CH556879A - Verfahren zur gewinnung und chemischen reinigung von amphoterizin b. - Google Patents

Description

  
 



   Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Gewinnung und chemischen Reinigung von Amphoterizin B, das zu den makroliden Heptaenantibiotika gehört.



   Das Amphoterizin B findet Verwendung in der medizinischen Praxis bei der Behandlung tiefer Mykosen und anderer Pilzerkrankungen.



   Es sind Verfahren zur Gewinnung und chemischen Reinigung von Amphoterizin B, bekannt z.B. ein Verfahren, das darin besteht, dass man das Rohantibiotikum, gelöst in Dime   thylformamid,    mit Wasser ausfällt, dann den Niederschlag abfiltriert, mit Azeton wäscht und unter Vakuum trocknet. In einem anderen Verfahren löst man das Rohantibiotikum in wässerigem Isopropylalkohol bei einem pH-Wert von 2-3 auf, filtriert den nichtgelösten Niederschlag ab, neutralisiert die Lösung auf einen pH-Wert von 5-7, filtriert den entstandenen Niederschlag des Antibiotikums ab, wäscht es mit Azeton und trocknet unter Vakuum.



   Es ist auch ein Verfahren bekannt, in welchem man das Rohantibiotikum aus einer Methanollösung von Kalziumchlorid mit Wasser umfällt und anschliessend dieses wäscht und trocknet. Die Aktivität des nach den genannten Verfahren erhaltenen Endproduktes beträgt 750 mkg/mg.



   Ein Nachteil der genannten Verfahren ist, dass keines von diesen eine Reinigung des Amphoterizins B von dem dieses begleitenden inaktiven Heptaen vorsieht. Das letztere bildet sich zusammen mit dem Antibiotikum im Prozess der Fermentation des Produzenten   Actinomyces      lnodosus.    Der genannte Umstand verschlechtert die Qualität des Endproduktes.



   Ziel der vorliegenden Erfindung ist es, den genannten Nachteil zu vermeiden.



   In Übereinstimmung mit dem Ziel wurde die Aufgabe gestellt, durch die Wahl einer neuen wässerig - organischen Komposition und eines entsprechenden technologischen Verfahrens die Qualität des Endproduktes zu erhöhen.



   Diese Aufgabe wurde dadurch gelöst, dass man in dem Verfahren zur Gewinnung und chemischen Reinigung von Amphoterizin B durch dessen Ausfällen mit Wasser aus Rohantibiotikumlösung in Dimethylformamid unter anschliessendem Waschen mit einem organischen Lösungsmittel erfindungsgemäss der Rohantibiotikumslösung in Dimethylformamid 0,5 Volumen destilliertes Wasser, bezogen auf das Volumen des Dimethylformamids, zusetzt, das erhaltene Gemisch auf einen pH-Wert von 2,0-3,6 ansäuert, wobei eine Salzbildung stattfindet, die ausgefallenen Verunreinigungen abtrennt, dem Filtrat Wasser in einem   Volumen    zusetzt, das dem Ausgangslösungsmittel gleich ist, dann den pH-Wert des Gemisches auf 6,5-7,0 bringt, wobei das Amphoterizin B aus seinem Salz freigesetzt wird, und das Endprodukt abtrennt, welches mit wässerigem n - Propanol und Azeton gewaschen und getrocknet wird.



   Man bereitet zweckmässig die Rohantibiotikumlösung in Dimethylformamid durch Vermischen von I Gewichtsteil Rohantibiotikum mit 10-20 Volumen Dimethylformamid unter anschliessenden Ansäuern des erhaltenen Gemisches mit Salzsäure auf einen pH-Wert von 7-7,5.



   Das Ansäuern des Gemisches auf einen pH-Wert von 23,6 führt man zweckmässig mit   10%iger    wässeriger Salzsäurelösung durch. Das Alkalisieren des Gemisches auf einen pH Wert von 6,5-7,0 führt man zweckmässig mit   1048iger    wässeriger Ätznatronlösung durch. Man verwendet zweckmässig zum Waschen des Endproduktes 50%ige wässerige n-Propanollösung.



   Das erfindungsgemässe Verfahren wird zweckmässig wie folgt durchgeführt. Das Ausgangs-Rohamphoterizin B löst man in Dimethylformamid auf. Man bereitet zweckmässig eine Suspension von Rohamphoterizin B in Dimethylformamid. Dazu mischt man 1 Gewichtsteil Rohamphoterizin B mit 10 - 20 Volumen Dimethylformamid. Dann säuert man unter Rühren das Gemisch mit konzentrierter Salzsäure auf einen pH-Wert von 7 - 7,5 an. Das Gemisch wird noch 1,5 - 2 Stunden bis zur vollständigen Auflösung der Heptaene gerührt. Dann giesst man langsam unter Rühren destilliertes Wasser in einer Menge von 0,5 Volumen   zù,    bezogen auf das Volumen des eingesetzten Dimethylformamids. Man stellt das Gemisch auf einen pH-Wert von 2,0-3,6 mit   10%iger    Salzsäurelösung ein.

  Der ausgefallene Niederschlag, der im wesentlichen aus inaktivem Heptaen besteht, wird durch Filtration oder Schleudern abgetrennt und verworfen. Der klaren Lösung giesst man unter Rühren destilliertes Wasser in einer Menge von 1 Volumen zu, bezogen auf das Volumen des Dimethylformamids. Man stellt das Gemisch auf pH von 6,5 - 7,0 durch Zugabe   10%iger    Ätznatronlösung ein und filtriert oder schleudert die entstandene Suspension des Antibiotikums. Die erhaltene Paste wäscht man mit 50%iger wässeriger n-Propylalkohollösung, dann mit Azeton und trocknet unter Vakuum. Man erhält Amphoterizin B mit einer spezifischen Aktivität von über 750 mkg/mg, einem Aschegehalt von weniger als   05%.   



   Das erfindungsgemässe Verfahren macht es möglich, Amphoterizin B hohen Reinheitsgrades zu erhalten, das zur Herstellung von Injektionsarzneiformen bestimmt ist.



   Nachstehend wird die Erfindung anhand von Beispielen für die Durchführung des Verfahrens zur Herstellung von Amphoterizin B näher erläutert.



   Beispiel I
25 g Rohamphoterizin B mit einer spezifischen biologischen Aktivität von 500 mkg/mg einer Extinktion E   }7cOm    = 1100 und einem Gehalt an Amphoterizin A weniger als 5% mischt man mit 500 ml Dimethylformamid bei einer Temperatur von   20"C.    Unter Rühren bringt man das Gemisch auf einen pH-Wert von 7,2 mit konzentrierter Salzsäure. Das Gemisch rührt man noch 1,5 Stunden. Der erhaltenen Lösung giesst man langsam während 1 Stunde unter Rühren 250 ml destilliertes Wasser zu. Man stellt ein pH des Gemisches von 3,2 durch Zugabe   10%iger    Salzsäurelösung ein.



  Der ausgefallene Niederschlag wird unter Vakuum abfiltriert und verworfen. Der klaren Lösung giesst man unter Rühren 500 ml destilliertes Wasser zu. Man stellt im Gemisch ein pH von 6,5 durch Zugabe 1 0%iger wässeriger Ätznatronlösung ein und schleudert die entstandene Suspension. Die erhaltene Paste des Antibiotikums wäscht man unter Rühren mit 500 ml   50Sigen    wässerigen n-Propylalkohols während 2 Stunden bei Zimmertemperatur. Nach beendetem Waschen wird die Paste geschleudert, mit Azeton gewaschen, filtriert und unter Vakuum bei einem Restdruck von 10 Torr und einer Temperatur von 200C getrocknet. Das Gewicht des Fertigproduktes beträgt 8,0 g, die spezifische biologische Aktivität des Pulvers 800 mkg/mg und die Extinktion E   l ' m    = 1500. 

  Die Ausbeute an Amphoterizin B, bezogen auf die im Rohprodukt enthaltene Aktivität, beträgt   51cd.   



   Beispiel 2
100 g Rohamphoterizin B mit einer spezifischen biologischen Aktivität von 500 mgk/mg, einer Extinktion   E:e,    = 1150 und einem Gehalt an Amphoterizin A weniger als 5% bringt man in einen mit einem Rührwerk versehenen emaillierten Apparat ein. Man giesst 1 Liter Dimethylformamid zu und bringt unter Rühren den pH-Wert des Gemisches auf 7.0 durch Zugabe konzentrierter Salzsäure. Das Gemisch rührt man noch 2 Stunden. Der erhaltenen Lösung giesst   maa    langsam während 1,5 Stunden unter Rühren 0,5 Liter destilliertes Wasser zu. Man stellt im Gemisch ein pH von 2,8 durch Zugabe konzentrierter Salzsäure ein. Der ausgefallene Niederschlag wird durch Schleudern abgetrennt und verworfen. Der  klaren Lösung im emaillierten Apparat giesst man unter Rühren 1 Liter destilliertes Wasser zu. 

  Man stellt im Gemisch ein pH von 6,8 durch Zugabe 10%iger wässeriger Ätznatronlösung ein und trennt den ausgefallenen Niederschlag des Antibiotikums durch Schleudern ab. Die erhaltene Paste wäscht man im emaillierten Apparat mit 2 Liter 50%igen wässerigen n-Propanols während 3 Stunden bei Zimmertemperatur. Nach beendetem Waschen schleudert man die Paste, wäscht mit Azeton, filtriert und trocknet unter Vakuum bei einem Restdruck von 10 Torr und einer Temperatur von 200C. Das Gewicht des Fertigproduktes beträgt 20 g die spezifische biologische Aktivität des Pulvers 900 mkg/mg und die Extinktion E   1%    = 1500. Die Ausbeute an Amphoterizin B, bezogen auf die im Rohprodukt enthaltene Aktivität, beträgt 36%. 

Claims (1)

1. PATENTANSPRUCH

   Verfahren zur Gewinnung und chemischen Reinigung von Amphoterizin B durch dessen Ausfällen mit Wasser aus Lösungen von Rohantibiotikum in Dimethylformamid unter anschliessendem Waschen mit einem organischen Lösungsmittel, dadurch gekennzeichnet, dass man der Rohantibiotikumlösung in Dimethylfonnamid 0,5 Volumen destilliertes Wasser, bezogen auf das Volumen des Dimethylformamids, zusetzt, das erhaltene Gemisch auf einen pH-Wert von 2,0-3,6 ansäuert, wobei eine Salzbildung stattfindet, die ausgefallenen Verun reinigungen abtrennt, dem Filtrat Wasser in einem Volumen, das dem des Ausgangslösungsmittels gleich ist, zusetzt, dann den pH-Wert des Gemisches auf 6,5-7,0 bringt, wobei das Amphoterizin B aus seinem Salz freigesetzt wird, und das Endprodukt abtrennt, das mit wässerigem n-Propanol und Azeton gewaschen und getrocknet wird.

   UNTERANSPRÜCHE 1. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeich net, dass man die Rohantibiotikumlösung in Dimethylform amid durch Vermischen von I Gewichtsteil Rohantibiotikum mit 10 - 20 Volumen Dimethylformamid und anschliessendes Ansäuern des erhaltenen Gemisches auf einen pH-Wert von 7 - 7,5 durch Zugabe konzentrierter Salzsäure bereitet.

   2. Verfahren nach Patentanspruch und dem Unteran spruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man das Ansäuern des Gemisches auf einen pH-Wert von 2-3,6 durch Zugabe 10% iger wässeriger Salzsäurelösung durchführt.

   3. Verfahren nach dem Patentanspruch und Unteran spruch 1-2, dadurch gekennzeichnet, dass man das Alkalisie ren des Gemisches auf einen pH-Wert von 6,5-7,0 durch Zu gabe 10%iger wässeriger Ätznatronlösung durchführt.

   4. Verfahren nach Patentanspruch und Unteranspruch 1-3, dadurch gekennzeichnet, dass das Endprodukt mit 50%- igem wässrigem n-Propanol gewaschen wird.