DE202019005637U1

DE202019005637U1 - Topische Muskelentspannungszusammensetzungen und deren Verwendung

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Publication number: DE202019005637U1
Application number: DE202019005637.8U
Authority: DE
Original assignee: Kay Mary Inc
Current assignee: Kay Mary Inc
Priority date: 2018-07-03
Filing date: 2019-06-28
Publication date: 2021-04-15
Anticipated expiration: 2029-06-29
Also published as: US11547734B2; US20200009209A1; WO2020009937A8; WO2020009937A1; EP3817755A1; US20230106520A1; CN112739363A; EP3817755A4

Abstract

Verwendung einer Zusammensetzung, die
(a) eine effektive Menge an Rosmarinus officinalis-Blattextrakt,
(b) eine effektive Menge an Lavendula stoechas-Extrakt und
(c) eine effektive Menge an Acmella oleracea-Extrakt umfasst,
um Muskelkontraktion eines Gesichtsmuskels bei einer Person zu reduzieren und/oder das Erscheinungsbild einer feinen Linie oder Falte auf der Haut einer Person zu reduzieren, wobei die Verwendung topisches Auftragen der Zusammensetzung auf Gesichtshaut umfasst, wobei topische Auftragung der Zusammensetzung auf die Gesichtshaut Muskelkontraktion des Gesichtsmuskels reduziert und/oder das Erscheinungsbild der feinen Linie oder Falte reduziert.

Description

Diese Anmeldung beansprucht die Priorität der vorläufigen US-Patentanmeldung Nr. 62/693,545 , eingereicht am 3. Juli 2018, hier durch Bezugnahme in vollem Umfang eingeschlossen.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft allgemein eine Zusammensetzung, die verwendet werden kann, um Gesichtsmuskeln zu entspannen und/oder das Erscheinungsbild von feinen Linien oder Falten zu reduzieren. Die Zusammensetzung kann eine Kombination von Extrakten auf Pflanzenbasis einschließen, wie Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt.
Hintergrund
Bestimmte Typen von Falten entwickeln sich aufgrund von wiederholter Muskelkontraktion im Zeitverlauf auf der Haut des Gesichts. Diese Typen von Falten werden in der Regel als Rhytiden bezeichnet. Beispiele hierfür können Stirnrunzellinien oder Glabellarlinien, Stirnlinien, Krähenfüße, Nasenrückenfältchen oder Nasallinien, Kinngrübchen, Lachfalten, Lippenlinien einschließen. Zurzeit ist eine umfangreiche Palette von kommerziell erhältlichen Behandlungsmaterialien erhältlich, und diese sind vorgeblich als Entspannungsmittel für Gesichtsmuskeln/Unterdrückungsmittel von Muskelkontraktion effektiv. Es wird gesagt, dass diese Materialien in der Lage seien, das Erscheinungsbild derartiger Falten zu reduzieren. Nicht-einschränkende Beispiele für solche Behandlungsmaterialien schließen injizierbare Neuromodulatoren ein, wie Botox® (OnabotulinumtoxinA), Dysport® (AbobotulinumtoxinA) oder Xeomin® (IncobotulinumtoxinA). Andere Beispiele schließen topisch verabreichte Behandlungsmaterialien ein, wie chemische Verbindungen (z. B. gamma-Aminobuttersäure) und Peptide (z. B. Acetylhexapeptid-3).
Mit injizierbaren Neuromodulatoren sind verschiedene Probleme verbunden, wie allergische Reaktionen, Ausschlag, Juckreiz, Reaktionen an der Injektionsstelle (blaue Flekken, Blutung, Schmerz, Rötung, Schwellung oder Druckschmerzhaftigkeit), Muskelsteifheit, Fieber, Husten, Halsschmerzen, grippeartige Symptome, Nacken- oder Rückenschmerz sowie das Potential, sich von der Injektionsstelle auf andere Körperteile auszubreiten, was zu schwerwiegenden Risiken wie Problemen beim Sprechen, Schlucken oder Atmen, Muskelschwäche, herabhängenden Augenlidern und verschwommener Sicht oder Doppelbildern führen kann. Chemische Verbindungen haben gleichermaßen ihre eigenen Nachteile, wie Hautreizung und möglicherweise allergische Reaktionen. Neben den physiologischen Problemen im Zusammenhang mit injizierbaren Neuromodulatoren und chemischen Verbindungen können diese elektiven kosmetischen Verfahren für ein großes Segment der Population, das davon profitieren könnte, von der Kostenseite her prohibitiv sein.
Es gab einige Versuche, Bestandteile auf natürlicher Basis zu produzieren, die über die Fähigkeit verfügen, Gesichtsmuskeln zu entspannen. Ein derartiger Versuch ist die Entwicklung von Acmella oleracea-Extrakten. Auch wenn diese Extrakte eine gewisse muskelrelaxierende Wirkung bieten können, reicht der Effekt möglicherweise nicht aus, um Gesichtsmuskeln effektiv zu entspannen und das Erscheinungsbild von feinen Linien oder Falten zu reduzieren.
Es ist gezeigt worden, dass frühere Versuche zur Verbesserung des visuellen Erscheinungsbildes der Haut verschiedene Nachteile aufweisen, wie hohe Kosten, medizinische Risiken, Hautreizung, verlängerte Erholungsperioden oder ineffiziente Abgabe der versprochenen Hautvorteile.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die Erfinder haben eine Lösung für mindestens einige der Probleme im Zusammenhang mit der Behandlung von feinen Linien oder Falten identifiziert. Die Lösung liegt in einer Kombination von Bestandteilen auf Pflanzenbasis, die effektiv ist, um Muskelkontraktion von Gesichtsmuskeln zu reduzieren. Die Kontraktion der Gesichtsmuskeln kann in einem speziellen Aspekt reduziert werden, indem die Kontraktion von Myotubuli mittels Reduzieren des Einfließens der Calciumspiegel in die Myotubuli reduziert wird. Das Reduzieren des Einfließens der Calciumspiegel in die Myotubuli kann ein Aktionspotential in den Myotubuli reduzieren oder inhibieren, wodurch Muskelkontraktion reduziert oder verhindert wird. Diese Kombination der Bestandteile hat auch die Fähigkeit, biochemische Wege zu modulieren, die weiter dazu beitragen können, das Erscheinungsbild von feinen Linien oder Falten zu reduzieren, wie durch Stimulieren der Kollagenproduktion in der Haut (z. B. Keratinozyten oder humane Dermalfibroblasten), und/oder Reduzieren der enzymatischen Aktivität oder Produktion von Enzymen im Zusammenhang mit dem Abbau von extrazellulären Matrixproteinen (z. B. Matrix-Metalloproteinase- (MMP)-Enzymen, wie MMP-1, MMO3 und/oder MMP-9). Die Kombination der Bestandteile hat zudem auch die Fähigkeit, die Expression von Kollagen und Produktion von Laminin in Hautzellen zu erhöhen (z. B. Keratinozyten oder humanen Dermalfibroblasten). Die Kombination der Bestandteile auf Pflanzenbasis schließt mindestens zwei oder alle drei von Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und/oder Acmella oleracea-Extrakt ein. Diese Kombination von Bestandteilen auf Pflanzenbasis kann verwendet werden, um topische Hautzusammensetzungen zu erzeugen, welche das Erscheinungsbild von feinen Linien oder Falten reduzieren und/oder deren Bildung verhindern, einschließlich tiefen Gesichtslinienfalten oder Rhytiden, die mit wiederholter Gesichtsmuskelkontraktion über längere Zeiträume (z. B. 1, 2, 4, 6, 8, 12 oder mehr Monate oder etliche Jahre) in Verbindung gebracht werden können. Es ist bemerkenswert, dass die Kombination von Bestandteilen verwendet werden kann, um das Erscheinungsbild von sowohl statischen als auch dynamischen feinen Linien oder Falten zu reduzieren und/oder deren Bildung zu verhindern.
Gemäß einem Aspekt der vorliegenden Erfindung wird ein Verfahren zum Reduzieren von Muskelkontraktion eines Gesichtsmuskels bei einer Person offenbart. In einem anderen Aspekt wird ein Verfahren zum Reduzieren des Erscheinungsbildes einer feinen Linie oder Falte auf der Haut einer Person offenbart. Das Verfahren kann topisches Auftragen einer Zusammensetzung auf die Haut einschließen, wobei die Zusammensetzung umfasst: (a) eine effektive Menge an Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, (b) eine effektive Menge an Lavendula stoechas-Extrakt und/oder (c) eine effektive Menge an Acmella oleracea-Extrakt, wobei topische Auftragung der Zusammensetzung auf Gesichtshaut Muskelkontraktion des Gesichtsmuskels reduziert, oder wobei topische Auftragung der Zusammensetzung auf die Haut das Erscheinungsbild von feinen Linien oder Falten auf der Haut einer Person reduziert. Topische Auftragung kann zusätzlich oder alternativ Rollen eines Mikrorollers über die Haut einer Person einschließen, um das Eindringen der Zusammensetzung in die Haut zu erhöhen. Die Zusammensetzung schließt in bestimmten Aspekten Rosmarinus officinalis-Blattextrakt und Lavendula stoechas-Extrakt, Rosmarinus officinalis-Blattextrakt und Acmella oleracea-Extrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt oder alle von Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt ein. Gesichtsmuskel(n), der/die kontrahiert ist/sind, kann bzw. können in bestimmten Aspekten direkt unter der Haut positioniert sein, wo die Zusammensetzung aufgebracht wird. Gesichtsmuskel(n), der/die kontrahiert ist/sind, kann bzw. können in anderen Aspekten in enger Nähe zu der Haut sein, jedoch nicht direkt unterhalb der Haut, wo die Zusammensetzung aufgetragen wird (z. B. innerhalb von 3 Zentimetern, vorzugsweise 2,5 cm oder bevorzugter innerhalb von 2 cm oder noch bevorzugter innerhalb von 1,5 oder 1 cm des Hautareals, auf welches die Zusammensetzung aufgetragen worden ist). Der Gesichtsmuskel kann ein Muskel des Glabellarkomplexes, ein Orbicularis oculi-Muskel, ein Depressormuskel oder ein Frontalismuskel oder jegliche Kombination davon sein. Die Zusammensetzung kann alternativ auf Haut außerhalb des Gesichts aufgetragen werden (z. B. Hände, Schenkel, Hals, Po, Decollete-Region, Füße, usw.) und kann zu reduzierter Muskelkontraktion von Muskeln direkt unter der Haut führen, wo die Zusammensetzung aufgetragen worden ist, oder in enger Nähe zu der Haut, jedoch nicht direkt unter der Haut. Falls die Zusammensetzung auf eine feine Linie oder Falte aufgetragen wird, kann die feine Linie oder Falte eine Rhytide sein, und die Reduktion der Muskelkontraktion des Gesichtsmuskels reduziert das Erscheinungsbild der Rhytide. In anderen Fällen ist die feine Linie oder Falte keine Rhytide.
Die in den Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung verwendeten Extrakte können jeweils individuell aus Wasser als Extraktionslösungsmittel (z. B. wässriger Extrakt), Alkohol als Extraktionslösungsmittel (z. B. Alkoholextrakt) oder Polyol als Extraktionslösungsmittel (z. B. Polyolextrakt) oder jeglichen Kombinationen solcher Extraktionsmittel (z. B. wässrig-alkoholischer Extrakt, wässrig-Polyolextrakt, Alkohol-Polyolextrakt oder wässrig-alkoholisch-Polyolextrakt) erhalten werden. Nicht-einschränkende Beispiele für Alkohole können Methanol, Ethanol, Propanol, Butanol, Pentanol, Hexanol, Heptanol, Octanol, usw. sein. Nicht-einschränkende Beispiele für Polyole können Ethylenglykol, Propylenglykol, Glycerin, Erythrit, Xylit, Mannit, Volemit, usw. sein. Es können zudem andere Extraktionslösungsmittel verwendet werden, wie zusätzliche hydrophile Lösungsmittel oder lipophile Lösungsmittel (z. B. Methan, Ethan, Butan, Propan, Hexan, Heptan, Octan, Dimethylsulfoxid (DMSO), N-Methyl-2-pyrrolidon (NMP), Kohlendioxid, wie die Verwendung von Kohlendioxid (CO₂) in überkritischen Extraktionstechniken). Überkritische Extraktion mit CO₂ kann Füllen einer Säule mit getrocknetem Pflanzenmaterial und Pumpen von überkritischem flüssigem Kohlendioxid durch die Säule mit sehr hohem Druck (200-400 Bar) und nachfolgendes Auffangen des resultierenden Extrakts einschließen.
In einem bevorzugten Fall kann der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt aus dem Blatt von Rosmarinus officinalis erhalten werden. Das Blatt kann einem Extraktionsprozess mit Eutektigenese unter Verwendung einer fließfähigen Extraktionsmischung unterzogen werden, die Betain oder hydratisiertes Betain, eine Donorverbindung für Wasserstoffbrükkenbindungen (z. B. Polyole, organische Säuren, usw.) und Wasser umfasst. Der eutektische Extrakt kann dann in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen verwendet werden. Der Donor der Wasserstoffbrückenbindung ist in einigen bevorzugten Fällen eine organische Säure, vorzugsweise Milchsäure. Eutektigenese nutzt eutektische Lösungsmittel, die Mischungen von Verbindungen sind, die niedrigere Schmelzpunkte als jene ihrer Bestandteile für sich genommen aufweisen. In einem anderen bevorzugten Fall ist der Lavendula stoechas-Extrakt aus einer Kombination der Blüten-, Blatt- und Stielanteile von Lavendula stoechas, und der Extrakt kann hergestellt werden, indem diese Anteile einem überkritischen Extraktionsprozess unter Verwendung von Kohlendioxid (CO₂) als Lösungsmittel ausgesetzt werden. Der überkritische CO₂-Extrakt von Blüte, Blatt und Stiel (Blüte/Blatt/Stiel) von Lavendula stoechas kann dann in den Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung verwendet werden. Der überkritische CO₂-Extrakt von Blüte/Blatt/Stiel von Lavendula stoechas kann auch mit Capryl-/Caprintriglyceriden gemischt und dann in den Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung verwendet werden. In noch einem anderen bevorzugten Fall ist der Acmella oleracea-Extrakt aus der Kombination der Blüten-, Blatt- und Stielanteile von Acmella oleracea, und der Extrakt kann hergestellt werden, indem diese Anteile (Blüte/Blatt/Stiel) einem hydro-alkoholischen (vorzugsweise hydro-ethanolischen) Extraktionsprozess oder einem hydro-alkoholisch-Polyol-Extraktionsprozess unterzogen werden. Das Polyol kann in bevorzugten Fällen 1,3-Propandiol sein. Der Alkohol kann aus dem resultierenden Extrakt entfernt werden. Der Acmella oleracea-Extrakt kann dann in den Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung verwendet werden. In einem bevorzugten Fall können somit der eutektische Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, der Blüten/Blatt/Stielextrakt aus Lavendula stoechas mit überkritischem CO₂ und der Hydro-Alkohol-Polyolextrakt aus Blüte/Blatt/Stiel von Acmella oleracea in den Zusammensetzungen und Verfahren der vorliegenden Erfindung verwendet werden.
Eine effektive Menge an Rosmarinus officinalis-Blattextrakt in der Zusammensetzung kann 0,00001 bis 25 % Gew./Gew. oder jeglicher Bereich darin sein (z. B. 0,00001 bis 10 % Gew./Gew., 0,00001 bis 5 % Gew./Gew., 0,00001 bis 2 % Gew./Gew., 0,00001 bis 1 % Gew./Gew., 0,00001 bis 0,5 % Gew./Gew. oder 0,001 bis 1 % Gew./Gew., 0,01 bis 1 % Gew./Gew., 0,1 bis 1 % Gew./Gew. oder 0,001 bis 2 % Gew./Gew, 0,01 bis 2 % Gew./Gew. oder 0,1 bis 2 % Gew./Gew.). Eine effektive Menge an Lavendula stoechas-Extrakt in der Zusammensetzung kann 0,00001 bis 25 % Gew./Gew. oder jeglicher Bereich darin sein (z. B. 0,00001 bis 10 % Gew./Gew., 0,00001 bis 5 % Gew./Gew., 0,00001 bis 2 % Gew./Gew., 0,00001 bis 1 % Gew./Gew., 0,00001 bis 0,5 % Gew./Gew. oder 0,001 bis 1 % Gew./Gew., 0,01 bis 1 % Gew./Gew., 0,1 bis 1 % Gew./Gew. oder 0,001 bis 2 % Gew./Gew, 0,01 bis 2 % Gew./Gew. oder 0,1 bis 2 % Gew./Gew.). Eine effektive Menge an Acmella oleracea-Extrakt in der Zusammensetzung kann 0,00001 bis 25 % Gew./Gew. oder jeglicher Bereich darin sein (z. B. 0,00001 bis 10 % Gew./Gew., 0,00001 bis 5 % Gew./Gew., 0,00001 bis 2 % Gew./Gew., 0,00001 bis 1 % Gew./Gew., 0,00001 bis 0,5 % Gew./Gew. oder 0,001 bis 1 % Gew./Gew., 0,01 bis 1 % Gew./Gew., 0,1 bis 1 % Gew./Gew. oder 0,001 bis 2 % Gew./Gew, 0,01 bis 2 % Gew./Gew. oder 0,1 bis 2 % Gew./Gew.).
Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können Kontraktion von Myotubuli reduzieren. Dies kann erfolgen, indem das Einfließen von Calcium in die Myotubuli reduziert wird, was reduzieren oder verhindern kann, dass in den Myotubuli ein Aktionspotential auftritt. Durch Reduzieren oder Verhindern der Aktionspotentialentwicklung kann die Kontraktion der Myotubuli reduziert oder verhindert werden. Es ist durch die Erfinder gezeigt worden, dass bemerkenswerterweise jedes von Rosmarinus officinalis-Blatt oder einem Extrakt davon, Lavendula stoechas oder einem Extrakt davon und/oder Acmella oleracea oder einem Extrakt davon das Einfließen von Calcium in Myotubuli reduziert oder verhindert und Muskelkontraktion reduziert oder verhindert. Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können auch die Kollagenproduktion in Hautzellen stimulieren (z.B. Keratinozyten und/oder humanen Dermalfibroblasten. Es wurde insbesondere im Kontext der vorliegenden Erfindung gefunden, dass Acmella oleracea oder ein Extrakt davon die Kollagenproduktion in Hautzellen erhöhen kann. Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können auch die Lamininproduktion in Hautzellen stimulieren (z.B. Keratinozyten und/oder humane Dermalfibroblasten. Es wurde insbesondere im Kontext der vorliegenden Erfindung gefunden, dass Acmella oleracea oder ein Extrakt davon die Lamininproduktion in Hautzellen erhöhen kann. Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können auch die Aktivität oder Produktion von Matrix-Metalloproteinasen (MMP) 1, 3 und 9 in Hautzellen (z. B. Keratinozyten und/oder humanen Dermalfibroblasten) reduzieren oder inhibieren. Es wurde insbesondere im Kontext der vorliegenden Erfindung gefunden, dass Rosmarinus officinalis-Blatt oder ein Extrakt davon jede von Aktivität oder Produktion von MMP-1, MMP-3 und MMP-9 in Hautzellen reduzieren oder inhibieren kann. Die Haut kann Gesichtshaut sein, wie Haut, die sich auf der Stirn, den Wangen, dem Kinn, der Augenregion (z. B. unter den Augen, neben den Augen, wie dort, wo sich Krähenfüße bilden, Augenlid, usw.) befindet. Die Gesichtshaut ist in bestimmten bevorzugten Aspekten Stirnhaut oder die Haut der Augenregion, insbesondere dort, wo sich Krähenfüße entwickeln. Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können weiterhin verwendet werden, um die Straffheit der Haut zu erhöhen, was dazu beitragen kann, das Erscheinungsbild von loser, schlaffer und/oder welker Haut zu reduzieren.
Die topischen Hautzusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können zusätzlich zu Rosmarinus officinalis-Blatt oder einem Extrakt davon, Lavendula stoechas oder einem Extrakt davon und/oder Acmella oleracea oder einem Extrakt davon ein oder mehrere hier beschriebene Bestandteile umfassen. Die Zusammensetzung kann beispielsweise ein oder mehrere zusätzliche Bestandteile ausgewählt von einem oder mehreren kosmetischen Bestandteilen oder pharmazeutischen Bestandteilen umfassen. Die Zusammensetzungen können in einigen Fällen ein oder mehrere Konditionierungsmittel, Befeuchtungsmittel, pH-Werteinstellungsmittel, Strukturierungsmittel, silikonhaltige Verbindungen, anorganische Salze und/oder Konservierungsmittel einschließen. Die topische Zusammensetzung schließt in einigen Aspekten des Weiteren Wasser ein, vorzugsweise mindestens 50, 60, 70, 80 oder 90 oder mehr Gew.% Wasser, bevorzugter zwischen 50 und 90 Gew.% Wasser. Die topischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können in einigen Aspekten ein oder mehrere zusätzliche Bestandteile ausgewählt aus einem oder mehreren kosmetischen Bestandteilen oder pharmazeutischen Bestandteilen ausschließen. Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können in einigen noch spezielleren Aspekten einen oder mehrere von Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt ausschließen. Die topische Zusammensetzung schließt in einigen Aspekten Wasser aus. Die topische Zusammensetzung kann hier in einigen Aspekten wasserfrei oder im Wesentlichen wasserfrei sein.
Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung werden in speziellen Aspekten als topische Hautzusammensetzung formuliert. Die Zusammensetzung kann ein dermatologisch annehmbares Vehikel oder einen dermatologisch annehmbaren Träger für die Verbindungen und Extrakte aufweisen. Die Zusammensetzung kann ferner ein Befeuchtungsmittel oder Feuchthaltemittel, ein oberflächenaktives Mittel, silikonhaltige Verbindungen, UV-Mittel, Öl und/oder andere Bestandteile einschließen, die in dieser Beschreibung angegeben sind oder die Fachleuten bekannt sind. Die Zusammensetzung kann eine Maske, eine Lotion, eine Creme, ein Gel, ein Serum, eine Emulsion (z. B. Öl-in-Wasser, Wasser-in-Öl, Silikonin-Wasser, Wasser-in-Silikon, Wasser-in-Öl-in-Wasser, Öl-in-Wasser-in-Öl, Öl-in-Wasser-in-Silikon, usw.), Lösungen (z. B. wässrige oder hydro-alkoholische Lösungen), wasserfreie Basismaterialien (z. B. Lippenstift oder ein Puder), Salben, Milch, Paste, ein Aerosol, feste Formen, Augengelees, Gelserumpräparate, Gelemulsionen, usw. sein. Die Zusammensetzung kann für die topische Auftragung auf Haut mindestens 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder mehr Male am Tag während der Verwendung dienen. In anderen Aspekten der vorliegenden Erfindung können Zusammensetzungen lagerstabil oder farbstabil oder beides sein. Es ist auch vorgesehen, dass die Viskosität der Zusammensetzung so gewählt werden kann, dass ein bestimmtes Ergebnis erreicht wird, z. B. kann in Abhängigkeit von dem gewünschten Typ der Zusammensetzung die Viskosität etwa 1 cps bis deutlich über 1 Millionen cps betragen, oder ein beliebiger davon ableitbarer Bereich oder eine beliebige davon ableitbare ganze Zahl (z. B. 2 cps, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10000, 20000, 30000, 40000, 50000, 60000, 70000, 80000, 90000, 100000, 200000, 300000, 400000, 500000, 600000, 700000, 800000, 900000, 1000000, 2000000, 3000000, 4000000, 5000000, 10000000 cps usw., gemessen mit einem Brookfield-Viskometer unter Verwendung einer TC-Spindel mit 2,5 UpM bei 25 °C).
Die Zusammensetzungen können in nicht-einschränkenden Aspekten einen pH-Wert von etwa 6 bis etwa 9 haben. In anderen Aspekten kann der pH-Wert 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 oder 14 sein. Die Formulierung kann ein Triglycerid einschließen. Nicht-einschränkende Beispiele schließen kurz-, mittel- und langkettige Triglyceride ein. Das Triglycerid ist in bestimmten Aspekten ein mittelkettiges Triglycerid (z. B. Capryl-/Caprintriglycerid). Die Zusammensetzungen können auch Konservierungsmittel einschließen. Nicht-einschränkende Beispiele für Konservierungsmittel schließen Natriumbenzoat, Iodpropinylbutylcarbamat, Methylparaben, Propylparaben oder eine Mischung von Methylparaben und Propylparaben ein. Die Zusammensetzung ist in einigen Ausführungsformen parabenfrei.
Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können UV A- und UV B-Absorptionseigenschaften aufweisen. Die Zusammensetzungen können einen Lichtschutzfaktor (SPF) von 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60 oder mehr aufweisen, oder eine beliebige ganze Zahl oder ein beliebiges Derivat darin. Die Zusammensetzungen können Sonnenschutzlotionen, -sprays oder -cremes sein.
Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können auch ein beliebiges von, eine beliebige Kombination von oder alle der folgenden zusätzlichen Bestandteile einschließen: Wasser, einen Chelatbildner, ein Befeuchtungsmittel, ein Konservierungsmittel, ein Verdickungsmittel, eine silikonhaltige Verbindung, ein etherisches Öl, ein Strukturierungsmittel, ein Vitamin, einen pharmazeutischen Bestandteil, ein Antioxidans oder eine beliebige Kombination dieser Bestandteile oder Mischungen solcher Bestandteile. Die Zusammensetzung kann in bestimmten Aspekten mindestens zwei, drei, vier, fünf, sechs, sieben, acht, neun, zehn oder alle dieser zusätzlichen Bestandteile einschließen, die im vorhergehenden Satz genannt wurden. In dieser Beschreibung werden nicht-einschränkende Beispiele für diese zusätzlichen Bestandteile angegeben und werden durch Bezugnahme in diesen Abschnitt aufgenommen. Die Mengen dieser Bestandteile können im Bereich von 0,0001 bis 99,9 Gew.% oder Vol.% der Zusammensetzung liegen oder eine beliebige ganze Zahl oder ein beliebiger Bereich dazwischen sein, wie in anderen Abschnitten dieser Beschreibung offenbart ist, die in diesem Absatz durch Bezugnahme eingeschlossen sind.
Kits, die die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen einschließen, sind auch vorgesehen. In bestimmten Ausführungsformen ist die Zusammensetzung in einem Behälter enthalten. Der Behälter kann eine Flasche, ein Spender oder eine Packung sein. Der Behälter kann eine festgelegte Menge der Zusammensetzung enthalten. Die Zusammensetzungen werden in bestimmten Aspekten als Spray, Nebel, Klecks oder Flüssigkeit abgegeben. Der Behälter kann Zeichen auf seiner Oberfläche aufweisen. Die Zeichen können ein Wort, eine Abkürzung, ein Bild oder ein Symbol sein.
Es ist auch vorgesehen, dass die in dieser Beschreibung offenbarten Zusammensetzungen in Produkten, die auf der Haut verbleiben („Leave-on“), oder Produkten, die von der Haut abgespült werden („Rinse-off“), verwendet werden können. Eine Leave-on-Zusammensetzung kann beispielsweise eine sein, die topisch auf die Haut aufgetragen wird und eine Zeit lang auf der Haut verbleibt (z. B. mindestens 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20 oder 30 Minuten oder mindestens 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 oder 24 Stunden oder über Nacht oder während des Tages). Alternativ kann eine Rinse-off-Zusammensetzung ein Produkt sein, das auf die Haut aufgetragen und dann innerhalb eines Zeitraums, wie weniger als 5, 4, 3, 2 oder 1 Minute, von der Haut entfernt oder abgespült wird (z. B. mit Wasser). Ein Beispiel für eine Rinse-off-Zusammensetzung kann ein Hautreiniger, Shampoo, Conditioner oder Seife sein. Ein Beispiel für eine Leave-on-Zusammensetzung kann ein Befeuchtungsprodukt für die Haut, Sonnenschutzmittel, eine Maske, Nachtcreme oder Tagescreme sein.
Es ist vorgesehen, dass jedwede in dieser Beschreibung erörterte Ausführungsform in Bezug auf jedwedes Verfahren oder jedwede Zusammensetzung der Erfindung implementiert werden kann, und anders herum. Zusammensetzungen der Erfindung können ferner verwendet werden, um Verfahren der Erfindung zu erreichen.
In einer Ausführungsform können Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung pharmazeutisch oder kosmetisch hochwertig sein oder angenehme taktile Eigenschaften aufweisen. „Pharmazeutisch hochwertig“, „kosmetisch hochwertig“ und/oder „taktil angenehme Eigenschaften“ beschreibt eine Zusammensetzung mit besonderen taktilen Eigenschaften, die sich auf der Haut angenehm anfühlen (z. B. Zusammensetzungen, die nicht zu wässrig oder schmierig sind, Zusammensetzungen mit seidiger Textur, Zusammensetzungen, die nicht haftend oder klebrig sind, usw.). Pharmazeutisch oder kosmetisch hochwertig kann sich auch auf die Cremigkeit oder Schmierfähigkeitseigenschaften der Zusammensetzung oder die Feuchthalteeigenschaften der Zusammensetzung beziehen.
Es ist auch ein Produkt vorgesehen, das eine Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung umfasst. Das Produkt kann in nicht-einschränkenden Aspekten ein Kosmetikprodukt sein. Das Kosmetikprodukt kann solche sein, die in anderen Abschnitten dieser Beschreibung beschrieben oder Fachleuten bekannt sind. Nicht-einschränkende Beispiele für Produkte beinhalten ein Feuchtigkeitsprodukt, eine Creme, eine Lotion, ein Produkt, um die Haut geschmeidig zu machen, ein Gel, ein Waschpräparat, eine Grundierung, eine Nachtcreme, einen Lippenstift, einen Reiniger, ein Reinigungsbalsam, ein Tonisierungsmittel, ein Sonnenschutzmittel, eine Maske, ein gegen Alterung wirkendes Produkt („Anti-Aging-Produkt“), ein Deodorant, ein Antiperspirant, ein Parfüm, ein Eau de Cologne, usw.
Es werden auch die folgenden Ausführungsformen 1 bis 40 der vorliegenden Erfindung offenbart. Ausführungsform 1 ist ein Verfahren zum Reduzieren der Muskelkontraktion eines Gesichtsmuskels bei einer Person, wobei das Verfahren topisches Auftragen einer Zusammensetzung auf Gesichtshaut umfasst, wobei die Zusammensetzung (a) eine effektive Menge an Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, (b) eine effektive Menge an Lavendula stoechas-Extrakt und (c) eine effektive Menge an Acmella oleracea-Extrakt umfasst, wobei topische Auftragung der Zusammensetzung auf die Gesichtshaut Muskelkontraktion des Gesichtsmuskels reduziert. Ausführungsform 2 ist das Verfahren von Anspruch 1, bei dem die Zusammensetzung auf eine feine Linie oder Falte aufgetragen wird, und wobei das Erscheinungsbild der feinen Linie oder Falte nach der topischen Auftragung reduziert wird. Ausführungsform 3 ist das Verfahren nach Anspruch 2, bei dem die feine Linie oder Falte eine Rhytide ist, und wobei die Reduktion der Muskelkontraktion des Gesichtsmuskels das Erscheinungsbild der Rhytide reduziert. Ausführungsform 4 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 1 bis 3, bei dem der Gesichtsmuskel ein Muskel des Glabellarkomplexes, ein Orbicularis oculi-Muskel, ein Depressormuskel oder ein Frontalismuskel oder jegliche Kombination davon ist. Ausführungsform 5 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 1 bis 4, bei dem jeder der Extrakte individuell ein wässriger Extrakt, ein Alkoholextrakt, ein Polyolextrakt oder eine Kombination davon ist. Ausführungsform 6 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 1 bis 5, bei dem der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt mit einer fließfähigen Extraktionslösungsmittelmischung erhalten wird, die Betain, Milchsäure und Wasser umfasst, der Lavendula stoechas-Extrakt ein Extrakt aus Blüte/Blatt/Stiel von Lavendula stoechas ist, der mit einem überkritischen Kohlendioxid (CO₂)-Extraktionsmittel erhalten wird, und der Acmella oleracea-Extrakt mit einer fließfähigen Extraktionslösungsmittelmischung erhalten wird, die Wasser, Ethanol und 1,3-Propandiol umfasst. Ausführungsform 7 ist das Verfahren nach einer der Ausführungsformen 1 oder 6, wobei die Zusammensetzung umfasst: 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Lavendula stoechas-Extrakt und 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Acmella oleracea-Extrakt. Ausführungsform 8 ist das Verfahren von einer beliebigen der Ausführungsformen 1 bis 7, bei dem der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel reduziert und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert, der Lavendula stoechas-Extrakt ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel reduziert und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert, und der Acmella oleracea-Extrakt ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel reduziert und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert. Ausführungsform 9 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 1 bis 8, bei der Acmella oleracea-Extrakt die Kollagenproduktion und Lamininproduktion in der Haut stimuliert. Ausführungsform 10 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 1 bis 9, bei dem Rosmarinus officinalis-Blattextrakt die Produktion der Matrix-Metalloproteinasen 1, 3 oder 9 in der Haut reduziert. Ausführungsform 11 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 1 bis 10, bei dem die Gesichtshaut Stirnhaut, Wangenhaut, Haut des Kinns oder Haut im Augenbereich ist. Ausführungsform 12 ist das Verfahren von Ausführungsform 11, bei dem die Haut Stirnhaut ist. Ausführungsform 13 ist das Verfahren von Ausführungsform 11, bei dem die Haut Haut des Augenbereichs ist. Ausführungsform 14 ist das Verfahren nach einer der Ausführungsformen 1 bis 13, bei dem die Zusammensetzung eine Emulsion ist. Ausführungsform 15 ist das Verfahren von Ausführungsform 14, bei dem die Emulsion eine Öl-in-Wasser-Emulsion ist. Ausführungsform 16 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 1 bis 13, bei dem die Zusammensetzung ein Gel ist. Ausführungsform 17 ist ein Verfahren zum Reduzieren des Erscheinungsbilds einer feinen Linie oder Falte auf der Haut einer Person, bei dem topisch auf die feine Linie oder Falte eine Zusammensetzung aufgetragen wird, die (a) eine effektive Menge an Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, (b) eine effektive Menge an Lavendula stoechas-Extrakt und (c) eine effektive Menge an Acmella oleracea-Extrakt umfasst, wobei topische Auftragung das Erscheinungsbild der feinen Linie oder Falte reduziert. Ausführungsform 18 ist das Verfahren von Ausführungsform 17, bei dem die Zusammensetzung Muskelkontraktion eines Muskels reduziert, der das Erscheinungsbild der feinen Linie oder Falte bewirkt, wenn der Muskel kontrahiert wird. Ausführungsform 19 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 17 bis 18, bei dem der Gesichtsmuskel ein Muskel des Glabellarkomplexes, ein Orbicularis oculi-Muskel, ein Depressormuskel oder ein Frontalismuskel oder jegliche Kombination davon ist. Ausführungsform 20 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 17 bis 19, bei dem die feine Linie oder Falte eine Rhytide ist. Ausführungsform 21 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 17 bis 20, bei dem jeder der Extrakte individuell ein wässriger Extrakt, ein Alkoholextrakt, ein Polyolextrakt oder eine Kombination davon ist. Ausführungsform 22 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 17 bis 21, bei dem der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt mit einer fließfähigen Extraktionslösungsmittelmischung erhalten wird, die Betain, Milchsäure und Wasser umfasst, der Lavendula stoechas-Extrakt ein Extrakt aus Blüte/Blatt/Stiel von Lavendula stoechas ist, der mit einem überkritischen Kohlendioxid (CO₂)-Extraktionsmittel erhalten wird, und der Acmella oleracea-Extrakt mit einer fließfähigen Extraktionslösungsmittelmischung erhalten wird, die Wasser, Ethanol und 1,3-Propandiol umfasst. Ausführungsform 23 ist das Verfahren nach einer der Ausführungsformen 17 oder 22, wobei die Zusammensetzung umfasst: 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Lavendula stoechas-Extrakt und 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Acmella oleracea-Extrakt. Ausführungsform 24 ist das Verfahren von einer beliebigen der Ausführungsformen 17 bis 23, bei dem der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel reduziert und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert, der Lavendula stoechas-Extrakt ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel reduziert und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert, und der Acmella oleracea-Extrakt ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel reduziert und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert. Ausführungsform 25 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 17 bis 24, bei der Acmella oleracea-Extrakt die Kollagenproduktion und Lamininproduktion in der Haut stimuliert. Ausführungsform 26 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 17 bis 25, bei der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt die Produktion der Matrix-Metalloproteinasen 1, 3 oder 9 in der Haut reduziert. Ausführungsform 27 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 17 bis 26, bei dem die Haut der Person Gesichtshaut ist, vorzugsweise Stirnhaut, Wangenhaut, Haut des Kinns oder Haut im Augenbereich. Ausführungsform 28 ist das Verfahren von Ausführungsform 27, bei dem die Haut Stirnhaut ist. Ausführungsform 29 ist das Verfahren von Ausführungsform 27, bei dem die Haut Haut des Augenbereichs ist. Ausführungsform 30 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 17 bis 29, bei dem die Zusammensetzung eine Emulsion ist. Ausführungsform 31 ist das Verfahren von Ausführungsform 30, bei dem die Emulsion eine Öl-in-Wasser-Emulsion ist. Ausführungsform 32 ist das Verfahren von einer der Ausführungsformen 17 bis 31, bei dem die Zusammensetzung ein Gel ist. Ausführungsform 33 ist eine topische Hautzusammensetzung, die (a) eine effektive Menge an Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, (b) eine effektive Menge an Lavendula stoechas-Extrakt und (c) eine effektive Menge an Acmella oleracea-Extrakt umfasst, wobei die topische Hautzusammensetzung in der Lage ist, das Erscheinungsbild einer feinen Linie oder Falte auf der Haut einer Person zu reduzieren, und/oder in der Lage ist, Muskelkontraktion eines Gesichtsmuskels bei einer Person zu reduzieren. Ausführungsform 34 ist die Zusammensetzung von Ausführungsform 33, bei der jeder der Extrakte individuell ein wässriger Extrakt, ein Alkoholextrakt, ein Polyolextrakt oder eine Kombination davon ist. Ausführungsform 35 ist die Zusammensetzung von einer der Ausführungsformen 33 bis 34, bei der der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt mit einer fließfähigen Extraktionslösungsmittelmischung erhalten wird, die Betain, Milchsäure und Wasser umfasst, der Lavendula stoechas-Extrakt ein Extrakt aus Blüte/Blatt/Stiel von Lavendula stoechas ist, der mit einem überkritischen Kohlendioxid (CO₂)-Extraktionsmittel erhalten wird, und der Acmella oleracea-Extrakt mit einer fließfähigen Extraktionslösungsmittelmischung erhalten wird, die Wasser, Ethanol und 1,3-Propandiol umfasst. Ausführungsform 36 ist die Zusammensetzung von einer der Ausführungsformen 33 bis 35, die 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Lavendula stoechas-Extrakt und 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Acmella oleracea-Extrakt umfasst. Ausführungsform 37 ist die Zusammensetzung von einer der Ausführungsformen 33 bis 36, bei der der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt in der Lage ist, ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel zu reduzieren, und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert, der Lavendula stoechas-Extrakt in der Lage ist, ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel zu reduzieren, und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert, und der Acmella oleracea-Extrakt in der Lage ist, ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel zu reduzieren, und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert. Ausführungsform 38 ist die Zusammensetzung von einer der Ausführungsformen 33 bis 37, bei der der Acmella oleracea-Extrakt in der Lage ist, die Kollagenproduktion und Lamininproduktion in der Haut zu stimulieren. Ausführungsform 39 ist die Zusammensetzung von einer der Ausführungsformen 33 bis 38, bei der der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt in der Lage ist, die Produktion der Matrix-Metalloproteinasen 1, 3 oder 9 in der Haut zu reduzieren. Ausführungsform 40 ist die Zusammensetzung von einer der Ausführungsformen 33 bis 39, bei der die Zusammensetzung eine Emulsion ist, vorzugsweise eine Öl-in-Wasser-Emulsion, oder ein Gel.
„Topische Auftragung“ bedeutet, eine Zusammensetzung auf die Oberfläche von Lippen oder keratinösem Gewebe aufzutragen oder auszubreiten. „Topische Hautzusammensetzung“ schließt Zusammensetzungen ein, die für die topische Auftragung auf Haut und/oder keratinöses Gewebe geeignet sind. Derartige Zusammensetzungen sind typischerweise dermatologisch annehmbar, als dass sie keine ungeeignete Toxizität, Unverträglichkeit, Instabilität, allergische Reaktion und dergleichen aufweisen, wenn sie auf die Haut und/oder keratinöses Gewebe aufgetragen werden. Topische Hautpflegezusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können eine ausgewählte Viskosität aufweisen, um signifikantes Tropfen oder Zusammenfließen („Pooling“) nach Auftragung auf die Haut und/oder das keratinöse Gewebe zu vermeiden.
„Keratinöses Gewebe‟ schließt Keratin enthaltende Schichten ein, die als die äußerste Schutzschicht von Säugern angeordnet sind, wozu ohne Einschränkungen Lippen, Haut, Haar und Nägel gehören.
Der Begriff „etwa“ oder „ungefähr“ ist als nahe an einer Angabe liegend definiert, wie es ein Fachmann verstehen würde. In einer nicht-einschränkenden Ausführungsform sind die Begriffe als innerhalb von 10 %, vorzugsweise innerhalb von 5 %, bevorzugter innerhalb von 1 % und am meisten bevorzugt innerhalb von 0,5 % liegend definiert.
Der Begriff „im Wesentlichen“ und seine Varianten beziehen sich auf Bereiche innerhalb von 10 %, innerhalb von 5 %, innerhalb von 1 % oder innerhalb von 0,5 %.
Die Begriffe „Inhibieren“ oder „Reduzieren“ oder jegliche Variation dieser Begriffe schließt jede messbare Abnahme oder vollständige Inhibierung ein, um ein gewünschtes Ergebnis zu erreichen. Die Begriffe „Fördern“ oder „Erhöhen“ oder jede Variante dieser Begriffe können einen beliebigen messbaren Anstieg oder eine messbare Produktion eines Proteins oder Moleküls einschließen (z. B. Matrixproteine, wie Fibronectin, Laminin, Kollagen oder Elastin, oder von Molekülen, wie Hyaluronsäure), um ein gewünschtes Ergebnis zu erreichen.
Der Begriff „effektiv“ bedeutet in dem Sinne, wie der Begriff in der Beschreibung und/oder den Ansprüchen verwendet wird, angemessen, um ein gewünschtes, erwartetes oder geplantes Ergebnis zu erhalten.
Die Verwendung des Worts „ein“ oder „eine/eines/einer“ im Zusammenhang mit den Begriffen „umfassend“, „einschließend“, „aufweisend“ oder „enthaltend“ oder jeglicher Variante dieser Begriffe in den Ansprüchen und/oder der Beschreibung kann „ein (1)“ bedeuten, ist jedoch auch konsistent mit der Bedeutung von „einem oder mehreren“, „mindestens eins“ und „ein oder mehr als ein“.
Die Begriffe „Gew.%“, „Vol.%“ oder „Mol%“ beziehen sich auf einen Gewichts-, Volumen- oder molaren Prozentsatz einer Komponente, bezogen auf das Gesamtgewicht beziehungsweise das Gesamtvolumen oder die Gesamtmol des Materials, welches die Komponente einschließt. In einem nicht einschränkenden Beispiel sind 10 Gramm der Komponente in 100 Gramm des Materials 10 Gew.% der Komponente. Der Begriff „% Gew./Gew.“ hat die gleiche Bedeutung wie Gew.%.
Die Worte „umfassend“ (und jegliche Formen davon, wie „umfassen“, und „umfasst“), „aufweisend“ (und jegliche Form davon, wie „aufweisen“ oder „aufweist“), „einschließlich“ (und jegliche Form davon, wie „einschließen“ oder „einschließt“) oder „enthaltend“ (und jegliche Form davon, wie „enthalten“ und „enthält“) sind in dieser Beschreibung und den Ansprüchen einschließlich oder offen und schließen zusätzliche, nicht genannte Elemente oder Verfahrensschritte nicht aus.
Die Zusammensetzungen und Verfahren zu deren Verwendung können beliebige der in der Beschreibung offenbarten Bestandteile oder Stufen „umfassen“, „im Wesentlichen daraus bestehen“ oder „daraus bestehen“. In Bezug auf die Formulierung „im Wesentlichen bestehend aus“ ist eine grundlegende und neue Eigenschaft der Zusammensetzungen und Verfahren der vorliegenden Erfindung die Fähigkeit, das Erscheinungsbild von feinen Linien oder Falten zu reduzieren und/oder Muskelkontraktion zu reduzieren, vorzugsweise Kontraktion von Gesichtsmuskeln.
Andere Aufgaben, Merkmale und Vorteile der vorliegenden Erfindung ergeben sich aus der folgenden detaillierten Beschreibung. Es sei jedoch darauf hingewiesen, dass die detaillierte Beschreibung und die Beispiele, obgleich sie spezielle Ausführungsformen der Erfindung darstellen, nur zur Veranschaulichung gegeben werden. Es ist darüber hinaus vorgesehen, dass sich dem Fachmann aus dieser detaillierten Beschreibung Änderungen und Modifikationen innerhalb der Idee und des Umfangs der Erfindung ergeben.
Figurenliste
Die folgenden Zeichnungen sind Teil der vorliegenden Beschreibung und sind eingeschlossen, um bestimmte Aspekte der vorliegenden Erfindung näher zu demonstrieren. Die Erfindung wird unter Bezugnahme auf eine oder mehrere dieser Zeichnungen in Kombination mit der detaillierten Beschreibung von hier präsentierten Ausführungsformen der Beschreibung möglicherweise besser verständlich.

1 stellt Daten bereit, die die mittlere % Verbesserung gegenüber der Basislinie (Woche 0) in dem EMG-Ansprechbereich (mW˙s) für Muskelkontraktion in der Glabellaregion für eine Gruppe von Leuten illustrieren, die eine Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung mit einer Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt verwenden. Die mittleren % Verbesserung illustrieren reduzierte Muskelkontraktion in der Glabellaregion im Zeitverlauf (2 Wochen, 4 Wochen und 8 Wochen). „*“ zeigt p < 0,05 statistisch signifikante Verbesserung, verglichen mit der Basislinie (0 Wochen).
2 stellt Daten bereit, die die % der Leute illustrieren, die Verbesserung gegenüber der Basislinie (Woche 0) in dem EMG-Ansprechbereich (mW˙s) für Muskelkontraktion in der Glabellaregion zeigen, die eine Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung mit einer Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt verwenden. Die % der Leute, die Verbesserung zeigen, illustrieren reduzierte Muskelkontraktion in der Glabellaregion im Zeitverlauf (2 Wochen, 4 Wochen und 8 Wochen).
3 stellt Daten bereit, die die mittlere % Verbesserung gegenüber der Basislinie (Woche 0) für ein reduziertes Erscheinungsbild von feinen Linien und Falten für eine Gruppe von Leuten illustrieren, die eine Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung mit einer Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt verwenden. Die mittleren % Verbesserung illustrieren reduziertes Erscheinungsbild von feinen Linien und Falten in dem behandelten Bereich im Zeitverlauf (2 Wochen, 4 Wochen und 8 Wochen). „*“ zeigt p < 0,05 statistisch signifikante Verbesserung, verglichen mit der Basislinie (0 Wochen).
4 stellt Daten bereit, die die % der Leute illustrieren, die Verbesserung gegenüber der Basislinie (Woche 0) in der Reduktion von feinen Linien und Falten für eine Gruppe von Leuten zeigen, die eine Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung mit einer Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt verwenden. Die % der Leute, die Verbesserung zeigen, illustrieren reduziertes Erscheinungsbild von feinen Linien und Falten in dem behandelten Bereich im Zeitverlauf (2 Wochen, 4 Wochen und 8 Wochen).
5 stellt Daten bereit, die die mittlere % Verbesserung gegenüber der Basislinie (Woche 0) in dem EMG-Ansprechbereich (mW˙s) für Muskelkontraktion in der Glabellaregion für eine Gruppe von Leuten, die eine Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung mit einer Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt verwenden und die Zusammensetzung mit einem Mikroroller auftragen, gegenüber dem Auftragen der Zusammensetzung ohne einen Mikroroller illustrieren. Die mittleren % Verbesserung illustrieren eine raschere und stärkere Reduktion der Kontraktion des Gesichtsmuskels nach 2, 4 und 8 Wochen im Vergleich mit der Basislinie, wenn bei der Auftragung der Zusammensetzung ein Mikroroller verwendet wird. „*“ zeigt p < 0,05 statistisch signifikante Verbesserung, verglichen mit der Basislinie (0 Wochen).
6 stellt Daten bereit, die die % der Leute illustrieren, die Verbesserung gegenüber der Basislinie (Woche 0) in dem EMG-Ansprechbereich (mW.s) für Muskelkontraktion in der Glabellaregion zeigen, die eine Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung mit einer Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt verwenden. Die % der Leute, die Verbesserung zeigen, illustrieren eine raschere und stärkere Reduktion der Kontraktion des Gesichtsmuskels nach 2, 4 und 8 Wochen in der Glabellaregion, wenn bei der Auftragung der Zusammensetzung ein Mikroroller verwendet wird.
7 stellt Daten bereit, die die mittlere % Verbesserung gegenüber der Basislinie (Woche 0) für reduziertes Erscheinungsbild von feinen Linien und Falten für eine Gruppe von Leuten illustrieren, die eine Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung mit einer Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt verwenden. Die mittlere % Verbesserung illustriert reduziertes Erscheinungsbild von feinen Linien und Falten in dem behandelten Bereich im Zeitverlauf (2 Wochen, 4 Wochen und 8 Wochen), wenn ein Mikroroller bei der Auftragung der Zusammensetzung verwendet wird, und ohne Verwenden eines Mikrorollers bei der Auftragung der Zusammensetzung. „*“ zeigt p < 0,05 statistisch signifikante Verbesserung, verglichen mit der Basislinie (0 Wochen).
8 stellt Daten bereit, die die % der Leute illustrieren, die Verbesserung gegenüber der Basislinie (Woche 0) in der Reduktion von feinen Linien und Falten für eine Gruppe von Leuten zeigen, die eine Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung mit einer Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt verwenden. Die % der Leute, die Verbesserung zeigen, illustrieren reduziertes Erscheinungsbild von feinen Linien und Falten in dem behandelten Bereich im Zeitverlauf (2 Wochen, 4 Wochen und 8 Wochen, wenn ein Mikroroller bei der Auftragung der Zusammensetzung verwendet wird, und ohne Verwenden eines Mikrorollers bei der Auftragung der Zusammensetzung.
9 stellt Daten bereit, die die mittlere % Verbesserung gegenüber der Basislinie (Woche 0) für Hauttextur/Rauheit für eine Gruppe von Leuten illustrieren, die eine Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung mit einer Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt verwenden. Die mittlere % Verbesserung illustriert verbesserte Hauttextur/Rauheit in dem behandelten Bereich im Zeitverlauf (2 Wochen, 4 Wochen und 8 Wochen), wenn ein Mikroroller bei der Auftragung der Zusammensetzung verwendet wird, und ohne Verwenden eines Mikrorollers bei der Auftragung der Zusammensetzung. „*“ zeigt p < 0,05 statistisch signifikante Verbesserung, verglichen mit der Basislinie (0 Wochen).
10 stellt Daten bereit, die die % der Leute illustrieren, die Verbesserung gegenüber der Basislinie (Woche 0) in der Hauttextur/Rauheit für eine Gruppe von Leuten illustrieren, die eine Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung mit einer Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt verwenden. Die % der Leute, die Verbesserung zeigen, illustrieren verbesserte Hauttextur/Rauheit in dem behandelten Bereich im Zeitverlauf (2 Wochen, 4 Wochen und 8 Wochen), wenn ein Mikroroller bei der Auftragung der Zusammensetzung verwendet wird, und ohne Verwenden eines Mikrorollers bei der Auftragung der Zusammensetzung.

BESCHREIBUNG BEISPIELHAFTER AUSFÜHRUNGSFORMEN
Es ist eine Lösung für mindestens einige der Probleme im Zusammenhang mit aktuellen Verfahren gefunden worden, die zur Behandlung feiner Linien oder Falten bei Haut verwendet werden, einschließlich sowohl statischer als auch dynamischer feiner Linien oder Falten. Feine Linien werden in der Regel als kleiner und flacher charakterisiert (z. B. allgemein weniger als 2 Millimeter tief), verglichen mit Falten, die tiefere Linien aufweisen (z. B. allgemein zwei oder mehr Millimeter tief). Statische feine Linien oder Falten stehen in der Regel im Zusammenhang mit feinen Linien oder Falten, die auf Haut vorhanden sind, die entspannt ist/sich nicht bewegt. Dynamische feine Linien oder Falten erscheinen im Vergleich dazu auf Haut mit Hautbewegung im Zusammenhang mit Muskelkontraktion. Die Lösung basiert auf der Verwendung einer Kombination von mindestens zwei von und vorzugsweise allen drei von Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt in topischen Hautzusammensetzungen, um Muskelkontraktion zu reduzieren, vorzugsweise Muskelkontraktion in Gesichtsmuskeln zu reduzieren. Es wird angenommen, dass die Kombination dieser Bestandteile dazu beitragen kann, das Erscheinungsbild von statischen und/oder dynamischen feinen Linien oder Falten auf mindestens drei Ebenen zu reduzieren: (1) Reduzieren von Muskelkontraktion in Fällen, in denen Muskelkontraktion die Anwesenheit feiner Linien oder Falten bilden kann (z. B. dynamische feine Linien oder Falten), (2) Erhöhen der Kollagenproduktion in Haut (z. B. in Hautzellen, wie Keratinozyten und/oder Fibroblasten), wodurch vollere und straffere Haut möglich wird, die zu reduziertem Erscheinungsbild von statischen und/oder dynamischen feinen Linien oder Falten führen kann, (3) Herabsetzen der Produktion oder Aktivität von Matrix-Metalloproteinase (MMP) (die Begriffe „Produktion“ und „Aktivität“ können hier in dieser Beschreibung austauschbar verwendet werden) in Haut, wie Produktion oder Aktivität von MMP-1, MMP-3 und/oder MMP-9, um weiter dazu beizutragen, das Erscheinungsbild von statischen und/oder dynamischen feinen Linien oder Falten zu reduzieren-MMP -Enzyme können extrazelluläre Matrixkomponenten abbauen oder zerlegen, wie Kollagen, Fibronectin, Laminin, Proteoglycane und Vitronectin, die zur Bildung feiner Linien oder Falten führen können, und (4) Erhöhen der Lamininproduktion in der Haut (z. B. Hautzellen wie Keratinozyten und/oder Fibroblasten)-Laminin ist ein strukturelles Glykoprotein, das sich in der DEJ befindet. Laminin wird als der Kleber angesehen, der die Zellen zusammenhält, und wird von dermalen Fibroblasten sekretiert, um die intra- und interzelluläre Adhäsion der epidermalen Zellen an der DEJ zu unterstützen.
Diese und andere nicht-einschränkende Aspekte der vorliegenden Erfindung werden in den folgenden Abschnitten beschrieben.
Wirkstoffe
Die vorliegende Erfindung basiert auf einer Feststellung, dass eine Kombination von Wirkbestandteilen - Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt -verwendet werden kann, um Muskelkontraktion eines Gesichtsmuskels zu reduzieren, feine Linien und Falten im Gesicht zu reduzieren und/oder zu verhindern, dynamische Gesichtsfalten und Stirnfalten zu reduzieren, die durch wiederholte Gesichtsmuskelkontraktion (z. B. Rhytiden) verursacht werden, um die Kollagenproduktion zu erhöhen, Matrix-Metalloproteinase zu reduzieren, einschließlich einer oder mehreren der Matrix-Metalloproteinase 1, Matrix-Metalloproteinase 3 und Matrix-Metalloproteinase 9, die Haut zu straffen und/oder das Erscheinungsbild von loser, schlaffer und welker Haut zu reduzieren.
Rosmarinus officinali-Blattextrakt ist ein Extrakt aus dem Blatt von Rosmarinus officinealis. Rosmarinus officinalis ist in der Mittelmeerregion beheimatet und ist ein holziges mehrjähriges Kraut mit duftenden, immergrünen, nadelartigen Blättern und weißen, rosa, violetten oder blauen Blüten. Es ist ein Busch, der bis 1,5 Meter hoch werden kann, mit Blättern, die etwa 2 bis 4 cm lang sind und grün (Oberseite) und weiß (Unterseite) gefärbt sind. In einem bevorzugten Fall kann der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt aus dem Blatt von Rosmarinus officinalis erhalten werden. Das Blatt kann einem Extraktionsprozess mit Eutektigenese unter Verwendung einer fließfähigen Extraktionsmischung unterzogen werden, die Betain oder hydratisiertes Betain, eine Donorverbindung für Wasserstoffbrückenbindungen (z. B. Polyole, organische Säuren, usw.) und Wasser umfasst. Der Blattanteil kann insbesondere zerkleinert oder mazeriert werden und dann der genannten eutektischen fließfähigen Extraktionsmischung ausgesetzt werden, um einen eutektischen Extrakt zu erhalten Der eutektische Extrakt kann dann in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen verwendet werden. Der Donor der Wasserstoffbrückenbindung ist in einigen bevorzugten Fällen eine organische Säure, vorzugsweise Milchsäure. Eutektigenese nutzt eutektische Lösungsmittel, die Mischungen von Verbindungen sind, die niedrigere Schmelzpunkte als jene ihrer Bestandteile für sich genommen aufweisen. Rosmarinus officinalis ist in einigen Fällen im Handel erhältlich. Rosmarinus officinalis kann in einigen Fällen von Naturex (Frankreich) unter der Handelsbezeichnung ROSEMARY EUTECTYS BLA™ erhalten werden. Es wurde im Kontext der vorliegenden Erfindung gefunden, dass Rosmarinus officinalis-Blattextrakt Kontraktion von Myotubuli reduzieren oder inhibieren kann, indem ein Einfließen von Calcium in die Myotubuli reduziert oder inhibiert wird und das Auftreten eines Aktionspotentials reduziert oder verhindert wird. Es wurde auch gefunden, dass Rosmarinus officinalis-Blattextrakt die Produktion oder Aktivität von MMP-1, MMP-3 und MMP-3 in Hautzellen inhibieren oder reduzieren kann (z. B. Keratinozyten oder humane Dermalfibroblasten).
Lavendula stoechas-Extrakt ist ein Extrakt aus der Pflanze Lavendula stoechas. Lavendula stoechas ist in der Mittelmeerregion heimisch und ist ein immergrüner Busch, der etwa 30 bis 100 cm groß ist, mit gräulichen und filzigen Blättern, die etwa 1 bis 4 cm lang sind. Der Lavendula stoechas-Extrakt ist in einem bevorzugten Fall aus einer Kombination der Blüten-, Blatt- und Stielanteile von Lavendula stoechas. Diese Anteile können kombiniert und dann zerkleinert oder mazeriert werden, oder zerkleinert oder mazeriert und dann kombiniert. Das resultierende zerkleinerte oder mazerierte Blüten-/Blatt-/Stielmaterial kann dann einem überkritischen Extraktionsprozess unter Verwendung von Kohlendioxid (CO₂) als Lösungsmittel unterzogen werden. Der überkritische CO₂-Extrakt von Blüte/Blatt/Stiel von Lavendula stoechas kann dann in den Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung verwendet werden. Der überkritische CO₂-Extrakt von Blüte/Blatt/Stiel von Lavendula stoechas kann auch mit Capryl-/Caprintriglyceriden gemischt und dann in den Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung verwendet werden. In einigen Fällen ist Lavendula stoechas-Extrakt im Handel erhältlich. Lavendula stoechas kann in einigen Fällen von Barnet Products LLC (Englewood Cliffs, New Jersey (USA)) unter der Handelsbezeichnung STOCHEY'S erhalten werden. Es ist im Kontext der vorliegenden Erfindung gefunden worden, dass Lavendula stoechas-Extrakt die Kontraktion von Myotubuli reduzieren oder inhibieren kann, indem ein Einfließen von Calcium in die Myotubuli reduziert oder inhibiert wird und das Auftreten eines Aktionspotentials reduziert oder verhindert wird.
Acmella oleracea-Extrakt ist ein Extrakt aus der Pflanze Acmella oleracea. Acmella oleracea findet sich in Lateinamerika, Madagaskar und den Maskarenen. Der Acmella oleracea-Extrakt ist in einem bevorzugten Fall aus einer Kombination der Blüten-, Blatt- und Stielanteile von Acmella oleracea. Diese Anteile können kombiniert und dann zerkleinert oder mazeriert werden, oder zerkleinert oder mazeriert und dann kombiniert. Das resultierende zerkleinerte oder mazerierte Blüten/Blatt/Stielmaterial kann dann einem hydro-alkoholischen (vorzugsweise hydro-ethanolischen) Extraktionsprozess oder einem hydroalkoholischen-Polyolextraktionsprozess unterzogen werden. Das Polyol kann in bevorzugten Fällen 1,3-Propandiol sein. Der Alkohol kann aus dem resultierenden Extrakt entfernt werden. Der Acmella oleracea-Extrakt kann dann in den Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung verwendet werden. Der Blüten/Blatt/Stielextrakt aus Acmella oleracea kann in einem bevorzugten Fall aus einer Hydro-Ethanol-1,3-Propandiol-Lösungsmittelmischung erhalten werden. Der resultierende Extrakt kann dann in den Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung verwendet werden oder kann des Weiteren verarbeitet werden, um das Ethanol zu entfernen, und kann dann in den Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung verwendet werden. Das Extraktionslösungsmittel kann alternativ eine Kombination von Wasser und Polyol sein, vorzugsweise 1,3-Propandiol, ohne einen Alkohol. Die Mengen an Wasser, Alkohol und/oder Polyol, die in der Reaktionsmischung vorhanden sind, können nach Wunsch modifiziert werden. In einigen Fällen ist Acmella oleracea-Extrakt im Handel erhältlich. In einigen Fällen kann Acmella oleracea-Extrakt von Gattefosse (Frankreich) unter der Handelsbezeichnung GATULINE® EXPRESSION AF erhalten werden. Es wurde im Kontext der vorliegenden Erfindung gefunden, dass Acmella oleracea-Extrakt Kontraktion von Myotubuli reduzieren oder inhibieren kann, indem ein Einfließen von Calcium in die Myotubuli reduziert oder inhibiert wird und das Auftreten eines Aktionspotentials reduziert oder verhindert wird. Es wurde auch gefunden, dass Acmella oleracea-Extrakt die Produktion von sowohl Kollagen als auch Lamin in Hautzellen (z. B. Keratinozyten oder humanen Dermalfibroblasten) erhöhen kann.
Die hier beschriebenen Extrakte können Extrakte sein, die durch in der Technik bekannte Extraktionsverfahren und Kombinationen davon hergestellt worden sind. Nicht-einschränkende Beispiele für Extraktionsmethoden schließen die Verwendung von Flüssig-Flüssig-Extraktion, Festphasenextraktion, wässriger Extraktion, Ethylacetat, Alkohol, Aceton, Öl, überkritischem Kohlendioxid, Wärme, Druck, Druckabfallextraktion, Ultraschallextraktion, usw. ein. Die Extrakte können eine Flüssigkeit, ein Feststoff, getrocknete Flüssigkeit, resuspendierter Feststoff, usw. sein. Jeder der Extrakte kann in bestimmten Fällen hergestellt werden durch: (i) Erhalten des gewünschten Pflanzenteils (z. B. Blatt, Stiel, Rinde, Blüte, Samen, usw.) oder der gesamten Pflanze, (ii) Zerkleinern oder Mazerieren des Pflanzenteils oder der gesamten Pflanze, (iii) gegebenenfalls Trocknen des zerkleinerten mazerierten Pflanzenteils oder der gesamten Pflanze, (iv) Aussetzen der zerkleinerten oder mazerierten Pflanze oder des Pflanzenteils einem Extraktionslösungsmittel für einen ausreichenden Zeitraum (z. B. 1, 5, 10, 30 oder 45 Minuten oder mehr, oder 1, 6, 12 oder 18 Stunden oder mehr, oder 2, 3, 4, 5, 6 Tage oder mehr) bei Raumtemperatur (z. B. 20 bis 30 °C) oder Wärme (z. B. mehr als 30 °C oder darüber, bevorzugt 30 °C bis unter dem Siedepunkt des Lösungsmittels), (v) Auffangen der Lösung, die das Extraktionslösungsmittel und das extrahierte Pflanzenmaterial umfasst (z. B. flüssiger Extrakt) und (vi) gegebenenfalls Entfernen des Extraktionslösungsmittels, um einen getrockneten Pflanzenextrakt zu erhalten, und (vii) gegebenenfalls Rekonstituieren des getrockneten Pflanzenextrakts in einem flüssigen Träger (z. B. Wasser, Alkohol, Diol, usw.). Im Kontext der vorliegenden Erfindung kommt es auch in Frage, das Pflanzenmaterial aus Rosmarinus officinalis-Blatt, Lavendula stoechas und/oder Acmella oleracea direkt zu verwenden, ohne das Pflanzenmaterial einer Extraktionstechnik zu unterziehen.
Nicht-einschränkende Beispiele für Gesichtsmuskeln, deren Kontraktion die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung abschwächen können, schließen Gesichtsmuskeln des Glabellarkomplexes, Orbicularis-Muskeln, Frontalismuskeln oder Depressor anguli oris-Muskeln oder Kombinationen davon ein. Die Muskeln des Glabellarkomplexes können für die Bildung von Runzelfalten verantwortlich sein, die die Muskeln von Corrugator supercilii, Depressor supercilii, Procerus und Orbicularis oculi para frontalis einschließen. Der Corrugator supercilii liegt unter dem Frontalis-Muskel und wirkt so, dass die Braue nach medial und abwärts gezogen wird, während der kleinere Depressor supercilii unter dem Corrugator-Muskel lokalisiert werden kann und so wirkt, dass der mediale Brauenanteil nach unten gezogen wird. Der Procerus befindet sich zwischen den Augenbrauen und wirkt auch zur Absenkung der glabellaren medialen Brauenregion. Der Depressorfunktion des Glabellarkomplexes wirkt der Frontalis-Muskel entgegen. Dieser Muskel verläuft zusammen mit den superioren Anteilen des Glabellarkomplexes, aus denen er sich unterhalb der Stirn aufwärts erstreckt. Der Frontalis-Muskel ist ein Muskel der Stirn und steht im Zusammenhang mit dem Hochziehen der Braue. Der Orbicularis-Muskel ist ein Muskel, der die Augenlider schließt. Der Depressor anguli oris-Muskel ist ein Gesichtsmuskel, der mit Stirnrunzeln in Zusammenhang steht. In einem bevorzugten Aspekt wird die kontraktile Aktivität gemessen.
Mengen der Bestandteile
Es ist vorgesehen, dass die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen jegliche Menge der in dieser Beschreibung erörterten Bestandteile einschließen können. Die Zusammensetzungen können auch jegliche Anzahl an Kombinationen von zusätzlichen Bestandteilen einschließen, die in dieser Beschreibung beschrieben sind (z. B. Pigmente oder zusätzliche kosmetische oder pharmazeutische Bestandteile). Die Konzentrationen beliebiger Bestandteile innerhalb der Zusammensetzungen können variieren. Die Zusammensetzung kann in nicht-einschränkenden Ausführungsformen beispielsweise in fertiger Form mindestens etwa 0,0001 %, 0,0002 %, 0,0003 %, 0,0004 %, 0,0005 %, 0,0006 %, 0,0007 %, 0,0008 %, 0,0009 %, 0,0010 %, 0,0011 %, 0,0012 %, 0,0013 %, 0,0014 %, 0,0015 %, 0,0016 %, 0,0017 %, 0,0018 %, 0,0019 %, 0,0020 %, 0,0021 %, 0,0022 %, 0,0023 %, 0,0024 %, 0,0025 %, 0,0026 %, 0,0027 %, 0,0028 %, 0,0029 %, 0,0030 %, 0,0031 %, 0,0032 %, 0,0033 %, 0,0034 %, 0,0035 %, 0,0036 %, 0,0037 %, 0,0038 %, 0,0039 %, 0,0040 %, 0,0041 %, 0,0042 %, 0,0043 %, 0,0044 %, 0,0045 %, 0,0046 %, 0,0047 %, 0,0048 %, 0,0049 %, 0,0050 %, 0,0051 %, 0,0052 %, 0,0053 %, 0,0054 %, 0,0055 %, 0,0056 %, 0,0057 %, 0,0058 %, 0,0059 %, 0,0060 %, 0,0061 %, 0,0062 %, 0,0063 %, 0,0064 %, 0,0065 %, 0,0066 %, 0,0067 %, 0,0068 %, 0,0069 %, 0,0070 %, 0,0071 %, 0,0072 %, 0,0073 %, 0,0074 %, 0,0075 %, 0,0076 %, 0,0077 %, 0,0078 %, 0,0079 %, 0,0080 %, 0,0081 %, 0,0082 %, 0,0083 %, 0,0084 %, 0,0085 %, 0,0086 %, 0,0087 %, 0,0088 %, 0,0089 %, 0,0090 %, 0,0091 %, 0,0092 %, 0,0093 %, 0,0094 %, 0,0095 %, 0,0096 %, 0,0097 %, 0,0098 %, 0,0099 %, 0,0100 %, 0,0200 %, 0,0250 %, 0,0275 %, 0,0300 %, 0,0325 %, 0,0350 %, 0,0375 %, 0,0400 %, 0,0425 %, 0,0450 %, 0,0475 %, 0,0500 %, 0,0525 %, 0,0550 %, 0,0575 %, 0,0600 %, 0,0625 %, 0,0650 %, 0,0675 %, 0,0700 %, 0,0725 %, 0,0750 %, 0,0775 %, 0,0800 %, 0,0825 %, 0,0850 %, 0,0875 %, 0,0900 %, 0,0925 %, 0,0950 %, 0,0975 %, 0,1000 %, 0,1250 %, 0,1500 %, 0,1750 %, 0,2000 %, 0,2250 %, 0,2500 %, 0,2750 %, 0,3000 %, 0,3250 %, 0,3500 %, 0,3750 %, 0,4000 %, 0,4250 %, 0,4500 %, 0,4750 %, 0,5000 %, 0,5250 %, 0,0550 %, 0,5750 %, 0,6000 %, 0,6250 %, 0,6500 %, 0,6750 %, 0,7000 %, 0,7250 %, 0,7500 %, 0,7750 %, 0,8000 %, 0,8250 %, 0,8500 %, 0,8750 %, 0,9000 %, 0,9250 %, 0,9500 %, 0,9750 %, 1,0 %, 1,1 %, 1,2 %, 1,3 %, 1,4 %, 1,5 %, 1,6 %, 1,7 %, 1,8 %, 1,9 %, 2,0 %, 2,1 %, 2,2 %, 2,3 %, 2,4 %, 2,5 %, 2,6 % 2,7 %, 2,8 %, 2,9 %, 3,0 %, 3,1 %, 3,2 %, 3,3 %, 3,4 %, 3,5 %, 3,6 %, 3,7 %, 3,8 % 3,9 %, 4,0 %, 4,1 %, 4,2 %, 4,3 %, 4,4 %, 4,5 %, 4,6 %, 4,7 %, 4,8 %, 4,9 %, 5,0 %, 5,1 %, 5,2 %, 5,3 %, 5,4 %, 5,5 %, 5,6 %, 5,7 %, 5,8 %, 5,9 %, 6,0 %, 6,1 %, 6,2 %, 6,3 %, 6,4 %, 6,5 %, 6,6 %, 6,7 %, 6,8 %, 6,9 %, 7,0 %, 7,1 %, 7,2 %, 7,3 %, 7,4 %, 7,5 %, 7,6 %, 7,7 %, 7,8 %, 7,9 %, 8,0 %, 8,1 %, 8,2 %, 8,3 %, 8,4 %, 8,5 %, 8,6 %, 8,7 %, 8,8 %, 8,9 %, 9,0 %, 9,1 %, 9,2 %, 9,3 %, 9,4 %, 9,5 %, 9,6 %, 9,7 %, 9,8 %, 9,9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 26 %, 27 %, 28 %, 29 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % oder 99 % oder jeden davon ableitbaren Bereich von mindestens einem der Bestandteile umfassen, im Wesentlichen daraus bestehen oder daraus bestehen, die in der Beschreibung und den Ansprüchen genannt sind. Der Prozentsatz kann in nicht-einschränkenden Aspekten bezogen auf Gewicht oder Volumen der Gesamtzusammensetzung berechnet werden. Ein Fachmann würde verstehen, dass die Konzentrationen je nach Zugabe, Ersetzung und/oder Subtraktion der Bestandteile in einer gegebenen Zusammensetzungen variieren können.
Vehikel
Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können in alle Arten von Vehikeln oder Trägern eingeschlossen oder eingebracht werden. Das Vehikel oder der Träger kann ein pharmazeutisch oder dermatologisch annehmbares Vehikel oder ein pharmazeutisch oder dermatologisch annehmbarer Träger sein. Zu nicht-einschränkenden Beispielen für Vehikel oder Träger gehören Wasser, Glycerin, Alkohol, Öl, eine Silicium enthaltende Verbindung, eine Silikonverbindung und Wachs. Variationen und sonstige geeignete Vehikel sind dem Fachmann offensichtlich und sind für die Verwendungen in der vorliegenden Erfindung geeignet. Die Konzentrationen und Kombinationen der Verbindungen, Bestandteile und Mittel können in bestimmten Aspekten so gewählt werden, dass die Kombinationen chemisch verträglich sind und keine Komplexe bilden, die aus dem fertigen Produkt ausfallen.
Struktur
Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können in eine Palette unterschiedlicher Formen strukturiert oder formuliert werden. Nicht-einschränkende Beispiele schließen Emulsionen (z. B. Wasser-in-Öl, Wasser-in-Öl-in-Wasser, Öl-in-Wasser, Silikonin-Wasser, Wasser-in-Silikon, Öl-in-Wasser-in-Öl, Öl-in-Wasser-in-Silikon-Emulsionen), Cremes, Lotionen, Lösungen (sowohl wässrig als auch hydroalkoholisch), wasserfreie Grundlagen (wie Lippenstifte und Puder), Gele, Masken, Peelings und Salben ein. Variationen und sonstige Strukturen sind dem Fachmann offensichtlich und sind für die Verwendungen in der vorliegenden Erfindung geeignet.
Zusätzliche Bestandteile
Zusätzlich zu der von den Erfindern offenbarten Kombination von Bestandteilen können die Zusammensetzungen auch zusätzliche Bestandteile einschließen, wie Kosmetikbestandteile und pharmazeutisch wirksame Bestandteile. Nicht-einschränkende Beispiele für diese zusätzlichen Bestandteile sind in den folgenden Unterabschnitten beschrieben.
Kosmetikbestandteile
Das CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook (2004 und 2008) beschreibt eine umfassende Palette nicht-einschränkender Kosmetikbestandteile, die im Kontext der vorliegenden Erfindung verwendet werden können. Beispiele für diese Bestandteilklassen schließen ein: Duftstoffmittel (synthetisch und natürlich, z. B. Gluconsäure, Phenoxyethanol und Triethanolamin), Farbstoffe und Farbbestandteile (z. B. Blue 1, Blue 1 Lake, Red 40, Titandioxid, D&C Blau Nr. 4, D&C Grün Nr. 5, D&C Orange Nr. 4, D&C Rot Nr. 17, D&C Rot Nr. 33, D&C Violett Nr. 2, D&C Gelb Nr. 10 und D&C Gelb Nr. 11), geschmackgebende Mittel/Aromamittel (z. B. Stevia rebaudiana (Honigkraut)-Extrakt und Menthol) Adsorbentien, Schmiermittel, Lösungsmittel, Befeuchtungsmittel (einschließlich z. B. Aufweichmitteln, Feuchthaltemitteln, Filmbildnern, Okklusionsmitteln und Mitteln, die die natürlichen Befeuchtungsmechanismen der Haut beeinflussen), Wasserabweisemittel, UV-Absorbentien (physikalische und chemische Absorbentien, wie para-Aminobenzoesäure („PABA“) und entsprechende PABA-Derivate, Titandioxid, Zinkoxid, usw.), etherische Öle, Vitamine (z. B. A, B, C, D, E und K), Spurenmetalle (z. B. Zink, Calcium und Selen), Reizlinderungsmittel (z. B. Steroide und nichtsteroidale Entzündungshemmer), botanische Extrakte (z. B. Aloe vera, Kamille, Gurkenextrakt, Ginkgo biloba, Ginseng und Rosmarin), antimikrobielle Mittel, Antioxidantien (z. B. BHT und Tokopherol), Chelatbildner (z. B. Dinatrium-EDTA und Tetranatrium-EDTA), Konservierungsmittel (z. B. Methylparaben und Propylparaben), pH-Einstellmittel (z. B. Natriumhydroxid und Citronensäure), Absorbentien (z. B. Aluminiumstärkeoctenylsuccinat, Kaolin, Maisstärke, Haferstärke, Cyclodextrin, Talkum und Zeolith), Hautbleich- und -aufhellungsmittel (z. B. Hydrochinon und Niacinamidlactat), Feuchthaltemittel (z. B. Sorbit, Harnstoff, Methylgluceth-20, Saccharidisomerat und Mannit), Schälmittel, wasserabweisend machende Mittel (z. B. Magnesium/Aluminiumhydroxidstearat), Hautkonditionierungsmittel (z. B. Aloe-Extrakte, Allantoin, Bisabolol, Ceramide, Dimethicon, Hyaluronsäure, Biosaccharidgum-1, Ethylhexylglycerin, Pentylenglykol, hydriertes Polydecen, Octyldodecyloleat und Dikaliumglycyrrhizat). Nicht-einschränkende Beispiele für diese Bestandteile sind in den folgenden Unterabschnitten beschrieben.
UV-Absorptions- und/oder -Reflexionsmittel
UV-Absorptionsmittel und/oder -Reflexionsmittel, die in Kombination mit den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen verwendet werden können, schließen chemische und physikalische Sonnenblockierungsmittel (Sunblocker) ein. Nicht einschränkende Beispiele für chemische Sunblocker, die verwendet werden können, umfassen para-Aminobenzoesäure (PABA), PABA-Ester (Glyceryl-PABA, Amyldimethyl-PABA und Octyldimethyl-PABA), Butyl-PABA, Ethyl-PABA, Ethyldihydroxypropyl-PABA, Benzophenone (Oxybenzon, Sulisobenzon, Benzophenon und Benzophenon-1 bis 12), Cinnamate (Octylmethoxycinnamat (Octinoxat), Isoamyl-p-methoxycinnamat, Octylmethoxycinnamat, Cinoxat, Diisopropylmethylcinnamat, DEA-Methoxycinnamat, Ethyldiisopropylcinnamat, Glyceryloctanoatdimethoxycinnamat und Ethylmethoxycinnamat), Cinnamatester, Salicylate (Homomethylsalicylat, Benzylsalicylat, Glykolsalicylat, Isopropylbenzylsalicylat, usw.), Anthranilate, Ethylurocanat, Homosalat, Octisalat Dibenzoylmethanderivative (z. B. Avobenzon), Octocrylen, Octyltriazon, Digalloytrioleat, Glycerylaminobenzoat, Lawson mit Dihydroxyaceton, Ethylhexyltriazon, Dioctylbutamidotriazon, Benzylidenmalonatpolysiloxan, Terephthalylidendikamphersulfonsäure, Dinatriumphenyldibenzimidazoltetrasulfonat, Diethylaminohydroxybenzoylhexylbenzoat, Bisdiethylaminohydroxybenzoylbenzoat, Bisbenzoxazoylphenylethylhexyliminotriazin, Drometrizoltrisiloxan, Methylenbisbenzotriazolyltetramethylbutylphenol und Bisethylhexyloxyphenolmethoxyphenyltriazin, 4-Methylbenzylidenkampher und Isopentyl-4-methoxycinnamat. Nicht-einschränkende Beispiele für physikalische Sunblocker schließen Kaolin, Talkum, Petrolatum und Metalloxide (z. B. Titandioxid und Zinkoxid) ein.
Befeuchtungsmittel
Nicht-einschränkende Beispiele für Befeuchtungsmittel, die mit den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen verwendet werden können, umfassen Aminosäuren, Chondroitinsulfat, Diglycerin, Erythritol, Fructose, Glucose, Glycerin, Glycerinpolymere, Glykol, 1,2,6-Hexantriol, Honig, Hyaluronsäure, hydrierten Honig, hydriertes Stärkehydrolysat, Inosit, Lactit, Maltit, Maltose, Mannit, natürlichen Befeuchtungsfaktor, PEG-15-Butandiol, Polyglycerylsorbitol, Salze von Pyrrolidoncarbonsäure, Kalium-PCA, Propylenglykol, Saccharidisomerat, Natriumglucuronat, Natrium-PCA, Sorbit, Sucrose, Trehalose, Harnstoff und Xylit.
Zu anderen Beispielen gehören acetyliertes Lanolin, acetylierter Lanolinalkohol, Threonin, Lysin, Alanin, Algenextrakt, Aloe barbadensis, Aloe barbadensis-Extrakt, Aloe barbadensis-Gel, Althea officinalis-Extrakt, Aprikosen (Prunus armeniaca)-Kernöl, Arginin, Argininaspartat, Arnica montana-Extrakt, Asparaginsäure, Avocado (Persea gratissima)-Öl, Barrieresphingolipide, Butylalkohol, Bienenwachs, Behenylalkohol, beta-Sitosterol, Birken (Betula alba)-Rindenextrakt, Borretsch (Borago officinalis) -Extrakt, stechender Mäusedorn (Ruscus aculeatus)-Extrakt, Butylenglykol, Calendula officinalis-Extrakt, Calendula officinalis-Öl, Candelilla (Euphorbia cerifera)-Wachs, Canolaöl, Capryl-/Caprintriglycerid, Kardamom (Elettaria cardamomum)-Öl, Carnauba (Copernicia cerifera)-Wachs, Karotten (Daucus carota sativa)-Öl, Castor (Ricinus communis)-Öl, Ceramide, Ceresin, Ceteareth-5, Ceteareth-12, Ceteareth-20, Cetearylethylhexanoat, Ceteth-20, Ceteth-24, Cetylacetat, Cetyloctanoat, Cetylpalmitat, Kamillen (Anthemis nobilis)-Öl, Cholesterin, Cholesterinester, Cholesterylhydroxystearat, Citronensäure, Muskatellersalbei (Salvia sclarea)-Öl, Kakao (Theobroma cacao)-Butter, Cococaprylat/-caprat, Kokosnuss (Cocos nucifera)-Öl, Kollagen, Kollagenaminosäuren, Mais (Zea mays)-Öl, Fettsäuren, Decyloleat, Dimethiconcopolyol, Dimethiconol, Dioctyladipat, Dioctylsuccinat, Dipentaerythritylhexacaprylat/-hexacaprat, DNA, Erythrit, Ethoxydiglykol, Ethyllinoleat, Eucalyptus globulus-Öl, Nachtkerzen (Oenothera biennis)-Öl, Fettsäuren, Geranium maculatum-Öl, Glucosamin, Glucoseglutamat, Glutaminsäure, Glycereth-26, Glycerin, Glycerol, Glyceryldistearat, Glycerylhydroxystearat, Glyceryllaurat, Glyceryllinoleat, Glycerylmyristat, Glyceryloleat, Glycerylstearat, Glycerylstearat SE, Glycin, Glykolstearat, Glykolstearat SE, Glycosaminoglycane, Trauben (Vitis vinifera) Kernöl, Haselnuss (Corylus americana)-Öl, Haselnuss (Corylus avellana)-Öl, Hexylenglykol, Hyaluronsäure, Hybrid-Färberdistel (Carthamus tinctorius)-Öl, hydriertes Castoröl, hydrierte Kokosglyceride, hydriertes Kokosnussöl, hydriertes Lanolin, hydriertes Lecithin, hydriertes Palmglycerid, hydriertes Palmkernöl, hydriertes Sojabohnen, hydriertes Talgglycerid, hydriertes pflanzliches Öl, hydrolysiertes Kollagen, hydrolysiertes Elastin, hydrolysierte Glycosaminoglycane, hydrolysiertes Keratin, hydrolysiertes Sojaprotein, hydroxyliertes Lanolin, Prolin, Hydroxyprolin, Isocetylstearat, Isocetylstearoylstearat, Isodecyloleat, Isopropylisostearat, Isopropyllanolat, Isopropylmyristat, Isopropylpalmitat, Isopropylstearat, Isostearamid DEA, Isostearinsäure, Isostearyllactat, Isostearylneopentanoat, Jasmin (Jasminum officinale)-Öl, Jojoba (Buxus chinensis)-Öl, Kelp, Kukui (Aleurites moluccana)-Nussöl, Lactamid MEA, Laneth-16, Laneth-10-acetat, Lanolin, Lanolinsäure, Lanolinalkohol, Lanolinöl, Lanolinwachs, Lavendel (Lavandula angustifolia)-Öl, Lecithin, Zitronen (Citrus medica limonum)-Öl, Linolsäure, Linolensäure, Macadamia ternifolia-Nussöl, Maltit, Matricaria (Chamomilla recutita)-Öl, Methylglucosesesquistearat, Methylsilanol PCA, Mineralöl, Nerzöl, Mortierellaöl, Myristyllactat, Myristylmyristat, Myristylpropionat, Neopentylglykoldicaprylat/-dicaprat, Octyldodecanol, Octyldodecylmyristat, Octyldodecylstearoylstearat, Octylhydroxystearat, Octylpalmitat, Octylsalicylat, Octylstearat, Ölsäure, Olive (Olea europaea)-Öl, Orangen (Citrus aurantium dulcis)-Öl, Palm (Elaeis guineensis)-Öl, Palmitinsäure, Pantethin, Panthenol, Panthenylethylether, Paraffin, PCA, Pfirsich (Prunus persica)-Kernöl, Erdnuss (Arachis hypogaea)-Öl, PEG-8 C_12-18-Ester, PEG-15-Kokosamin, PEG-150-Distearat, PEG-60-Glycerylisostearat, PEG-5-Glycerylstearat, PEG-30-Glycerylstearat, PEG-7-hydriertes Castoröl, PEG-40-hydriertes Castoröl, PEG-60-hydriertes Castoröl, PEG-20-Methylglucosesesquistearat, PEG-40-Sorbitanperoleat, PEG-5-Sojasterol, PEG-10-Sojasterol, PEG-2-Stearat, PEG-8-Stearat, PEG-20-Stearat, PEG-32-Stearat, PEG-40-Stearat, PEG-50-Stearat, PEG-100-Stearat, PEG-150-Stearat, Pentadecalacton, Pfefferminz (Mentha piperita)-Öl, Vaseline, Phospholipide, Planktonextrakt, Polyaminozuckerkondensat, Polyglyceryl-3-diisostearat, Polyquaternium-24, Polysorbat 20, Polysorbat 40, Polysorbat 60, Polysorbat 80, Polysorbat 85, Kaliummyristat, Kaliumpalmitat, Propylenglykol, Propylenglykoldicaprylat/- dicaprat, Propylenglykoldioctanoat, Propylenglykoldipelargonat, Propylenglykollaurat, Propylenglykolstearat, Propylenglykolstearat SE, PVP, Pyridoxindipalmitat, Retinol, Retinylpalmitat, Reis (Oryza sativa)-Kleieöl, RNA, Rosmarin (Rosmarinus officinalis)-Öl, Rosenöl, Färberdistel (Carthamus tinctorius)-Öl, Salbei (Salvia officinalis)-Öl, Sandelholz (Santalum album)-Öl, Serin, Serumprotein, Sesam (Sesamum indicum)-Öl, Shea-Butter (Butyrospermum parkii), Seidenpulver, Natriumchondroitinsulfat, Natriumhyaluronat, Natriumlactat, Natriumpalmitat, Natrium-PCA, Natriumpolyglutamat, lösliches Kollagen, Sorbitanlaurat, Sorbitanoleat, Sorbitanpalmitat, Sorbitansesquioleat, Sorbitanstearat, Sorbit, Sojabohnen (Glycine soja)-Öl, Sphingolipide, Squalan, Squalen, Stearamid MEA-Stearat, Stearinsäure, Stearoxydimethicon, Stearoxytrimethylsilan, Stearylalkohol, Stearylglycyrrhetinat, Stearylheptanoat, Stearylstearat, Sonnenblumen (Helianthus annuus)-Samenöl, Süßmandel (Prunus amygdalus dulcis)-Öl, synthetisches Bienenwachs, Tocopherol, Tocopherylacetat, Tocopheryllinoleat, Tribehenin, Tridecylneopentanoat, Tridecylstearat, Triethanolamin, Tristearin, Harnstoff, pflanzliches Öl, Wasser, Wachse, Weizen (Triticum vulgare)-Keimöl und Ylang (Cananga odorata)-Öl.
Antioxidantien
Nicht einschränkende Beispiele für Antioxidantien, die mit den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen verwendet werden können, umfassen Acetylcystein, Ascorbinsäurepolypeptid, Ascorbyldipalmitat, Ascorbylmethylsilanolpectinat, Ascorbylpalmitat, Ascorbylstearat, BHA, BHT, t-Butylhydrochinon, Cystein, Cystein˙HCl, Diamylhydrochinon, Di-t-butylhydrochinon, Dicetylthiodipropionat, Dioleyltocopherylmethylsilanol, Dinatriumascorbylsulfat, Distearylthiodipropionat, Ditridecylthiodipropionat, Dodecylgallat, Erythorbinsäure, Ester von Ascorbinsäure, Ethylferulat, Ferulasäure, Gallsäureester, Hydrochinon, Isooctylthioglycolat, Kojisäure, Magnesiumascorbat, Magnesiumascorbylphosphat, Methylsilanolascorbat, natürliche botanische Antioxidantien, wie grünen Tee oder Traubenkernextrakte, Nordihydroguaiaretsäure, Octylgallat, Phenylthioglykolsäure, Kaliumascorbyltocopherylphosphat, Kaliumsulfit, Propylgallat, Chinone, Rosmarinsäure, Natriumascorbat, Natriumbisulfit, Natriumerythorbat, Natriummetabisulfit, Natriumsulfit, Superoxiddismutase, Natriumthioglykolat, Sorbitylfurfural, Thiodiglykol, Thiodiglykolamid, Thiodiglykolsäure, Thioglykolsäure, Thiomilchsäure, Thiosalicylsäure, Tocophereth-5, Tocophereth-10, Tocophereth-12, Tocophereth-18, Tocophereth-50, Tocopherol, Tocophersolan, Tocopherylacetat, Tocopheryllinoleat, Tocopherylnicotinat, Tocopherylsuccinat und Tris(nonylphenyl)phosphit.
Strukturierungsmittel
Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können in anderen nicht einschränkenden Aspekten ein Strukturierungsmittel einschließen. Strukturierungsmittel unterstützen in einigen Aspekten, der Zusammensetzung rheologische Charakteristika bereitzustellen, um zur Stabilität der Zusammensetzung beizutragen. Strukturierungsmittel können in anderen Aspekten auch als Emulgator oder Tensid fungieren. Nicht einschränkende Beispiele für Strukturierungsmittel umfassen Stearinsäure, Palmitinsäure, Stearylalkohol, Cetylalkohol, Behenylalkohol, Stearinsäure, Palmitinsäure, den Polyethylenglykolether von Stearylalkohol mit durchschnittlich etwa 1 bis etwa 21 Ethylenoxideinheiten, den Polyethylenglykolether von Cetylalkohol mit durchschnittlich etwa 1 bis etwa 5 Ethylenoxideinheiten, sowie Mischungen davon.
Emulgatoren
Die Zusammensetzungen schließen in bestimmten Aspekten der vorliegenden Erfindung keinen Emulgator ein. Die Zusammensetzungen können in anderen Aspekten einen oder mehrere Emulgatoren einschließen. Emulgatoren können die Grenzflächenspannung zwischen Phasen reduzieren und die Formulierung und Stabilität einer Emulsion verbessern. Die Emulgatoren können nichtionische, kationische, anionische und zwitterionische Emulgatoren sein (siehe McCutcheon's (1986), US-Patente Nr. 5,011,681 , 4,421,769 , 3,755,560 ). Nicht einschränkende Beispiele umfassen Ester von Glycerin, Ester von Propylenglykol, Fettsäureester von Polyethylenglykol, Fettsäureester von Polypropylenglykol, Ester von Sorbit, Ester von Sorbitananhydriden, Carbonsäurecopolymere, Ester und Ether von Glucose, ethoxylierte Ether, ethoxylierte Alkohole, Alkylphosphate, Polyoxyethylenfettetherphosphate, Fettsäureamide, Acyllactylate, Seifen, TEA-Stearat, DEA-Oleth-3-phosphat, Polyethylenglykol 20-Sorbitanmonolaurat (Polysorbat 20), Polyethylenglykol 5-Sojasterol, Steareth-2, Steareth-20, Steareth-21, Ceteareth-20, Cetearylglucosid, Cetearylalkohol, C_12-13-Pareth-3, PPG-2-Methylglucoseetherdistearat, PPG-5-Ceteth-20, Bis-PEG/PPG-20/20-dimethicon, Ceteth-10, Polysorbat 80, Cetylphosphat, Kaliumcetylphosphat, Diethanolamincetylphosphat, Polysorbat 60, Glycerylstearat, PEG-100-Stearat, Arachidylalkohol, Arachidylglucosid, Hydroxypropylcyclodextrin und Mischungen davon.
Silikonhaltige Verbindungen
In nicht einschränkenden Aspekten umfassen silikonhaltige Verbindungen jedes Mitglied einer Familie von polymeren Produkten, dessen molekulares Grundgerüst aus alternierenden Silikon und Sauerstoffatomen zusammengesetzt ist, wobei Seitengruppen an die Siliciumatome gebunden sind. Durch Variieren der -Si-O-Kettenlängen, Seitengruppen und Vernetzung können Silikone in einer weiten Vielfalt von Materialien synthetisiert werden. In der Konsistenz können sie von Flüssigkeit über Gel bis Feststoffen variieren
Die Silikon enthaltenden Verbindungen, die im Kontext der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, schließen diejenigen ein, die in dieser Beschreibung beschrieben sind oder einem Fachmann bekannt sind. Nicht-einschränkende Beispiele schließen Silikonöle (z. B. flüchtige und nichtflüchtige Öle), Gele und Feststoffe ein. Die siliciumhaltigen Verbindungen schließen in bestimmten Aspekten Silikonöle ein, wie ein Polyorganosiloxan. Nicht einschränkende Beispiele für Polyorganosiloxane umfassen Dimethicon, Cyclomethicon, Cyclohexasiloxan, Polysilicon-11, Phenyltrimethicon, Trimethylsilylamodimethicon, Stearoxytrimethylsilan oder Mischungen von diesen und anderen Organosiloxanmaterialien in beliebigem Verhältnis, um die gewünschten Konsistenz und Auftragungseigenschaften je nach vorgesehener Auftragung zu erhalten (z. B. für einen speziellen Bereich, wie Haut, Haar oder Augen). Ein „flüchtiges Silikonöl“ schließt ein Silikonöl mit einer niedrigen Verdampfungswärme ein, d. h. normalerweise weniger als 50 cal pro Gramm Silikonöl. Nicht-einschränkende Beispiele für flüchtige Silikonöle schließen ein: Cyclomethicone wie Dow Corning 344 Fluid, Dow Corning 345 Fluid, Dow Corning 244 Fluid und Dow Corning 245 Fluid, Volatile Silicon 7207 (Union Carbide Corp., Danbury, Conn., USA), niedrigviskose Dimethicone, d. h. Dimethicone mit einer Viskosität von etwa 50 cst oder weniger (z. B. Dimethicone wie Dow Corning 200-0,5 cst Fluid). Die Dow Corning Fluids sind von Dow Corning Corporation, Midland, Michigan, USA, erhältlich. Cyclomethicon und Dimethicon sind in der dritten Auflage des CTFA Cosmetic Ingredient Dictionary (durch Bezugnahme eingeschlossen) als cyclische Dimethylpolysiloxanverbindungen beziehungsweise eine Mischung aus vollständig methylierten linearen Siloxanpolymeren, endverblockt mit Trimethylsiloxyeinheiten, beschrieben. Andere nicht einschränkende flüchtige Silikonöle, die im Kontext der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, schließen jene ein, die von General Electric Co., Silicone Products Div., Waterford, N.Y., USA, und SWS Silicones Div. of Stauffer Chemical Co., Adrian, Michigan, USA, erhältlich sind.
Schälmittel
Schälmittel schließen Bestandteile ein, die tote Hautzellen von der äußeren Oberfläche der Haut entfernen. Diese Mittel wirken durch mechanische, chemische und/oder sonstige Mittel. Nicht-einschränkende Beispiele für mechanische Schälmittel schließen Abrasiva ein, wie Bimsstein, Siliciumdioxid, Tuch, Papier, Schalen, Perlen, feste Kristalle, feste Polymere, usw. Nicht-einschränkende Beispiele für chemische Schälmittel schießen Säuren und Enzymschälmittel ein. Säuren, die als Schälmittel verwendet werden können, schließen Glykolsäure, Milchsäure, Citronensäure, alpha-Hydroxysäuren, beta-Hydroxysäuren, usw. ein. Andere Schälmittel, die dem Fachmann bekannt sind, werden auch als brauchbar in dem Kontext der vorliegenden Erfindung angesehen.
Etherische Öle
Etherische Öle umfassen Öle, die von Kräutern, Blüten, Bäumen und anderen Pflanzen abgeleitet sind. Derartige Öle liegen typischerweise als winzige Tröpfchen zwischen den Zellen der Pflanze vor und können nach mehreren Methoden extrahiert werden, die Fachleuten bekannt sind (z. B. wasserdampfdestilliert, Enfleurage (d. h. Extraktion mittels Fett), Maceration, Lösungsmittelextraktion oder mechanisches Pressen). Wenn diese Öltypen der Luft ausgesetzt werden, neigen sie zum Verdampfen (d. h. ein flüchtiges Öl). Infolgedessen sind viele etherische Öle farblos, können mit zunehmendem Altern jedoch oxidieren und nachdunkeln. Etherische Öle sind in Wasser unlöslich und in Alkohol, Ether, Fettölen (pflanzlich) und anderen organischen Lösungsmitteln löslich. Typische physikalische Charakteristika von etherischen Ölen beinhalten Siedepunkte, die von etwa 160° bis 240°C variieren, und Dichten im Bereich von 0,759 bis etwa 1,096.
Etherische Öle sind typischerweise nach der Pflanze benannt, in der das Öl gefunden wird. Rosenöl und Pfefferminzöl stammen beispielsweise von Rosen beziehungsweise Pfefferminzpflanzen. Nicht einschränkende Beispiele für etherische Öle, die im Kontext der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, umfassen Sesamöl, Macadamianussöl, Teebaumöl, Nachtkerzenöl, Spanisch-Salbeiöl, Spanisch-Rosmarinöl, Korianderöl, Thymianöl, Pimentöl, Rosenöl, Anisöl, Balsamöl, Bergamottenöl, Rosenholzöl, Zedernöl, Kamillenöl, Salbeiöl, Clary-Salbeiöl, Nelkenöl, Zypressenöl, Eukalyptusöl, Fenchelöl, Meeresfenchelöl, Weihrauchöl, Geranienöl, Ingweröl, Grapefruitöl, Jasminöl, Wachholderöl, Lavendelöl, Zitronenöl, Lemongrassöl, Limonenöl, Mandarinenöl, Majoranöl, Myrrhenöl, Neroliöl, Orangeöl, Patchouliöl, Pfefferöl, Schwarzpfefferöl, Petitgrainöl, Pinienöl, Rose-otto-Öl, Rosmarinöl, Sandelholzöl, Spearmintöl, Nardenöl, Vetiveröl, Wintergrünöl oder Ylang. Andere etherische Öle, die Fachleuten bekannt sind, werden auch als brauchbar im Kontext der vorliegenden Erfindung angesehen.
Verdickungsmittel
Verdickungsmittel, einschließlich Verdicker oder Geliermittel, schließen Substanzen ein, die die Viskosität einer Zusammensetzung erhöhen können. Verdicker schließen jene ein, die die Viskosität einer Zusammensetzung erhöhen können, ohne die Wirksamkeit des aktiven Bestandteils in der Zusammensetzung wesentlich zu ändern. Verdicker können auch die Stabilität der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen erhöhen. Verdicker schließen in bestimmten Aspekten der vorliegenden Erfindung hydriertes Polyisobuten, Trihydroxystearin. Ammoniumacryloyldimethyltaurat/VP-Copolymer oder eine Mischung von diesen ein.
Nicht-einschränkende Beispiele für zusätzliche Verdickungsmittel, die im Kontext der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, umfassen Carbonsäurepolymere, vernetzte Polyacrylatpolymere, Polyacrylamidpolymere, Polysaccharide und Gummis. Beispiele für Carbonsäurepolymere umfassen vernetzte Verbindungen, die ein oder mehrere Monomere abgeleitet von Acrylsäure, substituierten Acrylsäuren und Salzen und Estern dieser Acrylsäuren und den substituierten Acrylsäuren enthalten, wobei das Vernetzungsmittel zwei oder mehr Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindungen enthält und von einem mehrwertigen Alkohol abgeleitet ist (siehe US-Patente Nr. 5,087,445 , 4,509,949 , 2,798,053 , CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary, 4. Auflage, 1991, Seiten 12 und 80). Beispiele für im Handel erhältliche Carbonsäurepolymere schließen Carbomere ein, die Homopolymere von Acrylsäure vernetzt mit Allylethern von Sucrose oder Pentaerytritol sind (z. B. CARBOPOL™ 900 Reihen von B. F. Goodrich).
Nicht-einschränkende Beispiele für vernetzte Polyacrylatpolymere umfassen kationische und nichtionische Polymere. Beispiele sind in den US-Patenten Nr. 5,100,660 , 4,849,484 , 4,835,206 , 4,628,078 , 4,599,379 beschrieben.
Nicht einschränkende Beispiele für Polyacrylamidpolymere (einschließlich nichtionischer Polyacrylamidpolymere einschließlich substituierter verzweigter oder unverzweigter Polymere) umfassen Polyacrylamid, Isoparaffin und Laureth-7, Multiblockcopolymere von Acrylamiden und substituierten Acrylamiden mit Acrylsäuren und substituierten Acrylsäuren.
Nicht einschränkende Beispiele für Polysaccharide umfassen Cellulose, Carboxymethylhydroxyethylcellulose, Celluloseacetatpropionatcarboxylat, Hydroxyethylcellulose, Hydroxyethylethylcellulose, Hydroxypropylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose, Methylhydroxyethylcellulose, mikrokristalline Cellulose, Natriumcellulosesulfat und Mischungen davon. Ein weiteres Beispiel ist eine alkylsubstituierte Cellulose, wobei die Hydroxygruppen des Cellulosepolymers hydroxyliert sind (vorzugsweise hydroxyethyliert oder hydroxypropyliert), um eine hydroxyalkylierte Cellulose zu bilden, die dann mit einer C₁₀- bis C₃₀-geradkettigen Kette oder einer verzweigtkettigen Alkylgruppe über eine Etherverknüpfung weiter modifiziert ist. Diese Polymere sind typischerweise Ether von geradkettigen oder verzweigtkettigen C₁₀- bis C₃₀-Alkoholen mit Hydroxyalkylcellulosen. Andere brauchbare Polysaccharide schließen Scleroglucane ein, die eine lineare Kette aus (1-3)-verknüpften Glucoseeinheiten mit einer (1-6)-verknüpften Glucoseeinheit auf jeweils drei Einheiten umfassen.
Nicht einschränkende Beispiele für Gummis/Pflanzenschleime, die mit der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, schließen Akaziengummi, Agar, Algin, Alginsäure, Ammoniumalginat, Amylopectin, Calciumalginat, Calciumkarrageen, Carnitin, Karrageen, Dextrin, Gelatine, Gellangummi, Guargummi, Guarhydroxypropyltrimoniumchlorid, Hectorit, Hyaluronsäure, hydratisiertes Siliciumdioxid, Hydroxypropylchitosan, Hydroxypropylguar, Karayagummi, Kelp, Johannisbrotmehl, Nattogummi, Kaliumalginat, Kaliumkarrageen, Propylenglykolalginat, Sclerotium-Gummi, Natriumcarboxymethyldextran, Natriumkarrageen, Tragakanthgummi, Xanthangummi und Mischungen davon ein.
Konservierungsmittel
Nicht-einschränkende Beispiele für Konservierungsmittel, die im Kontext der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, schließen quaternäre Ammoniumkonservierungsmittel, wie Polyquaternium-1 und Benzalkoniumhalogenide (z. B. Benzalkoniumchlorid („BAC“) und Benzalkoniumbromid), Parabene (z. B. Methylparabene und Propylparabene), Phenoxyethanol, Benzylalkohol, Chlorbutanol, Phenol, Sorbinsäure, Thimerosal oder Kombinationen davon ein.
Pharmazeutische Bestandteile
Pharmazeutische Wirkstoffe werden auch als brauchbar mit den Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung angesehen. Nicht einschränkende Beispiele für pharmazeutische Wirkstoffe umfassen Antiaknemittel, Mittel, die zur Behandlung von Rosazea eingesetzt werden, Analgetika, Anästhetika, Anorektalmittel, Antihistamine, Entzündungshemmer einschließlich nichtsteroidaler Entzündungshemmer, Antibiotika, Antipilzmittel, antivirale Mittel, antimikrobielle Mittel, Antikrebswirkstoffe, gegen Krätze wirkende Mittel, gegen Läuse wirkende Mittel, Antineoplastika, Antiperspirantien, Antiprurika, Antipsoriasismittel, Antiseborrhoika, biologisch aktive Proteine und Peptide, Verbrennungsbehandlungsmittel, Kauterisierungsmittel, Depigmentierungsmittel, Enthaarungsmittel, Mittel gegen Windelausschlag, Enzyme, Haarwachstumsstimulantien, Haarwachstumsverzögerungsmittel einschließlich DFMO und deren Salzen und Analoga, Hämostatika, Kerotolytika, Krebsgeschwürbehandlungsmittel, Fieberbläschenbehandlungsmittel, Dental und Periodontalbehandlungsmittel, photosensibilisierende Wirkstoffe, Hautschutzmittel/Barrieremittel, Steroide einschließlich Hormonen und Kortikosteroiden, Mittel zur Behandlung von Sonnenbrand, Sonnenschutzmittel, Transdermalwirkstoffe, Nasalwirkstoffe, Vaginalwirkstoffe, Warzenbehandlungsmittel, Wundbehandlungsmittel, Wundheilungsmittel, usw.
Kits
Kits können auch in bestimmten Aspekten der vorliegenden Erfindung genutzt werden. Erfindungsgemäße Zusammensetzungen können beispielsweise in ein Kit eingeschlossen werden. Ein Kit kann einen Behälter einschließen. Behälter können ein Fläschchen, eine Metalltube, eine Laminattube, eine Plastiktube, einen Spender, einen Druckbehälter, einen Barrierebehälter, ein Paket, ein Fach, einen Lippenstiftbehälter, einen Kompaktbehälter, Kosmetikpfännchen, die Kosmetikzusammensetzungen enthalten können, oder andere Behältertypen einschließen, wie spritz- oder blasgeformte Plastikbehälter, in denen die Dispersionen oder Zusammensetzungen oder gewünschten Fläschchen, Spender oder Packungen aufbewahrt werden. Das Kit und/oder der Behälter kann Zeichen auf seiner Oberfläche aufweisen. Die Zeichen können beispielsweise ein Wort, ein Satz, eine Abkürzung, ein Bild oder ein Symbol sein.
Die Behälter können eine festgelegte Menge der Zusammensetzung abgeben. In anderen Ausführungsformen lässt sich der Behälter zusammendrücken (z. B. Metall-, Laminat- oder Kunststofftube), um eine gewünschte Menge der Zusammensetzung abzugeben. Die Zusammensetzung kann als Spray, Aerosol, Flüssigkeit, Fluid oder halbfestes Material abgegeben werden. Die Behälter können Spray-, Pump- oder Quetschmechanismen aufweisen. Ein Kit kann auch Anweisungen zur Verwendung der Kitkomponenten sowie der Verwendung jedweder anderen Zusammensetzungen einschließen, die in dem Behälter enthalten sind. Anweisungen können eine Erklärung einschließen, wie die Zusammensetzungen aufzutragen, zu verwenden und zu behandeln sind.
BEISPIELE
Die folgenden Beispiele sind eingeschlossen, um bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung zu demonstrieren. Fachleute sollten erkennen, dass die in den folgenden Beispielen offenbarten Techniken von dem Erfinder gefundene Techniken repräsentieren, die in der Praxis der Erfindung gut funktionieren und somit als bevorzugte Modi für deren Durchführung darstellend angesehen werden können. Fachleute sollten im Lichte der vorliegenden Offenbarung jedoch erkennen können, dass viele Änderungen an den konkreten offenbarten Ausführungsformen vorgenommen werden können und dennoch ein ähnliches oder vergleichbares Ergebnis erhalten werden kann, ohne von der Idee und dem Umfang der Erfindung abzuweichen.
Alle hier offenbarten und beanspruchten Zusammensetzungen und Verfahren können ohne unnötigen experimentellen Aufwand im Lichte der vorliegenden Offenbarung umgesetzt und ausgeführt werden. Obwohl die Zusammensetzungen und Verfahren dieser Erfindung in Bezug auf bevorzugte Ausführungsformen beschrieben wurden, wird dem Fachmann klar sein, dass in Bezug auf Zusammensetzungen und Verfahren sowie in den Stufen oder der Abfolge der Stufen des hier beschriebenen Verfahrens Variationen angewendet werden können, ohne vom Konzept, der Idee und dem Umfang der Erfindung abzuweichen. Es ist spezieller offensichtlich, dass bestimmte Mittel, die sowohl chemisch als auch physiologisch verwandt sind, die hier beschriebenen Mittel ersetzen können, während die selben oder ähnliche Ergebnisse erhalten werden. Alle derartigen ähnlichen Ersatzstoffe und Modifikationen, die dem Fachmann offensichtlich sind, werden als innerhalb der Idee, des Umfangs und Konzepts der Erfindung wie in den angefügten Ansprüchen definiert angesehen.
Beispiel 1
(In vitro-Myotubuskontraktionsdaten)

Es wurde gefunden, dass jeder von Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt die Kontraktion von Myotubuli reduziert, was zu reduzierter Muskelkontraktion eines Gesichtsmuskels und reduziertem Erscheinungsbild von tiefen Linien oder Falten im Gesicht sowie dynamischen Gesichtsfalten und Stirnfalten führt, die durch wiederholte Kontraktion des Gesichtsmuskels verursacht werden. Folgendes gehört zur Methodik, die zum Erhalten der Daten verwendet wurde: (1) Primäre humane Skelettmuskelmyoblasten (HSMM) wurden dazu gebracht, zu Myotubuli zu differenzieren, (2) Myotubuli wurden dann mit ‚Inducern‘ (Acetcholin) behandelt, die wiederum ein Einfließen von Calcium bewirken und ein Aktionspotential erzeugen, und (3) dieses Aktionspotential bewirkt, dass die Muskelzellen kontrahieren. Die Konzentrationsmengen von jedem verwendeten Extrakt und der resultierende Effekt auf die Inhibierung der Calciumspiegel werden in Tabelle 1 bereitgestellt. Tabelle 1

Bestandteil	Inhibierung der Calciumspiegel
Rosmarinus Officinalis-Blattextrakt*	1,0 Gew. % Konz. = 100 % Inhibierung 2,0 Gew. % Konz. = 100 % Inhibierung
Lavendula Stoechas- Extrakt *	0,5 Gew. % Konz. = 30 % Inhibierung 1,0 Gew. % Konz. = 30 % Inhibierung
Acmella Oleracea-Extrakt***	0,5 Gew. % Konz. = 77 % Inhibierung 1,0 Gew. % Konz. = 96 % Inhibierung

* Rosmarinus officinalis-Blattextrakt war ein eutektischer Extrakt, bei dem das Lösungsmittel, welches zur Herstellung des Extrakts verwendet worden war, eine fließfähige Mischung aus Betain, Milchsäure und Wasser war. Der Extrakt wurde von Naturex (Frankreich) unter der Handelsbezeichnung ROSEMARY EUTECTYS BLA™ erhalten.
** Der verwendete Lavendula stoechas-Extrakt war ein überkritischer CO₂-Extrakt der Blüten/Blätter/Stiele von Lavendula stoechas. Der CO₂-Extrakt wurde mit Capryl-/Caprintriglyceriden gemischt. Der Extrakt wurde von Barnet Products LLC (Englewood Cliffs, New Jersey (USA)) unter der Handelsbezeichnung STOCHEY'S erhalten.
*** Der verwendete Acmella oleracea-Extrakt war ein hydro-ethanolischer Extrakt, bei dem das Lösungsmittel eine fließfähige Mischung aus Wasser, Ethanol und 1,3-Propandiol einschloss. Das Ethanol wurde von dem resultierenden Extraktionsfluid entfernt. Der Extrakt wurde von Gattefosse (Frankreich) unter der Handelsbezeichnung GATULINE® EXPRESSION AF erhalten.

Beispiel 2
(In vitro-Kollagenexpressionsdaten)
Es wurde gefunden, dass Acmella oleracea-Extrakt die Produktion von Kollagen in humanen Dermalfibroblasten erhöht. Die Daten und verwendete Menge an Extrakt werden in Tabelle 2 bereitgestellt. Tabelle 2

Bestandteil Erhöhte Kollagenproduktion

Acmella Oleracea-Extrakt* 1,0 Gew.% Konz. = 61 % erhöhte Kollagenproduktion

* Der verwendete Acmella oleracea-Extrakt war ein hydro-ethanolischer Extrakt, bei dem das Lösungsmittel eine fließfähige Mischung aus Wasser, Ethanol und 1,3-Propandiol einschloss. Das Ethanol wurde von dem resultierenden Extraktionsfluid entfernt. Der Extrakt wurde von Gattefosse (Frankreich) unter der Handelsbezeichnung GATULINE® EXPRESSION AF erhalten.
Kollagen ist ein extrazelluläres Matrixprotein, das für die Hautstruktur entscheidend ist. Erhöhte Kollagensynthese trägt zur Festigkeit und Elastizität der Haut bei. Dieser Bioassay wurde verwendet, um die Wirkung von Acmella oleracea-Extrakt auf die Produktion von Prokollagenpeptid (einem Vorläufer des Kollagens) durch humane dermale Fibroblasten zu untersuchen. Der Endpunkt dieses Assays war eine spektrophotometrische Messung, die die Anwesenheit von Prokollagenpeptid und die zelluläre Lebensfähigkeit widerspiegelt. Der Assay verwendete die quantitative Sandwich-Enzym-Immunoassaytechnik, bei der ein für Prokollagenpeptid spezifischer monoklonaler Antikörper als Beschichtung vorab auf eine Mikroplatte aufgebracht wurde. Standards und Proben wurden in die Wells pipettiert, und jegliches vorhandene Prokollagenpeptid wurde durch den immobilisierten Antikörper gebunden. Nachdem jegliche ungebundenen Substanzen abgewaschen wurden, wurde den Wells ein enzymverknüpfter polyklonaler Antikörper zugefügt, der für Prokollagenpeptid spezifisch ist. Nach einem Waschvorgang, um jegliches nicht gebundene Antikörper-Enzymreagenz zu entfernen, wurde den Wells eine Substratlösung zugefügt, und Farbe entwickelte sich proportional zu der Menge an Prokollagenpeptid, die in dem ersten Schritt gebunden wurde. Die Farbentwicklung wurde gestoppt, und die Intensität der Farbe bei 450 nm wurde mit einem Mikroplattenlesegerät gemessen.
Zur Erzeugung von Proben und Kontrollen wurden subkonfluierende normale humane adulte Dermalfibroblasten (Cascade Biologics) in Standard-DMEM-Wachstumsmedium mit 10 % fetalem Kälberserum (Mediatech) bei 37 °C in 10 % CO₂ kultiviert. Die Zellen wurden 3 Tage lang mit jedem der getesteten Bestandteile und Kontrollen behandelt. Nach der Inkubierung wurde das Zellkulturmedium wie bereits erläutert aufgefangen und die Menge der Prokollagenpeptidsekretion wurde mit einem Sandwich-Enzyme-Linked Immuno-Sorbant Assay (ELISA) von Takara (Nr. MK101) quantifiziert.
Beispiel 3
(In vitro-Lamininexpressionsdaten)
Es wurde gefunden, dass Acmella oleracea-Extrakt die Produktion von Laminin in humanen Dermalfibroblasten erhöht. Die Daten und verwendete Menge an Extrakt werden in Tabelle 3 bereitgestellt. Tabelle 3

Bestandteil Erhöhte Lamininproduktion

Acmella Oleracea-Extrakt* 1,0 Gew.% Konz. = 53 % erhöhte Lamininproduktion

* Der verwendete Acmella oleracea-Extrakt war ein hydro-ethanolischer Extrakt, bei dem das Lösungsmittel eine fließfähige Mischung aus Wasser, Ethanol und 1,3-Propandiol einschloss. Das Ethanol wurde von dem resultierenden Extraktionsfluid entfernt. Der Extrakt wurde von Gattefosse (Frankreich) unter der Handelsbezeichnung GATULINE® EXPRESSION AF erhalten.
Laminin ist ein Hauptprotein in der dermal-epidermalen Übergangszone (DEJ) (die auch als Basalmembran bezeichnet wird). Die DEJ befindet sich zwischen der Dermis und der Epidermis und greift ineinander, wobei fingerartige Vorsprünge gebildet werden, die als Retezapfen bezeichnet werden. Die Zellen der Epidermis erhalten ihre Nährstoffe von den Blutgefäßen in der Dermis. Die Retezapfen vergrößern die Oberfläche der Epidermis, die diesen Blutgefäßen und den benötigten Nährstoffen ausgesetzt wird. Die DEJ sorgt für Adhäsion der beiden Gewebekompartimente und beherrscht die strukturelle Integrität der Haut. Laminin ist ein strukturelles Glykoprotein, das in der DEJ lokalisiert ist. Laminin wird als der Kleber angesehen, der die Zellen zusammenhält, und wird von dermalen Fibroblasten sekretiert, um die intra- und interzelluläre Adhäsion der epidermalen Zellen an der DEJ zu unterstützen. Die Sekretion von Laminin wurde überwacht, indem Laminin in Zellüberständen von kultivierten humanen Fibroblasten quantifiziert wurde, die 3 Tage lang mit Kulturmedium mit dem Testbestandteil (Acmella oleracea-Extrakt) behandelt wurden. Laminin wurde nach der Inkubation unter Verwendung von Immunofluoreszenzantikörpern, die gegen jedes Protein gerichtet sind, in einem Enzyme Linked Immuno-Sorbant Assay (ELISA) gemessen. Die Messungen wurden auf zelluläre metabolische Aktivität normalisiert, wie sie durch Biokonvertierung von 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS) ermittelt wurde.
Beispiel 4
(In vitro-M1VVIP-Inhibierungsdaten)

Es wurde gefunden, dass Rosmarinus officinalis-Blattextrakt in humanen Dermalfibroblasten Matrix-Metalloproteinasen (MMP) 1, 3 und 9 inhibiert. Die Daten und verwendete Menge an Extrakt werden in Tabelle 4 bereitgestellt. Tabelle 4

Bestandteil	Inhibierung der Produktion von MMP-1, 3 und 9
Rosmarinus Officinalis-Blattextrakt*	MMP-1 bei 1,0 Gew. % Konz. = -98 % Inhibierung
	MMP-1 bei 1,0 Gew. % Konz. = -39 % Inhibierung
	MMP-1 bei 1,0 Gew. % Konz. = -61 % Inhibierung

* Rosmarinus officinalis-Blattextrakt war ein eutektischer Extrakt, bei dem das Lösungsmittel, welches zur Herstellung des Extrakts verwendet worden war, eine fließfähige Mischung aus Betain, Milchsäure und Wasser war. Der Extrakt wurde von Naturex (Frankreich) unter der Handelsbezeichnung ROSEMARY EUTECTYS BLA™ erhalten.

Matrix-Metalloproteinase-l-Enzymaktivitäts- (MMP-1) Assay: MMPs sind extrazelluläre Proteasen, die infolge ihrer breiten Substratspezifität in vielen normalen und krankhaften Zuständen eine Rolle spielen. MMP1-1-Substrate schließen Kollagen IV ein. Das Enz/Chek Gelatinase/Collagenase-Assaykit (Nr. E12055) von Molecular Probes nutzt ein fluorogenes Gelatinesubstrat zur Detektierung der MMP1-Proteaseaktivität. Nach proteolytischer Spaltung zeigt sich hellgrüne Fluoreszenz und kann mit einem Fluoreszenz-Mikroplattenleser überwacht werden, um die enzymatische Aktivität zu messen. Das Enz/Chek Gelatinase/Kollagenase Assay Kit (Nr. E12055) von Invitrogen ist als in vitro-Assay zur Messung der enzymatischen Aktivität von MMP-1 konzipiert. Der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt wurde im Assay bewertet. Der Assay basiert auf der Fähigkeit von gereinigtem MMP-1-Enzym, ein fluorogenes Gelatinesubstrat abzubauen. Nachdem das Substrat durch MMP-1 spezifisch gespalten wurde, zeigt sich hellgrüne Fluoreszenz und wurde mit einem Fluoreszenz-Mikroplattenleser überwacht. Rosmarinus officinalis-Blattextrakt wurde in Gegenwart oder Abwesenheit von dem gereinigten Enzym und Substrat inkubiert, um ihre Proteaseinhibitorkapazität zu ermitteln.
Matrix-Metalloproteinase 3 und 9-Enzymaktivitäts- (MMP-3 und MMP-9) Assay: Zu den MMP-3-Substraten gehören Kollagene, Fibronectine und Laminin, während MMP-9-Substrate Kollagen VII, Fibronectine und Laminin einschließen. Dieser Assay wurde mit kolorimetrischen Arzneimittelnachweiskits von BioMol International für MMP-3 (AK-400) und MMP-9 (AK-410) zur Messung der Proteaseaktivität von MMPs mit einem Thiopeptid als chromogenem Substrat konzipiert, und zwar (Ac-PLG-[2-mercapto-4-methylpentanoyl]-LG-OC₂H₅)5,6. Die Peptidbindung an der MMP-Spaltungsstelle ist in dem Thiopeptid durch eine Thioesterbindung ersetzt. Die Hydrolyse dieser Bindung durch ein MMP produziert eine Sulfhydrylgruppe, die mit DTNB [5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoesäure), Ellmans Reagenz] unter Bildung von 2-Nitro-5-thiobenzoesäure reagiert, die durch ihre Extinktion bei 412 nm (ε=13 600 M^-1cm^-1 bei pH 6,0 und über 7) nachgewiesen werden kann. Der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt wurde im Assay bewertet.
Beispiel 5
(klinische In vivo-Daten)
Klinische in vivo-Daten zur Kombination von Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt wurden erhalten. Der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt war ein eutektischer Extrakt, bei dem das Lösungsmittel, welches zur Herstellung des Extrakts verwendet worden war, eine fließfähige Mischung aus Betain, Milchsäure und Wasser war. Der Extrakt wurde von Naturex (Frankreich) unter der Handelsbezeichnung ROSEMARY EUTECTYS BLA™ erhalten. Der verwendete Lavendula stoechas-Extrakt war ein überkritischer CO₂-Extrakt der Blüten/Blätter/Stiele von Lavendula stoechas. Der CO₂-Extrakt wurde mit Capryl-/Caprintriglyceriden gemischt. Der Extrakt wurde von Barnet Products LLC (Englewood Cliffs, New Jersey (USA)) unter der Handelsbezeichnung STOCHEY' S erhalten. Der verwendete Acmella oleracea-Extrakt war ein hydro-ethanolischer Extrakt, wobei das Lösungsmittel eine fließfähige Mischung aus Wasser, Ethanol und 1,3-Propandiol einschloss. Das Ethanol wurde von dem resultierenden Extraktionsfluid entfernt. Der Extrakt wurde von Gattefosse (Frankreich) unter der Handelsbezeichnung GATULINE® EXPRESSION AF erhalten.
Der Zweck der klinischen in vivo-Studie lag in der Beurteilung der Effizienz einer Kombination der drei Extrakte zur Muskelentspannung und Faltenreduktion über vier Wochen bei einer zwei Mal täglich erfolgenden Auftragung an 30 Individuen (n = 30). Die Kombination der drei Extrakte wurde in einem dermatologisch annehmbaren Vehikel platziert. Das dermatologisch annehmbare Vehikel war zum Testen der Effizienz der Kombination der drei Extrakte konzipiert. Es wurde angenommen, dass die anderen Bestandteile in dem dermatologisch annehmbaren Vehikel nicht in positiver oder negativer Weise zu den Ergebnissen der klinischen Daten beitrugen. Die Mengen an jedem Extrakt, die in dem dermatologisch annehmbaren Vehikel verwendet wurden, waren Rosmarinus officinalis-Blattextrakt in 1 Gew.%, Lavendula stoechas-Extrakt in 2 Gew.% und Acmella oleracea-Extrakt in 2 Gew.%.
Das Design der klinischen in vivo-Studie war eine randomisierte kontrollierte, Prüfarzt-verblindete klinische Studie. Die folgenden Parameter wurden verwendet: (1) Subjekte-Frauen im Alter zwischen 35 und 70 in gutem allgemeinem Gesundheitszustand (keine körperliche Untersuchung erforderlich), und es wurde ermittelt, dass sie einen Score von 3 bis 7 (einschließlich) auf einer 10-Punkte-Skala für mäßige Stirnrunzel/Glabellarlinien hatten, (2) Teststelle-Glabellabereich, (3) Beurteilungszeitpunkte-Basislinie (Baseline) (Woche 0), Woche 2, Woche 4 und Woche 8, (4) Testmethode-Elektromyographie (EMG) auf Muskelreaktion (mV/s): AUC (Fläche unter der Kurve) und (5) gemessene klinische Endpunkte -feine Linien und Falten und Hauttextur auf einer Skala von 0 bis 9.

1 bis 2 stellen über EMG-Testung Daten bereit, die Inhibierung der Muskelkontraktion zeigen. 3 bis 4 zeigen Daten, welche die Reduktion des Erscheinungsbildes von feinen Linien und Falten zeigen. Wie in den 1 bis 4 illustriert ist, legen die Daten nahe, dass die Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt Kontraktion der Gesichtsmuskeln reduzieren kann und das Gesamterscheinungsbild von feinen Linien und Falten reduzieren kann. Die folgende Tabelle 5 zeigt Daten, welche die EMG-Reaktion und einen klinischen Vergleich zwischen einem gut bekannten injizierbaren Neuromodulator (Botox® (OnabotulinumtoxinA)) und der Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt illustrieren. Tabelle 5

	% EMG-Reaktion (AUC)		% klinische Verbesserung der Falten
	BoTox - 5U (n = 5)**	Kombination von drei Extrakten (n = 30)	BoTox - 5U (n = 5)^**	Kombination von drei Extrakten (n = 30)
Woche 2	58 %*	11%	31 %*	1 %
Woche 4	40 %*	10%	35 %*	9%*
Woche 8	Nicht gemessen	16 %*	Nicht gemessen	19 %*

* p < 0,05 statistisch signifikante Verbesserung, verglichen mit der Basislinie.
** Die Studie mit BoTox – 5U wurde als Kontrolle zur Validierung der Methode verwendet und an 5 Individuen durchgeführt. Jedem Individuum wurden 5 Einheiten (U) Botox in die Glabellaregion verabreicht, und die % EMG-Reaktion (AUC) wurde gemessen. Dies wurde zur Standardisierung der Studie mit der genannten Kombination von Extrakten durchgeführt.

Beispiel 6
(klinische In vivo-Daten)
In einer vergleichenden klinischen Studie wurden weitere klinische in vivo-Daten zur Kombination von Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt erhalten. Der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt war ein eutektischer Extrakt, bei dem das Lösungsmittel, welches zur Herstellung des Extrakts verwendet worden war, eine fließfähige Mischung aus Betain, Milchsäure und Wasser war. Der Extrakt wurde von Naturex (Frankreich) unter der Handelsbezeichnung ROSEMARY EUTECTYS BLA™ erhalten. Der verwendete Lavendula stoechas-Extrakt war ein überkritischer CO₂-Extrakt der Blüten/Blätter/Stiele von Lavendula stoechas. Der CO₂-Extrakt wurde mit Capryl-/Caprintriglyceriden gemischt. Der Extrakt wurde von Barnet Products LLC (Englewood Cliffs, New Jersey (USA)) unter der Handelsbezeichnung STOCHEY'S erhalten. Der verwendete Acmella oleracea-Extrakt war ein hydro-ethanolischer Extrakt, wobei das Lösungsmittel eine fließfähige Mischung aus Wasser, Ethanol und 1,3-Propandiol einschloss. Das Ethanol wurde von dem resultierenden Extraktionsfluid entfernt. Der Extrakt wurde von Gattefosse (Frankreich) unter der Handelsbezeichnung GATULINE® EXPRESSION AF erhalten.
Der Zweck der vergleichenden klinischen in vivo-Studie lag in der Evaluierung der Effizienz einer Kombination der drei Extrakte zur Muskelentspannung und Faltenreduktion über vier Wochen der zwei Mal täglich erfolgenden Auftragung, wobei die Teilnehmer der experimentellen Gruppe 1 einen Mikroroller (n = 33) verwendeten, gegenüber der Auftragung durch die Teilnehmer der experimentellen Gruppe 2, die keinen Mikroroller (n = 30) verwendeten. Die Kombination der drei Extrakte wurde in einem dermatologisch annehmbaren Vehikel als Testprodukt platziert. Das dermatologisch annehmbare Vehikel war konzipiert, um die Effizienz der Kombination der drei Extrakte im Vergleich bei Auftragung mit einem Mikroroller, verglichen zu der Auftragung ohne Mikroroller, zu testen. Die Studienteilnehmer in der experimentellen Gruppe 1 verwendeten einen 1,0 mm Mikroroller. Die Studienteilnehmer trugen die Zusammensetzung, welche die drei Extrakte enthielt, morgens und abends nach der Reinigung des Gesichts mit einem Reinigungsmittel zur Körperpflege zwischen ihren Augenbrauen auf. Die Studienteilnehmer verwendeten in der experimentellen Gruppe 1 den Mikroroller 3 Mal pro Woche abends, indem der Mikroroller 4 bis 5 Mal zwischen den Augenbrauen vor und zurück gerollt wurden, wobei die Richtung bei jedem Durchgang gewechselt wurde. In beiden experimentellen Gruppen, der Gruppe 1 und der Gruppe 2, wurde über Nacht zwischen den Augenbrauen ein Okklusionspflaster (z. B. SCARAWAY®) platziert. Es wurde angenommen, dass die anderen Bestandteile in dem dermatologisch annehmbaren Vehikel nicht in positiver oder negativer Weise zu den Ergebnissen der klinischen Daten beitrugen. Die Mengen an jedem Extrakt, die in dem dermatologisch annehmbaren Vehikel verwendet wurden, waren Rosmarinus officinalis-Blattextrakt in 1 Gew.%, Lavendula stoechas-Extrakt in 2 Gew.% und Acmella oleracea-Extrakt in 2 Gew.%.
Das Design der komparativen klinischen in vivo-Studie war eine randomisierte kontrollierte, Prüfarzt-verblindete klinische Studie. Die folgenden Parameter wurden verwendet: (1) Subjekte-Frauen im Alter zwischen 35 und 70 in gutem allgemeinem Gesundheitszustand (keine körperliche Untersuchung erforderlich), und es wurde ermittelt, dass sie einen Score von 3 bis 7 (einschließlich) auf einer 10-Punkte-Skala für mäßige Stirnrunzel/Glabellarlinien hatten, (2) Teststelle-Glabellabereich, (3) Testprodukt - Frontalis; Ergänzungsprodukte - SCARAWAY® Okklusionspflaster und Mikroroller, (4) Beurteilungszeitpunkte-Basislinie (Woche 0), Woche 2, Woche 4 und Woche 8, (5) Testmethode-Elektromyographie (EMG) auf Muskelreaktion (mV/s): AUC (Fläche unter der Kurve) und (6) gemessene klinische Endpunkte -feine Linien und Falten und Hauttextur auf einer Skala von 0 bis 9.
5 bis 6 stellen Daten bereit, die die Inhibierung der Muskelkontraktion mittels EMG-Testung illustrieren, wobei die prozentuale Verbesserung zwischen der Auftragung mit einem Mikroroller und Auftragung ohne Mikroroller verglichen wird. 7 bis 8 stellen Daten bereit, die die Reduktion des Erscheinungsbildes von feinen Linien und Falten illustrieren, wobei die prozentuale Verbesserung zwischen Auftragung mit einem Mikroroller und Auftragung ohne Mikroroller verglichen wird. Wie in den 5 bis 8 illustriert ist, legen die Daten nahe, dass die Auftragung der Zusammensetzung, welche die Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt enthielt, in Kombination mit einem Mikroroller zur Förderung des Eindringens der Zusammensetzung in die Haut die Gesichtsmuskelkontraktion reduzieren kann und das Gesamterscheinungsbild von feinen Linien und Falten reduzieren kann. Es wurde ermittelt, dass die Auftragung der Zusammensetzung mit einem Mikroroller effektiv war, um eine schnellere und stärkere Reduktion der Gesichtsmuskelkontraktion nach 2, 4 und 8 Wochen zu erreichen, verglichen mit der Basislinie, und feine Linien und Falten sowie Hauttextur innerhalb von 4 Wochen reduzierte, wobei 79 % der Subjekte eine Verbesserung in sowohl den feinen Linien als auch den Falten sowie der Hautglattheit nach 8 Wochen zeigten. Es wurde des Weiteren ermittelt, dass die Auftragung der Zusammensetzung ohne einen Mikroroller noch effektiv war, um eine Reduktion der Gesichtsmuskelkontraktion nach 8 Wochen zu erreichen, und feine Linien und Falten sowie Hauttextur innerhalb von 4 Wochen reduzierte, wobei 87 % der Subjekte eine Verbesserung in sowohl den feinen Linien als auch den Falten sowie der 90 % der Hautglattheit nach 8 Wochen zeigten.
9 bis 10 stellt Daten bereit, die Verbesserung der Hauttextur/Rauheit illustrieren, wobei die prozentuale Verbesserung zwischen der Auftragung mit einem Mikroroller und Auftragung ohne Mikroroller verglichen wird. Wie in den 9 bis 10 illustriert ist, legen die Daten nahe, dass die Auftragung der Zusammensetzung, welche die Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt enthielt, in Kombination mit der Verwendung eines Mikrorollers zur Förderung des Eindringens der Zusammensetzung in die Haut die Hauttextur und Rauheit in dem Glabellarbereich nach 2, 4 und 8 Wochen verbessern kann. Es wurde ermittelt, dass 79 % der Subjekte Verbesserung in der Hautglattzeit zeigten, nachdem 8 Wochen lang die Zusammensetzung mit einem Mikroroller aufgetragen wurde. Es wurde des Weiteren ermittelt, dass die Auftragung der Zusammensetzung ohne Mikroroller nach 8 Wochen noch zur Verbesserung der Hautglattheit effektiv war.

Die folgende Tabelle 6 zeigt Daten, welche die EMG-Reaktion und einen klinischen Vergleich zwischen einem gut bekannten injizierbaren Neuromodulator (Botox® (OnabotulinumtoxinA)) und der Kombination aus Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, Lavendula stoechas-Extrakt und Acmella oleracea-Extrakt illustrieren, die mit einem Mikroroller und ohne Mikroroller aufgetragen wurde. Tabelle 6

	% EMG-Reaktion (AUC)			% klinische Verbesserung der Falten
	BoTox - 5U (n = 5)^**	Experimentelle Gruppe 1 (mit Mikroroller) (n = 33)	Experimentelle Gruppe 2 (ohne Mikroroller) (n = 30)	BoTox - 5U (n = 5)^**	Experimentelle Gruppe 1 (mit Mikroroller) (n = 33)	Experimentelle Gruppe 2 (ohne Mikroroller) (n = 30)
Woche 2	58%*	16%*	11%	31%*	3%	1%
Woche 4	40%*	16%*	10%	35%*	9%*	9%*
Woche 8	Nicht gemessen	21%*	16%*	Nicht gemessen	18%*	19%*

* p < 0,05 statistisch signifikante Verbesserung, verglichen mit der Basislinie.
** Die BoTox - 5U-Studie wurde als Positivkontrolle beim Vergleich der experimentellen Gruppe 1 und der experimentellen Gruppe 2 verwendet und wurde an 5 Individuen durchgeführt. Jedem Individuum wurden 5 Einheiten (U) Botox in die Glabellaregion verabreicht, und die % EMG-Reaktion (AUC) wurde gemessen. Dies wurde zur Standardisierung der Studie mit der genannten Kombination von Extrakten durchgeführt.

Beispiel 7
(Weitere Assays)
Weitere Assays, die verwendet werden können, um die Wirksamkeit von beliebigen der Bestandteile oder beliebiger Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit der Kombination von Bestandteilen zu bestimmen, die in der Beschreibung und den Ansprüchen offenbart sind, können nach Verfahren ermittelt werden, die Fachleuten bekannt sind. Anschließend werden nicht-einschränkende Assays beschrieben, die im Kontext der vorliegenden Erfindung verwendet werden können. Es ist zu erkennen, dass andere Testverfahren verwendet werden können, einschließlich beispielsweise objektiver und subjektiver Verfahren.
Antioxidans (AO)-Assay: Ein in vitro-Bioassay, der die gesamte Antioxidanskapazität von einem beliebigen der Bestandteile, einer beliebigen Kombination der Bestandteile oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen misst. Der Assay basiert auf der Fähigkeit von Antioxidantien in der Probe, die Oxidation von ABTS^® (2,2'-Azino-di-[3-ethylbenzthiazolinsulfonat]) zu ABTS^® + mittels Metmyoglobin zu inhibieren. Das Antioxidanssystem lebender Organismen schließt Enzyme, wie Superoxiddismutase, Catalase und Glutathionperoxidase, Makromoleküle wie Albumin, Ceruloplasmin und Ferritin, sowie eine Gruppe kleiner Moleküle ein, einschließlich Ascorbinsäure, α-Tocopherol, β-Karotin, reduziertem Glutathion, Harnsäure und Bilirubin. Die Summe der endogenen und aus Nahrungsmitteln stammenden Antioxidantien repräsentiert die gesamte Antioxidansaktivität der extrazellulären Flüssigkeit. Das Zusammenwirken aller unterschiedlichen Antioxidantien sorgt für größeren Schutz vor Angriff durch reaktive Sauerstoff- oder Stickstoffradikale als jegliche Einzelverbindung allen. Die gesamte Antioxidanskapazität kann somit relevantere biologische Informationen enthalten, verglichen mit denjenigen, die durch die Messung individueller Komponenten erhalten werden, da der kumulative Effekt aller in Plasma und Körperflüssigkeiten vorhandenen Antioxidantien berücksichtigt wird. Die Kapazität der Antioxidantien in der Probe zur Verhinderung der ABTS-Oxidation wird mit derjenigen von Trolox, einem wasserlöslichen Tocopherolanalogon, verglichen und wird als molare Troloxäquivalente quantifiziert. Das Antioxidans-Kapazitätskit (Anti-Oxidant Capacity Kit Nr. 709001 von Cayman Chemical (Ann Arbor, Michigan, USA) kann als in vitro-Bioassay verwendet werden, um die Gesamtantioxidanskapazität von jedwedem der aktiven Bestandteile, einer beliebigen Kombination der Bestandteile oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen zu messen. Das Protokoll kann sich nach den Empfehlungen des Herstellers richten.
ORAC-Assay: Die Sauerstoffradikalabsorptions- (oder Extinktions)-Kapazität (Oxygen Radical Absorption (Absorbance) Capacity, ORAC) von einem beliebigen der aktiven Bestandteile, einer beliebigen Kombination der Bestandteile oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen kann auch beurteilt werden, indem die Antioxidansaktivität dieser Bestandteile oder Zusammensetzungen gemessen wird. Antioxidansaktivität gibt eine Fähigkeit an, Oxidationsmittel (Oxidantien) zu reduzieren. Dieser Assay quantifiziert den Grad und die Zeitdauer, die zur Inhibierung der Wirkung eines Oxidationsmittels, wie Sauerstoffradikalen, nötig sind, die bekanntermaßen Zellschäden verursachen (z. B. an Hautzellen). Der ORAC-Wert von beliebigen der aktiven Bestandteile, beliebiger Kombination der Bestandteile oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen kann nach Methoden ermittelt werden, die Fachleuten bekannt sind (siehe US Veröffentlichungsnummern 2004/0109905 und 2005/0163880 , sowie im Handel erhältlichen Kits, wie Zen-Bio ORAC Anti-oxidant Assay Kit (Nr. AOX-2)). Das Zen-Bio ORAC Anti-oxidant Assay Kit misst den Verlust der Fluoreszenz von Fluoreszein im Zeitverlauf durch die Peroxylradikalbildung infolge des Abbaus von AAPH (2,2'-Azobis-2-methylpropanimidamid-dihydrochlorid). Trolox, ein wasserlösliches Vitamin E-Analogon, dient als positive Kontrolle zur Inhibierung des Zerfalls von Fluoreszeinn in dosisabhängiger Weise.
Cyclooxygenase (COX)-Assay: Ein in vitro-Cyclooxygenase-1 und -2 (COX-1, - 2)-Inhibitions-Assay. COX ist ein bifunktionales Enzym, das sowohl Cyclooxygenase als auch Peroxidaseaktivität zeigt. Die Cyclooxygenaseaktivität wandelt Arachidonsäure in ein Hydroperoxyendoperoxid (Prostaglandin G2, PGG2) um, und die Peroxidasekomponente reduziert das Endoperoxid (Prostaglandin H2, PGH2) zu dem entsprechenden Alkohol, dem Vorläufer der Prostaglandine, Thromboxane und Prostacycline. Dieser COX-Inhibitor-Screening-Assay misst die Peroxidasekomponente von Cyclooxygenasen. Die Peroxidaseaktivität wird im Assay kolorimetrisch beurteilt, indem das Erscheinen von oxidiertem N,N,N',N'-Tetramethyl-p-phenylendiamin (TMPD) überwacht wird. Dieser Inhibitor-Screening-Assay schließt sowohl COX-1 als auch COX-2-Enzyme ein, um auf isozymspezifische Inhibitoren zu screenen. Der kolorimetrische COX (Ovin) Inhibitor-Screening-Assay (Nr. 760111, Cayman Chemical) kann verwendet werden, um die Wirkungen von jeder/jedem der aktiven Bestandteile, einer beliebigen Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen auf die Aktivität von gereinigtem Cyclooxygenase-Enzym (COX-1 oder COX-2) zu analysieren. Gereinigtes Enzym, Häm und Testextrakte können nach Anweisungen des Herstellers in Assay-Puffer gemischt und unter Schütteln 15 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert werden. Nach der Inkubation können Arachidonsäure und kolorimetrisches Substrat zugefügt werden, um die Reaktion zu initiieren. Die Farbprogression kann durch kolorimetrische Plattenablesung bei 590 nm beurteilt werden. Die prozentuale Inhibierung der COX-1 oder COX-2-Aktivität kann verglichen mit unbehandelten Kontrollen berechnet werden, um die Fähigkeit von Testextrakten zu ermitteln, die Aktivität von gereinigtem Enzym zu inhibieren.
Lipoxygenase (LO)-Assay: Ein in vitro-Lipoxygenase (LO)-Inhibierungs-Assay. LOs sind kein Häm-Eisen enthaltende Dioxygenasen, die die Addition von molekularem Sauerstoff an Fettsäuren katalysieren. Linoleat und Arachidonat sind in Pflanzen und Tieren die Hauptsubstrate für LOs. Arachidonsäure kann dann in Hydroxyeicosatriensäure (HETE)-Derivate überführt werden, die anschließend in Leukotriene überführt werden, potente Entzündungsmediatoren. Dieser Assay bietet eine genaue und zweckmäßige Methode zum Screening auf Lipoxygenase-Inhibitoren, indem die Hydroperoxide gemessen werden, die aus der Inkubation einer Lipoxygenase (5, 12 oder 15-LO) mit Arachidonsäure erzeugt werden. Das kolorimetrische LO-Inhibitor-Screeningkit (Nr. 760700, Cayman Chemical) kann verwendet werden, um die Fähigkeit jedes der Wirkstoffe, irgendeiner der Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen zu ermitteln, die Enzymaktivität zu inhibieren. Gereinigte 15-Lipoxygenase und Testbestandteile können in Assay-Puffer gemischt und unter Schütteln 10 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert werden. Nach der Inkubation kann Arachidonsäure zugegeben werden, um die Reaktion zu initiieren, und die Mischungen können weitere 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert werden. Kolorimetrisches Substrat kann zugefügt werden, um die Katalyse zu beenden, und die Farbprogression kann durch Fluoreszenz-Plattenablesung bei 490 nm beurteilt werden. Die prozentuale Inhibierung der Lipoxygenaseaktivität kann im Vergleich zu unbehandelten Kontrollen berechnet werden, um die Fähigkeit jedes der aktiven Bestandteile, einer beliebigen Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen zu ermitteln, die Enzymaktivität zu inhibieren.
B16-Pigmentierungs-Assay: Melanogenese ist der Prozess, nach dem Melanozyten Melanin produzieren, ein natürlich produziertes Pigment, das Haut, Haar und Augen Farbe verleiht. Das Inhibieren der Melanogenese ist vorteilhaft, um das Dunklerwerden der Haut zu verhindern und dunkle Stellen aufzuhellen, die mit dem Alterungsprozess zusammenhängen. Dieser Bioassay nutzt B16-F1-Melanozyten (ATCC), eine immortalisierte Maus-Melanom-Zelllinie, um die Wirkung von Verbindungen auf die Melanogenese zu analysieren. Der Endpunkt dieses Assays ist eine spektrophotometrische Messung der Melaninproduktion und zellulären Lebensfähigkeit. B16-F1-Melanozyten können in Standard-DMEM-Wachstumsmedium mit 10 % fötalem Kälberserum (Mediatech) bei 37°C in 10 % CO₂ kultiviert und danach mit irgendeinem der aktiven Bestandteile, irgendwelchen Kombinationen von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen 6 Tage lang behandelt werden. Die Melaninsekretion wird nach der Inkubation durch Extinktion bei 405 nm gemessen, und die zelluläre Lebensfähigkeit wurde quantifiziert.
Elastinstimulations-Assay: Elastin ist ein Bindegewebeprotein, das dazu beiträgt, dass die Haut nach dem Recken oder Kontrahieren die Form wieder annimmt. Elastin ist auch ein wichtiges lasttragendes Protein, das an Stellen verwendet wird, in denen mechanische Energie gespeichert werden muss. Elastin wird hergestellt, indem viele lösliche Tropoelastinproteinmoleküle in einer Reaktion verknüpft werden, die durch Lysyloxidase katalysiert wird. Elastinsekretion und Elastinfasern können in kultivierten humanen Fibroblasten überwacht werden, indem die kultivierten humanen Fibroblasten mit Immunofluoreszenzantikörpern angefärbt werden, die gegen Elastin gerichtet sind.
Laminin- und Fibronectinstimulations-Assay: Laminin und Fibronectin sind wesentliche Proteine in der dermal-epidermalen Übergangszone (DEJ) (die auch als Basalmembran bezeichnet wird). Die DEJ befindet sich zwischen der Dermis und der Epidermis und greift ineinander, wobei fingerartige Vorsprünge gebildet werden, die als Retezapfen bezeichnet werden. Die Zellen der Epidermis erhalten ihre Nährstoffe von den Blutgefäßen in der Dermis. Die Retezapfen vergrößern die Oberfläche der Epidermis, die diesen Blutgefäßen und den benötigten Nährstoffen ausgesetzt wird. Die DEJ sorgt für Adhäsion der beiden Gewebekompartimente und beherrscht die strukturelle Integrität der Haut. Laminin und Fibronectin sind zwei strukturelle Glykoproteine, die in der DEJ lokalisiert sind. Laminin und Fibronectin werden als der Kleber angesehen, der die Zellen zusammenhält, daher werden sie von dermalen Fibroblasten sekretiert, um die intra- und interzelluläre Adhäsion der epidermalen Zellen an der DEJ zu unterstützen. Die Sekretion von Laminin und Fibronectin kann überwacht werden, indem Laminin und Fibronectin in Zellüberständen von kultivierten humanen Fibroblasten quantifiziert werden, die 3 Tage lang mit Kulturmedium mit oder ohne Testbestandteil (en) behandelt wurden. Der Gehalt an Laminin und Fibronectin kann nach der Inkubation unter Verwendung von Immunofluoreszenzantikörpern, die gegen jedes Protein gerichtet sind, in einem Enzyme Linked Immuno-Sorbant Assay (ELISA) gemessen werden. Die Messungen werden auf zelluläre metabolische Aktivität normalisiert, wie sie durch Biokonvertierung von 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS) ermittelt wird.
Tumornekrosefaktor Alpha (TNF-α) Assay: Der Prototypligand der TNF-Superfamilie, TNF-α, ist ein pleiotropes Zytokin, das bei Entzündung eine zentrale Rolle spielt. Der Anstieg seiner Expression steht im Zusammenhang mit einer Aufwärtsregulierung der proentzündlichen Aktivität. Dieser Bioassay kann verwendet werden, um die Wirkung von einem beliebigen der aktiven Bestandteile, einer beliebigen Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen auf die Produktion von TNF-α durch humane epidermale Fibroblasten zu untersuchen. Der Endpunkt dieses Assays kann eine spektrophotometrische Messung sein, die die Anwesenheit von TNF-α und die zelluläre Lebensfähigkeit widerspiegelt. Der Assay verwendet die quantitative Sandwich-Enzym-Immunoassaytechnik, durch die ein für TNF-α spezifischer monoklonaler Antikörper als Beschichtung vorab auf eine Mikroplatte aufgebracht worden ist. Standards und Proben können in die Wells pipettiert werden, und jegliches vorhandene TNF-α wird durch den immobilisierten Antikörper gebunden. Nachdem jegliche ungebundenen Substanzen abgewaschen wurden, kann den Wells ein enzymverknüpfter polyklonaler Antikörper zugefügt werden, der für TNF-α spezifisch ist. Nach einem Waschvorgang, um jegliches nicht gebundene Antikörper-Enzymreagenz zu entfernen, kann den Wells eine Substratlösung zugefügt werden, und Farbe entwickelte sich proportional zu der Menge an TNF-α, die in dem ersten Schritt gebunden wurde, wobei ein Mikroplattenleser zur Detektierung bei 450 nm verwendet wird. Die Farbentwicklung kann gestoppt und die Farbintensität gemessen werden. Subkonfluente, normale, humane adulte Keratinozyten (Cascade Biologics), kultiviert in EPILIFE™ Standardwachstumsmedium (Cascade Biologics) bei 37°C in 5 % CO₂, können 6 Stunden lang mit Phorbol-12-myristat-13-acetat (PMA, 10 ng/ml, Sigma Chemical, Nr. P1585-1MG) und einem beliebigen der aktiven Bestandteile, einer beliebigen Kombination der Bestandteile oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen 6 Stunden lang behandelt werden. Es ist gezeigt worden, dass PMA einen drastischen Anstieg der TNF-α-Sekretion herbeiführt, der 6 Stunden nach der Behandlung einen Peak erreicht. Nach der Inkubierung kann das Zellkulturmedium aufgefangen und die Menge der TNF-α-Sekretion mit einem Sandwich-Enzyme-Linked Immuno-Sorbant Assay (ELISA) von R&D Systems (Nr. DTA00C) quantifiziert werden.
Pilz-Tyrosinaseaktivitäts-Assay: Bei Säugerzellen katalysiert Tyrosinase zwei Stufen in der mehrstufigen Biosynthese von Melaninpigmenten aus Tyrosin (und aus der Polymerisation von Dopachrom). Tyrosinase befindet sich in Melanozyten und produziert Melanin (aromatische Chinonverbindungen), die Haut, Haar und Augen Farbe verleihen. Gereinigte Pilz-Tyrosinase (Sigma) kann mit ihrem Substrat L-Dopa (Fisher) in Gegenwart oder Abwesenheit von jedem der aktiven Bestandteile, einer beliebigen Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen inkubiert werden. Die Pigmentbildung kann durch kolorimetrische Plattenablesung bei 490 nm beurteilt werden. Die prozentuale Inhibierung der Pilz-Tyrosinaseaktivität kann verglichen mit unbehandelten Kontrollen berechnet werden, um die Fähigkeit von Testextrakten zu er- mitteln, die Aktivität von gereinigtem Enzym zu inhibieren. Die Inhibierung des Testextrakts kann mit derjenigen von Kojisäure (Sigma) verglichen werden.
Elastase-Assay: Der ENZCHEK® Elastase-Assay (Kit Nr. E-12056) von Molecular Probes (Eugene, Oregon, USA) kann als in vitro-Enzyminhibierungs-Assay verwendet werden, um die Inhibierung der Elastaseaktivität für jeden der Wirkstoffe, eine beliebige der Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen zu messen. Das EnzChek-Kit enthält lösliches Rinderhalsligament-Elastin, das mit Farbstoff markiert werden kann, so dass die Fluoreszenz des Konjugats gequencht werden kann. Das nicht fluoreszierende Substrat kann von Elastase oder anderen Proteasen verdaut werden, um hochfluoreszierende Fragmente zu ergeben. Der resultierende Fluoreszenzanstieg kann mit einem Fluoreszenz-Mikroplattenleser überwacht werden. Verdauungsprodukte aus dem Elastinsubstrat haben Absorptionsmaxima bei ~505 nm und Fluoreszenzemissionsmaxima bei ~515 nm. Das Peptid, N-Methoxysuccinyl-Ala-Ala-Pro-Val-Chlormethylketon, kann als selektiver kollektiver Inhibitor der Elastase verwendet werden, wenn das EnzChek Elastase-Assay-Kit zum Screening auf Elastaseinhibitoren eingesetzt wird.
Ölkontroll-Assay: Ein Assay zur Messung der Reduktion der Talgsekretion aus Talgdrüsen und/oder der Reduktion der Talgproduktion aus Talgdrüsen kann beurteilt werden, indem Standardtechniken verwendet werden, die Fachleuten bekannt sind. In einem Fall kann die Stirn verwendet werden. Jeder der aktiven Bestandteile, eine beliebige Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen kann ein oder zwei Mal pro Tag für einen festgelegten Zeitraum (z. B. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 oder mehr Tage) auf die Stirn aufgetragen werden, während ein weiterer Teil der Stirn nicht mit der Zusammensetzung behandelt wird. Nachdem der festgesetzte Zeitraum von Tagen vergangen ist, kann die Talgsekretion durch Aufbringen von feinem Löschpapier auf die behandelte und unbehandelte Haut der Stirn beurteilt werden. Dies erfolgt, indem zuerst mit feuchten und trockenen Tüchern jeglicher Talg von den behandelten und unbehandelten Bereichen entfernt wird. Dann kann Löschpapier auf die behandelten und unbehandelten Bereiche der Stirn aufgebracht werden, und um die Stirn kann ein Elastikband angeordnet werden, um das Löschpapier sanft auf die Haut zu drücken. Nach 2 Stunden können die Löschpapiere entfernt, trocknen gelassen und dann durchleuchtet werden. Dunkleres Löschpapier korreliert mit mehr Talgsekretion (oder helleres Löschpapier korreliert mit reduzierter Talgsekretion).
Erythem-Assay: Ein Assay zur Messung der Reduktion der Hautröte kann mit einem Minolta-Chromameter beurteilt werden. Das Hauterythem kann induziert werden, indem auf den Unterarm eines Probanden eine 0,2-prozentige Lösung von Natriumdodecylsulfat aufgetragen wird. Der Bereich wird 24 Stunden lang mit einem Okklusionspflaster geschützt. Das Pflaster wird nach 24 Stunden entfernt, und die durch die Reizung induzierte Röte kann mit den a*-Werten des Minolta-Chromameters bewertet werden. Der a*-Wert misst Veränderungen der Hautfarbe im roten Bereich. Unmittelbar nach der Ablesung wird der Bereich mit den aktiven Bestandteilen, einer beliebigen Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen behandelt. In regelmäßigen Intervallen können Wiederholungsmessungen durchgeführt werden, um die Fähigkeit der Formulierung zu ermitteln, Röte und Reizung zu reduzieren.
Hautfeuchtigkeits/Hydratisierungs-Assay: Hautfeuchtigkeits/Hydratisierungsvorteile können durch Impedanzmessungen mit dem Nova Dermal Phasenmeter gemessen werden. Das Impedanzmeter misst Änderungen des Hautfeuchtegehalts. Die Außenschicht der Haut hat eigene elektrische Eigenschaften. Wenn Haut trocken ist, leitet sie die Elektrizität sehr schlecht. Mit zunehmender Hydratisierung nehmen die Leitfähigkeitsergebnisse zu. Änderungen der Hautimpedanz (im Zusammenhang mit Leitfähigkeit) können demnach verwendet werden, um Änderungen der Hauthydratisierung zu bewerten. Das Gerät kann nach den Instrumentenanweisungen für jeden Testtag kalibriert werden. Temperatur und relative Feuchtigkeit können auch aufgezeichnet werden. Die Probanden können wie folgt bewertet werden: Vor der Messung können sie sich in einem Raum mit definierter Feuchtigkeit (z. B. 30-50 %) und Temperatur (z. B. 68-72°F (20-22°C)) äquilibrieren. An jeder Seite des Gesichts können drei separate Impedanzablesungen erfolgen, aufgezeichnet und gemittelt werden. Am Impedanzmeter kann die Einstellung T5 verwendet werden, die die Impedanzwerte alle fünf Sekunden bei Anwendung auf das Gesicht mittelt. Änderungen können mit statistischer Varianz und Signifikanz berichtet werden. Jeder der aktiven Bestandteile, eine beliebige von der Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit in der Beschreibung offenbarten Kombinationen können im Assay gemäß diesem Verfahren beurteilt werden.
Assay zur Hautklarheit und Reduktion von Sommersprossen und Altersflekken: Hautklarheit und Reduktion von Sommersprossen und Altersflecken können mit einem Minolta-Chromameter beurteilt werden. Änderungen der Hautfarbe können mit den a*-Werten des Minolta-Chromameters bewertet werden, um das Reizpotential infolge der Produktbehandlung zu bestimmen. Der a*-Wert misst Veränderungen der Hautfarbe im roten Bereich. Dies wird verwendet, um zu ermitteln, ob jeder der aktiven Bestandteile, eine beliebige von der Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen Reizung induzieren. Die Messungen können auf jeder Seite des Gesichts erfolgen und als linke und rechte Gesichtswerte gemittelt werden. Die Hautklarheit kann auch mit dem Minolta-Meter gemessen werden. Die Messung ist eine Kombination der a*, b und L-Werte des Minolta-Meters und ist verknüpft mit der Helligkeit der Haut und korreliert gut mit Glattheit und Hydratisierung der Haut. Die Hautablesung erfolgt wie oben. Die Hautklarheit kann in einem nicht-einschränkenden Aspekt als L/C beschrieben werden, wobei C Chroma ist und definiert ist als (a²+ b² )^1/2.
Assay zu Hauttrockenheit, feinen Oberflächenlinien, Glattheit der Haut und Hautton: Hauttrockenheit, feine Oberflächenlinien, Hautglattheit und Hautton können mit klinischen Einstufungstechniken beurteilt werden. Die klinische Einstufung der Hauttrockenheit kann beispielsweise nach der fünfstufigen Standard-Kligman-Skala erfolgen: (0) Haut ist weich und feucht, (1) Haut sieht normal aus ohne sichtbare Trockenheit, (2) Haut fühlt sich bei Berührung etwas trocken an ohne sichtbare Schuppung, (3) Haut fühlt sich trocken und rau an und hat ein weißliches Aussehen mit etwas Schuppung, und (4) Haut fühlt sich sehr trocken und rau an und hat ein weißliches Aussehen mit Schuppung. Die Beurteilungen können unabhängig durch zwei Kliniker erfolgen und gemittelt werden.
Assay zur klinischen Einstufung des Hauttons: Die klinische Einstufung des Hauttons kann nach einer zehnpunktigen analogen numerischen Skala erfolgen: (10) ebenmäßige Haut mit einheitlicher rosabräunlicher Farbe. Keine dunklen, erythemischen oder schuppigen Stellen bei Untersuchung mit einer handgeführten Lupe. Die Mikrotextur der Haut ist bei Berührung sehr gleichförmig, (7) ebenmäßiger Hautton ohne Vergrößerung beobachtet. Keine schuppigen Stellen, aber leichte Verfärbungen durch Pigmentierung oder Erythem. Keine Verfärbungen von mehr als 1 cm Durchmesser, (4) sowohl Hautverfärbung als auch ungleichförmige Textur leicht wahrnehmbar. Leichte Schuppigkeit. Haut in einigen Bereichen bei Berührung rau, und (1) uneinheitliche Hautfärbung und -textur. Zahlreiche schuppige und verfärbte Bereiche, entweder hypopigmentiert, erythemisch oder dunkle Flekken. Große Bereiche von ungleichförmiger Farbe mit mehr als 1 cm Durchmesser. Die Beurteilungen wurden unabhängig durch zwei Kliniker durchgeführt und gemittelt.
Assay zur klinischen Einstufung der Hautglattheit: Die klinische Einstufung der Hautglattheit kann nach einer zehnpunktigen analogen numerischen Skala erfolgen: (10) glatt, Haut ist feucht und schimmert, kein Widerstand, wenn der Finger über die Oberfläche gezogen wird, (7) ziemlich glatt, leichter Widerstand, (4) rau, sichtbar verändert, Widerstand beim Darüberreiben, und (1) raue, schuppige, uneinheitliche Oberfläche. Die Beurteilungen wurden unabhängig durch zwei Kliniker durchgeführt und gemittelt.
Hautglattheit und Faltenreduktions-Assay nach Verfahren, die in Packman et al., 1978) offenbart sind: Hautglattheit und Faltenreduktion können auch visuell nach den in Packman et al. (1978) offenbarten Verfahren beurteilt werden. Bei jeder Visite des Probanden werden beispielsweise die Tiefe, Flachheit und Gesamtzahl der oberflächlichen Gesichtslinien (SFL) jedes Probanden sorgfältig beurteilt und aufgezeichnet. Ein Zahlen-Score wurde erhalten, indem ein Zahlenfaktor mit einem Faktor für Tiefe/Breite/Länge multipliziert wurde. Für den Augenbereich und Mundbereich (linke und rechte Seiten) wurden Scores erhalten und als Gesamtfalten-Score zusammengezählt.
Hautstraffheits-Assay mit einem Hargens-Ballistometer: Die Hautstraffheit kann mit einem Hargens-Ballistometer gemessen werden, einem Gerät, das die Elastizität und Straffheit der Haut beurteilt, indem ein kleiner Körper auf die Haut fallen gelassen und dessen ersten beiden Abprall-Peaks aufgezeichnet werden. Für die Ballistometrie wurde eine kleine leichte Sonde mit einer relativ stumpfen Spitze (4 mm² Kontaktfläche) verwendet. Die Sonde dringt etwas in die Haut ein und führt zu Messungen, die von den Eigenschaften der äußeren Hautschichten abhängen, einschließlich des Stratum corneum und der äußeren Epidermis und einigen der Dermalschichten.
Hautweichheit/Geschmeidigkeits-Assay mit einem Gaslager-Elektrodynamometer: Hautweichheit/Geschmeidigkeit können mit dem Gaslager-Elektrodynamometer beurteilt werden, einem Instrument, welches die Spannungs/Dehnungs-Eigenschaften der Haut misst. Die viskoelastischen Eigenschaften der Haut korrelieren mit der Hautfeuchtigkeit. Messungen können an der festgelegten Stelle des Wangenbereichs erhalten werden, indem die Sonde mit doppelseitigem Klebeband an der Hautoberfläche befestigt wird. Eine Kraft von annähernd 3,5 g kann parallel zu der Hautoberfläche angelegt werden, und die Hautverschiebung wird genau gemessen. Die Geschmeidigkeit der Haut kann dann berechnet werden und wird als DSR angegeben (dynamische Federkonstante in g/mm).
Assay zum Erscheinungsbild von Linien und Falten mit Replikas: Das Erscheinungsbild von Linien und Falten auf der Haut kann mit Replikas beurteilt werden, die der Abdruck der Hautoberfläche sind. Es kann silikongummiartiges Material verwendet werden. Die Replika kann durch Bildanalyse analysiert werden. Änderungen der Sichtbarkeit von Linien und Falten lassen sich objektiv quantifizieren, indem Silikonreplikas vom Gesicht des Probanden genommen und die Replikabilder mit einem Computer-Bildanalysesystem analysiert werden. Replikas können vom Augenbereich und dem Halsbereich genommen und mit einer Digitalkamera mit einer Beleuchtung mit flachem Einfallwinkel fotografiert werden. Die Digitalbilder können mit einem Bildverarbeitungsprogramm analysiert werden, und der Bereich der mit Falten oder feinen Linien bedeckten Replikas wird dann ermittelt.
Assay zur Oberflächenkontur der Haut nach einem Profilometer/Griffel-Verfahren: Die Oberflächenkontur der Haut kann nach dem Profilometer/Griffelverfahren gemessen werden. Hierzu wird entweder mit einem Licht über die Replikaoberfläche geleuchtet oder ein Griffel über diese gezogen. Die vertikale Verschiebung des Griffels kann über einen Abstandsmesswertwandler in einen Computer eingespeist werden, und nach dem Scannen einer festen Länge der Replika kann eine Querschnittanalyse des Hautprofils als zweidimensionale Kurve generiert werden. Dieser Scan kann mehrmals entlang einer festen Achse wiederholt werden, um ein simuliertes 3D-Bild der Haut zu generieren. Es lassen sich zehn statistische Schnitte der Replikas nach der Griffeltechnik erhalten und kombinieren, um Durchschnittswerte zu generieren. Die interessierenden Werte beinhalten Ra, das arithmetische Mittel aller Rauheits (Höhen)-Werte, die durch Integrieren der Profilhöhe relativ zu der mittleren Profilhöhe berechnet werden. Rt ist der maximale vertikale Abstand zwischen dem höchsten Peak und dem tiefsten Tal, und Rz ist die mittlere Peak-Amplitude minus der mittleren Peak-Höhe. Die Werte werden als kalibrierter Wert in mm angegeben. Die Geräte sollten vor jeder Verwendung durch Scannen von Metallstandards mit bekannten Werten standardisiert werden. Der Wert für Ra kann nach der folgenden Gleichung berechnet werden: Ra = Standardisierte Rauheit, Im = die (Scan)-Länge in Querrichtung und y = der Absolutwert der Position des Profils relativ zu der mittleren Profilhöhe (x-Achse).
MELANODERM™-Assay: In anderen nicht-einschränkenden Aspekten kann die Wirksamkeit von jedem der aktiven Bestandteile, einer beliebigen Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen unter Verwendung eines Hautanalogons, wie beispielsweise MELANODERM™, beurteilt werden. Melanozyten, eine der Zellen des Hautanalogons, werden positiv gefärbt, wenn sie L-Dihydroxyphenylalanin (L-DOPA), einem Vorläufer von Melanin, ausgesetzt werden. Das Hautanalogon, MELANODERM™, kann mit einer Vielfalt von Basismaterialien behandelt werden, die jeden der Wirkstoffe, eine beliebige von der Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen enthalten, oder mit dem Basismaterial allein als Kontrolle. Alternativ kann eine unbehandelte Probe des Hautanalogons als Kontrolle verwendet werden.
Produktion von Filaggrin: Änderungen in der Produktion von Filaggrin in Keratinozyten infolge von jedem der Wirkstoffe, einem beliebigen von der Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen können gemessen werden. Filaggrin ist der Vorläufer des natürlichen Befeuchtungsfaktors (Natural Moisturizing Factor, NMF) der Haut. Gesteigerter NMF steigert den Feuchtigkeitsgehalt der Haut. Die Produktion von Filaggrin in behandelten und unbehandelten Keratinozyten kann mit einem Bioassay ermittelt werden, der die Filaggrinkonzentration in Zelllysaten von Keratinozyten analysiert. Ein nicht-einschränkendes Beispiel für einen Bioassay, der zur Quantifizierung der Filaggrinproduktion verwendet werden kann, ist das PROTEINSIMPLE® SIMON™ Western Blotting-Protokoll. Normale humane Epidermalkeratinozyten (NHEK) werden in EPI-200-Mattek Epilife® Wachstumsmedium mit Calcium von Life Technologies (M-EP-500-CA) gezüchtet. NHEK werden über Nacht bei 37 °C in 5 % CO₂ vor der Behandlung in Wachstumsmedium inkubiert. NHEK werden dann in Wachstumsmedium mit 1 % Testverbindung/Extrakt oder ohne Verbindung/Extrakt (Negativkontrolle) 24 bis 36 Stunden lang inkubiert. Die NHEK können dann gewaschen, aufgefangen und auf Eis oder kälter verwahrt werden, bis sie auf Eis unter Verwendung eines Lysepuffers und Schallbehandlung lysiert werden. Die Proteinkonzentrationen der Proben können ermittelt und verwendet werden, um die Proben zu normalisieren. Die Lysate können bis zur Verwendung in dem Quantifizierungs-Assay bei -80°C aufbewahrt werden.
Der PROTEINSIMPLE® SIMON™ Western Blotting-Bioassay verwendet eine quantitative Western Blotting-Immunoassay-Technik, die einen Antikörper nutzt, der für Filaggrin spezifisch ist, um Filaggrin in den Testproben quantitativ zu detektieren. Zellproben werden lysiert und auf Proteinkonzentration normalisiert. Normalisierte Proben und Molekulargewichtstandards können dann auf ein denaturiertes Proteintrenngel, das mit Kapillarelektrophorese arbeitet, geladen und laufen gelassen werden. Die Proteine werden in dem Gel immobilisiert und immunosondiert, wobei ein für Filaggrin spezifischer primärer Antikörper verwendet wird. Die immobilisierten Proteine können dann mit einem enzymverknüpften Detektierungsantikörper immunosondiert werden, der an den primären Antikörper bindet. Dann kann den immobilisierten Proteinen eine Chemilumineszenzsubstratlösung zugefügt werden, um die Entwicklung von Chemilumineszenz proportional zu der Menge an Filaggrin zu ermöglichen, die in der Immobilisierung gebunden sind. Die Chemilumineszenzentwicklung wird zu einer bestimmten Zeit gestoppt, und die Intensität des Chemolumineszenzsignals kann gemessen und mit positiven und negativen Kontrollen verglichen werden.
Produktion von Occludin: Änderungen in der Produktion von Occludin in Keratinozyten infolge von jedem der Wirkstoffe, einer beliebigen von der Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen können gemessen werden. Occludin ist ein Protein, das für die Formulierung von Tight Junctions und die Feuchtigkeitsbarrierefunktion der Haut entscheidend ist. Ein nicht-einschränkendes Beispiel dafür, wie die Produktion von Occludin in behandelten und unbehandelten Keratinozyten ermittelt werden kann, ist die Verwendung eines Bioassays, der die Occludinkonzentration in Keratinozytenzelllysaten analysiert. Der Bioassay kann unter Verwendung des PROTEINSIMPLE® SIMON™ Western Blotting-Protokolls durchgeführt werden. Bei den Proben können adulte humane Epidermalkeratinozyten (HEKa) von Life Technologies (C-005-5C) 24 Stunden lang bei 37°C und 5 % CO₂ in EPILIFE™-Wachstumsmedium mit Calcium von Life Technologies (M-EP-500-CA) gezüchtet werden, das mit Keratinozytenwachstumszusatz (Keratinocyte Growth Supplement, HKGS) von Life Technologies (S-101-5) versetzt wurde. HEKa werden dann für 24 bis 48 Stunden in Wachstumsmedium mit Testverbindung/Extrakt, ohne Verbindung/Extrakt für Negativkontrolle, oder mit 1 mM CaCl₂ für Positivkontrollen inkubiert. Die HEKa werden dann gewaschen, aufgefangen und auf Eis oder kälter verwahrt, bis sie auf Eis unter Verwendung eines Lysepuffers und Schallbehandlung lysiert werden. Die Proteinkonzentrationen der Proben können ermittelt und verwendet werden, um die Proben zu normalisieren. Die Lysate werden bis zur Verwendung in dem Bioassay bei -80°C aufbewahrt.
Der PROTEINSIMPLE® SIMON™ Western Blotting-Bioassay verwendet eine quantitative Western Blotting-Immumnoassay-Technik, die einen Antikörper nutzt, der für Occludin spezifisch ist, um Occludin in den Testproben quantitativ zu detektieren. Zellproben werden lysiert und auf Proteinkonzentration normalisiert. Normalisierte Proben und Molekulargewichtstandards werden dann auf ein denaturiertes Proteintrenngel, das mit Kapillarelektrophorese arbeitet, geladen und laufen gelassen. Die Proteine werden dann in dem Gel immobilisiert und immunosondiert, wobei ein für Occludin spezifischer primärer Antikörper verwendet wird. Die immobilisierten Proteine werden dann mit einem enzymverknüpften Detektierungsantikörper immunosondiert, der an den primären Antikörper bindet. Dann wird den immobilisierten Proteinen eine Chemilumineszenzsubstratlösung zugefügt, um die Entwicklung von Chemilumineszenz proportional zu der Menge an Occludin zu ermöglichen, die in der Immobilisierung gebunden sind. Die Chemilumineszenzentwicklung kann zu einer bestimmten Zeit gestoppt werden, und die Intensität des Chemolumineszenzsignals kann gemessen und mit positiven und negativen Kontrollen verglichen werden.
Permeabilität einer Keratinozytenmonoschicht: Änderungen in der Permeabilität einer Keratinozytenmonoschicht infolge von jedem der aktiven Bestandteile, einer beliebigen von der Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen können gemessen werden. Die Permeabilität der Keratinozytenmonoschicht ist ein Maß für die Integrität der Hautbarriere. Die Permeabilität der Keratinozytenmonoschicht in behandelten und unbehandelten Keratinozyten kann dann ermittelt werden, wobei als nicht-einschränkendes Beispiel der In Vitro vaskuläre Permeabilitäts-Assay (Vascular Permeability Assay) von Millipore (ECM642) verwendet wird. Dieser Assay analysiert die endotheliale Zelladsorption, Transport und Permeabilität. Kurz gesagt können adulte humane epidermale Keratinozyten von Life Technologies (C-005-5C) auf eine poröse kollagenbeschichtete Membran in einem Auffang-Well geimpft werden. Die Keratinozyten werden dann 24 Stunden lang bei 37°C und 5 % CO₂ in EPILIFE™ Wachstumsmedium mit Calcium von Life Technologies (M-EP-500-CA) inkubiert, das mit Keratinozytenzusatz (Keratinocyte Growth Supplement, HKGS) von Life Technologies (S-101-5) versetzt war. Diese Inkubationszeit ermöglicht, dass die Zellen eine Monoschicht bilden und die Membranporen okkludieren. Das Medium wird dann durch frisches Medium mit (Testprobe) oder ohne (unbehandelte Kontrolle) Testverbindungen/Extrakte ersetzt, und die Keratinozyten werden zusätzliche 48 Stunden lang bei 37°C und 5 % CO₂ inkubiert. Das Medium wird zur Ermittlung der Permeabilität der Keratinozytenmonoschicht nach Inkubation mit/ohne die Testverbindung/den Testextrakt durch frisches Medium ersetzt, das ein Fluoreszeinisothiocyanat (FITC)-Dextran mit hohem Molekulargewicht enthält, und die Keratinozyten werden 4 Stunden lang bei 37°C und 5 % CO₂ inkubiert. FITC können während der Inkubation für 4 Stunden die Keratinozytenmonoschicht und poröse Membran in das Auffang-Well hinein mit einer Rate passieren, die zu der Permeabilität der Monoschicht proportional ist. Die Zelllebensfähigkeit und der Gehalt an FITC in den Auffang-Wells kann nach der Inkubation von 4 Stunden ermittelt werden. Das Medium in dem Auffang-Well wird für den FITC-Gehalt aufgefangen, und die Fluoreszenz des Mediums wird bei 480 nm (Em) ermittelt, wenn mit 520 nm angeregt wird. Die prozentuale Permeabilität und prozentuale Änderung im Vergleich mit den unbehandelten Kontrollen kann mithilfe der folgenden Gleichungen ermittelt werden: Prozentuale Permeabilität = ((Mittlerer Ex/Em der Testprobe)/Mittlerer Ex/Em der unbehandelten Kontrolle)* 100, Prozentuale Änderung = Prozentuale Permeabilität der Testprobe - Prozentuale Permeabilität der unbehandelten Kontrolle.
Produktion von Hyaluronsäure: Änderungen in der Produktion von Hyaluronsäure in humanen dermalen Fibroblasten infolge von jedem der Wirkstoffe, einem beliebiger von der Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen können gemessen werden. HA ist ein Polysaccharid, das an der Stabilisierung der Struktur der Matrix beteiligt ist und daran beteiligt ist, Gewebe und Zellen Turgordruck bereitzustellen. Die HA-Produktion in behandelten und unbehandelten adulten humanen dermalen Fibroblasten (HDFa)-Zellen kann als nicht-einschränkendes Beispiel unter Verwendung des Hyaluronan DuoSet ELISA Kits von R&D Systems (DY3614) ermittelt werden. In diesem Assay werden subkonfluierende HDFa-Zellen von Cascade Biologics (C-13-5C) 72 Stunden vor der Behandlung bei 37°C und 10 % CO₂ in Hungermedium (0,15 % fetales Kälberserum und 1 % Penicillin-Streptomycin-Lösung in Dulbeccos Modified Eagle Medium) zur Produktion von Proben inkubiert. Die Zellen werden dann 24 Stunden lang mit frischem Hungermedium mit entweder Testverbindung, Positivkontrolle (Phorbol-12-myristat-13-acetat von Sigma-Aldrich (P1585) und thrombozytenabgeleitetem Wachstumsfaktor (PDGF) von Sigma-Aldrich (P3201)) oder ohne Zusatz inkubiert. Dann werden die Medien aufgefangen und bis zur Verwendung in dem ELISA-Assay bei -80°C eingefroren.
Der ELISA-Assay verwendet kurz gesagt eine quantitative Sandwich-Enzym-Immunoassaytechnik, bei der ein für HA spezifischer Einfangantikörper vorab als Beschichtung auf eine Mikroplatte aufgebracht werden kann. Standards und Medien von behandelten und unbehandelten Zellen werden in die Wells der Mikroplatte pipettiert, um zu ermöglichen, dass jegliches vorhandene HA durch den immobilierten Antikörper gebunden wird. Nachdem jegliche ungebundenen Substanzen abgewaschen wurden, wird den Wells ein enzymverknüpfter Detektierungsantikörper zugefügt, der für HA spezifisch ist. Nach einem Waschvorgang, um jegliches nicht gebundene Antikörper-Enzymreagenz zu entfernen, wird den Wells eine Substratlösung zugefügt, um die Farbentwicklung proportional zu der Menge an HA zu ermöglichen, die in dem anfänglichen Schritt gebunden wurde. Die Farbentwicklung wird zu einer bestimmten Zeit gestoppt, und die Intensität der Farbe bei 450 nm kann mit einem Mikroplattenlesegerät gemessen werden.
Inhibierung der Aktivität von Hyaluronidase: Änderungen in der Aktivität der Hyaluronidase infolge von jedem der Wirkstoffe, einer beliebigen von der Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen können gemessen werden. Hyaluronidase ist ein Enzym, das HA abbaut. HA ist ein Polysaccharid, das an der Stabilisierung der Struktur der Matrix beteiligt ist und daran beteiligt ist, Gewebe und Zellen Turgordruck bereitzustellen. Die Hyaluronidaseaktivität kann als nicht-einschränkendes Beispiel unter Verwendung eines in vitro-Protokolls ermittelt werden, das aus dem Sigma-Aldrich Protokoll Nr. EC 3.2.1.35 modifiziert wurde. Kurz gesagt wird Hyaluronidase Typ 1-S von Sigma-Aldrich (H3506) zu Mikroplattenreaktions-Wells gegeben, die Testverbindung oder Kontrollen enthalten. Tanninsäure kann als Positivkontrollinhibitor verwendet werden, als Kontrollenzym ist die fehlende Zugabe von Testverbindung möglich, und Wells mit Testverbindung oder Positivkontrolle, jedoch ohne Hyaluronidase, können als Hintergrundnegativkontrolle verwendet werden. Vor Zugabe des Substrats (HA) werden die Wells 10 Minuten lang bei 37°C inkubiert. Substrat wird zugegeben, und die Reaktionen werden 45 Minuten lang bei 37°C inkubiert. Ein Teil jeder Reaktionslösung wird dann in eine Lösung von Natriumacetat und Essigsäure mit einem pH-Wert von 3,75 überführt und vorsichtig gemischt, um diesen Teil der Reaktion zu stoppen (gestoppte Wells). Die gestoppten Wells und Reaktions-Wells sollten beide das gleiche Volumen an Lösung enthalten, nachdem der Teil der Reaktionslösung zu den gestoppten Wells gegeben wurde. Sowohl die Reaktions-Wells als auch die gestoppten Wells wurden 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Sowohl für die Reaktions-Wells als auch die gestoppten Wells wurde dann die Extinktion bei 600 nm gemessen. Die Inhibierung kann unter Verwendung der folgenden Formeln berechnet werden. Aktivität von Inhibitor (oder Kontrolle) = (Extinktion der mit Inhibitor gestoppten Wells bei 600 nm - Extinktion der Inhibitorreaktions-Wells bei 600 nm), Anfangsaktivität = Kontrollenzymextinktion bei 600 nm, Prozentuale Inhibierung = [(Anfangsaktivität/ Inhibitoraktivität)* 100]-100.
Aktivität von Peroxisom-Proliferator-aktiviertem Rezeptor Gamma (PPAR-γ): Änderungen in der Aktivität der PPAR-γ infolge von jedem der Wirkstoffe, einer beliebigen von der Kombination von Bestandteilen oder Zusammensetzungen mit den in der Beschreibung offenbarten Kombinationen können gemessen werden. PPAR-γ ist ein Rezeptor, der für die Produktion von Hauttalg (Sebum) entscheidend ist. Die Aktivität von PPAR-γ kann als ein nicht-einschränkendes Beispiel unter Verwendung eines Bioassays ermittelt werden, der die Fähigkeit einer Testverbindung oder Zusammensetzung zum Inhibieren der Bindung eines Liganden analysiert. Kurz gesagt kann der fluoreszierende kleinmolekulare pan-PPAR-Ligand, FLUORMONE™ Pan-PPAR Grün, erhältlich von Life Technologies (PV4894), verwendet werden, um zu ermitteln, ob Testverbindungen oder Zusammensetzungen in der Lage sind, die Bindung des Liganden an PPAR-γ zu inhibieren. Die Proben-Wells schließen PPAR-γ und fluoreszierenden Liganden und entweder: Testverbindung oder Zusammensetzung (Test), einen Referenzinhibitor, Rosiglitazon (Positivkontrolle), oder keine Testverbindung (Negativkontrolle) ein. Die Wells werden für einen festgelegten Zeitraum inkubiert, um dem Liganden Gelegenheit zu geben, den PPAR-γ zu binden. Die Fluoreszenzpolarisierung jedes Proben-Wells kann dann gemessen und mit dem Negativkontroll-Well verglichen werden, um den Prozentsatz der Inhibierung durch die Testverbindung oder Zusammensetzung zu ermitteln.
Zytokin-Array: Humane epidermale Keratinozyten wurden bis zu 70 bis 80 % Konfluenz kultiviert. Das Medium in der Platte wurde aspiriert, und es wurde 0,025 % Trypsin/EDTA zugegeben. Als die Zellen abgerundet wurden, wurde die Kulturschale sanft geklopft, um die Zellen zu lösen. Die Trypsin/EDTA enthaltenden Zellen wurden aus der Kulturschale entfernt und neutralisiert. Die Zellen wurden 5 min mit 180 x g zentrifugiert, um ein Pellet aus Zellen zu bilden. Der Überstand wurde aspiriert. Das resultierende Pellet wurde in EPILIFE™ Medium (Cascade Biologics) erneut suspendiert. Die Zellen wurden auf 6-WellPlatten mit ungefähr 10 bis 20 % Konfluenz geimpft. Nachdem die Zellen ungefähr 80 % konfluent geworden waren, wurde das Medium aspiriert, und 1,0 ml EPILIFE™ wurde zusammen mit Phorbol-13-myristat-12-acetat („PMA“) (einem bekannten Induktor von Entzündung) und den Testzusammensetzungsverdünnungen zu zwei Replikat-Wells gegeben (d. h. 1,0 % (100 µ1 von 100X Vorratsmaterial) und 0,1 % (10 µl 100X Vorratsmaterial) Testzusammensetzungen wurden auf ein Endvolumen von 1 ml EPILIFE™ Wachstumsmedium verdünnt). Das Medium wurde sanft verwirbelt, um adäquates Mischen zu gewährleisten. Es wurden zusätzlich 1,0 ml EPILIFE™ zu den Kontroll-Wells gegeben, mit und ohne zusätzliches PMA. Die Platten wurden für ungefähr 5 Stunden nach dem Dosieren dann mit 37 ± 1°C und 5,0 ± 1 % CO₂ inkubiert. Nach dieser 5-stündigen Inkubierung wurden alle Medien in konischen Röhrchen aufgefangen und bei -70°C eingefroren.
Zur Analyse wurde eine 16-Pad-Hybridisierungskammer an 16-Pad-FAST-Objektträgern befestigt, die in Dreierreihen mit 16 Anti-Zytokin-Antikörpern plus experimentellen Kontrollen (Whatman BioSciences) gruppiert wurden, und die Objektträger wurden zur Verarbeitung in einem FASTFrame (4 Objektträger pro Rahmen) platziert. Die Gruppierungen (Arrays) wurden 15 Minuten bei Raumtemperatur unter Verwendung von 70 ml S&S Protein Array Blocking buffer „Blockierpuffer“ (Whatman Schleicher und Scheull) blockiert. Der Blockierpuffer wurde entfernt, und 70 ml jeder Überstandprobe wurde zu jedem Array gegeben. Die Arrays wurden unter leichter Bewegung 3 Stunden lang bei Raumtemperatur inkubiert. Die Arrays wurden 3 Mal mit TBS-T gewaschen. Die Arrays wurden mit 70 ml eines Antikörper-Cocktails behandelt, der einen biotinylierten Antikörper enthielt, entsprechend jedem der gruppierten Einfangantikörper. Die Arrays wurden unter leichter Bewegung 1 Stunden lang bei Raumtemperatur inkubiert. Die Arrays wurden 3 Mal mit TBS-T gewaschen. Die Arrays wurden 1 Stunde lang bei Raumtemperatur unter sanfter Bewegung mit 70 ml Lösung, die Streptavidin-Cy5-Konjugat enthielt, inkubiert. Arrays wurden 3 Mal mit TBS-T gewaschen, rasch mit entionisiertem Wasser abgespült und getrocknet.
Die Objektträger wurden in einem Perkin-Elmer ScanArray 4000 konfokalen Fluoreszenzbildgebungssystem Bildgebung unterzogen. Bilder der Arrays können gespeichert und unter Verwendung der Software Imaging Research Array Vision analysiert werden. Kurz gesagt wurden die Intensitäten der Spots durch Subtraktion von Hintergrundsignalen bestimmt. Replikate der Spots aus jeder Probenbedingung können gemittelt und dann mit den geeigneten Kontrollen verglichen werden.
Bildung von Endothelialrohren: Die Bildung von Endothelialrohren ist an der Angiogenese und der Bildung von Mikrogefäßkapillaren beteiligt. Kapillarbildung und Angiogenese können zu Rötung und Rosazea der Haut beitragen. Die Fähigkeit der Endothelialzellen, in Anwesenheit oder Abwesenheit der Testextrakte und -verbindungen Rohre (Tubuli) zu bilden, kann mit einem Kapillartubuliunterbrechungs-Assay mit vorgebildeten primären humanen Nabelschnurvenenendothelialzellen (HUVEC) in einem Zellkultursystem ermittelt werden.
HUVECs werden kurz gesagt in vitro auf extrazellulärer Matrix kultiviert, die die Anhaftung und tubuläre Morphogenese von Endothelialzellen stimuliert, um kapillarartige Lumenstrukturen zu bilden. Diese in vitro gebildeten Kapillartubuli sind humanen Blutgefäßkapillaren in vielerlei Hinsicht ähnlich. Auf diesem Phänomen basiert der Kapillarrohr-Assay, und er wird zur Bewertung von Mitteln verwendet, die potentiell auf das Gefäßsystem zielen.
HUVEC-Kulturen werden in einem Zellinkubator mit 5 % CO₂ 37°C gezüchtet. Das vollständige Wachstumsmedium für HUVECs ist Endothelialzellen-Basalmedium (Endothelial Cell Basal Medium, EBM) mit Zusatz von 2 % fötalem Kälberserum (FBS), 12 µg /ml Rinderhirnextrakt, 1 µg/ml Hydrocortison und 1 µg/ml GA-1000 (Gentamicin-Amphothericin). HUVEC-Kulturen können zwischen Durchgang 3 und 8 für alle Assay-Experimente verwendet werden.
HUVECs werden mit dem Fluoreszenzmittel Calcein AM vormarkiert und mit ihrem vollständigen Wachstumsmedium in mit extrazellulärer Matrix beschichtete 96 Well-Kulturplatte geimpft. Die Endothelialkapillarrohre sollten nach etwa vier Stunden des Morphogeneseprozesses gebildet werden. Dann wird Testmittel in vorgesehenen Dosen in 50 µl Volumen als Behandlungsbedingungen in die gebildeten Kapillarrohrkulturen appliziert. Den behandlungsfreien Kontrollen kann Vehikel der Testmittel zugefügt werden. Sutent, ein FDA-zugelassenes antiangiogenes Arzneimittel, kann in einer Konzentration als Kontrolle für die Leistung des Assays eingeschlossen werden. Die Endothelialrohrmorphologie wird nach etwa sechs Behandlungsstunden in jedem Well mikroskopisch untersucht, Bildgebung unterzogen, und die Kapillarunterbrechungsaktivitäten unter den Behandlungsbedingungen lassen sich quantitativ analysieren. Alle Testbedingungen können in Zweierreihen-Wells durchgeführt werden, auch die Kontrollen.
Alle hier offenbarten und beanspruchten Zusammensetzungen und/oder Verfahren können ohne unnötigen experimentellen Aufwand im Lichte der vorliegenden Offenbarung umgesetzt und ausgeführt werden. Obwohl die Zusammensetzungen und Verfahren dieser Erfindung in Bezug auf bevorzugte Ausführungsformen beschrieben wurden, wird dem Fachmann klar sein, dass in Bezug auf Zusammensetzungen und/oder Verfahren sowie in den Stufen oder der Abfolge der Stufen des hier beschriebenen Verfahrens Variationen angewendet werden können, ohne vom Konzept, der Idee und dem Umfang der Erfindung abzuweichen. Es ist spezieller offensichtlich, dass bestimmte Mittel, die sowohl chemisch als auch physiologisch verwandt sind, die hier beschriebenen Mittel ersetzen können, während dieselben oder ähnliche Ergebnisse erhalten werden. Alle derartigen ähnlichen Ersatzstoffe und Modifikationen, die dem Fachmann offensichtlich sind, werden als innerhalb der Idee, des Umfangs und Konzepts der Erfindung wie in den angefügten Ansprüchen definiert angesehen.
ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
Diese Liste der vom Anmelder aufgeführten Dokumente wurde automatisiert erzeugt und ist ausschließlich zur besseren Information des Lesers aufgenommen. Die Liste ist nicht Bestandteil der deutschen Patent- bzw. Gebrauchsmusteranmeldung. Das DPMA übernimmt keinerlei Haftung für etwaige Fehler oder Auslassungen.
Zitierte Patentliteratur

US 62/693545 [0001]
US 5011681 [0054]
US 4421769 [0054]
US 3755560 [0054]
US 5087445 [0061]
US 4509949 [0061]
US 2798053 [0061]
US 5100660 [0062]
US 4849484 [0062]
US 4835206 [0062]
US 4628078 [0062]
US 4599379 [0062]
US 2004/0109905 [0093]
US 2005/0163880 [0093]

Claims

Verwendung einer Zusammensetzung, die (a) eine effektive Menge an Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, (b) eine effektive Menge an Lavendula stoechas-Extrakt und (c) eine effektive Menge an Acmella oleracea-Extrakt umfasst, um Muskelkontraktion eines Gesichtsmuskels bei einer Person zu reduzieren und/oder das Erscheinungsbild einer feinen Linie oder Falte auf der Haut einer Person zu reduzieren, wobei die Verwendung topisches Auftragen der Zusammensetzung auf Gesichtshaut umfasst, wobei topische Auftragung der Zusammensetzung auf die Gesichtshaut Muskelkontraktion des Gesichtsmuskels reduziert und/oder das Erscheinungsbild der feinen Linie oder Falte reduziert.
Verwendung nach Anspruch 1, bei der die Zusammensetzung auf eine feine Linie oder Falte aufgetragen wird, und wobei das Erscheinungsbild der feinen Linie oder Falte nach topischer Auftragung reduziert wird, und/oder Muskelkontraktion eines Muskels, der das Erscheinungsbild der feinen Linie oder Falte bewirkt, nach topischer Aufbringung reduziert wird.
Verwendung nach Anspruch 2, bei der die feine Linie oder Falte eine Rhytide ist, und wobei die Reduktion der Muskelkontraktion des Gesichtsmuskels das Erscheinungsbild der Rhytide reduziert.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, bei der der Gesichtsmuskel ein Muskel des Glabellarkomplexes, ein Orbicularis oculi-Muskel, ein Depressormuskel oder ein Frontalismuskel oder jegliche Kombination davon ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, bei der jeder der Extrakte individuell ein wässriger Extrakt, ein Alkoholextrakt, ein Polyolextrakt oder eine Kombination davon ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, bei der der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt mit einer fließfähigen Extraktionslösungsmittelmischung erhalten wird, die Betain, Milchsäure und Wasser umfasst, der Lavendula stoechas-Extrakt ein Extrakt aus Blüten/Blatt/Stiel von Lavendula stoechas ist, der mit überkritischem Kohlendioxid (CO₂) als Extraktionsmittel erhalten wird, und der Acmella oleracea-Extrakt mit einer fließfähigen Extraktionslösungsmittelmi- schung erhalten wird, die Wasser, Ethanol und 1,3-Propandiol umfasst.
Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der die Zusammensetzung 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Lavendula stoechas-Extrakt und 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Acmella oleracea-Extrakt umfasst.
Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel reduziert und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert, der Lavendula stoechas-Extrakt ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel reduziert und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert und der Acmella oleracea-Extrakt ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel reduziert und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert.
Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der Acmella oleracea-Extrakt die Kollagenproduktion und Lamininproduktion in der Haut stimuliert.
Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt die Produktion der Matrix-Metalloproteinasen 1, 3 oder 9 in der Haut reduziert.
Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der die Gesichtshaut Stirnhaut, Wangenhaut, Haut des Kinns und/oder Haut im Augenbereich ist.
Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der die Zusammensetzung eine Emulsion ist.
Verwendung nach Anspruch 12, bei der die Emulsion eine Öl-in-Wasser-Emulsion ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 11, bei der die Zusammensetzung ein Gel ist.
Topische Hautzusammensetzung, die (a) eine effektive Menge an Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, (b) eine effektive Menge an Lavendula stoechas-Extrakt und (c) eine effektive Menge an Acmella oleracea-Extrakt umfasst, bei der die topische Hautzusammensetzung in der Lage ist, das Erscheinungsbild einer feinen Linie oder Falte auf der Haut einer Person zu reduzieren und/oder in der Lage ist, die Muskelkontraktion eines Gesichtsmuskels bei einer Person zu reduzieren.
Topische Hautzusammensetzung nach Anspruch 15, bei der jeder der Extrakte individuell ein wässriger Extrakt, ein Alkoholextrakt, ein Polyolextrakt oder eine Kombination davon ist.
Topische Hautzusammensetzung nach Anspruch 15, bei der der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt mit einer fließfähigen Extraktionslösungsmittelmischung erhalten wird, die Betain, Milchsäure und Wasser umfasst, der Lavendula stoechas-Extrakt ein Extrakt aus Blüten/Blatt/Stiel von Lavendula stoechas ist, der mit überkritischem Kohlendioxid (CO₂) als Extraktionsmittel erhalten wird, und der Acmella oleracea-Extrakt mit einer fließfähigen Extraktionslösungsmittelmischung erhalten wird, die Wasser, Ethanol und 1,3-Propandiol umfasst.
Topische Hautzusammensetzung nach einem der Ansprüche 15 oder 17, bei der die Zusammensetzung 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Rosmarinus officinalis-Blattextrakt, 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Lavendula stoechas-Extrakt und 0,00001 bis 10 % Gew./Gew. Acmella oleracea-Extrakt umfasst.
Topische Hautzusammensetzung nach einem der Ansprüche 15 oder 18, bei der der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt in der Lage ist, ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel zu reduzieren, und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert, und/oder der Rosmarinus officinalis-Blattextrakt in der Lage ist, die Produktion von Matrix-Metalloproteinasen 1, 3 oder 9 in der Haut zu reduzieren, der Lavendula stoechas-Extrakt in der Lage ist, ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel zu reduzieren, und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert und der Acmella oleracea-Extrakt in der Lage ist, ein Einfließen von Calcium in den Gesichtsmuskel zu reduzieren, und das Auftreten eines Aktionspotentials in dem Gesichtsmuskel reduziert, und/oder der Acmella oleracea-Extrakt in der Lage ist, die Kollagenproduktion und Lamininproduktion der Haut zu stimulieren.
Topische Hautzusammensetzung nach einem der Ansprüche 15 bis 19, die eine Emulsion, vorzugsweise eine Öl-in-Wasser-Emulsion, oder ein Gel ist.