KR101686399B1

KR101686399B1 - 항노화용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101686399B1
Application number: KR1020150166362A
Authority: KR
Inventors: 안정호; 김미수; 전소미; 노윤화; 김민지
Original assignee: 코스맥스 유에스에이, 코퍼레이션; 코스맥스 주식회사; 제네시스 퓨어 인코포레이티드
Priority date: 2015-11-26
Filing date: 2015-11-26
Publication date: 2016-12-15
Also published as: US20170151171A1

Abstract

본 발명은 거미줄 추출물, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물, 인삼캘러스 배양추출물 및 헵타펩타이드를 유효성분으로 함유하는 항노화용 화장료 조성물, 구체적으로는 거미줄 추출물, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물, 인삼캘러스 배양추출물, 및 카퍼팔미토일 헵타펩타이드-14 및 헵타펩타이드-15 팔미테이트로 구성된 헵타펩타이드를 유효성분으로 함유하는 항노화용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 항노화용 화장료 조성물은 항산화 효과가 우수하며, 피부의 주름 및 탄력을 개선, 피부 보습력을 증가, 및 피부 장벽을 개선시킴으로써 항노화 효과를 나타낼 수 있다.

Description

항노화용 화장료 조성물{Cosmetic composition for anti-aging}

본 발명은 항노화용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 거미줄 추출물, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물, 인삼캘러스 배양추출물 및 헵타펩타이드를 유효성분으로 함유하는 항노화용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 체온 조절, 장벽 기능 및 여러 가지 생리 기능 등을 가진 보호막으로 인체의 중요 기관 중 하나이다. 피부 노화는 크게 두 가지 과정으로 일어나는데, 특별한 환경적 요인 없이 나이가 들면서 일어나는 내인성 노화와 자외선과 같은 환경요인에 장기간 노출되어 피부에 변화를 일으키는 광노화가 있다. 노화에 따른 피부의 생리적 변화로는 피부 구성 성분인 표피, 진피 및 피하 조직의 두께가 얇아지는 현상, 피부의 수분 함량이 떨어지고 피부가 건조해지는 현상, 색소침착 등 다양한 피부 변병이 유발된다. 특히, 과도한 피로 및 스트레스와 증가된 자외선량 등으로 인해 생성되는 활성산소는 콜라겐, 엘라스틴 등의 단백질 분해 효소(MMPs)의 합성을 촉진하여 진피층의 탄력을 감소시킴으로써 피부 주름 및 노화의 주원인으로 작용한다. 따라서 피부 노화에 따른 주름 형성, 탄력 감소, 색소 침착, 피부결 변화, 건조 등 화장료 분야에서 피부 보호 및 항노화에 대한 많은 연구가 이루어지고 있다.

또한, 피부 최외각층에 존재하는 피부 각질층은 우리 몸을 보호하는 것뿐만 아니라 피부 장벽 기능을 수행함으로 피부 수분을 조절하는 역할을 하고 있다. 사람의 각질층의 세포에는 천연보습인자 (Natural Moisture Factor, NMF)가 존재하여 수분이 일정하게 유지될 수 있도록 조절을 하는 성분으로 노화에 따라 그 기능도 점차 저하된다. 최근에는 스트레스, 자외선 등의 외부적 요인에 의해 NMF가 부족해지면서 피부 표면이 건조해지고 피부 탄력이 떨어진다. 피부 탄력이 저하되면 주름이 생기는 피부 노화가 일어나기 때문에 피부의 보습력 유지 또한 항노화 효과를 나타낼 수 있다.

아쿠아포린(aquaporins)은 물 분자만을 선택적으로 통과시키며 모든 세포막에 존재하는 막관통단백질(major intrinsic protein family)로 피부의 수분 흡수를 증가시키는 기작이 있다. 포유동물에서는 13가지 종류가 알려져 있고, 이들 중 아쿠아포린 3 (aquaporin 3)은 피부의 각질형성세포에서 발현하며 아쿠아포린 3을 통한 물과 글리세롤의 흡수와 이동은 세포의 수분 손실을 방지해 피부의 보습 및 탄력을 증가시킨다.

이에 최근에는 다양한 방법을 통해서 피부 노화를 억제하고자 한다. 대표적으로 식물의 전형성능(Totipotency)를 이용한 식물 배양 기술이 개발되어 다양한 생리 활성을 가지는 식물 캘러스 원료 개발이 용이하게 됨에 따라 식물 자원 소비를 최소화하면서 희소가치가 큰 원료 공급 문제를 해결하는 연구가 활발하게 진행 중이다. 한편, 생명공학 기술의 발전에 따라 다양한 주름 개선 및 항노화 관련 펩타이드 합성이 수월해지고 이러한 다양한 펩타이드들의 보다 상세하고 정확한 생체내의 기전이 밝혀짐에 따라 이를 효과적으로 피부에 전달하기 위한 다양한 전달 체계 기술을 접목시킨 방법이 시도되고 있다. 남극, 북극과 같이 사람들이 주거하기 힘든 지역 혹은 극단적인 환경에서 살아가는 동식물 및 미생물을 이용하여 극한의 상황에서의 보호 및 방어 기제에 대한 연구 및 생명력 보존에 관련하여 화장료 조성물에 적용하려는 연구뿐만 아니라, 이러한 기능을 바탕으로 피부에 줄 수 있는 다양한 효능을 효과적으로 전달할 수 있는 기제 또한 활발히 기술 개발에 힘쓰고 있다.

한국등록특허 제1565542호는 거미줄 추출물을 함유하는 피부 리프팅 및 노화 방지용 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 거미줄 펩타이드 또는 거미줄을 붉은덕다리버섯 발효에 의해 가수분해하여 수득한 거미줄 가수분해물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 우수한 피부 보습 효과, 피부 탄력 증진효과 및 피부 주름 개선효과를 발휘한다고 기재되어 있다. 그러나, 본원발명과 같이 거미줄 추출물, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물, 인삼캘러스 배양추출물 및 헵타펩타이드를 일정 비율로 배합한 항노화 조성물에 대해서는 알려진바 없다.

이에, 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점들을 극복하기 위하여 예의 연구노력한 결과, 거미줄 추출물, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물, 인삼캘러스 배양추출물 및 헵타펩타이드를 유효성분으로 함유하는 항노화용 화장료 조성물의 경우, 항산화 효과가 우수하며, 피부의 주름 및 탄력을 개선, 피부 보습력을 증가, 및 피부 장벽을 개선시킴으로써 항노화 효과를 나타낼 수 있음을 확인하고, 본　발명을 완성하게 되었다.

KR

10-1565542

B

따라서, 본 발명의 주된 목적은 항산화 효과가 우수하며, 피부의 주름 및 탄력을 개선, 피부 보습력을 증가, 및 피부 장벽을 개선시킴으로써 항노화 효과을 갖는 항노화용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 거미줄 추출물, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물, 인삼캘러스 배양추출물 및 헵타펩타이드를 유효성분으로 함유하는 항노화용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 본원발명의 거미줄 추출물은 인체의 아미노산이 다량 함유되어 있는 거미줄을 산 또는 프로테아제로 가수분해하여 얻어지는 추출물이다. 함유하고 있는 천연 아미노산을 통해 영양분을 공급받으며 이는 세포 재생에 탁월하다. 또한, 단백질 결합체로 미세한 실타래와 같은 구조로 되어 있는 거미줄 특성상 수분 트랩 역할을 제공하며, 일부의 아미노산(Glu, Gly)은 친수성의 성질을 가지고 있어 피부에 공급되는 수분을 흡수하고 유지시킴으로 뛰어난 보습 효과를 나타낸다.

상기 본원발명의 슈도알테로모나스 발효 추출물은 남극 극저온미생물 Pseudoalteromonas Antarctica NF3의 발효를 통해 추출한 추출물로 동결 방지 기능을 가지는 당단백질을 많이 함유하고 있어 추운 날씨에서도 피부의 수분을 유지시켜주며 경피수분손실(TEWL)로 부터 보호하는 기능을 한다. 또한, 콜라겐 및 엘라스틴 합성을 촉진하여 피부 재생에 도움을 준다.

또한, 자가 재생 능력을 가지고 있는 인삼캘러스배양추출물은 한국산 인삼(Panax Ginseng Cameyer)을 줄기세포 배양기술을 통해 추출한 유효성분이다. 콜라겐 type1 과 3의 합성을 촉진하고 MMP-1과 9의 활동을 저해하며, 세포재생능력을 통해 주름 방지 및 개선 효과를 나타낸다.

본 발명에 있어서, 상기 헵타펩타이드는 콜라겐 합성, 면역 반응, 및 상처치료 등에 관여하는 인체의 피부조직에서 발견된 natural peptide를 모방(mimic)한 합성 펩타이드로서, 바람직하게는 지방산, 예컨대 팔미틱산(Palmitic Acid)과 결합된 헵타펩타이드(Heptapeptide), 더욱 바람직하게는 카퍼팔미토일 헵타펩타이드-14(Copper Palmitoyl Heptapeptide-14) 및 헵타펩타이드-15 팔미테이트(Heptapeptide-15 Palmitate)인 것을 특징으로 한다.

본 발명의 실험예에서는 카퍼팔미토일헵타펩타이드-14 및 헵타펩타이드-15 팔미테이트를 포함하고 있는 X-50 Antiaging CC Solution을 사용하였다.

카퍼팔미토일헵타펩타이드-14 및 헵타펩타이드-15 팔미테이트를 포함하고 있는 X-50 Antiaging CC Solution은 ITD(Intelligent Targeting Device) 기술을 통해 세포외 기질(Extracellular Matrix, ECM)을 구성하고 있는 단백질 elastin, laminine, collagen 등의 mRNA의 생성을 촉진 시켜 항노화 효과를 나타낸다.

이에, 본 발명자들은 피부 보습 효과, 주름 및 탄력 개선 효과, 피부 재생 효과를 나타내는 각 성분들을 일정 비율로 배합한 화장료 조성물의 경우, 단독 성분들에 비해 시너지 효과로 인한 항노화 효과가 우수한 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명에 있어서, 상기 거미추출물, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물. 인삼캘러스 배양추출물 및 헵타펩타이드는 1~2 : 1~2 : 1~2 : 1~2 중량비로 배합될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 2:2:1:1로 배합된 것을 특징으로 한다.

본 발명의 실험예에 따르면, 상기 각 성분들을 단독, 2가지(슈도알테로모나스 발효 추출물. 인삼캘러스 배양추출물), 또는 3가지(거미추출물, 슈도알테로모나스 발효 추출물. 인삼캘러스 배양추출물)를 배합한 경우보다 4가지 성분(거미추출물, 슈도알테로모나스 발효 추출물. 인삼캘러스 배양추출물 및 헵타펩타이드)을 혼합하였을 때 항노화 효과가 더욱 우수한 것을 확인하였으며, 더욱이, 4가지 성분을 2:2:1:1로 배합한 경우 가장 우수한 항노화 효과를 나타내는 것을 확인하였다.

본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부의 주름 및 탄력을 개선함으로써 항노화 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 실험예에 따르면, 피부의 주름 및 탄력 개선 효과를 확인하기 위하여 피브릴린(Fibrillin) 및 프로콜라겐(Procollagen) 발현 정도를 확인한 결과, 각 성분들을 단독(비교예 1-4), 또는 2가지(비교예 5), 및 3가지(비교예 6)를 배합한 경우보다 4가지 성분(실시예1-2), 특히 4가지 성분을 2:2:1:1로(실시예 2)을 혼합하였을 때, 피브릴린 및 프로콜라겐의 발현이 증가한 것을 확인하였다. 이러한 결과로 볼 때, 본원발명의 화장료 조성물은 사람 피부에서 탄력에 중요한 역할을 하는 피브릴린과 주름에 중요한 역할을 하는 프로콜라겐의 발현을 증가시켜 피부의 주름 및 탄력을 개선시킴으로써 항노화 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있다(실험예2-3 참조).

본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 보습력을 증가시킴으로써 항노화 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다. 피부 노화의 원인은 매우 다양하며, 그 중 피부의 수분 손실은 주름, 늘어짐, 푸석거림, 건조함 등 피부 트러블을 유발할 수 있으며, 이는 피부 노화와 직결된다. 따라서, 피부 노화를 방지하기 위해서는 피부 보습 관리를 해주는 것이 필요하다.

본 발명의 실험예에 따르면, 피부 보습 효과를 확인하기 위하여 아쿠아포린(Aquaporin)발현 정도를 확인한 결과, 각 성분들을 단독(비교예 1-4), 또는 2가지(비교예 5), 및 3가지(비교예 6)를 배합한 경우보다 4가지 성분(실시예1-2)을 혼합하였을 때, 아쿠아포린의 발현이 증가한 것을 확인하였다. 이러한 결과로 볼 때, 본원발명의 화장료 조성물은 피부 세포의 수분 흡수를 증가시키는 아쿠아포린의 발현을 증가시켜 피부 보습력을 향상시킴으로써 항노화 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있다(실험예 5 참조).

본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부장벽을 개선시킴으로써 항노화 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다.

피부는 환경 변화에 대응하여 인체 내부의 항상성을 유지하기 위한 피부 장벽 기능을 가지고 있는데, 장벽 기능은 주로 피부의 가장 외각에 위치하는 각질층에 의해 나타나게 된다. 피부의 1차 방어막인 각질층은 물리적 자극이나 상처에 의해 손상될 수 있으며, 아토피나 건조한 피부를 가지는 사람의 경우 각질층의 피부장벽의 기능이 제대로 이루어지지 않거나 손상되어 있다. 상기와 같이 장벽 기능이 제대로 이루어지지 않을 경우 피부 노화가 빠르게 진행될 수 있다.

본 발명의 실험예에 따르면, 피부장벽 개선효과를 확인하기 위하여 트랜스글루탐산분해효소(transglutaminase-1)의 발현 정도를 확인한 결과, 각 성분들을 단독(비교예 1-4), 또는 2가지(비교예 5), 및 3가지(비교예 6)를 배합한 경우보다 4가지 성분(실시예1-2)을 혼합하였을 때, transglutaminase-1의 발현이 증가한 것을 확인하였다. 이러한 결과로 볼 때, 본원발명의 화장료 조성물은 사람 각질형성세포가 표피층에서 각질층으로 분화시에 발현이 증가하여 피부 각화막 형성에 결정적인 역할을 수행하는 transglutaminase-1의 발현을 증가시켜 피부장벽 기능을 개선시킴으로써 항노화 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있다(실험예 4 참조).

본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 또는 바디클렌저로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 제형인 것을 특징으로 한다.

상기 설명한 바와 같이, 본 발명은 거미줄추출물, 슈도알테로모나스발효추출물, 인삼캘러스배양추출물 및 헵타펩타이드를 유효성분으로 함유하는 항노화용 화장료 조성물에 관한 것으로, 피부 탄력인자 및 주름 억제 단백질 발현 증가를 촉진하고 피부 장벽 강화 기능을 수행하는 인자 및 수분 흡수 인자의 증가를 통해 피부 노화를 매우 효과적으로 예방할 수 있다.

도 1은 탄력인자인 피브릴린의 발현증가를 확인한 실험예 2에 대한 결과이다.
도 2는 주름억제단백질인 프로콜라겐의 발현증가를 확인한 실험예 3에 대한 결과이다.
도 3은 피부장벽 강화단백질인 트랜스글루타미네이즈의 발현증가를 확인한 실험예 4에 대한 결과이다.
도 4는 보습인자인 아쿠아포린의 발현증가를 확인한 실험예 5에 대한 결과이다.
도 5는 피부 보습지속력(8시간)을 확인한 실험예 6에 대한 결과이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

실시예 1: 원료의 제조

본 발명에서 사용된 거미줄추출물(A)은 살균된 거미줄에서 불순물을 제거하고 추출하는 공정을 거쳐 제조된 Spider Protein(주식회사 코씨드바이오팜, 대한민국)을 구입하여 사용하였다.

본 발명에서 사용된 슈도알테로모나스발효추출물(B)는 남극 극저온미생물 (Pseudoalteromonas Antarctica NF3)에서 추출한 당단백질수용액인 Antarcticine C(Lipotec, 스페인)을 구입하여 사용하였다.

본 발명에서 사용된 인삼캘러스배양추출물(C)는 한국산 인삼의 줄기세포 배양 후 추출하는 공정을 거쳐 제조된 PhytoG Stem Cell-Korea M. Ginseng(S)(GFC Co.,Ltd., 대한민국)을 구입하여 사용하였다.

본 발명에서 사용된 카퍼팔미토일 헵타펩타이드-14(Copper Palmitoyl Heptapeptide-14), 헵타펩타이드-15 팔미테이트(Heptapeptide-15 Palmitate)는 합성 펩타이드 X-50 Antiaging CC Solution(Infinitec, USA)(D)을 구입하여 사용하였다.

실험예 1: 항산화 효과 - 자유라디칼 소거 실험

실시예 1의 원료의 자유라디칼 소거 작용을 확인하기 위하여, 비교적 안정한 자유라디칼로 존재하여 자유라디칼 소거 작용을 확인하는데 일차적으로 사용되는 방법인, 1,1-Diphenyl-2-pycryl-Hydrazyl(DPPH) 방법을 사용하여 평가하였다.

DPPH 측정은 상기 원료들의 여러 가지 조합으로 샘플을 만들어 처리 농도 300ppm이 되도록 2mM 에탄올 용액으로 제조된 DPPH를 총 부피를 1㎖로 되도록 넣어 37℃에서 30분간 방치한 후 96 well로 옮겨 517nm ELISA reader로 흡광도를 측정하였다. 자유라디칼 소거 작용(%)은 하기 식 1로 산출하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

[식 1]

	성분	소거율 (%)
비교예 1	Spider Protein (A)	19.6
비교예 2	Antarcticine (B)	10.9
비교예 3	PhytoG Stem Cell-Korea M (C)	21.9
비교예 4	X-50 Antiaging (D)	4.8
비교예 5	B + C, 1:1	25.1
비교예 6	A + B + C, 1:1:1	25.9
실시예 1	A + B + C + D, 1:1:1:1	30.0
실시예 2	A + B + C + D, 2:2:1:1	35.2

그 결과, 상기 표 1의 결과에서 보는 바와 같이, 각 원료 자체로도 자유라디칼 소거작용이 있었으나, 원료 혼용에 의한 높은 상승작용을 보이는 조합들이 있었는데, 그 중에서도 4가지 원료를 모두 혼합하여 사용하였을 때, 가장 우수한 소거능을 나타냄을 확인할 수 있었다. 특히, 동일한 비율로 혼합하여 처리한 경우(실시예 1)보다 일정한 비율로 배합하여 사용하였을 때(실시예 2), 원료간의 상호작용이 증폭되어 활성산소 제거에 주는 영향이 커지는 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 2: 탄력 증대 효과 - Fibrillin 발현 확인

상기 표 1의 결과에서 보인 항산화 효과들이 사람 피부에서 탄력에 중요한 역할을 하는 피브릴린의 생성을 증가시키는지를 자유라디칼 소거능이 우수했던 원료 조합 8가지(비교예1~6, 실시예1~2)를 사용하여 다음과 같은 방법으로 측정하였다.

사람 섬유아세포를 well 세포 배양 접시에 4 X 10⁵의 밀도로 접종한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 24시간 배양하였다. 다음, 부착시킨 세포에 원료 8종을 처리한 후, 24시간 배양하였다. 그 후 각 샘플의 세포에서 트리졸(RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop을 이용하여 260㎚에서 RNA를 정량하고, 각각 2㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA에 타겟 단백질인 fibrillin 주형(primer)과 시아닌 염료인 사이버그린(SYBR Green supermis, Applied Biosystems, 미국)을 첨가한 혼합물을 이용하여 real-time PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써 최종적으로 피브릴린 유전자의 발현 정도를 평가하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.

그 결과, 도면 1에 나타낸 바와 같이 원료 8 종의 fibrillin 발현 증가를 확인하였고, 그 중에서도 거미줄 추출물, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물, 인삼캘러스 배양추출물 및 헵타펩타이드를 혼합한 본원발명의 실시예 1 및 실시예 2의 피브릴린 발현 증가 효과가 가장 우수하다는 것을 확인하였다.

실험예 3: 주름 억제 효과 - Procollagen 발현 확인

상기 표 1의 결과에서 보인 항산화 효과들이 사람 피부에서 주름에 중요한 역할을 하는 콜라겐의 생성을 증가시키는지를 자유라디칼 소거능이 우수했던 원료 조합 8가지(비교예1~6, 실시예1~2)를 사용하여 다음과 같은 방법으로 측정하였다.

사람 섬유아세포를 6 well 세포 배양 접시에 4 X 10⁵의 밀도로 접종한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 24시간 배양하였다. UVB를 15mJ 조사한 후 상기 원료 8 종을 처리하고 24 시간 동안 추가 배양하였다. 그 후 각 샘플의 세포에서 트리졸(RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop을 이용하여 260㎚에서 RNA를 정량하고, 각각 2㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA에 타겟 단백질인 procollagen 주형(primer)과 시아닌 염료인 사이버그린 (SYBR Green supermis, Applied Biosystems, 미국)을 첨가한 혼합물을 이용하여 real-time PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써 최종적으로 type 1 procollagen 유전자의 발현 정도를 평가하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이 처리 원료 8종의 type 1 procollagen 생성이 증가하였고, 그 중에서도 거미줄 추출물, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물, 인삼캘러스 배양추출물 및 헵타펩타이드를 혼합한 본원발명의 실시예 1 및 실시예 2의 type 1 procollagen 회복 능력이 가장 우수한 것을 확인하였다.

실험예 4: 장벽 재생 효과 - Transglutaminase 발현 확인

상기 표 1의 결과에서 보인 원료 조합 8가지(비교예1~6, 실시예1~2)를 사용하여 사람 각질형성세포가 표피층에서 각질층으로 분화시에 발현이 증가하여 피부 각화막(cornified envelope) 형성에 결정적인 역할을 수행하는 transglutaminase 1 유전자의 발현 통한 장벽재생 효과를 다음과 같은 방법으로 측정하였다.

사람 각질형성세포를 6 well 세포 배양 접시에 4 X 10⁵의 밀도로 접종한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 24시간 배양하였다. 원료 8종을 첨가하여 24 시간 동안 배양하고 세포를 회수하여 트리졸(RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop을 이용하여 260㎚에서 RNA를 정량하고, 각각 2㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA에 타겟 단백질인 transglutaminase 1 주형(primer)과 시아닌 염료인 사이버그린 (SYBR Green supermis, Applied Biosystems, 미국)을 첨가한 혼합물을 이용하여 real-time PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써 최종적으로 transglutaminase 1 유전자의 발현 정도를 평가하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 처리 원료 8종의 transglutaminase 1 발현을 확인하였고, 그 중에서도 거미줄 추출물, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물, 인삼캘러스 배양추출물 및 헵타펩타이드를 혼합한 본원발명의 실시예 1 및 실시예 2의 transglutaminase 1 발현 증가가 가장 우수한 것을 확인하였다.

실험예 5: 보습 효과 - Aquaporin 발현 확인

상기 표 1의 결과에서 보인 원료 조합 8가지(비교예1~6, 실시예1~2)를 사용하여 피부 세포의 수분 흡수를 증가시키는 아쿠아포린 3 (aquaporin 3) 의 발현증가를 통한 보습 효과를 다음과 같은 방법으로 측정하였다.

사람 각질형성세포를 6 well 세포 배양 접시에 4 X 10⁵의 밀도로 접종한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 24시간 배양하였다. 원료 8종과 양성 대조군으로 레티놀 1ppm 을 첨가하여 24 시간 동안 배양하고 세포를 회수하여 트리졸(RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop을 이용하여 260㎚에서 RNA를 정량하고, 각각 2㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA에 타겟 단백질인 aquaporin 3 주형(primer)과 시아닌 염료인 사이버그린 (SYBR Green supermis, Applied Biosystems, 미국)을 첨가한 혼합물을 이용하여 real-time PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써 최종적으로 aquaporin 3유전자의 발현 정도를 평가하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.

그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이 처리 원료 8종의 aquaporin 3 발현을 확인하였고, 그 중에서도 거미줄 추출물, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물, 인삼캘러스 배양추출물 및 헵타펩타이드를 혼합한 본원발명의 실시예 1 및 실시예 2는 양성대조군으로 처리한 레티놀보다 aquaporin 3의 발현 증가 효과가 가장 우수한 것을 확인하였다.

처방예 1: 에센스

실시예 2의 4 가지 원료를 함유하는 화장료 중 에센스의 처방예는 하기 표 2과 같다.

성분	함량 (단위: 중량%)
Spider Protein	1
Antarcticine C	1
PhytoG Stem Cell-Korea M Ginseng	0.5
X-50 Antiaging CC Solution	0.5
글리세린	5
디메치콘	13.5
디소듐이디티에이	0.05
아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머	0.12
카라기난	0.2
암모늄아크릴로일디메칠타우레이트/브이피코폴리머	0.2
방부제	0.9
정제수	잔량
합계	100

실험예 6: 피부 보습지속력 효과 (8시간)

본 발명의 Spider Protein, Antarcticine C, PhytoG Stem Cell-Korea M Ginseng, X-50 Antiaging CC Solution 4가지 원료를 함유하는 화장료의 피부 보습지속력 효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 실시하였다. 평균 연령 24.8세의 건강한 성인 5명을 대상으로 상기 처방예 1 에센스를 8ul씩 시험부위 (2cm×2 cm)에 고루 도포하여 흡수시킨 후, 직후, 2시간 후, 4시간 후, 8시간 후의 피부 수분도를 각각 3회씩 Corneometer(CK ekectronic, Germany)로 측정하였다.

그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이 무도포에 비하여 에센스를 도포한 후 피부수분도가 증가한 상태로 8시간까지 유지가 된 것을 확인하였다.

Claims

거미줄 추출물, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물, 인삼캘러스 배양추출물 및 헵타펩타이드를 유효성분으로 함유하는 항노화용 화장료 조성물에 관한 것으로, 상기 헵타펩타이드는 카퍼팔미토일 헵타펩타이드-14(Copper Palmitoyl Heptapeptide-14) 및 헵타펩타이드-15 팔미테이트(Heptapeptide-15 Palmitate)인 것을 특징으로 하는 항노화용 화장료 조성물.
삭제
제 1항에 있어서, 상기 거미줄 추출물, 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas) 발효 추출물. 인삼캘러스 배양추출물 및 헵타펩타이드는 1~2 : 1~2 : 1~2 : 1~2 중량비로 배합된 것을 특징으로 하는 항노화용 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부의 주름 및 탄력을 개선함으로써 항노화 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 항노화용 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 보습력을 증가시킴으로써 항노화 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 항노화용 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 장벽을 개선시킴으로써 항노화 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 항노화용 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 또는 바디클렌저로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 제형인 것을 특징으로 하는 항노화용 화장료 조성물.