche:

1. Als Partricin-methylester (SPA-S-160) bezeichneter Antibiotikakomplex mit Polyenstruktur (Heptaen), gekennzeichnet durch die folgenden Eigenschaften:

Stickstoff und Sauerstoff in den folgenden Gewichtsprozenten: