CN112739363A - 局部肌肉松弛组合物和方法 - Google Patents

Abstract

公开了一种用于减少面部肌肉的肌肉收缩或减少细纹或皱纹外观的方法。所述方法可以包括组合物对面部皮肤和/或对细纹或皱纹的局部施用。所述组合物可以包含有效量的迷迭香叶提取物、有效量的法国薰衣草提取物和有效量的千日菊提取物。所述组合物对面部皮肤的局部施用可以减少面部肌肉的肌肉收缩。所述组合物对细纹或皱纹的局部施用可以减少细纹或皱纹的外观。

Description

局部肌肉松弛组合物和方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年7月3日提交的美国临时专利申请62/693545的优先权，其公开内容通过引用整体并入本文。

发明背景

A.发明领域

本发明一般涉及可用于放松面部肌肉和/或减少细纹或皱纹外观的组合物。所述组合物可以包括植物提取物如迷迭香(Rosmarinus officinalis)叶提取物、法国薰衣草(Lavendula stoechas)提取物和千日菊(Acmella oleracea)提取物的组合。

B.背景技术

由于重复性肌肉收缩，面部皮肤随着时间出现某些类型的皱纹。通常把这些类型的皱纹称为脸部皱纹，其实例可以包括皱眉纹或眉间纹、前额纹、鱼尾纹、兔子纹或鼻纹、有窝的下巴、微笑提拉纹、唇纹等。目前，可以使用多种可商购获得的处理材料，据称它们作为面部肌肉松弛剂/肌肉收缩抑制剂是有效的。据说这些材料能够减少这种皱纹的出现。这种处理材料的非限制性实例包括可注射的神经调质例如

(onabotulinumtoxinA)、

(abobotulinumtoxinA)或

(incobotulinumtoxinA)。其他实例包括局部施用的处理材料如化学化合物(例如γ-氨基丁酸)和肽(例如乙酰基六胜肽-3)。

与可注射的神经调质有关的问题，例如过敏反应、皮疹、瘙痒、注射部位反应(淤斑、出血、疼痛、泛红、肿胀或压痛)、肌肉僵硬、发烧、咳嗽、咽喉痛、流感样症状、颈部或背部疼痛和从注射部位扩散到身体其它部位的可能，造成的严重风险包括说话困难、吞咽或呼吸困难、肌无力、睑下垂和视力模糊或复视。类似地，化学化合物具有其自身缺点，例如皮肤刺激和潜在过敏反应。除了与可注射的神经调质和化学化合物相关的生理问题之外，对于大部分受益人群来说，这些选择性美容手术的成本高昂。

已经有一些尝试来产生能够放松面部肌肉的天然成分。一种这样的尝试是千日菊提取物的开发。虽然这些提取物可以提供一些肌肉松弛效果，但该效果不足以有效地放松面部肌肉并减少细纹或皱纹的外观。

因此，先前改善皮肤视觉外观的尝试已经显示出具有各种缺点，例如高成本、医疗风险、皮肤刺激、恢复期延长或未达到承诺的皮肤益处。

发明内容

发明人已经发现了与处理细纹或皱纹相关的至少一些问题的解决方法。该解决方法基于植物性成分的组合，所述植物性成分能有效减少面部肌肉的肌肉收缩。在一个特定方面，可以通过减少肌管中的钙流入水平，从而减少肌管收缩来减少面部肌肉收缩。减少肌管中的钙流入水平可以减少或抑制肌管中的动作电位，从而减少或阻止肌肉收缩。这样的成分组合还能够调节生物化学途径，可以例如通过刺激皮肤(例如角质形成细胞或人真皮成纤维细胞)中胶原蛋白的产生和/或减少与细胞外基质蛋白的降解相关的酶(例如，基质金属蛋白酶(MMP)，如MMP-1、MMP3和/或MMP-9)的活性或酶的产生，来进一步帮助减少细纹或皱纹的外观。而且，成分的组合还能够提高皮肤细胞(例如角质细胞或人真皮成纤维细胞)中胶原蛋白的表达和层粘连蛋白的产生。植物性成分的组合包括迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和/或千日菊提取物的至少两种或全部三种。植物性成分的这种组合可用于产生局部皮肤用组合物，其减少细纹或皱纹的外观或防止细纹或皱纹的形成，所述细纹或皱纹包括可能与长时间(例如，1个月、2个月、4个月、6个月、8个月、12个月或多于12个月或数年)的重复性面部肌肉收缩相关的深层面部细纹或面部皱纹。值得注意的是，成分的组合可用于减少静态和动态细纹或皱纹的外观和/或防止静态和动态细纹或皱纹的形成。

在本发明的一个方面，公开了用于减少人面部肌肉的肌肉收缩的方法。在另一个方面，公开了用于减少人皮肤上细纹或皱纹的外观的方法。该方法可以包括向皮肤局部施用包含以下的组合物：(a)有效量的迷迭香叶提取物；(b)有效量的法国薰衣草提取物；和/或(c)有效量的千日菊提取物，其中组合物对面部皮肤的局部施用减少了面部肌肉的肌肉收缩，或其中组合物对皮肤的局部施用减少了人皮肤上细纹或皱纹的外观。另外地或可选地，局部施用可以包括在人的皮肤上滚动微型滚轮以增加组合物对皮肤的渗透。在某些方面，所述组合物包括迷迭香叶提取物和法国薰衣草提取物、迷迭香叶提取物和千日菊提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物，或迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物全部。在某些方面，收缩的面部肌肉可以位于施用了组合物的皮肤的正下方。在其他方面，收缩的面部肌肉可以接近于施用了组合物的皮肤，但不在施用了组合物的皮肤的正下方(例如，在3厘米内，优选2.5cm，或更优选在2cm内，或甚至更优选在施用了组合物的皮肤区域的1.5cm至1cm内)。面部肌肉可以是眉间复合肌、眼轮匝肌、降肌、或额肌或其任意组合。或者，组合物可以施用于非面部肌肉(例如手、大腿、脖子、臀部、胸肩部位(décolletéregion)、脚等)并可以减少刚好在施用了组合物的皮肤正下方或接近于施用了组合物的皮肤但不在该皮肤正下方的肌肉的肌肉收缩。在对细纹或皱纹施用组合物的情况下，细纹或皱纹可以是面部皱纹，并且减少面部肌肉的肌肉收缩减少了面部皱纹的外观。在其他情况下，细纹或皱纹不是面部皱纹。

用于本发明的组合物的提取物可以各自分别由作为提取溶剂的水(例如水提取物)、作为提取溶剂的醇(例如醇提取物)、或作为提取溶剂的多元醇(例如多元醇提取物)或这些提取溶剂的任意组合(例如水-醇提取物、水-多元醇提取物、醇-多元醇提取物或水-醇-多元醇提取物)获得。醇的非限制性实例可以是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇、庚醇、辛醇等。多元醇的非限制性实例可以是乙二醇、丙二醇、甘油、赤藓糖醇、木糖醇、甘露醇、庚七醇等。另外，可以使用其他提取溶剂，例如另外的亲水溶剂或亲脂溶剂(例如甲烷、乙烷、丁烷、丙烷、己烷、庚烷、辛烷、二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、二氧化碳如二氧化碳(CO₂)在超临界提取技术中的使用)。CO₂超临界提取可以包括用研磨的干燥植物材料填充柱，并在非常高的压力(200巴至400巴)下将超临界液体二氧化碳泵送通过柱，然后收集所得提取物。

在优选的情况下，迷迭香叶提取物可以从迷迭香的叶中获得。使用包含甜菜碱或水合甜菜碱，即一种氢键供体化合物(例如多元醇、有机酸等)，和水的液体提取混合物对叶进行共晶提取(Eutectigenesis)过程。然后，共晶提取物可用于本发明的组合物中。在一些优选的情况下，氢键供体是有机酸，优选乳酸。共晶提取利用了共晶溶剂，所述共晶溶剂是熔点低于其单独成分熔点的化合物的混合物。在另一个优选的情况下，法国薰衣草提取物来自法国薰衣草的花、叶和茎部分的组合，并且可以通过使用二氧化碳(CO₂)作为溶剂对这些部分进行超临界提取过程来制备所述提取物。然后，法国薰衣草的花、叶和茎(花/叶/茎)的超临界CO₂提取物可用于本发明的组合物中。法国薰衣草花/叶/茎的CO₂超临界提取物还可以与辛酸/癸酸甘油三酯混合，然后用于本发明的组合物中。在另一个优选的情况下，千日菊提取物来自千日菊的花、叶和茎部分的组合，并且可以通过对这些部分(花/叶/茎)进行水-醇(优选水-乙醇)提取过程或水-醇-多元醇提取过程来制备所述提取物。在优选的情况中多元醇可以为1,3-丙二醇。醇可以从所得提取物中除去。然后，千日菊提取物可用于本发明的组合物中。因此，在优选的情况下，迷迭香叶共晶提取物、法国薰衣草花/叶/茎超临界CO₂提取物和千日菊花/叶/茎的水-醇-多元醇提取物可用于本发明的组合物和方法中。

组合物中有效量的迷迭香叶提取物可以为0.00001重量％至25重量％或其中任意范围(例如0.00001重量％至10重量％、0.00001重量％至5重量％、0.00001重量％至2重量％、0.00001重量％至1重量％、0.00001重量％至0.5重量％或0.001重量％至1重量％、0.01重量％至1重量％、0.1重量％至1重量％或0.001重量％至2重量％、0.01重量％至2重量％或0.1重量％至2重量％)。组合物中有效量的法国薰衣草提取物可以为0.00001重量％至25重量％或其中任意范围(例如0.00001重量％至10重量％、0.00001重量％至5重量％、0.00001重量％至2重量％、0.00001重量％至1重量％、0.00001重量％至0.5重量％或0.001重量％至1重量％、0.01重量％至1重量％、0.1重量％至1重量％或0.001重量％至2重量％、0.01重量％至2重量％或0.1重量％至2重量％)。组合物中有效量的千日菊提取物可以为0.00001重量％至25重量％或其中任意范围(例如0.00001重量％至10重量％、0.00001重量％至5重量％、0.00001重量％至2重量％、0.00001重量％至1重量％、0.00001重量％至0.5重量％或0.001重量％至1重量％、0.01重量％至1重量％、0.1重量％至1重量％或0.001重量％至2重量％、0.01重量％至2重量％或0.1重量％至2重量％)。

本发明的组合物可以减少肌管收缩。这可以通过减少流入肌管的钙来实现，这可以减少或防止在肌管中产生动作电位。通过减少或防止动作电位的产生，可以减少或防止肌管收缩。值得注意的是，发明人已经表明迷迭香叶或其提取物、法国薰衣草或其提取物和/或千日菊或其提取物中的每一种减少或防止钙流入肌管并减少或防止肌肉收缩。本发明的组合物还可以刺激皮肤细胞(例如角质形成细胞和/或人真皮成纤维细胞)中胶原蛋白的产生。特别是，在本发明的情况下，发现千日菊或其提取物可以增加皮肤细胞中胶原蛋白的产生。本发明的组合物还可以刺激皮肤细胞(例如角质形成细胞和/或人真皮成纤维细胞)中层粘连蛋白的产生。特别是，在本发明的情况下，发现千日菊或其提取物可以增加皮肤中层粘连蛋白的产生。本发明的组合物还可以减少或抑制皮肤细胞(例如角质形成细胞和/或人真皮成纤维细胞)中基质金属蛋白酶(MMP)1、基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9的活性或产生。特别是，在本发明的情况下，发现迷迭香叶或其组合物可以减少或抑制皮肤细胞中MMP-1、MMP-3和MMP-9中每一种的活性或产生。所述皮肤可以是面部皮肤，例如位于人的前额、脸颊、下巴、眼眶区域(例如眼睛下面、邻近眼睛如鱼尾纹形成的地方、眼睑等)的皮肤。在某些优选的方面，面部皮肤是前额皮肤或眼眶区域皮肤，特别是鱼尾纹形成的地方。此外，本发明的组合物还可以用于增加皮肤紧实度，这可以有助于减轻皮肤松散、下垂和/或松弛的外观。

除了迷迭香叶或其提取物、法国薰衣草或其提取物和/或千日菊或其组合物之外，本发明的局部皮肤用组合物还可以包含上文描述的一种或多于一种成分。例如，组合物可以包含一种或多于一种另外的成分，其选自一种或多于一种化妆品用成分或药物成分。在一些情况下，组合物可以包括一种或多于一种调节剂、保湿剂、pH调节剂、结构化剂、含硅酮的化合物、无机盐和/或防腐剂。在一些方面，局部用组合物还包含水，优选至少50重量％、60重量％、70重量％、80重量％或90重量％或多于90重量％的水，更优选为50重量％至90重量％的水。在一些方面，本发明的局部用组合物可以不包含一种或多于一种另外的成分，所述成分选自一种或多于一种化妆品用成分或药物成分。在一些特定方面，本发明的组合物可以不包含迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物中的一种或多于一种。在一些情况下，局部用组合物不包含水。一些情况下，本文的局部用组合物可以是无水的或基本上无水的。

在特定的方面，本发明的组合物配制为局部皮肤用组合物。组合物可以具有用于化合物和提取物的皮肤病学可接受的载剂或载体。组合物还可以包含保湿剂或湿润剂、表面活性剂、含硅酮的化合物、UV剂、油和/或本说明书所确定的其他成分或本领域中已知的成分。组合物可以是面膜、乳液、乳膏、凝胶、精华、乳状液(例如，水包油、油包水、水包硅酮、硅酮包水、水包油包水、油包水包油、硅酮包水包油等)、溶液(例如水溶液或水醇溶液)、无水基质(例如口红或散粉)、软膏剂、乳剂、糊状物、气溶胶、固体形式、眼部凝胶、凝胶精华、凝胶乳状液等。组合物可以配制为用于局部皮肤施用，在使用期间每天施用至少1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次或多于7次。在本发明的其它方面，组合物可以是储存稳定或颜色稳定的，或是两者。还预期可以选择组合物的黏度以达到希望的结果，例如根据所需的组合物类型，这种组合物的黏度可以为约1cp至远超过1百万cp，或是其中可获得的任意范围或整数(例如，在25℃下在布氏黏度计上用TC转子以2.5rpm的转速测量的2cp、3cp、4cp、5cp、6cp、7cp、8cp、9cp、10cp、20cp、30cp、40cp、50cp、60cp、70cp、80cp、90cp、100cp、200cp、300cp、400cp、500cp、600cp、700cp、800cp、900cp、1000cp、2000cp、3000cp、4000cp、5000cp、6000cp、7000cp、8000cp、9000cp、10000cp、20000cp、30000cp、40000cp、50000cp、60000cp、70000cp、80000cp、90000cp、100000cp、200000cp、300000cp、400000cp、500000cp、600000cp、700000cp、800000cp、900000cp、1000000cp、2000000cp、3000000cp、4000000cp、5000000cp、10000000cp等)。

在非限制性方面，组合物pH值可以为约6至约9。在其它方面，pH可以为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14。组合物可以包含甘油三酯。非限制性实例包含短链、中链和长链甘油三酯。在某些方面，甘油三酯是中链甘油三酯(例如辛酸癸酸甘油三酯)。组合物还可以包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例包括苯甲酸钠、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、或对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯的混合物。在一些实施方案中，组合物不含对羟基苯甲酸酯。

本发明的组合物可以具有UVA和UVB吸收性质。该组合物可以具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或大于60，或是其中任意整数或可得到的数的防晒指数(SPF)。组合物可以是防晒乳液、喷雾或乳膏。

本发明的组合物还可以包含以下附加成分的任意一种、任意组合或全部：水、螯合剂、保湿剂、防腐剂、增稠剂、含硅酮的化合物、精油、结构化剂、维生素、药物成分、抗氧化剂，或这类成分的任意组合或这类成分的混合物。在某些方面，组合物可以包含前述确定的这些附加成分中的至少二种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或全部。这些附加成分的非限制性实例在本说明书全文确定，并通过引用并入本段。这类成分的量以组合物的重量或体积计可以为0.0001％至99.9％，或者是在如本说明书其它部分中所公开的范围之间的任何整数或范围，其通过引用并入本段。

也考虑了包含本发明的组合物的试剂盒。在特定的实施方案中，组合物包含在容器中。所述容器可以是瓶子、分配器或包装。所述容器可以分配预定量的组合物。在某些方面，组合物以喷雾、薄雾、团块或液体形式分配。容器可以在其表面上包含标记。所述标记可以是单词、缩写、图片或符号。

还考虑了在本说明书全文中所公开的组合物可以用作免洗或洗去型组合物。举例来说，免洗型组合物可以是局部施用至皮肤并在皮肤上保留一段时间(例如，至少5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、20分钟或30分钟，或至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时或24小时，或者一夜或全天)的组合物。或者，洗去型组合物可以是打算施用于皮肤然后在一段时间内，如小于5分钟、4分钟、3分钟、2分钟或1分钟，(例如用水)从皮肤去除或洗去的产品。洗去型组合物的实例可以是皮肤清洁剂、洗发水、护发素或肥皂。免洗型组合物的实例可以是皮肤保湿剂、防晒剂、面膜、晚霜或日霜。

预期对于本发明的任何方法或组合物，可以实施本说明书中所讨论的任意实施方案，反之亦然。此外，本发明的组合物可以用于实现本发明的方法。

在一个实施方案中，本发明的组合物可以是可药用的或可化妆用的，或可以具有舒适的触觉性质。“可药用的”、“可化妆用的”和/或“舒适的触觉性质”描述了具有在皮肤上感觉舒适的特定触觉性质的组合物(例如，不太水或太油的组合物、具有丝滑质地的组合物、非粘性或粘性的组合物等)。可药用的或可化妆用的还可以涉及组合物的乳脂状或润滑性能，或组合物的保湿性能。

还预期了包含本发明的组合物的产品。在非限制性方面，该产品可以是化妆品。该化妆品可以是本说明书其他部分所述的那些，或是本领域技术人员已知的那些。产品的非限制性实例包括保湿霜、乳霜、乳液、柔肤水、凝胶、洗剂、粉底、晚霜、口红、清洁剂、卸妆膏、爽肤水、防晒霜、面膜、抗老化产品、除臭剂、止汗剂、香水、古龙水等。

还公开了本发明的以下实施方案1至40。实施方案1是用于减少人面部肌肉的肌肉收缩的方法，所述方法包括将组合物局部施用至面部皮肤，所述组合物包含：(a)有效量的迷迭香叶提取物；(b)有效量的法国薰衣草提取物；和(c)有效量的千日菊提取物，其中将组合物局部施用至面部皮肤减少了面部肌肉的肌肉收缩。实施方案2是权利要求1所述的方法，其中将组合物施用于细纹或皱纹，并且其中在局部施用后减少了细纹或皱纹的外观。实施方案3是权利要求2所述的方法，其中细纹或皱纹是面部皱纹，并且其中减少面部肌肉的肌肉收缩减少了面部皱纹的外观。实施方案4是实施方案1至3中任一项所述的方法，其中面部肌肉是眉间复合肌、眼轮匝肌、降肌、或额肌或其任意组合。实施方案5是实施方案1至4中任一项所述的方法，其中每种提取物分别为水提取物、醇提取物、多元醇提取物或其组合。实施方案6是实施方案1至5中任一项所述的方法，其中迷迭香叶提取物是用包含甜菜碱、乳酸和水的液体提取溶剂混合物获得的；法国薰衣草提取物是用超临界二氧化碳(CO₂)提取溶剂获得的法国薰衣草花/叶/茎提取物；千日菊提取物是用包含水、乙醇和1,3-丙二醇的液体提取溶剂混合物获得的。实施方案7是实施方案1至6中任一项所述的方法，其中组合物包含：0.00001重量％至10重量％的迷迭香叶提取物；0.00001重量％至10重量％的法国薰衣草提取物；和0.00001重量％至10重量％的千日菊提取物。实施方案8是实施方案1至7中任一项所述的方法，其中迷迭香叶提取物减少了面部肌肉中的钙流入并减少面部肌肉中动作电位的产生；法国薰衣草提取物减少了面部肌肉中的钙流入并减少面部肌肉中动作电位的产生；千日菊提取物减少了面部肌肉中的钙流入并减少面部肌肉中动作电位的产生。实施方案9是实施方案1至8中任一项所述的方法，其中千日菊提取物刺激了皮肤中胶原蛋白的产生和层粘连蛋白的产生。实施方案10是实施方案1至9中任一项所述的方法，其中迷迭香叶提取物减少了皮肤中基质金属蛋白酶(MMP)1、基质金属蛋白酶3或基质金属蛋白酶9的产生。实施方案11是实施方案1至10中任一项所述的方法，其中面部皮肤是前额皮肤、脸颊皮肤、下巴皮肤或眼眶区域皮肤。实施方案12是实施方案11所述的方法，其中皮肤是前额皮肤。实施方案13是实施方案11所述的方法，其中皮肤是眼眶区域皮肤。实施方案14是实施方案1至13中任一项所述的方法，其中组合物是乳状液。实施方案15是实施方案14所述的方法，其中乳状液是水包油乳状液。实施方案16是实施方案1至13中任一项所述的方法，其中组合物是凝胶。实施方案17是减少人的皮肤上细纹或皱纹的外观的方法，所述方法包括将组合物局部施用于细纹或皱纹，该组合物包含：(a)有效量的迷迭香叶提取物；(b)有效量的法国薰衣草提取物；和(c)有效量的千日菊提取物，其中局部的施用减少了细纹或皱纹的外观。实施方案18是实施方案17所述的方法，其中组合物减少了当肌肉收缩时引起细纹或皱纹外观的肌肉的肌肉收缩。实施方案19是实施方案17至18中任一项所述的方法，其中肌肉是眉间复合肌、眼轮匝肌、降肌、或额肌或其任意组合。实施方案20是实施方案17至19中任一项所述的方法，其中细纹或皱纹是面部皱纹。实施方案21是实施方案17至20中任一项所述的方法，其中每种提取物分别为水提取物、醇提取物、多元醇提取物或其组合。实施方案22是实施方案17至21中任一项所述的方法，其中迷迭香叶提取物是用包含甜菜碱、乳酸和水的液体提取溶剂混合物获得的；法国薰衣草提取物是用超临界二氧化碳(CO₂)提取溶剂获得的法国薰衣草花/叶/茎提取物；千日菊提取物是用包含水、乙醇和1,3-丙二醇的液体提取溶剂混合物获得的。实施方案23是实施方案17至22中任一项所述的方法，其中组合物包含：0.00001重量％至10重量％的迷迭香叶提取物；0.00001重量％至10重量％的法国薰衣草提取物；和0.00001重量％至10重量％的千日菊提取物。实施方案24是实施方案17至23中任一项所述的方法，其中：迷迭香叶提取物减少了面部肌肉中的钙流入并减少面部肌肉中动作电位的产生；法国薰衣草提取物减少了面部肌肉中的钙流入并减少面部肌肉中动作电位的产生；千日菊提取物减少了面部肌肉中的钙流入并减少面部肌肉中动作电位的产生。实施方案25是实施方案17至24中任一项所述的方法，其中千日菊提取物刺激了皮肤中胶原蛋白的产生和层粘连蛋白的产生。实施方案26是实施方案17至25中任一项所述的方法，其中迷迭香叶提取物减少了皮肤中基质金属蛋白酶(MMP)1、基质金属蛋白酶3或基质金属蛋白酶9的产生。实施方案27是实施方案17至26中任一项所述的方法，其中人的皮肤是面部皮肤，优选前额皮肤、脸颊皮肤、下巴皮肤或眼眶区域皮肤。实施方案28是实施方案27所述的方法，其中皮肤是前额皮肤。实施方案29是实施方案27所述的方法，其中皮肤是眼眶区域皮肤。实施方案30是实施方案17至29中任一项所述的方法，其中组合物是乳状液。实施方案31是实施方案30所述的方法，其中乳状液是水包油乳状液。实施方案32是实施方案17至31中任一项所述的方法，其中组合物是凝胶。实施方案33是局部皮肤用组合物，其包含：(a)有效量的迷迭香叶提取物；(b)有效量的法国薰衣草提取物；和(c)有效量的千日菊提取物，其中局部皮肤用组合物能够减少人的皮肤中细纹或皱纹的外观和/或减少人的面部肌肉的肌肉收缩。实施方案34是实施方案33中所述的组合物，其中每种提取物分别为水提取物、醇提取物、多元醇提取物或其组合。实施方案35是实施方案33至34中任一项所述的组合物，其中迷迭香叶提取物是用包含甜菜碱、乳酸和水的液体提取溶剂混合物获得的；法国薰衣草提取物是用超临界二氧化碳(CO₂)提取溶剂获得的法国薰衣草花/叶/茎提取物；千日菊提取物是用包含水、乙醇和1,3-丙二醇的液体提取溶剂混合物获得的。实施方案36是实施方案33至35中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含：0.00001重量％至10重量％的迷迭香叶提取物；0.00001重量％至10重量％的法国薰衣草提取物；和0.00001重量％至10重量％的千日菊提取物。实施方案37是实施方案33至36中任一项所述的组合物，其中迷迭香叶提取物能够减少面部肌肉中的钙流入并减少面部肌肉中动作电位的产生；法国薰衣草提取物能够减少面部肌肉中的钙流入并减少面部肌肉中动作电位的产生；千日菊提取物能够减少面部肌肉中的钙流入并减少面部肌肉中动作电位的产生。实施方案38是实施方案33至37中任一项所述的组合物，其中千日菊提取物能够刺激皮肤中胶原蛋白的产生和层粘连蛋白的产生。实施方案39是实施方案33至38中任一项所述的组合物，其中迷迭香叶提取物能够减少皮肤中基质金属蛋白酶(MMP)1、基质金属蛋白酶3或基质金属蛋白酶9的产生。实施方案40是实施方案33至39中任一项所述的组合物，其中组合物是乳状液，优选水包油乳状液或凝胶。

“局部施用”是指将组合物施用或涂抹到嘴唇或角质组织的表面上。“局部皮肤用组合物”包括适合在皮肤和/或角质组织局部施用的组合物。这类组合物一般为皮肤病学上可接受的，这是因为当施用到皮肤和/或角质组织时，其不具有异常毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等。本发明的局部护肤组合物可以具有选定的黏度以避免施用到皮肤和/或角质组织后明显的滴落或淤积。

“角质组织”包括作为哺乳动物最外保护层的含有角质的层，并且包括但不限于嘴唇、皮肤、毛发和指甲。

术语“约”或“大约”定义为如本领域普通技术人员所理解的接近于。在一个非限制性实施方案中，术语定义为10％以内，优选5％以内，更优选1％以内，最优选0.5％以内。

术语“基本上”及其变体是指10％以内、5％以内、1％以内或0.5％以内的范围。

术语“抑制”或“减少”或这些术语的任何变体包括为了达到预期结果的任何可测量的减少或完全的抑制。术语“促进”或“增加”或这些术语的任何变体包括实现预期结果的蛋白质或分子(例如，基质蛋白如纤连蛋白、层粘连蛋白、胶原蛋白或弹性蛋白，或者分子如透明质酸)的任何可测量的增加或产生。

如本说明书和/或权利要求中所使用的术语，术语“有效的”指足以实现预期的、期望的或想要的结果。

当在权利要求和/或说明书中与术语“包含”、“包括”、“含有”或“具有”或这些术语的任何变体的一起使用时，要素前面不使用数量词可以表示“一个”，但是其也符合“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意思。

术语“重量％”、“体积％”或“摩尔％”分别指基于包含该组分的材料的总重量、总体积或总摩尔的组分的重量百分数、体积百分数或摩尔百分数。在非限制性实例中，100克材料中的10克成分是10重量％的成分。术语“％重量”与重量％具有相同的意思。

如本说明书和权利要求所使用的，单词“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括性的或开放式的，并且不排除附加的、未列举的要素或方法步骤。

使用的组合物和方法可以“包含”本说明书通篇所公开的成分或步骤的任一个、“主要由其组成”或“由其组成”。关于短语“基本上由……组成”，本发明的组合物和方法的基本和新颖的性质是减少细纹或皱纹的外观和/或减少肌肉收缩，优选面部肌肉收缩。

通过下面的详细描述，本发明的其他目的、特征和优点将变得明显。然而，应理解详细描述和实施例在表明本发明的具体实施方案时仅以举例说明的方式给出。另外，预期通过该详细描述，本发明的精神和范围内的变化和修改对于本领域技术人员会变得明显。

附图说明

以下附图形成本说明书的一部分，并被包含以进一步证实本发明的特定方面。通过参照一个或多于一个这些附图结合本文所示的说明书实施方案的详细说明可以更好地理解本发明。

图1提供了表明人群组的眉间区肌肉收缩的EMG响应面积(mV.s)从基线(第0周)开始改善的平均％的数据，所述人群组使用了具有迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的本发明的组合物。改善的平均％表明了随时间(第2周、4周和8周)的变化，眉间区域的肌肉收缩减少。“*”表示当与基线(第0周)相比，p<0.05，在统计上显著改善。

图2提供了表明人群组的眉间区肌肉收缩的EMG响应面积(mV.s)从基线(第0周)开始显示出改善的人％的数据，所述人群组使用了具有迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的本发明的组合物。显示出改善的人％表明随时间(第2周、4周和8周)的变化，眉间区域的肌肉收缩减少。

图3提供了表明人群组细纹或皱纹的外观减少从基线(第0周)开始改善的平均％的数据，所述人群组使用了具有迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的本发明的组合物。改善的平均％表明了随时间(第2周、4周和8周)的变化，经处理的区域中细纹或皱纹的外观减少。“*”表示当与基线(第0周)相比，p<0.05，在统计上显著改善。

图4提供了表明人群组细纹或皱纹的减少从基线(第0周)开始改善的人％的数据，所述人群组使用了具有迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的本发明的组合物。显示出改善的人％表明了随时间(第2周、4周和8周)的变化，经处理的区域中细纹或皱纹的外观减少。

图5提供的数据表明人群组眉间区肌肉收缩的EMG响应面积(mV.s)从基线(第0周)开始改善的平均％，所述人群组使用了具有迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的本发明的组合物，以及使用微型滚轮施用所述组合物与不使用微型滚轮施用所述组合物的对比。改善的平均％表明当使用微型滚轮来施用组合物时，第2周、4周和8周时面部肌肉收缩的减少与基线相比更快且更强。“*”表示当与基线(第0周)相比，p<0.05，在统计上显著改善。

图6提供了表明人群组的眉间区肌肉收缩的EMG响应面积(mV.s)从基线(第0周)开始显示出改善的人％的数据，所述人群组使用了具有迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的本发明的组合物。显示出改善的人％表明当使用微型滚轮来施用组合物时，在第2周、4周和8周时眉间区域面部肌肉收缩的减少更快且更强。

图7提供了表明人群组细纹或皱纹的外观减少从基线(第0周)开始改善的平均％的数据，所述人群组使用了具有迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的本发明的组合物。改善的平均％表明当使用微型滚轮施用组合物和不使用微型滚轮施用组合物时，随时间(第2周、4周和8周)的变化经处理的区域中细纹和皱纹的外观减少。“*”表示当与基线(第0周)相比，p<0.05，在统计上显著改善。

图8提供了表明人群组细纹或皱纹的减少从基线(第0周)开始改善的人％的数据，所述人群组使用了具有迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的本发明的组合物。显示出改善的人％表明当使用微型滚轮施用组合物和不使用微型滚轮施用组合物时，随时间(第2周、4周和8周)的变化经处理的区域中细纹和皱纹的外观减少。

图9提供了表明人群组的皮肤纹理/粗糙度从基线(第0周)开始改善的平均％的数据，所述人群组使用了具有迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的本发明的组合物。改善的平均％表明当使用微型滚轮施用组合物和不使用微型滚轮施用组合物时，随时间(第2周、4周和8周)的变化经处理的区域中皮肤纹理/粗糙度有所改善。“*”表示当与基线(第0周)相比，p<0.05，在统计上显著改善。

图10提供了表明人群组的皮肤纹理/粗糙度从基线(第0周)开始显示出改善的人％的数据，所述人群组使用了具有迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的本发明的组合物。显示出改善的人％表明当使用微型滚轮施用组合物和不使用微型滚轮施用组合物时，随时间(第2周、4周和8周)的变化经处理的区域中皮肤纹理/粗糙度有所改善。

具体实施方式

已经有发现提供了与用于处理皮肤中的细纹或皱纹，包括静态和动态细纹或皱纹的当前方法有关的至少一些问题的解决方法。当与具有更深的线条(例如，深度通常为两毫米或大于两毫米)的皱纹相比，细纹的特征一般在于其更小且更浅(例如，深度通常小于两毫米)。静态细纹或皱纹通常与松弛/不活动的皮肤上存在的细纹或皱纹有关。相比之下，动态细纹或皱纹出现在具有与肌肉收缩有关的皮肤运动的皮肤上。解决方法在于使用局部皮肤用组合物中的迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的至少两种和优选地全部三种的组合，以减少肌肉收缩，优选减少面部肌肉的肌肉收缩。认为这些成分的组合可以有助于在至少三个水平上减少静态和/或动态细纹或皱纹的外观，所述至少三个水平为：(1)在肌肉收缩可形成细纹或皱纹(例如，动态细纹或皱纹)的存在的情况下，减少肌肉收缩；(2)增加皮肤中(例如在角质细胞和/或成纤维细胞的皮肤细胞中)可以使皮肤更饱满和紧致的胶原蛋白的产生，这可以导致静态和/或动态细纹和皱纹的外观减少；(3)减少皮肤中基质金属蛋白酶(MMP)的产生和活性(术语“产生”和“活性”可以在本说明书全文中交换使用)，例如MMP-1、MMP-3和/或MMP-9的产生或活性，以进一步帮助减少静态和/或动态细纹或皱纹的外观——MMP酶可以分解或降解细胞外基质成分，例如胶原蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白；蛋白聚糖和玻连蛋白，其可以导致细纹或皱纹的形成；和(4)增加皮肤中层粘连蛋白的产生(例如，皮肤细胞如角质细胞和/或成纤维细胞)——层粘连蛋白是位于DEJ的结构糖蛋白。作为将细胞保持在一起的胶，由真皮成纤维细胞分泌层粘连蛋白以帮助促进表皮细胞到DEJ的细胞内和细胞间粘连。

在以下部分中描述本发明的这些和其他非限制性方面。

A.活性成分

本发明基于确定活性成分的组合——迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和/或千日菊提取物——可用于减少面部肌肉的肌肉收缩、减少和/或防止面部细纹或皱纹、减少由于重复的面部肌肉收缩导致的动态面部皱纹和前额皱纹(例如面部皱纹)、增加胶原蛋白的产生、减少基质金属蛋白酶、使皮肤紧致和/或减少松散、下垂和松弛的皮肤的外观，所述基质金属蛋白酶包含一种或多于一种基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9。

迷迭香叶提取物是来自迷迭香的叶的提取物。迷迭香是原产于地中海地区，是多年生木本草本植物，具有芳香、常绿、针状的叶和白色、粉红色、紫色或蓝色的花。它是可以最高可达1.5米高度的灌木，叶子长度为约2cm至4cm，呈绿色(顶面)和白色(底面)。在优选的情况下，迷迭香叶提取物可以从迷迭香的叶中获得。使用包含甜菜碱或水合甜菜碱，即一种氢键供体化合物(例如多元醇、有机酸等)和水的液体提取混合物对叶进行共晶提取过程。特别是，可以将叶部分捣碎或浸渍，然后置于上述共晶液体提取混合物以获得共晶提取物。然后，共晶提取物可用于本发明的组合物中。在一些优选的情况下，氢键供体是有机酸，优选乳酸。共晶利用了共晶溶剂，所述共晶溶剂是熔点低于其单独成分熔点的化合物的混合物。在一些情况下，迷迭香可商购获得。在一些情况下，迷迭香可以以商品名RosemaryEUTECTYS BLA^TM由Naturex(法国)提供。在本发明的上下文中发现，迷迭香叶提取物可以通过减少或抑制肌管中的钙流入和减少或防止动作电位产生，来减少或抑制肌管收缩。还发现了迷迭香叶提取物可以抑制或减少皮肤细胞(例如角质细胞或人真皮成纤维细胞)中MMP-1、MMP-3和MMP-3的产生或活性。

法国薰衣草提取物是来自植物法国薰衣草的提取物。法国薰衣草原产自地中海地区，是常绿灌木，高约30cm至100cm，叶为浅灰色且被绒毛，叶长约1cm至4cm。在优选的情况下，法国薰衣草提取物来自法国薰衣草的花、叶和茎部分的组合。这些部分可以混合然后捣碎或浸渍，或者将其捣碎或浸渍然后进行混合。然后，得到的经捣碎或经浸渍的花/叶/茎材料可以使用二氧化碳(CO₂作为溶剂进行超临界提取过程。然后，法国薰衣草花/叶/茎的超临界CO₂提取物可用于本发明的组合物中。法国薰衣草花/叶/茎的CO₂超临界提取物还可以与辛酸/癸酸甘油三酯混合，然后用于本发明的组合物中。在一些情况下，法国薰衣草可以商购获得。在一些情况下，法国薰衣草可以以商品名Stochey’s由Barnet Products LLC(恩格尔伍德克利夫斯，新泽西(美国))所提供。在本发明的上下文中发现，法国薰衣草提取物可以通过减少或抑制肌管中的钙流入和减少或防止动作电位的产生来减少或抑制肌管收缩。

千日菊提取物是来自千日菊植物的提取物。千日菊可以在南美、马达加斯加和马斯克林群岛发现。在优选的情况下，千日菊提取物来自千日菊的花、叶和茎部分的组合。这些部分可以混合然后捣碎或浸渍，或者将其捣碎或浸渍然后进行混合。然后，得到的经捣碎或经浸渍的花/叶/茎材料可以进行水-醇(优选水-乙醇)提取过程或水-醇-多元醇提取过程。在优选的情况中多元醇可以为1,3-丙二醇。醇可以从所得提取物中除去。然后，千日菊提取物可用于本发明的组合物中。在优选的情况下，千日菊花/叶/茎提取物可以从水-乙醇-1,3-丙二醇溶剂混合物中获得。然后，得到的提取物可用于本发明的组合物中或还可以进行加工来去除乙醇，然后可以用于本发明的组合物中。或者，提取溶剂可以是水和多元醇的组合，优选1,3-丙二醇，不含醇。反应混合物中存在的水、醇和/或多元醇的量可以按所需来改变。在一些情况下，千日菊可商购获得。在一些情况下，千日菊提取物可以以商品名

ExpressionAF由Gattefossé(法国)所提供。在本发明的上下文中发现，千日菊提取物可以通过减少或抑制肌管中的钙流入和减少或防止动作电位产生，来减少或抑制肌管收缩。还发现了千日菊提取物可以增加皮肤细胞(例如角质细胞或人真皮成纤维细胞)中胶原蛋白的产生和层粘连蛋白的产生或活性。

本文描述的提取物可以是通过本领域已知的提取方法及其组合而制备的提取物。提取方法的非限制性实例包括使用液-液提取、固相提取、水提取、乙酸乙酯、醇、丙酮、油、超临界二氧化碳、加热、压力、压降提取、超声提取等。提取物可以是液体、固体、干燥液体、再悬浮固体等。在某些情况下，每一种提取物可以由以下步骤制备：(i)获得期望的植物部分(例如叶、茎、茎皮、花、种子等)或整个植物；(ii)捣碎或浸渍植物部分或整个植物；(iii)任选地干燥经捣碎或经浸渍的植物部分或整个植物；(iv)在室温下(例如20℃至30℃)或加热(例如大于30℃或大于比30℃更高的温度，优选30℃至小于溶剂沸点的温度)下，将经捣碎或经浸渍的植物或植物部分置于提取溶剂中足够的时间(例如1分钟、5分钟、10分钟、30分钟、或45分钟或多于45分钟，或1小时、6小时、12小时、或18小时或多于18小时，或2天、3天、4天、5天、6天或多于6天)；(v)收集包含提取溶剂和经提取的植物材料的溶液(液体提取物)；(vi)任选地除去提取溶剂以获得经干燥的植物提取物；和(vii)任选地在液体载剂(例如水、醇、二醇等)中重构经干燥的植物提取物。在本发明的上下文中还考虑了来自迷迭香叶、法国薰衣草和/或千日菊的材料可以直接使用而无需对植物材料进行提取工艺。

本发明的组合物能够减弱收缩的面部肌肉的非限制性实例包括眉间复合肌、眼轮匝肌、额肌或降口角肌或其组合。眉间复合体的肌肉可以形成眉间纹，所述眉间复合体的肌肉包括皱眉肌、降眉肌、降眉间肌和额旁眼轮匝肌。皱眉肌位于额肌下方并用于将眉毛向内侧向下拉，而较小的降眉肌位于皱眉肌下方并用于将内侧眉毛向下拉。降眉间肌可以位于眉毛之间，并且还可以用于降低眉间内侧眉毛区域。额肌抵抗眉间复合肌的降低功能。额肌与眉间复合肌的上部合并，从该处向上延伸至前额下方。额肌是前额的肌肉并与眉毛的抬起有关。眼轮匝肌是靠近眼睑的肌肉。降口角肌是与皱眉有关的面部肌肉。在优选的方面，测量收缩活动。

B.成分的量

期望本发明的组合物可以包含任意量的本说明书所讨论的成分。该组合物还可以包含任意量的在本说明书全文中所描述的附加成分的组合(例如，颜料或附加的化妆品或药物成分)。在该组合物中任意成分的浓度可以改变。例如，在非限制性实施方案中，该组合物在其最终形式中可以包含、主要由以下组分组成或由以下组分组成：例如至少约0.0001％、0.0002％、0.0003％、0.0004％、0.0005％、0.0006％、0.0007％、0.0008％、0.0009％、0.0010％、0.0011％、0.0012％、0.0013％、0.0014％、0.0015％、0.0016％、0.0017％、0.0018％、0.0019％、0.0020％、0.0021％、0.0022％、0.0023％、0.0024％、0.0025％、0.0026％、0.0027％、0.0028％、0.0029％、0.0030％、0.0031％、0.0032％、0.0033％、0.0034％、0.0035％、0.0036％、0.0037％、0.0038％、0.0039％、0.0040％、0.0041％、0.0042％、0.0043％、0.0044％、0.0045％、0.0046％、0.0047％、0.0048％、0.0049％、0.0050％、0.0051％、0.0052％、0.0053％、0.0054％、0.0055％、0.0056％、0.0057％、0.0058％、0.0059％、0.0060％、0.0061％、0.0062％、0.0063％、0.0064％、0.0065％、0.0066％、0.0067％、0.0068％、0.0069％、0.0070％、0.0071％、0.0072％、0.0073％、0.0074％、0.0075％、0.0076％、0.0077％、0.0078％、0.0079％、0.0080％、0.0081％、0.0082％、0.0083％、0.0084％、0.0085％、0.0086％、0.0087％、0.0088％、0.0089％、0.0090％、0.0091％、0.0092％、0.0093％、0.0094％、0.0095％、0.0096％、0.0097％、0.0098％、0.0099％、0.0100％、0.0200％、0.0250％、0.0275％、0.0300％、0.0325％、0.0350％、0.0375％、0.0400％、0.0425％、0.0450％、0.0475％、0.0500％、0.0525％、0.0550％、0.0575％、0.0600％、0.0625％、0.0650％、0.0675％、0.0700％、0.0725％、0.0750％、0.0775％、0.0800％、0.0825％、0.0850％、0.0875％、0.0900％、0.0925％、0.0950％、0.0975％、0.1000％、0.1250％、0.1500％、0.1750％、0.2000％、0.2250％、0.2500％、0.2750％、0.3000％、0.3250％、0.3500％、0.3750％、0.4000％、0.4250％、0.4500％、0.4750％、0.5000％、0.5250％、0.0550％、0.5750％、0.6000％、0.6250％、0.6500％、0.6750％、0.7000％、0.7250％、0.7500％、0.7750％、0.8000％、0.8250％、0.8500％、0.8750％、0.9000％、0.9250％、0.9500％、0.9750％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％、6.6％、6.7％、6.8％、6.9％、7.0％、7.1％、7.2％、7.3％、7.4％、7.5％、7.6％、7.7％、7.8％、7.9％、8.0％、8.1％、8.2％、8.3％、8.4％、8.5％、8.6％、8.7％、8.8％、8.9％、9.0％、9.1％、9.2％、9.3％、9.4％、9.5％、9.6％、9.7％、9.8％、9.9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或其中可得到的任何范围的在本说明书的全文和权利要求所提及的至少一种成分。在非限制性方面，百分比可以按整个组合物的重量或体积进行计算。本领域普通技术人员会理解，给定组合物中的浓度可以根据成分的添加、替换和/或减少而改变。

C.载体

本发明的组合物可以包括所有类型的载剂和载体，或并入到所有类型的载剂和载体中。载体或载剂可以是药学上或皮肤病学上可接受的载体或载剂。载体或载剂的非限制性实例包括水、甘油、醇、油、含硅酮的化合物、硅酮化合物和蜡。变体和其它合适的载体对于本领域技术人员是明显的，并且适用于本发明。在一些方面，化合物、成分和试剂的浓度和组合以这样的方式进行挑选，使得组合物是化学相容的并且不形成从完成的产物中沉淀出来的复合物。

D.结构

本发明的组合物可以构造或配制成各种不同的形式。非限制性实例包括乳状液(例如，油包水、水包油包水、水包油、水包硅酮、硅酮包水、油包水包油、硅酮包水包油的乳状液)、乳液、溶液(水溶液或者水-醇溶液)、无水基质(例如口红和粉末)、凝胶、面膜、去角质膏和软膏。变体和其它的结构对于熟练技术人员是明显的，并且适用于本发明。

E.其他成分

除了发明人所公开的成分的组合之外，组合物还可以包含附加成分，例如化妆品成分和药物有效成分。这些附加成分的非限制性实例在以下子章节中进行描述。

1.化妆品成分

CTFA国际化妆品成分词典和手册(2004和2008)描述了多种可以在本发明的上下文中使用的非限制性化妆品成分。这些成分种类的实例包括：芳香剂(人造的和天然的；例如葡萄糖酸、苯氧乙醇和三乙醇胺)、染料和着色成分(例如蓝色1号、蓝色1号色淀、红色40号、二氧化钛、D&C蓝色4号、D&C绿色5号、D&C橙色4号、D&C红色17号、D&C红色33号、D&C紫色2号、D&C黄色10号和D&C黄色11号)、调味剂/芳香剂(例如，甜叶菊(Stevia rebaudiana)提取物和薄荷醇)、吸附剂、润滑剂、溶剂、保湿剂(包括例如润肤剂、湿润剂、成膜剂、闭塞剂和影响皮肤天然保湿机制的试剂)、拒水剂、紫外吸收剂(物理和化学吸收剂，例如对氨基苯甲酸(“PABA”)和相应的PABA衍生物、二氧化钛、氧化锌等)、精油、维生素(例如A、B、C、D、E和K)、微量金属(例如锌、钙和硒)、抗刺激物(例如类固醇和非-固醇类抗炎药)、植物提取物(例如芦荟(Aloe vera)、柑橘、黄瓜提取物、银杏(Ginkgo biloba)、人参和迷迭香)、抗菌剂、抗氧化剂(例如BHT和生育酚)、螯合剂(例如乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸四钠)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、pH调节剂(例如氢氧化钠和柠檬酸)、吸收剂(例如淀粉辛烯琥珀酸铝、高岭土、玉米淀粉、燕麦淀粉、环糊精、滑石和沸石)、皮肤漂白和光亮剂(例如氢醌和烟酰胺乳酸盐/酯)、湿润剂(例如山梨醇、脲、甲基葡糖醇聚醚-20、糖类同分异构体和甘露醇)、剥离剂、防水剂(例如氢氧化钠镁/铝硬脂酸盐)、皮肤调理剂(例如芦荟提取物、尿囊素、没药醇、神经酰胺、聚二甲基硅氧烷、透明质酸、生物糖胶-1、乙基己基甘油、戊二醇、氢化聚癸烯、辛基十二烷基油酸酯和甘草酸二钾)。这些成分中的一些非限制性实例在以下子章节中提供。

a.紫外吸收和/或反射剂

可以与本发明的组合物组合使用的紫外吸收和/或反射剂包括化学和物理防晒霜。可以使用的化学防晒物质的非限制性实例包括对氨基苯甲酸(PABA)、PABA酯(PABA甘油酯、戊基二甲醇PABA酯和辛基二甲醇PABA酯)、PABA丁酯、PABA乙酯、乙基二羟基丙醇PABA酯、二苯甲酮(氧苯酮、磺异苯酮、二苯甲酮和二苯甲酮-1到12)、肉桂酸盐/酯(甲氧基肉桂酸辛酯(桂皮酸酯))、对-甲氧基肉桂酸异戊酯、辛基甲氧基肉桂酸酯、西诺沙酯、二异丙基肉桂酸甲酯、甲氧基肉桂酸DEA盐、二异丙基肉桂酸乙酯、甘油辛酸酯二甲氧基肉桂酸酯和甲氧基肉桂酸乙酯)、肉桂酸酯、水杨酸酯(均甲基水杨酸酯、水杨酸苄酯、乙二醇水杨酸酯、异丙基苄醇水杨酸酯等)、邻氨基苯甲酸盐/酯、尿刊酸乙酯、原膜散酯、水杨酸辛酯、二苯甲酰基甲烷衍生物(例如阿伏苯宗)、奥克立林、辛基三嗪酮、棓酰棓酸三油酸酯、氨基苯甲酸甘油酯、2-羟基-1,4-萘醌和二羟基丙酮、乙基己基三嗪酮、二辛基丁酰胺基三嗪酮、苯亚甲基丙二酸脂聚二甲基硅氧烷、对苯二亚甲基二莰酮磺酸、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯、双二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸酯、双苯并恶唑基苯基乙基己基亚氨基三嗪、甲酚曲唑三硅氧烷、亚甲基双苯并三唑基四甲基丁基苯酚和双乙基己基氧苯酚甲氧苯基三嗪、4-甲基苯亚甲基莰酮和4-甲氧基肉桂酸异戊酯。物理防晒霜的非限制性实例包括高岭土、滑石、凡士林和金属氧化物(例如二氧化钛和氧化锌)。

b.保湿剂

可以与本发明的组合物一起使用的保湿剂的非限制性实例包含氨基酸、硫酸软骨素、双甘油、赤藓糖醇、果糖、葡萄糖、甘油、甘油聚合物、乙二醇、1,2,6-己三醇、蜂蜜、透明质酸、氢化蜂蜜、氢化淀粉水解物、肌醇、乳糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖、甘露醇、天然保湿因子、PEG-15丁二醇、聚甘油山梨醇、吡咯烷酮羧酸的盐、PCA钾、丙二醇、糖类同分异构体、葡糖醛酸钠、PCA钠、山梨醇、蔗糖、海藻糖、脲和木糖醇。

其他实例包括乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、苏氨酸、赖氨酸、丙氨酸、藻提取物、翠叶芦荟(Aloe barbadensis)、翠叶芦荟提取物、翠叶芦荟凝胶、药蜀葵(Altheaofficinalis)提取物、杏(Prunus armeniaca)仁油、精氨酸、精氨酸天冬氨酸盐/酯、山金车(Arnica montana)提取物、天冬氨酸、鳄梨(Persea gratissima)油、屏障鞘脂、丁醇、蜂蜡、山萮醇、β-谷甾醇、白桦(Betula alba)树皮提取物、琉璃苣(Borago officinalis)提取物、假叶树(Ruscus aculeatus)提取物、丁二醇、金盏花(Calendula officinalis)提取物、金盏花油、小烛树(Euphorbia cerifera)蜡、菜籽油、辛酸/癸酸甘油三酯、豆蔻(Elettariacardamomum)油、巴西棕榈Copernicia cerifera)蜡、胡萝卜(Daucus carota sativa)油、蓖麻(Ricinus communis)油、神经酰胺、地蜡、鲸蜡硬脂醇聚醚-5、鲸蜡硬脂醇聚醚-12、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂醇己酸乙酯酯、鲸蜡醇聚醚-20、鲸蜡醇聚醚-24、鲸蜡醇乙酸酯、鲸蜡醇辛酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、洋甘菊(Anthemis nobilis)油、胆固醇、胆固醇酯、胆甾醇羟基硬脂酸酯、柠檬酸、鼠尾草(Salvia sclarea)油、可可(Theobroma cacao)脂、椰油醇-辛酸酯/癸酸酯、椰子(Cocos nucifera)油、胶原蛋白、胶原蛋白氨基酸、玉米(Zeamays)油、脂肪酸、癸基油酸酯、聚二甲基硅氧烷共聚醇、聚二甲基硅氧烷醇、己二酸二辛酯、琥珀酸二辛酯、二聚季戊四醇六辛酸酯/六癸酸酯、DNA、赤藓糖醇、乙氧基二乙二醇、亚油酸乙酯、蓝桉(Eucalyptus globulus)油、月见草(Oenothera biennis)油、脂肪酸、斑点老鹳草(Geranium maculatum)油、葡萄糖胺、葡糖谷氨酸酯、谷氨酸、甘油聚氧乙烯醚-26、甘油、丙三醇、二硬脂酸甘油酯、羟基硬脂酸甘油酯、月桂酸甘油酯、亚油酸甘油酯、豆蔻酸甘油酯、油酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯SE、甘氨酸、乙二醇硬酯酸酯、乙二醇硬酯酸酯SE、葡糖氨基葡聚糖、葡萄(Vitis vinifera)籽油、榛子(Corylus americana)坚果油、榛子(Corylus avellana)坚果油、己二醇、透明质酸、混合红花(Carthamus tinctorius)油、氢化蓖麻油、氢化椰油酸甘油酯、氢化椰子油、氢化羊毛脂、氢化卵磷脂、氢化棕榈油甘油酯、氢化棕榈仁油、氢化大豆油、氢化牛脂酸甘油酯、氢化植物油、水解胶原蛋白、水解弹性蛋白、水解葡糖氨基葡聚糖、水解角蛋白、水解大豆蛋白、羟基化羊毛脂、脯氨酸、羟基脯氨酸、硬脂酸异鲸蜡醇酯、异鲸蜡醇硬脂酰基硬脂酸酯、油酸异癸酯、异硬脂酸异丙酯、羊毛脂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、异硬脂酰胺DEA、异硬脂酸、异硬脂醇乳酸酯、异硬脂醇新戊酸酯、茉莉(Jasminum officinale)油、霍霍巴(Buxuschinensis)油、巨藻、石栗(Aleurites moluccana)坚果油、乳酰胺MEA、羊毛脂醇聚醚-16、羊毛脂醇聚氧乙烯醚乙酸酯-10、羊毛脂、羊毛脂酸、羊毛脂醇、羊毛脂油、羊毛脂蜡、薰衣草(Lavandula angustifolia)油、卵磷脂、柠檬(Citrus medica limonum)油、亚油酸、亚麻酸、澳洲坚果(Macadamia ternifolia)油、麦芽糖醇、母菊(Chamomilla recutita)油、甲基葡糖倍半硬脂酸酯、甲基硅烷醇PCA、矿物油、貂油、被孢霉油、肉豆蔻醇乳酸酯、肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯、肉豆蔻醇丙酸酯、新戊二醇二辛酸酯/二癸酸酯、辛基月桂醇、辛基月桂醇肉豆蔻酸酯、辛基月桂醇硬脂酰基硬脂酸酯、羟基硬脂酸辛酯、棕榈酸辛酯、水杨酸辛酯、硬脂酸辛酯、油酸、橄榄(Olea europaea)油、橙(Citrus aurantium dulcis)油、棕榈(Elaeisguineensis)油、棕榈酸、泛硫乙胺、泛醇、泛醇基乙基醚、石蜡、PCA、桃(prunus persica)仁油、花生(Arachis hypogaea)油、PEG-8C12-18酯、PEG-15椰油烷基胺、PEG-150二硬脂酸酯、PEG-60甘油异硬脂酸酯、PEG-5甘油硬脂酸酯、PEG-30甘油硬脂酸酯、PEG-7氢化蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、PEG-40失水山梨醇全油酸酯、PEG-5大豆甾醇、PEG-10大豆甾醇、PEG-2硬脂酸酯、PEG-8硬脂酸酯、PEG-20硬脂酸酯、PEG-32硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-50硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-150硬脂酸酯、十五酸内酯、薄荷(Mentha piperita)油、凡士林、磷脂、多氨基酸多糖缩合物、聚甘油二异硬脂酸酯-3、聚季铵盐-24、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85、肉豆蔻酸钾、棕榈酸钾、丙二醇、丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯、丙二醇二辛酸酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇月桂酸酯、丙二醇硬脂酸酯、丙二醇硬脂酸酯SE、PVP、吡哆醇二棕榈酸酯、视黄醇、视黄醇棕榈酸酯、米(Oryza sativa)糠油、RNA、迷迭香(Rosmarinusofficinalis)油、玫瑰油、红花(Carthamus tinctorius)油、鼠尾草(Salvia officinalis)油、檀香(Santalum album)油、丝氨酸、血清蛋白、芝麻(Sesamum indicum)油、牛油果(Butyrospermum parkii)脂、蚕丝粉、软骨素硫酸钠、透明质酸钠、乳酸钠、棕榈酸钠、PCA钠、聚谷氨酸钠、可溶性胶原、失水山梨醇月桂酸酯、失水山梨醇油酸酯、失水山梨醇棕榈酸酯、失水山梨醇倍半油酸酯、失水山梨醇硬脂酸酯、山梨醇、大豆(Glycine soja)油、鞘脂、角鲨烷、角鲨烯、硬脂酰胺MEA-硬脂酸酯、硬脂酸、硬脂氧基聚二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷、硬脂醇、硬脂醇甘草亭酸酯、硬脂醇庚酸酯、硬脂醇硬脂酸酯、向日葵(Helianthusannuus)籽油、甜杏仁(Prunus amygdalus dulcis)油、合成蜂蜡、生育酚、乙酸生育酚酯、生育酚亚油酸酯、三山嵛酸甘油酯、十三烷醇新戊酸酯、十三烷醇硬脂酸酯、三乙醇胺、三硬脂酸甘油酯、脲、植物油、水、蜡、小麦(Triticum vulgare)胚芽油和依兰(Cananga odorata)油。

c.抗氧化剂

可以与本发明的组合物一起使用的抗氧化剂的非限制性实例包括乙酰半胱氨酸、抗坏血酸多肽、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸甲基硅烷醇果胶酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、BHA、BHT、叔丁基氢醌、半胱氨酸、半胱氨酸HCL、二戊基氢醌、二叔丁基氢醌、二鲸蜡醇硫代二丙酸酯、二油基生育酚甲基硅烷醇、抗坏血酸硫酸酯二钠、二硬脂醇硫代二丙酸酯、双十三烷醇硫代二丙酸酯、没食子酸月桂酯、异抗坏血酸、抗坏血酸酯、阿魏酸乙酯、阿魏酸、没食子酸酯、氢醌、巯基乙酸异辛酯、曲酸、抗坏血酸镁、抗坏血酸磷酸酯镁、甲基硅烷醇抗坏血酸酯、天然植物抗氧化剂例如绿茶或葡萄籽提取物、去甲二氢愈创木酸、没食子酸辛酯、苯巯基乙酸、磷酸抗坏血酸酯生育酚酯钾、亚硫酸钾、没食子酸丙酯、醌、迷迭香酸、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、异抗坏血酸钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、超氧化物歧化酶、巯基乙酸钠、山梨醇缩糠醛、硫二甘醇、亚硫基二乙酰胺、硫二乙酸、巯基乙酸、硫代乳酸、硫代水杨酸、生育酚聚氧乙烯醚-5、生育酚聚氧乙烯醚-10、生育酚聚氧乙烯醚-12、生育酚聚氧乙烯醚-18、生育酚聚氧乙烯醚-50、生育酚、托可索伦、乙酸生育酚酯、生育酚亚油酸酯、生育酚烟酸酯、生育酚琥珀酸酯和三(壬基酚)亚磷酸酯。

d.结构化剂

在其它非限制性方面，本发明的组合物可以包含结构化剂。在某些方面，结构化剂帮助向组合物提供流变学特征以促进组合物的稳定性。在其它方面，结构化剂还可以起乳化剂或表面活性剂的作用。结构化剂的非限制性实例包括硬脂酸、棕榈酸、硬脂醇、鲸蜡醇、山嵛醇、硬脂酸、棕榈酸、具有平均约1个到约21个亚乙基氧单元的硬脂醇的聚乙二醇醚、具有平均约1个到约5个亚乙基氧单元的鲸蜡醇的聚乙二醇醚及其混合物。

e.乳化剂

在本发明的某些方面，组合物不包含乳化剂。然而，在其它方面，组合物可以包含一种或多于一种乳化剂。乳化剂可以降低相间界面张力并改善乳状液的配制和稳定性。乳化剂可以是非离子的、阳离子的、阴离子的和两性离子的乳化剂(参见McCutcheon's(1986)；美国专利5011681号；4421769号；3755560号)。非限制性实例包括甘油酯、丙二醇酯、丙二醇的脂肪酸酯、聚丙二醇的脂肪酸酯、山梨醇的酯、失水山梨醇酐酯、羧酸共聚物、葡萄糖的酯和醚、乙氧基化的酯、乙氧基化的醇、磷酸烷基酯、聚氧乙烯脂肪醚磷酸酯、脂肪酸酰胺、酰基乳酸酯、脂肪酸盐、TEA硬脂酸酯、DEA油醇聚氧乙烯-3醚磷酸酯、聚乙二醇20失水山梨醇单月桂酸酯(聚山梨醇酯20)、聚乙二醇5大豆甾醇、硬脂醇聚氧乙烯醚-2、硬脂醇聚氧乙烯醚-20、硬脂醇聚氧乙烯醚-21、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂基葡糖苷、鲸蜡硬脂醇、C12-13链烷醇聚醚-3、PPG-2甲基葡萄糖醚二硬脂酸酯、PPG-5-鲸蜡醇聚醚-20、双-PEG/PPG-20/20二甲硅酮、鲸蜡醇聚醚-10、聚山梨醇酯80、鲸蜡醇磷酸酯、鲸蜡醇磷酸酯钾、二乙醇胺鲸蜡醇磷酸酯、聚山梨醇酯60、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、花生醇、花生醇葡糖苷、羟丙基环糊精及其混合物。

f.含有硅酮的化合物

在非限制性方面，含硅酮的化合物包括分子主链由交替的硅和氧原子与连接在硅原子上的侧基组成的聚合产物家族中的任意成员。通过改变-Si-O-链的长度、侧基和交联，硅酮可以合成为各种各样的材料。它们的稠度可以从液体到凝胶到固体不等。

可以在本发明的上下文中使用的含硅酮的化合物包含在本说明书中所描述的或本领域普通技术人员已知的那些。非限制性实例包括硅油(例如挥发性和非挥发性油)、凝胶和固体。在某些方面，含硅酮的化合物包括硅油，例如聚有机硅氧烷。聚有机硅氧烷的非限制性实例包括二甲聚硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、环己硅氧烷、聚硅酮-11、苯基三甲基聚硅氧烷、聚三甲基硅氨基二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷或这些的混合物和其它任何给定比例的有机硅氧烷材料，以根据预期的应用(例如，对特定区域例如皮肤、毛发或眼睛)达到期望的稠度和应用特征。“挥发性硅油”包含具有低气化热的硅油，即通常低于约50卡每克硅油的硅油。挥发性硅油的非限制性实例包含：环聚二甲基硅氧烷，例如Dow Corning344 Fluid、Dow Corning 345 Fluid、Dow Corning 244 Fluid和Dow Corning 245 Fluid、Volatile Silicon 7207(康涅狄格州丹伯里的Union Carbide Corp.)；低黏度聚二甲基硅氧烷，即黏度大约为50cst或更低的聚二甲基硅氧烷(例如聚二甲基硅氧烷，例如DowCorning 200-0.5cst Fluid)。Dow Corning Fluid可以从密歇根州米德兰的Dow CorningCorporation购得。在CTFA化妆品成分词典第三版中(通过引用并入)，环聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷分别被描述为环状二甲基聚硅氧烷化合物和用三甲基硅氧基单元封端的完全甲基化的线性硅氧烷聚合物。可以在本发明的上下文中使用的其它非限制性挥发性硅油包含从纽约州沃特福德的General Electric Co.，Silicone Products Div.和密歇根州艾德里安的Stauffer Chemical Co.的SWS Silicones Div.可获得的那些。

g.去角质剂

去角质剂包含去除皮肤外表面上的死皮细胞的成分。这些试剂可以通过物理、化学和或其他方式起作用。物理去角质剂的非限制性实例包括研磨剂，例如浮石、二氧化硅、布、纸、贝壳、珠、固体晶体、固体聚合物等。化学去角质剂的非限制性实例包括酸和酶去角质剂。可用作去角质剂的酸包括但不限于乙醇酸、乳酸、柠檬酸、α羟基酸、β羟基酸等。本领域技术人员已知的其他去角质剂也可考虑为在本发明的上下文中有用。

h.精油

精油包括来自药草、花、树和其它植物的油。这些油一般以植物细胞间微小的液滴存在，并可以通过本领域技术人员已知的若干方法(例如，蒸气蒸馏、花香提取(即通过使用脂肪提取)、浸渍、溶剂提取或机械压榨)进行提取。当这些类型的油暴露于空气时，它们趋于挥发(即挥发性油)。因此，虽然许多精油是无色的，但是随着时间它们可以氧化并变得更深。精油不溶于水，但溶于醇、醚、固定油(植物的)和其它有机溶剂。在精油中发现的典型物理特征包括从约160℃到240℃变化的沸点和从约0.759到约1.096的密度。

精油一般通过发现油的植物来命名。例如，玫瑰油或薄荷油分别来自玫瑰或薄荷植物。可以在本发明情况下使用的精油的非限制性实例包括芝麻油、澳洲坚果油、茶树油、月见草油、西班牙鼠尾草油、西班牙迷迭香油、芫荽油、百里香油、众香果油、玫瑰油、茴香油、凤仙花油、香柠檬油、玫瑰木油、香柏油、甘菊油、鼠尾草油、香紫苏油、丁香油、柏木油、桉油、茴香油、海茴香油、乳香油、香叶油、姜油、葡萄柚油、茉莉油、杜松子油、薰衣草油、柠檬油、柠檬草油、梨莓油、橘子油、甘牛至油、没药油、橙花油、橙皮油、广藿香油、胡椒油、黑胡椒油、苦橙叶油、松油、奥图玫瑰油、迷迭香油、檀香油、绿薄荷油、甘松油、香根草油、冬青油或依兰油。还预期本领域技术人员已知的其它精油在本发明的上下文中有用。

i.增稠剂

包括增稠剂或凝胶剂在内的增稠剂，包括可以增加组合物黏度的物质。增稠剂包括可以增加组合物黏度而基本上不改变组合物内活性成分功效的那些。增稠剂还可以增加本发明的组合物的稳定性。在本发明的某些方面，增稠剂包括氢化聚异丁烯、三羟基硬脂酸甘油酯、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/vp共聚物或它们的混合物。

可以在本发明情况下使用的另外的增稠剂的非限制性实例包括羧酸聚合物、交联的聚丙烯酸酯聚合物、聚丙烯酰胺聚合物、多糖和胶。羧酸聚合物的实例包括含有一种或多于一种衍生自丙烯酸的单体的交联化合物、经取代的丙烯酸和这些丙烯酸和经取代的丙烯酸的盐和酯，其中所述交联剂含有两个或多余两个碳-碳双键，并衍生自多元醇(参见美国专利第5087445号；第4509949号；第2798053号；CTFA国际化妆品成分词典，第四版，1991，第12页和80页)。可商购获得的羧酸聚合物的实例包括卡波姆，其为丙烯酸与蔗糖或季戊四醇的烯丙基醚交联的均聚物(例如，来自B.F.Goodrich的CARBOPOL^TM900系列)。

交联的聚丙烯酸酯聚合物的非限制性实例包括阳离子型和非离子型聚合物。实例描述于美国专利第5100660号；第4849484号；第4835206号；第4628078号；第4599379号。

聚丙烯酰胺聚合物(包括非离子的聚丙烯酰胺聚合物，其包含经取代的支化或非支化聚合物)的非限制性实例包含聚丙烯酰胺、异构烷烃和月桂醇聚醚-7、丙烯酰胺和经取代的丙烯酰胺与丙烯酸和经取代的丙烯酸取代的多嵌段共聚物。

多糖的非限制性实例包括纤维素、羧甲基羟乙基纤维素、乙酸丙酸羧酸纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、微晶纤维素、纤维素硫酸钠及其混合物。其他实例为烷基取代的纤维素，其中纤维素聚合物的羟基被羟烷基化(优选地羟乙基化或羟丙基化)以形成羟烷基化的纤维素，其然后用C₁₀-C₃₀直链或带支链的烷基通过醚键进行进一步改性。一般这些聚合物为C₁₀-C₃₀直链或带支链的醇与羟烷基纤维素的醚。其它有用的多糖包括硬葡聚糖，其包含每三个单元具有(1-6)个连接的葡萄糖的(1-3)连接的葡萄糖单元的直链。

本发明可以使用的胶的非限制性实例包括阿拉伯树胶、琼脂、藻胶、藻酸、藻酸铵、支化淀粉、藻酸钙、角叉菜胶钙、肉毒碱、角叉菜胶、糊精、明胶、结冷胶、瓜尔豆胶、瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵、锂蒙脱石、透明质酸、水合二氧化硅、羟丙基壳聚糖、羟丙基瓜尔胶、卡拉亚胶、巨藻、角豆胶、纳豆胶、藻酸钾、角叉菜胶钾、藻酸丙二醇酯、菌核胶、羧甲基葡聚糖钠、角叉菜胶钠、黄蓍胶、黄原胶及其混合物。

j.防腐剂

可以在本发明的情况下使用的防腐剂的非限制性实例包括季铵盐防腐剂如聚季铵盐-1和苄烷铵卤化物(例如苯扎氯铵(“BAC”)和苯扎溴铵)、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、苯氧基乙醇、苄醇、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫汞撒或其组合。

2.药物成分

还预期药物活性剂对本发明的组合物是有用的。药物活性成分的非限制性实例包括抗粉刺剂、用于处理酒渣鼻的试剂、止痛剂、麻醉剂、肛门直肠用药、抗组胺药、包括非甾族消炎药在内的消炎剂、抗生素、抗菌剂、抗病毒素、抗微生物剂、抗癌活性物、抗疥螨剂、灭虱剂、抗肿瘤药、防汗药、止痒剂、抗牛皮癣药、抗脂溢剂、生物活性蛋白质和多肽、烧伤处理剂、烧灼剂、脱色剂、脱毛剂、尿布疹处理剂、酶、毛发生长刺激剂、包括DFMO及其盐和类似物在内的毛发生长抑制剂、止血剂、角质分离剂、口疮处理剂、唇疱疹处理剂、牙科或牙周处理剂、光敏感活性物、皮肤保护剂/屏障剂、包括激素和皮质激素的类固醇、晒伤处理剂、遮光剂、经皮活性物、鼻活性物、阴道活性物、疣处理剂、创伤处理剂、创伤愈合剂等。

F.试剂盒

还考虑了用于本发明的一些方面的试剂盒。例如，本发明的组合物可以包含在试剂盒内。试剂盒可以包括容器。容器可以包括瓶子、金属管、层合管、塑料管、分配器、加压容器、屏障容器、包装、隔室、口红容器、压缩容器、能够保存化妆品组合物的化妆品盘或其它类型的容器如注射或吹塑成型的塑料容器，其中保存分散体或组合物或所需的瓶子、分配器或包装。试剂盒和/或容器在其表面可包含标记。例如，标记可以是字词、短语、缩写、图片或符号。

所述容器可以分配预定量的组合物。在其他实施方案中，可以挤压容器(例如金属管、层压管或塑料管)以分配所需量的组合物。组合物可以分配为喷雾、气溶胶、液体、流体或半固体。容器可以具有喷雾、抽吸或挤压机构。试剂盒还可以包含使用试剂盒组分以及使用任何包含于容器内的组合物的说明书。说明书可以包括如何施用、使用和保存组合物的说明。

实施例

包括了以下实施例以说明本发明的优选实施方案。本领域技术人员应理解，以下实施例中所公开的技术代表本发明人发现的在本发明的实践中发挥良好作用的技术，并因此可以被认为为其实践建立优选的模式。然而，根据本公开，本领域技术人员应理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，在所公开的具体实施方案中可以做许多改变，并仍获得类似或相似的结果。

根据本公开，本文所公开和要求保护的所有组合物和方法无需过度实验即可制成和实施。尽管本发明的组合物和方法已经按照优选实施方案进行了描述，但是对于本领域技术人员明显的是，在不脱离本发明的构思、精神和范围的情况下，可以对所述组合物和方法以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序中实施变化。更具体地，明显的是化学上和生理上都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂，同时实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如由所附权利要求限定的本发明的精神、范围和构思内。

实施例1

(体外肌管收缩数据)

发现迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物中的每一种都减少了肌管的收缩，这可以导致面部肌肉的肌肉收缩减少，和由于重复性面部肌肉收缩引起的面部深层细纹或皱纹以及动态面部皱纹和前额皱纹减少。用于获得数据的方法包括：(1)将原代人骨骼肌成肌细胞(HSMM)分化成肌管；(2)然后，用“诱发剂”(Acetcholine)处理肌管，继而引起钙流入并产生动作电位；和(3)该动作电位引起肌肉细胞收缩。表1提供了所使用的每种提取物的收缩量和得到的钙水平的抑制效果。

表1

*迷迭香叶提取物是共晶提取物，其中用于制备提取物的溶剂是甜菜碱、乳酸和水的液体混合物。所述提取物可以以商品名Rosemary EUTECTYS BLA^TM由Naturex(法国)提供。

**使用的法国薰衣草提取物是法国薰衣草花/叶/茎的超临界CO₂提取物。该CO₂提取物与辛酸/癸酸甘油三酯混合。该提取物以商品名Stochey’s由Barnet Products LLC(恩格尔伍德克利夫斯，新泽西(美国))提供。

***使用的千日菊提取物是水-乙醇提取物，其中溶剂包括水、乙醇和1,3-丙二醇的液体混合物。从所得提取液体中去除乙醇。该提取物以商品名

ExpressionAF由Gattefossé(法国)提供。

实施例2

(体外胶原蛋白表达数据)

发现千日菊提取物提高了人真皮成纤维细胞中胶原蛋白的产生。表2提供了数据和使用的提取物的量。

表2

成分	增加的胶原蛋白的产生
		千日菊提取物*	1.0重量％浓度＝61％增加的胶原蛋白的产生

*使用的千日菊提取物是水-乙醇提取物，其中溶剂包括水、乙醇和1,3-丙二醇的液体混合物。从所得提取液体中去除乙醇。该提取物以商品名

ExpressionAF由Gattefossé(法国)提供。

胶原蛋白是对皮肤结构重要的一种细胞外基质蛋白。增加的胶原蛋白合成帮助改善皮肤紧实度和弹性。使用生物分析检验千日菊提取物对人真皮成纤维细胞产生前胶原肽(一种胶原蛋白前体)的效果。该分析的终点是反映前胶原肽的存在和细胞活性的分光光度测量。该分析采用定量的三明治酶免疫分析技术，因此对前胶原肽特异的单克隆抗体预先涂覆在微孔板上。将标准品和样品移液到孔中，存在的任何前胶原肽被固定化的抗体结合。洗去所有未结合的物质后，向孔中添加对前胶原肽特异的酶联多克隆抗体。冲洗以去除任何未结合的抗体-酶试剂之后，向孔中加入底物溶液，使颜色显现与最初步骤中结合的前胶原肽的量成比例。停止颜色显现，使用酶标仪在450nm处测量颜色的强度。

为了产生样品和对照，在37℃下10％的CO₂中，用10％的胎牛血清(Mediatech)在标准DMEM生长培养基中孵育亚汇合的正常人成熟真皮成纤维细胞(Cascade Biologics)。用每种测试成分和对照处理细胞3天。孵育之后，收集细胞培养基，并如上所述，使用来自Takara(#MK101)的夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)定量前胶原肽的分泌量。

实施例3

(体外层粘连蛋白表达数据)

发现千日菊提取物提高了人真皮成纤维细胞中层粘连蛋白的产生。表3提供了数据和使用的提取物的量。

表3

成分	增加的层粘连蛋白的产生
		千日菊提取物*	1.0重量％浓度＝53％层粘连蛋白产生的增加

*使用的千日菊提取物是水-乙醇提取物，其中溶剂包括水、乙醇和1,3-丙二醇的液体混合物。从所得提取液体中去除乙醇。该提取物以商品名

ExpressionAF由Gattefossé(法国)提供。

层粘连蛋白是真皮-表皮连接(DEJ)(也称为基膜)中主要的蛋白质。DEJ位于真皮和表皮之间，并连结形成叫做网脊的指状突出。表皮细胞从真皮的血管中接收养分。网脊增大了暴露于这些血管和所需养分的表皮的表面积。DEJ提供两种组织室的粘连，并控制皮肤的结构完整性。层粘连蛋白是位于DEJ中的结构糖蛋白。作为将细胞保持在一起的胶，由真皮成纤维细胞分泌层粘连蛋白以帮助促进表皮细胞与DEJ的细胞内和细胞间黏附。通过量化在孵育的人成纤维细胞的细胞上清液中的层粘连蛋白来监测层粘连蛋白的分泌，所述人纤维细胞用具有测试成分(千日菊提取物)的培养基处理了3天。孵育之后，在酶联免疫吸附测试(ELISA)中，使用针对每种蛋白质的免疫荧光抗体测量层粘连蛋白。对细胞代谢活性的测量进行标准化，其由3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)的生物转化来测定。

实施例4

(体外MMP抑制数据)

发现迷迭香叶提取物抑制了人真皮成纤维细胞中的基质金属蛋白酶(MMP)1、基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9。表4提供了数据和使用的提取物的量。

表4

*迷迭香叶提取物是共晶提取物，其中用于制备提取物的溶剂是甜菜碱、乳酸和水的液体混合物。所述提取物可以以商品名Rosemary EUTECTYS BLA^TM由Naturex(法国)提供。

基质金属蛋白酶1的酶活性(MMP-1)分析：MMP是胞外蛋白酶，其凭借广泛的底物特异性在许多正常和疾病状态中起作用。MMP-1底物包括胶原蛋白IV。分子探针Enz/Chek白明胶酶/胶原酶分析试剂盒(#E12055)利用荧光明胶底物来检测MMP1蛋白酶活性。在溶蛋白性裂解后，显示亮绿色荧光，并可以使用荧光酶标仪监测以测量酶活性。将来自Invitrogen的Enz/Chek白明胶酶/胶原酶分析试剂盒(#E12055)设计为体外分析以测量MMP-1酶活性。分析迷迭香叶提取物。该分析依赖于纯净的MMP-1酶降解荧光明胶底物的能力。一旦底物被MMP-1特异裂解，则显示亮绿色荧光并使用荧光酶标仪来监测。在纯净的酶和底物存在或不存的条件下孵育迷迭香叶提取物以确定其蛋白酶抑制能力。

基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9(MMP3和MMP9)的酶活性分析：MMP-3底物包含胶原蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白；而MMP9底物包含胶原蛋白VII、纤连蛋白和层粘连蛋白。使用来自BioMol International的用于MMP3(AK-400)和MMP-9(AK-410)的比色药物发现试剂盒，该分析设计用于其使用含硫多肽作为显色底物(Ac-PLG-[2-巯基-4-甲基-戊酰基]-LG-OC₂H₅)5,6来测量MMP的蛋白酶活性。MMP裂解位点的肽键由含硫多肽中的硫酯键替代。该键被MMP水解产生巯基，其与DTNB[5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)，埃尔曼试剂]反应生成2-硝基-5-硫代苯甲酸，可以通过其在412nm处的吸光度进行检测(在pH为6.0和高于7时，ε＝13600M^-1cm^-1)。分析迷迭香叶提取物。

实施例5

(体内临床数据)

获得了迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的体内临床数据。迷迭香叶提取物是共晶提取物，其中用于制备提取物的溶剂是甜菜碱、乳酸和水的液体混合物。所述提取物可以以商品名Rosemary EUTECTYS BLA^TM由Naturex(法国)提供。使用的法国薰衣草提取物是法国薰衣草花/叶/茎的超临界CO₂提取物。该CO₂提取物与辛酸/癸酸甘油三酯混合。该提取物以商品名Stochey’s由Barnet Products LLC(恩格尔伍德克利夫斯,新泽西(美国))提供。使用的千日菊提取物是水-乙醇提取物，其中溶剂包括水、乙醇和1,3-丙二醇的液体混合物。从所得提取液体中去除乙醇。该提取物以商品名

ExpressionAF由Gattefossé(法国)提供。

体内临床研究的目的是评估三种提取物的组合在30个人(n＝30)中在四周内每日施用两次的情况下，对肌肉松弛和减少皱纹的功效。将三种提取物的组合置于皮肤病学可接受的载体上。皮肤病学可接受的载体设计用于测试三种提取物的组合的功效。相信皮肤病学可接受的载体中的其他成分不会对临床数据结果产生积极或消极影响。皮肤病学可接受的载体中使用的每种提取物的量为1重量％的迷迭香叶提取物、2重量％的法国薰衣草提取物和2重量％的千日菊提取物。

体内临床研究设计为随机对照、研究者盲法临床研究。使用以下参数：(1)对象——年龄为35岁至70岁的身体状况良好(无需体检)的女性并且经临床确定，在10分的范围内评分为3-7分(包含地)的中度皱眉纹/眉间纹；(2)测试部位——眉间区；(3)评估时间点——基线(第0周)、第2周、第4周和第8周；(4)测试方法——用于肌肉响应(mV/s)：AUC(曲线下的面积)的肌电描记术(EMG)；和(5)测量的临床终点——0到9范围内的细纹和皱纹以及皮肤纹理。

图1至图2提供了通过EMG测试表示肌肉收缩的抑制的数据。图3至图4提供了表示细纹和皱纹的外观减少的数据。如这些图1至图4中所示，数据表明迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合可以减少面部肌肉收缩并可以减少细纹和皱纹的整体外观。以下表5提供了表示著名的可注射的神经调质(

(onabotulinumtoxinA))与迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合之间的EMG响应和临床对比的数据。

表5

*表示当与基线相比，p<0.05，在统计上显著改善。

**将BoTox–5U用作对照以验证方法并在5个人上进行。每个人对眉间区给予5单位(U)的Botox并测量％EMG响应(AUC)。这样做是为了使上述提取物组合的研究标准化。

实施例6

(体内临床数据)

在对比临床研究中，获得了迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的体内临床数据。迷迭香叶提取物是共晶提取物，其中用于制备提取物的溶剂是甜菜碱、乳酸和水的液体混合物。所述提取物可以以商品名Rosemary EUTECTYS BLA^TM由Naturex(法国)提供。使用的法国薰衣草提取物是法国薰衣草花/叶/茎的超临界CO₂提取物。该CO₂提取物与辛酸/癸酸甘油三酯混合。该提取物以商品名Stochey’s由BarnetProducts LLC(恩格尔伍德克利夫斯，新泽西(美国))提供。使用的千日菊提取物是水-乙醇提取物，其中溶剂包括水、乙醇和1,3-丙二醇的液体混合物。从所得提取液体中去除乙醇。该提取物以商品名

ExpressionAF由Gattefossé(法国)提供。

对比体内临床研究的目的是评估三种提取物的组合对实施在四周内每天两次的肌肉收缩和减少皱纹的功效，所述实验组1参与者使用了微型滚轮(n＝33)，实验组2参与者不使用微型滚轮(n＝30)。将三种提取物的组合置于皮肤病学可接受的载体上作为测试产品。皮肤病学可接受的载体设计用于测试三种提取物的组合在使用微型滚轮施用和不使用微型滚轮施用时的功效。实验组1的研究参与者使用了1.0mm的微型滚轮。研究参与者在用私人的洗面奶清洁他们的脸之后，早上和晚上在其眉毛之间施用含有三种提取物的组合物。对于实验组1，研究参与者在晚上每周使用3次微型滚轮，在眉毛之间来回滚动微型滚轮4次至5次，每次通过时改变方向。对于实验组1和实验组2，将封闭贴片(例如

)置于眉间整夜。相信皮肤病学可接受的载体中的其他成分不会对临床数据结果产生积极或消极影响。皮肤病学可接受的载体中使用的每种提取物的量为1重量％的迷迭香叶提取物、2重量％的法国薰衣草提取物和2重量％的千日菊提取物。

对比体内临床研究设计为随机对照、研究者盲法临床研究。使用以下参数：(1)对象——年龄为35岁至70岁的身体状况良好(无需体检)的女性并且经临床确定，在10分的范围内评分为3-7分(包含地)的中度皱眉纹/眉间纹；(2)测试部位——眉间区；(3)测试产品——前额；补充的产品——

封闭贴片和微型滚轮；(4)评估时间点——基线(第0周)、第2周、第4周和第8周；(5)测试方法——用于肌肉响应(mV/s)：AUC(曲线下的面积)的肌电描记术(EMG)；和(6)测量的临床终点——0到9范围内的细纹和皱纹以及皮肤纹理。

图5至图6提供了通过EMG测试表示肌肉收缩抑制的数据，比较了使用微型滚轮和不使用微型滚轮的应用之间的改善百分比。图7至图8提供了表示细纹和皱纹的外观减少的数据，比较了使用微型滚轮和不使用微型滚轮的应用之间的改善百分比。如图5至图8中所示，数据表明，含有迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的组合物的施用，其与使用微型滚轮结合以促进组合物向皮肤内渗透，这可以减少面部肌肉收缩并且可以减少细纹和皱纹的整体外观。经确定，与基线相比，在第2、4周和8周使用微型滚轮的组合物的施用可有效实现更快和更强的面部肌肉收缩减少，并在4周内减少细纹和皱纹以及皮肤纹理，其中在8周后79％的对象在细纹和皱纹以及皮肤平滑度上均显示出改善。还确定了在8周后不使用微型滚轮的组合物的施用仍可有效实现面部肌肉收缩的减少，并在4周内减少细纹和皱纹以及皮肤纹理，其中在8周后87％的对象在细纹和皱纹上均显示出改善，90％的对象在皮肤平滑度上显示出改善。

图9至图10提供了表示改善皮肤纹理/粗糙度的数据，比较了使用微型滚轮和不使用微型滚轮的应用之间的改善百分比。如图9至图10中所示，数据表明，含有迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合的组合物的施用，其与使用微型滚轮结合以促进组合物向皮肤内渗透，这可以在第2周、4周和8周后在眉间区显著改善皮肤纹理和粗糙度。经确定，79％的对象在用微型滚轮施用组合物的8周后显示出皮肤平滑度有所改善。还确定了不使用微型滚轮施用组合物仍可在8周后有效改善皮肤平滑度。

以下表6提供了表示众所周知的可注射的神经调质(

(onabotulinumtoxinA))与用微型滚轮施用和不用微型滚轮施用的迷迭香叶提取物、法国薰衣草提取物和千日菊提取物的组合之间的EMG响应和临床对比的数据。

表6

*表示当与基线相比，p<0.05，在统计上显著改善。

**在比较实验组1和实验组2时，将BoTox–5U用作阳性对照并在5个人上进行。每个人对眉间区给予5单位(U)的Botox并测量％EMG响应(AUC)。这样做是为了使上述提取物组合的研究标准化。

实施例7

(附加分析)

可以通过本领域普通技术人员已知的方法进行确定可以用于确定在本说明书全文和权利要求书中所公开的任意一种成分、或成分的任意组合、或具有所述成分的组合的组合物功效的分析。以下是可以在本发明的情况下使用的非限制性分析。应认识到，可以使用其它测试过程，包括例如客观的和主观的过程。

抗氧化(AO)分析：测量了本说明中所公开的成分、成分的组合或具有所述组合的组合物中的任意一种的总抗氧化能力的体外生物分析。所述分析依赖样品中抗氧化剂抑制

(2,2'-联氮-双-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐])被正铁肌红蛋白氧化成

·+的能力。活生物体的抗氧化体系包含酶，例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶；高分子，例如白蛋白、血浆铜蓝蛋白和铁蛋白；和大量小分子，包括抗坏血酸、α-生育酚、β-胡萝卜素、还原型谷胱甘肽、尿酸和胆红素。內源的和源自食物的抗氧化剂的总数表示细胞外液的总抗氧化能力。所有不同抗氧化剂的协作提供比单独的任何单个化合物更强的对抗反应性氧或氮自由基侵袭的保护。因此，总的抗氧化能力与测量单独组分获得的抗氧化能力相比可以给出更相关的生物信息，因为其考虑了血浆和体液中存在的所有抗氧化剂的累积效应。样品中抗氧化剂预防ABTS氧化的能力与Trolox，即水溶性生育酚类似物进行比较，并以Trolox的摩尔当量进行定量。来自Cayman Chemical(安娜堡，美国密歇根)的抗氧化能力试剂盒#709001可以用作体外生物分析，以测量说明书中公开的每种活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物中的总抗氧化能力。方案可以根据制造商的建议进行。

ORAC分析：还可以通过测量这种成分或组合物的抗氧化活性来分析本说明书公开的任意一种活性成分、成分的组合或具有所述组合的组合物的氧自由基吸收(或吸收率)能力(ORAC)。抗氧化活性表示减少氧化试剂(氧化剂)的能力。该分析定量抑制氧化剂，例如已知导致损害细胞(例如皮肤细胞)的氧自由基的活动的程度及时长。可通过本领域普通技术人员已知的方法(参见美国专利公布第2004/0109905号和第2005/0163880号，以及可商购获得的试剂盒例如Zen-Bio ORAC抗氧化分析试剂盒(#AOX-2))来确定本说明书公开的任意一种活性成分、成分组合或具有所述组合的组合物的ORAC值。Zen-Bio ORAC抗氧化分析试剂盒测量了由于通过AAPH(2,2'-偶氮二-2-甲基丙基咪二盐酸盐)分解而形成过氧化氢-自由基的随时间的荧光素荧光的损失。Trolox，水溶性维生素E，以剂量依赖的方式作为抑制荧光素衰变的阳性对照。

环氧合酶(COX)分析：体外环氧合酶-1和环氧合酶-2(COX-1、环氧合酶-2)抑制分析。COX是展现环氧合酶和过氧化物酶两者活性的双功能酶。环氧合酶活性将花生四烯酸转化为过氧化氢内过氧化物(前列腺素G2；PGG2)，过氧化物酶组分将内过氧化物(前列腺素H2；PGH2)还原为相应的醇、前列腺素、血栓素和环前列腺素的前体。该COX抑制剂筛选分析测量环氧合酶的过氧化物酶组分。过氧化物酶活性通过监测氧化的N,N,N',N'-四甲基-对苯二胺(TMPD)的出现比色地进行分析。该抑制剂筛选分析包含COX-1和COX-2酶两者，以筛选同工酶特异性抑制剂。可以使用比色COX(绵羊)抑制剂筛选分析(#760111，CaymanChemical)来分析本说明书中所公开的每一种活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物对纯化的环氧合酶(COX-1或COX-2)的影响。根据制造商的指示，纯化的酶、血红素和试验提取物可以在分析缓冲液中混合，并在室温下摇晃孵育15分钟。孵育之后，可以加入花生四烯酸和比色底物开始反应。可以在590nm处通过比色板读数来评估颜色变化。COX-1或COX-2活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照物比较来计算，以确定试验提取物抑制纯化的酶活性的能力。

脂肪氧合酶(LO)分析：体外脂肪氧合酶(LO)抑制分析。LO是非血红素的含铁的加双氧酶，其催化分子氧加成到脂肪酸。亚油酸盐/酯和花生四烯酸盐/酯是植物和动物中LO的主要底物。然后，花生四烯酸可以转化为羟基二十三烯(HETE)酸衍生物，其随后转化为白三烯，白三烯为有效的炎症介质。该分析通过测量利用花生四烯酸培养的脂肪氧合酶(5-LO、12-LO或15-LO)产生的氢过氧化物提供一种精确且方便的用于筛选脂肪氧合酶抑制剂的方法。可以使用比色LO抑制剂筛选试剂盒(#760700，Cayman Chemical)来确定本说明书中所公开的每一种活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物抑制酶活性的能力。纯化的15-脂肪氧合酶和试验成分可以在分析缓冲液中混合，并在室温下摇晃孵育10分钟。孵育之后，可以加入花生四烯酸开始反应，并且混合物可以在室温下再孵育额外的10分钟。可以加入比色底物终止催化，颜色变化可以通过在490nm测定的荧光板进行评估。脂肪氧合酶活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照物对比来计算，以确定说明书中所公开的每种活性成分、任意一种成分的组合、或具有所述组合的组合物抑制纯净酶活性的能力。

B16色素沉着分析：黑素生成是黑素细胞产生黑色素的过程，黑色素是一种天然产生的给予皮肤、毛发和眼睛颜色的色素。抑制黑素生成有益于预防皮肤变黑并减轻与老化有关的黑斑。该生物分析采用B16-F1黑素细胞(ATCC)，一种永生化的小鼠黑色素瘤细胞，以分析化合物对黑素生成的效果。该分析的终点是黑色素产生和细胞活性的分光光度测量。可以在37℃下10％的CO₂中利用10％的胎牛血清(Mediatech)在标准DMEM生长培养基中培养B16-F1黑素细胞，然后用本说明书中所公开任意一种活性成分、成分的组合或具有所述组合的组合物处理6天。孵育之后，通过在405nm处的吸收测量黑色素分泌并定量细胞活性。

弹性蛋白刺激分析：弹性蛋白是结缔组织蛋白，其在伸展或收缩后帮助皮肤恢复形状。弹性蛋白也是在需要储存机械能的位置使用的重要负载蛋白。弹性蛋白是由许多可溶性弹性蛋白原蛋白分子在由赖氨酰氧化酶催化的反应中连接而制备。通过使用针对弹性蛋白的免疫荧光抗体来染色培养的人成纤维细胞，可以在培养的人成纤维细胞中监测弹性蛋白分泌和弹性蛋白纤维。

层粘连蛋白和纤连蛋白刺激分析：层粘连蛋白和纤连蛋白是真皮-表皮连接(DEJ)(也称为基膜)中主要的蛋白质。DEJ位于真皮和表皮之间，并连结形成叫做网脊的指状突出。表皮细胞从真皮的血管中接收养分。网脊增大暴露于这些血管和所需养分的表皮的表面积。DEJ提供两种组织室的粘连，并控制皮肤的结构完整性。层粘连蛋白和纤连蛋白是位于DEJ中的两种结构糖蛋白。考虑到将细胞保持在一起的胶，真皮成纤维细胞分泌层粘连蛋白和纤连蛋白以帮助促进表皮细胞与DEJ的细胞内和细胞间粘连。层粘连蛋白和纤连蛋白的分泌可以通过定量在培养的人成纤维细胞的细胞上清液中的层粘连蛋白和纤连蛋白来监测，培养的人成纤维细胞用含或不含测试成分的培养基处理3天。培养之后，在酶联免疫吸附测试(ELISA)中，可以使用针对每种蛋白质的免疫荧光抗体测量层粘连蛋白和纤连蛋白含量。对细胞代谢活性的测量进行标准化，其由3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)的生物转化来测定。

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分析：TNF超家族的原型配体，TNF-α，是在炎症中起主要作用的多效细胞因子。其表达的增加与促炎活性上调有关。该生物分析可用于分析本说明书公开的任意一种活性成分、成分的组合或具有所述组合的组合物对通过人表皮角化细胞的TNF-α产生的作用。该分析的终点可以为反映TNF-α的存在和细胞活性的分光光度测量。该分析采用定量的三明治酶免疫分析技术，由此对TNF-α特异的单克隆抗体预先涂覆在微孔板上。可将标准品和样品移液到孔中，存在的所有TNF-α由固定化的抗体结合。洗去所有未结合的物质后，可向孔中添加对TNF-α特异的酶联多克隆抗体。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后，可添加底物溶液到孔中，颜色显现与最初步骤中结合的TNF-α的量成比例，使用微孔板测定仪在450nm处检测。可以停止显色，并测量颜色的强度。在37℃下5％的CO₂中在EPILIFE^TM标准生长培养基(Cascade Biologics)中培养的次融合的正常人类成年角质细胞(Cascade Biologics)可用佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA，10ng/ml，SigmaChemical，#P1585-1MG)和本说明书公开的任意一种活性成分、成分的组合或具有所述组合的组合物处理6小时。PMA已经显示导致TNF-α分泌明显的增加，所述TNF-α分泌在处理6小时后达到峰值。孵育之后，可以收集细胞培养基，并使用来自R&D Systems(#DTA00C)的三明治酶联免疫吸附分析(ELISA)定量TNF-α的分泌量。

蘑菇酪氨酸酶活性分析：在哺乳动物细胞中，酪氨酸酶在来自酪氨酸(和来自多巴色素聚合)的黑色素生物多步合成中催化两个步骤。酪氨酸酶位于黑素细胞中，并产生给予皮肤、毛发和眼睛颜色的黑色素(芳香醌化合物)。在存在或不存在本说明书公开的每种活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物的情况下，纯净蘑菇酪氨酸酶(Sigma)可以与其底物L-Dopa(Fisher)一起孵育。可以在490nm处通过比色板读数来评估色素形成。蘑菇酪氨酸酶活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照物进行比较来计算，以确定测试成分或其组合抑制纯净酶活性的能力。可以将测试提取物抑制与曲酸(Sigma)的进行比较。

弹性蛋白酶分析：来自Molecular Probes(俄勒冈州尤金，美国)的

弹性蛋白酶分析(试剂盒#E-12056)可以用作用于测量本说明书中所公开的每种活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物的弹性蛋白酶活性抑制的体外酶抑制分析。EnzChek试剂盒含有可溶的牛颈韧带弹性蛋白，其可用染料标记以使共轭荧光淬灭。非荧光的底物可以被弹性蛋白酶或其他蛋白酶消化以产生高荧光的片段。产生的荧光增强可以用荧光微孔板测定仪进行监测。来自弹性蛋白底物的消化产物在约505nm处具有吸收最大值，在约515nm处具有荧光发射最大值。当利用EnzChek弹性蛋白酶分析试剂盒以筛选弹性蛋白酶抑制剂时，可以将肽、N-甲氧基琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val-氯甲基酮用作选择性的、共同的弹性蛋白酶抑制剂。

油控制分析：用于测量皮脂腺中皮脂分泌的减少和/或皮脂腺中皮脂产生的减少的分析可以通过使用本领域普通技术人员已知的标准技术进行分析。在一个例子中，可以使用前额。可以将本说明书中所公开的每种活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物每天一次或两次施用到前额的一部分一段固定的日子(例如1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天或多于14天)，而前额的其他部分不用所述组合物处理。在一段固定的日子期满后，皮脂分泌可以通过将细吸油纸施用到处理过的和未处理的前额皮肤上进行分析。这是通过首先用湿的和干的布从处理过的和未处理的区域去除所有皮脂完成的。然后将吸油纸施用到处理过的和未处理的前额区域，并且围绕前额放置橡皮筋以轻轻地将吸油纸压到皮肤上。2小时后，可以移去吸油纸，使其干燥，然后进行透照。越深的吸油纸对应于越多的皮脂分泌(或较浅的吸油纸对应于减少的皮脂分泌。

红斑分析：测量皮肤发红减少的分析可以使用Minolta Chromometer进行评估。皮肤红斑可以通过在对象前臂施用0.2％的十二烷基硫酸钠溶液来引发。区域用封闭贴片保护24小时。24小时后，除去贴片并可以使用Minolta Chroma Meter的a*值对刺激引发的发红进行评估。a*值测量红色区域的肤色变化。读数后立即用本说明书公开的活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物处理区域。可以定期进行重复测量以确定制剂减少发红和刺激的能力。

皮肤水分/水合分析：皮肤水分/水合的益处可以通过利用以Nova Dermal PhaseMeter进行的阻抗测量进行测量。阻抗计测量皮肤水分含量的变化。皮肤外层具有不同的电性质。当皮肤干燥时，其导电很差。当其变得更加水合时，导电率结果增加。因此，皮肤阻抗(与导电性有关)的变化可以用于评价皮肤水合的变化。装置可以根据仪器说明对每个测试日进行校准。还可以对温度和相对湿度进行标记。对对象可以进行如下评估：测量前其可以在具有限定湿度(例如30％至50％)和温度(例如68℃至72℃)的室内进行平衡。在脸的每一侧进行三个独立的阻抗测定，并对其进行记录和平均。阻抗计可以使用T5设定，其对施用到脸上每五秒的阻抗值进行平均。变化可以以统计方差和显著性进行报道。根据该方法可以测定本说明书中公开的每种活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物。

皮肤明晰度和雀斑与老年斑减少的分析：使用Minolta Chromometer评估皮肤明晰度和雀斑与老年斑的减少。可以使用Minolta Chroma Meter的a*值评估肤色变化，以确定由于产品处理引起的潜在刺激。a*值测量红色区域的肤色变化。这用于确定本说明书中公开的每种活性成分、任意一种成分的组合或具有所述组合的组合物是否减少刺激。测量可以在脸的每一侧进行并进行平均，作为左边和右边脸的值。皮肤明晰度也可以使用Minolta Meter来测量。测量是Minolta Meter的a*值、b值和L值的组合，并与皮肤的亮度有关，而且很好地对应皮肤的平滑度和水合。皮肤读数如上进行。在一个非限制性方面，皮肤明晰度可以描述为L/C，其中C是色度并定义为(a²+b²)^1/2。

皮肤干燥、表面细纹、皮肤平滑度和肤色分析：皮肤干燥、表面细纹、皮肤平滑度和肤色可以用临床评分技术进行评估。例如，皮肤干燥的临床评分可以通过五点标准Kligmanscale进行确定：(0)皮肤是柔软和湿润的；(1)皮肤呈现中性而没有可见的干燥；(2)皮肤触摸感觉轻微干燥而没有可见的剥落；(3)皮肤感觉干燥、粗糙并且具有有些鳞屑的发白的外观；以及(4)皮肤感觉非常干燥、粗糙并且具有有鳞屑的发白的外观。评估可以由两个临床医师独立进行并平均。

肤色临床评分分析：肤色的临床评分可以通过十点模拟数值刻度来实施：(10)均匀的粉红棕色皮肤。手持放大镜检查时没有暗的、发红的或有鳞的斑块。皮肤的微观纹理摸上去非常均匀；(7)不用放大镜观察均匀的肤色。没有鳞状区域，但是有由于色素淀积或红斑引起的轻微变色。没有直径大于1cm的色斑；(4)容易地注意到皮肤色斑和不均匀的纹理。少量鳞片。某些区域摸上去粗糙的皮肤；以及(1)不均匀的皮肤着色和纹理。大量的鳞片和色斑区域，为色素减退、红斑或黑斑。大面积的直径超过1cm的不均匀着色。评估由两个临床医师独立进行并进行平均。

皮肤平滑度的临床评分分析：皮肤平滑度的临床评分可以通过一个十点模拟数值刻度进行分析：(10)平滑的，皮肤是湿润的和闪光的，手指划过表面时没有阻力；(7)一定程度平滑的，微小的阻力；(4)粗糙的、可见地改变的，摩擦时有摩擦力；和(1)粗糙的、片状的、不均匀的表面。评估由两个临床医师独立进行并进行平均。

用Packman等人(1978)公开的方法进行的皮肤平滑度和皱纹减少的分析：皮肤平滑度和皱纹的减少也可以通过使用Packman等人(1978)公开的方法进行可视化评估。例如，每个对象就诊时，对每个对象的表面面部皱纹(SFL)的深度、浅度和总数都可以进行认真的评分和记录。通过将数量因子乘以深度/宽度/长度因子得到数字的分数。获得眼睛区域和嘴巴区域(左侧和右侧)的分数，并将其加到一起作为总的皱纹分数。

用Hargens Ballistometer进行的皮肤紧致度分析：皮肤紧致度可以用HargensBallistometer进行测量，Hargens Ballistometer是通过在皮肤上落下一个小物体并记录前两个反弹峰来评估皮肤弹性和紧致度的装置，来进行测量。Ballistometry是使用相对钝的尖端(4平方毫米-接触面积)的小且轻的探针。探针轻轻地穿透进入皮肤，得到根据皮肤外层性质的测量，所述皮肤外层包括角质层和外表皮以及部分真皮层。

用Gas Bearing Electrodynamometer进行的皮肤柔软度/柔韧性分析：皮肤柔软度/柔韧性可以使用Gas Bearing Electrodynamometer进行评估，Gas BearingElectrodynamometer是测量皮肤压力/张力性质的仪器。皮肤的黏弹性与皮肤保湿有关。可以通过用双面胶将探针附着在皮肤表面实现对脸颊区域预定位点的测量。大约3.5gm的力平行施加于皮肤表面，精确地测量皮肤的位移。然后可以计算皮肤的柔韧性，并以DSR表示(弹簧动刚度，以gm/mm计)。

用复制品进行的线条和皱纹的显现分析：皮肤上线条和皱纹的显现可以使用复制品进行评估，所述复制品是皮肤表面的印模。可以使用如硅橡胶的材料。复制品可以通过图像分析进行分析。线条和皱纹可见性的变化可以通过利用硅复制品形成对象的脸并用计算机图像分析系统分析复制品图像进行客观地定量。复制品可以从眼睛区域和颈部区域获得，并用数码相机以低角度入射照明拍摄。数字图像可以用图像处理程序进行分析并确定复制品被皱纹和细纹覆盖的区域。

用表面光度仪/触针法进行的皮肤表面轮廓分析：皮肤表面轮廓可以通过使用表面光度仪/触针法进行测量。这包括闪光或拖动触针穿过复制品表面。触针的垂直位移通过距离传感器可以录入计算机，并且在扫描固定长度的复制品后，皮肤轮廓的分析可以以二维曲面产生。该扫描可以沿着固定的轴重复任意次数以产生模拟的皮肤3-D图像。使用触针技术可以获得十个随机的复制品截面，并组合产生平均值。感兴趣的值包括Ra，其为通过积分相对于平均轮廓高度的轮廓高度计算得到的所有粗糙度(高度)值的算术平均值。Rt，其为最高峰和最低谷之间的最大垂直距离，以及Rz，其为平均峰振幅减去平均峰高度。数值是以mm为单位的校准值。设备应在每次使用前通过扫描已知数值的金属标准物进行标准化。Ra值可以通过下式计算：R_a＝标准化粗糙度；lm＝横向(扫描)长度；以及y＝轮廓位置相对于平均轮廓高度(x轴)的绝对值。

MELANODERM^TM分析：在其它非限制性方面，可以通过使用皮肤类似物例如MELANODERMTM来评价说明书中公开的每种活性成分、任意一种成分的组合、或具有所述组合的组合物的功效。黑素细胞是皮肤类似物中细胞的一种，当暴露于L-二羟苯基丙氨酸(L-DOPA)，即黑色素的前体时呈阳性染色。皮肤类似物MELANODERMTM可以用包含说明书中公开的每种活性成分、任意一种成分的组合、或具有所述组合的组合物的各种碱来处理、或仅用碱来处理作为对照。或者，皮肤类似物的未经处理的样品可以用作对照物。

丝聚合蛋白的产生：可测量角化细胞中由于本说明书中所公开的每种活性成分、任意一种成分组合或具有该组合的组合物而导致的丝聚合蛋白产生的变化。丝聚合蛋白是皮肤中天然保湿因子(NMF)的前体。增加的NMF提高了皮肤中的水分含量。使用分析角化细胞溶解产物中的丝聚合蛋白浓度的生物测试来测定在经处理和未经处理的角化细胞中的丝聚合蛋白的产生。可用于量化丝聚合蛋白产生的生物分析的非限制性实例为

Simon^TM免疫印迹方案。对于每个样品，使正常人表皮角化细胞(NHEK)在来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的含钙的EPI-200–Mattek

生长培养基中生长。在处理之前，在37℃下5％的CO₂中，使NHEK在生长培养基中孵育过夜。然后将NHEK在含有1％测试化合物/提取物的生长培养基或不含化合物/提取物(阴性对照)的生长培养基中孵育24小时至36小时。然后可将NHEK清洗、收集并于冰或更冷的物体上储存直至用裂解缓冲液和超声在冰上裂解。可确定样品的蛋白质浓度并用于使样品标准化。裂解物可在-80℃下存储直至在定量分析中使用。

Simon^TM蛋白质免疫印迹生物分析使用定量的蛋白质免疫印迹免疫分析技术，该技术使用了对丝聚合蛋白特异性的抗体来定量检测样品中的丝聚合蛋白。将细胞样品裂解并对蛋白质浓度进行标准化。然后可将标准化的样品和分子量标准样使用毛细管电泳装载并运行于变性蛋白质分离凝胶。使用对丝聚合蛋白特异的初代抗体对凝胶内的蛋白质进行固定及免疫探测。然后可以用与初代抗体结合的酶联检测抗体对经固定的蛋白质进行免疫探测。然后可向经固定的蛋白质中添加化学发光底物溶液以使化学发光显色与在固定化中结合的丝聚合蛋白的量成比例。在特定的时间终止化学发光显色，并且可以测量化学发光信号的强度并与阳性对照和阴性对照比对。

闭合蛋白的产生：可测定在角化细胞中的由于本说明书中所公开的每种活性成分、任意一种成分组合的或具有该组合的组合物而导致的闭合蛋白产生的变化。闭合蛋白是对于紧密连结的形成和皮肤水分屏障功能重要的蛋白质。在经处理和经未处理的角化细胞中如何确定闭合蛋白产生的非限制性实例是通过使用分析在角化细胞裂解物中的闭合蛋白浓度的生物分析。实施

Simon^TM蛋白质免疫印迹方案进行该生物分析。对于样品，在37C下5％的CO₂中，来自Life Technologies(C-005-5C)的成人表皮角化细胞(HEKa)在EPILIFE^TM生长培养基中生长24小时，EPILIFE^TM生长培养基含有来自LifeTechnologies(M-EP-500-CA)的钙，补充有来自Life Technologies(S-101-5)的Keratinocyte Growth Supplement(HKGS)。然后使用测试化合物/提取物、无化合物/提取物的阴性对照或具有1mM的CaCl₂的阳性对照，使HEKa在生长培养基中孵育24小时至48小时。然后将HEKa清洗、收集并于冰或更冷的物体上储存直至使用裂解缓冲液和超声在冰上裂解。可确定样品的蛋白质浓度并用于使样品标准化。裂解物在-80℃下存储直至在生物测试中使用。

Simon^TM蛋白质免疫印迹生物分析使用定量的蛋白质免疫印迹免疫分析技术，该技术使用了对闭合蛋白特异的抗体来定量检测样品中的闭合蛋白。将细胞样品裂解并对蛋白质浓度进行标准化。然后将标准化的样品和分子量标准样使用毛细管电泳装载并运行于变性蛋白质分离凝胶。然后，使用对闭合蛋白特异的初代抗体对凝胶内的蛋白质进行固定以及免疫探测。用与初代抗体结合的酶联检测抗体对经固定的蛋白质进行免疫探测。然后向经固定的蛋白质中添加化学发光底物溶液以使化学发光显色与在固定化中结合的闭合蛋白的量成比例。可在特定的时间终止化学发光显色，并且可以测量化学发光信号的强度并与阳性对照和阴性对照比对。

角化细胞单层渗透性：可测量由于本说明书中所公开的每种活性成分、任意一种成分的组合或具有该组合的组合物而导致的角化细胞单层的渗透性变化。角化细胞单层的渗透性是皮肤屏障完整性的量度。作为非限制性实例，可以使用Millipore(ECM642)的体外血管渗漏分析测定经处理和未经处理的角化细胞中的角化细胞单层渗透性。该分析分析了内皮细胞吸附、输送和渗透。简略来说，来自Life Technologies(C-005-5C)的成人表皮角化细胞可被接种到在收集孔内的多孔胶原蛋白涂覆的膜上。在37℃下和5％的CO₂中，角化细胞在EPILIFE^TM生长培养基中培养24小时，EPILIFE^TM生长培养基含有来自LifeTechnologies的钙(M-EP-500-CA)，补充有来自Life Technologies的KeratinocyteGrowth Supplement(HKGS)(S-101-5)。培养时间使得细胞形成单层并封闭膜孔。然后将培养基替换成含有(测试样品)或不含有(未处理对照)测试化合物/提取物的新鲜培养基，并且该角化细胞在37℃下和5％的CO₂中孵育另外48小时。在含有/不含有测试化合物/提取物的孵育之后，为了测定角化细胞单层渗透性，培养基被替换成含有高分子量异硫氰酸荧光素(FITC)-Dextran的新鲜培养基，该角化细胞在37℃下和5％的CO₂中培养另外4小时。在4小时的孵育期间，FITC可以以与单层膜的渗透性成比例的速率穿过该角化细胞单层和多孔膜进入收集孔。在4小时的孵育后，可测定细胞活性和收集孔中FITC的含量。对于FITC含量，收集孔中的培养基被收集，并且在520nm处激发时在480nm(Em)处测定培养基的荧光。与未经处理的对照相比，渗透率百分比和变化百分比可以通过以下等式确定：渗透率百分比＝((测试样品的平均Ex/Em)/平均Ex/未经处理的对照Em)*100；变化百分比＝测试样品的渗透率百分比-未经处理的对照的渗透率百分比。

透明质酸的产生：可测量在人真皮成纤维细胞中的由于本说明书中所公开的每种活性成分、任意一种成分的组合或具有该组合的组合物而导致的透明质酸产生的变化。HA是与基质结构的稳定性有关的多糖，并且与向组织和细胞提供膨压有关。作为一个非限制性实例，可以使用来自R&D Systems(DY3614)的Hyaluronan DuoSet ELISA试剂盒测定在经处理和未经处理的成人真皮成纤维(HDFa)细胞中的HA的产生。在该分析中，对于样品的产生，在处理之前，在37℃和10％CO₂下在饥饿培养基中(在Dulbecco氏改良Eagle培养基中的0.15％的牛胎儿血清和1％的青霉素链霉素溶液)孵育由Cascade Biologics获得的次融合的HDFa细胞(C-13-5C)72小时。然后，将细胞用新鲜饥饿培养基孵育24小时，所述饥饿培养基含有测试化合物、阳性对照(来自Sigma-Aldrich(P1585)的佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯和来自Sigma-Aldrich(P3201)的血小板衍生生长因子)，或者不含添加剂。然后收集培养基并在-80℃下冷冻直至在ELISA测试中使用。

简而言之，该ELISA分析采用定量的三明治酶免疫分析技术，因此对HA特异的捕获抗体可以预先涂覆在微孔板上。将标准品、来自经处理和未经处理的细胞的培养基移液至微孔板，以使存在的任意HA被经固定的抗体结合。洗去所有未结合的物质后，向孔中添加对HA特异的酶联检测抗体。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后，向孔中添加底物溶液，使得颜色显现能够与最初步骤中结合的HA的量成比例。在特定的时间停止颜色显现，颜色的强度可以使用酶标仪在450nm处测量。

透明质酸酶活性的抑制：可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、任意一种成分的组合或具有该组合的组合物而导致的透明质酸酶活性的变化。透明质酸酶是分解HA的酶。HA是一种与基质结构的稳定性有关的多糖，并且与向组织和细胞提供膨压有关。作为非限制性实例，可以使用修改来自Sigma-Aldrich方案#EC 3.2.1.35的体外方案测定透明质酸活性。简略来说，向含有测试化合物或对照组的微孔板反应孔中添加来自Sigma-Aldrich(H3506)的1-S型透明质酸。可使用鞣酸作为阳性对照抑制剂，对于对照的酶不添加测试化合物，并且可使用含有测试化合物的孔或并没有透明质酸的阳性对照作为背景的阴性对照。在添加底物(HA)之前，孔在37℃下培养10分钟。添加底物，反应在37℃下孵育45分钟。然后，将每个反应溶液的一部分转移并轻轻混合在乙酸钠和pH为3.75的乙酸的溶液中，以停止该部分反应(停止的孔)。在将一部分反应溶液加入到停止的孔中之后，停止的孔和反应孔应该都含有相同体积的溶液。反应孔和停止的孔均在室温下培养10分钟。然后测量反应孔和停止的孔在600nm处的吸光度。抑制作用可以使用以下公式来计算：抑制剂(或对照)活性＝(在600nm处的抑制剂停止的孔吸光度-在600nm处的抑制剂反应孔吸光度)；初始活性＝在600nm处的对照酶吸光度；抑制百分数＝[(初始活性/抑制剂活性)*100]-100。

过氧化物酶体增殖剂-激活的受体γ(PPAR-γ)的活性：可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、任意一种成分的组合或具有该组合的组合物而导致的PPAR-γ活性变化。PPAR-γ是对皮脂产生来说重要的受体。作为非限制性实例，使用分析测试化合物或组合物抑制配体结合的能力的生物测试来测定PPAR-γ的活性。简略来说，可以使用荧光的小分子pan-PPAR配体，从Life Technologies(PV4894)获得的FLUORMONE^TM Pan-PPARGreen，来确定测试的化合物或组合物是否能够抑制配体与PPAR-γ结合。样品孔包括PPAR-γ和荧光配体和二者之一：测试化合物或组合物(测试)；参考抑制剂；罗格列酮(阳性对照)；或者没有测试化合物(阴性对照)。孔被培养设定的一段时间以使得配体有机会与PPAR-γ结合。然后可测量每个样品孔的荧光偏振，并与阴性对照孔比对以确定测试化合物或组合物的抑制百分比。

细胞因子阵列：人表皮角质形成细胞被培养至70％至80％的融合度。吸出板中的培养基并加入0.025％的胰蛋白酶/EDTA。当细胞变得丰满时，轻轻地对培养皿抽液以释放细胞。从培养皿中去除含有胰蛋白酶/EDTA的细胞并中和。将细胞在180xg下离心5分钟以形成细胞沉淀。吸出上清液。在EPILIFE^TM培养基(Cascade Biologics)中再悬浮获得的沉淀。该细胞以约10％至20％的融合度被接种到6孔板中。在细胞变为约80％融合度之后吸出培养基，将1.0ml的EPILIFE^TM，以及佛波醇13-十四酸酯12-乙酸酯(“PMA”)(已知的炎症诱导剂)和测试组合物稀释物加入到两个重复的孔中(即1.0％(100X储备中的100μl)和0.1％(100X储备中的10μl)的测试组合物稀释为最终体积为1ml的EPILIFE^TM生长培养基)。轻轻地涡旋振荡培养基以确保充分混合。另外，在含有或不含有额外的PMA的情况下，向对照孔中添加1.0ml的EPILIFE^TM。然后，在定量给料之后，将板在37±1℃和5.0±1％CO₂中孵育约5小时。孵育5小时后，将所有培养基收集在圆锥管中并在-70℃下冷冻。

为了分析，将16格的杂交盒连接至16格的FAST基片，和16抗细胞因子抗体加实验对照组一式三份排列，将基片置于用于加工的FAST框架中(每框架4个基片)。在室温下用70ml S&S蛋白分析封闭缓冲液(Whatman Schleicher and Scheull)将阵列封闭15分钟。去除封闭缓冲液并添加70ml每种上清样品至每个阵列。将阵列在室温下轻轻搅动孵育3小时。用TBS-T洗涤阵列3次。用70ml抗体混合物处理阵列，所述抗体含有对应于每个阵列捕获抗体的一种生物素化的抗体。将阵列在室温下轻轻搅动孵育1小时。用TBS-T洗涤阵列3次。用70ml溶液在室温下轻轻搅动孵育阵列1小时，所述溶液包含链霉亲和素-Cy5缀合物。用TBS-T洗涤阵列3次，快速在去离子水中冲洗并干燥。

基片可以在Perkin-Elmer ScanArray 4000激光共聚焦成像系统中成像。可以保存阵列图像，并用Imaging Research ArrayVision软件进行分析。简而言之，点强度通过减去背景信号来确定。来自每个样品条件的点重复值可以被平均，然后与适合的对照对比。

内皮管形成：内皮管的形成和血管生成及毛细血管形成有关。毛细血管形成和血管生成可以导致皮肤发红和红斑痤疮。在存在或不存在测试提取物和化合物的情况下，在细胞培养系统中，使用具有预成型的原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的毛细血管小管破裂测定来确定内皮细胞形成管的能力。

简略来说，将HUVEC在细胞外基质进行体外培养，其刺激和内皮细胞的附着和管状形态发生以形成毛细管状的内腔结构。在许多方面，这些体外形成的毛细血管与人的血管毛细血管相似。毛细管测试基于该现象，并用于评价潜在的脉管系统靶向剂。

在5％CO₂、37℃下，HUVEC培养物在细胞恒温箱中生长。用于HUVEC的完整生长基为内皮管细胞基础培养基(EBM)，补充有2％的牛胎儿血清(FBS)、12μg/ml的牛脑提取液、1μg/ml的氢化可的松和1μg/ml的GA-1000(庆大霉素-两性霉素B)。可将第3代和第8代之间的HUVEC培养物可以用于所有的分析试验。

用荧光试剂Calcein AM预标记HUVEC，并将其接种于使用其完整的生长培养基涂覆的96孔培养板的细胞外基质中。在形态发生过程后约四小时，形成内皮毛细管。然后，作为处理条件，对形成的毛细管培养物施用50μl体积的设定剂量的测试试剂。可以向无处理对照组加入测试试剂的载剂。Sutent，即FDA认证的抗血管生成药物，其浓度可作为检测性能对照。在处理后约六小时，每个孔中的内皮小管形态通过显微镜检查、成像，并且可以定量分析处理条件下的毛细血管干扰活性。每个测试条件可以在重复的孔中实施，包括对照组。

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根据本公开，本文所公开和要求保护的所有组合物和/或方法可以可以无需不适当的实验即可制成和实施。尽管本发明的组合物和方法已经按照优选的实施方案进行了描述，但是对于本领域技术人员明显的是，在不脱离本发明的概念、精神和范围的情况下，可以对所述组合物和/或方法以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序中实施变化。更具体地，明显的是化学上和生理上都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂，同时实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如由所附权利要求限定的本发明的精神、范围和构思内。

Claims (20)

1.一种用于减少人面部肌肉的肌肉收缩和/或减少人皮肤上细纹或皱纹外观的方法，所述方法包括向面部皮肤局部施用组合物，所述组合物包含：

(a)有效量的迷迭香叶提取物；

(b)有效量的法国薰衣草提取物；和

(c)有效量的千日菊提取物，

其中组合物对面部皮肤的局部施用减少了面部肌肉的肌肉收缩和/或减少了细纹或皱纹的外观。

2.根据权利要求1所述的方法，其中将组合物施用至细纹或皱纹，并且其中在局部施用后减少了细纹或皱纹的外观和/或在局部施用后减少了引起细纹或皱纹外观的肌肉的肌肉收缩。

3.根据权利要求2所述的方法，其中细纹或皱纹是面部皱纹，并且其中减少面部肌肉的肌肉收缩减少了面部皱纹的外观。

4.根据权利要求1所述的方法，其中面部肌肉是眉间复合肌、眼轮匝肌、降肌、或额肌或其任意组合。

5.根据权利要求1所述的方法，其中每种提取物分别为水提物、醇提物、多元醇提取物或其组合。

6.根据权利要求1所述的方法，其中：

迷迭香叶提取物是用包含甜菜碱、乳酸和水的流体提取溶剂混合物获得的；

法国薰衣草提取物是用超临界二氧化碳(CO₂)提取溶剂获得的法国薰衣草花/叶/茎提取物；和

千日菊提取物是用包含水、乙醇和1,3-丙二醇的流体提取溶剂混合物获得的。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含：

0.00001重量％至10重量％的迷迭香叶提取物；

0.00001重量％至10重量％的法国薰衣草提取物；和

0.00001重量％至10重量％的千日菊提取物。

8.根据权利要求1所述的方法，其中：

迷迭香叶提取物减少了面部肌肉中的钙流入并减少了面部肌肉中动作电位的产生；

法国薰衣草提取物减少了面部肌肉中的钙流入并减少了面部肌肉中动作电位的产生；和

千日菊提取物减少了面部肌肉中的钙流入并减少了面部肌肉中动作电位的产生。

9.根据权利要求1所述的方法，其中千日菊提取物刺激了皮肤中胶原蛋白的产生和层粘连蛋白的产生。

10.根据权利要求1所述的方法，其中迷迭香叶提取物减少了皮肤中基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶3或基质金属蛋白酶9的产生。

11.根据权利要求1所述的方法，其中面部皮肤是前额皮肤、脸颊皮肤、下巴皮肤和/或眼眶区域皮肤。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物为乳状液。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述乳状液为水包油乳状液。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物为凝胶。

15.一种局部皮肤用组合物，其包含：

(a)有效量的迷迭香叶提取物；

(b)有效量的法国薰衣草提取物；和

(c)有效量的千日菊提取物，

其中所述局部皮肤用组合物能够减少人皮肤的细纹或皱纹的外观和/或能够减少人面部肌肉的肌肉收缩。

16.根据权利要求15所述的局部皮肤用组合物，其中每种提取物分别为水提取物、醇提取物、多元醇提取物或其组合。

17.根据权利要求15所述的局部皮肤用组合物，其中：

迷迭香叶提取物是用包含甜菜碱、乳酸和水的流体提取溶剂混合物获得的；

法国薰衣草提取物是用超临界二氧化碳(CO₂)提取溶剂获得的法国薰衣草花/叶/茎提取物；和

千日菊提取物是用包含水、乙醇和1,3-丙二醇的流体提取溶剂混合物获得的。

18.根据权利要求15所述的局部皮肤用组合物，其中所述组合物包含：

0.00001重量％至10重量％的迷迭香叶提取物；

0.00001重量％至10重量％的法国薰衣草提取物；和

0.00001重量％至10重量％的千日菊提取物。

19.根据权利要求15所述的局部皮肤用组合物，其中：

迷迭香叶提取物能够减少面部肌肉中的钙流入并减少了面部肌肉中动作电位的产生和/或迷迭香叶提取物能够减少皮肤中基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶3或基质金属蛋白酶9的产生；

法国薰衣草提取物能够减少面部肌肉中的钙流入并减少了面部肌肉中动作电位的产生；和

千日菊提取物能够减少面部肌肉中的钙流入并减少了面部肌肉中动作电位的产生，和/或千日菊提取物能够刺激皮肤中胶原蛋白的产生和层粘连蛋白的产生。

20.根据权利要求15所述的局部皮肤用组合物，其中所述组合物是乳状液，优选水包油乳状液或凝胶。

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