CN107184539A - 一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法及其应用，以占所述面膜液重量百分比计，所述面膜液包括高分子量透明质酸钠0.2%‑0.5%、甘油1%‑5%、干细胞培养液0.1%‑2.0%、纳米透明质酸钠0.05%‑0.5%、1,2‑己二醇0.3%‑1%、对羟基苯乙酮0.3%‑0.5%、黄原胶0.05%‑0.2%、辣木籽提取物1%‑5%、余量为去离子水。本发明的面膜液含有干细胞培养液，其中含有大量生长因子，超低分子量纳米透明质酸钠和辣木籽提取物能将干细胞培养液的护肤功效充分的发挥出来，在纳米透明质酸钠透皮吸收的同时将干细胞生长因子深入皮肤真皮层和皮下组织全面激活皮肤内干细胞分化，全面激活皮肤内干细胞分化，快速地更新替换衰老的细胞，从而改善皮肤，提高保湿和弹性，减少皱纹。本发明的面膜使用后无需清洗。

Description

一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法及其应用

技术领域

本发明属于化妆品领域，涉及面膜液产品，特别是涉及一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法及其应用。

背景技术

近年来，干细胞培养液在化妆品中的应用越来越受关注。干细胞是一种具有复制能力，可以分化成各种功能细胞的早期未分化细胞。干细胞的“干”译自英文“Stem”，意为“树”、“干”和“起源”，干细胞即起源细胞。人的机体在发展适应过程中，为弥补普通细胞在分化过程中由于高度分化而完全失去了再分裂的能力，最终衰老死亡的不足，而保留了一部分未分化的原始细胞，也就是干细胞。按其分化潜能大小，干细胞可分为三种类型：一类是全能干细胞，它具有形成完整个体的分化潜能，如胚胎干细胞；第二类是多能干细胞，它具有分化出多种细胞组织的潜能，但却失去了发育成完整个体的能力；第三类称为专能干细胞，只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化。此外，根据来源，干细胞分为胚胎干细胞和成体干细胞，成体干细胞是出生后存在于机体各种组织器官内的干细胞，如造血干细胞、神经干细胞、皮肤干细胞、肌干细胞、肝干细胞等。在众多类型的干细胞中与美容护肤保健最为密切是成体干细胞，尤其是间充质干细胞和皮肤干细胞等。

人体是由大约1800万亿个不同生理特性的细胞组成的“细胞社会”。每天都有1％-2％的细胞死亡，同时每天也有1％-2％的细胞新生。而干细胞就是这个“细胞社会”的母亲。随着个体生命的生长、成熟，体内各种成体干细胞逐步减少，甚至在某些组织器官中完全消失。体内的干细胞凋亡后，组织就不能再制造新细胞，细胞的新陈代谢机能也就减弱，衰老细胞越来越多，机体就变老了，直到死亡。所以，各种成体干细胞是维持机体器官生长和新陈代谢的源泉动力。此外，唤醒或激活休眠的成体干细胞，恢复其再造和修复功能能产生下列功效：再造机体退行器官组织结构，修复机体亚健康临床状态，再生机体器官和系统功能，维持机体青春活力，延缓机体衰老进程，维护身体健康和提高生活质量。

新陈代谢是人体生命活动的基本形式。通过新陈代谢，机体同环境之间不断地进行物质交流和转化，同时机体内物质又不断地进行分解、利用与更新，为个体的健康生存提供物质和能量。新陈代谢的生物基础是机体各器官和系统中健康、年青的具有不同生理功能的细胞。而干细胞就是这个细胞社会之母，组织器官的各种成体干细胞的质和量决定新陈代谢的功能和水平。干细胞对新陈代谢有重要的调节功能。研究统计证明，干细胞保健治疗能提高皮肤的新陈代谢，改善微循环的功效具有着重大应用价值。

干细胞是再造和恢复美丽容颜的根本细胞。因此，干细胞保健有显著的美容美肤效果：能使松驰下坠的皮肤光滑收紧，恢复皮肤弹性，减少皮肤皱纹和色素沉着。经统计发现，有相当多的保健者经干细胞保健获得的美容效果，不仅是皮肤得到再造的效果，更是机体多器官、多系统获得到再造修复，整体功能改善的外在表现。含人体脂肪干细胞培养液的提取物中含有多种生长因子，例如Fibronectin(纤维连接蛋白)具有皮肤伤口愈合功能的组成成份；VEGF(血管内皮生长因子)可促进血管内皮细胞增殖；bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)促进细胞再生，增加皮肤自身免疫功能，促成纤维细胞的代谢和胶原蛋白的形成，促进创伤愈合；HGF(肝细胞生长因子)调节细胞的生产，运动以及组织的形态发生；TGF-β(转化生长因子-β)对细胞的生长、分化和免疫功能都有重要的调节作用；KGF(角质细胞生长因子)参与皮肤上皮的损伤修复，具有损伤的防护功能；IGF-I(胰岛素素样生长因子)促进细胞分化，增殖，成长发育；Procollagen(胶原蛋白)支撑、修复、保护三重抗老化作用，可维持皮肤弹性。这些生产因子给皮肤传达更加丰富的营养，使皮肤变成具有弹性的健康皮肤。

干细胞培养液在护肤上有很多的优点，但现在由于价格昂贵，1公斤达到上万元到十几万元，且干细胞培养液对人体肌肤的渗透性还不够好，同时干细胞生长因子中的生物活性成分在真皮细胞和皮下组织细胞内容易被蛋白水解酶降解，所以在化妆品配方中的添加量达到较大的比例时(5％-15％)才会达到很好的效果，这样导致成本比较贵，不利于产品的推广和商业化。

透明质酸(hyaluronic acid,HA)是人体皮肤的组成成分之一，是人体内分布最广的一种酸性黏多糖，存在于结缔组织基质中，被誉为理想的天然保湿因子(naturalmoisturizing factor,NMF)。

辣木籽之所以被誉为一种极限植物之母，是因为它是原产于自然条件极其恶劣的非洲辣木树的种子。辣木树的种子可食用部分为种仁。口味似花生，苦涩，饮水后回甘明显。辣木在非洲已有4000多年栽培历史，传统医学认为辣木可以预防300多种疾病，并称为“神奇之树”。据有关资料介绍，辣木籽具有较好的降血压、降血脂、降血糖和抗癌的作用，排除宿便效果较为明显。由于辣木籽保水的本领很厉害，致使它能在极限干旱地区的恶劣环境中生长，因为它含有能抓住水分的活性成分，因此，辣木籽除少量用于种植之外，大量的用途是用来做生产原料，在食品、医药、保健、化妆品等领域都有着良好的应用价值，如可用于液体净化、提取制造保水、防晒等高档化妆品的活性物质等。根据国内外临床报告，经常食用辣木籽可增强免疫力、排毒、塑身、抗老化、抗癌、并对多种慢性及重大疾病都有极大的改善功效。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法及其应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种含干细胞培养液可免洗面膜液，以占所述面膜液重量百分比计，所述面膜液包括高分子量透明质酸钠(购自华熙福瑞达生物医药有限公司)0.2％-0.5％、甘油1％-5％、干细胞培养液(购自韩国Biostar公司的脂肪干细胞培养液型号，含1％-5％的人体脂肪细胞培养液提取物)0.1％-2.0％、纳米透明质酸钠(购自华熙福瑞达生物医药有限公司的纳诺HA型号)0.05％-0.5％、1,2-己二醇0.3％-1％、对羟基苯乙酮0.3％-0.5％、黄原胶0.05％-0.2％、辣木籽提取物1％-5％、余量为去离子水。使用此组分和配比按照相应工艺制备的面膜液都具有很好的护肤效果。所述干细胞培养液为人体脂肪干细胞培养2-4周的培养液，里面含有Fibronectin(纤维连接蛋白)，VEGF(血管内皮生长因子)，bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)，HGF(肝细胞生长因子)，TGF-β(转化生长因子-β)，KGF(角质细胞生长因子)，IGF-I(胰岛素素样生长因子)，Procollagen(胶原蛋白)等生长因子。

辣木籽提取物的提取方法：①将辣木籽洗净、干燥后粉碎，过50-70目筛，得到辣木籽粗粉，加入粗粉总重量10倍量的体积分数为50-70％的乙醇，微波提取3-8分钟，微波功率为400-500W，提取温度为40-50℃，将提取液过滤，按同样条件重复提取1次，合并提取液，再过滤得到辣木籽残渣；

②酶水解：取辣木籽残渣80-150g溶于1L蒸馏水中，该蒸馏水的温度为50℃，调节为碱性，然后加入3-8ml碱性蛋白酶，仍保持温度在50℃，碱性条件，酶解1小时后滴加氢氧化钠溶液，维持体系呈碱性；

③酶灭活：向步骤②中添加氯化氢调节为酸性条件，保持温度为50℃，10-30分钟酶解结束，采用800rpm～1000rpm×20min离心操作，然后过滤该液体并保存滤液，得到辣木籽残渣酶解的粗提物；

④精制：将步骤③中所得到的粗提取物依次通过截止分子量为10k、3k的超滤膜，其中k为1000单位，采用Sephadex G-25凝胶过滤色谱柱及高效液相分离，得到精制的辣木籽提取物。

优选地，辣木籽提取物的提取方法，①将辣木籽洗去杂质，干燥后粉碎，过60目筛，得到辣木籽粗粉，加入粗粉总重量10倍量体积分数为60％的乙醇，微波提取5分钟，微波功率为450W，提取温度为45℃，将提取液过滤，按同样条件重复提取1次，合并提取液，再过滤得到辣木籽残渣；②酶水解：取辣木籽残渣100g溶于1L蒸馏水中，该蒸馏水的温度为50℃，调节为碱性，然后加入5ml碱性蛋白酶，仍保持温度在50℃，碱性条件，酶解1小时后滴加0.05mol/L的氢氧化钠NaOH，维持体系碱性调节；③酶灭活：向步骤②中添加氯化氢HCl调节为酸性条件，保持温度为50℃，20分钟酶解结束，采用800rpm～1000rpm×20min离心操作，然后过滤该液体并保存滤液，得到辣木籽残渣酶解的粗提物；④精制：将步骤③中所得到的粗提取物依次通过截止分子量为10k、3k，其中k为1000单位的超滤膜，采用Sephadex G-25凝胶过滤色谱柱及高效液相分离，得到精制的辣木籽提取物产品；50克辣木籽粗粉精制得到1L辣木籽提取物。按照此优选提取方法提取的辣木籽提取物应用在本发明的实施例和对比例中。

优选地，所述高分子量透明质酸钠的分子量为180万-240万；进一步优选地，所述高分子量透明质酸钠的分子量为190万。

一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法，包括以下步骤：

(1)称取黄原胶、高分子量透明质酸钠、纳米透明质酸钠和甘油，并依次加入到反应器中搅拌均匀，再往其中加入去离子水，搅拌均匀后加热至80℃～85℃，得溶液A；

(2)称取对羟基苯乙酮和1,2-己二醇，并将其加热至80℃～85℃搅拌均匀，得溶液B；

(3)将溶液B加入到溶液A中并搅拌均匀，调节温度至40℃～45℃，再依次按份数加入干细胞培养液和辣木籽提取物，搅拌均匀。

一种含干细胞培养液可免洗面膜，包括面膜载体，以及上述面膜液，所述面膜载体上吸附有所述面膜液。

优选地，所述面膜载体的材质为棉、涤纶、混纺、蚕丝或水果纤维。

本发明所述的面膜液结合面膜载体使用体验效果较好，也可以单独使用，不仅限用于面部肌肤，可直接涂抹于皮肤上使用，无需清洗。不同于市面上的其它面膜，本发明的面膜液和面膜在使用之后无需清洗，其活性成分会保留在皮肤上，产生持久护肤效果。

干细胞培养液含多种生长因子能深入到真皮层和皮下组织，全面激活皮肤内干细胞分化，快速地更新替换衰老的细胞，从而增加胶原分泌，改善皮肤弹性，促进蛋白的合成和活化，增强皮肤柔软度，也能提高肌肤水合度，增强肌肤耐刺激和耐恶劣环境的能力，同时对敏感性肌肤也有很好的修复作用。它会刺激肌层产生成纤维细胞及肌肤蛋白质，增加肌肤紧致度和弹性，增强皮肤弹力，令皮肤紧绷。在美白嫩肤方面，它能吞噬色素消除色斑，有助于抚平细纹、皱纹，重塑脸部轮廓，令肌肤变得紧致、柔嫩、细腻滋润，减少皱纹，使皮肤总体呈现年轻态。

辣木籽提取物含有辣木籽中提取出来的天然低分子量阳离子蛋白，具有很强的净化作用。同时辣木籽提取物中的有效成分具有蛋白水解酶抑制作用，从而延缓表皮干细胞培养液生长因子中的生物活性成分在真皮细胞和皮下组织细胞内被蛋白水解酶降解的速度，提高干细胞培养液的抗衰老功效。

超低分子量纳米透明质酸钠是采用天然、温和的酶降解工艺生产得到的超小分子透明质酸钠，分子量3k-10kDa，纳米级的透明质酸钠已经不是普通意义的透明质酸钠，极易透皮吸收，深层护理肌肤，具有保湿、修复、抗氧化等多重活性。可修复受损细胞，提高细胞活性，从而减少外在环境对肌肤细胞的伤害。利用皮肤模型测试超低分子量纳米透明质酸钠的透皮吸收性。结果表明，1h时纳米透明质酸钠的透皮吸收率达36.2％，8h时达60.7％，24h时高达69.5％。

180万-240万的高分子量透明质酸钠具有一定增稠作用，保湿作用非常好，在本发明中加入180万-240万的高分子量透明质酸钠与少量的黄原胶复配达到料体的增稠，在使用本发明的面膜后，揭开面膜布，无需清洗，待料体自然吸收即可，相对于其他需清洗的面膜，能更好的利用干细胞培养液，达到更佳的护肤效果。

将超低分子量纳米透明质酸钠和干细胞培养液用于面膜时，能大大加大干细胞在皮肤中的吸收，成为干细胞运输至真皮层的载体，迅速将干细胞培养液中的大量干细胞生产因子深入到皮肤真皮层和皮下组织充分发挥干细胞生产因子的作用促进皮肤增生能力，有利于干细胞生产因子的吸收，更好的发挥干细胞培养液的护肤功效。

通过以上超低分子量纳米透明质酸钠和辣木籽提取物能将干细胞培养液的护肤功效充分的发挥出来，在纳米透明质酸钠透皮吸收的同时将干细胞生长因子深入皮肤真皮层和皮下组织全面激活皮肤内干细胞分化，快速地更新替换衰老的细胞，同时辣木籽提取物中的有效物质在延缓表皮干细胞生长因子中的生物活性成分在真皮细胞和皮下组织细胞内被蛋白水解酶降解的速度。这样大大加大干细胞培养液中生长因子对皮肤的护肤功效。在较低比例添加干细胞培养液(0.1-2％)和超低分子量纳米透明质酸钠、辣木籽提取物复配、协同作用时，能达到高比例添加干细胞培养液(5％)的保湿、抗衰老、减少皱纹、增强皮肤弹、修复肌肤的功效，由于1公斤干细胞培养液达到上万元到十几万元，而纳米透明质酸钠和辣木籽提取物价格低于1公斤几千元且用量减少，所以能大大减少本发明的成本，有利于本发明的应用和商业推广。

本发明的有益效果：

(1)本发明的面膜液含有干细胞培养液，其中含有大量生长因子，全面激活皮肤内干细胞分化，快速地更新替换衰老的细胞，从而增加胶原分泌，改善皮肤弹性，促进蛋白的合成活性化，增强皮肤柔软度，同时能提高肌肤水合度，提高肌肤耐刺激耐恶劣环境的能力，对敏感性肌肤也有很好的修复作用，刺激肌层产生成纤维细胞及肌肤蛋白质，增加肌肤紧致度及其弹性，减少肌肤皱纹；

(2)超低分子量纳米透明质酸钠和辣木籽提取物能将干细胞培养液的护肤功效充分的发挥出来，在纳米透明质酸钠透皮吸收的同时将干细胞生长因子深入皮肤真皮层和皮下组织全面激活皮肤内干细胞分化，快速地更新替换衰老的细胞，同时辣木籽提取物中的有效物质在延缓表皮干细胞生长因子中的生物活性成分在真皮细胞和皮下组织细胞内被蛋白水解酶降解的速度。在较低比例添加干细胞培养液(0.1-2％)和超低分子量纳米透明质酸钠、辣木籽提取物复配，协同作用时，能达到高比例添加干细胞培养液(5％)的保湿、抗衰老、减少皱纹、增强皮肤弹、修复肌肤的功效，同时能大大降低本发明的成本，有利于本发明的应用和商业推广；

(3)本发明采用180万-240万的高分子量透明质酸钠与少量的黄原胶复配达到面膜液的增稠，在使用本发明的面膜后，揭开面膜布，无需清洗，待面膜液自然吸收即可，相对于其他需清洗的面膜，能更好的利用干细胞培养液，达到更佳的护肤效果。

具体实施方式

为了更好的解释本发明，现结合以下具体实施例做进一步说明，但是本发明不限于具体实施例。

实施例1

一种含干细胞培养液可免洗面膜液，按重量份计，所述面膜液包括0.2份190万分子量透明质酸钠、2份甘油、0.5份干细胞培养液、0.15份纳米透明质酸钠、0.4份1,2-己二醇、0.3份对羟基苯乙酮、0.1份黄原胶、2份辣木籽提取物、94.35份去离子水。

一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法，包括以下步骤：

(1)按份数称取0.1份黄原胶、0.2份190万分子量透明质酸钠、0.15份纳米透明质酸钠和2份甘油，并依次加入到反应器中搅拌均匀，再往其中加入94.35份去离子水，搅拌均匀后加热至85℃，得溶液A；

(2)按份数称取0.3份对羟基苯乙酮和0.4份1,2-己二醇，并将其加热至85℃搅拌均匀得溶液B；

(3)将溶液B加入到溶液A中并搅拌均匀，调节温度至45℃，再依次按份数加入0.5份干细胞培养液和2份辣木籽提取物，搅拌均匀即可。

一种含干细胞培养液可免洗面膜，包括全棉面膜载体和上述面膜液，所述面膜载体上吸附有所述面膜液。

实施例2

一种含干细胞培养液可免洗面膜液，按重量份计，所述面膜液包括0.2份180万分子量透明质酸钠、1份甘油、0.1份干细胞培养液、0.05份纳米透明质酸钠、0.3份1,2-己二醇、0.3份对羟基苯乙酮、0.05份黄原胶、1份辣木籽提取物、97份去离子水。

一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法，包括以下步骤：

(1)按份数称取0.05份黄原胶、0.2份180万分子量透明质酸钠、0.05份纳米透明质酸钠和1份甘油，并依次加入到反应器中搅拌均匀，再往其中加入97份去离子水，搅拌均匀后加热至80℃，得溶液A；

(2)按份数称取0.3份对羟基苯乙酮和0.3份1,2-己二醇，并将其加热至80℃搅拌均匀得溶液B；

(3)将溶液B加入到溶液A中并搅拌均匀，调节温度至40℃，再依次按份数加入0.1份干细胞培养液和1份辣木籽提取物，搅拌均匀即可。

一种含干细胞培养液可免洗面膜，包括全棉面膜载体和上述面膜液，所述面膜载体上吸附有所述面膜液。

实施例3

一种含干细胞培养液可免洗面膜液，按重量份计，所述面膜液包括0.5份240万分子量透明质酸钠、5份甘油、2份干细胞培养液、0.5份纳米透明质酸钠、1份1,2-己二醇、0.5份对羟基苯乙酮、0.2份黄原胶、5份辣木籽提取物、85.3份去离子水。

一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法，包括以下步骤：

(1)按份数称取0.2份黄原胶、0.5份240万分子量透明质酸钠、0.5份纳米透明质酸钠和5份甘油，并依次加入到反应器中搅拌均匀，再往其中加入85.3份去离子水，搅拌均匀后加热至85℃，得溶液A；

(2)按份数称取0.5份对羟基苯乙酮和1份1,2-己二醇，并将其加热至85℃搅拌均匀，得溶液B；

(3)将溶液B加入到溶液A中并搅拌均匀，调节温度至45℃，再依次按份数加入2份干细胞培养液和5份辣木籽提取物，搅拌均匀即可。

一种含干细胞培养液可免洗面膜，包括全棉面膜载体和上述面膜液，所述面膜载体上吸附有所述面膜液。

对比例1

一种含干细胞培养液可免洗面膜液，按重量份计，所述面膜液包括0.2份190万分子量透明质酸钠、2份甘油、5份干细胞培养液、0.4份1,2-己二醇、0.3份对羟基苯乙酮、0.1份黄原胶、92份去离子水。

一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法，包括以下步骤：

(1)按份数称取0.1份黄原胶、0.2份190万分子量透明质酸钠和2份甘油，并依次加入到反应器中搅拌均匀，再往其中加入92份去离子水，搅拌均匀后加热至85℃，得溶液A；

(2)按份数称取0.3份对羟基苯乙酮和0.4份1,2-己二醇，并将其加热至85℃搅拌均匀，得溶液B；

(3)将溶液B加入到溶液A中并搅拌均匀，调节温度至45℃，再按份数加入5份干细胞培养液，搅拌均匀即可。

一种含干细胞培养液可免洗面膜，包括全棉面膜载体和上述面膜液，所述面膜载体上吸附有所述面膜液。

对比例2

一种含干细胞培养液可免洗面膜液，按重量份计，所述面膜液包括0.2份190万分子量透明质酸钠、2份甘油、0.5份干细胞培养液、0.4份1,2-己二醇、0.3份对羟基苯乙酮、0.1份黄原胶、96.5份去离子水。

一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法，包括以下步骤：

(1)按份数称取0.1份黄原胶、0.2份190万分子量透明质酸钠和2份甘油，并依次加入到反应器中搅拌均匀，再往其中加入96.5份去离子水，搅拌均匀后加热至85℃，得溶液A；

(2)按份数称取0.3份对羟基苯乙酮和0.4份1,2-己二醇，并将其加热至85℃搅拌均匀，得溶液B；

(3)将溶液B加入到溶液A中并搅拌均匀，调节温度至45℃，再按份数加入0.5份干细胞培养液，搅拌均匀即可。

一种含干细胞培养液可免洗面膜，包括全棉面膜载体和上述面膜液，所述面膜载体上吸附有所述面膜液。

对比例3

一种含干细胞培养液可免洗面膜液，按重量份计，所述面膜液包括0.2份190万分子量透明质酸钠、2份甘油、0.5份干细胞培养液、0.15份纳米透明质酸钠、0.4份1,2-己二醇、0.3份对羟基苯乙酮、0.1份黄原胶、96.35份去离子水。

一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法，包括以下步骤：

(1)按份数称取0.1份黄原胶、0.2份190万分子量透明质酸钠、0.15份纳米透明质酸钠和2份甘油，并依次加入到反应器中搅拌均匀，再往其中加入96.35份去离子水，搅拌均匀后加热至85℃，得溶液A；

(2)按份数称取0.3份对羟基苯乙酮和0.4份1,2-己二醇，并将其加热至85℃搅拌均匀，得溶液B；

(3)将溶液B加入到溶液A中并搅拌均匀，调节温度至45℃，再依次按份数加入0.5份干细胞培养液，搅拌均匀即可。

一种含干细胞培养液可免洗面膜，包括全棉面膜载体和上述面膜液，所述面膜载体上吸附有所述面膜液。

对比例4

一种含干细胞培养液可免洗面膜液，按重量份计，所述面膜液包括0.2份190万分子量透明质酸钠、2份甘油、0.5份干细胞培养液、2份辣木籽提取物、0.4份1,2-己二醇、0.3份对羟基苯乙酮、0.1份黄原胶、94.5份去离子水。

一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法，包括以下步骤：

(1)按份数称取0.1份黄原胶、0.2份190万分子量透明质酸钠和2份甘油，并依次加入到反应器中搅拌均匀，再往其中加入94.5份去离子水，搅拌均匀后加热至85℃，得溶液A；

(2)按份数称取0.3份对羟基苯乙酮和0.4份1,2-己二醇，并将其加热至85℃搅拌均匀，得溶液B；

(3)将溶液B加入到溶液A中并搅拌均匀，调节温度至45℃，再依次按份数加入0.5份干细胞培养液和2份辣木籽提取物，搅拌均匀即可。

一种含干细胞培养液可免洗面膜，包括全棉面膜载体和上述面膜液，所述面膜载体上吸附有所述面膜液。

对比例5

一种含干细胞培养液可免洗面膜液，按重量份计，所述面膜液包括5份干细胞培养液、0.4份1,2-己二醇、0.3份对羟基苯乙酮、0.4份黄原胶、93.9份去离子水。

一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法，包括以下步骤：

(1)按份数称取0.4份黄原胶加入到反应器中搅拌均匀，再往其中加入93.9份去离子水，搅拌均匀后加热至85℃，得溶液A；

(2)按份数称取0.3份对羟基苯乙酮和0.4份1,2-己二醇，并将其加热至85℃搅拌均匀，得溶液B；

(3)将溶液B加入到溶液A中并搅拌均匀，调节温度至45℃，再依次按份数加入5份干细胞培养液搅拌均匀即可。

一种含干细胞培养液可免洗面膜，包括全棉面膜载体和上述面膜液，所述面膜载体上吸附有所述面膜液。

对比例6

一种含干细胞培养液可免洗面膜液，按重量份计，所述面膜液包括0.5份干细胞培养液、0.4份1,2-己二醇、0.3份对羟基苯乙酮、0.4份黄原胶、98.4份去离子水。

一种含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法，包括以下步骤：

(1)按份数称取0.4份黄原胶加入到反应器中搅拌均匀，再往其中加入98.4份去离子水，搅拌均匀后加热至85℃，得溶液A；

(2)按份数称取0.3份对羟基苯乙酮和0.4份1,2-己二醇，并将其加热至85℃搅拌均匀，得溶液B；

(3)将溶液B加入到溶液A中并搅拌均匀，调节温度至45℃，再依次按份数加入0.5份干细胞培养液搅拌均匀即可。

一种含干细胞培养液可免洗面膜，包括全棉面膜载体和上述面膜液，所述面膜载体上吸附有所述面膜液。

试验例一：人体应用测试

1、试验方法：志愿者210人(年龄25-40周岁)，按平行对照的原则随机分为7组，每组30人，分别试验实施例1和对比例1-6的面膜。试验志愿者每日早晚洁面后各在面部敷一片，使用4周，分别测试使用前(0周)、使用1周后、使用2周后、使用3周后、使用4周后、8周后(使用4周后再暂停使用4周后)皮肤水份含量和皮肤弹性指数的情况，每次测试5个数据取平均值。

2、仪器：德国COURAGE+KHAZAKA(CK)公司生产的皮肤水份测试仪CorneometerCM825，皮肤弹性测试仪Cutometer dual MPA580。

3、试验结果：志愿者每周皮肤水份增加百分量和弹性指数增加百分量详见表1。表中评价指标包括皮肤轻度改善和明显改善两个等级，人数随时间累积叠加。轻度改善是指有改善的前提下与测试前(0周)相比皮肤水份增加百分量<5％，弹性指数增加百分量<5％；明显改善是指与测试前(0周)相比皮肤水份增加百分量≥5％，弹性指数增加百分量≥5％(两项都满足)，轻度改善和明显改善不重合。

表1：志愿者每周皮肤改善程度

由表1的实验结果可以看出对比例2相对于对比例1干细胞培养液由5％，下降至0.5％，皮肤水份增加百分量和弹性指数增加百分量下降非常大，0.5％干细胞培养液单独与0.15％纳米透明质酸钠复配时的对比例3的皮肤水份增加百分量和弹性指数增加百分量有所提高，但达不到对比例1的程度，0.5％干细胞培养液单独与2％辣木籽提取物复配时的对比例4也是如此，从当0.5％干细胞培养液与0.15％纳米透明质酸钠、2％辣木籽提取物复配时的实施例1的皮肤水份增加百分量和弹性指数增加百分量有大幅度提高，与对比例1(干细胞培养液5％)的情况差不多能保持一致。所以纳米透明质酸钠、辣木籽提取物与干细胞培养液复配时，能产生协同增效作用，纳米透明质酸钠和辣木籽提取物能最大程度地将干细胞培养液带入皮肤真皮层和皮下组织，全面激活皮肤内干细胞分化，改善皮肤，提高皮肤保湿程度和弹性。

试验例二：抗衰老临床观察

1、试验方法

筛选420例皮肤出现老化的女性受试志愿者，年龄28-50岁，平均年龄35岁，入选标准：皮肤干燥，弹性降低，出现皱纹、色素沉着、肤色灰暗等皮肤老化现象；在整个试验期间愿意避免日晒，或接触阳光时面部使用SPF≥30的防晒产品；在整个试验期间不使用其他抗衰老产品。

420例女性受试志愿者随机分为7组，分别为实施例1和对比例1-6的面膜，每组60例，早、晚洁面后各组分别使用实施例1和对比例1-6的面膜。各组整个试验时间为90d，记录试验期间发生的不良反应，并对受试者进行效果评价。

皮肤老化评估：通过观察受试者的5个受试区的皱纹来评价(眉间纹、前额皱纹、鱼尾纹、鼻唇沟、唇周皱纹)，评判标准：没有皱纹；轻度：有2-3条浅皱纹，长度＜1.5cm；中度：有2-6条浅皱纹，长度＜3cm；重度：有数条主皱纹，长度达4cm，同时伴有浅皱纹。

在第90d对受试者皮肤老化进行评估。

2、试验结果

表2：试验结束后各组受试者的皮肤老化评估

从表2可以看出实施例1与对比例1的数据很接近，说明当使用低含量的干细胞培养液(0.5％)与纳米透明质酸钠(0.15％)、辣木籽提取物(2％)复配时的实施例1皮肤的皱纹减少情况有大幅度提高，与对比例1(干细胞培养液5％)的情况差不多能保持一致。所以纳米透明质酸钠、辣木籽提取物与干细胞培养液复配时，能产生协同增效作用，纳米透明质酸钠和辣木籽提取物能最大程度地将干细胞培养液带入皮肤真皮层和皮下组织，全面激活皮肤内干细胞分化，改善皮肤，大大减少肌肤皱纹。

试验例三：防敏脱敏作用临床效观察

选面部皮肤有发红、发痒等过敏症状的20—50周岁的女性350名，试用前进行常规检査：心电图、血尿便常规、肝肾功能均未见异常。350人随机分为七组，每组50人。每组分别每天早晩洁面后分别使用实施例1、对比例1-6的面膜，待自然吸收无需清洗，连续使用14天，试用期间避免试用刺激性食物、不用其它化妆品。统计结果见表3。

疗效判定标准：

治愈：用后检査皮肤发红发痒症状完全消失，连续观察7天未复发。

显效：用后、症状明显减轻。

无效：用后症状无减轻，或有加重。

表3：临床疗效观察

由表3的实验结果可以看出对比例2相对于对比例1干细胞培养液由5％，下降至0.5％，总有效率下降非常大，0.5％干细胞培养液单独与0.15％纳米透明质酸钠复配时的对比例3的总有效率有所提高，但达不到对比例1的程度，0.5％干细胞培养液单独与2％辣木籽提取物复配时的对比例4也是如此，从当0.5％干细胞培养液与0.15％纳米透明质酸钠、2％辣木籽提取物复配时的实施例1的总有效率有大幅度提高，与对比例1(干细胞培养液5％)的情况差不多能保持一致。所以纳米透明质酸钠、辣木籽提取物与干细胞培养液复配时，能产生协同增效作用，纳米透明质酸钠和辣木籽提取物能最大程度地将干细胞培养液带入皮肤真皮层和皮下组织，全面激活皮肤内干细胞分化，改善皮肤，对敏感性肌肤也大大增强的修复作用。

Claims (9)

1.一种含干细胞培养液可免洗面膜液，其特征在于，以占所述面膜液重量百分比计，所述面膜液包括高分子量透明质酸钠0.2%-0.5%、甘油1%-5%、干细胞培养液0.1%-2.0%、纳米透明质酸钠0.05%-0.5%、1,2-己二醇0.3%-1%、对羟基苯乙酮0.3%-0.5%、黄原胶0.05%-0.2%、辣木籽提取物1%-5%、余量为去离子水。

2.根据权利要求1所述的含干细胞培养液可免洗面膜液，其特征在于，所述干细胞培养液为人体脂肪干细胞培养2-4周的培养液，里面含有Fibronectin（纤维连接蛋白），VEGF（血管内皮生长因子），bFGF（碱性成纤维细胞生长因子），HGF（肝细胞生长因子），TGF-β（转化生长因子-β），KGF（角质细胞生长因子），IGF-I（胰岛素素样生长因子），Procollagen（胶原蛋白）生长因子。

3.根据权利要求1所述的含干细胞培养液可免洗面膜液，其特征在于，所述高分子量透明质酸钠的分子量为180万-240万。

4.根据权利要求1所述的含干细胞培养液可免洗面膜液，其特征在于，所述纳米透明质酸钠的分子量为3k-10kDa。

5.根据权利要求1所述的含干细胞培养液可免洗面膜液，其特征在于，所述辣木籽提取物的提取方法包括以下步骤：

①将辣木籽洗净、干燥后粉碎，过50-70目筛，得到辣木籽粗粉，加入粗粉总重量10倍量的体积分数为50-70％的乙醇，微波提取3-8分钟，微波功率为400-500W，提取温度为40-50℃，将提取液过滤，按同样条件重复提取1次，合并提取液，再过滤得到辣木籽残渣；

②酶水解：取辣木籽残渣80-150g溶于1L蒸馏水中，该蒸馏水的温度为50℃，调节为碱性，然后加入3-8ml碱性蛋白酶，仍保持温度在50℃，碱性条件，酶解1小时后滴加氢氧化钠溶液，维持体系呈碱性；

③酶灭活：向步骤②中添加氯化氢调节为酸性条件，保持温度为50℃，10-30分钟酶解结束，采用800rpm~1000rpm×20min离心操作，然后过滤该液体并保存滤液，即得到辣木籽残渣酶解的粗提物；

④精制：将步骤③中所得到的粗提取物依次通过截止分子量为10k、3k的超滤膜，其中k为1000单位，采用Sephadex G-25凝胶过滤色谱柱及高效液相分离，得到精制的辣木籽提取物。

6.根据权利要求1所述的含干细胞培养液可免洗面膜液，其特征在于，以占所述面膜液重量百分比计，所述面膜液包括高分子量透明质酸钠0.2%、甘油2%、干细胞培养液0.5%、纳米透明质酸钠0.15%、1,2-己二醇0.4%、对羟基苯乙酮0.3%、黄原胶0.1%、辣木籽提取物2%、余量为去离子水。

7.根据权利要求1-6任一项所述的含干细胞培养液可免洗面膜液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）称取黄原胶、高分子量透明质酸钠、纳米透明质酸钠和甘油，并依次加入到反应器中搅拌均匀，再往其中加入去离子水，搅拌均匀后加热至80℃~85℃，得溶液A；

（2）称取对羟基苯乙酮和1,2-己二醇，并将其加热至80℃~85℃搅拌均匀，得溶液B；

（3）将溶液B加入到溶液A中并搅拌均匀后，调节温度至40℃~45℃，再依次加入干细胞培养液和辣木籽提取物，搅拌均匀。

8.一种含干细胞培养液可免洗面膜，其特征在于，包括面膜载体，以及如权利要求1-6任一项所述面膜液，所述面膜载体上吸附有所述面膜液。

9.根据权利要求8所述的含干细胞培养液可免洗面膜，其特征在于，所述面膜载体的材质为棉、涤纶、混纺、蚕丝或水果纤维。