CN108066276A - 一种含复合干细胞因子眼啫喱的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种含复合干细胞因子眼啫喱，由以下重量百分比的组分组成：A组分：甘油硬脂酸酯5％、丙二醇5％、透明质酸钠2％、水69.9％；B组分：茉莉花叶细胞提取物1％、七叶树提取物1％、橙皮苷甲基查尔酮1％、卡波姆0.3％、三乙醇胺1.5％、抗坏血酸3％；C组分：复合干细胞因子10％；D组分：苯氧乙醇0.3％。本发明配制富含多种植物提取物的眼啫喱，并将具有高活性的复合干细胞因子在低温条件下添加到眼啫喱中，既利用多种植物提取物对肌肤的调理作用，又利用干细胞因子的修复作用等特点，通过涂抹按摩，充分发挥干细胞眼啫喱的作用，达到祛除皱纹，恢复弹性眼肌的抗衰作用。

Description

一种含复合干细胞因子眼啫喱的制备方法

技术领域

本发明属于日用品技术领域，涉及一种眼啫喱的制备方法，尤其涉及一种含复合干细胞因子眼啫喱的制备方法。

背景技术

皱纹是人体新陈代谢表现在肌肤上的自然现象，是无法抗拒。当人体新陈代谢能力减弱，真皮中的纤维退化、萎缩，故而水分和皮下脂肪也随着流失，使皮肤失去良好的滋润而变得干燥、缺乏弹性，出现折痕，便形成了皱纹。人的健康状况、生活习惯、卫生条件等也都可以减缓和加快皱纹的形成和增多。眼部肌肤是脸部较为细腻敏感的肌肤，更容易因为表皮组织干燥变薄，及真皮层的胶原蛋白和弹力纤维补充不足而变细，失去网状支撑力而产生眼部皱纹。

在眼部抗衰老的化妆品，有多种方法，比如通过激素、植物提取物等配方对皮肤进行去皱处理，然而这些方法不能从根本上达到抵抗衰老的作用，激素使用对人体有危害，并且只能取得短期效果，长期使用加剧皮肤老化，而植物提取物的效果不明显，需要长期使用。

随着生活水平的不断提高，人们对皮肤的保养特别是眼部越来越受到重视。皮肤老化的根本原因在于新陈代谢过程中需要的各种营养物质数量和质量不能简单的从饮食中得到完全补充，并且细胞衰老后，新生细胞也无法及时生成。眼部皮肤过度衰老将表现出：眼肌松弛、皱纹增多加深、眼袋、黑眼圈等。目前，市面上用于眼部护理的产品大多保湿，功效停留在表皮层，作用有限。

发明内容

为解决现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种含复合干细胞因子眼啫喱的制备方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种含复合干细胞因子眼啫喱，由以下重量百分比的组分组成：

上述方案中，相关内容解释如下：

1、上述方案中，所述复合干细胞的制备方法为：在无菌条件下，收取健康的脐带、胎盘和脂肪组织；分离、培养并传代，获取脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脂肪间充质干细胞；再将脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脂肪间充质干细胞三种培养上清加入10％BSA作为赋形剂，充分溶解后，0.45um过滤装入冻干瓶中；将冻干瓶置于-80℃进行预冻，预冻24h后取出置于冻干机冻干。

2、上述方案中，所述脐带间充质干细胞和胎盘间充质干细胞是在无菌条件下，收取健康的脐带和胎盘，养在GMP实验室生物安全柜将胎盘剪碎至1.5-2.5mm³大小的组织块，将所述组织块分别置于T175培养瓶所盛的DMEM-LG细胞培养液中，置37℃，5％CO₂培养箱中培养；每隔2-3天换液，直至有大量干细胞爬出后，弃去组织块；细胞长满后，记为第一代，用0.28％胰酶进行消化传代；第二代后改用无抗生素DMEM-LG培养基进行培养；依次传代培养；获取脐带间充质干细胞和胎盘间充质干细胞；其中，所述DMEM-LG细胞培养液中含10％FBS、bFGF 5ng/mL、L-谷氨酰胺2mM、青霉素100U/mL、链霉素100μg/mL和两性霉素B 1μg/mL；所述无抗生素DMEM-LG培养基含10％FBS、bFGF 5ng/mL和L-谷氨酰胺2mM。

3、上述方案中，所述脂肪间充质干细胞是在无菌条件下，获取健康人的脂肪组织100mg；将所述脂肪组织放入超净台中，用PBS反复冲洗，直至无明显血污；收集到离心管中，加入0.5％的胰酶和0.1％胶原酶各10ml，将离心管密封，放入37℃恒温摇床中，180r×min^-1，震荡消化30min；消化后从所述恒温摇床上取出，在1000rpm的条件下离心10min，去上清，以去除悬浮脂肪；再用0.16mol/L的NH4Cl溶解红细胞，PBS洗涤3次，200目过滤，分离单个核细胞；移入DMEM-LG培养基进行培养；并进行传代，获取脂肪间充质干细胞。

一种根据权利要求1所述的含复合干细胞因子的眼啫喱的制备方法，包括以下步骤：将A组分的原料投料，加热至80℃，并搅拌溶解均匀；待A组分原料降到40℃时，按顺序加入B组分、C组分和D组分，并搅拌溶解均匀；静置，消泡24小时；出料、进行理化检验及卫生指标检测，检验合格后罐装。

干细胞是一类具有多向分化潜能及增殖能力的细胞，它可分泌出多种细胞因子，参与机体生长、调节。将这些细胞因子应用在眼部护理中，会促进眼部肌肤的再生修复，使得松弛的眼肌变得有弹性，更加饱满紧；暗沉的眼肌重现光彩；抚平眼肌皱纹等等。高能活性的复合干细胞因子含有多种干细胞分泌的细胞因子，其细胞因子的种类更加全面，用于眼啫喱的制备，将具有更好的使用效果。

茉莉花叶细胞提取物有清肝明目、防辐射损伤、抗衰老之功效，补充抗氧化物质有利于运动机体减少自由基的产生或加速其清除，以对抗自由基的副作用，加快体能恢复。对干燥缺水、过油以及敏感的肌肤、湿疹、发炎也有调理作用。

七叶树提取物通过抑制胶原蛋白酶等与肌肤纹理和完整性密切相关的酶类，促进微循环，维持细胞正常代谢，从而促使毛孔收敛，洁净，滋养，使肌肤细致无瑕。

橙皮苷甲基查尔酮可增强维生素C的作用，能抑制导致皮肤变黑的酪氨酸酶的作用，可用于治疗黑斑、雀斑等皮肤病。具有维持血管正常通透性，提高毛细血管抵抗力，增强毛细血管的弹性与韧性，使毛细血管渗透正常和防止动脉硬化所引起的血管紊乱；防止和治疗毛细血管出血，牙龈出血等。

与现有技术相比，本发明的优势在于：

本发明配制富含多种植物提取物的眼啫喱，并将具有高活性的复合干细胞因子在低温条件下添加到眼啫喱中，既利用多种植物提取物对肌肤的调理作用，又利用干细胞因子的修复作用等特点，通过涂抹按摩，充分发挥干细胞眼啫喱的作用，达到祛除皱纹，恢复弹性眼肌的抗衰作用。

本发明提供的干细胞眼啫喱，从细胞的角度，有针对性地补充活性细胞或活化已有细胞的功能。在皮肤众多的细胞中，皮肤干细胞是各种细胞更新换代的“种子细胞”，是可以产生各种类型细胞的原始细胞。干细胞眼啫喱通过表皮吸收后，深入到真皮层和皮下组织，全面激活皮肤内干细胞分化，快速地更新替换衰老的细胞。从而增加胶原分泌，改善皮肤弹性；促进蛋白的合成活性化，增强眼部皮肤柔软度；刺激肌层产生成纤维细胞及肌肤蛋白质，增加眼部肌肤紧致度及其弹性，增强眼部皮肤弹力，令眼部皮肤紧绷。吞噬色素消除色斑；有助抚平细纹、皱纹，重塑脸部轮廓，令肌肤变得紧致、柔嫩、细腻滋润，减少皱纹，使皮肤总体呈现年轻态。

具体实施方式

以下通过具体实施方式进一步描述本发明，但本发明不仅仅限于以下实施例。

实施例一：

一种含复合干细胞因子眼啫喱，由以下重量百分比的组分组成：

眼啫喱的配方表如下表所示

所述复合干细胞的制备方法为：在无菌条件下，收取健康的脐带、胎盘和脂肪组织；分离、培养并传代，获取脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脂肪间充质干细胞；再将脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脂肪间充质干细胞三种培养上清加入10％BSA作为赋形剂，充分溶解后，0.45um过滤装入冻干瓶中；将冻干瓶置于-80℃进行预冻，预冻24h后取出置于冻干机冻干。

所述脐带间充质干细胞和胎盘间充质干细胞是在无菌条件下，收取健康的脐带和胎盘，养在GMP实验室生物安全柜将胎盘剪碎至1.5-2.5mm³大小的组织块，将所述组织块分别置于T175培养瓶所盛的DMEM-LG细胞培养液中，置37℃，5％CO₂培养箱中培养；每隔2-3天换液，直至有大量干细胞爬出后，弃去组织块；细胞长满后，记为第一代，用0.28％胰酶进行消化传代；第二代后改用无抗生素DMEM-LG培养基进行培养；依次传代培养；获取脐带间充质干细胞和胎盘间充质干细胞；其中，所述DMEM-LG细胞培养液中含10％FBS、bFGF 5ng/mL、L-谷氨酰胺2mM、青霉素100U/mL、链霉素100μg/mL和两性霉素B 1μg/mL；所述无抗生素DMEM-LG培养基含10％FBS、bFGF 5ng/mL和L-谷氨酰胺2mM。

所述脂肪间充质干细胞是在无菌条件下，获取健康人的脂肪组织100mg；将所述脂肪组织放入超净台中，用PBS反复冲洗，直至无明显血污；收集到离心管中，加入0.5％的胰酶和0.1％胶原酶各10ml，将离心管密封，放入37℃恒温摇床中，180r×min^-1，震荡消化30min；消化后从所述恒温摇床上取出，在1000rpm的条件下离心10min，去上清，以去除悬浮脂肪；再用0.16mol/L的NH4Cl溶解红细胞，PBS洗涤3次，200目过滤，分离单个核细胞；移入DMEM-LG培养基进行培养；并进行传代，获取脂肪间充质干细胞。

一种根据权利要求1所述的含复合干细胞因子的眼啫喱的制备方法，包括以下步骤：将A组分的原料投料，加热至80℃，并搅拌溶解均匀；待A组分原料降到40℃时，按顺序加入B组分、C组分和D组分，并搅拌溶解均匀；静置，消泡24小时；出料、进行理化检验及卫生指标检测，检验合格后罐装。眼啫喱理化指标及卫生指标检测结果如下表所示：

实施例二：

眼啫喱的试用实例

市场上选取120例有较多眼纹的人群参加产品测试，随机分成三组，每组40人。

对照组：不使用任何眼部护理；

安慰组：使用纯净水早晚涂抹按摩；

实验组：使用本眼啫喱早晚涂抹按摩。

跟踪三组受试人员眼部情况1个月。

对照组的眼皱纹无任何改善，并且有加深的情况；安慰组在使用纯净水涂抹按摩，30天共有两例眼皱纹有轻微淡化；而实验组随着眼啫喱使用时间的延长，眼皱纹改善的例数逐渐增多，且眼皱纹改善情况良好。数据统计如下表所示：

组别	7天改善例数	15天改善例数	30天改善例数
				对照组	0	0	0
安慰组	0	1	2
				实验组	6	15	38

例1、范女士，年龄45岁，平时进行简单的基本眼部护理，皱纹随年龄增大加深严重，实验组试用一周后，可发现眼部皱纹明显减少，并随着时间增长，皱纹淡化程度越强。

例2、肖女士，年龄63岁，平时进行简单的基本眼部护理，皱纹随年龄增大加深严重，实验组试用6周后，可发现眼部皱纹逐渐淡化，并随着时间增长，皱纹淡化程度越强。

本发明配制富含多种植物提取物的眼啫喱，并将具有高活性的复合干细胞因子在低温条件下添加到眼啫喱中，既利用多种植物提取物对肌肤的调理作用，又利用干细胞因子的修复作用等特点，通过涂抹按摩，充分发挥干细胞眼啫喱的作用，达到祛除皱纹，恢复弹性眼肌的抗衰作用。

在此描述并且要求保护的本发明不限于在此披露的特定方面的范围，因为这些方面旨在作为本发明若干方面的说明。预期任何等效方面都处于本发明的范围内。实际上，除在此所示和描述的那些之外，本发明的不同修改对于本领域普通技术人员而言从前述描述将变得清楚。此类修改也旨在落入所附权利要求书的范围内。在有冲突的情况下，以包括定义的本披露为准。

Claims (5)

1.一种含复合干细胞因子眼啫喱，其特征在于：由以下重量百分比的组分组成：

。

2.根据权利要求1所述的含复合干细胞因子眼啫喱，其特征在于：所述复合干细胞的制备方法为：在无菌条件下，收取健康的脐带、胎盘和脂肪组织；分离、培养并传代，获取脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脂肪间充质干细胞；再将脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脂肪间充质干细胞三种培养上清加入10％BSA作为赋形剂，充分溶解后，0.45um过滤装入冻干瓶中；将冻干瓶置于-80℃进行预冻，预冻24h后取出置于冻干机冻干。

3.根据权利要求2所述的含复合干细胞因子眼啫喱，其特征在于：所述脐带间充质干细胞和胎盘间充质干细胞是在无菌条件下，收取健康的脐带和胎盘，养在GMP实验室生物安全柜将胎盘剪碎至1.5-2.5mm³大小的组织块，将所述组织块分别置于T175培养瓶所盛的DMEM-LG细胞培养液中，置37℃，5％CO₂培养箱中培养；每隔2-3天换液，直至有大量干细胞爬出后，弃去组织块；细胞长满后，记为第一代，用0.28％胰酶进行消化传代；第二代后改用无抗生素DMEM-LG培养基进行培养；依次传代培养；获取脐带间充质干细胞和胎盘间充质干细胞；其中，所述DMEM-LG细胞培养液中含10％FBS、bFGF 5ng/mL、L-谷氨酰胺2mM、青霉素100U/mL、链霉素100μg/mL和两性霉素B 1μg/mL；所述无抗生素DMEM-LG培养基含10％FBS、bFGF 5ng/mL和L-谷氨酰胺2mM。

4.根据权利要求2所述的含复合干细胞因子眼啫喱，其特征在于：所述脂肪间充质干细胞是在无菌条件下，获取健康人的脂肪组织100mg；将所述脂肪组织放入超净台中，用PBS反复冲洗，直至无明显血污；收集到离心管中，加入0.5％的胰酶和0.1％胶原酶各10ml，将离心管密封，放入37℃恒温摇床中，180r×min^-1，震荡消化30min；消化后从所述恒温摇床上取出，在1000rpm的条件下离心10min，去上清，以去除悬浮脂肪；再用0.16mol/L的NH4Cl溶解红细胞，PBS洗涤3次，200目过滤，分离单个核细胞；移入DMEM-LG培养基进行培养；并进行传代，获取脂肪间充质干细胞。

5.一种根据权利要求1所述的含复合干细胞因子的眼啫喱的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将A组分的原料投料，加热至80℃，并搅拌溶解均匀；待A组分原料降到40℃时，按顺序加入B组分、C组分和D组分，并搅拌溶解均匀；静置，消泡24小时；出料、进行理化检验及卫生指标检测，检验合格后罐装。