CN113262192A - 局部用化妆品组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明一般涉及可用于包含七叶皂素、卵磷脂、浮游生物提取物、绿毛山柳菊提取物、雏菊花提取物、橙皮苷甲基查尔酮、棕榈酰四肽‑7、迷迭香叶提取物或其任意组合的局部用组合物的方法和组合物,以及其使用方法和生产方法。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年2月17日提交的美国临时专利申请第62/977631号的优先权,其全部公开内容通过引用合并于本文。
技术领域
本发明一般涉及可用于改善皮肤状况和/或皮肤视觉外观的局部用组合物。在一些方面,本发明的组合物可以包括例如成分的组合,以增加皮肤紧致度、减少皮肤细纹或皱纹、眼下浮肿和/或眼部周围皮肤上的黑眼圈的出现。这种成分的组合可以包含在各种各样的产品制剂中(例如,精华、眼霜、爽肤水、凝胶、面膜等)。
背景技术
衰老、长期暴露于不利的环境因素、营养失调、疲劳等会以视觉上不期望的方式改变皮肤的视觉外观、物理性能或生理功能。最显著和明显的改变包括细纹和皱纹的发展、弹性的损失、松垂的增加、坚实度的损失、颜色均匀性或色调的损失、粗糙的表面纹理和斑驳的色素沉着。随着皮肤老化或经历长期的环境损害而发生的不太明显但可测量的改变包括细胞和组织活性的普遍降低、细胞复制速率的降低、皮肤血流的减少、水分含量的降低、结构和功能的累积错误、常见生化过程正常调节的变化以及皮肤重塑和自修复的能力的降低。皮肤的外观和功能的许多变化由皮肤的外表皮层的改变导致,而其他的变化由真皮下部的改变导致。
许多因素会导致皮肤老化并且产生老化的外观,这些因素例如人的实际年龄、暴露于环境因素(例如,日光、污染、化学物质、烟雾等)的量,以及人对皮肤的护理程度如何。特别地,皮肤老化涉及两个过程——内因性老化,其与自然衰老过程和遗传影响有关,以及外因性老化,其是由于环境因素造成的累积损害。
细胞和皮肤的内因性老化过程可能与皮肤失去维持生化途径的适当功能有关。这样的途径可以控制皮肤中的氧化/还原环境平衡,调节细胞分裂和细胞膜完整性以及维持皮肤水分平衡。丧失皮肤的适当功能会导致皮肤紧致度降低、皮肤不均匀性增加、细纹和皱纹增加以及皮肤干燥。举例来说,内因性老化可能是由于蛋白质核纤层蛋白A的功能引起的,核纤层蛋白A在细胞分裂过程中非常重要,因为它提供了核酸酶的膜结构。没有功能性核纤层蛋白A,核层会形成缺乏结构支撑的异常核膜。这会导致异常形状的核膜,从而限制细胞分裂。沉默形式的核纤层蛋白A称为早衰蛋白,与疾病早衰症有关,在该疾病中,患者会加速衰老,早在2岁时就在皮肤上出现衰老迹象,并且患者寿命会大大缩短。这种以及其他皮肤本身功能丧失会导致皮肤紧致度降低、皮肤不均匀性增加、细纹和皱纹增加、氧化损伤增加以及皮肤干燥。
外在因素可能包括暴露于紫外线(UV)辐射、刺激物和污染。通过日光照射或使用紫外线灯(例如晒黑床)产生的UV辐射会引起氧化应激、发炎、黑色素生成乃至导致皮肤受损的基因突变。
通过自由基形成积累的氧化应激会破坏皮肤蛋白,导致皮肤老化,其中包括弹性下降、皮肤蛋白丧失、产生纹路和皱纹以及色素的异常沉着。
炎症也是紫外线和环境损害的特征。炎症可以通过炎性细胞因子(例如TNF-α或VEGF)或有助于炎症途径的酶发生。随着炎症的持续,例如基质金属蛋白酶-1(MMP1)、基质金属蛋白酶-3(MMP3)和基质金属蛋白酶-9(MMP9)之类的酶参与皮肤蛋白质的分解,从而使免疫细胞迁移。真皮蛋白例如层黏连蛋白、弹性蛋白和胶原蛋白的这种分解可以导致皮肤老化。
当暴露于外在因素时,角质形成细胞(皮肤的最外层细胞)会释放信号分子,例如刺激α黑素细胞的激素(α-MSH)和炎性细胞因子。这些激素触发黑素细胞产生黑色素(黑色素生成)。典型的色素沉着的特征是皮肤均匀、一致地着色。然而,通过外在因素产生黑色素会导致皮肤颜色变化。例如,一个人的皮肤可能会呈现出灰黄的色调,色素沉着的斑点,不想要的雀斑或深色斑点,例如老年性雀斑样痣、肝斑、黄褐斑、棕色或老年斑,白癜风,晒斑色素沉着,由于擦伤、烧伤、伤口或皮炎引起的炎症后色素过度沉着,光毒性反应和其他类似的小而固定的色素沉着病变。通常希望使这些区域变亮或者使皮肤不规则的色素区域的外观变均衡。人们可能还希望更加白皙或减少皮肤中色素沉着的总体水平。不论发生何种情况,色素沉着通常被认为是美容方面所不希望的,并且人们经常希望使皮肤变亮。常规的脱色剂例如氢醌、皮质类固醇和曲酸,在长期接触时会引起一些安全隐患(例如,褐黄病、萎缩、致癌作用以及其他局部或全身性副作用)(Talwar 1993)。
外在因素还可以减少皮肤中的水分。暴露于化学物质、溶剂、洗涤物、化妆品、织物或干燥环境中,是皮肤失去水分的许多方式中的一部分。水分流失会导致皮肤破裂或细纹和皱纹。保持皮肤和/或毛发的水分有助于克服皮肤和毛发的一些不必要的变化。然而,在每天暴露于恶劣的外在因素下,保持皮肤的水分可能很困难。保湿剂旨在补救该困难。皮肤和毛发的保湿剂是专门设计用于使皮肤(表皮)的外层更柔软、更柔韧的复杂的化学试剂混合物。它们通过减少蒸发来增加皮肤的水分(水含量)。天然存在的皮肤脂质和固醇,以及人造或天然油、保湿剂、润肤剂、润滑剂等,可以是商业化皮肤保湿剂组合物的一部分。它们通常作为美容和治疗用途的商业产品出售,但也可以在家里用常见的药物成分制作。然而,保湿剂并不是完美的。与保湿剂有关的一些问题包括令人不愉快的触觉特性(例如,厚重、油腻或发黏的感觉)、不稳定性、皮肤刺激性或保湿能力不足。
内在因素和外在因素的组合最终导致可见的衰老迹象。市场上的现有产品或者不能有效地解决衰老的迹象或原因,或者不能有效地解决外在因素对皮肤的影响和/或它们具有刺激皮肤的作用。例如,现有产品可能无法解决皮肤紧致度下降、色素沉着问题、细纹或皱纹外观和/或水分流失的问题。
发明内容
已经发现了与现有产品相关的问题的解决方案,以抵消老化和暴露于改变皮肤外观和/或状况的外在因素的某些影响。该解决方案在于成分的组合,可以是七叶皂素、卵磷脂、浮游生物提取物、绿毛山柳菊(hieracium pilosella)提取物,雏菊(bellis perennis)花提取物、橙皮苷甲基查尔酮、棕榈酰四肽-7和迷迭香(Rosmarinus officinalis)叶提取物中的任一种或任意组合,这种成分的组合可以用于创建局部用皮肤组合物,以有效提高皮肤紧致度和弹性、减少皮肤纹路和/或皱纹、减少眼下浮肿、眼下黑眼圈和/或下垂的眼睑,以改善眼睛周围区域的整体外观并增加皮肤和/或毛发的水分。局部皮肤用组合物的益处包括:增加赖氨酰氧化酶,增加层黏连蛋白,抑制弹性蛋白酶,抑制MMP1、MMP9和MMP3,抑制促炎细胞因子,其包括脂氧合酶、IL-6、IL-8、TNF-α、FAAH,抑制弹性蛋白酶,抑制肾素,抑制黑色素生成和提供抗氧化能力。
在一些实施方案中,公开了局部皮肤用组合物。在一些实例中,局部皮肤用组合物可以包括七叶皂素、卵磷脂、浮游生物提取物、绿毛山柳菊提取物、雏菊花提取物、橙皮苷甲基查尔酮、棕榈酰四肽-7和迷迭香叶提取物中的任一种、任意组合或全部。组合物中成分的量可以变化(例如,量可以低至0.000001重量/重量%,高至98重量/重量%,或其间的任何范围)。在一些实例中,所述组合物包含0.01重量%至1重量%的七叶皂素、0.01重量%至1重量%的卵磷脂、0.01重量%至1重量%的浮游生物提取物、0.1重量%至10重量%的绿毛山柳菊提取物、0.1重量%至10重量%的雏菊花提取物、0.001重量%至0.1重量%橙皮苷甲基查尔酮、0.001重量%至0.01重量%棕榈酰四肽-7和0.001重量%至0.1重量%迷迭香叶提取物。在一些方面,七叶皂素可以包含从七叶树的种子获得的皂苷的混合物。卵磷脂可以是与七叶皂素混合的保湿剂。浮游生物提取物可以包括由属于海洋浮游生物家族的称为溶藻弧菌的微生物合成的胞外多糖。在一些方面,绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物可以包括绿毛山柳菊和雏菊花的提取物的协同组合。在一个优选的实例中,迷迭香叶提取物可以从迷迭香叶中获得。可以使用包含甜菜碱或水合甜菜碱、氢键供体化合物(多元醇、有机酸等)和水的流体提取混合物对叶片进行共熔发生(eutectigenesis)提取过程。在一些实例中,组合物还包含水。在一个实例中,组合物包含35重量%至70重量%的水。在一些方面,组合物还包含甘油、EDTA二钠、黄原胶、硬脂酸、角鲨烯、鲸蜡醇、矿物油、鲸蜡硬脂醇聚醚-25、二椰油酰乙二胺PEG-15二硫酸酯二钠、蜂蜡、辛基十二烷醇、硬脂醇、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、石蜡、微晶蜡、异十六烷、癸基甲硅油、二甲硅油和聚二甲基硅氧烷醇。在一些实例中,组合物可以包含1重量%至20重量%的甘油、0.01重量%至10重量%的EDTA二钠、0.01重量%至1重量%的黄原胶、0.1重量%至20重量%的硬脂酸、0.2重量%至10重量%的角鲨烯、0.3重量%至10重量%的鲸蜡醇、0.1重量%至10重量%的矿物油、0.1重量%至10重量%的鲸蜡硬脂醇聚醚-25、0.1重量%至10重量%的二椰油酰乙二胺PEG-15二硫酸酯二钠、0.1重量%至5重量%的蜂蜡、0.1重量%至10重量%的辛基十二烷醇、0.1重量%至10重量%的硬脂醇、0.1重量%至10重量%的丙烯酰基二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、0.01重量%至1重量%的石蜡、0.1重量%至10重量%的微晶蜡、0.1重量%至10重量%的异十六烷、0.1重量%至10重量%的辛基甲硅油、0.1重量%至20重量%的二甲硅油、0.1重量%至10重量%的二甲基聚硅氧烷醇。在一些方面,组合物还可以包含环戊硅氧烷、环己硅氧烷、三乙醇胺、β-谷甾醇、重氮烷基脲、羟丙基环糊精、碘丙炔基丁基氨基甲酸酯、乳酸、甜菜碱、氯己定二葡糖酸盐、二肽-2和山梨酸钾。在一些实例中,组合物可以包含0.001重量%至0.1重量%的环戊硅氧烷、0.001重量%至0.1重量%的环己硅氧烷、0.1重量%至10重量%的三乙醇胺、0.01重量%至1重量%的β-谷甾醇、0.01重量%至3重量%的重氮烷基脲、0.01重量%至1重量%的羟丙基环糊精、0.001重量%至0.5重量%的碘丙炔基丁基氨基甲酸酯、0.01重量%至1重量%的乳酸、0.01重量%至1重量%的甜菜碱、0.0001重量%至0.01重量%的氯己定二葡糖酸盐、0.0001重量%至0.01重量%的二肽-2、0.0001重量%至0.01重量%的山梨酸钾、0.00001重量%至0.01重量%的棕榈酰四肽-7。在一些方面,组合物还可以包含丁二醇、仙人果(opuntia tuna)果实提取物、柠檬酸、苯甲酸钠、二氧化硅、二氧化钛、云母、氧化锡和变性醇。在一些实例中,组合物可以包含0.1重量%至10重量%的丁二醇、0.00001重量%至0.01重量%的仙人果果实提取物、0.00001重量%至0.001重量%的柠檬酸、0.00001重量%至0.001重量%的苯甲酸钠、0.1重量%至10重量%的二氧化硅、0.01重量%至5重量%的二氧化钛、0.01重量%至5重量%的云母、0.001重量%至0.1重量%的氧化锡和0.1重量%至10重量%的变性醇。组合物还可以包含一种或多于一种本文所述的成分。例如,组合物可以包含一种或多于一种选自以下的附加成分:一种或多于一种的调理剂、保湿剂、pH调节剂、结构化剂、无机盐和防腐剂。
在一些方面,局部用组合物可以包含有效量的绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物以增加赖氨酰氧化酶。在一些方面,局部用组合物可以包含有效量的橙皮苷甲基查尔酮和棕榈酰四肽-7,以增加层黏连蛋白的表达。在一些方面,局部用组合物可以包含有效量的迷迭香叶提取物,以抑制基质金属蛋白酶的酶活性。示例性基质金属蛋白酶可以包括MMP1、MMP3、MMP9或其任意组合。在一些方面,局部用组合物可包含有效量的迷迭香叶提取物,以抑制促炎细胞因子。在一些实例中,促炎细胞因子可以包括脂氧合酶、IL-6、IL-8、TNF-α、FAAH或其任意组合。在一些方面,局部用组合物可以包含有效量的七叶皂素,以抑制促炎细胞因子,包括FAAH。在一些方面,局部用组合物可以包含有效量的迷迭香叶提取物以抑制弹性蛋白酶。局部用组合物可以包含有效量的橙皮苷甲基查尔酮和棕榈酰四肽-7,以抑制肾素。在一些方面,局部用组合物可以包含有效量的七叶皂素以抑制黑色素生成。在一些方面,局部用组合物能够为皮肤提供抗氧化能力。局部用组合物能够减少皮肤的纹路和/或皱纹。在一些方面,局部用组合物能够改善皮肤紧致度。在一些实例中,局部用组合物能够改善眼睛周围的皮肤松弛和/或减少眼下浮肿。在一些方面,局部用组合物能够减少眼部周围的黑眼圈。
在一些方面,局部用组合物可以包括乳液、精华、凝胶、凝胶乳液或凝胶精华。在一些方面,局部皮肤用组合物可以包括乳液。在一个实例中,组合物是水包油乳液。在一些实例中,组合物可以配制成霜。在另一个实例中,组合物配制成眼霜。
还公开了局部用组合物的使用方法。在一些实施方案中,公开了一种改善皮肤和/或毛发的状况或外观的方法。该方法可以包括向皮肤施加有效量的局部用组合物,所述局部用组合物包含七叶皂素、卵磷脂、浮游生物提取物、绿毛山柳菊提取物、雏菊花提取物、橙皮苷甲基查尔酮、棕榈酰四肽-7、迷迭香叶提取物或其任意组合。在一方面,将公开的局部用组合物施用于皮肤和/或毛发,并留在皮肤和/或毛发上,或可选地在一段时间后从皮肤和/或毛发上除去。在一些实例中,局部施用后,局部用组合物可以在皮肤上保留至少30分钟。在其他方面,通过施用局部用组合物,可以处理皮肤以增加皮肤紧致度,其中皮肤的紧致度得以增加。在另一些方面,通过施用局部用组合物,可以处理皮肤以减少细纹和/或皱纹的出现,其中细纹和/或皱纹的出现得以减少。在其他方面,通过将局部用组合物施用于眼部的皮肤,处理皮肤以减少眼下浮肿,其中眼下浮肿得以减少。在其他方面,通过施用局部用组合物,可以处理皮肤以改善松弛的皮肤,其中皮肤的松弛得以减轻。在一些其他方面,通过施用局部用组合物,可以处理皮肤,以改善皮肤的紧致度和/或皮肤的弹性和/或减少皮肤的黑眼圈,其中皮肤的紧致度和/或皮肤的弹性得以改善,和/或眼部周围皮肤的黑眼圈得以减少。
在一些方面,通过将本文公开的任一种局部用组合物施用于皮肤,所公开的局部用组合物可以适于抑制皮肤中的黑色素生成,其中黑色素生成得以抑制。在另一方面,通过将本文公开的任一种组合物施用于眼睛周围的皮肤上,所公开的局部用组合物可以适于减少眼睛周围的皮肤上和/或下方的黑眼圈,其中皮肤上和/或皮肤下方的黑眼圈得以减少。在一些方面,通过将本文公开的任一种组合物施用于眼睛周围的皮肤上,所公开的组合物可以适于改善下垂的眼睑,其中眼睑下垂得以减轻。在另一方面,通过将本文公开的任意组合物施用于眼睛周围的皮肤,将本文公开的组合物用于减少眼睛周围的皮肤上的细纹和皱纹,其中纹路和皱纹得以减少。在另一方面,通过将本文所公开的任一种组合物施用于皮肤,包括眼睛周围的皮肤,所公开的局部用组合物可适于改善皮肤紧致度,其中皮肤紧致度得以改善。在另一方面,通过将本文公开的任一种局部用组合物施用于眼睛周围的皮肤,所公开的组合物适于减轻眼睛周围的黑眼圈,其中黑眼圈得以减轻。在另一方面,通过将本文公开的任一种组合物施用于眼睛周围的皮肤,本文公开的组合物用于改善眼睛周围皮肤的整体外观,其中眼睛周围的皮肤的整体外观得以改善。在一些方面,施用于皮肤的局部用组合物可以包含有效量的绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物以增加赖氨酰氧化酶,并且该局部用组合物用于增加赖氨酰氧化酶。在又一些其他方面,施用于皮肤的局部用组合物可以包括有效量的橙皮苷甲基查尔酮和棕榈酰四肽-7以增加层黏连蛋白的表达,并且该局部用组合物可以用于增加层黏连蛋白的表达。在一些其他方面,施用于皮肤的局部用组合物可以包含有效量的迷迭香叶提取物以抑制基质金属蛋白酶的酶活性,并且该局部用组合物用于抑制基质金属蛋白酶的酶活性。示例性基质金属蛋白酶可以包括MMP1、MMP3、MMP9或其任意组合。在一些方面,施用于皮肤的局部用组合物可以包含有效量的迷迭香叶提取物以抑制弹性蛋白酶,并且该局部用组合物用于抑制弹性蛋白酶。在一些其他方面,施用于皮肤的局部用组合物可以包含有效量的橙皮苷甲基查尔酮和棕榈酰四肽-7的组合以抑制肾素,并且该局部用组合物用于抑制肾素。在一些方面,施用于皮肤的局部用组合物可以包含有效量的七叶皂素以抑制黑色素生成,并且该局部用组合物用于抑制黑色素生成。在一些其他方面,施用于皮肤的局部用组合物可以包含有效量的迷迭香叶提取物以抑制促炎细胞因子,并且该局部用组合物用于抑制促炎细胞因子。示例性促炎细胞因子包括脂氧合酶、IL-6、IL-8、TNF-α、FAAH或其任意组合。在一些其他方面,施用于皮肤的局部用组合物包含有效量的七叶皂素,以抑制的促炎细胞因子,所述促炎细胞因子包括FAAH。在一些方面,施用于皮肤的局部用组合物适于提供抗氧化能力。在一些方面,局部用组合物施用于眼部周围的皮肤。在一些其他方面,局部用组合物施用于皮肤上的细纹和/或皱纹。在一些方面,局部用组合物施用于眼部皮肤的黑眼圈。在一些实例中,局部用组合物施用于松弛的皮肤和/或无弹性的皮肤。在一些方面,将局部用组合物施用于皮肤上至少30分钟。在一些实例中,每天施用局部用组合物,持续至少4周。
在特定方面,本发明的组合物配制成局部皮肤和/或毛发用组合物。组合物可以具有用于所述化合物、组合物和提取物的皮肤病学可接受的载体或载剂。该组合物还可以包含保湿剂或润湿剂、表面活性剂、含硅氧烷的化合物、UV剂、油和/或本说明书或本领域已知的其他成分。组合物可以为洗剂、霜、凝胶、精华、乳液(例如水包油、油包水、水包硅酮、硅酮包水、水包油包水、油包水包油、硅酮包水包油等)、溶液(例如水溶液或水醇溶液)、无水基质(例如口红或粉末)、软膏剂、乳状物、糊剂、气雾剂、固体形式、眼胶等。组合物可以是粉末形式(例如,干燥、冻干、颗粒等)。组合物可以配制成在使用期间每天局部皮肤施用至少1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次或多于7次。在本发明的其他方面中,组合物可以是储存稳定或颜色稳定的,或是两者。还期望可以选择组合物的黏度以达到期望的结果,例如根据期望的组合物类型,该组合物的黏度可以为约1cps至远超过1百万cps,或者是其中可衍生的任意范围或整数(例如,如在25℃下在Brookfield黏度计上用TC转子以2.5rpm测量的2cps、3cps、4cps、5cps、6cps、7cps、8cps、9cps、10cps、20cps、30cps、40cps、50cps、60cps、70cps、80cps、90cps、100cps、200cps、300cps、400cps、500cps、600cps、700cps、800cps、900cps、1000cps、2000cps、3000cps、4000cps、5000cps、6000cps、7000cps、8000cps、9000cps、10000cps、20000cps、30000cps、40000cps、50000cps、60000cps、70000cps、80000cps、90000cps、100000cps、200000cps、300000cps、400000cps、500000cps、600000cps、700000cps、800000cps、900000cps、1000000cps、2000000cps、3000000cps、4000000cps、5000000cps、10000000cps等)。
也可以将本发明的组合物改性以具有所需的氧自由基吸收能力(ORAC)值。在某些非限制性方面,可以改性在整个说明书中确定的本发明的组合物或其组分或提取物为具有每mg的ORAC值至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、95、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、15000、20000、30000、50000、100000或高于100000或其中可衍生的任何范围。
非限制性方面的组合物可以具有约6至约9的pH。在其他方面,pH可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14。组合物可以包括甘油三酯。非限制性实例包括短链、中链和长链甘油三酯。在某些方面,甘油三酯是中链甘油三酯(例如辛酸癸酸甘油三酯)。组合物还可以包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯的混合物。在一些实施方案中,组合物不含对羟基苯甲酸酯。
本发明的组合物可以具有UVA和UVB吸收特性。组合物的防晒系数(SPF)可以为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或高于60,或其间的任意整数或衍生的数。组合物可以是防晒乳、防晒喷雾或防晒霜。
本发明的组合物还可以包含以下附加成分中的任一种、其任意组合或全部:水、螯合剂、保湿剂、防腐剂、增稠剂、含硅氧烷的化合物、精油、结构化剂、维生素、药物成分或抗氧化剂、或此类成分的任意组合或此类成分的混合物。在一些方面,组合物可以包含上句中提到的这些附加成分的至少两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或所有。这些附加成分的非限制性实例是在整个说明书中被确定的并且通过引用并入本部分。此类成分的量按组合物的重量或体积计可以为0.0001%至99.9%,或者如本说明书的其他部分所公开的,介于其之间的任意整数或范围,其通过引用并入本段。
还考虑了包括本发明的组合物的试剂盒。在一些实施方案中,组合物包含在容器中。容器可以是瓶子、分配器或包装。容器可以分配预定量的组合物。在一些方面,组合物以喷雾、薄雾、团块或液体分配。容器可以在其表面上包含标记。标记可以是单词、缩写、图片或符号。
还考虑了在本说明书全文中所公开的组合物可以用作免洗型或洗去型组合物。举例来说,免洗型组合物可以是对皮肤局部施用的,并在皮肤上保持一段时间(例如,至少5分钟、至少6分钟、至少7分钟、至少8分钟、至少9分钟、至少10分钟、至少20分钟或至少30分钟,或至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至少8小时、至少9小时、至少10小时、至少11小时、至少12小时、至少13小时、至少14小时、至少15小时、至少16小时、至少17小时、至少18小时、至少19小时、至少20小时、至少21小时、至少22小时、至少23小时或至少24小时,或者整夜或整个白天)。或者,洗去型组合物可以是打算施用于皮肤并然后在一段时间内,如小于5分钟、小于4分钟、小于3分钟、小于2分钟或小于1分钟,(例如用水)从皮肤除去或洗去的产品。洗去型组合物的实例可以是洁面乳、洗发水、护发素或肥皂。免洗型组合物的实例可以是皮肤保湿剂、防晒剂、面膜、晚霜或日霜。
预期对于本发明的任何方法或组合物,可以实施本说明书中所讨论的任何实施方案,反之亦然。此外,本发明的组合物可以用于实现本发明的方法。
在一个实施方案中,本发明的组合物可以是药学上易于使用的或美容上易于使用的,或可以具有舒适的触觉性质。“药学上易于使用的”、“美容上易于使用的”和/或“舒适的触觉性质”描述具有令皮肤感觉舒适的特定触觉性质的组合物(例如,不是太水或太油的组合物、具有丝滑质地的组合物、非黏性或黏性的组合物等)。药学上易于使用的或美容上易于使用的还可以涉及组合物的乳脂状或润滑性能,或组合物的水分保留性能。
还考虑了一种包含本发明的组合物的产品。在非限制性方面,产品可以是化妆品。化妆品可以是本说明书其他章节所述的那些,或是本领域技术人员已知的那些。产品的非限制性实例包括保湿剂、霜、洗剂、柔肤水、凝胶、洗涤剂、粉底、晚霜、口红、洁面乳、爽肤水、防晒霜、面膜、抗老化产品、除臭剂、止汗剂、香水、古龙水等。
在本发明的上下文中,至少描述了以下40个方面。方面1包括一种改善皮肤状况或外观的方法。该方法包括向皮肤施用有效量的局部用组合物,所述局部用组合物包含七叶皂素、卵磷脂、浮游生物提取物、绿毛山柳菊提取物、雏菊花提取物、橙皮苷甲基查尔酮、棕榈酰四肽-7、迷迭香叶提取物或其任意组合。方面2从属于方面1,其中通过施用局部用组合物,对皮肤进行处理以减轻皮肤状况,所述皮肤状况包括皮肤纹路、皮肤皱纹、眼下浮肿、眼下黑眼圈、眼睑下垂、皮肤松弛或其任意组合。方面3从属于方面1和2中的任一项,其中通过施用局部用组合物,对皮肤进行处理以改善皮肤紧致度和/或皮肤弹性,和/或增加皮肤的水分。方面4从属于方面1至3中的任一项,其中通过施用局部用组合物,对皮肤进行处理以抑制基质金属蛋白酶活性。方面5从属于方面4,其中基质金属蛋白酶包括MMP1、MMP3、MMP9或其任意组合。方面6从属于方面1至5中的任一项,其中通过施用局部用组合物,对皮肤进行处理以刺激层黏连蛋白产生。方面7从属于方面1至6中的任一项,其中通过施用局部用组合物,对皮肤进行处理以增加赖氨酰氧化酶。方面8从属于方面1至7中的任一项,其中通过施用局部用组合物,对皮肤进行处理以抑制弹性蛋白酶、肾素、黑色素生成或其任意组合。方面9从属于方面1至8中的任一项,其中通过施用局部用组合物,对皮肤进行处理以抑制促炎细胞因子。方面10从属于方面9,其中促炎细胞因子包括脂氧合酶、IL-6、IL-8、TNF-α、FAAH或其任意组合。方面11从属于方面1至10中的任一项,其中局部用组合物适于提供抗氧化能力。方面12从属于方面1至11中的任一项,其中局部用组合物还包含水。方面13从属于方面1至12中的任一项,其中局部用组合物是霜、乳液、精华、凝胶、凝胶乳液或凝胶精华。方面14从属于方面1至13中的任一项,其中局部用组合物是水包油乳液。方面15从属于方面1至14中的任一项,其中局部用组合物施用于眼部周围的皮肤。方面16从属于方面1至15中的任一项,其中局部用组合物施用于皮肤上的细纹或皱纹。方面17从属于方面1至16中的任一项,其中局部用组合物施用于眼部皮肤的黑眼圈。方面18从属于方面1至17中的任一项,其中局部用组合物施用于松弛的皮肤和/或无弹性的皮肤。方面19从属于方面1至18中的任一项,其中在局部施用后,组合物在皮肤上保留至少30分钟。方面20从属于方面1至19中的任一项,其中每天施用局部用组合物,持续至少4周。方面21包括一种局部皮肤用组合物,其包含七叶皂素、卵磷脂、浮游生物提取物、绿毛山柳菊提取物、雏菊花提取物、橙皮苷甲基查尔酮、棕榈酰四肽-7、迷迭香叶提取物或其任意组合。方面22从属于方面21,其中局部用组合物包含有效量的绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物,以增加赖氨酰氧化酶。方面23从属于方面21和22中的任一项,其中局部用组合物包含有效量的橙皮苷甲基查尔酮和棕榈酰基四肽-7,以增加层黏连蛋白表达。方面24从属于方面21和23中的任一项,其中局部用组合物包含有效量的迷迭香叶提取物,以抑制基质金属蛋白酶的酶活性。方面25从属于方面24,其中基质金属蛋白酶包括MMP1、MMP3、MMP9或其任意组合。方面26从属于方面21和25中的任一项,其中局部用组合物包含有效量的迷迭香叶提取物,以抑制促炎细胞因子。方面27从属于方面26,其中促炎细胞因子包括脂氧合酶、IL-6、IL-8、TNF-α、FAAH或其任意组合。方面28从属于方面21至27中的任一项,其中局部用组合物包含有效量的七叶皂素,以抑制包括FAAH在内的促炎细胞因子。方面29从属于方面21至28中的任一项,其中局部用组合物包含有效量的迷迭香叶提取物,以抑制弹性蛋白酶。方面30从属于方面21和29中的任一项,其中局部用组合物包含有效量的橙皮苷甲基查尔酮和棕榈酰基四肽-7,以抑制肾素。方面31从属于方面21至30中的任一项,其中局部用组合物包含有效量的七叶皂素,以抑制黑色素生成。方面32从属于方面21至31中的任一项,其中局部用组合物适于向皮肤提供抗氧化能力。方面33从属于方面21至32中的任一项,其中局部用组合物能够减少皮肤的纹路和/或皱纹。方面34从属于方面21至33中的任一项,其中局部用组合物适于改善皮肤紧致度。方面35从属于方面21至34中的任一项,其中局部用组合物适于减少眼部周围的黑眼圈。方面36从属于方面21至35中的任一项,其中局部用组合物包含0.1重量%至10重量%的绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物的组合、0.02重量%至2.5重量%的卵磷脂、0.02重量%至1.8重量%的七叶皂素、0.005重量%至0.5重量%的橙皮苷甲基查尔酮、0.002重量%至0.2重量%的迷迭香叶提取物、0.00011重量%至0.011重量%的浮游生物提取物、0.00003重量%至0.003重量%的棕榈酰四肽-7。方面37从属于方面36,其中局部用组合物还包含0.00005重量%至0.005重量%的仙人果果实提取物。方面38从属于方面21至37中的任一项,其中局部用组合物还包含水。方面39从属于方面21至38中的任一项,其中局部用组合物是乳液、精华、凝胶、凝胶乳液或凝胶精华。方面40从属于方面21至39中的任一项,其中局部用组合物是水包油乳液。
“局部施用”指施用或涂敷组合物到嘴唇或角质组织的表面上。“局部皮肤用组合物”包括适合在嘴唇或角质组织上局部施用的组合物。这类组合物一般是皮肤病学上可接受的,这是因为当它们施用到嘴唇或皮肤时,不具有异常毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等。本发明的局部用护肤组合物可以具有选定的黏度以避免施用到皮肤后明显的滴落或淤积。
“角质组织”包含配置作为哺乳动物最外保护层的含有角质的层,并且包含但不限于嘴唇、皮肤、毛发和指甲。
术语“约”或“大约”定义为如本领域普通技术人员所理解的接近于。在一个非限制性实施方案中,该术语定义为10%以内,优选5%以内,更优选1%以内,最优选0.5%以内。
术语“基本上”及其变型被定义为在很大程度上但不一定完全是本领域普通技术人员所理解的规定,在一个非限制性实施方案中,基本上指在10%以内、5%以内、1%以内、或0.5%以内的范围。
术语“抑制”或“减少”或这些术语的变体包括为了达到预期结果的任何可测量的减少或完全的抑制。术语“促进”或“增加”或这些术语的任意变体包括为了达到预期结果的蛋白质或分子(例如,基质蛋白,例如纤连蛋白、层黏连蛋白、胶原蛋白或弹性蛋白,或者分子,例如透明质酸)的任何可测量的增加或产生。
作为本说明书和/或权利要求所使用的术语,术语“有效”表示适于实现希望的、期望的或预期的结果。
当在权利要求和/或说明书中与术语“包含”、“包括”、“含有”或“具有”联用时,要素前面不使用数量词可以表示“一个”,但是其也符合“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意思。
如本说明书和权利要求所使用的,词语“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括性的或开放式的,并且不排除附加的、未列举的要素或方法步骤。
使用的组合物和方法可以“包含”、“主要组成为”或“组成为”本说明书通篇所公开的成分或步骤的任一个。
通过下面的详细描述,本发明的其他目的、特征和优点会变得明显。然而,应理解详细的描述和实施例在表明本发明的具体实施方案时仅以举例说明的方式给出。另外,可以预期,根据该详细描述,在本发明的精神和范围内的改变和修改对于本领域技术人员将变得显而易见。
具体实施方式
如上所述,本发明的几个独特方面在于局部用化妆品组合物中进行组合,所述局部用化妆品组合物包含七叶皂素、卵磷脂、浮游生物提取物、绿毛山柳菊提取物、雏菊花提取物、橙皮苷甲基查尔酮、棕榈酰四肽-7和迷迭香叶提取物的一种或多于一种。局部用化妆品组合物可以还包含仙人果果实提取物。这带来了增加皮肤紧致度和弹性、减少细纹和/或皱纹、减少眼下浮肿、眼下黑眼圈和眼睑下垂以及改善眼睛周围区域的整体外观的益处。其他益处包括:增加赖氨酰氧化酶报道分子,增加层黏连蛋白,抑制弹性蛋白酶,抑制MMP1、MMP9和MMP3,抑制促炎细胞因子,所述促炎细胞因子包括脂氧合酶、IL-6、IL-8、TNF-α、FAAH,抑制弹性蛋白酶,抑制肾素,抑制黑色素生成和提供抗氧化能力。
以下子节更详细地描述了本发明的非限制性方面。
设计本发明的一个特定组合物以用作眼霜组合物。在一种情况下,眼霜可以帮助紧致皮肤、减少皮肤上的纹路和皱纹并增加微循环,以减少眼袋的出现,同时还可以减少眼睛周围的黑眼圈的出现。组合物依赖于七叶皂素、卵磷脂、浮游生物提取物、绿毛山柳菊提取物、雏菊花提取物、橙皮苷甲基查尔酮、棕榈酰四肽-7和迷迭香叶提取物中的任一种、任意组合或全部以及另外任选的仙人果果实提取物的独特组合。在实施例1,表1中提供了这种组合物的实施例。
可以将以上组合物施用于皮肤或毛发上并在皮肤或毛发上保留一段时间(例如,至少1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟或60分钟或多于60分钟)。之后,可以根据需要将组合物从皮肤上冲洗掉或从皮肤上剥下来。
A.活性成分
本发明的前提是确定可以有效增加皮肤紧致度和弹性、改善皮肤质地和清晰度、减少细纹和/或皱纹、眼下浮肿、眼下黑眼圈以及眼睑下垂并改善眼睛周围区域的整体外观的活性成分——七叶皂素、卵磷脂、浮游生物提取物、绿毛山柳菊提取物、雏菊花提取物、橙皮苷甲基查尔酮、棕榈酰四肽-7和迷迭香叶提取物——的组合。其他益处包括:增加赖氨酰氧化酶,增加层黏连蛋白,抑制弹性蛋白酶、MMP1、MMP9和MMP3,抑制促炎细胞因子,包括脂氧合酶、IL-6、IL-8、TNF-α、FAAH,抑制弹性蛋白酶,抑制肾素,抑制黑色素生成和提供抗氧化能力。
成分的这种组合可以用于不同的产品中,以处理各种皮肤状况。举例来说,眼霜可以帮助紧致皮肤,改善眼睛周围区域的整体外观,同时还可以减少黑眼圈。
本发明的组合物和制剂可以特别有益于已经开始出现纹路、皱纹和/或松弛的皮肤。除了对抗衰老过程外,各种成分的组合还保湿、紧致并提亮皮肤。
七叶皂素,也称为七叶皂苷,是在七叶树(Aesculus hippocastanum)种子中发现的皂苷的混合物。该活性成分可从多种来源商购获得(参见,例如,《国际化妆品成分词典和手册》,第12版,2008(“CTFA”),第1卷,第940页,其通过引用并入本文)。七叶皂素和卵磷脂的混合物可从Indena S.P.A.(意大利)以商品名Escinβ-sitosterol Phytosome获得。
浮游生物提取物是从海洋生物中提取的。众所周知它是一种皮肤调理剂。它还可以为皮肤提供脂肪酸、抗氧化剂和锌,并减少皮肤中的炎症并保护皮肤免受阳光照射。浮游生物提取物可以商品名EyedelineTM从Lipotec(美国)购买。在一些实施方案中,浮游生物提取物是来自微生物E.crustaceum的提取物。它可以通过减少液体渗出并增加胆红素的降解来提供对眼睛轮廓区域的护理。另外,它能够促进胶原蛋白和弹性蛋白的合成,并减少高级糖基化终产物的形成。
至于绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物的组合,这种组合可从CLR(德国)以商品名JuveneyeTM获得。这种组合能够解决黑眼圈形成和持续过程中最重要的皮肤病学过程。它可以激活允许血红素分解的重要过程,血红素是深色的并且在黑眼圈的病因中起重要作用。该组合通过其增加VEGF-C产生的能力,可以进一步能够激活皮肤排出。多余的液体、电解质和免疫细胞可以更有效地排出。另外,该组合可能能够减少皮肤中黑色素的沉积并改善整体皮肤健康。
橙皮苷甲基查尔酮是可以从多种来源商购获得的化合物(参见国际化妆品成分词典和手册,第12版,第1卷,第1146页(2008),其通过引用并入本文)。一方面,该成分可通过使用以商品名EyelissTM销售的Sederama SAS(法国)混合物获得,该混合物是水、甘油、橙皮苷甲基查尔酮、硬脂醇聚醚-20、二肽-2(缬氨酰-色氨酸)和棕榈酰四肽-7(Pal-GQPR)的组合。
棕榈酰四肽-7是棕榈酸与含有甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸和精氨酸的合成肽的反应产物,可从多种来源商购获得(参见国际化妆品成分词典和手册,第12版,第2卷,第1767页(2008),其通过引用并入本文)。一方面,该成分可通过使用以商品名EyelissTM销售的Sederama SAS(法国)混合物获得,该混合物是水、甘油、橙皮苷甲基查尔酮、硬脂醇聚醚-20、二肽-2(缬氨酰-色氨酸)和棕榈酰四肽-7(Pal-GQPR)的组合。
迷迭香叶提取物是迷迭香叶的提取物。迷迭香(Rosmarinus officinalis)原产于地中海地区,是一种多年生木本植物,具有芳香、常绿、针状叶子和白色、粉红色、紫色或蓝色的花朵。它是一种灌木,最高可达1.5米的高度,叶子长约2cm至4cm,绿色(顶部表面)和白色(底部表面)着色。在一个优选的实例中,迷迭香叶提取物可以从迷迭香叶中获得。可以使用包含甜菜碱或水合甜菜碱、氢键供体化合物(多元醇、有机酸等)和水的流体提取混合物对叶片进行共熔发生(eutectigenesis)提取过程。特别地,可以将叶部分压碎或浸软,然后置于前述的共熔流体提取混合物中,以获得共熔提取物。然后可以将共熔提取物用于本发明的组合物中。在一些优选的实例中,氢键供体是有机酸,优选乳酸。共熔发生利用低共熔溶剂,该低共熔溶剂是熔点低于其中的成分单独时的熔点的化合物的混合物。在一些实例中,迷迭香可以商购获得。在一些实例中,迷迭香可以由Naturex(法国)以商品名RosemaryEucteysTM提供。在本发明的上下文中发现,迷迭香叶提取物可以通过减少或抑制钙在肌管中的流入以及减少或防止动作电位的发生而减少或抑制肌管的收缩。还发现迷迭香叶提取物可以抑制或减少皮肤细胞(例如角质形成细胞或人皮肤成纤维细胞)中的MMP-1、MMP-3和MMP-9的产生或活性。
本文描述的提取物可以是通过本领域已知的萃取方法及其组合来制得的提取物。提取方法的非限制性实例包括使用液-液萃取、固相萃取、水萃取、乙酸乙酯、醇、丙酮、油、超临界二氧化碳、加热、压力、压降萃取、超声提取等。提取物可以是液体、固体、干燥液体、再悬浮固体等。
B.成分的量
期望本发明的组合物可以包含任意量的本说明书所讨论的成分。组合物还可包含任意数目的在本说明书全文中所描述的附加成分的组合(例如,颜料或附加的化妆品或药物成分)。在组合物中任意成分的浓度可以改变。例如,在非限制性实施方案中,组合物在其最终形式中可以包含以下组分、主要由或由以下组分组成:例如至少约0.0001%、0.0002%、0.0003%、0.0004%、0.0005%、0.0006%、0.0007%、0.0008%、0.0009%、0.0010%、0.0011%、0.0012%、0.0013%、0.0014%、0.0015%、0.0016%、0.0017%、0.0018%、0.0019%、0.0020%、0.0021%、0.0022%、0.0023%、0.0024%、0.0025%、0.0026%、0.0027%、0.0028%、0.0029%、0.0030%、0.0031%、0.0032%、0.0033%、0.0034%、0.0035%、0.0036%、0.0037%、0.0038%、0.0039%、0.0040%、0.0041%、0.0042%、0.0043%、0.0044%、0.0045%、0.0046%、0.0047%、0.0048%、0.0049%、0.0050%、0.0051%、0.0052%、0.0053%、0.0054%、0.0055%、0.0056%、0.0057%、0.0058%、0.0059%、0.0060%、0.0061%、0.0062%、0.0063%、0.0064%、0.0065%、0.0066%、0.0067%、0.0068%、0.0069%、0.0070%、0.0071%、0.0072%、0.0073%、0.0074%、0.0075%、0.0076%、0.0077%、0.0078%、0.0079%、0.0080%、0.0081%、0.0082%、0.0083%、0.0084%、0.0085%、0.0086%、0.0087%、0.0088%、0.0089%、0.0090%、0.0091%、0.0092%、0.0093%、0.0094%、0.0095%、0.0096%、0.0097%、0.0098%、0.0099%、0.0100%、0.0200%、0.0250%、0.0275%、0.0300%、0.0325%、0.0350%、0.0375%、0.0400%、0.0425%、0.0450%、0.0475%、0.0500%、0.0525%、0.0550%、0.0575%、0.0600%、0.0625%、0.0650%、0.0675%、0.0700%、0.0725%、0.0750%、0.0775%、0.0800%、0.0825%、0.0850%、0.0875%、0.0900%、0.0925%、0.0950%、0.0975%、0.1000%、0.1250%、0.1500%、0.1750%、0.2000%、0.2250%、0.2500%、0.2750%、0.3000%、0.3250%、0.3500%、0.3750%、0.4000%、0.4250%、0.4500%、0.4750%、0.5000%、0.5250%、0.0550%、0.5750%、0.6000%、0.6250%、0.6500%、0.6750%、0.7000%、0.7250%、0.7500%、0.7750%、0.8000%、0.8250%、0.8500%、0.8750%、0.9000%、0.9250%、0.9500%、0.9750%、1.0%、1.1%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、2.0%、2.1%、2.2%、2.3%、2.4%、2.5%、2.6%、2.7%、2.8%、2.9%、3.0%、3.1%、3.2%、3.3%、3.4%、3.5%、3.6%、3.7%、3.8%、3.9%、4.0%、4.1%、4.2%、4.3%、4.4%、4.5%、4.6%、4.7%、4.8%、4.9%、5.0%、5.1%、5.2%、5.3%、5.4%、5.5%、5.6%、5.7%、5.8%、5.9%、6.0%、6.1%、6.2%、6.3%、6.4%、6.5%、6.6%、6.7%、6.8%、6.9%、7.0%、7.1%、7.2%、7.3%、7.4%、7.5%、7.6%、7.7%、7.8%、7.9%、8.0%、8.1%、8.2%、8.3%、8.4%、8.5%、8.6%、8.7%、8.8%、8.9%、9.0%、9.1%、9.2%、9.3%、9.4%、9.5%、9.6%、9.7%、9.8%、9.9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或99%或其中可衍生的任何范围的在本说明书和权利要求通篇所提及的至少一种成分。在非限制性方面,百分比可以按整个组合物的重量或体积进行计算。本领域普通技术人员会理解,给定组合物中的浓度可以根据成分的添加、替换和/或减少而改变。
C.载剂
本发明的组合物可以包含所有类型的载剂和载体,或可以掺入所有类型的载剂和载体中。载剂或载体可以是药学或皮肤病学上可接受的载剂或载体。载剂或载体的非限制性实例包括水、甘油、醇、油、含硅化合物、硅酮化合物和蜡。变化方案和其他合适的载剂对于熟练技术人员是明显的,并且适用于本发明。在某些方面,化合物、成分和试剂的浓度和组合以这样的方式进行选择,使得组合物是化学相容的并且不形成从最终产品中沉淀出来的复合物。
D.结构
本发明的组合物可以被构建或配制为多种不同形式。非限制性实例包括乳液(例如,油包水、水包油包水、水包油、水包硅酮、硅酮包水、油包水包油、硅酮包水包油的乳液)、霜、洗剂、溶液剂(水溶液或者水-乙醇溶液)、无水基质(例如口红和粉末)、凝胶、面膜、去角质剂和软膏剂。变体和其他的结构对于熟练技术人员是明显的,并且适用于本发明。
E.附加成分
除了发明人所公开成分的组合之外,组合物还可以包含附加成分,例如化妆品成分和药物活性成分。这些附加成分的非限制性实例在以下子章节中进行描述。
1、化妆品成分
CTFA国际化妆品成分词典和手册(2004和2008)描述了多种可以在本发明的环境下使用的非限制性化妆品成分。这些成分种类的实例包括:芳香剂(人造的和天然的;例如葡萄糖酸、苯氧乙醇和三乙醇胺)、染料和着色成分(例如蓝1、蓝1色淀、红40、二氧化钛、D&C蓝色4号、D&C绿色5号、D&C橙色4号、D&C红色17号、D&C红色33号、D&C紫色2号、D&C黄色10号和D&C黄色11号)、调味剂/香味剂(例如,甜叶菊(Stevia rebaudiana)提取物,以及薄荷醇)、吸附剂、润滑剂、溶剂、保湿剂(包括例如润肤剂、湿润剂、成膜剂、闭塞剂和影响皮肤天然保湿机制的试剂)、拒水剂、UV吸收剂(物理和化学吸收剂,例如对氨基苯甲酸(“PABA”)和相应的PABA衍生物、二氧化钛、氧化锌等)、精油、维生素(例如A、B、C、D、E和K)、微量金属(例如锌、钙和硒)、抗刺激物(例如类固醇和非类固醇抗炎药)、植物提取物(例如芦荟(Aloevera)、柑橘、黄瓜提取物、银杏(Ginkgo biloba)、人参和迷迭香)、抗菌剂、抗氧化剂(例如BHT和生育酚)、螯合剂(例如EDTA二钠和EDTA四钠)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、pH调节剂(例如氢氧化钠和柠檬酸)、吸收剂(例如淀粉辛烯基琥珀酸铝、高岭土、玉米淀粉、燕麦淀粉、环糊精、滑石和沸石)、皮肤漂白和美白剂(例如氢醌和烟酰胺乳酸盐)、湿润剂(例如山梨醇、脲、甲基葡糖醇聚醚-20和甘露醇)、去角质剂、防水剂(例如氢氧化镁/铝硬脂酸盐)、皮肤调节剂(例如芦荟提取物、尿囊素、没药醇、神经酰胺、聚二甲基硅氧烷、透明质酸、生物糖胶-1、乙基己基甘油、戊二醇、氢化聚癸烯、油酸辛基十二烷醇酯和甘草酸二钾)。这些成分中的一些的非限制性实例在以下子章节中提供。
a.UV吸收剂
可以与本发明的组合物组合使用的UV吸收剂包括化学和物理防晒物质。可以使用的化学防晒物质的非限制性实例包括对氨基苯甲酸(PABA)、PABA酯(PABA甘油酯、PABA戊基二甲酯和PABA辛基二甲酯)、PABA丁酯、PABA乙酯、PABA乙基二羟基丙酯、二苯甲酮(氧苯酮、磺异苯酮、二苯甲酮和二苯甲酮-1至二苯甲酮-12)、肉桂酸盐/酯(甲氧基肉桂酸辛酯、对甲氧基肉桂酸异戊酯、肉桂酸辛基甲氧基酯、西诺沙酯、肉桂酸二异丙基甲酯、DEA甲氧基肉桂酸盐、二异丙基肉桂酸乙酯、甘油辛酸酯二甲氧基肉桂酸酯和甲氧基肉桂酸乙酯)、肉桂酸酯、水杨酸盐/酯(水杨酸均甲酯、水杨酸苄酯、水杨酸乙二醇酯、水杨酸异丙基苄酯等)、邻氨基苯甲酸盐/酯、尿刊酸乙酯、胡莫柳酯、水杨酸辛酯、二苯甲酰基甲烷衍生物(例如阿伏苯宗)、奥克立林、辛基三嗪酮、棓酰棓酸三油酸酯、氨基苯甲酸甘油酯、劳松黄和二羟基丙酮、乙基己基三嗪酮、二辛基丁酰胺基三嗪酮、苯亚甲基丙二酸脂聚硅氧烷、对苯二亚甲基二樟脑磺酸、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯、双二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸酯、双苯并唑基苯基乙基己基亚氨基三嗪、甲酚曲唑三硅氧烷、亚甲基双苯并三唑基四甲基丁基苯酚和双乙基己基氧苯酚甲氧苯基三嗪、4-甲基苯亚甲基樟脑和4-甲氧基肉桂酸异戊酯。物理防晒物质的非限制性实例包括高岭土、滑石、矿脂和金属氧化物(例如二氧化钛和氧化锌)。
b.保湿剂
可以与本发明的组合物一起使用的保湿剂的非限制性实例包括氨基酸、硫酸软骨素、双甘油、赤藓糖醇、果糖、葡萄糖、甘油、甘油聚合物、乙二醇、1,2,6-己三醇、蜂蜜、透明质酸、氢化蜂蜜、氢化淀粉水解物、肌醇、乳糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖、甘露醇、天然保湿因子、PEG-15丁二醇、聚甘油山梨醇、吡咯烷酮羧酸的盐、PCA钾、丙二醇、葡糖醛酸钠、PCA钠、山梨醇、蔗糖、海藻糖、脲和木糖醇。
其他实例包括乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、丙氨酸、藻类提取物、库拉索芦荟(Aloe barbadensis)、库拉索芦荟提取物、库拉索芦荟凝胶、药蜀葵(Althea officinalis)提取物、杏(Prunus armeniaca)仁油、精氨酸、精氨酸天冬氨酸盐/酯、山金车提取物、天冬氨酸、鳄梨(Persea gratissima)油、屏障鞘脂、丁醇、蜂蜡、山萮醇、β-谷甾醇、白桦(Betulaalba)树皮提取物、琉璃苣(Borago officinalis)提取物、假叶树(Ruscus aculeatus)提取物、丁二醇、金盏花提取物、金盏花油、小烛树(Euphorbia cerifera)蜡、菜籽油、辛酸/癸酸甘油三酯、小豆蔻(Elettaria cardamomum)油、巴西棕榈(Copernicia cerifera)蜡、胡萝卜(Daucus carota sativa)油、蓖麻(Ricinus communis)油、神经酰胺、地蜡、鲸蜡硬脂醇聚醚-5、鲸蜡硬脂醇聚醚-12、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂醇辛酸酯、鲸蜡醇聚醚-20、鲸蜡醇聚醚-24、鲸蜡醇乙酸酯、鲸蜡醇辛酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、白花春黄菊(Anthemisnobilis)油、胆固醇、胆固醇酯、胆甾醇羟基硬脂酸酯、柠檬酸、鼠尾草(Salvia sclarea)油、可可(Theobroma cacao)脂、椰油醇-辛酸酯/癸酸酯、椰子(Cocos nucifera)油、胶原蛋白、胶原蛋白氨基酸、玉米(Zea mays)油、脂肪酸、油酸癸酯、聚二甲基硅氧烷共聚醇、聚二甲基硅氧烷醇、己二酸二辛酯、琥珀酸二辛酯、二聚季戊四醇六辛酸酯/六癸酸酯、DNA、赤藓糖醇、乙氧基二乙二醇、亚油酸乙酯、蓝桉(Eucalyptus globulus)油、月见草(Oenotherabiennis)油、脂肪酸、斑点老鹳草(Geranium maculatum)油、葡萄糖胺、葡糖谷氨酸酯、谷氨酸、甘油聚醚-26、甘油、丙三醇、二硬脂酸甘油酯、羟基硬脂酸甘油酯、月桂酸甘油酯、亚油酸甘油酯、豆蔻酸甘油酯、油酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯SE、甘氨酸、硬酯酸乙二醇酯、硬酯酸乙二醇酯SE、葡糖氨基葡聚糖、葡萄(Vitis vinifera)籽油、美洲榛(Corylus americana)坚果油、欧洲榛(Corylus avellana)坚果油、己二醇、透明质酸、混合红花(Carthamus tinctorius)油、氢化蓖麻油、氢化椰油甘油酯、氢化椰子油、氢化羊毛脂、氢化卵磷脂、氢化棕榈油甘油酯、氢化棕榈仁油、氢化大豆油、氢化牛脂酸甘油酯、氢化植物油、水解胶原蛋白、水解弹性蛋白、水解葡糖氨基葡聚糖、水解角蛋白、水解大豆蛋白、羟基化羊毛脂、羟基脯氨酸、异鲸蜡醇硬脂酸酯、异鲸蜡醇硬脂酰基硬脂酸酯、油酸异癸酯、异硬脂酸异丙酯、羊毛脂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、异硬脂酰胺DEA、异硬脂酸、异硬脂醇乳酸酯、异硬脂醇新戊酸酯、茉莉(Jasminum officinale)油、霍霍巴(Buxus chinensis)油、巨藻、石栗(Aleurites moluccana)坚果油、乳酰胺MEA、羊毛脂醇聚醚-16、羊毛脂醇聚醚-10乙酸酯、羊毛脂、羊毛脂酸、羊毛脂醇、羊毛脂油、羊毛脂蜡、薰衣草(Lavandula angustifolia)油、卵磷脂、柠檬(Citrus medica limonum)油、亚油酸、亚麻酸、澳洲坚果(Macadamia ternifolia)油、麦芽糖醇、母菊(Chamomilla recutita)油、甲基葡糖倍半硬脂酸酯、甲基硅烷醇PCA酯、矿物油、貂油、黄褐色被孢霉油、肉豆蔻醇乳酸酯、肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯、肉豆蔻醇丙酸酯、新戊二醇二辛酸酯/二癸酸酯、辛基十二醇、肉豆蔻酸辛基十二醇酯、硬脂酰基硬脂酸辛基十二醇酯、羟基硬脂酸辛酯、棕榈酸辛酯、水杨酸辛酯、硬脂酸辛酯、油酸、橄榄(Olea europaea)油、橙(Citrus aurantium dulcis)油、棕榈(Elaeis guineensis)油、棕榈酸、泛硫乙胺、泛醇、泛醇基乙基醚、石蜡、PCA、桃(Prunuspersica)仁油、花生(Arachis hypogaea)油、PEG-8C12-18酸酯、PEG-15椰油胺、PEG-150二硬脂酸酯、PEG-60甘油异硬脂酸酯、PEG-5甘油硬脂酸酯、PEG-30甘油硬脂酸酯、PEG-7氢化蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、PEG-40失水山梨醇全油酸酯、PEG-5大豆甾醇、PEG-10大豆甾醇、PEG-2硬脂酸酯、PEG-8硬脂酸酯、PEG-20硬脂酸酯、PEG-32硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-50硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-150硬脂酸酯、十五内酯、薄荷(Mentha piperita)油、矿脂、磷脂、多氨基多糖缩合物、聚甘油-3二异硬脂酸酯、聚季铵盐-24、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85、肉豆蔻酸钾、棕榈酸钾、丙二醇、丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯、丙二醇二辛酸酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇月桂酸酯、丙二醇硬脂酸酯、丙二醇硬脂酸酯SE、PVP、吡哆素二棕榈酸酯、视黄醇、视黄醇棕榈酸酯、米(Oryza sativa)糠油、RNA、迷迭香(Rosmarinus officinalis)油、玫瑰油、红花(Carthamus tinctorius)油、鼠尾草(Salviaofficinalis)油、檀香(Santalum album)油、丝氨酸、血清蛋白、芝麻(Sesamum indicum)油、牛油果(Butyrospermum parkii)脂、蚕丝粉、软骨素硫酸钠、透明质酸钠、乳酸钠、棕榈酸钠、PCA钠、聚谷氨酸钠、可溶性胶原蛋白、山梨坦月桂酸酯、山梨坦油酸酯、山梨坦棕榈酸酯、山梨坦倍半油酸酯、山梨坦硬脂酸酯、山梨醇、大豆(Glycine soja)油、鞘脂、角鲨烷、角鲨烯、硬脂酰胺MEA-硬脂酸酯、硬脂酸、硬脂氧基聚二甲硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷、硬脂醇、硬脂醇甘草亭酸酯、硬脂醇庚酸酯、硬脂醇硬脂酸酯、向日葵(Helianthus annuus)籽油、甜扁桃(Prunus amygdalus dulcis)油、合成蜂蜡、生育酚、生育酚乙酸酯、生育酚亚油酸酯、三山嵛精、十三烷醇新戊酸酯、十三烷醇硬脂酸酯、三乙醇胺、三硬脂精、脲、植物油、水、蜡、小麦(Triticum vulgare)胚芽油和依兰(Cananga odorata)油。
c.抗氧化剂
可以与本发明的组合物一起使用的抗氧化剂的非限制性实例包括乙酰半胱氨酸、抗坏血酸多肽、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸甲基硅烷醇果胶酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、BHA、BHT、叔丁基氢醌、半胱氨酸、半胱氨酸HCl、二戊基氢醌、二叔丁基氢醌、二鲸蜡醇硫代二丙酸酯、二油基生育酚甲基硅烷醇、抗坏血酸硫酸酯二钠、二硬脂醇硫代二丙酸酯、双十三烷醇硫代二丙酸酯、十二醇棓酸酯、异抗坏血酸、抗坏血酸酯、阿魏酸乙酯、阿魏酸、棓酯、氢醌、巯基乙酸异辛酯、曲酸、抗坏血酸镁、抗坏血酸磷酸酯镁、甲基硅烷醇抗坏血酸酯、天然植物抗氧化剂,例如绿茶或葡萄籽提取物、去甲二氢愈创木酸、棓酸辛酯、苯基巯基乙酸、磷酸抗坏血酸酯生育酚酯钾、亚硫酸钾、棓酸丙酯、醌、迷迭香酸、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、异抗坏血酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、超氧化物歧化酶、巯基乙酸钠、山梨醇缩糠醛、硫二甘醇、亚硫基二乙酰胺、亚硫基二乙酸、巯基乙酸、硫代乳酸、硫代水杨酸、生育酚聚醚-5、生育酚聚醚-10、生育酚聚醚-12、生育酚聚醚-18、生育酚聚醚-50、生育酚、托可索仑、生育酚乙酸酯、生育酚亚油酸酯、生育酚烟酸酯、生育酚琥珀酸酯和三(壬基苯酚)亚磷酸酯。
d.结构化剂
在其他非限制性方面,本发明的组合物可以包含结构化剂。在特定的方面,结构化剂帮助向组合物提供流变学特征以有助于组合物的稳定性。在其他方面,结构化剂还可以起乳化剂或表面活性剂的作用。结构化剂的非限制性实例包括硬脂酸、棕榈酸、硬脂醇、鲸蜡醇、山嵛醇、硬脂酸、棕榈酸、具有平均约1个至约21个亚乙基氧单元的硬脂醇的聚乙二醇醚、具有平均约1个至约5个亚乙基氧单元的鲸蜡醇的聚乙二醇醚及其混合物。
e.乳化剂
在本发明的特定方面,组合物不包含乳化剂。然而,在其他方面,组合物可以包含一种或多于一种乳化剂。乳化剂可以降低相间表面张力并改善乳液的剂型和稳定性。乳化剂可以是非离子的、阳离子的、阴离子的和两性离子的乳化剂(参见McCutcheon(1986);美国专利第5011681号;第4421769号;第3755560号)。非限制性实例包括甘油酯、丙二醇酯、乙二醇的脂肪酸酯、聚丙二醇的脂肪酸酯、山梨醇的酯、失水山梨醇酐酯、羧酸共聚物、葡萄糖的酯和醚、乙氧基化的酯、乙氧基化的醇、磷酸烷醇酯、聚氧乙烯脂肪醚磷酸酯、脂肪酸酰胺、酰基乳酸酯、脂肪酸盐、TEA硬脂酸酯、DEA油醇聚醚-3磷酸酯、聚乙二醇20失水山梨醇单月桂酸酯(聚山梨醇酯20)、聚乙二醇5大豆甾醇、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-21、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂基葡糖苷、鲸蜡硬脂醇、C12-13烷醇聚醚-3、PPG-2甲基葡糖醚二硬脂酸酯、PPG-5-鲸蜡醇聚醚-20、双-PEG/PPG-20/20聚二甲基硅氧烷、鲸蜡醇聚醚-10、聚山梨醇酯80、鲸蜡醇磷酸酯、鲸蜡醇磷酸酯钾、二乙醇胺鲸蜡醇磷酸酯、聚山梨醇酯60、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、花生醇、花生醇葡糖苷及其混合物。
f.含聚硅氧烷的化合物
在非限制性方面,含聚硅氧烷的化合物包括分子主链由交替的硅和氧原子与连接在硅原子上的侧基组成的聚合产物家族中的任何成员。通过改变-Si-O-链的长度、侧基和交联,聚硅氧烷可以合成为各种各样的材料。它们的稠度可以从液体至凝胶至固体改变。
可以在本发明的环境下使用的含聚硅氧烷的化合物包括在本说明书中所描述的或本领域普通技术人员已知的那些。非限制性实例包括硅油(例如挥发性和非挥发性油)、凝胶和固体。在某些方面,含硅的化合物包括硅油,例如聚有机硅氧烷。聚有机硅氧烷的非限制性实例包括聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、聚硅氧烷-11、苯基聚三甲基硅氧烷、三甲基硅烷基氨端二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷或它们的混合物和其他任何给定比例的有机硅氧烷材料,以根据预期的应用(例如,对特定区域例如皮肤、毛发或眼睛)达到期望的稠度和应用特征。“挥发性硅油”包括具有低气化热的硅油,即通常低于约50卡每克硅油。挥发性硅油的非限制性实例包括:环聚二甲基硅氧烷,例如Dow Corning 344Fluid、DowCorning 345Fluid、Dow Corning 244Fluid和Dow Corning 245Fluid、Volatile Silicon7207(康涅狄格州丹伯里的Union Carbide Corp.);低黏度聚二甲基硅氧烷,即黏度为约50cst或低于50cst的聚二甲基硅氧烷(例如,聚二甲基硅氧烷,例如Dow Corning 200-0.5cst Fluid)。Dow Corning Fluid可以从密歇根州米德兰的Dow Corning Corporation获得。在CTFA化妆品成分词典的第三版中(通过引用并入),环聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷分别被描述为环状二甲基聚硅氧烷化合物和用三甲基硅氧基单元封端的完全甲基化的线性硅氧烷的混合物。可以在本发明的环境下使用的其他非限制性挥发性硅油包括可从纽约州沃特福德的General Electric Co.,Silicone Products Div.获得的那些和密歇根州艾德里安Stauffer Chemical Co.的SWS Silicones Div.。
g.精油
精油包括来自药草、花、树木和其他植物的油。这类油一般以植物细胞间微小的液滴存在,并可以通过本领域技术人员已知的若干方法进行提取(例如,蒸气蒸馏、花香提取(即使用脂肪提取)、浸渍、溶剂提取或机械压榨)。当这些类型的油暴露于空气时,其趋于挥发(即挥发性油)。因此,虽然许多精油是无色的,但是随着时间其被氧化并且颜色变得更深。精油不溶于水,但溶于醇、醚、固定油(植物的)和其他有机溶剂。在精油中发现的一般物理特征包括约160℃至240℃的沸点和约0.759至约1.096的密度。
精油一般通过发现油的来源植物命名。例如,玫瑰油或薄荷油分别来自玫瑰或薄荷植物。可以在本发明的环境下使用的精油的非限制性实例包括芝麻油、澳洲坚果油、茶树油、月见草油、西班牙鼠尾草油、西班牙迷迭香油、芫荽油、百里香油、麝香草油、玫瑰油、大茴香油、凤仙花油、香柠檬油、玫瑰木油、香柏油、甘菊油、鼠尾草油、香紫苏油、丁香油、柏木油、桉油、茴香油、海茴香油、乳香油、香叶油、姜油、葡萄柚油、茉莉油、杜松子油、薰衣草油、柠檬油、柠檬草油、来檬油、橘子油、马郁兰油、没药油、苦橙花油、橙油、绿叶油、胡椒油、黑胡椒油、苦橙叶油、松油、奥图玫瑰油、迷迭香油、檀香油、绿薄荷油、甘松油、香根草油、冬青油或依兰油。还预期本领域技术人员已知的其他精油在本发明的环境下是有用的。
h.增稠剂
包括增稠剂或凝胶剂的增稠剂包括可以增加组合物黏度的物质。增稠剂包括可以增加组合物黏度而基本上不改变组合物内活性成分功效的那些。增稠剂还可以增加本发明的组合物的稳定性。在本发明的某些方面,增稠剂包括氢化聚异丁烯、三羟基硬脂精、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、或其混合物。
可以在本发明的环境下使用的另外的增稠剂的非限制性实例包括羧酸聚合物、交联的聚丙烯酸酯聚合物、聚丙烯酰胺聚合物、多糖和胶。羧酸聚合物的实例包括含有一种或多于一种衍生自丙烯酸的单体的交联化合物、经取代的丙烯酸和这些丙烯酸的盐和酯和经取代的丙烯酸,其中所述交联剂含有两个或多于两个碳-碳双键,并衍生自多元醇(参见美国专利第5087445号;第4509949号;第2798053号;CTFA国际化妆品成分词典,第四版,1991,第12页和80页)。可商购获得的羧酸聚合物的实例包括卡波姆,其为丙烯酸与蔗糖或季戊四醇的烯丙基醚交联的均聚物(例如,购自B.F.Goodrich的CARBOPOLTM 900系列)。
交联的聚丙烯酸酯聚合物的非限制性实例包括阳离子型和非离子型聚合物。实例描述于美国专利第5100660号、第4849484号、第4835206号、第4628078号、第4599379号。
聚丙烯酰胺聚合物(包括非离子的聚丙烯酰胺聚合物,其包括经取代的支化的或未支化的聚合物)的非限制性实例包括聚丙烯酰胺、异构烷烃和月桂醇聚醚-7、丙烯酰胺与被丙烯酸和经取代的丙烯酸取代的丙烯酰胺的多嵌段共聚物。
多糖的非限制性实例包括纤维素、羧甲基羟乙基纤维素、乙酸丙酸羧酸纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、微晶纤维素、纤维素硫酸钠及其混合物。其他实例为烷基取代的纤维素,其中纤维素聚合物的羟基被羟烷基化(优选羟乙基化或羟丙基化)以形成羟烷基化的纤维素,其然后用C10至C30直链或带支链的烷基基团通过醚键进一步改性。一般这些聚合物为C10至C30直链或带支链的醇与羟烷基纤维素的醚。其他有用的多糖包括硬葡聚糖类,其包含每三个单元具有一个(1-6)连接的葡萄糖的(1-3)连接的葡萄糖单元的直链。
本发明可以使用的胶的非限制性实例包括阿拉伯树胶、琼脂、藻胶、藻酸、藻酸铵、支链淀粉、藻酸钙、角叉菜胶钙、肉毒碱、角叉菜胶、糊精、明胶、结冷胶、瓜尔豆胶、瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵、锂蒙脱石、透明质酸、水合二氧化硅、羟丙基壳聚糖、羟丙基瓜尔胶、卡拉亚胶、巨藻、角豆胶、纳豆胶、藻酸钾、角叉菜胶钾、藻酸丙二醇酯、菌核胶、羧甲基葡聚糖钠、角叉菜胶钠、黄蓍胶、黄原胶及其混合物。
i.防腐剂
可以在本发明的环境下使用的防腐剂的非限制性实例包括季铵盐防腐剂,例如聚季铵盐-1和苄烷铵卤化物(例如苯扎氯铵(“BAC”)和苯扎溴铵)、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、苯氧基乙醇、苄醇、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫汞撒或其组合。
2、药物成分
还预期药物活性成分对本发明的组合物是有用的。药物活性成分的非限制性实例包括抗粉刺剂、用于处理酒渣鼻的试剂、止痛剂、麻醉剂、肛门直肠剂、抗组胺药、消炎剂,包括非甾族消炎药的消炎剂、抗生素、抗真菌剂、抗病毒素、抗微生物剂、抗癌症活性剂、抗疥螨剂、灭虱剂、抗肿瘤药、防汗药、止痒剂、抗牛皮癣药、抗脂溢剂、生物活性蛋白质和肽、烧伤处理剂、烧灼剂、脱色剂、脱毛剂、尿布疹处理剂、酶、毛发生长刺激剂、包括DFMO及其盐和类似物的毛发生长抑制剂、止血剂、角质分离剂、口疮处理剂、唇疱疹处理剂、牙科或牙周处理剂、光敏感活性剂、皮肤保护剂/屏障剂、包括激素和皮质激素的类固醇、晒伤处理剂、遮光剂、经皮活性剂、鼻活性剂、阴道活性剂、疣处理剂、创伤处理剂、创伤愈合剂等。
F.试剂盒
还预期了用于本发明的某些方面的试剂盒。例如,本发明的组合物可以包括在试剂盒内。试剂盒可以包括容器。容器可以包括瓶子、金属管、层压管、塑料管、分配器、加压容器、屏障容器、包装、分室、口红容器、压缩容器、能够保存化妆品组合物的化妆品盘或其他类型的容器,例如注射或吹塑成型的塑料容器,其中保存分散体或组合物或期望的瓶子、分配器或包装。试剂盒和/或容器在其表面上可包含标记。举例来说,标记可以是字词、短语、缩写、图片或符号。
所述容器可以分配预定量的组合物。在其他实施方案中,可以挤压容器(例如金属管、层压管或塑料管)以分配期望量的组合物。组合物可以分配为喷雾、气溶胶、液体、流体或半固体。容器可以具有喷雾、泵或挤压机构。试剂盒还可以包含使用试剂盒组分以及使用任何包含于容器内的其他组合物的说明书。说明书可以包含如何施用、使用和保存组合物的解释。
实施例
列出以下实施例以说明本发明的优选实施方案。本领域技术人员应理解,以下实施例中所公开的技术代表发明人发现的在本发明的实践中发挥良好作用的技术,并因此可以被认为为其实践建立优选的模式。然而,根据本公开,本领域技术人员应理解,在不脱离本发明的精神和范围的情况下,在所公开的具体实施方案中可以做许多改变,并仍获得类似或相似的结果。
实施例1
本文所公开和要求保护的所有组合物可以根据本公开无需过度实验即可制成和实现。尽管本发明所述的组合物和方法已经按照优选实施方案进行了描述,对于本领域技术人员而言显而易见的是,可以对所述组合物以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序中实施变化,而不脱离本发明的概念、精神和范围。更具体地,明显地,化学和生理两方面都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂,同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如由所附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念内。
具有本文公开的活性成分的组合的制剂被制备为局部皮肤和/或毛发用组合物。表1和表2中表示的制剂被制备为乳液(例如水包油乳液),特别是眼霜。
表1*
成分 | 浓度%(以重量计) |
绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物 | 1.00 |
卵磷脂 | 0.25 |
七叶皂素 | 0.18 |
橙皮苷甲基查尔酮 | 0.05 |
迷迭香叶提取物 | 0.02 |
浮游生物提取物 | 0.0011 |
棕榈酰四肽-7 | 0.0003 |
仙人果果实提取物(任选的) | 0.0005 |
水 | 55.97 |
二甲硅油 | 8.70 |
甘油 | 4.65 |
鲸蜡醇 | 3.60 |
异十六烷 | 3.00 |
变性醇 | 2.77 |
硬脂酸 | 2.50 |
角鲨烷 | 2.00 |
辛基甲硅油 | 1.50 |
丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物 | 1.10 |
矿物油 | 1.00 |
蜂蜡 | 1.00 |
辛基十二烷醇 | 1.00 |
硬脂醇 | 1.00 |
二氧化硅 | 1.00 |
鲸蜡硬脂醇聚醚-25 | 0.99 |
丁二醇 | 0.94 |
微晶蜡 | 0.90 |
三乙醇胺 | 0.90 |
二氧化钛 | 0.80 |
二甲基聚硅氧烷醇 | 0.51 |
云母 | 0.44 |
二椰油酰乙二胺PEG-15二硫酸酯二钠 | 0.39 |
乳酸 | 0.39 |
甜菜碱 | 0.34 |
重氮烷基脲 | 0.30 |
黄原胶 | 0.15 |
EDTA二钠 | 0.10 |
石蜡 | 0.10 |
赋形剂** | q.s. |
*可以通过将成分在烧杯中于70℃至75℃的温度下混合直至均匀来制备制剂。随后,可以将制剂冷却至室温(20℃至25℃)。此外,并且如果需要的话,可以添加附加成分,例如以改变组合物的流变性。
**例如可以添加赋形剂,以改变组合物的流变性。或者,水的量可以变化,只要组合物中的水量为至少35重量/重量%,并且优选为40重量/重量%至60重量/重量%。
表2*
成分 | 浓度%(以重量计) |
雏菊花提取物 | 0.65 |
绿毛山柳菊提取物 | 0.32 |
卵磷脂 | 0.25 |
七叶皂素 | 0.18 |
橙皮苷甲基查尔酮 | 0.05 |
迷迭香叶提取物 | 0.02 |
浮游生物提取物 | 0.0011 |
棕榈酰四肽-7 | 0.0003 |
水 | 54.57 |
二甲硅油 | 8.74 |
甘油 | 4.63 |
鲸蜡醇 | 3.60 |
异十六烷 | 3.00 |
醇 | 2.78 |
硬脂酸 | 2.50 |
角鲨烷 | 2.00 |
辛基甲硅油 | 1.50 |
辛基十二烷醇 | 1.50 |
丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物 | 1.10 |
三乙醇胺 | 1.10 |
矿物油 | 1.00 |
蜂蜡 | 1.00 |
硬脂醇 | 1.00 |
二氧化硅 | 1.00 |
鲸蜡硬脂醇聚醚-25 | 0.99 |
丁二醇 | 0.94 |
微晶蜡/压光微晶蜡 | 0.90 |
二氧化钛 | 0.69 |
二甲基聚硅氧烷醇 | 0.51 |
戊二醇 | 0.40 |
二椰油酰乙二胺PEG-15二硫酸酯二钠 | 0.39 |
乳酸 | 0.39 |
云母 | 0.37 |
丙二醇 | 0.35 |
甜菜碱 | 0.34 |
羟基苯乙酮 | 0.25 |
丙二醇 | 0.23 |
辛二醇 | 0.15 |
黄原胶 | 0.15 |
EDTA二钠 | 0.10 |
乙基己基甘油 | 0.10 |
石蜡 | 0.10 |
赋形剂** | q.s. |
*可以通过将成分在烧杯中于70℃至75℃的温度下加热混合直至均匀来制备制剂。随后,可以将制剂冷却至室温(20℃至25℃)。此外,并且如果需要的话,可以添加附加成分,例如以改变组合物的流变性。
**例如可以添加赋形剂,以改变组合物的流变性。或者,水的量可以变化,只要组合物中的水量为至少35重量/重量%,并且优选为40重量/重量%至60重量/重量%。
实施例2
(活性成分的体外功效)
成分的功效通过以下方法确定。以下是可以在本发明的上下文中使用的非限制性测定。应该认识到,可以使用其他测试程序,包括例如客观和主观程序。
已确定绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物的组合提供抗氧化能力,并增加赖氨酰氧化酶。已确定迷迭香叶提取物具有抗氧化能力,抑制MMP1、MMP9和MMP3,抑制促炎细胞因子并抑制弹性蛋白酶,所述促炎细胞因子包括脂氧合酶、IL-6、IL-8、TNF-α和FAAH。已经确定橙皮苷甲基查尔酮和棕榈酰四肽-7的组合提供抗氧化能力,抑制层黏连蛋白并抑制肾素。已确定浮游生物提取物提供抗氧化能力。还确定七叶皂素抑制包括FAAH在内的促炎细胞因子,并抑制黑色素生成。
表3总结了体外定量结果,下面提供了用于确定成分特性的方法。
表3
抗氧化(AO)测试:绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物的组合,橙皮苷甲基查尔酮和棕榈酰四肽-7的组合,以及浮游生物提取物均具有抗氧化能力。生命有机体的抗氧化体系包括酶,例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶;大分子,例如白蛋白、铜蓝蛋白和铁蛋白;以及一系列小分子,包括抗坏血酸、α-生育酚、β-胡萝卜素、还原型谷胱甘肽、尿酸和胆红素。内源性和食物源性抗氧化剂的总和代表细胞外液的总抗氧化活性。与所有单独的单一化合物相比,所有不同抗氧化剂的配合为抵抗活性氧或氮自由基的攻击提供更大的保护。因此,与通过测量单个成分获得的信息相比,总的抗氧化剂能力可能会提供更多相关的生物学信息,因为它考虑了血浆和体液中所有抗氧化剂的累积作用。在体外生物测定法中监测测试化合物和提取物的抗氧化能力,该测定法使用购自Cayman Chemical(美国密歇根州安阿伯市)的抗氧化剂能力试剂盒#709001来测量测试化合物和提取物的总抗氧化能力。
简而言之,Cayman Chemical(美国密歇根州安阿伯)的抗氧化剂容量试剂盒#709001依赖于样品中的抗氧化剂抑制肌红蛋白将(2,2'-叠氮基-二-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐])氧化为·+的能力。将样品中抗氧化剂防止ABTS氧化的能力与水溶性生育酚类似物Trolox进行比较,并以Trolox摩尔当量进行定量。可以根据制造商的建议遵循该方案。经测定,绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物的组合具有Trolox的98%的抗氧化能力,橙皮苷甲基查尔酮和棕榈酰四肽-7的组合具有Trolox的47%的抗氧化能力,迷迭香叶提取物具有Trolox的52%的抗氧化能力,浮游生物提取物具有Trolox的98%的抗氧化能力。
赖氨酰氧化酶测试:现已证明,绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物的组合增加了赖氨酰氧化酶的表达。对皮肤细胞(例如表皮角质形成细胞、成纤维细胞和/或真皮内皮细胞)进行赖氨酰氧化酶测定,以确定表1所列成分刺激皮肤赖氨酰氧化酶表达的能力。赖氨酰氧化酶可以催化弹性蛋白和胶原蛋白的交联,从而为皮肤提供更具结构刚性的基质。通过增加赖氨酰氧化酶的表达,弹性蛋白和胶原蛋白的交联会增加,这对减少细纹、皱纹、皮肤松弛和/或非弹性皮肤的出现可能是有益的。已经确定,有效量的绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物的组合将赖氨酰氧化酶表达提高了89%。
层黏连蛋白刺激测试–橙皮苷甲基查尔酮和棕榈酰四肽-7的组合已显示增加了层黏连蛋白的表达。层黏连蛋白是真皮-表皮连接(DEJ)(也称为基底膜)中的主要蛋白质之一。DEJ位于真皮和表皮联结之间,形成叫做网脊的指状突出。表皮的细胞从真皮的血管中接收其养分。网脊增大暴露于这些血管和所需养分的表皮的表面积。DEJ提供两种组织区室的黏连,并控制皮肤的结构完整性。层黏连蛋白和纤连蛋白是位于DEJ中的两种结构糖蛋白。考虑到将细胞保持在一起的胶,真皮成纤维细胞分泌层黏连蛋白和纤连蛋白以帮助促进表皮细胞到DEJ的细胞内和细胞间黏连。胶原蛋白是对皮肤结构关键的一种细胞外基质蛋白。增加的胶原蛋白合成帮助改善皮肤紧致度和弹性。使用针对每种蛋白质的免疫荧光抗体,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)监测培养的人成纤维细胞中层黏连蛋白的表达。已确定橙皮苷甲基查尔酮和棕榈酰四肽-7的组合可使层黏连蛋白表达增加了+117%。
简而言之,层黏连蛋白的表达通过在含10%胎牛血清(Mediatech)的标准DMEM生长培养基中于37℃、10%CO2中,用或不用1.0%最终浓度的测试成分处理3天的亚汇合正常人成年表皮成纤维细胞(Cascade Biologics)的细胞上清液中的这些蛋白质进行监测。培养之后,在酶联免疫吸附测试(ELISA)中,使用针对层黏连蛋白的免疫荧光抗体,测定层黏连蛋白含量。将测试结果对于细胞的代谢活性进行归一化,细胞的代谢活性由3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)的生物转化来确定。
基质金属蛋白酶3和9酶活性(MMP3;MMP9)测定:迷迭香叶提取物已显示抑制MMP3和MMP9。该测定是体外基质金属蛋白酶(MMP)抑制测定。MMP是细胞外蛋白酶,凭借其广泛的底物特异性在许多正常和疾病状态中发挥作用。MMP3底物包括胶原蛋白、纤连蛋白和层黏连蛋白;而MMP9底物包括胶原蛋白VII、纤连蛋白和层黏连蛋白。使用BioMolInternational的比色药物发现试剂盒用于MMP3(AK-400)和MMP-9(AK-410),此测定法旨在使用硫肽作为发色底物(Ac-PLG-[2-巯基-4-甲基-戊酰基]-LG-OC2H5)5,6。MMP裂解位点肽键被硫肽中的硫酯键取代。MMP对该键的水解产生了巯基,该巯基与DTNB[5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸),埃尔曼试剂]反应形成2-硝基-5-硫代苯甲酸,其可通过在412nm(ε=13600M-1cm-1在pH 6.0及7以上)处的吸光度进行检测。测试迷迭香叶提取物。已确定迷迭香叶提取物抑制MMP3达40%,抑制MMP9达61%。
基质金属蛋白酶1酶活性(MMP1)测定:迷迭香叶提取物已显示抑制MMP1。这是体外基质金属蛋白酶(MMP)抑制测定。MMP是细胞外蛋白酶,凭借其广泛的底物特异性在许多正常和疾病状态中发挥作用。MMP1底物包括胶原蛋白IV。分子探针Enz/Chek明胶酶/胶原蛋白酶检测试剂盒(#E12055)利用荧光明胶底物检测MMP1蛋白酶活性。在蛋白水解切割后,显示出亮绿色的荧光,并使用荧光酶标仪对其进行监测以测量酶活性。
来自Invitrogen的Enz/Chek明胶酶/胶原蛋白酶测定试剂盒(#E12055)设计用于测量MMP1酶活性的体外测定。测试迷迭香叶提取物。该测定依赖于纯化的MMP1酶降解荧光明胶底物的能力。底物被MMP1特异性切割后,就会显示出亮绿色的荧光,可以使用荧光酶标仪进行监测。在存在或不存在纯化的酶和底物的情况下孵育测试材料,以确定其蛋白酶抑制剂的能力。已确定迷迭香叶提取物抑制MMP1达40%。
脂氧合酶(LO)测定:体外脂氧合酶(LO)抑制测定。迷迭香叶提取物已显示抑制脂氧合酶。LO是非血红素含铁双加氧酶,其催化分子氧加到脂肪酸中。亚油酸酯和花生四烯酸酯是植物和动物中LO的主要底物。然后可以将花生四烯酸转化为羟基二十碳四烯酸(HEAT)酸衍生物,随后将其转化为有效的炎症介质白三烯。该测定通过测量从脂氧合酶(5-LO、12-LO或15-LO)与花生四烯酸的孵育中产生的氢过氧化物,提供了一种筛选脂氧合酶抑制剂的准确而便捷的方法。使用比色法LO抑制剂筛选试剂盒(#760700,Cayman Chemical)确定迷迭香叶提取物抑制酶活性的能力。可以将纯化的15-脂氧合酶和迷迭香叶提取物在测定缓冲液中混合,并在室温下振摇孵育10分钟。孵育后,加入花生四烯酸以引发反应,并将混合物在室温下再孵育10分钟。加入比色底物以终止催化作用,并通过在490nm下的荧光板读数评估颜色进程。与未处理的对照相比,计算了对脂氧合酶活性的抑制百分数,以确定迷迭香叶提取物抑制纯化酶活性的能力。已确定迷迭香叶提取物抑制脂氧合酶达54%。
抑制肿瘤坏死因子α(TNF-α)-迷迭香叶提取物已显示可抑制角质形成细胞中TNF-α的产生。TNF-α是TNF超家族的原型配体。它是一种多效性细胞因子,在炎症中起关键作用。其表达的增加与促炎活性的上调有关。用于分析迷迭香叶提取物作用的生物测定法采用分光光度法测量,测量反映TNF-α的存在和细胞生存能力。已确定迷迭香叶提取物抑制角质形成细胞中TNF-α的产生达85%。
在37℃下、5%CO2中、EpiLife标准生长培养基(Cascade Biologics)中培养的亚汇合正常人成年角质形成细胞(Cascade Biologics),用佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA,10ng/ml,Sigma Chemical,#P1585-1MG)和迷迭香叶提取物(经处理的样品)或不进行其他处理(未经处理的样品)处理6小时。PMA会导致TNF-α分泌急剧增加,并在处理后6小时达到峰值。孵育后,收集细胞培养基,并使用R&D Systems(#DTA00C)的夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)定量TNF-α的分泌量。
简而言之,ELISA测定采用定量三明治酶免疫测定技术,由此将对TNF-α特异的单克隆抗体预先包被在微板上。将标准液以及处理过的和未处理过的样品吸移到微孔板孔中,以使存在的任何TNF-α被固定的抗体结合。洗去所有未结合的物质后,将对TNF-α特异性的酶联多克隆抗体添加到孔中。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后,添加底物溶液到孔中,使得颜色以与最初步骤中结合的TNF-α的量成比例的显现。在特定的时间停止颜色显现,颜色的强度使用酶标仪在450nm处测量。
细胞因子阵列(包括IL-6、IL-8和FAAH):迷迭香叶提取物已显示抑制IL-6、IL-8和FAAH产生。Escin已被证明抑制FAAH的产生。迷迭香叶提取物对IL-6、IL-8和FAAH产生的抑制作用以及七叶皂素对FAAH产生的抑制作用是通过蛋白质检测测定法确定的,该测定法使用针对多种细胞因子的生物素化抗体来检测抗体。已确定迷迭香叶提取物抑制IL-6的产生达83%、抑制IL-8的产生达98%和抑制FAAH的产生达50%。已确定七叶皂素抑制FAAH的产生达50%。
简而言之,将人表皮角质形成细胞培养至70%至80%汇合。吸出板中的培养基,并加入0.025%的胰蛋白酶/EDTA。当细胞变成圆形时,轻轻敲打培养皿以释放细胞。从培养皿中取出含有胰蛋白酶/EDTA的细胞并中和。将细胞以180x g离心5分钟。细胞形成沉淀并吸出上清液。将所得沉淀重悬于EpiLifeTM培养基(Cascade Biologics)中。将细胞以约10%至20%汇合度接种在6孔板中。细胞汇合约80%后,吸出培养基,并将1.0ml的EpiLifeTM以及佛波醇13-肉豆蔻酸酯12-乙酸酯(“PMA”)(一种已知的炎症诱导剂)和测试组合物稀释液添加到两个重复孔中(即将1.0%(100μl的100X储备液)和0.1%(10μl的100X储备液)测试组合物稀释至1ml EpiLife生长培养基的最终体积)。轻轻旋转培养基以确保充分混合。此外,在有或没有额外PMA的情况下,将1.0ml的EpiLifeTM添加到对照孔中。给药后,将板在37±10℃和5.0±1%CO2下孵育约5小时。孵育5小时后,将所有培养基收集在锥形管中,并于-70℃冷冻,然后将冷冻的培养基放在干冰上运输。
在分析当天,将16垫杂交室连接到16垫FAST载玻片上,该载玻片一式三份与16种抗细胞因子抗体(包括IL-6、IL-8和FAAH)和实验对照(Whatman BioSciences)一起排列,然后将其放入FASTFrame(每帧4片)中进行处理。使用70ml S&S蛋白质阵列封闭缓冲液(Whatman Schleicher和Scheull)在室温下将阵列封闭15分钟。除去封闭缓冲液,并将70ml的每种上清液样品加入每个阵列。将阵列在室温温和搅拌下孵育3小时。将阵列用TBS-T洗涤3次。用70ml的抗体混合物处理阵列,该混合物包含一种生物素化的抗体,该抗体对应于每种阵列的捕获抗体。将阵列在室温温和搅拌下孵育1小时。将阵列用TBS-T洗涤3次。将阵列用70ml含有链霉亲和素-Cy5缀合物的溶液在室温温和搅拌下孵育1小时。将阵列用TBS-T洗涤3次,在去离子水中快速冲洗,然后干燥。
将玻片在Perkin-Elmer ScanArray 4000共聚焦荧光成像系统中成像。保存阵列图像并使用Imaging Research ArrayVision软件进行分析。简而言之,通过减去背景信号来确定光点强度。将每种样品条件下的斑点重复结果取平均值,然后将其与适当的对照进行比较。
抑制弹性蛋白酶活性-迷迭香叶提取物已显示出抑制弹性蛋白酶活性。弹性蛋白酶是降解弹性蛋白的酶。迷迭香叶提取物对弹性蛋白酶活性的抑制作用是使用来自Molecular Probes(Eugene,Oregon USA)的弹性蛋白酶含量测定(Kit#E-12056)确定的。该试剂盒用作体外酶抑制测定法,用于测量对弹性蛋白酶活性的抑制。已确定迷迭香叶提取物抑制弹性蛋白酶活性达54%。
简而言之,EnzChek试剂盒包含可溶的牛颈韧带弹性蛋白,并用染料标记,从而使缀合物的荧光淬灭。非荧光牛颈韧带弹性蛋白底物被弹性蛋白酶或其他蛋白酶消化,产生高荧光片段。用荧光酶标仪监测荧光的增加。来自弹性蛋白底物的消化产物在约505nm具有最大吸收,在约515nm具有最大荧光发射。迷迭香叶提取物处理或不进行任何处理的消化反应,以确定对弹性蛋白酶的抑制作用。作为阳性对照,将N-甲氧基琥珀酰基-Ala-Ala-Pro-Val-氯甲基酮用作弹性蛋白酶活性的选择性集体抑制剂。
B16色素沉着分析-七叶皂素已显示能抑制黑色素生成。黑色素生成是黑素细胞产生黑色素的过程,黑色素是一种天然产生的给予皮肤、毛发和眼睛颜色的色素。抑制黑色素生成有益于预防皮肤变黑和减轻与老化有关的黑斑。通过测量黑色素分泌,在有或没有七叶皂素的情况下确定B16细胞中的黑色素生成。已确定七叶皂素抑制黑色素生成达21.25%。
使用永生化的小鼠黑色素瘤细胞系B16-F1黑素细胞(ATCC)确定黑色素生成。该测定的终点是分光光度法测定黑色素的产生和细胞活力。将B16-F1黑色素细胞在含10%胎牛血清的标准DMEM生长培养基(Mediatech)中于37℃、10%CO2中培养,然后用或不用烟酰胺处理6天。孵育后,通过在405nm处的吸光度测量黑色素的分泌,并定量细胞活力。
实施例3
(组合物的临床功效)
抗衰老和黑眼圈研究–表1和/或表2中描述的组合物已经显示出改善了志愿对象的眼睑下垂、增加了皮肤的紧致度、减少了眼下浮肿、减少了眼部周围的黑眼圈以及减少了眼部的纹路和皱纹。这项研究的目的是评估表1和表2的组合物在眼部区域的老化/光老化皮肤上的有效性。所有对象均在35岁至65岁年龄段。将该组合物每天两次施用于每个对象的眼部区域,持续12周。还提供了补充清洁剂和SPF产品。在使用组合物的4周、8周、10周和/或12周后对对象进行评估。表4和表5总结了临床结果。
表4改善皮肤状况的专门小组成员的百分比
4周 | 8周 | 10周 | 12周 | |
纹路 | 22% | 33% | -- | 44% |
紧致度 | 78% | 96% | -- | 81% |
黑眼圈 | 46% | 54% | 54% | -- |
表5状况改善的百分比
4周 | 8周 | 10周 | 12周 | |
纹路 | NS* | 2% | -- | 3% |
紧致度 | 6% | 10% | -- | 10% |
黑眼圈 | 7% | 11% | 14% | -- |
*NS表示无统计学意义
结果显示,在4周后,有22%的对象眼部周围的纹路减少,有7%的对象的眼睑下垂得到改善,而78%的对象眼部周围的皮肤紧致度有所改善。在8周后,33%的对象的眼部纹路减少,4%的对象的眼睑下垂减少,而96%的对象的皮肤紧致度得到改善。在12周后,44%的对象的眼部周围的纹路减少,4%的对象的眼睑下垂减少,而81%的对象的皮肤紧致度得到改善。
总体而言,在8周和12周后,对象的纹路减少分别约为2%和3%。4周、8周和12周后,对象的皮肤紧致度分别提高了6%、10%和10%。
对于黑眼圈研究,在4周、8周和10周时对对象进行评估。结果表明,在使用组合物4周后,有46%的对象眼部周围的黑眼圈减少。8周后,有54%的对象眼部周围的黑眼圈减少。10周后,显示眼部周围黑眼圈减少的对象比例保持在54%。总体而言,在4周后,对象眼部周围的黑眼圈减少了大约7%。在8周后,对象眼部周围的黑眼圈减少了大约11%。在10周后,对象眼部周围的黑眼圈减少了大约14%。在局部用组合物的临床研究中,使用临床分级技术对皮肤细纹进行了评估。评估可以由两个临床医师独立进行并进行平均。皮肤紧致度用Hargens Ballistometer进行测量,Hargens Ballistometer是一种通过在皮肤上落下一个小物体并记录前两个反弹峰来评估皮肤弹性和紧致度的装置。Ballistometry是使用相对钝的探头(4平方毫米-接触面积)的小的轻量探测器。探测器轻轻地穿透进入皮肤,导致依赖于皮肤外层性质的测量,皮肤外层包括角质层和外表皮以及部分真皮层。
皮肤水分/水合试验:表1和/或表2中描述的组合物已显示改善皮肤保湿。皮肤水分/水合的益处可以通过使用以Nova Dermal Phase Meter进行的阻抗测量进行测量。阻抗计测量皮肤水分含量的变化。皮肤外层具有不同的电性质。当皮肤干燥时,其导电很差。当其变得更加含水时,结果是导电性增加。因此,皮肤阻抗(与导电性有关)的变化用于评价皮肤水合的变化。装置可以根据仪器说明针对每个测试日进行校准。还可以对温度和相对湿度进行标记。对象可以进行如下评估:测量前其可以在具有确定湿度(例如30%至50%)和温度(例如68℃至72℃)的室内进行平衡。在脸的每一侧进行三个独立的阻抗测定,并对其进行记录和平均。阻抗计使用T5设定,其对施用到脸上每五秒的阻抗值进行平均。变化可以以统计方差和显著性进行报告。分析本说明书公开的每种活性成分、成分组合中的任一种或具有所述组合的组合物。表6显示了使用表1和/或表2中所述的组合物的全天保湿百分比提高(在施用组合物后8小时和12小时立即测试)。
表6全天保湿效果改善百分比
立刻 | 8小时 | 12小时 | |
改善保湿 | 21% | 12% | 11% |
总体而言,在施用表1和/或表2所示的组合物之后,对象立即表现出约21%的皮肤保湿改善。在8小时和12小时后,对象的保湿效果分别改善了12%和11%。
实施例4
(其他测定)
可用于确定在整个说明书和权利要求书中公开的成分的任一种或者成分的任意组合或者具有成分的所述组合的组合物的功效的测定可以通过本领域普通技术人员已知的方法来确定。以下是可以在本发明的上下文中使用的非限制性测定。应该认识到,可以使用其他测试程序,包括例如客观和主观程序。
胶原蛋白刺激测定:胶原蛋白是对皮肤结构关键的一种细胞外基质蛋白。增加的胶原蛋白合成帮助改善皮肤紧致度和弹性。该生物测定可用于检验本说明书公开的活性成分、成分组合或具有所述组合的组合物的任一种对于通过人表皮成纤维细胞产生前胶原肽(胶原蛋白的前体)的作用。该测定的终点是反映前胶原肽的存在和细胞活性的分光光度测量。该测定采用定量的三明治酶免疫分析技术,其中将对前胶原肽特异的单克隆抗体预先涂覆在微孔板上。可将标准品和样品移液到孔中,存在的所有前胶原肽由固定化的抗体结合。冲走所有未结合的物质后,可将对前胶原肽特异的酶联多克隆抗体添加到孔中。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后,可添加底物溶液到孔中,使用微孔板测定仪在450nm处检测的颜色显现与最初步骤中结合的前胶原肽的量成比例。可以停止颜色显现,并且可以测量颜色的强度。为了生成样品和对照,在含有10%胎牛血清(Mediatech)的标准DMEM生长培养基中于37℃在10%CO2中培养亚汇合正常人成年表皮成纤维细胞(CascadeBiologics),其可以用说明书中公开的所述成分的组合或具有所述组合的组合物的每种处理3天。培育之后,可收集细胞培养基,并使用来自Takara(#MK101)的三明治酶联免疫吸附分析(ELISA)定量前胶原肽的分泌量。
层黏连蛋白刺激测定:层黏连蛋白和纤连蛋白是真皮-表皮连接(DEJ)(也被称为基膜)中主要的蛋白质。DEJ位于真皮和表皮联结之间,形成叫做网脊的指状突出。表皮的细胞从真皮的血管中接收其养分。网脊增大暴露于这些血管和所需养分的表皮的表面积。DEJ提供两种组织区室的黏连,并控制皮肤的结构完整性。层黏连蛋白和纤连蛋白是位于DEJ中的两种结构糖蛋白。考虑到将细胞保持在一起的胶,真皮成纤维细胞分泌层黏连蛋白和纤连蛋白以帮助促进表皮细胞到DEJ的细胞内和细胞间黏连。层黏连蛋白和纤连蛋白的分泌可以通过定量在培养的人成纤维细胞的细胞上清液中的层黏连蛋白和纤连蛋白来监测,所述培养的人成纤维细胞用含或不含1.0%最终浓度的测试成分的培养基处理3天。培养之后,在酶联免疫吸附测试(ELISA)中,使用针对层黏连蛋白和纤连蛋白的免疫荧光抗体,可以测定层黏连蛋白和纤连蛋白的含量。对于细胞的代谢活性,将测试结果现对于细胞的代谢活性归一化,细胞的代谢活性由3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)的生物转化来确定。
ORAC试验:还可以通过测量成分或组合物的抗氧化活性来分析本说明书公开的活性成分、成分组合或具有所述组合的组合物的任一种的氧自由基吸收(或吸收率)能力(ORAC)。抗氧化活性说明减少氧化试剂(氧化剂)的能力。该试验定量抑制氧化剂,例如已知导致损害细胞(例如皮肤细胞)的氧自由基的活动的程度及所需时间。可通过本领域普通技术人员已知的方法(参见美国专利公布第2004/0109905号和第2005/0163880号;以及可商购获得的试剂盒例如Zen-Bio ORAC抗氧化分析试剂盒(#AOX-2))来确定本说明书公开的活性成分、成分组合或具有所述组合的组合物的任一种的ORAC值。Zen-Bio ORAC抗氧化分析试剂盒测量了由于AAPH(2,2'-偶氮双-2-甲基丙脒二盐酸盐)分解形成过氧自由基,荧光素荧光随时间的损失。Trolox是一种水溶性维生素E,以剂量依赖的方式作为抑制荧光素衰变的阳性对照。
蘑菇酪氨酸酶活性试验:在哺乳动物细胞中,酪氨酸酶在来自酪氨酸(和来自多巴色素聚合)的黑色素的多步生物合成中催化两个步骤。酪氨酸酶位于黑素细胞中,并产生赋予皮肤、毛发和眼睛颜色的黑色素(芳香族醌化合物)。在存在或不存在本说明书公开的每种活性成分、任意成分组合或具有所述组合的组合物的情况下,纯化的蘑菇酪氨酸酶(Sigma)可以与其底物L-Dopa(Fisher)一起孵育。色素形成可通过在490nm的比色板读数进行评估。蘑菇酪氨酸酶活性的抑制百分比可以通过与未经处理的对照比较进行计算,以确定测试成分或其组合抑制纯化的酶活性的能力。测试提取物的抑制与曲酸(Sigma)的抑制进行比较。
环氧合酶(COX)试验:体外环氧合酶-1和环氧合酶-2(COX-1、COX-2)抑制试验。COX是一种展现环氧合酶和过氧化物酶两种活性的双功能酶。环氧合酶活性将花生四烯酸转换为过氧化氢内过氧化物(前列腺素G2;PGG2),过氧化物酶组分将内过氧化物(前列腺素H2;PGH2)还原为相应的醇,前列腺素、凝血烷和环前列腺素的前体。该COX抑制剂筛选分析测量环氧合酶的过氧化物酶组分。通过监测氧化的N,N,N',N'-四甲基-对苯二胺(TMPD)的出现比色地分析过氧化物酶活性。该抑制筛选分析包括COX-1和COX-2酶两者,以筛选同工酶特异性抑制剂。比色的COX(绵羊)抑制剂筛选分析(#760111,Cayman Chemical)可以用于分析说明书中所公开的活性成分、任意一种成分的组合、或具有所述组合的组合物对纯化的环氧合酶(COX-1或COX-2)活性的效果。根据制造商的说明,纯化的酶、血红素和测试提取物可以在分析缓冲液中混合,并在室温下摇动孵育15分钟。孵育之后,可以加入花生四烯酸和比色底物开始反应。颜色变化可以通过在590nm的比色板读数进行评估。COX-1或COX-2活性的抑制百分比可以通过与未经处理的对照比较进行计算,以确定测试提取物抑制纯化的酶活性的能力。
油控制试验:用于测量皮脂腺中皮脂分泌的减少和/或皮脂腺中皮脂产生的减少的试验可以通过使用本领域普通技术人员已知的标准技术进行分析。在一个例子中,可以使用前额。本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物可以每天一次或两次地施用到前额的一部分持续设定的天数(例如1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天或多于14天),而前额的其他部分不用组合物处理。在设定的天数期满后,皮脂分泌可以通过将细吸油纸施用到经处理的和未经处理的前额皮肤上进行分析。这是通过首先用湿的和干的布从经处理的和未经处理的区域除去所有皮脂完成的。然后吸油纸施用到经处理的和未经处理的前额区域,可以绕着前额放置橡皮筋以轻轻地将吸油纸压到皮肤上。2小时后,可以移去吸油纸,使其干燥,然后进行透照。较深的吸油纸对应于较多的皮脂分泌(或较浅的吸油纸对应于减少的皮脂分泌)。
红斑试验:测量皮肤发红减少的试验可以使用Minolta Chromometer进行评估。皮肤红斑可以通过在对象前臂施用0.2%的十二烷基硫酸钠溶液来引发。该区域用封闭的贴片保护24小时。24小时后,除去贴片,可以使用Minolta Chroma Meter的a*值对刺激引发的发红进行评估。a*值测量肤色在红色区域的变化。在阅读后,立即用说明书中公开的活性成分、任意一种成分的组合、或具有所述组合的组合物来处理该区域。可以定期进行重复测量以确定制剂减少发红和刺激的能力。
皮肤清透度和雀斑与老年斑减少的试验:皮肤清透度和雀斑与老年斑减少使用Minolta Chroma Meter进行评价。肤色改变可以使用Minolta Chroma Meter的a*值进行评估以确定由于产品处理引起刺激的可能性。a*值测量肤色在红色区域的变化。这用于确定说明书中公开的每种活性成分、任意一种成分的组合、或具有所述组合的组合物是否诱导刺激。可以在脸的每一侧上进行测量并进行平均,作为左脸和右脸的值。皮肤清透度也可以使用Minolta Meter进行测量。测量是Minolta Meter的a*、b、和L值的组合,并与皮肤的亮度有关,而且非常好的对应皮肤的光滑度和水合。皮肤测定如上进行。在一个非限制性方面,皮肤清透度可以描述为L/C,其中C是色度并定义为(a2+b2)1/2。
皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和肤色分析:皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和肤色可以用临床评分技术进行评估。例如,皮肤干燥的临床评分可以通过五点标准Kligman量表进行确定:(0)皮肤是柔软和湿润的;(1)皮肤呈现正常而没有可见的干燥;(2)皮肤触摸感觉轻微干燥而没有可见的剥落;(3)皮肤感觉干燥、坚韧并且具有一些鳞屑的发白外观;以及(4)皮肤感觉非常干燥、粗糙并且具有鳞屑的发白外观。评估可以由两个临床医师独立进行并进行平均。
肤色临床评分试验:肤色的临床评分可以通过十点模拟数值量表实施:(10)平滑的均匀的皮肤、粉红棕色的颜色。手持放大镜检查时没有暗的、发红的或有鳞的斑块。皮肤的微观纹理摸上去非常均匀;(7)不用放大镜观察到均匀的肤色。没有鳞状区域,但是有由于色素淀积或红斑引起的轻微变色。没有直径大于1cm的变色;(4)轻易地注意到皮肤变色和不均匀的纹理。轻微有鳞。一些区域摸上去粗糙的皮肤;以及(1)不均匀的皮肤着色和纹理。多个区域有鳞和变色,色素减退型、发红的或暗斑。大面积的直径超过1cm的不均匀着色。评估由两个临床医师独立进行并进行平均。
皮肤平滑度的临床评分试验:皮肤光滑度的临床评分可以通过一个十点模拟数值刻度进行分析:(10)光滑的,皮肤是湿润的和闪光的,手指划过表面时没有阻力;(7)一定程度光滑的,微小的阻力;(4)粗糙的、可见地改变的,摩擦时有摩擦力;以及(1)粗糙的、片状的、不均匀的表面。评估由两个临床医师独立进行并进行平均。
用Packman等人(1978)公开的方法进行的皮肤光滑度和皱纹减少试验:皮肤光滑度和皱纹的减少也可以通过使用Packman等人(1978)公开的方法进行可视化评估。例如,每名对象就诊时,对每名对象的表面面线(SFL)的深度、浅度和总数量都可以进行认真的评分和记录。通过将数量因子乘以深度/宽度/长度因子得到数字的分数。获得眼睛区域和嘴巴区域(左侧和右侧)的分数,加到一起作为总的皱纹分数。
用Hargens Ballistometer进行的皮肤紧致度试验:皮肤紧致度可以用HargensBallistometer进行测量,Hargens Ballistometer是一种通过在皮肤上落下一个小物体并记录前两个反弹峰来评估皮肤弹性和紧致度的装置。Ballistometry是使用相对钝的探头(4平方毫米-接触面积)的小的轻量探测器。探测器轻轻地穿透进入皮肤,导致依赖于皮肤外层性质的测量,皮肤外层包括角质层和外表皮以及部分真皮层。
用Gas Bearing Electrodynamometer进行的皮肤柔软度/柔韧性试验:皮肤柔软度/柔韧性可以使用Gas Bearing Electrodynamometer进行评估,Gas BearingElectrodynamometer是一种测量皮肤压力/张力性质的仪器。皮肤的黏弹性与皮肤保湿有关。可以通过用双面胶将探测器附着在皮肤表面实现对脸颊区域预定位点的测量。大约3.5gm的力平行施加于皮肤表面,精确地测量皮肤的位移。然后可以计算皮肤的柔韧性,并表达为DSR(动态弹簧刚度,以gm/mm计)。
用复制品进行的纹路和皱纹显现的试验:皮肤上纹路和皱纹的显现可以使用复制品进行评估,复制品是皮肤表面的印模。可以使用如硅橡胶的材料。复制品可以通过图像分析进行分析。纹路和皱纹可见性的变化可以通过利用硅复制品形成对象的脸并用计算机图像分析系统分析复制品图像进行客观地定量。复制品可以从眼部区域和颈部区域获得,并用数码相机以低照明入射角进行拍摄。数字图像可以用图像处理程序进行分析并确定复制品被皱纹和细纹覆盖的区域。
用表面光度仪/记录针的方法进行的皮肤表面轮廓分析:皮肤表面轮廓可以通过使用表面光度仪/记录针的方法进行测量。这包括闪光或拖动记录针穿过复制品表面。记录针的垂直位移通过距离传感器可以录入计算机,在扫描固定长度的复制品后,皮肤轮廓的截面分析可以以二维曲面产生。该扫描可以沿着固定的轴重复任意次数以产生模拟的皮肤3-D图像。使用记录针技术可以获得十个随机的复制品截面,并组合产生平均值。感兴趣的值包括Ra,其为通过积分相对于平局轮廓高度的轮廓高度计算得到的所有粗糙度(高度)值的算术平均数。Rt,其为最高峰和最低谷之间的最大垂直距离,以及Rz,其为平均峰振幅减去平均峰高度。数值以用mm为单位标定的数值给出。设备应在每次使用前通过扫描已知数值的金属标准物进行归一化。Ra值可以通过下式计算:Ra=归一化粗糙度;lm=横向(扫描)长度;以及y=轮廓位置相对于平均轮廓高度的绝对值(x-轴)。
MELANODERMTM试验:在其他非限制性方面,可以通过使用皮肤类似物例如MELANODERMTM来评价说明书中公开的每种活性成分、任意一种成分的组合、或具有所述组合的组合物的功效。黑素细胞,皮肤类似物中细胞的一种,在暴露于L-二羟苯基丙氨酸(L-DOPA)(黑色素的前体)时明确地染色。皮肤类似物MELANODERMTM可以用包含说明书中公开的每种活性成分、任意一种成分的组合、或具有所述组合的组合物的各种主要成分或作为对照的单独成分来处理。或者,未经处理的皮肤类似物样品可以用作对照物。
丝聚合蛋白的产生:可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物导致的角质形成细胞中丝聚合蛋白产生的变化。丝聚合蛋白是皮肤中天然保湿因子(NMF)的前体。增加的NMF提高了皮肤中的水分含量。使用分析角质形成细胞裂解物中丝聚合蛋白浓度的生物测定法来测定经处理和未经处理的角质形成细胞中丝聚合蛋白的产生。可用于定量丝聚合蛋白产量的生物测定法的一个非限制性实例是SimonTM蛋白质印迹测定法。对于样品,使正常的人表皮角化细胞(NHEK)在来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的含有钙的EPI 200–Mattek生长培养基中生长。处理之前,NHEK在37℃、5%的CO2下的生长培养基中孵育过夜。然后将NHEK在含有1%测试化合物/提取物的生长培养基中或不含化合物/提取物的生长培养基(阴性对照)中孵育24小时至36小时。然后,洗涤NHEK,收集并储存在冰上或更冷的地方,直到使用裂解缓冲液在冰上裂解并超声处理。测定样品的蛋白质浓度并将其用于使样品归一化。将裂解物存储在-80℃下直至用于生物测定。
SimonTM蛋白质印迹生物测定法采用定量蛋白质印迹免疫测定技术,该技术使用了针对丝聚合蛋白的特异性抗体来定量检测测试样品中的丝聚合蛋白。将细胞试样裂解并针对蛋白质浓度进行归一化。然后加载归一化的样品和分子量标准物,并使用毛细管电泳在变性的蛋白质分离凝胶上运行。将凝胶中的蛋白质固定并使用对丝聚合蛋白特异的第一抗体进行免疫学检测。然后,用结合第一抗体的酶联检测抗体对固定的蛋白质进行免疫检测。然后,将化学发光底物溶液加入到固定的蛋白质中,以允许与固定化中结合的丝聚合蛋白的量成比例的化学发光显影。在特定的时间停止化学发光显影,测量化学发光信号的强度,并与阳性对照和阴性对照进行比较。
闭合蛋白的产生:可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物导致的角质形成细胞中闭合蛋白产生的变化。闭合蛋白是对于紧密连结的形成和皮肤水分屏障功能重要的蛋白质。使用生物测定法来测定经处理和未经处理的角质形成细胞中闭合蛋白的产生,该生物测定法分析了角质形成细胞裂解物中的闭合蛋白浓度。使用SIMONTM免疫印迹方案进行该生物分析。对于样品,来自Life Technologies(C-005-5C)的成年人表皮角质形成细胞(HEKa)在37℃和5%的CO2下,在含有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙、并补充有来自LifeTechnologies(S-101-5)的角质细胞生长补充剂(HKGS)的Epilife生长培养基中生长24小时。然后在使用测试化合物/提取物、无化合物/提取物用于阴性对照、或使用1mM的CaCl2用于阳性对照的生长培养基中培养HEKa持续24小时至48小时。然后,洗涤HEKa细胞,收集并储存在冰上或更冷的地方,直到使用裂解缓冲液在冰上裂解并超声处理。测定样品的蛋白质浓度并将其用于使样品归一化。将细胞裂解物存储在-80℃下直至用于生物测定。
SIMONTM免疫印迹生物分析使用定量的免疫印迹免疫分析技术,该技术使用了对闭合蛋白特异性的抗体来定量检测试样中的闭合蛋白。如上所述将细胞试样裂解并针对蛋白质浓度进行归一化。加载归一化的样品和分子量标准物,并使用毛细管电泳在变性的蛋白质分离凝胶上运行。然后,然后将凝胶中的蛋白质固定,并使用针对闭合蛋白特异性的第一抗体进行免疫杂交。用结合第一抗体的酶联检测抗体对固定的蛋白质进行免疫检测。然后,将化学发光底物溶液加入到固定的蛋白质中,以允许与固定化中结合的闭合蛋白聚糖的量成比例的化学发光显影。在特定的时间停止化学发光显影,测量化学发光信号的强度,并与阳性对照和阴性对照进行比较。
角质形成细胞单层渗透性:可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的角质形成细胞单层的渗透性变化。角质形成细胞单层的渗透性是皮肤屏障的完整性的量度。作为非限制性实例,可使用Millipore(ECM642)的体外血管渗漏性试验测定在经处理和未经处理的角质形成细胞中的角质形成细胞单层的渗透性。该试验分析了内皮细胞吸附、输送和渗透。简略来说,来自Life Technologies(C-005-5C)的成人表皮角质形成细胞可被接种到在收集孔内的多孔胶原蛋白涂覆的膜上。将角质形成细胞在Epilife生长培养基中在37℃下和5%的CO2中培养24小时,Epilife生长培养基含有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙,补充来自Life Technologies(S-101-5)的Keratinocyte Growth Supplement(HKGS)。培养时间使得细胞形成单层并封闭膜孔。然后将培养基替换成含有(测试样品)或不含有(未经处理的对照)测试化合物/提取物的新鲜的培养基,角质形成细胞在37℃下和5%的CO2中培养另外48小时。在存在/不存在测试化合物/提取物的培养之后,为了确定角质形成细胞单层的渗透性,培养基被替换成含有高分子量异硫氰酸荧光素(FITC)-Dextran的新鲜的培养基,将角质形成细胞在37℃下和5%的CO2中培养另外4小时。在4小时的培养期间,FITC可以与单层膜渗透性成比例的速率穿过角质形成细胞单层和多孔膜进入收集孔。在4小时的培养之后,可确定细胞活性和收集孔中FITC的含量。对于FITC含量,收集孔中的培养基被收集,并且在520nm处激发时在480nm(Em)处测定培养基的荧光。与未处理的对照相比,渗透性百分比和变化百分比可以通过以下等式确定:渗透率百分比=((测试样品的平均Ex/Em)/未经处理的对照的平均Ex/Em)*100;变化百分比=测试样品的渗透率百分比-未经处理的对照的渗透率百分比。
透明质酸的产生:可测定在人真皮成纤维细胞中由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的透明质酸产生的变化。HA是一种与基质结构的稳定性有关的多糖,其还与向组织和细胞提供膨压有关。作为一个非限制性实例,可使用来自R&D Systems的Hyaluronan DuoSet ELISA试剂盒(DY3614)确定在经处理和未经处理的成人真皮成纤维(HDFa)细胞中的HA的产生。在该试验中,对于试样的产生,在处理之前,在37℃和10%CO2下在饥饿培养基中(在Dulbecco改良Eagle培养基中含0.15%牛胎儿血清和1%青霉素链霉素溶液)培养由Cascade Biologics获得的亚汇合的HDFa细胞(C-13-5C)72小时。之后使用测试化合物、阳性对照(来自Sigma-Aldrich(P1585)的佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯和来自Sigma-Aldrich的衍生自生长因子的血小板(P3201))或无添加对照用新鲜的饥饿培养基培养该细胞24小时。然后收集培养基并在-80℃下冷冻直至在ELISA试验中使用。
简而言之,该ELISA分析采用定量的三明治酶免疫分析技术,其中对HA特异的捕获抗体可以预先涂覆在微孔板上。将标准品、来自经处理的细胞和未经处理的细胞的培养基移液至微孔板,以使存在的任何HA被固定化抗体结合。冲走所有未结合的物质后,添加对HA特异的酶联检测抗体到孔中。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后,添加底物溶液到孔中,使得颜色能够与最初步骤中结合的HA的量成比例的显现。在特定的时间停止颜色显现,颜色的强度可以使用酶标仪在450nm处测量。
透明质酸酶活性的抑制:可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的透明质酸酶活性的变化。透明质酸酶是分解HA的酶。HA是一种与基质结构的稳定性有关的多糖,其还与向组织和细胞提供膨压有关。作为非限制性实例,可以使用修改源自Sigma-Aldrich方案#EC 3.2.1.35的体外方案测定透明质酸酶活性。简略来说,向含有测试化合物或对照的微孔板反应孔中添加来自Sigma-Aldrich的1-S型透明质酸(H3506)。可使用鞣酸作为阳性对照抑制剂,对于对照的酶不添加测试化合物,可使用含有测试化合物或并没有透明质酸酶的阳性对照的孔作为背景阴性对照。在底物(HA)的添加之前,孔在37℃下培养10分钟。添加底物,反应在37℃下培养45分钟。然后,将每个反应溶液的一部分转移至乙酸钠和乙酸的pH为3.75的溶液中并轻轻混合,以停止该部分反应(停止的孔)。在将一部分反应溶液加入到停止的孔中之后,停止的孔和反应孔应该都含有相同体积的溶液。反应孔和停止的孔均在室温下培养10分钟。然后测量反应孔和停止的孔在600nm处的吸光度。抑制可以使用以下公式来计算:抑制剂(或对照)活性=(在600nm处的抑制剂停止的孔吸光度-在600nm处的抑制剂反应孔吸光度);初始活性=在600nm处的对照酶吸光度;抑制百分数=[(初始活性/抑制剂活性)*100]-100。
过氧化物酶体增殖物-激活的受体γ(PPAR-γ)的活性:可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的PPAR-γ活性的变化。PPAR-γ是一种对皮脂产生至关重要的受体。作为非限制性实例,可使用分析测试化合物或组合物抑制配体结合的能力的生物测试测定PPAR-γ的活性。简略来说,可以使用荧光的小分子pan-PPAR配体,由Life Technologies(PV4894)获得的FLUORMONETM Pan-PPAR Green,来确定测试的化合物或组合物是否能够抑制配体与PPAR-γ的结合。样品孔含有PPAR-γ和荧光配体和测试化合物或组合物(测试);参考抑制剂;罗格列酮(阳性对照);或者没有测试化合物(阴性对照)。孔被培养设定的一段时间以使得配体有机会与PPAR-γ结合。然后可测定每个样品孔的荧光偏振,并与阴性对照孔比较以确定测试化合物或组合物的抑制百分比。
内皮管形成:内皮管的形成与血管生成和微血管毛细血管的形成有关。毛细血管的形成和血管生成可能会导致皮肤发红和酒渣鼻。在存在或不存在测试提取物和化合物的情况下,可以使用毛细管破坏试验与预先形成的原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在细胞培养系统中测定内皮细胞形成管的能力。
简而言之,HUVEC在细胞外基质上进行体外培养,刺激内皮细胞的附着和管状形态发生,形成毛细血管样腔结构。这些体外形成的毛细管在许多方面类似于人血管的毛细管。毛细管分析就是基于这种现象,并用于评估潜在的脉管靶向剂。
HUVEC培养物在5%CO2、37℃下的细胞培养箱中生长。HUVEC的完全生长培养基是内皮细胞基础培养基(EBM),其中补充了2%的胎牛血清(FBS)、12μg/ml的牛脑提取物、1μg/ml的氢化可的松和1μg/ml的GA-1000(庆大霉素-两性霉素)。在第3和第8代之间的HUVEC培养物可用于所有测定实验。
HUVEC用荧光素钙黄绿素AM预先标记,并以其完全生长培养基接种到细胞外基质包被的96孔培养板中。在大约四个小时的形态发生过程后,应形成内皮毛细管。然后,将设计剂量为50μl的测试试剂作为处理条件加到形成的毛细管培养物中。可以将未经处理的对照添加到测试试剂的载剂中。一种浓度的FDA批准的抗血管生成药物Sutent可以作为分析性能对照。处理大约六个小时后,通过显微镜检查,成像对每个孔中的内皮细管形态进行成像,并可以定量分析处理条件下的毛细血管破坏活性。每个测试条件都可以在包括对照在内的孔中重复进行。
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本文所公开和要求保护的所有组合物和/或方法可以根据本公开无需过度实验即可制成和实现。尽管本发明所述的组合物和方法已经按照优选实施方案进行了描述,对于本领域技术人员而言显而易见的是,可以对所述组合物和/或方法以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序中实施变化,而不脱离本发明的概念、精神和范围。更具体地,明显地,化学和生理两方面都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂,同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如由所附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念内。
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Claims (20)
1.一种改善皮肤状况或外观的方法,所述方法包括向皮肤施用有效量的局部用组合物,所述局部用组合物包含七叶皂素、卵磷脂、浮游生物提取物、绿毛山柳菊提取物、雏菊花提取物、橙皮苷甲基查尔酮、棕榈酰四肽-7、迷迭香叶提取物或其任意组合。
2.根据权利要求1所述的方法,其中通过施用局部用组合物,对皮肤进行处理以减轻皮肤状况,所述皮肤状况包括皮肤纹路、皮肤皱纹、眼下浮肿、眼下黑眼圈、眼睑下垂、皮肤松弛或其任意组合。
3.根据权利要求1所述的方法,其中通过施用局部用组合物,对皮肤进行处理以改善皮肤紧致度和/或皮肤弹性,和/或增加皮肤的水分。
4.根据权利要求1所述的方法,其中通过施用局部用组合物,对皮肤进行处理以抑制基质金属蛋白酶活性,刺激层黏连蛋白产生,抑制弹性蛋白酶、肾素、黑色素生成或其任意组合,以增加赖氨酰氧化酶和/或抑制促炎细胞因子。
5.根据权利要求4所述的方法,其中基质金属蛋白酶包括MMP1、MMP3、MMP9或其任意组合;其中促炎细胞因子包括脂氧合酶、IL-6、IL-8、TNF-α、FAAH或其任意组合。
6.根据权利要求1所述的方法,其中局部用组合物适于提供抗氧化能力。
7.根据权利要求1所述的方法,其中局部用组合物是霜、乳液、精华、凝胶、凝胶乳液或凝胶精华;其中乳液包括水包油乳液。
8.根据权利要求1所述的方法,其中将所述局部用组合物施用于眼部周围的皮肤、皮肤上的细纹、皮肤上的皱纹、眼部皮肤的黑眼圈或其任意组合。
9.根据权利要求1所述的方法,其中局部用组合物施用于松弛的皮肤或无弹性的皮肤。
10.根据权利要求1所述的方法,其中在局部施用后,组合物在皮肤上保留至少30分钟,并且其中每天施用局部用组合物,持续至少4周。
11.一种局部用组合物,其包含七叶皂素、卵磷脂、浮游生物提取物、绿毛山柳菊提取物、雏菊花提取物、橙皮苷甲基查尔酮、棕榈酰四肽-7、迷迭香叶提取物或其任意组合。
12.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中局部用组合物包含有效量的增加赖氨酰氧化酶的绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物,有效量的增加层黏连蛋白表达的橙皮苷甲基查尔酮和棕榈酰四肽-7,有效量的抑制基质金属蛋白酶活性的迷迭香叶提取物,有效量的抑制促炎细胞因子的迷迭香叶提取物,有效量的抑制促炎细胞因子的七叶皂素,有效量的抑制弹性蛋白酶的迷迭香叶提取物,有效量的抑制肾素的橙皮苷甲基查尔酮和棕榈酰四肽-7,有效量的抑制黑色素生成的七叶皂素,或其任意组合。
13.根据权利要求12所述的局部用组合物,其中基质金属蛋白酶包括MMP1、MMP3、MMP9或其任意组合;其中促炎细胞因子包括脂氧合酶、IL-6、IL-8、TNF-α、FAAH或其任意组合。
14.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中局部用组合物适于向皮肤提供抗氧化能力。
15.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中局部用组合物适于减少皮肤的纹路和/或皱纹。
16.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中局部用组合物适于提高皮肤紧致度。
17.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中局部用组合物适于减少眼部周围的黑眼圈。
18.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中局部用组合物包含0.1重量%至10重量%的绿毛山柳菊提取物和雏菊花提取物的组合、0.02重量%至2.5重量%的卵磷脂、0.02重量%至1.8重量%的七叶皂素、0.005重量%至0.5重量%的橙皮苷甲基查尔酮、0.002重量%至0.2重量%的迷迭香叶提取物、0.00011重量%至0.011重量%的浮游生物提取物、0.00003重量%至0.003重量%的棕榈酰四肽-7。
19.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中局部用组合物是乳液、精华、凝胶、凝胶乳液或凝胶精华。
20.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中局部用组合物为水包油乳液。
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