DE2121517B2

DE2121517B2 - Verfahren zur Gewinnung von Ampho tenzin B

Info

Publication number: DE2121517B2
Application number: DE19712121517
Authority: DE
Inventors: Jewgenij Davidowitsch Etingow; Walter Oswaldowitsch Kulbach; Mark Abowitsch Malkow; Wladimir Semjonowitsch Nynj
Original assignee: LENINGRADSKIJ NAUTSCHNO-ISSLEDOWATELSKIJ INSTITUT ANTIBIOTIKOW SSR LENINGRAD (SOWJETUNION)
Current assignee: LENINGRADSKIJ NAUTSCHNO-ISSLEDOWATELSKIJ INSTITUT ANTIBIOTIKOW SSR LENINGRAD (SOWJETUNION)
Priority date: 1971-04-30
Filing date: 1971-04-30
Publication date: 1973-11-22
Also published as: DE2121517C3; DE2121517A1

Description

2 Stunden bis zur vollständigen Auflösung der Heptaene gerührt. Dann gießt man langsam unter Rühren destilliertes Wasser in einer Menge von 0,5 Volumen

Amphoierizin B findet Verwendung in der medi- zu, bezogen auf das Volumen des eingesetzten Dizinischi*n Praxis bei der Behandlung tiefer Mykosen 3° methylformamids. Man stellt das Gemisch auf einen und anderer Pilzerkrankungen. pH-Wert von 2,0 bis 3,6 mit lO°/oiger Salzsäurelösung Es sind Verfahren zur Gewinnung und chemischen ein. Der ausgefallene Niederschlag, der im wesent-Reinigung von Amphoterizhi3 bekannt, z.B. ein liehen aus inaktivem Heptaen besteht, wird durch Verfahren, das darin besteht, daß man das Rohanti- Filtration oder Schleudern abgetrennt und verworfen, biotikum, gelöst in Dimethylformamid, mit Wasser 35 Der klaren Lösung gießt man unter Rühren destillierausfällt, dann den Niederschlag abfiltriert, mit Azeton tes Wasser in einer Menge von 1 Volumen zu, bewäscht und unter Vakuum trocknet (USA.-Patent- zogen auf das Volumen des Dimethylformamids. Man schrift 2 908 611). Nach einem anderen Verfahren stellt das Gemisch auf einen pH von 6,5 bis 7,0 durch löst man das Rohantibiotikum in wäßrigem Iso- Zugabe von lO°/oiger Ätznatronlösung ein und filtriert propylalkohol bei einem pH-Wert von 2 bis 3 auf, 40 oder zentrifugiert die entstandene Suspension des filtriert den nichtgelösten Niederschlag ab, neutrali- Antibiotikums. Die erhaltene Paste wäscht man mit siert die Lösung auf einen pH-Wert von 5 bis 7, 5O°/oiger wäßriger n-Propylalkohollösung, dann mit filtriert den entstandenen Niederschlag des Anti- Azeton und trocknet unter Vakuum. Man erhält biotikums ab, wäscht es mit Azeton und trocknet Amphoterizin B mit einer spezifischen Aktivität von unter Vakuum (USA.-Patentschrift 2 908 611). 45 über 750 mkg/mg, einem Aschegehalt von weniger

Es ist auch ein Verfahren bekannt, nach welchem als 0,5 %.

man das Rohantibiotikum aus einer Methanollösung Das erfindungsgemäße Verfahren macht es mög-

von Kalziumchlorid mit Wasser umfällt und anschlie- Hch, Amphoterizin B hohen Reinheitsgrades zu erhal-

ßend dieses wäscht und trocknet. Die Aktivität des ten, das zur Herstellung von Injektionsarzneiformen

nach den genannten Verfahren erhaltenen Endpro- 50 bestimmt ist.

duktes beträgt 750 mkg/mg (USA.-Patentschrift Nachstehend wird die Erfindung an Hand von

2908 611; J. Vandeputte et al. Antibiotics Ann. Beispielen für die Durchführung des Verfahrens zur

1955/56, p. 587). Herstellung von Amphoterizin B näher erläutert.

Ein Nachteil der genannten Verfahren ist, daß . · 1 ·,
keines von ihnen eine Reinigung des Amphoterizins B 55 Beispiel!
von dem dieses begleitenden inaktiven Heptaen vor- 25 g Rohamphoterizin B mit einer spezifischen sieht. Das letztere bildet sich zusammen mit dem biologischen Aktivität von 500 mkg/mg, einer Extink-Antibiotikum bei der Fermentation des Produzenten tion Ε}*,, = 1100 bei einer Wellenlänge von Actinomyces nodosus. Der genannte Umstand ver- Λ = 382 mn und einem Gehalt an Amphoterizin A schlechtert die Qualität des Fertigproduktes. 60 von weniger als 5 °/o mischt man mit 500 ml Di-Ziel der vorliegenden Erfindung ist es, den ge- methylformamid bei 2O⁰C. Unter Rühren bringt nannten Nachteil zu vermeiden. man das Gemisch auf einen pH-Wert von 7,2 mit In Übereinstimmung mit dem Ziel wurde die Auf- konzentrierter Salzsäure. Das Gemisch rührt man gäbe gestellt, durch die Wahl eines neuen wäßrig- noch 1,5 Stunden. Der erhaltenen Lösung gießt man organischen Mediums und eines entsprechenden 65 langsam während 1 Stunde unter Rühren 250 ml technologischen Verfahrens die Qualität des End- destilliertes Wasser zu. Man stellt einen pH des Produktes zu erhöhen. Gemisches von 3,2 durch Zugabe 10°/oiger Salzsäure-Diese Aufgabe wurde dadurch gelöst, daß man lösung ein. Der ausgefallene Niederschlag wird unter

Vakuum abfiltriert und verworfen. Der klaren Lösung gießt man unter Rühren 500 ml destilliertes Wasser zu. Man stellt im Gemisch einen pH von 6,5 durch Zugabe 10%iger wäßriger Ätznatronlösung ein und schleudert die entstandene Suspension. Die erhaltene Paste des Antibiotikums wäscht man unter Rühren mit 500 ml 5O°/oigen wäßrigen n-Propylalkohols während 2 Stunden bei Zimmertemperatur. Nach beendetem Waschen wird die Paste zentrifugiert, mit Azeton gewaschen, filtriert und unter Vakuum bei einem Restdruck von 10 Torr und einer Tempeiatur von 20° C getrocknet. Das Gewicht des Fertigproduktes beträgt 8,0 g, die spezifische biologische Aktivität des Pulvers 800 mkg/mg und die Extinktion E}*_n = 1500 bei einer Wellenlänge ;. = 382 mn.

Die Ausbeute an Amphoterizin B, bezogen auf die im Rohprodukt enthaltene Aktivität, beträgt 51⁰Zo.

Beispiel 2

100 g Rohamphoterizin B mit einer spezifischen biologischen Aktivität von 500 mkg/mg, einer üxtinktion E}*„ = 1150 (A = 382 nm) und einem Gehalt an Amphoterizin A von weniger als 5 % bringt man in einen mit einem Rührwerk versehenen emaillierten Apparat ein. Man gießt 1 Liter Dimethylformamid zu und bringt unter Rühren den pH-Wert des Gemisches auf 7,0 durch Zugabe konzentrierter Salzsäure. Das Gemisch rührt man noch 2 Stunden. Der erhaltenen Lösung gießt man langsam während 1,5 Stunden S unter Rühren 0,5 Liter destilliertes Wasser zu. Man stellt im Gemisch einen pH von 2,8 durch Zugabe konzentrierter Salzsäure ein. Der ausgefallene Niederschlag wird durch Zentrifugieren abgetrennt und verworfen. Der klaren Lösung im emaillierten Apparat gießt man unter Rühren 1 Liter destilliertes Wasser zu. Man stellt im Gemisch einen pH von 6,8 durch Zugabe lO°/oiger wäßriger Ätznatronlösung ein und trennt den ausgefallenen Niederschlag des Antibiotikums durch Zentrifagieren ab. Die erhaltene Paste wäscht man im emaillierten Apparat mit 2 Liter 5O°/oigen wäßrigen n-Propylaikohols während 3 Stunden bei Zimmertemperatur. Nach beendetem Waschen schleudert man die Paste, wäscht mit Azeton, filtriert und trocknet unter Vakuum bei einem Restdruck von 100 Torr und einer Temperatur von 20° C. Das Gewicht des Fertigproduktes beträgt 20 g, die spezifische biologische Aktivität des Pulvers 900 mkg/mg und die Extinktion E}*₌ = 1500 (A = 382 nm). Die Ausbeute an Amphoterizin B, bezogen auf die im Rohprodukt enthaltene Aktivität, beträgt 36%.

Claims

1 2

in dem Verfahren zur Gewinnung von Amphoteri-

Patentanspruch: zin B durch dessen Ausfällen mit Wasser aus Rohantibiotikumlösungen in Dimethylformamid, die mit

Verfahren zur Gewinnung von Amphoterizin B konzentrierter Salzsäure bis pH 7 bis 7,5 angesäuert

durch dessen Ausfällen mit Wasser aus Lösungen 5 wurden, unter anschließendem Waschen mit einem

von Rohantibiotikum in Dimethylformamid, die organischen Lösungsmittel erfindungsgemäß der Roh-

bis pH 7 bis 7,5 mit konzentrierter Salzsäure antibiotikumlösung in Dimethylformamid 0,5 VoIu-

angesäuert wurden, unter anschließendem Wa- men destilliertes Wasser, bezogen auf das Volumen

sehen mit einem organischen Lösungsmittel, da- des Dimethylformamids, zusetzt, das erhaltene Ge-

durch gekennzeichnet, daß man der Roh- io misch auf einen pH-Wert von 2 bis 3,6 ansäuert,

antibiotikumlösung in Dimethylformamid 0.5 Vo- die ausgefallenen Beimengungen abtrennt, dem FiI-

lumen destilliertes Wasser, bezogen auf das Vo- trat Wasser in einem Volumen zusetzt, das dem

lumen des Dimethylformamids, zusetzt, das er- Ausgangslösungsmittel gleich ist, dann den pH-Wert

haltene Gemisch auf einen pH-Wert von 2 bis des ^jemische? iuf 6,5 bis 7,0 bringt und das End-

3,6 ansäuert, die ausgefallenen Verunreinigungen 15 produkt abtrei ,t, welches mit wäßrigem π Propanol

abtrennt, dem Filtrat Wasser in einer Menge, und Azeton gewaschen und getrocknet wird,

die der des Ausgangslösungsmittels gleich ist, Das erfindungsgemäße Verfahren wird wie folgt

zusetzt, dann den pH-Wert des Gemisches auf 6.5 durchgeführt: Das Ausgangs-Rohamphoterizin B löst

bis 7,0 bringt und das Endprodukt abtrennt, das man in Dimethylformamid auf. Man bereitet zweck-

mit wäßrigem n-Propanol und Azeton gewaschen 20 mäßig eine Suspension von Rohamphoterizin B in

und getrocknet wird. Dimethylformamid. Dazu mischt man 1 Gewichtsteil

Rohamphoterizin B mit 10 bis 20 Volumen Dimethylformamid. Dann säuert man unter Rühren das Gemisch mit konzentrierter Salzsäure auf einen pH-Wert

25 von 7 bis 7,5 an. Das Gemisch wird noch 1,5 bis