CN106420590A - 局部用化妆品组合物 - Google Patents

Abstract

本发明一般涉及对局部用组合物有用的方法和组合物，该局部用组合物包含积雪草提取物、荷花玉兰树皮提取物或厚朴树皮提取物、橙皮苷甲基查尔酮、豌豆提取物、柚果皮提取物、望春玉兰花提取物、二肽‑2、棕榈酰四肽‑7、三肽‑1，和任选地积雪草分生组织细胞培养物，以及其使用和生产的方法。

Description

局部用化妆品组合物

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年8月7日提交的美国临时申请第62/202568号的权益，其内容通过引用并入本申请中。

技术领域

本发明一般涉及可以用于改善皮肤状况和/或视觉外观的局部用组合物。在某些方面，本发明的组合物可以包含，例如，用以提高皮肤紧实度和弹性的成分、改善皮肤纹理和清透度的成分、减少皮肤炎症的成分、减少皮肤色素沉着的成分、减少皮肤红疹的成分、减少细纹和/或皱纹的成分、减轻眼袋的成分、减轻黑眼圈的成分、减轻幼纹的成分以及减轻下垂的成分、提亮肤色的成分、治疗酒糟鼻的成分、改善眼周区域的整体外观的成分以及滋润皮肤和/或毛发的成分的组合。该成分的组合可以包括于广泛的产品制剂中(例如精华、眼霜、化妆水、凝胶、面膜等)。

背景技术

衰老、长期暴露于不利的环境因素、营养失调、疲劳等可以以被认为是视觉上不期望的方式改变皮肤的视觉外观、物理性能或生理功能。最值得注意和明显的改变包括细纹和皱纹的发展、弹性的丧失、增加的下垂、坚实度的丧失、颜色均匀性或色调的损失、粗糙的表面纹理和斑驳的色素沉积。随着皮肤老化或经历长期环境损害而发生的稍不明显但重要的改变包括细胞和组织活性的普遍降低、细胞复制速率的降低、减少的皮肤血流、降低的水分含量、结构和功能的累积错误、普通生化过程正常调节的改变以及皮肤的重建与修复自身的能力的降低。皮肤的外观和功能的许多变化由皮肤的外表皮层的改变导致，而其他的变化由下部的真皮的改变导致。

许多因素促成皮肤老化和外貌老化，例如人的实际年龄、暴露于环境因素(如阳光、污染、化学品、烟等)的量和人照顾其皮肤的良好程度。具体地，皮肤老化关系到两个过程——与自然老化过程和基因影响有关的内在老化，和归结于环境因素的累积损伤的外在老化。

细胞和皮肤的内在老化过程可与维持生化途径中皮肤的特有功能的损失相关。这种途径可以控制皮肤中氧化/还原环境平衡、细胞分裂和细胞膜的完整性的调控以及皮肤水分平衡的维持。皮肤的特有功能的损失可以导致皮肤紧实度的丧失、增加皮肤的粗糙度、增加皮肤的细纹和皱纹以及干性皮肤。举例来说，内在老化可以归因于核纤层蛋白A的功能，由于其提供核酸酶的膜结构因而在细胞分裂中是重要的。在功能的核纤层蛋白A的作用，核纤层制造缺少结构支撑的异常核膜。这可导致限制细胞分裂的异常形状的核膜。核纤层蛋白A的突变形式，被称为早老蛋白，与早老症疾病有关，其中患者经历加速衰老，早在两岁时就显示出衰老信号并具有大幅缩短的寿命。皮肤的特有功能的这种和其他损失可以导致皮肤紧实度的丧失、增加皮肤粗糙度、增加细纹和皱纹、增加氧化损伤以及干性皮肤。

外在因素可包括暴露于紫外(UV)线、刺激物和污染。通过阳光照射或使用紫外灯(例如日晒床)的紫外线可以引起氧化应激、炎症、黑色素的产生，甚至引起导致皮肤损伤的基因突变。

凭借自由基形成的氧化应激的累积可以损伤皮肤蛋白，导致包括失去弹性、失去真皮蛋白、细纹和皱纹以及异常色素沉着的皮肤老化。

炎症也是紫外损伤和环境损伤的特征。炎症可以通过炎性细胞因子如TNF-α、VEGF、IL-1β、IL-6等，或者有助于炎症通路的酶如环氧合酶(例如COX-1)而发生。当炎症持续时，如基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1，MMP1)、基质金属蛋白酶-3(MMP3)和基质金属蛋白酶-9(MMP9)的酶参与到了真皮蛋白的分解，这使得免疫细胞迁移。真皮蛋白例如层粘连蛋白、弹性蛋白和胶原蛋白的这种分解可以导致皮肤老化。

当暴露于外在因素时，角化细胞(皮肤最外层细胞)释放信号分子如α-促黑激素(α-melanocyte-stimulating hormone，α-MSH)和炎性细胞因子。这些激素引发黑素细胞产生黑色素(黑素生成)。典型的色素沉着的特征在于均匀的、一致的皮肤着色。然而，通过外在因素产生黑色素可以导致皮肤颜色的变化。例如，人的皮肤可以具有黯哑、色素斑、不期望的雀斑或暗斑，如老年性着色斑、肝斑、黄褐斑、棕斑或老年斑、白癜风、晒斑色素沉着、由于擦伤、灼伤、创伤或皮炎的炎症后色素沉着过度、光毒性反应和其它类似的小的、固定的色素沉着病变。通常希望使这些区域变亮或使皮肤的不规则色素沉着区域的外观正常。个体还可能希望增加美观或降低皮肤中色素沉着的总体水平。无论哪种情况，色素沉着过度通常被视为从化妆方面是不期望的，并且个体通常希望使皮肤变亮。传统的褪色试剂如氢醌、皮质类固醇和曲酸可以引起几种与长期暴露相关的安全性担忧(例如褐黄病、萎缩、致癌作用以及其他局部或全身的副作用)。(Talwar 1993)。

外在因素还可以减少皮肤水分。暴露于化学品、溶剂、洗涤剂、化妆品、纤维织物或干燥环境是皮肤可以失去水分的多种途径中的一些。水分损失可以导致皮肤开裂或细纹和皱纹。维持皮肤和/或毛发中的水分有助于克服皮肤和毛发的一些不需要的改变。然而，在日常暴露于苛刻的外在因素下，维持皮肤水分可能是困难的。保湿剂已被设计为试图弥补这种困境。用于皮肤和毛发的保湿剂是被特别设计为使得皮肤外层(表皮)更加柔软和柔韧的化学试剂的复杂混合物。它们通过减少蒸发增加皮肤的水合(水含量)。天然生成的皮肤脂质和固醇，以及人工或天然油脂、湿润剂、润肤剂、润滑剂等可能是商用的皮肤保湿剂组合物的一部分。它们通常作为可商购产品有效的用于美容和治疗用途，但是它们也可以使用普通制药成分在家制备。然而，保湿剂不是完美的。和保湿剂联系在一起的一些问题包括令人不愉快的触觉特性(例如厚重、油腻或黏糊感)、不稳定性、皮肤刺激或保湿能力不足。

内在因素和外在因素的结合最终导致了可见的衰老信号。目前市面上的产品要么并非有效地处理衰老的信号或成因，要么并非有效地处理外在因素对于皮肤的作用，和/或它们具有皮肤刺激作用。例如，目前产品可能不是处理皮肤紧实度的丧失、色素沉着问题、细纹或皱纹的外观和/或水分损失。

发明内容

本发明人已经确定了目前与用以抵消老化和暴露于改变皮肤外观和/或状况的外在因素的一些作用的产品相关的问题的解决方法。该解决方法在于成分的组合，其可以是以下物质的任意组合：积雪草(Centella asiatica)提取物、积雪草分生组织细胞培养物、荷花玉兰(Magnolia grandiflora)树皮提取物、厚朴(Magnolia officinalis)树皮提取物、豌豆(Pisum sativum)提取物、柚(Citrus grandis)果皮提取物、望春玉兰(Magnoliabiondii)花提取物、三肽-1、和/或橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2、和棕榈酰四肽-7的组合，其可用于创建局部皮肤用组合物以有效增加皮肤的紧实度和弹性，改善皮肤纹理和清透度，减少皮肤炎症、减少皮肤的色素沉着、减少皮肤上的红疹、减少细纹和/或皱纹、减轻眼袋、减轻黑眼圈、减少幼纹(crepiness)和减轻下垂，亮白皮肤，治疗酒糟鼻，改善眼周区域的整体外观。成分的组合可以被用于创建局部皮肤用组合物以有效提高透明质酸合成、增加层粘连蛋白的刺激、增加纤维粘连蛋白的刺激、增加胶原蛋白的刺激、抑制弹性蛋白酶、抑制MMP1、抑制黑色素生成、抑制酪氨酸酶、抑制内皮细胞管的形成、抑制TNF-α、抑制IL-1β、抑制IL-6、抑制IL-10、抑制IL-2、抑制COX-1、抑制VEGF，并提供抗氧化能力。

在一方面，公开了局部皮肤用组合物。在一个实例中，局部皮肤用组合物包含积雪草提取物、荷花玉兰树皮提取物或厚朴树皮提取物、橙皮苷甲基查尔酮、豌豆提取物、柚果皮提取物、望春玉兰花提取物、二肽-2、棕榈酰四肽-7和三肽-1的任意一个、任意组合或全部。在一些方面，积雪草提取物为乙醇提取物。在一些方面，荷花玉兰树皮提取物为醇提取物。在一些方面，荷花玉兰树皮提取物包含至少一种木质素。在一些方面，厚朴树皮提取物为超临界流体–CO₂提取物。在一些方面，厚朴树皮提取物包含木兰醇与和厚朴酚。在一些方面，豌豆提取物为水提取物。在一些方面，柚果皮提取物为醇提取物。在一些方面，柚果皮提取物包含黄酮。在一些方面，望春玉兰花提取物为水/丙二醇提取物。在一些方面，望春玉兰花提取物含有木酚素。

组合物内成分的量可以改变(例如，该量以重量百分比计可以是低如0.000001％至高如98％，或是其间的任意范围)。在一些方面，该组合物含有有效量的积雪草提取物以促进透明质酸合成、增加层粘连蛋白产生、抑制黑色素生成和/或降低酪氨酸酶活性。在一些方面，该组合物含有有效量的荷花玉兰树皮提取物以抑制TNFα、提供抗氧化能力、增加层粘连蛋白产生和/或抑制黑色素生成。在一些方面，该组合物含有有效量的厚朴树皮提取物以提供抗氧化能力、抑制黑色素生成、抑制炎性细胞因子的表达、抑制TNF-α、抑制IL-1β、抑制IL-6、抑制IL-10、抑制IL-2和/或抑制COX-1。在一些方面，该组合物含有有效量的豌豆提取物以提供抗氧化能力、增加胶原蛋白I、抑制弹性蛋白酶和/或增加纤维连接蛋白的产生。在一些方面，该组合物含有有效量的柚果皮提取物以增加层粘连蛋白的产生和/或中断内皮细胞管形成。在一些方面，该组合物含有有效量的望春玉兰花提取物以抑制VEGF和/或中断内皮细胞管形成。在一些方面，该组合物含有有效量的三肽-1以增加胶原蛋白I产生和/或增加透明质酸产生。在一些方面，该组合物含有有效量的橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合以提供抗氧化能力、增加层粘连蛋白产生和/或抑制MMP1。在一个实例中，该组合物包含0.01重量％至1重量％的积雪草提取物、0.01重量％至1重量％的荷花玉兰树皮提取物或厚朴树皮提取物、0.01重量％至1重量％的橙皮苷甲基查尔酮、0.001重量％至0.5重量％的豌豆提取物、0.001重量％至0.5重量％的柚果皮提取物、0.0005重量％至0.1重量％的望春玉兰花提取物、0.0001重量％至0.1重量％的二肽-2、0.00001重量％至0.01重量％的棕榈酰四肽-7和0.000001重量％至0.001重量％的三肽-1。

在另一实例中，组合物还包含积雪草分生组织细胞培养物。在一些方面，该组合物含有有效量的积雪草分生组织细胞培养物以增加透明质酸产生和/或降低酪氨酸酶活性。在另一个实例中，该组合物含有0.0005重量％至0.1重量％的积雪草分生组织细胞培养物。

在一个实例中，该组合物还包含水。在一个实例中，该组合物包含35重量％至70重量％的水。在另一个实例中，组合物还包含甘油、凡士林、矿物油、氢化聚癸烯、十六烷基酯、双-二甘油多脂酰己二酸酯-2、丁二醇、氢化聚异丁烯、山梨坦橄榄油酸酯、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、十六烷酸鲸蜡醇酯和鲸蜡硬脂醇。在又一实例中，该组合物包含5重量％至20重量％的甘油、1重量％至15重量％的凡士林、1重量％至15重量％的矿物油、1重量％至10重量％的氢化聚癸烯、1重量％至10重量％的十六烷基酯、1重量％至10重量％的双-二甘油多脂酰己二酸酯-2、0.5重量％至5重量％的丁二醇、0.5重量％至5重量％的氢化聚异丁烯、0.5重量％至5重量％的山梨坦橄榄油酸酯、0.5重量％至5重量％的鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、0.1重量％至5重量％的十六烷酸鲸蜡醇酯和0.1重量％至5重量％的鲸蜡硬脂醇。在一个实例中，该组合物还包含山梨坦棕榈酸酯、四己基癸醇抗坏血酸酯、二氧化硅、鲸蜡硬脂醇醚-20、重氮咪唑烷基脲、生育酚醋酸酯、三乙醇胺、丙烯酸酯/C10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物和丙二醇。在另一实例中，该组合物包含0.1重量％至3重量％的山梨坦棕榈酸酯、0.1重量％至3重量％的四己基癸醇抗坏血酸酯、0.1重量％至3重量％的二氧化硅、0.05重量％至1重量％的鲸蜡硬脂醇醚-20、0.05重量％至1重量％的重氮咪唑烷基脲、0.05重量％至1重量％的生育酚醋酸酯、0.05重量％至1重量％的三乙醇胺、0.01重量％至1重量％的丙烯酸酯/C10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物和0.01重量％至1重量％的丙二醇。在又一实例中，该组合物还包含仙人果(Opuntia tuna)果实提取物。在一个实例中，该组合物包含0.00001重量％至0.01重量％的仙人果果实提取物。该组合物还可以包含一种或多种本文描述的成分。例如，该组合物可以包含选自一种或多种调理剂、保湿剂、pH调节剂、结构剂、无机盐和防腐剂的一种或多种附加成分。

在另一实例中，该局部皮肤用组合物为乳液。在一个实例中，该组合物为水包油乳液。在另一实例中，该组合物被配制为霜剂。在又一实例中，组合物被配制为眼霜。

还公开了本文公开的组合物的使用方法。在一些方面，公开了改善皮肤和/或毛发状况或外观的方法，其包括将本文描述的任一组合物施用于其中需要的皮肤和/或毛发。在一个方面，公开的组合物被施用于皮肤/或毛发并留在皮肤/或毛发上，或者一段时间后从皮肤/或毛发上移除。

在另一方面，通过将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中该皮肤的紧实度增加，公开的组合物被用于增加皮肤的紧实度。在又一方面，通过将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中该皮肤的细纹和/或皱纹的出现减少，公开的组合物被用于减少细纹和/或皱纹的出现。在一个方面中，本文公开的组合物被用于改善皮肤纹理，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中该皮肤的纹理改善。在另一方面，本文公开的组合物被用于减轻眼袋，包括将本文公开的任一组合物施用于眼下皮肤，其中眼袋减轻。在又一方面，本文公开的组合物被用于减轻皮肤下垂，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中皮肤下垂减轻。在一个方面，本文公开的组合物被用于减少皮肤幼纹(crepiness)，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中皮肤幼纹减轻。在另一方面，本文公开的组合物被用于增加皮肤弹性，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中皮肤的弹性增加。

在一个方面，通过将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中皮肤的亮度提高，公开的组合物被用于提亮皮肤。在另一方面，通过将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中皮肤的色素沉着减少，公开的组合物被用于减少皮肤的色素沉着。在又一方面，通过将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中黑色素生成被抑制，公开的组合物被用于抑制皮肤中黑色素生成。在另一方面，通过将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中该皮肤上的红疹减轻，公开的组合物被用于减轻皮肤上的红疹。在另一方面，通过将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中酒糟鼻减轻，公开的组合物被用于处理酒糟鼻。在又一方面，通过将本文公开的任一组合物施用于眼周皮肤，其中该眼周皮肤上的和/或眼周皮肤下的黑眼圈减轻，公开的组合物被用于减轻眼周皮肤上的和/或眼周皮肤下的黑眼圈。在一个方面，通过将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中皮肤的清透度被改善，该公开的组合物被用于改善皮肤的清透度。在另一方面，通过将本文公开的任一组合物施用于眼周皮肤，其中该眼周皮肤的整体外观被改善，公开的组合物被用于改善眼周皮肤的整体外观。在又一方面，通过将本文公开的任一组合物施用于皮肤和/或毛发，其中该皮肤和/或毛发被滋润，公开的组合物被用于滋润皮肤和/或毛发。

在另一方面中，本文公开的组合物被用于减轻皮肤炎症，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中皮肤中的炎症被减轻。

在一个方面，本文公开的组合物被用于抑制皮肤中的酪氨酸酶，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中皮肤中的酪氨酸酶被抑制。在又一方面中，本文公开的组合物被用于抑制血管生成，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中血管生成被抑制。在一个方面，本文公开的组合物被用于增加皮肤中透明质酸产生，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中透明质酸的产生增加。在另一方面，本文公开的组合物被用于增加皮肤中层粘连蛋白的产生，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中层粘连蛋白的产生增加。在另一方面，本文公开的组合物被用于增加皮肤中纤维连接蛋白的产生，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中纤维连接蛋白的产生增加。在一个方面，本文公开的组合物被用于增加皮肤中的胶原蛋白刺激，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中皮肤中的胶原蛋白刺激增加。在另一方面，本文公开的组合物被用于抑制皮肤中弹性蛋白酶活性，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中皮肤中弹性蛋白酶活性被抑制。在又一方面，本文公开的组合物被用于抑制皮肤中的MMP1，包括对将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中该皮肤中的MMP1被抑制。

在另一方面中，本文公开的组合物被用于抑制皮肤中的TNF-α，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中皮肤中的TNF-α被抑制。在另一方面，本文公开的组合物被用于抑制皮肤中的VEGF，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中该皮肤中的VEGF被抑制。在一些方面，本文公开的组合物被用于抑制皮肤中的IL-1β，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中该皮肤中的IL-1β被抑制。在一些方面中，本文公开的组合物被用于抑制皮肤中的IL-6，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中该皮肤中的IL-6被抑制。在一些方面，本文公开的组合物被用于抑制皮肤中的IL-10，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中该皮肤中的IL-10被抑制。在一些方面中，本文公开的组合物被用于抑制皮肤中的IL-2，包括对皮肤应用本文公开的任一组合物，其中该皮肤中的IL-2被抑制。在一些方面，本文公开的组合物被用于抑制皮肤中的COX-1，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤，其中该皮肤中的COX-1被抑制。在又一方面，本文公开的组合物被用于减少在皮肤和/或毛发表面和/或内部的氧化剂，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤和/或毛发，其中该氧化剂被减少。在一个方面，本文公开的组合物被用于预防由氧化剂对皮肤和/或毛发造成的氧化损伤，包括将本文公开的任一组合物施用于皮肤和/或毛发，其中由该氧化剂对皮肤和/或毛发造成的氧化损伤被预防。

在具体方面，本发明的组合物配制为局部皮肤和/或毛发用组合物。该组合物可以具有用于化合物、组合物和提取物的皮肤病学可接受的载剂或载体。该组合物还可以包含保湿剂或湿润剂、表面活性剂、含硅酮的化合物、UV剂、油和/或本说明书确定的或本领域已知的其他成分。组合物可以是润肤露、霜剂、凝胶、精华素、乳液(例如水包油、油包水、水包硅酮、硅酮包水、水包油包水、油包水包油、硅酮包水包油等)、溶液(例如水溶液或水-醇溶液)、无水基(例如唇膏或粉剂)、软膏剂、乳液、贴剂、气溶胶、固形、眼啫喱等。该组合物可以是粉剂形式(例如干燥的、冻干的、微粒的等)。该组合物可以被配制用于在使用期间每天局部皮肤施用至少1、2、3、4、5、6、7或更多次。在本发明的其它方面，组合物可以是储存稳定或颜色稳定的，或是两者。还期望可以选择组合物的黏度以达到想要的结果，例如根据想要的组合物类型，该组合物的黏度可以从1cps到远超过1百万cps，或者是其中可推得的任意范围或整数(例如，如在25℃下在布氏黏度计上用TC轴以2.5rpm的转速测量的2cps、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、20000、30000、40000、50000、60000、70000、80000、90000、100000、200000、300000、400000、500000、600000、700000、800000、900000、1000000、2000000、3000000、4000000、5000000、10000000cps等)。

本发明的组合物还可以被改性以具有想要的氧自由基吸收能力(ORAC)值。在某些非限制性方面，在本说明书全文中所确定的本发明的组合物或组分或其提取物可以被改性以具有每毫克至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、95、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、15000、20000、30000、50000、100000或更多或者其中可推得的任意范围的ORAC值。

在非限制性方面，该组合物可以具有约6至约9的pH值。在其它方面，pH可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14。该组合物可以包含甘油三酸酯。非限制性实例包括小的、中等的和大的链甘油三酸酯。在某些方面，该甘油三酸酯是中等链甘油三酸酯(例如辛酸癸酸甘油三酯)。该组合物还可以包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯的混合物。在一些实施方案中，防腐剂不是苯甲酸酯类(paraben)。

本发明的组合物可以具有UVA和UVB吸收性质。该组合物可以具有的防晒系数(sunprotection factor，SPF)为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、或更大、或其中可以推得的任何整数。该组合物可以是防晒的润肤露、喷雾或霜剂。

本发明的组合物还可以包含以下附加成分中的任何一种、任意组合或全部：水、螯合剂、保湿剂、防腐剂、增稠剂、含硅酮的化合物、精油、结构化剂、维生素、药物成分、或抗氧化剂、或这些成分的任意组合或这些成分的混合物。在某些方面，该组合物可以包含在上句中指出的这些附加成分中的至少二、三、四、五、六、七、八、九、十种或全部。这些附加成分的非限制性实例在本说明书全文指出并通过引用并入本章节。这些成分的量以组合物的重量或体积计可以是0.0001％至99.9％，或者是如本说明书其它章节中所公开的任意整数或范围，其通过引用并入本段。

也预期了包含本发明的组合物的试剂盒。在某些实施方案中，该组合物包含在容器中。该容器可以是瓶子、分配器或包装。该容器可以分配预定量的组合物。在某些方面，该组合物以喷雾、雾、团块或液体分配。该容器可以包含其表面上的标记。该标记可以是单词、缩写、图片或符号。

还预期了在本说明书全文中所公开的组合物可以用作保留或洗去型组合物。举例来说，保留型组合物可以局部施用于皮肤，并在皮肤上保留一端时间(例如，至少5、6、7、8、9、10、20或30分钟，或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时，或者整夜或整天)的产品。或者，洗去型组合物可以是意在施用于皮肤，然后在一端时间内如小于5、4、3、2或1分钟从皮肤移除或洗去(比如用水)的产品。洗去型组合物的实例可以是洗面奶、洗发水、调理剂或肥皂。保留型组合物的例子可以是皮肤保湿霜、防晒霜、面膜、晚霜或日霜。

预期了对于本发明的任何方法或组合物，可以实施于本说明书中所讨论的任何实施方案，反之亦然。此外，本发明的组合物可以用于实现本发明的方法。

在一个实施方案中，本发明的组合物可以是可药用的或可化妆用的，或可以具有舒适的触觉性质。“可药用的”、“可化妆用的”和/或“舒适的触觉性质”描述了具有在皮肤上令人感觉舒适的特定触觉性质的组合物(例如，不是太湿或太油的组合物、具有丝滑质地的组合物、非发粘的或粘性的组合物等)。可药用的或可化妆用的也可以与组合物的乳脂状或润滑性能、或组合物的保湿性能有关。

还预期了一种包含本发明的组合物的产品。在非限制性方面，该产品可以是化妆品。该化妆品可以是本说明书其它章节所述的那些，或是本领域技术人员已知的那些。产品的非限制性实例包括保湿剂、霜剂、润肤露、柔肤水、凝胶、化妆水、粉底、晚霜、唇膏、清洁剂、爽肤水、防晒霜、面膜、抗老化产品、除臭剂、止汗剂、香水、古龙水等。

还公开了本发明的以下实施方案1-29。实施方案1是改善皮肤外观或状况的方法，其中紧实度提高、亮度提高、色素沉着减轻、黑色素生成被抑制、红疹减轻、酒槽鼻减轻、黑眼圈减轻、清透度改善、细纹和/或皱纹的外观减轻、纹理改善、眼袋减轻、下垂减轻、幼纹减轻、弹性增加、炎症减轻和/或眼周皮肤的整体外观改善，该方法包括将局部用组合物施用于皮肤，该局部用组合物包含：积雪草提取物；荷花玉兰树皮提取物或厚朴树皮提取物；橙皮苷甲基查尔酮；豌豆提取物；柚果皮提取物；望春玉兰花提取物；二肽-2；棕榈酰四肽-7和三肽-1。实施方案2是根据实施方案1的方法，其中积雪草提取物为乙醇提取物，荷花玉兰树皮提取物为醇提取物，厚朴树皮提取物为超临界流体–CO₂提取物，豌豆提取物为水提取物，柚果皮提取物为包含黄酮的醇提取物，和/或望春玉兰花提取物为包含木酚素的水/丙二醇提取物。实施方案3是根据实施方案1和2中任一项的方法，其中抑制了酪氨酸酶，抑制了血管生成，增加了透明质酸的产生，增加了层粘连蛋白的产生，增加了纤维连接蛋白的产生，增加了胶原蛋白刺激，抑制了弹性蛋白酶活性，抑制了MMP1，抑制了TNF-α，抑制了VEGF，抑制了IL-1β，抑制了IL-6，抑制了IL-10，抑制了IL-2，抑制了COX-1，和/或阻止了氧化剂对皮肤的氧化损伤。实施方案4是根据实施方案1至3中任一项的方法，其中该组合物包含有效量的：积雪草提取物以促进透明质酸的合成，增加层粘连蛋白的产生，抑制黑色素生成和/或降低酪氨酸酶活性；荷花玉兰树皮提取物以抑制TNFα，提供抗氧化能力，增加层粘连蛋白的产生，和/或抑制黑色素生成；厚朴树皮提取物以提供抗氧化能力，抑制黑色素生成，抑制炎性细胞因子的表达，抑制TNF-α，抑制IL-1β，抑制IL-6，抑制IL-10，抑制IL-2，和/或抑制COX-1；豌豆提取物以提供抗氧化能力，增加胶原蛋白I，抑制弹性蛋白酶，和/或增加纤维连接蛋白的产生；柚果皮提取物以增加层粘连蛋白的产生和/或破坏内皮细胞管形成；望春玉兰花提取物以抑制VEGF和/或破坏内皮细胞管形成；三肽-1以增加胶原蛋白I的产生和/或增加透明质酸的产生；和/或橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合以提供抗氧化能力，增加层粘连蛋白的产生，和/或抑制MMP1。实施方案5是根据实施方案1至4中任一项的方法，其中该组合物包含：0.01重量％至1重量％的积雪草提取物；0.01重量％至1重量％的荷花玉兰树皮提取物或厚朴树皮提取物；0.01重量％至1重量％的橙皮苷甲基查尔酮；0.001重量％至0.5重量％的豌豆提取物；0.001重量％至0.5重量％的柚果皮提取物；0.0005重量％至0.1重量％的望春玉兰花提取物；0.0001重量％至0.1重量％的二肽-2；0.00001重量％至0.01重量％的棕榈酰四肽-7；和0.000001重量％至0.001重量％的三肽-1。实施方案6是根据实施方案1至5中任一项的方法，其中该组合物还包含积雪草分生组织细胞培养物。实施方案7是根据实施方案6的方法，其中该组合物包含有效量的积雪草分生组织细胞培养物以增加透明质酸的产生和/或降低酪氨酸酶的活性。实施方案8是根据实施方案6至7中任一项的方法，其中该组合物包含0.0005重量％至0.1重量％的积雪草分生组织细胞培养物。实施方案9是根据实施方案1至8中任一项的方法，其中该组合物还包含水。实施方案10是根据实施方案9的方法，其中该组合物包含35重量％至70重量％的水。实施方案11是根据实施方案1至10中任一项的方法，其中该组合物还包括仙人果果实提取物。实施方案12是根据实施方案11的方法，其中该组合物包含0.00001重量％至0.01重量％的仙人果果实提取物。实施方案13是根据实施方案1至12中任一项的方法，其中该组合物为乳液。实施方案14是根据实施方案1至13中任一项的方法，其中该组合物为水包油乳液。实施方案15是根据实施方案1至14中任一项的方法，其中该组合物被配制为眼霜。实施方案16为配制为改善皮肤状况或外观的局部用组合物，其包含：积雪草提取物；荷花玉兰树皮提取物或厚朴树皮提取物；橙皮苷甲基查尔酮；豌豆提取物；柚果皮提取物；望春玉兰花提取物；二肽-2；棕榈酰四肽-7和三肽-1。实施方案17是根据实施方案16的局部用组合物，其中该组合物包含有效量的：积雪草提取物，以促进透明质酸合成、增加层粘连蛋白产生、抑制黑色素生成和/或降低酪氨酸酶活性；荷花玉兰树皮提取物，以抑制TNFα、提供抗氧化能力、增加层粘连蛋白的产生和/或抑制黑色素生成；厚朴树皮提取物，以提供抗氧化能力、抑制黑色素生成、抑制炎性细胞因子的表达、抑制TNF-α、抑制IL-1β、抑制IL-6、抑制IL-10、抑制IL-2和/或抑制COX-1；豌豆提取物，以提供抗氧化能力、增加胶原蛋白I、抑制弹性蛋白酶和/或增加纤维连接蛋白的产生；柚果皮提取物，以增加层粘连蛋白的产生和/或破坏内皮细胞管形成；望春玉兰花提取物，以抑制VEGF和/或破坏内皮细胞管形成；三肽-1，以增加胶原蛋白I的生产和/或增加透明质酸的产生；和/或橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合，以提供抗氧化能力、增加层粘连蛋白的产生和/或抑制MMP1。实施方案18是根据实施方案16至17中任一项的组合物，包含：0.01重量％至1重量％的积雪草提取物；0.01重量％至1重量％的荷花玉兰树皮提取物或厚朴树皮提取物；0.01重量％至1重量％的橙皮苷甲基查尔酮；0.001重量％至0.5重量％的豌豆提取物；0.001重量％至0.5重量％的柚果皮提取物；0.0005重量％至0.1重量％的望春玉兰花提取物；0.0001重量％至0.1重量％的二肽-2；0.00001重量％至0.01重量％的棕榈酰四肽-7；和0.000001重量％至0.001重量％的三肽-1。实施方案19是根据实施方案16至18中任一项的组合物，其中积雪草提取物为乙醇提取物，荷花玉兰树皮提取物为醇提取物，厚朴树皮提取物为超临界流体–CO₂提取物，豌豆提取物为水提取物，柚果皮提取物为包含黄酮的醇提取物，和/或望春玉兰花提取物为包含木酚素的水/丙二醇提取物。实施方案20是根据实施方案16至19中任一项的组合物，其还包括积雪草分生组织细胞培养物。实施方案21是根据实施方案20的组合物，其含有有效量的积雪草分生组织细胞培养物以增加透明质酸的产生和/或降低酪氨酸酶的活性。实施方案22是根据实施方案20至21中任一项的组合物，其包括0.0005重量％至0.1重量％的积雪草分生组织细胞培养物。实施方案23是根据实施方案16至22中任一项的组合物，其还包含水。实施方案24是根据实施方案23的组合物，其包含35重量％至70重量％的水。实施方案25是根据实施方案16至24中任一项的组合物，其还包含仙人果果实提取物。实施方案26是根据实施方案25的组合物，其包含0.00001重量％至0.01重量％的仙人果果实提取物。实施方案27是根据实施方案16至26中任一项的组合物，其中该组合物为乳液。实施方案28是根据实施方案27的组合物，其中该组合物为水包油乳液。实施方案29是根据实施方案28的组合物，其中该组合物被配制为眼霜。

“局部施用”是指将组合物施用或涂敷到嘴唇或角质组织的表面上。“局部皮肤用组合物”包括适合局部施用于嘴唇或角质组织的组合物。这类组合物当被施用于嘴唇或皮肤时，其不具有异常毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等，因而一般为皮肤病学可接受的。本发明的局部护肤组合物可以具有选定的黏度以避免施用于皮肤后明显的滴落或聚积。

“角质组织”包括配置为哺乳类最外的保护的覆盖物的含有角质的层，并且包括但不限于嘴唇、皮肤、毛发和指甲。

术语“大约”或“约”定义为如本领域普通技术人员所理解的接近于，并且在一个非限制性实施方案中该术语定义为在10％以内，优选在5％以内，更优选在1％以内，最优选在0.5％以内。

术语“基本上”及其变体定义为如本领域普通技术人员所理解的大部分但不必全部地为指定的事物，并且在一个非限定性的实施方案中基本上指的是范围在10％以内、在5％以内、在1％以内或在0.5％以内。

术语“抑制”或“减少”或这些术语的任何变体包含为了达到预期结果的任何可测量的减少或完全抑制。术语“促进”或“增加”或这些术语的任何变体包含为了达到预期结果的任何可测量的增加或蛋白质或分子(例如，基质蛋白如纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原蛋白或弹性蛋白，或者分子如透明质酸)的产生。

作为本说明书和/或权利要求中所使用的术语，术语“有效的”表示足够实现预期的、期望的或意图的结果。

当在权利要求和/或说明书中与术语“包含”一起使用时，要素前面不使用数量词可以表示“一个”，但是其也符合“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意思。

如本说明书和权利要求所使用的，词“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括性的或开放式的，并且不排除附加的、未列举的要素或方法步骤。

组合物和它们的使用方法可以“包含”贯穿说明书公开的任何成分或步骤，或“主要由”贯穿说明书公开的任何成分或步骤“组成”，或“由”贯穿说明书公开的任何成分或步骤“组成”。

本发明的其它目的、特征和优点通过下面的详细描述会变得明显。然而，应理解详细的描述和实施例在表明本发明的具体实施方案时仅以举例说明给出。另外，期望通过该详细描述，本发明的精神和范围内的变化和修改对于本领域技术人员会变得明显。

具体实施方式

如上所述，本发明若干独特方面在局部用化妆品组合物中结合，其包含积雪草提取物、荷花玉兰树皮提取物、厚朴树皮提取物、豌豆提取物、柚果皮提取物、望春玉兰花提取物、三肽-1，和/或橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合中的一种或多种，以及任选的积雪草的分生组织细胞培养物。这使得以下益处能够实现：提高皮肤紧实度和弹性、改善皮肤纹理和清透度、减轻皮肤炎症、减少皮肤色素沉着、减少皮肤上的红疹、减少细纹和/或皱纹、减轻眼袋、减轻黑眼圈、减轻幼纹以及减轻下垂、提亮肤色、治疗酒糟鼻、和改善眼周区域的整体外观。其他益处包括：增加透明质酸的合成、增加层粘连蛋白刺激、增加纤维连接蛋白刺激、增加胶原蛋白刺激、抑制弹性蛋白酶、抑制MMP1、抑制黑色素生成、抑制酪氨酸酶、抑制内皮细胞管形成、抑制TNF-α、抑制IL-1β、抑制IL-6、抑制IL-10、抑制IL-2、抑制COX-1、抑制VEGF，并提供了具有抗氧化能力的组合物。

以下子章节更详细地描述本发明的非限制性方面。

本发明的特别的组合物被设计为用作眼霜组合物。在一个实例中，该眼霜可以有助于紧实皮肤和增加微循环以减轻下眼袋的外观，同时减轻黑眼圈的外观。该组合物依赖于以下物质的任一种、任意组合或所有的独特组合：积雪草提取物、荷花玉兰树皮提取物、厚朴树皮提取物、橙皮苷甲基查尔酮、豌豆提取物、柚果皮提取物、望春玉兰花提取物、二肽-2、棕榈酰四肽-7、三肽-1和积雪草的分生组织细胞培养物，以及另外任选的仙人果果实提取物。表1的实施例1中提供了该组合物的一个实例。

上述组合物可施用于皮肤或毛发并留在皮肤或毛发上一段时间(例如,至少1、2、3、4、5、10、20、30、或60分钟或更长)。之后，如果需要，该组合物可以从皮肤上冲掉或揭掉。

A.活性成分

本发明的前提是以下活性成分组合的确定：积雪草提取物、荷花玉兰树皮提取物或厚朴树皮提取物、橙皮苷甲基查尔酮、豌豆提取物、柚果皮提取物、望春玉兰花提取物、二肽-2、棕榈酰四肽-7、三肽-1和积雪草的分生组织细胞培养物——其可以有效增加皮肤紧实度和弹性、改善皮肤纹理和清透度、减少皮肤炎症、减少皮肤的色素沉着、减少皮肤上的红疹、减少细纹和/或皱纹、减轻眼袋、减轻黑眼圈、减少幼纹(crepiness)和减少下垂、亮白皮肤、治疗酒糟鼻、改善眼周区域的整体外观。成分的组合还可以有效增加透明质酸的合成、提高层粘连蛋白刺激、提高纤维连接蛋白刺激、提高胶原蛋白刺激、抑制弹性蛋白酶、抑制MMP1、抑制黑色素生成、抑制酪氨酸酶、抑制内皮细胞管形成、抑制TNF-α、抑制IL-1β、抑制IL-6、抑制IL-10、抑制IL-2、抑制COX-1、抑制VEGF、并提供抗氧化能力。该成分的组合可以用于不同产品以处理多种皮肤状况。例如，眼霜可以有助于紧实皮肤并改善眼周区域的整体外观，同时也减轻黑眼圈的外观。

本发明的组合物和制剂可以是特别有益于开始生长细纹、皱纹和/或幼纹的皮肤。除了阻止老化过程，该成分的组合保湿、紧实和提亮皮肤。

积雪草是小型草本一年生植物，原产于印度、斯里兰卡、澳大利亚北部、印度尼西亚和亚洲的部分地区。这种植物的提取物(不论该提取物是从整株植物、花、叶、茎、种子还是根中获得)是从广泛的来源商购的(参见International Cosmetic IngredientDictionary and Handbook，第12版，第1卷，第458-60页(2008)，其通过引用并入)，所有的这种植物的提取物均可以用于本发明的环境。在一些方面，积雪草提取物为乙醇提取物。在具体方面，可以使用积雪草分生组织细胞培养物，其是从Instituto di RicercheBiotecnologiche(意大利)商购的，商标名为Centella Asiatic Stems G^TM。在一些方面，该积雪草提取物可以促进透明质酸的合成、增加层粘连蛋白的产生、抑制黑色素生成和/或降低酪氨酸酶活性。在一些方面，该积雪草分生组织细胞培养物可以增加透明质酸的产生和/或降低酪氨酸酶的活性。

荷花玉兰树皮提取物是从荷花玉兰树的树皮获得。在一些方面，荷花玉兰树皮提取物为醇提取物。在一些方面，荷花玉兰树皮提取物为粉状提取物。在一些方面，荷花玉兰树皮提取物包含木兰醇与和厚朴酚。荷花玉兰树皮提取物是从供应商例如PremierSpecialties,Inc.和/或DSM(北美)商购的。参见International Cosmetic IngredientDictionary and Handbook，第12版，第2卷，第1499-50页(2008)，其通过引用并入。在一些方面，荷花玉兰树皮提取物可以抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)，提供抗氧化能力，增加层粘连蛋白的产生，和/或抑制黑色素生成。

厚朴树皮提取物是从厚朴树的树皮获得的。在一些方面，厚朴树皮提取物为超临界流体–CO₂提取物。在一些方面，厚朴树皮提取物为超临界CO₂流体提取物。在一些方面，厚朴树皮提取物包含木兰醇与和厚朴酚。厚朴树皮提取物是从供应商如Coast Southwest,Inc.商购得到。参见International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook，第12版，第2卷，1499-50页(2008)，其通过引用并入。在一些方面，该厚朴树皮提取物可以提供抗氧化能力、抑制黑色素生成、抑制炎性细胞因子的表达、抑制TNF-α、抑制IL-1β、抑制IL-6、抑制IL-10、抑制IL-2和/或抑制COX-1。

望春玉兰花提取物是从望春玉兰树的花和蓓蕾获得的。在一些方面，荷花玉兰树皮提取物包含木酚素。在某些方面，望春玉兰花提取物为水/丙二醇提取物。荷花玉兰树皮提取物是从供应商如Carrubba Inc.商购得到。参见International Cosmetic IngredientDictionary and Handbook，第12版，第2卷，1499-50页(2008)，其通过引用并入。在一些方面，望春玉兰花提取物可以抑制血管内皮生长因子(VEGF)和/或破坏内皮细胞管形成。

豌豆，也被称为青豆、菜豌豆和青豌豆，为产生小型可食用种子的一年生植物。在某些方面，豌豆提取物为水提取物。豌豆提取物是可从供应商如Cognis(商标名PROTEASYL^TM)商购的。参见International Cosmetic Ingredient Dictionary andHandbook，第12版，第2卷，第2042页(2008)，其通过引用并入。在某些方面，该豌豆提取物可以提供抗氧化能力、增加胶原蛋白I、抑制弹性蛋白酶和/或增加纤维连接蛋白产生。

柚果皮提取物是从柚(葡萄柚)的果皮中获得的。在一些方面，柚果皮提取物为醇提取物。在一些方面，柚果皮提取物包含黄酮。柚果皮提取物是从供应商如J.L.PROSOURCING商购的。参见International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook，第12版，第1卷，第610页(2008)，其通过引用并入。在一些方面，该柚果皮提取物可以增加层粘连蛋白的产生和/或中断内皮细胞管的形成。

三肽-1是含有甘氨酸、组氨酸和赖氨酸的合成肽。它具有滋润皮肤的能力。该成分是从广泛的来源商购得到(参见International Cosmetic Ingredient Dictionary andHandbook，第12版，第1卷，第458-60页(2008)，其通过引用并入)。在具体的实例中，可以使用从Unipex Innovations(加拿大)获得的产品其为三肽-1与水和右旋糖酐的结合。在一些方面，三肽-1可以增加胶原蛋白I的产生和/或增加透明质酸的产生。

橙皮苷甲基查尔酮是从广泛的来源商购得到的化合物(参见InternationalCosmetic Ingredient Dictionary and Handbook，第12版，第1卷，第1146页(2008)，其通过引用并入)。在一个方面，该成分可以通过使用以商标名Eyeliss^TM售卖的Sederama SAS(法国)混合物获得，该混合物为水、甘油、橙皮苷甲基查尔酮、硬脂醇聚醚-20、二肽-2(缬氨酰色氨酸)和棕榈酰四肽-7(Pal-GQPR)的组合。在一些方面，橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合提供了抗氧化能力，增加了层粘连蛋白产生和/或抑制了基质金属蛋白酶-1(MMP1)。

二肽-2是含有缬氨酸和色氨酸的合成肽。它是从广泛的来源商购得到(参见International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook，第12版，第1卷，855页(2008)，其通过引用并入)。在一个方面，该成分可以通过使用以商标名Eyeliss^TM售卖的Sederama SAS(法国)混合物来获得。在一些方面，橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合提供了抗氧化能力，增加了层粘连蛋白产生和/或抑制了基质金属蛋白酶-1(MMP1)。

棕榈酰四肽-7是棕榈酸与含有甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸和精氨酸的合成肽的反应产物，其是从广泛的来源商购得到(参见International Cosmetic IngredientDictionary and Handbook，第12版，第2卷，第1767页(2008)，其通过引用并入)。在一个方面，该成分可以从使用以商标名Eyeliss^TM售卖的Sederama SAS(法国)混合物来获得。在一些方面，橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合提供了抗氧化能力，增加了层粘连蛋白产生和/或抑制了基质金属蛋白酶-1(MMP1)。

本文描述的提取物可以是通过本领域已知的提取方法及其组合而制备的提取物。提取方法的非限制性实例包括使用液-液提取、固相萃取、水提取、乙酸乙酯、醇、丙酮、油脂、超临界二氧化碳、热、压力、压降提取、超声提取等。提取物可以是液体、固体、干燥液体、再悬浮固体等。

B.成分的量

预期本发明的组合物可以包含任意量的本说明书所讨论成分。该组合物还可以包含任意量的在本说明书全文中所描述的附加成分的组合(例如，颜料或附加的化妆品或药物成分)。在该组合物中任意成分的浓度可以改变。例如，在非限制性的实施方案中，该组合物在其最终形式中可以包含、基本由以下成分组成或由以下成分组成：例如至少大约0.0001％、0.0002％、0.0003％、0.0004％、0.0005％、0.0006％、0.0007％、0.0008％、0.0009％、0.0010％、0.0011％、0.0012％、0.0013％、0.0014％、0.0015％、0.0016％、0.0017％、0.0018％、0.0019％、0.0020％、0.0021％、0.0022％、0.0023％、0.0024％、0.0025％、0.0026％、0.0027％、0.0028％、0.0029％、0.0030％、0.0031％、0.0032％、0.0033％、0.0034％、0.0035％、0.0036％、0.0037％、0.0038％、0.0039％、0.0040％、0.0041％、0.0042％、0.0043％、0.0044％、0.0045％、0.0046％、0.0047％、0.0048％、0.0049％、0.0050％、0.0051％、0.0052％、0.0053％、0.0054％、0.0055％、0.0056％、0.0057％、0.0058％、0.0059％、0.0060％、0.0061％、0.0062％、0.0063％、0.0064％、0.0065％、0.0066％、0.0067％、0.0068％、0.0069％、0.0070％、0.0071％、0.0072％、0.0073％、0.0074％、0.0075％、0.0076％、0.0077％、0.0078％、0.0079％、0.0080％、0.0081％、0.0082％、0.0083％、0.0084％、0.0085％、0.0086％、0.0087％、0.0088％、0.0089％、0.0090％、0.0091％、0.0092％、0.0093％、0.0094％、0.0095％、0.0096％、0.0097％、0.0098％、0.0099％、0.0100％、0.0200％、0.0250％、0.0275％、0.0300％、0.0325％、0.0350％、0.0375％、0.0400％、0.0425％、0.0450％、0.0475％、0.0500％、0.0525％、0.0550％、0.0575％、0.0600％、0.0625％、0.0650％、0.0675％、0.0700％、0.0725％、0.0750％、0.0775％、0.0800％、0.0825％、0.0850％、0.0875％、0.0900％、0.0925％、0.0950％、0.0975％、0.1000％、0.1250％、0.1500％、0.1750％、0.2000％、0.2250％、0.2500％、0.2750％、0.3000％、0.3250％、0.3500％、0.3750％、0.4000％、0.4250％、0.4500％、0.4750％、0.5000％、0.5250％、0.0550％、0.5750％、0.6000％、0.6250％、0.6500％、0.6750％、0.7000％、0.7250％、0.7500％、0.7750％、0.8000％、0.8250％、0.8500％、0.8750％、0.9000％、0.9250％、0.9500％、0.9750％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％、6.6％、6.7％、6.8％、6.9％、7.0％、7.1％、7.2％、7.3％、7.4％、7.5％、7.6％、7.7％、7.8％、7.9％、8.0％、8.1％、8.2％、8.3％、8.4％、8.5％、8.6％、8.7％、8.8％、8.9％、9.0％、9.1％、9.2％、9.3％、9.4％、9.5％、9.6％、9.7％、9.8％、9.9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或其中可推得的任何范围的至少一种在本说明书全文和权利要求提及的成分。在非限制性的方面，可以按整个组合物的重量或体积计算该百分比。本领域普通技术人员会理解，浓度可以根据给定组合物中成分的添加、取代和/或减少而改变。

C.载剂

本发明的组合物可以包括或被并入到所有类型的载剂和载体中。该载剂或载体可以是药学或皮肤病学可接受的载剂或载体。载剂或载体的非限制性实例包括水、甘油、醇、油、含硅化合物，硅酮化合物和蜡。变体和其它合适的载剂对于熟练技术人员是明显的，并且适用于本发明。在某些方面，可以以这样的方式挑选化合物、成分和试剂的浓度和组合，使得组合物是化学相容的且不形成从最终产品沉淀的复合物。

D.结构

本发明的组合物可以被构建或配制为多种不同的形式。非限制性的实例包括乳剂(例如，油包水、水包油包水、水包油、水包硅酮、硅酮包水、油包水包油、硅酮包水包油的乳液)、霜剂、润肤露、溶液(水的和水-醇的)、无水基(例如唇膏和粉剂)、凝胶、面膜、面膜和软膏。变体和其它结构对于熟练技术人员是明显的，并且适用于本发明。

E.附加成分

除了本发明人所公开成分的组合之外，组合物还可以包含附加成分，如化妆品成分和药物活性成分。这些附加成分的非限制性实例在以下子章节中描述。

1.化妆品成分

CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook(2004和2008)描述了可以在本发明的上下文中使用的多种非限制性化妆品成分。这些成分种类的实例包括：芳香剂(人造的和天然的；例如葡糖酸、苯氧基乙醇和三乙醇胺)、染料和着色成分(例如Blue 1、Blue 1 Lake、Red 40、二氧化钛、D&C蓝色4号、D&C绿色5号、D&C橙色4号、D&C红色17号、D&C红色33号、D&C紫色2号、D&C黄色10号和D&C黄色11号)、增味剂/鲜味剂(例如甜叶菊(Stevia rebaudiana)(甜叶)提取物和甲醇)、吸附剂、润滑剂、溶剂、保湿剂(包括例如润肤剂、湿润剂、成膜剂、密封剂和影响皮肤天然保湿机制的试剂)、阻水剂、紫外吸收剂(物理和化学吸收剂如对氨基苯甲酸(para-aminobenzoic acid，“PABA”)和相应的PABA衍生物、二氧化钛、氧化锌等)、精油、维生素(例如A、B、C、D、E和K)、微量金属(例如锌、钙和硒)、抗刺激物(例如类固醇和非类固醇类抗炎药)、植物提取物(例如芦荟(Aloe vera)、甘菊、黄瓜提取物、银杏(Ginkgo biloba)、人参和迷迭香)、抗菌剂、抗氧化剂(例如BHT和生育酚)、螯合剂(例如EDTA二钠和EDTA四钠)、防腐剂(例如羟苯甲酯和羟苯丙酯)、pH调节剂(例如氢氧化钠和柠檬酸)、吸收剂(例如淀粉辛基琥珀酸铝、高岭土、玉米淀粉、燕麦淀粉、环糊精、滑石和沸石)、皮肤漂白和光亮剂(例如氢醌和烟酰胺乳酸酯)、湿润剂(例如山梨醇、脲、甲基葡糖醇聚醚-20和甘露醇)、磨砂剂、防水剂(例如羟基硬脂酸镁/羟基硬脂酸铝)、皮肤调理剂(例如芦荟提取物、尿囊素、没药醇、神经酰胺、二甲硅油、透明质酸、生物糖类胶-1、乙基己基甘油、戊二醇、氢化聚癸烯、辛基十二醇油酸酯和甘草酸二钾)。在以下子章节中提供了这些成分的一些非限制性实例。

a.紫外吸收剂

可以与本发明的组合物组合使用的紫外吸收剂包括化学和物理的防晒物质。可以使用的化学防晒物质的非限制性实例包括对氨基苯甲酸(PABA)、PABA酯(PABA甘油酯、二甲基PABA戊烷酯和二甲基PABA辛烷酯)、PABA丁酯、PABA乙酯、二羟基丙基PABA乙酯、苯甲酮(氧苯酮、磺异苯酮、二苯甲酮和二苯甲酮-1至12)、肉桂酸酯(甲氧基肉桂酸辛酯、对甲氧基肉桂酸异戊酯、辛基甲氧基肉桂酸酯、西诺沙酯、二异丙基肉桂酸甲酯、DEA甲氧基肉桂酸酯、二异丙基肉桂酸乙酯、辛酸二甲氧基肉桂酸甘油酯和甲氧基肉桂酸乙酯)、肉桂酸酯、水杨酸酯(均甲基水杨酸酯、水杨酸苄酯、水杨酸乙二酯、异丙基苄基水杨酸酯等)、邻氨基苯甲酸盐/酯、尿刊酸乙酯、胡莫柳酯、水杨酸辛酯、二苯甲酰基甲烷衍生物(例如阿伏苯宗)、氰双苯丙烯酸辛酯、辛基三嗪酮、二没食子三油酸酯、氨基苯甲酸甘油酯、含二羟基丙酮的指甲花醌、乙基己基三嗪酮、二辛基丁酰胺基三嗪酮、苯亚甲基丙二酸脂聚硅氧烷、对苯二亚甲基二莰酮磺酸、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯、双二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸酯、双苯并恶唑基苯基乙基己基亚氨基三嗪、甲酚曲唑三硅氧烷、亚甲基双苯并三唑基四甲基丁基苯酚和双乙基己氧基苯酚甲氧基苯基三嗪、4-甲基苄亚基莰酮和4-甲氧基肉桂酸异戊酯。物理防晒物质的非限制性实例包括高岭土、滑石、凡士林和金属氧化物(例如二氧化钛和氧化锌)。

b.保湿剂

可以与本发明的组合物一起使用的保湿剂的非限制性实例包括氨基酸、硫酸软骨素、双甘油、赤藓糖醇、果糖、葡萄糖、甘油、甘油聚合物、乙二醇、1,2,6-己三醇、蜂蜜、透明质酸、氢化蜂蜜、氢化淀粉水解物、肌醇、乳糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖、甘露醇、天然保湿因子、PEG-15丁二醇、聚甘油山梨醇、吡咯烷酮羧酸盐、PCA钾、丙二醇、葡糖醛酸钠、PCA钠、山梨醇、蔗糖、海藻糖、尿素和木糖醇。

其他的实例包括乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、丙氨酸、藻类提取物、库拉索芦荟(Aloe barbadensis)、库拉索芦荟提取物、库拉索芦荟凝胶、药蜀葵(Altheaofficinalis)提取物、杏(Prunus armeniaca)核油、精氨酸、精氨酸天冬氨酸盐、山金车(Arnica montana)提取物、天冬氨酸、鳄梨(Persea gratissima)油、屏障鞘脂、丁醇、蜂蜡、山嵛醇、β-谷甾醇、桦木(Betula alba)树皮提取物、紫草科(Borago officinalis)提取物、假叶树(Ruscus aculeatus)提取物、丁二醇、金盏花(Calendula officinalis)提取物、金盏花油、小烛树(Euphorbia cerifera)蜡、菜子油、辛酸/癸酸甘油三酯、小豆蔻(Elettariacardamomum)油、巴西棕榈(Copernicia cerifera)蜡、胡萝卜(Daucus carota sativa)油、蓖麻(Ricinus communis)油、神经酰胺、地蜡、鲸蜡硬脂醇聚醚-5、鲸蜡硬脂醇聚醚-12、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、辛酸十六酯、鲸蜡醇聚醚-20、鲸蜡醇聚醚-24、鲸蜡醋酸盐、鲸蜡醇辛酸酯、棕榈酸十六酯、洋甘菊(Anthemis nobilis)油、胆固醇、胆固醇酯、胆甾醇基羟基硬脂酸酯、柠檬酸、鼠尾草(Salvia sclarea)油、可可(Theobroma cacao)油、椰油醇-辛酸酯/癸酸酯、椰子(Cocos nucifera)油、胶原蛋白、胶原氨基酸、玉米(Zea mays)油、脂肪酸、油酸癸酯、二甲基硅氧烷共聚醇、聚二甲基硅氧烷醇、己二酸二辛酯、琥珀酸二辛酯、二聚季戊四醇六辛酸酯/六癸酸酯、DNA、赤藓醇、乙氧基乙二醇、亚油酸乙酯、蓝桉(Eucalyptusglobulus)油、月见草(Oenothera biennis)油、脂肪酸、天竺葵(Geranium maculatum)油、葡糖胺、葡萄糖谷氨酸酯、谷氨酸、甘油聚醚-26、甘油、丙三醇、二硬脂酸甘油酯、羟基硬脂酸甘油酯、月桂酸甘油酯、亚油酸甘油酯、肉豆蔻酸甘油酯、油酸甘油酯、羟基硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯SE、甘氨酸、乙二醇硬脂酸酯、乙二醇硬脂酸酯SE、葡糖氨基葡聚糖、葡萄(Vitis vinifera)籽油、榛子(Corylus americana)坚果油、榛子(Corylus avellana)坚果油、己二醇、透明质酸、杂交红花(Carthamus tinctorius)油、氢化蓖麻油、氢化椰油甘油酯、氢化椰子油、氢化羊毛脂、氢化卵磷脂、氢化棕榈甘油酯、氢化棕榈核油、氢化大豆油、氢化牛脂酸甘油酯、氢化植物油、水解胶原蛋白、水解弹性蛋白、水解葡糖氨基葡聚糖、水解角蛋白、水解大豆蛋白、羟基化羊毛脂、羟基脯氨酸、异鲸蜡硬脂酸酯、异鲸蜡醇硬脂酰硬脂酸酯、油酸异癸酯、异硬脂酸异丙酯、羊毛脂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、异硬脂酰胺DEA、异硬脂酸、异硬脂醇乳酸酯、异硬脂醇新戊酸酯、茉莉(Jasminumofficinale)油、荷荷巴(Buxus chinensis)油、巨藻、夏威夷果(Aleurites moluccana)坚果油、乳酰胺MEA、羊毛脂醇聚醚-16、羊毛脂醇聚醚-10乙酸酯、羊毛脂、羊毛脂酸、羊毛脂醇、羊毛脂油、羊毛脂蜡、薰衣草(Lavandula angustifolia)油、卵磷脂、柠檬(Citrusmedica limonum)油、亚油酸、亚麻酸、澳洲胡桃(Macadamia ternifolia)坚果油、麦芽糖醇、洋甘菊(Chamomilla recutita)油、甲基葡萄糖倍半硬脂酸酯、甲基硅烷醇PCA酯、矿物油、貂油、被孢霉油、乳酸肉豆蔻酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、丙酸肉豆蔻酯、新戊二醇基二辛酸酯/二癸酸酯、辛基十二烷醇、辛基十二烷醇肉豆蔻酸酯、硬脂酰硬脂酸辛基十二烷酯、羟基硬脂酸辛酯、棕榈酸辛酯、水杨酸辛酯、硬脂酸辛酯、油酸、橄榄(Olea europaea)油、橙(Citrus aurantium dulcis)油、棕榈(Elaeis guineensis)油、棕榈酸、泛硫乙胺、泛醇、泛醇基乙基醚、石蜡、PCA、桃(Prunus persica)核油、花生(Arachis hypogaea)油、PEG-8C12-18酯、PEG-15可可胺、PEG-150二硬脂酸酯、PEG-60异硬脂酸甘油酯、PEG-5硬脂酸甘油酯、PEG-30硬脂酸甘油酯、PEG-7氢化蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-20甲基葡萄糖倍半硬脂酸酯、PEG-40山梨坦油酸酯、PEG-5大豆甾醇、PEG-10大豆甾醇、PEG-2硬脂酸酯、PEG-8硬脂酸酯、PEG-20硬脂酸酯、PEG-32硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-50硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-150硬脂酸酯、十五酸内酯、胡椒薄荷(Mentha piperita)油、凡士林、磷脂、多氨基多糖缩合物、聚甘油-3二异硬脂酸酯、聚季铵盐-24、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85、肉豆蔻酸钾、棕榈酸钾、丙二醇、丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯、丙二醇二辛酸酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇月桂酸酯、丙二醇硬脂酸酯、丙二醇硬脂酸酯SE、PVP、吡哆醇二棕榈酸酯、视黄醇、棕榈酸视黄酯、水稻(Oryza sativa)糠油、RNA、迷迭香(Rosmarinus officinalis)油、玫瑰油、红花(Carthamustinctorius)油、鼠尾草(Salvia officinalis)油、檀香(Santalum album)油、丝氨酸、血清蛋白、芝麻(Sesamum indicum)油、乳木果(Butyrospermum parkii)、蚕丝粉、硫酸软骨素钠、透明质酸钠、乳酸钠、棕榈酸钠、PCA钠、聚谷氨酸钠、可溶性胶原蛋白、山梨坦月桂酸酯(盐)、山梨坦油酸酯、山梨坦棕榈酸酯(盐)、山梨坦倍半油酸酯、山梨坦硬脂酸酯、山梨糖醇、大豆(Glycine soja)油、鞘脂、角鲨烷、角鲨烯、硬脂酰胺MEA-硬脂酸酯(盐)、硬脂酸、硬脂氧基二甲硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷、硬脂醇、硬脂醇甘草亭酸酯、硬脂醇庚酸酯、硬脂醇硬脂酸酯、向日葵(Helianthus annuus)籽油、甜杏仁(Prunus amygdalus dulcis)油、合成蜂蜡、生育酚、生育酚乙酸酯、生育酚亚油酸酯(盐)、三山嵛精、十三烷基新戊酸酯、十三烷基硬脂酸酯、三乙醇胺、三硬脂精、尿素、植物油、水、蜡、小麦(Triticum vulgare)胚芽油、和依兰(Cananga odorata)油。

c.抗氧化剂

可以与本发明的组合物一起使用的抗氧化剂的非限制性实例包括乙酰半胱氨酸、抗坏血酸多肽、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸甲基硅烷醇果胶酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯(盐)、BHA、BHT、叔丁基氢醌、半胱氨酸、半胱氨酸HCI、二戊基氢醌、二叔丁基氢醌、二鲸蜡醇硫代二丙酸酯、二油基生育酚甲基硅烷醇、抗坏血酸硫酸酯二钠、二硬脂醇硫代二丙酸酯、双十三烷醇硫代二丙酸酯、没食子酸月桂酯、异抗坏血酸、抗坏血酸的酯、阿魏酸乙酯、阿魏酸、没食子酸酯、氢醌、巯基乙酸异辛酯、曲酸、抗坏血酸镁、磷酸抗坏血酸酯镁盐、甲基硅烷醇抗坏血酸酯、天然植物抗氧化剂如绿茶或葡萄籽提取物、去甲二氢愈创木酸、没食子酸辛酯、苯巯基乙酸、磷酸抗坏血酸酯生育酚酯钾盐、亚硫酸钾、没食子酸丙酯、醌类、迷迭香酸、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、异抗坏血酸钠、偏二亚硫酸钠、亚硫酸钠、超氧化物歧化酶、巯基乙酸钠、山梨醇缩糠醛、硫二甘醇、亚硫基二乙酰胺、硫二乙酸、巯基乙酸、硫代乳酸、硫代水杨酸、生育酚聚醚-5、生育酚聚醚-10、生育酚聚醚-12、生育酚聚醚-18、生育酚聚醚-50、生育酚、托可索伦、生育酚乙酯、生育酚亚油酸酯(盐)、烟酸生育酚酯、生育酚琥珀酸酯和三(壬基苯基)亚磷酸酯(盐)。

d.结构剂

在其它非限制性方面，本发明的组合物可以包含结构剂。在某些方面，结构剂协助向组合物提供流变性质以促进组合物的稳定性。在其它方面，结构剂还可以起乳化剂或表面活性剂的作用。结构剂的非限制性实例包括硬脂酸、棕榈酸、硬脂醇、鲸蜡醇、山嵛醇、硬脂酸、棕榈酸、具有平均约1至约21个亚乙基氧单元的硬脂醇的聚乙二醇醚、具有平均约1到约5个亚乙基氧单元的鲸蜡醇的聚乙二醇醚及其混合物。

e.乳化剂

在本发明的某些方面，组合物不包含乳化剂。然而，在其它方面，组合物可以包含一种或更多种乳化剂。乳化剂可以降低相间的界面张力并改善乳液的剂型和稳定性。乳化剂可以是非离子的、阳离子的、阴离子的和两性离子的乳化剂(参见McCutcheon(1986)；美国专利第5011681号；第4421769号；第3755560号)。非限制性实例包括甘油酯、丙二醇酯、聚乙二醇的脂肪酸酯、聚丙二醇的脂肪酸酯、山梨醇酯、失水山梨醇酐酯、羧酸共聚物、葡萄糖酯和葡萄糖醚、乙氧基醚、乙氧基醇、磷酸烷基酯、聚氧乙烯脂肪醚磷酸酯(盐)、脂肪酸酰胺、酰基乳酸酯、脂肪酸盐、TEA硬脂酸酯、DEA油醇聚醚-3磷酸酯、聚乙二醇20山梨醇酐月桂酸酯(聚山梨醇酯20)、聚乙二醇5大豆甾醇、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-21、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂基葡糖苷、鲸蜡硬脂醇、C12-13链烷醇聚醚-3、PPG-2甲基葡萄糖醚二硬脂酸酯、PPG-5-鲸蜡醇聚醚-20、双-PEG/PPG-20/20聚二甲基硅氧烷、鲸蜡醇聚醚-10、聚山梨醇酯80、鲸蜡磷酸酯、鲸蜡磷酸酯钾、二乙醇胺鲸蜡基磷酸酯(盐)、聚山梨醇酯60、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯(盐)、十二烷醇、十二烷醇葡萄糖苷及其混合物。

f.含硅酮的化合物

在非限制性方面，含硅酮的化合物包括分子主链由交替的硅和氧原子与连接在硅原子上的侧基组成的聚合产物一族中的任何成员。通过改变-Si-O-链的长度、侧基和交联，硅酮可以合成为各种材料。它们的稠度可以从液体变化到凝胶再到固体。

可以在本发明的环境下使用的含硅酮的化合物包括在本说明书中所描述的或本领域普通技术人员已知的那些。非限制性实例包括硅油(例如挥发性和非挥发性油)、凝胶和固体。在某些方面，含硅酮的化合物包括硅油，例如聚有机硅氧烷。根据预期的应用(例如，针对特定区域如皮肤、毛发或眼睛)，聚有机硅氧烷的非限制性实例包括聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、聚硅氧烷-11、苯基三甲基聚硅氧烷、三甲基硅烷基氨端聚二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷或其混合物和其它任何给定比例的有机硅氧烷材料以达到期望的稠度和应用特征。“挥发性硅油”包括具有低气化热的硅油，即通常低于约50卡每克的硅油。挥发性硅油的非限制性实例包括：环聚二甲基硅氧烷，如Dow Corning 344 Fluid、DowCorning 345 Fluid、Dow Corning 244 Fluid和Dow Corning 245 Fluid、VolatileSilicon 7207(康涅狄格州，丹伯里，Union Carbide Corp.)；低黏度的聚二甲基硅氧烷，即具有约50cst或更低黏度的聚二甲基硅氧烷(例如，如Dow Corning 200-0.5 cst Fluid的聚二甲基硅氧烷)。Dow Corning Fluid可以从密歇根州米德兰的Dow CorningCorporation购得。在CTFA Cosmetic Ingredient Dictionary的第三版中(通过引用并入)，环聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷分别被描述为环状二甲基聚硅氧烷化合物和用三甲基硅氧基单元封端的完全甲基化的线性硅氧烷聚合物的混合物。可以在本发明的环境下使用的其它非限制性的挥发性硅油包括从纽约州沃特福德的General Electric Co.的Silicone Products Div.和密歇根州艾德里安的Stauffer Chemical Co.的SWSSilicones Div.购得的那些。

g.精油

精油包括来自草本植物、花朵、树木和其它植物的油。这类油一般以植物细胞间微小的液滴存在，并可以用本领域技术人员已知的若干方法进行提取(例如，蒸汽蒸馏、脂析法(即使用脂肪提取)、浸渍、溶剂提取或机械压榨)。当这类油暴露于空气时其趋于挥发(即挥发性油)。因此，虽然许多精油是无色的，但是它们可以随着时间被氧化且变得更深色。精油不溶于水但可溶于醇、醚、非挥发性油(植物的)和其它有机溶剂。在精油中发现的典型的物理特征包括约160℃至240℃变化的沸点和约0.759至约1.096的密度。

精油一般以油被发现的来源植物命名。例如，玫瑰油或胡椒薄荷油分别来自玫瑰或胡椒薄荷植物。可以在本发明的环境下使用的精油的非限制性实例包括芝麻油、澳洲坚果油、茶树油、月见草油、西班牙鼠尾草油、西班牙迷迭香油、芫荽油、百里香油、众香果油、玫瑰油、大茴香油、凤仙花油、佛手柑油、玫瑰木油、香柏油、甘菊油、鼠尾草油、香紫苏油、丁香油、柏木油、桉油、茴香油、海茴香油、乳香油、香叶油、姜油、葡萄柚油、茉莉油、杜松子油、薰衣草油、柠檬油、柠檬草油、梨莓油、橘子油、甘牛至油、没药油、苦橙花油、橙油、广霍香油、胡椒油、黑胡椒油、苦橙叶油、松油、奥图玫瑰油、迷迭香油、檀香油、绿薄荷油、甘松油、香根草油、冬青油、依兰依兰。也预期本领域技术人员已知的其它精油在本发明的环境下是有用的。

h.增稠剂

包括增稠剂或胶凝剂在内的增稠剂包括可以增加组合物黏度的物质。增稠剂包括可以增加组合物黏度而基本上不改变组合物内活性成分功效的那些。增稠剂也可以增加本发明的组合物的稳定性。在本发明的某些方面，增稠剂包括氢化聚异丁烯或三羟硬脂精，丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物或其混合物。

可以在本发明的环境下使用的附加增稠剂的非限制性实例包括羧酸聚合物、交联的聚丙烯酸酯聚合物、聚丙烯酰胺聚合物、多糖和胶。羧酸聚合物的实例包括含有一种或更多种衍生自丙烯酸、取代的丙烯酸和这些丙烯酸和取代的丙烯酸的盐和酯的单体的交联化合物，其中所述交联剂含有两个或更多个碳-碳双键，并衍生自多元醇(参见美国专利第5087445号；第4509949号；第2798053号；CTFA International Cosmetic IngredientDictionary，第四版，1991，第12页和第80页)。市售羧酸聚合物的实例包括卡波姆，其为丙烯酸与蔗糖或季戊四醇的烯丙基醚交联的均聚物(例如，来自B.F.Goodrich的Carbopol^TM900系列)。

交联的聚丙烯酸酯聚合物的非限制性实例包括阳离子型和非离子型聚合物。美国专利第5100660号、第4849484号、第4835206号、第4628078号、第4599379号中描述了实例。

聚丙烯酰胺聚合物(包括非离子的聚丙烯酰胺聚合物，其含有取代的支化或未支化聚合物)的非限制性实例包括聚丙烯酰胺、异构烷烃和月桂醇聚醚-7、丙烯酰胺和被丙烯酸和取代的丙烯酸取代的丙烯酰胺的多嵌段共聚物。

多糖的非限制性实例包括纤维素、羧甲基羟乙基纤维素、乙酸丙酸羧酸纤维素酯、羟乙基纤维素、羟乙基乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、微晶纤维素、纤维素硫酸钠及其混合物。其他实例为烷基取代的纤维素，其中纤维素聚合物的羟基被羟烷基化(优选地羟乙基化或羟丙基化)以形成羟烷基化纤维素，其然后通过醚键用C10-C30直链或支链烷基基团进一步改性。一般来说，这些聚合物为C10-C30直链或支链醇与羟烷基纤维素的醚。其它有用的多糖包括硬葡聚糖类，其包含(1-3)连接的葡萄糖单元的直链以及每三个单元具有(1-6)连接的葡萄糖。

本发明可以使用的胶的非限制性实例包括阿拉伯树胶、琼脂、藻胶、藻酸、藻酸铵、支链淀粉、藻酸钙、卡拉胶钙、肉毒碱、卡拉胶、糊精、明胶、结冷胶、瓜尔豆胶、瓜尔胶羟丙基氯化铵、锂蒙脱石、透明质酸、水合硅石、羟丙基壳聚糖、羟丙基瓜尔胶、卡拉亚胶、巨藻、豆胶、纳豆胶、藻酸钾、卡拉胶钾、藻酸丙二醇酯、菌核胶、羧甲基右旋糖酐钠、卡拉胶钠、黄蓍胶、黄原胶及其混合物。

i.防腐剂

在本发明的环境下可以使用的防腐剂的非限制性实例包括季铵盐防腐剂(例如聚季铵盐-1和卤代苄烷铵(例如苯扎氯铵(“BAC”)和苯扎溴铵)、苯甲酸酯类(例如羟苯甲酯和羟苯丙酯)、苯氧乙醇、苄醇、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫汞撒或其组合。

2.药物成分

还预期药物活性剂对本发明的组合物是有用的。药物活性剂的非限制性实例包括抗粉刺剂、用于处理酒渣鼻的试剂、止痛剂、麻醉剂、肛门直肠的、抗组胺药、包括非甾族消炎药在内的消炎剂、抗生素、抗真菌剂、抗病毒剂、抗菌剂、抗癌活性物、抗疥螨剂、灭虱剂、抗肿瘤药、止汗药、止痒剂、抗牛皮癣药、抗脂溢剂、生物活性蛋白和多肽、烧伤处理剂、烧灼剂、脱色剂、脱毛剂、尿布疹处理剂、酶、毛发生长刺激剂、含有DFMO及其盐和类似物的毛发生长抑制剂、止血剂、角质分离剂、口疮处理剂、唇疱疹处理剂、牙科或牙周处理剂、光敏感活性物、皮肤保护剂/屏障剂、含有激素和皮质激素的类固醇、晒伤处理剂、遮光剂、经皮活性物、鼻活性物、阴道活性物、疣处理剂、创伤处理剂、创伤愈合剂等。

F.试剂盒

还预期了用于本发明的某些方面的试剂盒。例如，本发明的组合物可以包括在试剂盒内。试剂盒可以包括容器。容器可以包括瓶子、金属管、层压管、塑料管、分配器、压力容器、屏障容器、包装、分室、唇膏容器、压缩容器、能够保存化妆品组合物的化妆品盘，或其它类型的将分散体或组合物或期望的瓶子、分液器或包装保存其中的容器如注射或吹塑成型的塑料容器。试剂盒和/或容器在其表面可以包含标记。例如，标记可以是单词、短语、缩写、图片或符号。

所述容器可以分散预定量的组合物。在其他实施方案中，可以挤压容器(例如金属、层压或塑料管)以分散期望量的组合物。组合物可以分散为喷雾、气溶胶、液体、流体或半固体。容器可以具有喷雾、抽吸或挤压机制。试剂盒还可以包含使用试剂盒成分以及任何包含于容器内的组合物的用途的说明书。说明书可以包含如何施用、使用和保存组合物的解释。

实施例

并入以下实施例以说明本发明的优选实施方式。本领域技术人员应理解，以下实施例中所公开的技术代表本发明人发现的在本发明的实践中发挥良好作用的技术，从而视为构成了其优选的实施方式。然而，根据本公开，本领域技术人员应理解，在所公开的具体实施方案中可以做出许多改变，并仍然获得相同或相似的结果，而不脱离本发明的精神和范围。

实施例1

含有本文公开成分的制剂被制备成局部皮肤和/或毛发用组合物。作为非限制性实施例，表1中的制剂被制备成眼霜。

本文所公开和要求保护的所有组合物根据本公开即可以制成和实现，无需过度的实验。当本发明的组合物和方法已经从优选的实施方案的角度进行了描述时，所述组合物以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序中可以实施变化，而不脱离本发明的构思、精神和范围对于本领域技术人员是明显的。更具体来说，明显地，化学和生理两方面都相关的某些试剂可以替代本文所描述的试剂，同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如所附的权利要求限定的本发明的构思、范围和概念内。

表1^*

成分	％浓度(以重量计)
		水	48
甘油	11
		凡士林	8
矿物油	8
		氢化聚癸烯	5
鲸蜡酯	4
		双-二甘油多酰基己二酸酯-2	3
丁二醇	2
		氢化聚异丁烯	2
山梨坦橄榄油酸酯	2
		鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯	2
鲸蜡醇棕榈酸酯	1
		鲸蜡硬脂醇	1
山梨坦棕榈酸酯	0.8
		四己基癸醇抗坏血酸酯	0.5
二氧化硅	0.5
		鲸蜡硬脂醇聚醚-20	0.3
重氮烷基脲	0.3
		生育酚乙酸酯	0.2
三乙醇胺	0.2
		丙烯酸酯/C10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物	0.1
丙二醇	0.1
		积雪草提取物	0.1
荷花玉兰树皮提取物或厚朴树皮提取物	0.06
		橙皮苷甲基查尔酮	0.05
豌豆提取物	0.02
		柚果皮提取物	0.01
积雪草分生组织细胞培养物(任选的)	0.002
		望春玉兰花提取物	0.002
二肽-2	0.001
		棕榈酰四肽-7	0.0003
三肽-1	0.00005
		仙人果果实提取物(任选的)	0.0005
赋形剂**	适量

^*制剂可以通过在70℃至75℃下加热并在烧杯中混合所述成分直到均匀来制备。然后，所述制剂可以冷却到标准室温(20℃至25℃)。进一步，如果需要，例如，可以添加附加成分以调整组合物的流变性能。

^**例如，可以添加赋形剂用以改变组合物的流变性能。或者，可以改变水的量，只要组合物中水的量为至少35％(重量/重量)，优选40％至60％(重量/重量)。

实施例2

(活性成分的体外功效)

通过以下方法确定成分的功效。以下是可以在本发明的环境中使用的非限制性试验。应认识到，可以使用其它测试过程，包括例如客观的和主观的过程。

确定了积雪草提取物促进透明质酸合成、增加层粘连蛋白产生、抑制黑色素生成并降低酪氨酸酶活性。还确定了积雪草分生组织细胞培养物增加透明质酸产生并降低酪氨酸酶活性。确定了荷花玉兰树皮提取物抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)、具有抗氧化能力、增加层粘连蛋白产生、并抑制黑色素生成。确定的是厚朴树皮提取物提供抗氧化能力、抑制黑色素生成、抑制炎性细胞因子表达、抑制TNF-α、抑制IL-1β、抑制IL-6、抑制IL-10、抑制IL-2并抑制COX-1。确定的是豌豆提取物具有抗氧化能力、增加胶原蛋白I、抑制弹性蛋白酶并增加纤维连接蛋白产生。确定的是柚果皮提取物增加层粘连蛋白产生并破坏内皮细胞管形成。确定的是望春玉兰花提取物抑制血管内皮生长因子(VEGF)并破坏内皮细胞管形成。确定的是橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合具有抗氧化能力、增加层粘连蛋白产生并抑制基质金属蛋白酶-1(MMP1)。确定的是三肽-1增加胶原蛋白I产生并增加透明质酸产生。

表2中示出了定量体外结果的概要且在下文提供了用于测定成分性质的方法。

表2

刺激透明质酸产生-积雪草提取物、三肽-1和积雪草分生组织细胞培养物分别显示了在真皮成纤维细胞中刺激透明质酸(HA)的产生。HA是与基质结构的稳定性有关的多糖，并与向组织和细胞提供膨压有关。使用来自R&D Systems(DY3614)的HyaluronanDuoSet ELISA试剂盒测定在经处理的和未经处理的成人真皮成纤维(human dermalfibroblast,HDFa)细胞中的HA产生。确定的是积雪草提取物、三肽-1和积雪草分生组织细胞培养物分别以+91％、+93％和+48％刺激真皮成纤维(HDFa)细胞中的HA产生。

对于样品，在处理前，在37℃和10％的CO₂下在饥饿培养基中(Dulbecco’sModified Eagle Medium中的0.15％的胎牛血清和1％的青霉素链霉素溶液)培养由Cascade Biologics获得的亚融合HDFa细胞(C-13-5C)72小时。之后在检测处理、阳性对照(来自Sigma-Aldrich的佛波酯(P1585)和衍生于来自Sigma-Aldrich的生长因子的血小板(P3201))或无添加剂下用新鲜的饥饿培养基孵育该细胞24小时。收集培养基并在-80℃下冷冻直至在ELISA试验中使用。

简略来说，该ELISA检测采用了定量三明治酶免疫分析技术，由此将对HA特异的捕获抗体预先涂覆在微孔板上。将标准品、来自经处理的和未处理细胞的培养基移液至微孔板，使得存在的任何HA与固定的抗体结合。冲走任何未结合的物质后，添加对HA特异的酶联检测抗体到孔中。接着冲洗以去除任何未结合的抗体-酶试剂，添加底物溶液到孔中以使其与最初步骤中结合的HA量成比例显色。在特定时间停止显色，使用酶标仪测量在450nm处的颜色强度。

层粘连蛋白、纤维连接蛋白和胶原蛋白的刺激试验-积雪草提取物、荷花玉兰树皮提取物、柚果皮提取物，以及橙皮苷甲基查尔酮二肽-2和棕榈四肽-7的组合已经显示出增加层粘连蛋白的分泌。豌豆提取物已经显示出增加纤维连接蛋白的分泌。豌豆提取物和三肽-1已经显示出增加原胶原蛋白(胶原蛋白前体)的分泌。层粘连蛋白和纤维粘连蛋白是真皮-表皮连接(dermal-epidermal junction,DEJ)(也被称为基膜)中的主要蛋白质。DEJ位于真皮和表皮联结之间，形成叫做表皮突的指状突出。表皮细胞从真皮中的血管接收其养分。表皮突增大了暴露于这些血管和所需养分的表皮的表面积。DEJ提供两种组织隔室的粘连，并控制皮肤的结构完整性。层粘连蛋白和纤维粘连蛋白是位于DEJ中的两种结构性糖蛋白。被认为是将细胞保持在一起的胶，层粘连蛋白和纤维粘连蛋白由真皮成纤维细胞分泌以帮助促进表皮细胞与DEJ的细胞内和细胞间粘连。胶原蛋白是对皮肤结构关键的细胞外基质蛋白。增加的胶原蛋白合成帮助改善皮肤的紧实度和弹性。在酶联免疫吸附测试(ELISA)中，使用针对每种蛋白质的免疫荧光抗体在培养的人成纤维细胞中观测层粘连蛋白、纤维连接蛋白和原胶原蛋白的分泌。确定的是积雪草提取物、荷花玉兰树皮提取物、柚果皮提取物，以及橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈四肽-7的组合分别以+117％、+95％、+132％和+117％增加层粘连蛋白的分泌。确定的是豌豆提取物以+31％增加纤维连接蛋白的分泌。还确定的是豌豆提取物和三肽-1分别以+46％和+20％增加原胶原蛋白的分泌。

简略来说，通过对亚融合正常成人表皮成纤维细胞(Cascade Biologics)的细胞上清液中的这些蛋白质进行定量来观测层粘连蛋白、纤维连接蛋白和原胶原蛋白的分泌，正常成人表皮成纤维细胞使用或不使用最终浓度为1.0％的测试成分在37℃、10％的CO₂中、在含有10％胎牛血清(Mediatech)的标准DMEM生长培养基中处理3天。孵育之后，在酶联免疫吸附测试(ELISA)中使用针对每种蛋白质的免疫荧光抗体，测量层粘连蛋白、纤维连接蛋白和原胶原蛋白。对于细胞代谢活性测量是标准化的，通过3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)的生物转化来测定。

弹性蛋白酶活性的抑制-豌豆提取物已经显示出抑制弹性蛋白酶的活性。弹性蛋白酶是分解弹性蛋白的酶。使用来自Molecular Probes(尤金，美国俄勒冈州)的弹性蛋白酶检测(试剂盒#E-12056)来测定豌豆提取物对弹性蛋白酶活性抑制。该试剂盒用于针对测定弹性蛋白酶活性抑制的体外酶抑制的检测。确定的是豌豆提取物以20％抑制弹性蛋白酶活性。

简略来说，试剂盒含有可溶牛颈韧带弹性蛋白，其用染料标记以使共轭荧光淬灭。非荧光牛颈韧带弹性蛋白底物可以被弹性蛋白酶或其他蛋白酶消化以产生高荧光片段。得到的荧光增强用荧光微孔板测定仪进行观测。来自弹性蛋白底物的消化产物在约505nm处具有吸收最大值，在约515nm处具有荧光发射最大值。将豌豆提取物加入酶切反应或不对酶切反应进行处理以测定弹性蛋白酶的抑制。作为阳性对照，使用N-甲氧基琥珀酰基-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-缬氨酸-氯甲基酮作为选择性的、共同性的弹性蛋白酶活性抑制剂。

基质金属蛋白酶1(MMP1)的抑制-橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合已经显示出抑制MMP1。MMP是胞外蛋白酶，其凭借广泛的底物特异性在许多正常状态和疾病状态中起作用。MMP1底物包括胶原蛋白IV。在存在或不存在橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合的情况下，使用Molecular Probes Enz/Chek Gelatinase/Collagenase检测试剂盒(#E12055)测定MMP1的活性。确定的是橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合以23％抑制MMP1的活性。

简略来说，该试剂盒使用了荧光明胶底物以检测体外的MMP1蛋白酶活性。在荧光明胶底物的蛋白水解切割后，显示出亮绿色荧光并使用荧光酶标仪来观测亮绿色荧光以测量酶活性。在存在或不存在纯化酶和底物的条件下孵育试验材料或对照试剂以确定其蛋白酶抑制能力。

B16色素沉着检测-积雪草提取物、荷花玉兰树皮提取物和厚朴树皮提取物已经显示抑制黑色素生成。黑素生成是黑素细胞产生黑色素的过程，黑色素是天然产生的给予皮肤、毛发和眼睛颜色的色素。抑制黑素生成有益于预防皮肤变黑和减轻与老化有关的黑斑。在存在或不存在积雪草提取物和荷花玉兰树皮提取物的情况下，通过测量黑色素分泌测定B16细胞中的黑色素生成。确定的是积雪草提取物、荷花玉兰树皮提取物和厚朴树皮提取物分别以28％，37％和63％抑制黑色素生成。

使用B16-F1黑素细胞(ATCC)，永生的小鼠黑色素瘤细胞系，来测定黑色素生成。该分析的终点是黑色素产生和细胞存活能力的分光光度测量。在37℃下10％的CO₂中用含10％的胎牛血清(Mediatech)在标准DMEM生长培养基中培养B16-F1黑素细胞，并使用测试提取物处理6天或不处理。孵育之后，黑色素分泌通过在405nm处的吸收进行测量，并量化细胞的存活能力。

蘑菇酪氨酸酶活性检测-积雪草提取物和积雪草分生组织细胞培养物已经显示出抑制酪氨酸酶的活性。在哺乳动物细胞中，在来自酪氨酸(和来自多巴色素聚合)的黑色素的多步骤生物合成中酪氨酸酶催化两个步骤。酪氨酸酶位于黑素细胞中并产生给予皮肤、毛发和眼睛颜色的黑色素(芳香醌化合物)。在存在或不存在积雪草提取物和积雪草分生组织细胞培养物的情况下，使用蘑菇酪氨酸酶活性的比色分析确定酪氨酸酶在其底物L-Dopa上的活性。确定的是，积雪草提取物和积雪草分生组织细胞培养物分别以25％和55％抑制酪氨酸酶。

在存在或不存在积雪草提取物和积雪草分生组织细胞培养物的情况下，通过测量纯化蘑菇酪氨酸酶(Sigma)氧化其底物L-Dopa(Fisher)的能力检测酪氨酸酶活性。通过酪氨酸酶L-DOPA氧化产生色素，其由490nm处的比色板读数来评价。计算蘑菇酪氨酸酶活性的抑制百分比并与未处理的对照物进行比较，以确定试验成分抑制纯化酶活性的能力。试验抑制与已知的酪氨酸酶抑制剂曲酸(Sigma)的抑制进行比较。

内皮细胞管的形成-积雪草提取物、柚果皮提取物和望春木兰花提取物已经显示出抑制内皮细胞管形成。内皮细胞管的形成涉及血管形成和毛细血管形成。毛细血管形成和血管形成可以促进皮肤发红和酒槽鼻。在存在或不存在试验提取物和化合物的情况下，在细胞培养系统中使用具有预成型的初代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的毛细管破坏检测确定内皮细胞形成管的能力。确定的是，积雪草提取物、柚果皮提取物和望春木兰花提取物抑制内皮细胞管形成。

简略来说，在细胞外基质上体外培养HUVEC，其刺激内皮细胞的附着和管状形态生成以形成毛细管状的内腔结构。在多个方面，这些体外形成的毛细管和人血管的毛细管类似。毛细管检测是基于该现象的，并用于评价潜在的脉管系统靶向试剂。

HUVEC培养物在5％的CO₂、37℃下在细胞培养器中生长。用于HUVEC的完整生长培养基为内皮细胞基础培养基(EBM)，补充2％的胎牛血清(FBS)、12μg/ml的牛脑提取物、1μg/ml的皮质醇和1μg/ml的GA-1000(庆大霉素-两性霉素)。在传代3至8之间的HUVEC培养物用于所有的检测实验。

使用荧光试剂Calcein AM预标记HUVEC并与其完整生长培养基接种于细胞外基质涂覆的96孔培养板。在形态生成过程约4小时之后，形成内皮毛细管。然后，作为处理条件向形成的毛细管培养物施用50μl体积的设定剂量的测试试剂。向无处理对照组加入测试试剂的载剂。检测性能的对照包括一个浓度的FDA批准的抗血管生成药物索坦(Sutent)。在处理约6小时之后，通过显微镜检查每个孔中内皮细胞管形态生成，获得每个孔的图像，并定量分析在测试条件下的毛细管破坏活性。每个测试条件在重复的孔中实施，包括对照组。

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的抑制-荷花玉兰树皮提取物和厚朴树皮提取物已经显示出在角化细胞中抑制TNF-α产生。TNF-α是TNF超家族的原型配体。其是在炎症中起关键作用的多效性细胞因子。其表达的增加与促炎活性上调有关。用于分析荷花玉兰树皮提取物和厚朴树皮提取物的作用的生物检测使用了反映TNF-α的存在和细胞存活能力的分光光度测量。确定的是，荷花玉兰树皮提取物以98％抑制角化细胞中TNF-α的产生，厚朴树皮提取物以93％抑制角化细胞中TNF-α的产生。

用佛波酯(PMA，10ng/ml，Sigma Chemical，#P1585-1MG)和提取物(处理样品)或无附加处理(未处理样品)处理在37℃下5％的CO₂中在EpiLife标准生长培养基(CascadeBiologics)中培养的亚融合正常人成熟角质细胞(Cascade Biologics)6小时。PMA导致TNF-α的分泌急剧增加，在处理6小时后达到峰值。孵育之后，收集细胞培养基，并使用来自R&D Systems(#DTA00C)的三明治酶联免疫吸附分析(ELISA)量化TNF-α的分泌量。

简略来说，该ELISA检测采用了定量的三明治酶免疫分析技术，由此将对TNF-α特异的单克隆抗体预先涂覆在微孔板上。将标准品、经处理的和未处理的样品移液至微孔板孔以使存在的任何TNF-α与固定化抗体结合。冲走任何未结合的物质后，将对TNF-α特异的酶联多克隆抗体添加到孔中。冲洗以去除任何未结合的抗体-酶试剂之后，将底物溶液添加到孔中以使其与最初步骤中结合的TNF-α的量成比例显色。在特定时间停止显色，并使用酶标仪测量在450nm处的颜色强度。

环氧合酶(COX)分析：厚朴树皮提取物已经在体外COX-1抑制检测中显示出抑制环氧合酶-1(COX-1)。COX是展现环氧合酶和与炎症有关的过氧化物酶两者活性的双功能酶。环氧合酶活性将花生四烯酸转换为过氧化氢内过氧化物(前列腺素G2；PGG2)，过氧化物酶成分将内过氧化物(前列腺素H2；PGH2)还原为相应的醇，前列腺素的前体、凝血噁烷和环前列腺素。确定的是，厚朴树皮提取物以61％抑制COX-1酶活性。

该COX抑制剂筛选试验测量环氧合酶的过氧化物酶成分。通过观测氧化N,N,N',N'-四甲基-对苯二胺(TMPD)的出现比色检测过氧化物酶的活性。比色的COX(绵羊的)抑制剂筛选试验(#760111，Cayman Chemical)用于分析厚朴树皮提取物对纯化环氧合酶(COX-1)活性的作用。根据制造商的说明书，纯化酶、血红素和试验提取物在检测缓冲液中混合，并在室温下摇动孵育15分钟。孵育之后，加入花生四烯酸和比色底物开始反应。通过比色板在590nm处读取评价颜色变化。COX-1活性的抑制百分比通过与未处理的对照物比较进行计算，以测定试验提取物抑制纯化酶活性的能力。

细胞因子阵列(包括VEGF、IL-1β、IL-6、IL-10和IL-2)：望春玉兰花提取物已经显示出抑制VEGF产生。厚朴树皮提取物已经显示出抑制与炎症和抗炎应答有关的细胞因子、IL-1β、IL-6、IL-10和IL-2。VEGF是刺激血管生成和血管再生并可能促成炎症、发红和酒糟鼻的细胞因子。IL-1β、IL-2和IL-6是可能促成炎症的细胞因子，而IL-10一般被视为抗炎性细胞因子，但是在某些研究中已经显示促进炎症。采用蛋白质检测试验测定VEGF、IL-1β、IL-6、IL-10和IL-2产生的抑制，该蛋白质检测试验将生物素化抗体应用于检测抗体的各种细胞因子。确定的是，望春玉兰花提取物以26％抑制VEGF的产生，厚朴树皮提取物以100％抑制IL-1β的表达，以95％抑制IL-6的表达，以88％抑制IL-10的表达，并以100％抑制IL-2的产生。

简略来说，将人表皮角化细胞培养至70-80％的融合度。吸出板中的培养基并加入0.025％的胰蛋白酶/EDTA。当细胞变圆时，轻敲培养皿以释放细胞。从培养皿中去除含有胰蛋白酶/EDTA的细胞并中和。将细胞在180xg下离心5分钟。细胞形成球团且上清液被吸出。获得的球团在EPILIFE^TM培养基(Cascade Biologics)中被再悬浮。该细胞以约10-20％的融合度被接种到6孔板中。在细胞变为约80％融合度之后吸出培养基，添加1.0ml的EPILIFE^TM,以及佛波酯(“PMA”)(已知的炎症诱导剂)，将试验组合物的稀释物添加至两个平行的孔中(即1.0％(100X储备中的100μl)和0.1％(100X储备中的10μl)的测试组合物被稀释为最终体积为1ml的EpiLife生长培养基)。轻轻地搅拌培养基以确保充分混合。另外，在存在或不存在附加PMA的情况下，向对照孔中添加1.0ml的EPILIFE^TM。在定量给料之后，将板在37±1℃和5.0±1％的CO₂中孵育约5小时。在该5小时的孵育之后，将所有培养基收集到锥形管中并在-70℃冷冻，之后将冷冻的培养基放置于干冰上。

在分析当日，将16面板杂交室连接至16面板FAST玻片，其与16抗细胞因子抗体(包含VEGF、IL-1β、IL-6,IL-10和IL-2)以及实验对照组(Whatman BioSciences)一式三份阵列，将玻片置于用于加工的FAST框架中(每框架4个玻片)。在室温下使用70ml的S&S蛋白质阵列阻断缓冲液(Whatman Schleicher and Scheull)将阵列阻断15分钟。移除阻断缓冲液，并向每个阵列添加70ml各自的上清液试样。在轻微振动下，阵列在室温孵育3小时。使用TBS-T将阵列清洗3次。使用70ml混合型抗体处理阵列，该混合型抗体含有对应于每个阵列的捕获抗体的一个生物素化抗体。在轻微振动下，阵列在室温孵育1小时。使用TBS-T将阵列清洗3次。在轻微振动下，在室温使用70ml含有链霉亲和素-Cy5轭合物的溶液孵育阵列1小时。使用TBS-T将阵列清洗3次，在去离子水中快速冲洗并干燥。

玻片在Perkin-Elmer ScanArray 4000共焦荧光成像系统中成像。使用ImagingResearch ArrayVision软件保存并分析阵列图像。简略来说，通过去除背景信号测定点强度。将来自每个样品条件的点的副本平均，然后和适当的对照组比对。

抗氧化(AO)分析：豌豆提取物以及橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2、棕榈酰四肽-7的组合已经显示出具有抗氧化能力。活生物体的抗氧化系统包含酶如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶；高分子如白蛋白、血浆铜蓝蛋白和铁蛋白；和大量小分子，包括抗坏血酸、α-生育酚、β-胡萝卜素、还原型谷胱甘肽、尿酸和胆红素。內源性抗氧化剂和源自食物的抗氧化剂的总和表示细胞外流体的总抗氧化能力。所有不同抗氧化剂的协作提供比单独的任何单个化合物更强的对抗反应性氧或氮自由基侵袭的保护。因此，总抗氧化能力与测量单独组分获得的抗氧化能力相比可以给出更相关的生物信息，因为其考虑了血浆和体液中存在的所有抗氧化剂的累积效应。在使用来自Cayman Chemical(安娜堡，密歇根美国)的抗氧化能力试剂盒#709001测量试验化合物和提取物的总抗氧化能力的体外生物分析中，观测试验化合物和提取物的抗氧化能力。确定的是，豌豆提取物具有Trolox的抗氧化能力的34％，橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合具有Trolox的抗氧化能力的47％。

简略来说，来自Cayman Chemical(安娜堡，密歇根美国)的抗氧化能力试剂盒#709001依赖于样品中抗氧化剂抑制(2,2'-联氮-二-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐])被正铁肌红蛋白氧化成·+的能力。样品中抗氧化剂预防ABTS氧化的能力与Trolox，水溶性生育酚类似物的能力进行比较，并以Trolox的摩尔当量进行定量。方案可根据制造商建议进行。

抗氧化能力(ORAC)-荷花玉兰树皮提取和厚朴树皮提取物已经显示出具有抗氧化能力。活生物体的抗氧化系统包含酶如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶；高分子如白蛋白、血浆铜蓝蛋白和铁蛋白；和大量小分子，包括抗坏血酸、α-生育酚、β-胡萝卜素、还原型谷胱甘肽、尿酸和胆红素。內源性抗氧化剂和源自食物的抗氧化剂的总和表示细胞外液的总抗氧化能力。所有不同抗氧化剂的协作提供比单独的任何单个化合物更强的对抗反应性氧或氮自由基侵袭的保护。因此，总抗氧化能力与测量单独组分获得的抗氧化能力相比可以给出更相关的生物信息，因为其考虑了血浆和体液中存在的所有抗氧化剂的累积效应。确定的是，荷花玉兰树皮提取物具有Trolox的抗氧化能力的85％，厚朴树皮提取物也具有相对于对照组提高的抗氧化能力，这说明荷花玉兰树皮提取物和厚朴树皮提取物能够减少氧化试剂(氧化剂)。

通过氧自由基吸收(或吸收率)能力(ORAC)试验测定抗氧化能力。该试验定量了抑制已知导致损害细胞(例如皮肤细胞)的氧化剂如氧自由基的作用的程度及持续时间。使用Zen-Bio ORAC抗氧化分析试剂盒(#AOX-2)测定对照组和提取物的ORAC值。简略来说，该试验测量了荧光素荧光随时间的损失，其归因于通过AAPH(2,2'-偶氮双-2-甲基丙脒，二盐酸盐)分解获得的过氧自由基形成。Trolox，水溶性维生素E类似物，以剂量依赖方式作为抑制荧光素衰变的阳性对照。

实施例3

(组合物的临床功效)

眼周皮肤的外观和状况-表1中描述的组合物已经显示出在志愿受试者中能够：增加皮肤紧实度和弹性；改善皮肤纹理和清透度；减轻细纹和/或皱纹、眼袋、黑眼圈、幼纹和下垂；改善眼周区域的整体外观。该研究的目的是评价表1中的组合物对于眼部区域老化/光老化皮肤的功效。该研究通过视觉分级和生物仪器测量评价皮肤。确定的是，在处理4周之后，表1中的组合物从统计上地增加了皮肤紧实度，在12周也检测到这种增加。在第8周皮肤的净弹性也统计上地增加。12周后，相比于基线观察到以下明显改善：改善的皮肤纹理和清透度；减轻的细纹和/或皱纹、眼袋、黑眼圈、幼纹和下垂；改善的眼周区域的整体外观。

简略来说，志愿人受试者参与12周、表1中组合物用于眼周的一元评价。根据使用说明，志愿者将试验产品施用于他们的眼周区域皮肤12周。对于所有视觉评价使用0至9级的视觉分级：0＝无，最理想的情况；1-3＝轻微的；4-6＝适中的；和7-9＝严重的，最不理想的情况。使用皮肤弹性测量仪测量皮肤紧实度和弹性。使用5-Flash Imaging Station捕获每个受试者脸部的高分辨率可见的、平行极化的、横向极化的、蓝色荧光和紫外图像用于评价。

实施例4

(附加分析)

可以用于测定在本说明书全文和权利要求书中所公开的任一成分、或任意成分的组合或具有该成分的组合的组合物的功效的检测，可以通过本领域普通技术人员已知的方法进行测定。以下是可以在本发明的环境中使用的非限制性检测。应认识到，可以使用其它测试方法，包括例如客观的和主观的方法。

弹性蛋白刺激分析：弹性蛋白是有助于皮肤在伸展和收缩之后恢复形状的结缔组织蛋白。弹性蛋白还是用于需要储存机械能之处的重要的承载蛋白。在由赖氨酰氧化酶催化的反应中，弹性蛋白通过连接多个可溶性弹性蛋白原蛋白分子而形成。通过使用针对弹性蛋白的免疫荧光抗体对培养的人类成纤维细胞进行染色，弹性蛋白分泌和弹性蛋白纤维可以在培养的人成纤维细胞中观测，通过使用针对弹性蛋白的免疫荧光抗体染色培养的人成纤维细胞。

基质金属蛋白酶3和9(MMP3；MMP9)的活性分析：体外基质金属蛋白酶(MMP)抑制分析。MMP是胞外蛋白酶，其凭借广泛的底物特异性在许多正常状态和疾病状态起作用。MMP3底物包括胶原蛋白、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白；而MMP9底物包括胶原蛋白VII、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白。使用来自BioMol International的用于MMP3(AK-400)和MMP-9(AK-410)的Colorimetric Drug Discovery试剂盒，该分析设计用于测量MMP的蛋白酶活性，使用含硫多肽作为显色底物(Ac-PLG-[2-巯基-4-甲基-戊酰基]-LG-OC2H5)5,6。MMP切割位点肽键由含硫多肽中的硫酯键替代。该键被MMP水解产生巯基，其与DTNB[5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)，Ellman试剂]反应生成2-硝基-5-硫代苯甲酸，可以通过其在412nm处的吸光度进行检测(在pH 6.0和高于7时，ε＝13600 M-1cm-1)。可以分析本说明书公开的活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物

环氧合酶(COX)分析：体外环氧合酶-1和-2(COX-1、-2)抑制分析。COX是展现环氧合酶和过氧化物酶两者且与炎症应答有关的的双功能酶。环氧合酶活性将花生四烯酸转换为过氧化氢内过氧化物(前列腺素G2；PGG2)，过氧化物酶组分将内过氧化物(前列腺素H2；PGH2)还原为相应的醇，前列腺素的前体、凝血噁烷和环前列腺素。该COX抑制筛选分析测量环氧合酶的过氧化物酶组分。通过观测氧化N,N,N',N'-四甲基-对苯二胺(TMPD)的出现比色检测过氧化物酶的活性。该抑制筛选分析可包括COX-1和COX-2酶两者以筛选同工酶特异性抑制剂。比色的COX(绵羊的)抑制剂筛选分析(#760111，Cayman Chemical)可以用于分析本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物对纯化环氧合酶(COX-1或COX-2)活性的效果。根据制造商的说明书，纯化酶、血红素和试验提取物可以在分析缓冲液中混合，并在室温下摇动孵育15分钟。孵育之后，可以加入花生四烯酸和比色底物开始反应。通过比色板在590nm测定可以评估颜色变化。COX-1或COX-2活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照物比较进行计算，以测定试验提取物抑制纯化酶活性的能力。

脂肪氧合酶(LO)分析：体外脂肪氧合酶抑制分析。LO是非血红素的含铁加双氧酶，其催化分子氧加成到脂肪酸。亚油酸盐/酯和花生四烯酸盐/酯是植物和动物中LO的主要底物。然后，花生四烯酸可以转换为羟基二十三烯(HETE)酸衍生物，其随后转换为白三烯，有效的炎症介质。该分析通过测量利用花生四烯酸培养的脂肪氧合酶(5-、12-或15-LO)产生的氢过氧化物提供精确的和方便的用于筛选脂肪氧合酶抑制剂的方法。Colorimetric LOInhibitor筛选试剂盒(#760700，Cayman Chemical)可以用于确定本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物抑制酶活性的能力。纯化15-脂肪氧合酶和试验成分可以在分析缓冲液中混合，并在室温下摇动孵育10分钟。孵育之后，可以加入花生四烯酸开始反应，混合物在室温下再孵育额外10分钟。可以加入比色底物终止催化，颜色变化通过荧光板在490nm测定进行评估。脂氧合酶活性的抑制百分比可以相比于未处理的对照组进行计算，以确定本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物抑制纯净酶活性的能力。

油控制分析：用于测量皮脂腺中皮脂分泌的减少和/或皮脂腺中皮脂产生的减少的分析可以通过使用本领域普通技术人员已知的标准技术进行分析。在具体的例子中，可以使用前额。在一段固定天数(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或更多天)，将本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物可以每天一次或两次地施用到前额的一部分，而前额的其他部分不用所述组合物处理。在一段固定的天数期满后，皮脂分泌于是可以通过将细吸墨纸施用到经处理的和未处理的前额皮肤上进行分析。这是通过首先用湿织物和干织物从处理过的和未处理的区域去除任何皮脂完成的。然后可以将吸墨纸施用到处理过的和未处理的前额区域，可以绕着前额放置橡皮筋以轻轻地将吸墨纸压到皮肤上。2小时后，可以移去吸墨纸，使其干燥，然后进行透照。越深的吸墨纸对应于越多的皮脂分泌(或较浅的吸墨纸对应于减少的皮脂分泌)。

红斑分析：测量皮肤发红减少的分析可以使用Minolta Chromometer进行评估。皮肤红斑可以通过在受试者前臂施用0.2％的十二烷基硫酸钠溶液来引发。该区域用封闭贴片保护24小时。24小时后，除去贴片，可以使用Minolta Chroma Meter的a^*值对刺激引发的发红进行评估。a^*值测量肤色在红色区域的变化。读取之后，立即使用本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物处理该区域。可以定期进行重复测量以确定制剂减少发红和刺激的能力。

皮肤水分/水合分析：皮肤水分/水合的益处可以通过利用以Nova Dermal PhaseMeter进行的阻抗测量进行测量。阻抗计测量了皮肤水分含量的变化。皮肤外层具有不同的电性质。当皮肤干燥时，其导电很差。当其变得更加含水时，则增加了导电性。因此，皮肤阻抗(与导电性有关)的变化可以用于评价皮肤水合的变化。在每个试验日，可以根据仪器说明校准单元。还可以对温度和相对湿度进行标记。对受试者可以进行如下评估：测量前其可以在具有确定湿度(例如30-50％)和温度(例如68℃-72℃)的室内进行平衡。在面部的每一侧进行三个独立的阻抗测定，记录并平均。阻抗计可以使用T5设定，其对施用到面部的每五秒的阻抗值进行平均。变化可以用统计方差和显著性进行报道。根据该方法，可以分析本说明书公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物。

皮肤清透度和雀斑与老年斑减少的分析：皮肤清透度和雀斑与老年斑减少使用Minolta Chromometer进行评价。肤色改变可以使用Minolta Chroma Meter的a^*值进行评估以确定由于产品处理引起刺激的可能性。a^*值测量肤色在红色区域的变化。这用于确定本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物是否引发刺激。测量可以在每侧面部进行并进行平均，作为左边和右边面部的值。皮肤清透度也可以使用Minolta Meter进行测量。测量是Minolta Meter的a^*、b、和L值的组合，并与皮肤亮度有关，而且非常好的对应皮肤的光滑度和水合。皮肤测定如上进行。在一个非限制性方面，皮肤清透度可以描述为L/C，其中C是色度并定义为(a²+b²)^1/2。

皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和肤色分析：皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和肤色可以用临床分级技术进行评估。例如，皮肤干燥的临床分级可以通过5分标准Kligmanscale确定：(0)皮肤是柔软和湿润的；(1)皮肤呈现正常而没有可见干燥；(2)皮肤触摸感觉轻微干燥而没有可见剥落；(3)皮肤感觉干燥、坚韧并且具有有些起皮的发白外观；以及(4)皮肤感觉非常干燥、粗糙并且具有起皮的发白外观。评估可以由两个临床医师独立进行并平均。

肤色临床分级分析：肤色的临床分级可以通过10分模拟数值标度实施：(10)均匀、粉棕色颜色的平滑皮肤。手持放大镜检查时没有暗的、发红的或起皮的斑块。皮肤的微观纹理摸上去非常均匀；(7)不用放大镜观察到均匀的肤色。没有起皮区域，但有由于色素淀积或红斑引起的轻微变色。没有直径大于1cm的变色；(4)轻易地注意到皮肤变色和不均匀纹理。轻微起皮。某些区域摸上去粗糙的皮肤；以及(1)不均匀的皮肤着色和纹理。多个区域起皮和变色，色素减退或发红或暗色的斑点。直径超过1cm的大面积的不均匀着色。评估由两个临床医师独立进行并平均。

皮肤平滑度的临床分级分析：皮肤光滑度的临床分级可以通过10分模拟数值标度进行分析：(10)光滑的，皮肤是湿润的和反光的，手指划过表面时没有阻力；(7)一定程度光滑的，轻微阻力；(4)粗糙的、可见地改变的，摩擦时有摩擦力；以及(1)粗糙的、片状的、不均匀的表面。评估由两个临床医师独立进行并平均。

用Packman等人(1978)公开的方法进行的皮肤光滑度和皱纹减少的分析：皮肤光滑度和皱纹减少也可以通过使用Packman等人(1978)公开的方法进行可视化评估。例如，每次受试者拜访时，对每位受试者的表面面部线条(SFL)的深度、浅度和总量都可以进行认真评分和记录。通过将数量因子乘以深度/宽度/长度因子得到数字分数。获得眼睛区域和嘴巴区域(左侧和右侧)的分数，并加到一起作为总皱纹分数。

用Hargens Ballistometer进行的皮肤紧实度分析：皮肤紧实度可以用HargensBallistometer进行测量，其是通过在皮肤上落下小物体并记录前两个反弹峰来评估皮肤弹性和紧实度的装置。Ballistometry是使用相对钝的探头(4平方毫米-接触面积)的小轻量探测器。探测器轻轻地穿透进入皮肤，得到依赖于皮肤外层性质的测量，该皮肤外层包括角质层和外表皮以及部分真皮层。

用Gas Bearing Electrodynamometer进行的皮肤柔软度/柔韧性分析：皮肤柔软度/柔韧性可以使用Gas Bearing Electrodynamometer进行评估，其是测量皮肤应力/张力性质的仪器。皮肤的黏弹性与皮肤保湿有关。可以通过用双面胶将探测器附着在皮肤表面实现对脸颊区域预定位点的测量。可以将大约3.5gm的力平行施加于皮肤表面，精确地测量皮肤的位移。然后可以计算皮肤柔韧性，并表达为DSR(动态弹簧刚度，以gm/mm计)。

用复制品进行的线条和皱纹的显现分析：皮肤上线条和皱纹的显现可以使用复制品进行评估，所述复制品是皮肤表面的印模。可以使用如硅橡胶的材料。复制品可以通过图像分析进行分析。线条和皱纹的可见性变化可以通过利用硅复制品形成受试者的脸并用计算机图像分析系统分析复制品图像进行客观地定量。复制品可以从眼睛区域和颈部区域获得，并用数码相机以低照明入射角进行拍摄。数字图像可以用图像处理程序进行分析并确定复制品被皱纹和细纹覆盖的区域。

用表面光度仪/记录针的方法进行的皮肤表面轮廓分析：皮肤表面轮廓可以通过使用表面光度仪/记录针的方法进行测量。这包括要么闪光要么拖动记录针穿过复制品表面。记录针的垂直位移通过距离传感器可以录入计算机，在扫描复制品的一定距离后，皮肤轮廓的分析可以以二维曲面产生。该扫描可以沿着固定的轴重复任意次数以产生模拟的皮肤3-D图像。使用记录针技术可以获得十个随机的复制品截面，并组合产生平均值。感兴趣的值包括Ra，其为通过积分相对于平均轮廓高度的轮廓高度计算得到的所有粗糙度(高度)值的算术平均数。Rt其为最高峰和最低谷之间的最大垂直距离，Rz其为平均峰振幅减去平均峰高度。数值以用mm为单位标定的数值给出。设备应在每次使用前通过扫描已知数值的金属标准物进行标准化。Ra值可以通过下式计算：R_a＝标准化粗糙度；l_m＝横向(扫描)长度；y＝相对于平均轮廓高度的轮廓位置的绝对值(x-轴)。

MELANODERM^TM分析：在其他非限制性方面，可通过使用皮肤模拟例如MELANODERM^TM来评价本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的功效。黑素细胞，皮肤类似物中细胞的一种，当暴露于L-二羟苯基丙氨酸(L-DOPA)(黑色素的前体)时肯定着色。皮肤模拟MELANODERM^TM可以使用多种基质进行处理，该基质包含本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物，或者使用单独的基质作为对照。或者，皮肤类似物的未处理样品可以用作对照物。

丝聚合蛋白的产生：可测定在角化细胞中的由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的丝聚合蛋白产生的变化。丝聚合蛋白是皮肤中天然保湿因子(Natural Moisturizing Factor，NMF)的前体。增加的NMF提高了皮肤中的水分含量。使用分析角化细胞溶解产物中的丝聚合蛋白浓度的生物测定可以测定在经处理和未经处理的角化细胞中的丝聚合蛋白产生。可以用于定量丝聚合蛋白产生的生物分析的非限制性实例为Simon^TM免疫印迹方案。对于每个样品，正常人表皮角化细胞(normal human epidermal keratinocyte，NHEK)在EPI-200–Mattek生长培养基中生长，该生长培养基含有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙。处理之前，NHEK在37℃、5％的CO₂的生长培养基中过夜孵育。然后，NHEK在含有1％的试验化合物/提取物或无化合物/提取物(阴性对照)的生长培养基中培养24至36小时。然后可以清洗NHEK，收集，并储存在冰上或更冷的物体上，直至在冰上使用裂解缓冲液和声波降解法细胞裂解。样品的蛋白质浓度可以测定并用于标准化样品。裂解物可在-80℃储存直至在定量分析中使用。

Simon^TM免疫印迹生物测定使用了定量的免疫印迹免疫分析技术，该技术使用了对丝聚合蛋白特异的抗体来定量试样中的丝聚合蛋白。将细胞样品裂解并针对蛋白质浓度进行标准化。然后使用毛细管电泳可以将标准化样品和分子量标准品装载于变性蛋白质分离凝胶并在其上跑。使用对丝聚合蛋白特异的初代抗体对凝胶中的蛋白质进行固定化以及免疫探测。固定化蛋白质于是可以用与初代抗体结合的酶联检测抗体进行免疫探测。然后，向固定化蛋白质中添加化学发光底物溶液以使得化学发光显色与在固定化中结合的丝聚合蛋白的量成比例。在特定时间终止化学发光显色，可以测量化学发光信号的强度并与阳性对照和阴性对照比对。

闭合蛋白的产生：可测定在角化细胞中的由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的闭合蛋白产生的变化。闭合蛋白是对紧密连接的形成和皮肤的水分屏障功能关键的蛋白。如何确定在经处理的和未经处理的角化细胞中闭合蛋白产生的非限制性实例为通过使用分析角化细胞裂解物中闭合蛋白浓度的生物测定。使用Simon^TM免疫印迹方案进行该生物测定。对于样品，在37℃下和5％的CO₂中，来自Life Technologies(C-005-5C)的成人表皮角化细胞(humanepidermal keratinocyte，HEKa)在Epilife生长培养基中生长24小时，Epilife生长培养基含有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙，补充以来自Life Technologies(S-101-5)的Keratinocyte Growth Supplement(HKGS)。HEKa然后在试验含化合物/提取物的生长培养基、用于阴性对照的不含化合物/提取物的生长培养基、或用于阳性对照的含1mM的CaCl₂的生长培养基孵育24至48小时。然后将HEKa清洗、收集并于冰或更冷的物体上储存直至使用裂解缓冲液和声波降解法裂解。可以确定样品的蛋白质浓度并用于标准化样品。裂解物在-80℃下存储直至在生物测试中使用。

Simon^TM免疫印迹生物分析使用定量的免疫印迹分析技术，该技术使用了对闭合蛋白特异性的抗体来定量检测样品中的闭合蛋白。将细胞样品裂解并针对蛋白质浓度进行标准化。然后将标准化样品和分子量标准品使用毛细管电泳装载于变性蛋白质分离凝胶并在其上跑。然后，使用针对闭合蛋白特异性的初代抗体对凝胶中的蛋白质进行固定化以及免疫探测。将固定化蛋白质用与初代抗体结合的酶联检测抗体免疫探测。然后向固定化蛋白质中添加化学发光底物溶液以使得化学发光显色与在固定化中结合的闭合蛋白的量成比例。可在特定时间终止化学发光显色，可以测定化学发光信号的强度并与阳性对照和阴性对照比对。

角化细胞单层渗透性：可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的角化细胞单层的渗透性变化。角化细胞单层渗透性是皮肤屏障完整性的量度。作为非限制性实例，使用Millipore(ECM642)的体外血管渗漏试验可以确定在经处理和未经处理的角化细胞中的角化细胞单层渗透性。该试验分析了内皮细胞吸附、输送和渗透。简略来说，来自Life Technologies(C-005-5C)的成人表皮角化细胞可被接种到在收集孔内的多孔胶原蛋白涂覆的膜上。在37℃下和5％的CO₂中，角化细胞在Epilife生长培养基中孵育24小时，该Epilife生长培养基含有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙，补充来自Life Technologies(S-101-5)的角化细胞补充物(Keratinocyte Growth Supplement，HKGS)。孵育时间使得细胞形成单层并封闭膜孔。然后将培养基替换成含有(试验样品)或不含有(未处理对照)试验化合物/提取物的新鲜培养基，该角化细胞在37℃下和5％的CO₂中培养额外48小时。在存在/不存在试验化合物/提取物的孵育之后，为了测定角化细胞单层渗透性，培养基被替换成含有高分子量异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate，FITC)-Dextran的新鲜培养基，该角化细胞在37℃下和5％的CO₂中培养4小时。在孵育4小时期间，FITC可以以与单层膜的渗透性成比例的速率穿过该角化细胞单层和多孔膜进入收集孔。在孵育4小时之后，可确定细胞存活能力和收集孔中FITC的含量。对于FITC的含量，收集收集孔中的培养基，当在520nm被激发时，在480nm(Em)处测定培养基的荧光。可以通过以下等式测定与未处理的对照组相比的渗透性百分比和百分比的变化：渗透性百分比＝((试样的平均Ex/Em)/未处理对照的平均Ex/Em)*100；百分比的变化＝试样的渗透性百分比–未处理对照的渗透性百分比。

透明质酸酶活性的抑制：可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的透明质酸酶活性变化。透明质酸酶是分解HA的酶。HA是与基质结构稳定性有关的多糖，还与向组织和细胞提供膨压有关。作为非限制性实例，可以使用Sigma-Aldrich protocol#EC 3.2.1.35修改的体外方案测定透明质酸的活性。简略来说，向含有试验化合物或对照组的微孔板反应孔中添加来自Sigma-Aldrich的1-S型透明质酸(H3506)。可使用鞣酸作为阳性对照抑制剂，对于对照酶不添加试验化合物，可以使用含有试验化合物或阳性对照但没有透明质酸的孔作为背景阴性对照。在添加底物(HA)之前，孔在37℃下孵育10分钟。添加底物，反应在37℃下孵育45分钟。然后将每个反应溶液的一部分转移至醋酸钠和pH3.75的醋酸溶液中，并在其中轻轻混合以终止那部分的反应(终止孔)。在一部分的反应溶液添加至终止孔之后，终止孔和反应孔应该都包含相同体积的溶液。终止孔和反应孔都在室温孵育10分钟。然后，对终止孔和反应孔都测定600nm处的吸光度。可通过下式计算抑制：抑制剂(或对照)活性＝(抑制剂终止孔在600nm的吸光度–抑制剂反应孔在600nm的吸光度)；初始活性＝对照酶在600nm的吸光度；抑制百分比＝[(初始活性/抑制剂活性)*100]-100。

过氧化物酶体增殖剂-激活的受体γ(Peroxisome Proliferator-ActivatedReceptor Gamma,PPAR-γ)的活性：可以测量由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的PPAR-γ活性变化。PPAR-γ是对皮质产生的关键的受体。作为非限制性实例，可以使用分析试验化合物或组合物抑制配体结合的能力的生物分析测定PPAR-γ的活性。简略来说，可以使用荧光小分子泛-PPAR配体，由LifeTechnologies(PV4894)获得的FLUORMONE^TM Pan-PPAR Green，可以用于测定试验化合物或组合物是否能够抑制配体与PPAR-γ结合。样品孔含有PPAR-γ和荧光配体和二者之一：试验化合物或组合物(试验)；参考抑制剂；罗格列酮(阳性对照)；或者没有试验化合物(阴性对照)。孔被孵育一段设定的时间以使得配体有机会与PPAR-γ结合。然后可以测定每个样品孔的荧光偏振并与阴性对照孔比对以确定试验化合物或组合物的抑制百分比。

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本文所公开和要求保护的所有组合物和/或方法可以根据本公开制得和实现，无需过度的实验。当优选的实施方案已经描述了本发明的组合物和方法，各种可以施用于本文所描述组合物和/或方法以及方法的步骤或步骤的顺序中，而不脱离本发明的构思、精神和范围的变化，对于本领域技术人员是明显的。更具体而言，明显地，化学和生理两方面都相关的某些试剂可以替代本文所描述的试剂，同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在由所附权利要求限定的本发明的构思、范围和概念内。

参考文献

以下参考文献在一定程度上提供示例性程序或对本文所陈述细节的其他补充细节，其通过引用明确地并入本文。

Cosmetic Ingredient Dictionary，第三版，CTFA，1982

International Cosmetic Ingredient Dictionary，第四版，CTFA，1991

International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook，第十版，CTFA，2004

International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook，第十二版，CTFA，2008

Claims (10)

1.一种改善皮肤状况或外观的方法，其中紧实度提高、亮度提高、色素沉着减轻、黑色素生成得到抑制、红斑减轻、酒槽鼻减轻、黑眼圈减轻、清透度改善、细纹和/或皱纹的外观减轻、纹理改善、眼袋减轻、下垂减轻、幼纹减轻、弹性增加、炎症减轻和/或眼周皮肤的整体外观改善，所述方法包括将局部用组合物施用于皮肤，所述局部用组合物包含：

积雪草提取物或积雪草提取物和积雪草分生组织细胞培养物的组合；

荷花玉兰树皮提取物或厚朴树皮提取物；

橙皮苷甲基查尔酮；

豌豆提取物；

柚果皮提取物；

望春玉兰花提取物；

二肽-2；

棕榈酰四肽-7；

三肽-1。

2.根据权利要求1所述的方法，其中积雪草提取物为乙醇提取物，荷花玉兰树皮提取物为醇提取物，厚朴树皮提取物为超临界流体–CO₂提取物，豌豆提取物为水提取物，柚果皮提取物为包含黄酮的醇提取物，和/或望春玉兰花提取物为包含木酚素的水/丙二醇提取物。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含有效量的：

积雪草提取物，以促进透明质酸的合成、增加层粘连蛋白的产生、抑制黑色素生成和/或降低酪氨酸酶的活性；

积雪草分生组织细胞培养物，以增加透明质酸的产生和/或降低酪氨酸酶的活性；

荷花玉兰树皮提取物，以抑制TNFα、提供抗氧化能力、增加层粘连蛋白产生和/或抑制黑色素生成；

厚朴树皮提取物，以提供抗氧化能力、抑制黑色素生成、抑制炎性细胞因子表达、抑制TNF-α、抑制IL-1β、抑制IL-6、抑制IL-10、抑制IL-2和/或抑制COX-1；

豌豆提取物，以提供抗氧化能力、增加胶原蛋白I、抑制弹性蛋白酶和/或增加纤维连接蛋白的产生；

柚果皮提取物，以增加层粘连蛋白的产生和/或破坏内皮细胞管的形成；

望春玉兰花提取物，以抑制VEGF和/或破坏内皮细胞管的形成；

三肽-1，以增加胶原蛋白I的产生和/或增加透明质酸的产生；

和/或橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合，以提供抗氧化能力、增加层粘连蛋白的产生和/或抑制MMP1。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含：

0.01重量％至1重量％的积雪草提取物或0.01重量％至1重量％的积雪草提取物和0.0005重量％至0.1重量％的积雪草分生组织细胞培养物的组合；

0.01重量％至1重量％的荷花玉兰树皮提取物或厚朴树皮提取物；

0.01重量％至1重量％的橙皮苷甲基查尔酮；

0.001重量％至0.5重量％的豌豆提取物；

0.001重量％至0.5重量％的柚果皮提取物；

0.0005重量％至0.1重量％的望春玉兰花提取物；

0.0001重量％至0.1重量％的二肽-2；

0.00001重量％至0.01重量％的棕榈酰四肽-7；

0.000001重量％至0.001重量％的三肽-1。

5.一种配制为改善皮肤状况或外观的局部用组合物，包含：

积雪草提取物或积雪草提取物和积雪草分生组织细胞培养物的组合；

荷花玉兰树皮提取物或厚朴树皮提取物；

橙皮苷甲基查尔酮；

豌豆提取物；

柚果皮提取物；

望春玉兰花提取物；

二肽-2；

棕榈酰四肽-7；

三肽-1。

6.根据权利要求5所述的局部用组合物，其中所述组合物包含有效量的：

积雪草提取物，以促进透明质酸的合成、增加层粘连蛋白的产生、抑制黑色素生成和/或降低酪氨酸酶的活性；

积雪草分生组织细胞培养物，以增加透明质酸的产生和/或降低酪氨酸酶的活性；

荷花玉兰树皮提取物，以抑制TNFα、提供抗氧化能力、增加层粘连蛋白产生和/或抑制黑色素生成；

厚朴树皮提取物，以提供抗氧化能力、抑制黑色素生成、抑制炎性细胞因子表达、抑制TNF-α、抑制IL-1β、抑制IL-6、抑制IL-10、抑制IL-2和/或抑制COX-1；

豌豆提取物，以提供抗氧化能力、增加胶原蛋白I、抑制弹性蛋白酶和/或增加纤维连接蛋白的产生；

柚果皮提取物，以增加层粘连蛋白的产生和/或破坏内皮细胞管的形成；

望春玉兰花提取物，以抑制VEGF和/或破坏内皮细胞管的形成；

三肽-1，以增加胶原蛋白I的产生和/或增加透明质酸的产生；

和/或橙皮苷甲基查耳酮、二肽-2和棕榈酰四肽-7的组合，以提供抗氧化能力、增加层粘连蛋白的产生和/或抑制MMP1。

7.根据权利要求5所述的组合物，包含：

0.01重量％至1重量％的积雪草提取物或0.01重量％至1重量％的积雪草提取物和0.0005重量％至0.1重量％的积雪草分生组织细胞培养物的组合；

0.01重量％至1重量％的荷花玉兰树皮提取物或厚朴树皮提取物；

0.01重量％至1重量％的橙皮苷甲基查尔酮；

0.001重量％至0.5重量％的豌豆提取物；

0.001重量％至0.5重量％的柚果皮提取物；

0.0005重量％至0.1重量％的望春玉兰花提取物；

0.0001重量％至0.1重量％的二肽-2；

0.00001重量％至0.01重量％的棕榈酰四肽-7；

0.000001重量％至0.001重量％的三肽-1。

8.根据权利要求5所述的组合物，其中积雪草提取物为乙醇提取物，荷花玉兰树皮提取物为醇提取物，厚朴树皮提取物为超临界流体–CO₂提取物，豌豆提取物为水提取物，柚果皮提取物为包含黄酮的醇提取物，和/或望春玉兰花提取物为包含木酚素的水/丙二醇提取物。

9.根据权利要求5所述的组合物，还包含35重量％至70重量％的水。

10.根据权利要求5所述的组合物，其中所述组合物是水包油乳液或油包水乳液。