KR101508614B1 - 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물로 제조된 포이즌 컴플렉스를 유효성분으로 함유하는 항노화 화장료 조성물 - Google Patents
스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물로 제조된 포이즌 컴플렉스를 유효성분으로 함유하는 항노화 화장료 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 상기 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물은 피부세포에 독성이 없으며 주름 개선 효과, 피부 탄력 개선 효과, 염증 매개 인자 발현 억제에 효과적이고 보습 관련 인자 발현 증가 및 우수한 피부 세포 재생 및 피부 자극 완화 효과를 갖고 있어서 이를 유효성분으로 함유하는 화장료는 항노화에 우수한 효과를 나타낸다.
Description
본 발명은 포이즌 콤플렉스를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물을 유효성분으로 함유하는 항노화 화장료 조성물에 관한 것이다.
지구상의 동식물의 진화과정에서 자신을 보호하기 위하여 모든 동물은 독을 가지고 있다. 심지어 인류도 독을 갖고 있지만 우리는 일반적으로 파충류, 절지동물등 상대방을 물어 독을 직접 주입하는 부류에 대하여만 독이 있다고 생각하고 있다.
독이란 생체에서 물리, 화학적 반응을 통해서 생리적으로 어떤 해로운 변조(變調)를 일으키는 물질로, 이로운 효능을 나타내면 약이 되고 그 반대이면 독이 된다. 독을 이용한 연구로서 전갈, 지네 등의 독소 중 특정 성분을 마취제로 사용하는 연구가 진행 중이며, 뱀독 성분은 피부 탄력과 주름 개선을 도와주는 원료로 이용되고 있으며, 독 개구리에서 추출한 물질인 '에피바티딘'은 모르핀보다 200배 강한 진통제로 활용되고 있다.
대한민국 공개특허 제2010-0118629호 "봉독 또는 봉독 추출물을 함유하는 화장료 조성물"에는 '피부항산화, 항노화 및 피부 주름 개선효과가 있는 봉독 또는 봉독 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물'이 개시되어 있다. 또한, 대한민국 공개특허 제2014-0067333호 "봉독의 지용성 분획을 포함하는 항노화 화장료조성물 및 그 제조방법"에는 '지용성 용매에 의하여 분획된 봉독의 지용성분획과 수용성 용매에 의하여 분획된 수용성분획을 1:0.01~0.5의 부피비율로 포함하는 화장료조성물'이 개시되어 있다.
본 발명자들은 주름 개선, 항염, 보습 등의 피부개선효과가 있는 독소 추출물을 선별하고 이에 대한 복합추출물을 제조하여 그 활성에 대하여 연구하였으며, 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드의 복합물이 피부세포에 독성이 없고 우수한 주름 개선, 탄력 개선, 항염, 보습 및 피부세포 재생과 피부 진정 효과 등을 나타내는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물을 함유하여 주름 개선, 탄력 개선, 항염, 보습, 피부 세포 재생 및 피부 진정 효과가 우수한 항노화 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물을 포함하는 항노화 화장료 조성물이 제공된다. 이때, 상기 스파이더 실크 단백질은 γ-스파이더 폴리펩타이드-1(γ-Spider Polypeptide-1)이며, 상기 뱀독 유사 펩타이드는 디펩타이드 디아미노부티로일 벤질아미드 디아세테이트(Dipeptide Diaminobutyroyl Benzylamide Diacetate)인 것이 바람직하다.
상기 복합물은 주름 개선, 탄력 개선, 항염, 보습 및 피부 세포재생과 피부진정 효과가 우수하므로, 상기 화장료조성물은 주름 개선, 탄력 개선, 항염, 보습 및 피부 세포 재생과 피부 진정 효과의 화장료로 사용될 수 있다. 이때 유효성분으로서의 상기 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유된다.
상기 복합물은 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드가 각각 1~2:1~2:1~2:1~2의 중량비로 혼합된 것이다. 더욱 바람직하게는 2:1:1:1의 비율로 혼합된 것이다.
상기 거머리 추출물 및 봉독 추출물은 열수추출물이거나, 물, 탄소수 1~4의 저급 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매에 의한 용매추출물이다.
본 발명에 따른 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물은 주름 개선 효과, 탄력 개선 효과, 항염 효과, 보습 효과 및 피부 세포 재생과 피부 진정 효과가 우수하여 상기 복합물을 유효성분으로 함유하는 화장료는 항노화 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.
이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
본 발명은 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
스파이더 실크 단백질은 거미가 다른 포식자로부터 자신을 보호하기 위한 주거지 혹은 먹이를 얻기 위한 그물을 만드는데 사용되는 재료로서 중요한 역할을 한다. 거미실크는 같은 무게일 때 강도가 강철보다도 5배나 뛰어나고 탄성력은 방탄조끼의 재료로 사용되는 케블라보다도 뛰어나다. 그런데 거미 실크는 얻기가 어려운 문제가 있어서, 과학자들은 실크를 만드는 거미의 유전자를 다른 동물에 넣어 거미실크를 만드는 방법을 연구해왔다.
한편, 거미 실크 단백질은 생체적합성이 좋기 때문에 면역반응을 일으키지 않는다. 이에 따라 거미 실크 단백질은 미용제품이나 의료용품의 원료로 활용 되기에 적합하다. 면역반응을 유발하지 않는 재료이기 때문에 인체에 사용되는 보형물이나 보철물의 코팅재료로서 유용하게 사용될 수 있다. 또한 화장품의 원료로 사용될 수 있는데, 독일의 벤처회사인 AM SILK사는 거미 실크 단백질을 정제한 분말을 제조하여 화장료로 사용할 수 있음을 밝혀 국제 화장품 원료로 등록한 바 있다.
거머리 추출물은 예로부터 독을 지닌 동물에 쏘였거나 물렸을 때, 이로 인해 부어 오른 부위로부터 피를 뽑아내는데 사용되어 왔다. 현재 의학계에서 거머리 추출물은 사고로 잘린 손가락이나 귀 등의 접합 수술이나 성형 수술 등 외과 수술 시 응고된 혈액(혈전)이 혈관을 막는 것을 방지하기 위해 의료용으로 이용되고 있다. 거머리 추출물 침샘 속의 히루딘 성분은 혈액의 응고 저지 작용으로 혈액순환을 활성화 하는데 도움을 준다. 거머리 추출물은 주로 단백질을 함유하고 있고 한방에서는 거머리 추출물이 갖는 효과로 피부병, 종기 등의 치료에 탁월하다고 기록하고 있다.
봉독(蜂毒)은 여왕벌이나 일벌의 독주머니에 저장되어 있는 맑고 투명한 액체를 말한다. 이 벌침액에 들어있는 펩타이드 성분에는 항균, 항염증 작용을 하는 약 40여 가지의 성분이 들어있고 대표적인 펩타이드는 벌독의 50%이상을 차지하는 멜리틴이다. 멜리틴은 벌독의 대표적인 항균물질로 아미노산이 26개로 되어있는 활성 단백류이며, 물과 기름 모두 섞이는 친화성이 있어 다른 세포막에 대해서 막 투과성을 변화시키는 작용을 한다. 멜리틴은 항균 및 항염증 작용을 가지므로 여드름 피부에 좋으며 피부 재생 효과를 갖는다. 봉독의 활용으로는 봉독요법이 있는데 이는 임상에서 줄여'봉침' 혹은 '벌침'이라고 한다. 봉침은 벌독을 이용하는 약침 요법으로 꿀벌의 독낭에 들어있는 봉독을 추출한 뒤 봉독의 약리적인 효과를 얻는 방법이다.
뱀독은 독 뱀류의 특수한 침샘(독샘)에서 분비되는 독성분으로 여러 형태 독소의 혼합물로서 트립신과 유사한 프로테아제를 함유하고 있으며, 이것이 독소 국소 작용의 주역이다. 뱀독은 근육의 수축과 이완을 방해하는 작용을 하는데 보톡스와 비슷하게 근육축소의 신호를 방지하기 때문에 피부에 유사하게 작용하여 주름 개선 효과 및 피부 탄력 효과를 준다고 알려져 있다. 템플 바이퍼(temple viper)의 독성분인 Waglerin-1을 모방하여 합성한 펩타이드가 제조되어 화장품 원료로 사용되고 있다.
본 발명자 들은 상기 성분들을 특정한 비율로 혼합하여 피부 항노화 활성을 시험하였으며, 상기 성분들의 복합물은 그 상승작용에 의하여 그 효과가 증대됨을 확인하였다.
본 발명에서는 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물을 유효성분으로 함유하는 항노화 화장료 조성물이 제공된다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 스파이더 실크 단백질로는 γ-스파이더 폴리펩타이드-1(γ-Spider Polypeptide-1)가 사용된다.
상기 거머리 추출물 및 봉독 추출물은 건조된 거머리 및 정제 봉독을 통상의 방법으로 추출하여 사용될 수 있다. 상기 추출물은 열수추출물이거나, 물, 탄소수 1~4의 저급 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매에 의한 용매추출물이다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 뱀독 유사 펩타이드로는 디펩타이드 디아미노부티로일 벤질아미드 디아세테이트(Dipeptide Diaminobutyroyl Benzylamide Diacetate)가 사용된다.
본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 복합물은 상기 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드를 건조중량기준으로 1~2:1~2:1~2:1~2의 비율로 혼합하여 제조된다. 더욱 바람직하게는 2:1:1:1의 비율로 혼합하여 제조된다.
상기 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유된다.
이와 같이 제조된 본 발명의 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물은 피부 세포에 독성이 없음을 확인하였고(시험예 1), 그 상승작용에 의하여 주름 개선 효과가 우수하였고(시험예 2), 탄력 개선 효과가 우수하였고(시험예 3), 염증과 관련된 인자의 발현 억제효과(시험예 4)에 있어서 우수하였고, 보습과 관련된 인자의 발현 증가 효과(시험예 5)도 우수하게 나타내었다. 또한 상기 복합추출물은 피부 세포 재생 효과(시험예 6), 피부 진정 효과(시험예 7)에 있어서도 우수한 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
본 발명의 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물을 함유하는 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조 될 수 있으며, 그 예로는 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 콘디셔너, 헤어 젤, 화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스 등을 들 수 있다.
[실시예]
이하, 하기의 실시예와 시험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이 예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.
제조예 1: 거머리 추출물의 제조
건조된 거머리를 구매(삼흥 건재약업사)하여 사용하였다. 건조된 거머리를 세척하여 70% 함수 에탄올 3㎏을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 8시간 끓여서 추출하였다. 추출 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과시켰다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 스프레이드라이어(BUCHI사 제품)를 이용하여 건조시켜 건조 중량 24.1g의 거머리추출물 분말을 얻었다.
제조예 2: 봉독 추출물의 제조
봉독 채집 장치의 유리 채집판에서 수거한 봉독을 정제하여 수득된 봉독을 농촌진흥청으로부터 구입하였다.
구입된 봉독에 70% 함수 에탄올 3㎏을 넣고 교반하여 60℃에서 1시간 중탕 추출하였다. 추출 후 1μm 필터로 여과하고, 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 0.45μm 필터 여과시켰다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 스프레이드라이어(BUCHI사 제품)를 이용하여 건조시켜 건조 중량 23.5g의 봉독추출물 분말을 얻었다.
실시예 1: 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물의 제조
스파이더 실크 단백질로는 분자량이 47.6 KDa으로 세리신(Sericin)과 같은 불순물을 제거하는 공정을 거쳐 제조된 γ-Spider Polypeptide-1(AM Silk)를 구입하여 사용하였다.
뱀독 유사 펩타이드로는 분자량이 500 DA 이하인 몰 질량의 합성 트리펩타이드 Dipeptide Diaminobutyroyl Bemzylamide Diacetate(DSM, syn®-ake)를 구입하여 사용하였다.
상기 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물(제조예 1), 봉독 추출물(제조예 2) 및 뱀독 유사 펩타이드를 각 60g씩 1:1:1:1의 중량 비율로 혼합하여 복합물을 제조하였다.
실시예 2~11 : 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물의 제조
하기 표 1의 조성과 같이 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드의 혼합 중량비율을 달리하여 복합물을 제조하였다.
| (중량비) | 실시예 | |||||||||
| 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | |
| 스파이더 실크 단백질 | 1 | 1 | 1 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 |
| 거머리 추출물 | 2 | 1 | 1 | 1 | 2 | 1 | 1 | 2 | 1 | 2 |
| 봉독 추출물 | 1 | 2 | 1 | 1 | 1 | 2 | 1 | 2 | 2 | 1 |
| 뱀독 유사 펩타이드 | 1 | 1 | 2 | 1 | 1 | 1 | 2 | 1 | 2 | 2 |
상기 실시예들의 복합물을 사용하여, 항노화활성 시험을 하였다.
상기 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물(제조예 1), 봉독 추출물(제조예 2) 및 상기 뱀독 유사 펩타이드를 각각 비교예 1~4로 하였다.
시험예 1: 세포 독성 완화 효과 확인
사람 유래 섬유아세포 2×105 cells/well의 농도로 96 well plate에 배양하고 10% FBS를 함유하는 IMDM 배지 0.2㎖를 공급한 후 24시간 동안 CO2 배양기에서 배양하였다. 여기에 DMSO에 녹인 시료용액을 처리한 다음 24시간 동안 배양하였다. 이후, 세포의 생존력을 알아보기 위하여 MTT assay를 수행하였다. MTT assay는 배양한 세포에 MTT 용액 0.1㎖을 가한 후 4 시간 동안 배양한 다음 배지는 제거하고 DMSO 0.5㎖를 넣어 형성된 포마잔을 ELISA를 사용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
| 시료명 | 처리농도(w/v%) | 세포 생존율(%) |
| 실시예 1 | 10 | 98.8 |
| 실시예 2 | 10 | 99.1 |
| 실시예 3 | 10 | 98.7 |
| 실시예 4 | 10 | 98.8 |
| 실시예 5 | 10 | 99.8 |
| 실시예 6 | 10 | 99.2 |
| 실시예 7 | 10 | 99.2 |
| 실시예 8 | 10 | 98.7 |
| 실시예 9 | 10 | 98.4 |
| 실시예 10 | 10 | 98.1 |
| 실시예 11 | 10 | 98.2 |
| 비교예 1 | 10 | 98.8 |
| 비교예 2 | 10 | 98.7 |
| 비교예 3 | 10 | 98.7 |
| 비교예 4 | 10 | 98.6 |
상기 표 2에서 확인되는 바와 같이 10% 농도에서 시험한 시료 모두에서 피부세포에 독성이 없음을 확인 할 수 있었다. 상기 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물은 10% 에서 피부세포에 독성이 없는 것을 확인 할 수 있었다.
시험예 2: 주름 개선 효과 측정 실험
상기 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물의 주름 개선 효과를 확인하기 위해 CCD-986Sk(Human Fibroblast Cell) 세포를 10% FBS가 첨가된 IMDM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 콜라겐의 발현율을 확인하였다. 콜라겐 발현율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다. 대조군으로는 아데노신(Adenosine)을 사용하였다.
콜라겐 발현율(%)=(시료 콜라겐 발현 양/대조군 콜라겐 발현 양)×100
| 시료명 | 처리농도(w/v%) | 콜라겐 발현율(%) |
| 실시예 1 | 0.1 | 88.1 |
| 실시예 2 | 0.1 | 87.1 |
| 실시예 3 | 0.1 | 88.5 |
| 실시예 4 | 0.1 | 89.2 |
| 실시예 5 | 0.1 | 94.7 |
| 실시예 6 | 0.1 | 88.9 |
| 실시예 7 | 0.1 | 90.1 |
| 실시예 8 | 0.1 | 90.5 |
| 실시예 9 | 0.1 | 89.7 |
| 실시예 10 | 0.1 | 91.1 |
| 실시예 11 | 0.1 | 90.8 |
| 비교예 1 | 0.1 | 86.8 |
| 비교예 2 | 0.1 | 82.4 |
| 비교예 3 | 0.1 | 81.1 |
| 비교예 4 | 0.1 | 84.8 |
| 아데노신(Adenosine) | 0.1 | 86.4 |
상기 표 3에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 콜라겐 발현 증가 효과를 확인할 수 있었다. 특히 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물은 단독 추출물에 비해 우수한 콜라겐 발현 증가 효과를 나타내었고, 특히 실시예 5에서 가장 우수한 콜라겐 발현 증가 효과를 나타내었다.
시험예 3: 탄력 개선 효과 확인
상기 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물의 탄력 개선 효과를 확인하기 위해 elastase inhibition assay를 수행하였다. 200mM Tris-HCl Buffer(pH 8.8)에 0.1g의 Elastin-Congo red(Sigma)와 2.5g의 agar를 섞은 뒤 멸균하여 petri dish에 부어 굳혀주었다. 배지가 굳은 뒤 hole을 만들어주고 1800 units/mL의 elastase enzyme solution과 시료를 각각 10 uL를 준비하여 혼합 후 상온에서 10분간 반응시켰다. 반응 시킨 시료를 10uL 취하여 elastin-congo red agar의 hole에 넣어 주고 37℃에서 18시간 동안 배양한 뒤 halo diameter를 측정하였다. 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다.
| 시료명 | 처리농도(w/v%) | Elastase 억제율(%) |
| 실시예 1 | 0.1 | 79.1 |
| 실시예 2 | 0.1 | 77.0 |
| 실시예 3 | 0.1 | 78.5 |
| 실시예 4 | 0.1 | 79.1 |
| 실시예 5 | 0.1 | 85.9 |
| 실시예 6 | 0.1 | 78.7 |
| 실시예 7 | 0.1 | 80.9 |
| 실시예 8 | 0.1 | 80.5 |
| 실시예 9 | 0.1 | 78.7 |
| 실시예 10 | 0.1 | 81.4 |
| 실시예 11 | 0.1 | 80.4 |
| 비교예 1 | 0.1 | 76.5 |
| 비교예 2 | 0.1 | 72.0 |
| 비교예 3 | 0.1 | 71.0 |
| 비교예 4 | 0.1 | 74.4 |
| 아데노신(Adenosine) | 0.1 | 76.3 |
상기 표 4에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 elastase 억제율을 확인할 수 있었다. 특히 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물은 단독 추출물에 비해 우수한 elastase 억제 효과를 나타내었고 특히 실시예 5에서 가장 우수한 elastase 억제 효과를 나타내었다.
시험예 4: 염증 매개 인자 발현 억제효과 확인
RAW264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 12시간 동안 기아상태를 유지시킨 후, LPS 10 ng/mL과 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 TNF-α의 발현 억제율을 확인하였다. TNF-α 발현 억제율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다. 대조군으로는 덱사메타손(Dexamethason)을 사용하였다.
TNF-α 발현억제율(%)=(시료 TNF-α 발현양/대조군 TNF-α 발현양)×100
| 시료명 | 처리농도(w/v%) | TNF-α 발현억제율(%) |
| 실시예 1 | 0.1 | 76.5 |
| 실시예 2 | 0.1 | 73.7 |
| 실시예 3 | 0.1 | 78.7 |
| 실시예 4 | 0.1 | 80.1 |
| 실시예 5 | 0.1 | 86.8 |
| 실시예 6 | 0.1 | 79.3 |
| 실시예 7 | 0.1 | 81.3 |
| 실시예 8 | 0.1 | 78.5 |
| 실시예 9 | 0.1 | 79.1 |
| 실시예 10 | 0.1 | 80.8 |
| 실시예 11 | 0.1 | 81.3 |
| 비교예 1 | 0.1 | 78.9 |
| 비교예 2 | 0.1 | 79.0 |
| 비교예 3 | 0.1 | 79.3 |
| 비교예 4 | 0.1 | 78.4 |
| 덱사메타손(Dexamethason) | 0.1 | 76.1 |
상기 표 5에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 TNF-α 억제 효과를 확인할 수 있었다. 특히 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물은 단독 추출물에 비해 우수한 TNF-α 억제 효과를 나타내었다.
시험예 5: 보습 관련인자 발현증가효과 확인
CCD-986Sk 세포를 10% FBS가 첨가된 IMDM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 Hyaluronan Synthase-3(HAS-3)의 발현 증가율을 확인하였다. HAS-3 발현 증가율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다. 대조군으로는 히알루론산(Hyaluronic Acid)을 사용하였다.
HAS-3 발현율(%)=(시료 HAS-3 발현 양/대조군 HAS-3 발현 양)×100
| 시료명 | 처리농도(w/v%) | HAS-3 발현율(%) |
| 실시예 1 | 0.1 | 80.1 |
| 실시예 2 | 0.1 | 82.4 |
| 실시예 3 | 0.1 | 80.5 |
| 실시예 4 | 0.1 | 81.2 |
| 실시예 5 | 0.1 | 90.2 |
| 실시예 6 | 0.1 | 82.7 |
| 실시예 7 | 0.1 | 87.3 |
| 실시예 8 | 0.1 | 85.7 |
| 실시예 9 | 0.1 | 83.9 |
| 실시예 10 | 0.1 | 84.2 |
| 실시예 11 | 0.1 | 83.9 |
| 비교예 1 | 0.1 | 80.2 |
| 비교예 2 | 0.1 | 82.1 |
| 비교예 3 | 0.1 | 80.7 |
| 비교예 4 | 0.1 | 83.1 |
| 히알루론산(Hyaluronic Acid) | 0.1 | 85.7 |
상기 표 6에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 HAS-3 발현 증가 효과를 확인할 수 있었다. 특히 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물은 단독 추출물에 비해 우수한 HAS-3 발현 증가 효과를 나타내었다.
시험예 6: 피부세포 재생 효과 확인
상기 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물의 피부 재생 효과를 확인하기 위해 wound healing assay를 수행하였다. HACAT 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후 6 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 6 well plate에 가득 자란 세포에 스크래치를 내어 세포의 일부분을 6 well plate 바닥에서 떨어지게 한 뒤 시료를 처리하여 18시간 배양하였다. 세포가 재생된 정도를 확인하여 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.
| 시료명 | 처리농도(w/v%) | 세포 재생율(%) |
| 실시예 1 | 0.1 | 76.5 |
| 실시예 2 | 0.1 | 73.7 |
| 실시예 3 | 0.1 | 78.7 |
| 실시예 4 | 0.1 | 80.1 |
| 실시예 5 | 0.1 | 86.8 |
| 실시예 6 | 0.1 | 79.3 |
| 실시예 7 | 0.1 | 81.3 |
| 실시예 8 | 0.1 | 78.5 |
| 실시예 9 | 0.1 | 79.1 |
| 실시예 10 | 0.1 | 80.8 |
| 실시예 11 | 0.1 | 81.3 |
| 비교예 1 | 0.1 | 78.9 |
| 비교예 2 | 0.1 | 79.0 |
| 비교예 3 | 0.1 | 79.3 |
| 비교예 4 | 0.1 | 78.4 |
| 덱사메타손(Dexamethason) | 0.1 | 76.1 |
상기 표 7에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 피부 세포 재생 효과를 확인할 수 있었다. 특히 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물은 단독 추출물에 비해 우수한 피부 세포 재생 효과를 나타내었고 특히 실시예 5에서 가장 우수한 피부 세포 재생 효과를 나타내었다.
실시예 12~23 : 로션의 제조
상기 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사펩타이드 복합물을 함유하는 로션을 하기의 표 8의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.
| (중량%) | 대조예 | 비교예 | 실시예 | ||||||||||||||
| 5 | 6 | 7 | 8 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | ||
| 비교예 1 | - | 0.5 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| 비교예 2 | - | - | 0.5 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| 비교예 3 | - | - | - | 0.5 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| 비교예 4 | - | - | - | - | 0.5 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| 실시예 1 | - | - | - | - | - | 0.5 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| 실시예 2 | - | - | - | - | - | - | 0.5 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| 실시예 3 | - | - | - | - | - | - | - | 0.5 | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| 실시예 4 | - | - | - | - | - | - | - | - | 0.5 | - | - | - | - | - | - | - | - |
| 실시예 5 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0.5 | - | - | - | - | - | - | - |
| 실시예 6 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0.5 | - | - | - | - | - | - | |
| 실시예 7 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0.5 | - | - | - | - | - |
| 실시예 8 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0.5 | - | - | - | - |
| 실시예 9 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0.5 | - | - | - |
| 실시예 10 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0.5 | - | - |
| 실시예 11 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0.5 | - |
| 밀납 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 폴리솔베이트 60 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
| 솔비탄 세스퀴올레이트 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 유동 파라핀 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 |
| 소르비탄 스테아레이트 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 친유형 모노스테아린산 글리세린 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 스테아린산 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
| 글리세릴스테아레이트/ 피이지-400 스테아레이트 |
1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 프로필렌글리콜 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 3.0 |
| 카르복시폴리머 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
| 트리에탄올아민 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 방부제 | 미 량 |
미 량 |
미 량 |
미량 | 미량 | 미 량 |
미량 | 미량 | 미량 | 미량 | 미량 | 미 량 |
미량 | 미량 | 미량 | 미량 | 미량 |
| 정제수 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 | To 100 |
시험예 7: 피부 진정 효과 확인
현재 피부 알레르기 증상이 없는 20 내지 30대 남녀 10명을 대상으로 하완의 안쪽 부위에 테입 스트리핑 법(Tape Stripping Method)을 통한 피부자극을 유발한 후, 본 발명에 따른 복합물을 함유한 화장료와 함유되지 않는 화장료를 도포하여 유발된 자극이 진정되는 정도를 상대평가 하였다. 먼저 하완의 안쪽 부위 두 곳에 일반 스카치 테잎으로 30회 테이핑을 하여 피부 홍반을 유발하였다. 홍반 유발된 후, 본 발명에 따른 복합물을 함유한 화장료를 도포하였으며, 본 발명에 따른 복합물을 함유하지 않은 화장료를 도포하였다. 도포 후 3시간 후 피부진정 정도를 평가하였다.
<피부자극정도(홍반) 평가>
0 (무반응) 1 (매우 경미한 홍반흔적) 2 (희미한 또는 가벼운 홍반)
3 (경계가 뚜렷하나 약한 홍반) 4 (뚜렷한 홍반) 5 (심한 홍반)
| 시료명 | 피부자극정도 | |
| 좌 | 우 | |
| 실시예 12 | 1 | 1 |
| 실시예 13 | 0 | 1 |
| 실시예 14 | 1 | 1 |
| 실시예 15 | 1 | 0 |
| 실시예 16 | 0 | 0 |
| 실시예 17 | 1 | 1 |
| 실시예 18 | 1 | 0 |
| 실시예 19 | 1 | 0 |
| 실시예 20 | 1 | 1 |
| 실시예 21 | 1 | 1 |
| 실시예 22 | 1 | 1 |
| 실시예 23 | 1 | 1 |
| 비교예 5 | 1 | 0 |
| 비교예 6 | 1 | 0 |
| 비교예 7 | 0 | 1 |
| 비교예 8 | 1 | 1 |
상기 표 9에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물을 함유하는 로션 조성물은 상기 복합추출물을 함유하지 않은 대조예나 일부 만을 포함하는 비교예 들에 비해 피부자극완화 효과가 우수하였다. 그 중에서도 실시예 16의 로션 제형에서 가장 우수한 피부 자극 완화 효과를 나타내었다.
Claims (11)
- 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드인 디펩타이드 디아미노부티로일 벤질아미드 디아세테이트(Dipeptide Diaminobutyroyl Benzylamide Diacetate)가 건조중량으로서 2:1:1:1의 비율로 혼합된 복합물을 함유하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 스파이더 실크 단백질은 γ-스파이더 폴리펩타이드-1(γ-Spider Polypeptide-1)인 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 복합물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유되는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 주름 개선 효과를 가지는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 탄력 개선 효과를 가지는 것임을 특징으로 하는 화장료조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부의 염증매개인자 발현억제활성을 가지는 것임을 특징으로 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 보습관련인자의 발현증가를 통해 피부의 보습력을 증가시키는 것임을 특징으로 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부재생 효과를 갖는 것임을 특징으로 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 자극완화 효과를 갖는 것임을 특징으로 화장료 조성물.
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| KR20140110559A KR101508614B1 (ko) | 2014-08-25 | 2014-08-25 | 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물로 제조된 포이즌 컴플렉스를 유효성분으로 함유하는 항노화 화장료 조성물 |
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| KR20140110559A KR101508614B1 (ko) | 2014-08-25 | 2014-08-25 | 스파이더 실크 단백질, 거머리 추출물, 봉독 추출물 및 뱀독 유사 펩타이드 복합물로 제조된 포이즌 컴플렉스를 유효성분으로 함유하는 항노화 화장료 조성물 |
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