KR102101952B1

KR102101952B1 - 거미줄 추출물을 함유하는 피부 미백용 및 자외선에 의한 피부 손상 예방용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102101952B1
Application number: KR1020180145945A
Authority: KR
Inventors: 박성민; 이정노; 최수연
Original assignee: 주식회사 코씨드바이오팜
Priority date: 2018-11-23
Filing date: 2018-11-23
Publication date: 2020-04-27

Abstract

본 발명은 10~70KDa의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 10~70KDa의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드는 우수한 멜라닌 생성 억제효과, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 발휘하여, 10~70KDa의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 우수한 피부 미백 효과, 자외선에 의한 피부 손상 예방 효과를 발휘한다.

Description

거미줄 추출물을 함유하는 피부 미백용 및 자외선에 의한 피부 손상 예방용 화장료 조성물 {Cosmetic composition with spider web extract peptide for skin whitening and preventing UV-induced skin damage}

본 발명은 거미줄 추출물을 함유하는 피부 미백용 및 자외선에 의한 피부 손상 예방용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 10~70KDa의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 피부색에 영향을 미치는 색소로는 멜라닌, 멜라노이드, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있는데, 그중에서도 멜라닌은 피부색에 가장 큰 영향을 미친다. 일반적으로 멜라닌은 자외선을 흡수 또는 산란시켜 자외선으로부터 피부가 손상되는 것을 방지하는데 중요한 역할을 하며, 활성 산소종을 제거하는 기능이 탁월하다. 그러나 멜라닌은 그 자체가 활성 산소를 발생하기도 하고, 자유 라디칼의 성질을 나타내기도 하는바, 이러한 멜라닌의 부작용을 방지하기 위하여 멜라닌 생성단계에서 여러 사이토카인을 억제할 필요가 있다.

멜라닌은 아미노산인 티로신(tyrosine)이 티로시나제(tyrosinase)에 의해 산화되어 도파(Dopa)가 되고 다시 도파퀴논(Dopaquinone)이 되어 디하이드록시 페닐알라닌(dihydroxy phenylalanine)으로 전환되는 것을 시작으로 일련의 산화 과정을 거쳐 갈색 (pheomelanin), 흑색 (eumelanin)의 중합체로 생합성 된다. 이러한 멜라닌의 생합성 과정은 멜라노좀(melanosones)이라는 특수한 형태의 갈색 세포 내 소기관에서 진행되며, 생합성 중 멜라닌 과립을 포함하게 된 멜라노좀은 멜라노사이트에서 케라티노사이트 (각질 세포)의 핵 주변으로 이동하면서 축적된다.

멜라닌의 합성, 멜라노좀의 증가, 및 주위 각질 세포로의 이동은 유전적인 영향이 크지만 부분적으로는 호르몬과 자외선에 의한 영향을 받으며, 그 밖에는 세포내 조절 인자인 사이토카인(cytokine), 구리, 아연, 철 등의 금속이온 및 인터페론, 프로스타글란딘, 히스타민 등에 의해 영향을 받는 것으로 알려졌다.

종래 연구에 의하면, 비타민씨 (일본 특개평 4-9320), 하이드로퀴논 (일본 특개평-192062), 코직산 (일본 특개소 56-7710), 알부틴 (일본 특개평 4-93150) 및 일부의 추출물이 멜라닌 생성에 관여하는 티로시나제의 저해 활성을 가지고 있어 미백 화장료로 이용되고 있으나, 화장품 제형에 이용되기에는 그 안정성이 낮아 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능 불분명 등의 문제로 인해서 그 사용이 제한되는 실정이다. 따라서 이러한 일련의 문제를 해결하기 위해 많은 연구자가 미백에 효능이 있는 물질을 개발하기 위하여 지속적으로 노력하고 있다.

한편, 거미는 전 세계에 약 3만 종이 서식하는 절지동물로, 우리나라에 약 60여 종이 서식하는 것으로 알려졌다. 거미는 다양한 곳에서 서식하지만, 거미의 종류에 따라 거미집과 거미줄의 모양이 다른 것으로 알려졌다. 거미줄은 거미 몸 안에서 액체상태의 단백질이 산과 만나 생성되는데, 수많은 거미줄 가닥이 겹쳐지고 닿으면서 한 가닥의 거미줄로 보이게 된다. 일반적으로 거미줄은 포획용, 안전용, 알 보호용 등으로 구분되어 진다. 거미줄은 탄성이 좋고, 동일 두께에서 강철의 인장강도보다 약 5배가 튼튼한 것으로 알려졌으며, 사람에게 알레르기를 일으키지 않으며 양친매성을 갖는다.

거미줄 구성 펩타이드는 GPGGX/GPGQQ, GGX 등의 아미노산이 공통으로 포함되어 있으며, Gly 37.1%, Ala 21.1%, Arg 7.6%, Ser 4.5%, Glu 4.4%, Pro 4.3%, Leu 3.8%의 구성비를 갖는다 (International Journal of Biological Macromolecules 24(1999)265-270). 이중 Gly, Glu, Tyr, Ser, Leu은 수축작용에 영향을 미쳐 분자적 운동을 증가시키는 것으로 보고되어 있다.

한편, 거미줄은 붕대, 인공섬유, 방탄조끼 등의 방사기술에 이용되고 있어 그 적용분야가 매우 다양하나, 거미줄이 적용된 화장료 조성물에 관한 연구는 미미한 실정이다.

대한민국 등록특허 제10-348507호(등록일자: 2013.12.30)에는, 거미 실크 단백질을 코딩하는 핵산 서열, 상기 서열을 포함하는 벡터, 이러한 벡터로 형질전환된 숙주에 관한 기술이 기재되어 있다. 대한민국 등록특허 제10-1236212호(등록일자: 2013.02.18)에는, 하귤(Citrus natsdaidai) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 대한 기술이 기재되어 있다. 대한민국 등록특허 제10-1461704호(등록일자: 2014.11.07)에는, 모로우붉은실(Polysiphonia morrowii Harvey) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 대한 피부 보호용 화장료 조성물에 관한 기술이 기재되어 있다.

본 발명은 피부 미백 및 자외선에 의한 피부 손상 방지 효과가 우수한 화장료 조성물을 개발하여 제공하고자 한다.

본 발명은 10~70KDa의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물에 있어, 상기 거미줄 펩타이드는, 바람직하게 거미줄을 산 또는 프로테아제로 가수분해하여 수득된 것이 좋다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물에 있어, 상기 거미줄 펩타이드는, 바람직하게 거미줄을 붉은덕다리버섯으로 발효하여 수득된 것이 좋다.

한편, 본 발명은 10~70KDa의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 예방용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 자외선에 의한 피부 손상 예방용 화장료 조성물에 있어, 상기 거미줄 펩타이드는, 바람직하게 거미줄을 산 또는 프로테아제로 가수분해하여 수득된 것이 좋다.

본 발명의 자외선에 의한 피부 손상 예방용 화장료 조성물에 있어, 상기 거미줄 펩타이드는, 바람직하게 거미줄을 붉은덕다리버섯으로 발효하여 수득된 것이 좋다.

본 발명의 10~70KDa의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드는 우수한 멜라닌 생성 억제효과, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 발휘하여, 10~70KDa의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 우수한 피부 미백 효과, 자외선에 의한 피부 손상 예방 효과를 발휘한다.

본 발명은 10~70KDa의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 또는 자외선에 의한 피부 손상 예방용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 10~70KDa의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드는 우수한 멜라닌 생성 억제효과, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 발휘한다. 이에 따라, 10~70KDa의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 우수한 피부 미백 효과, 자외선에 의한 피부 손상 예방 효과를 발휘한다. 하기 실험예에 의하면 10KDa 미만, 70KDa 초과의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드는 상기와 같은 우수한 피부 개선 효과를 발휘하지 않음을 확인할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어, 상기 거미줄 펩타이드는, 바람직하게 거미줄을 산 또는 프로테아제로 가수분해하여 수득된 것을 사용하는 것이 좋다. 또한, 바람직하게는 거미줄을 붉은덕다리버섯으로 발효하여 수득된 것을 사용하는 것이 좋다. 붉은덕다리버섯은 균체 외로 가수분해효소를 왕성히 분비하는데, 거미줄을 붉은덕다리버섯으로 발효하면, 분비된 가수분해효소에 의해 거미줄은 펩타이드로 분해된다. 붉은덕다리버섯에 의한 발효 방법은 특별한 방법으로 한정되는 것은 아니고, 통상적으로 사용되는 버섯 균사체 발효 방법에 의해 수행될 수 있다.

한편, 본 발명에 있어, 상기 거미줄 펩타이드는, 바람직하게 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.00001~30.0중량%가 함유되는 것이 좋다. 더욱 바람직하게는 화장료 조성물 전체 중량에 대해서 0.01~10중량% 함유되는 것이 좋다. 거미줄 펩타이드의 함량이 0.00001중량% 미만인 경우에는 피부 개선 효과가 나타나지 않고, 30.0중량% 초과할 경우 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효능이 증가하지 않는다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 10~70KDa 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명의 구성을 하기 실시예 및 실험예를 통해 구체적으로 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예 및 실험예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.

[ 제조예 1: 산에 의해 가수분해된 거미줄 펩타이드의 제조]

야생 및 실내에서 수거한 거미줄 10.0g을 10배량의 1N의 HCl 용액에 3시간 동안 교반한 뒤, 1N의 NaOH 용액으로 중화시켜 거미줄을 가수분해하였다. 이후, HP-20이 충진된 레진으로 1차 분획하여 거미줄 펩타이드 분획을 얻은 후, 세파덱스 레진(Sephadex LH-20)이 충진된 컬럼관으로 추가 정제하여 분자량 10~70KDa의 거미줄 펩타이드를 수득하였다. 분자량은 SDS-PAGE를 이용하여 확인하였다. 그 후, 상기 거미줄 펩타이드를 1%가 되도록, 50% 부틸렌글라이콜 수용액에 녹여 하기 실험예에 사용하였다.

[제조예 2: 프로테아제에 의해 가수분해된 거미줄 펩타이드 제조]

야생 및 실내에서 수거한 거미줄 10.0g을 100g의 물에 분산시킨 후, 프로테아제 (대종상사 Subtilisin) 10.0g을 가한 후, 50℃에서 3일간 반응시켜 거미줄을 가수분해시켰다. 이후, HP-20이 충진된 레진으로 1차 분획하여 펩타이드 분획을 얻은 후, 세파덱스 레진(Sephadex LH-20)이 충진된 컬럼관으로 추가 정제하여 분자량 10~70KDa의 거미줄 펩타이드를 수득하였다. 분자량은 SDS-PAGE를 이용하여 확인하였다. 그 후, 상기 거미줄 펩타이드를 1%가 되도록, 50% 부틸렌글라이콜 수용액에 녹여 하기 실험예에 사용하였다.

[ 제조예 3: 붉은덕다리버섯 발효에 의한 거미줄 펩타이드 제조]

야생 및 실내에서 수거한 거미줄 10.0g을 100g의 물에 분산시킨 후, 붉은덕다리버섯(Lａｅｔｉｐｏｒｕｓ sｕｌｐｈｕｒｅｕｓ) ＣＳ0218 (ＫＦＣＣ 11494Ｐ) 균사체 배양액(발효액)을 종균 접종하였다. 여기에 탄소원으로 포도당 2%를 첨가하였으며, 펩톤 0.25%를 추가로 첨가하여 발효를 개시하였다. 발효는 5L 발효조에서 10일간, 37℃, pH 6의 조건을 유지하며 수행하였다. 발효 완료 후 발효액을 원심분리함으로써, 균체를 제거하였다. 균체를 제거하여 수득한 거미줄 펩타이드 발효물을 최종 70%(v/v) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #10 여과지로 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 0.25uM의 여과기를 이용하여 최종 여과하였다.

이후, 상기 추출단계에서 얻어진 추출액을 HP-20이 충진된 레진으로 1차 분획하여 펩타이드 분획을 얻은 후, 세파덱스 레진(Sephadex LH-20)이 충진된 컬럼관으로 추가 정제하여 분자량 10~70KDa의 거미줄 펩타이드를 수득하였다. 분자량은 SDS-PAGE를 이용하여 확인하였다. 그 후, 상기 거미줄 펩타이드를 1%가 되도록, 50% 부틸렌글라이콜 수용액에 녹여 하기 실험예에서 사용하였다.

[비교제조예 1-1: 산에 의해 가수분해된 저분자 거미줄 펩타이드 제조]

상기 제조예 1에서 산에 의해 가수분해된 거미줄 펩타이드를 세파덱스 레진(Sephadex LH-20)이 충진된 컬럼관으로 분획하여 10KDa 미만의 거미줄 펩타이드를 수득하였다. 그 후, 상기 거미줄 펩타이드를 1%가 되도록, 50% 부틸렌글라이콜 수용액에 녹여 하기 실험예에서 사용하였다.

[비교제조예 1-2: 산에 의해 가수분해된 고분자 거미줄 펩타이드 제조]

상기 제조예 1에서 산에 의해 가수분해된 거미줄 펩타이드를 세파덱스 레진(Sephadex LH-20)이 충진된 컬럼관으로 분획하여 70KDa 초과의 거미줄 펩타이드를 수득하였다. 그 후, 상기 거미줄 펩타이드를 1%가 되도록, 50% 부틸렌글라이콜 수용액에 녹여 하기 실험예에서 사용하였다.

[비교제조예 2-1: 프로테아제에 의해 가수분해된 저분자 거미줄 펩타이드 제조]

상기 제조예 2에서 프로테아제에 의해 가수분해된 거미줄 펩타이드를 세파덱스 레진(Sephadex LH-20)이 충진된 컬럼관으로 분획하여 10KDa 미만의 거미줄 펩타이드를 수득하였다. 그 후, 상기 거미줄 펩타이드를 1%가 되도록, 50% 부틸렌글라이콜 수용액에 녹여 하기 실험예에서 사용하였다.

[비교제조예 2-2: 프로테아제에 의해 가수분해된 고분자 거미줄 펩타이드 제조]

상기 제조예 2에서 프로테아제에 의해 가수분해된 거미줄 펩타이드를 세파덱스 레진(Sephadex LH-20)이 충진된 컬럼관으로 분획하여 70KDa 초과의 거미줄 펩타이드를 수득하였다. 그 후, 상기 거미줄 펩타이드를 1%가 되도록 50% 부틸렌글라이콜 수용액에 녹여 하기 실험예에서 사용하였다.

[비교제조예 3: 거미줄 추출물 제조]

야생 및 실내에서 수거한 거미줄 10.0g을 1.0kg 50% 부틸렌글라이콜 수용액에 녹인 후, 400메쉬 여과망으로 여과하여 거미줄 추출물을 제조하였다.

[실험예 1: 거미줄 펩타이드의 B16F1 멜라닌 형성 세포를 이용한 멜라닌 생성 억제 효과 확인]

본 실험에서는 상기 제조예 1 내지 3에서 제조한 분자량 10~70KDa의 거미줄 펩타이드의 멜라닌 생성 억제 효과를 확인하고자, B16F1 멜라닌 형성 세포에서의 멜라닌 생성 억제 정도를 확인하였다.

본 실험에 사용한 B16F1 멜라닌 형성 세포는 마우스에서 유래한 세포주이며, 멜라닌이라는 흑색 색소를 분비하는 세포로서, ATCC(American Type Culture Collection)로부터 분양받아 사용하였다. 이 세포의 인공 배양 중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색 색소가 감소하는 정도를 비교하였다.

B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생합성 억제 효과 측정은 다음과 같이 수행하였다.

B16F1 멜라닌 형성 세포를 6웰 플레이트에 각 웰 당 2×10⁵ 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후, 독성을 유발하지 않는 농도 (1, 5, 10, 25, 50ppm)로 상기 제조예 1 내지 3, 비교제조예 1-1 내지 3 및 양성대조군으로 알부틴을 각각 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 이후, 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심 분리하여 세포를 회수하였다.

세포 내 멜라닌의 정량은 로탄 (Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 구체적으로, 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액 (50mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2mM PMSF) 1㎖를 첨가하여 5분간 와류함으로써 세포를 파쇄하였다. 그 후, 원심분리 (3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH (10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후, 마이크로 플레이트 판독기로 405nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다.

B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 수학식 1에 의하여 계산하였으며, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

[수학식 1]

A: 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양

B: 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양

처리 농도 (ppm)	멜라닌 생성 저해율(%)
처리 농도 (ppm)	제조예1	제조예2	제조예3	비교 제조예 1-1	비교 제조예 1-2	비교 제조예 2-1	비교 제조예 2-2	비교 제조예 3	알부틴
1	17.18	15.13	26.62	1.22	1.15	1.08	0.98	1.18	6.5
5	29.74	24.64	42.01	2.05	1.61	1.22	1.02	1.34	9.7
10	57.56	67.66	71.55	5.44	6.42	2.72	3.33	7.23	15.3
25	79.64	77.23	83.24	6.71	8.04	3.74	2.85	9.12	24.1
50	85.78	89.43	93.15	7.54	8.17	4.01	3.65	5.23	50.7

실험 결과, 제조예 1 내지 3 (분자량 10~70KDa의 거미줄 펩타이드)을 처리하였을 시, 농도 의존적으로 멜라닌 생성 저해율이 증가함을 확인할 수 있었다. 또한, 양성대조군인 알부틴보다 월등히 우수한 멜라닌 생성 저해 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다. 또한, 비교제조예 1-1 내지 3 (분자량 10KDa 미만, 70KDa 초과 거미줄 펩타이드, 거미줄 추출물)은 멜라닌 생성 저해 효과가 없음을 확인할 수 있었다.

상기와 같은 결과로부터, 분자량이 10~70KDa인 거미줄 펩타이드가 우수한 멜라닌 생성 저해 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다.

[실험예 2: 거미줄 펩타이드의 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인(IL-1α) 발현 억제 효과 확인]

본 실험에서는 상기 제조예 1 내지 3에서 제조된 분자량 10~70KDa의 거미줄 펩타이드의 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인(IL-1α) 발현 억제 정도를 측정하고자 하였다.

사람의 표피 조직에서 분리한 섬유아세포(Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5×10⁴개씩 분주하고, 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각각의 웰에 PBS 500㎕를 첨가하였다. 상기 섬유아세포에 자외선 B (UVB) 램프 (Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠을 조사한 후, PBS를 덜어내고 세포 배양배지 (DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350㎕를 첨가하였다. 그 후, 제조예 1 내지 3 및 비교제조예 1-1 내지 3을 처리한 후, 5시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배양 상층액 150㎕를 취하여 IL-1α의 양을 정량하였다. IL-1α의 양은 효소 면역 분석법(Enzyme-linked Immunosorbent Assay)을 이용하여 정량화하였으며, 염증성 사이토카인 (IL-1α)의 발현 억제율은 하기 수학식 2에 의해 계산하였고, 그 결과는 표 2에 나타내었다.

[수학식 2]

Bo: 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량

Bt: 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량

So: 자외선 조사하지 않고 시료 처리한 웰의 IL-1α 생성량

St: 자외선 조사하고 시료 처리한 웰의 IL-1α 생성량

처리 농도 (ppm)	염증성 사이토카인 발현 억제율(%)
처리 농도 (ppm)	제조예1	제조예2	제조예3	비교 제조예 1-1	비교 제조예 1-2	비교 제조예 2-1	비교 제조예 2-2	비교 제조예3
1	5.1	4.5	10.21	2.4	3.2	1.9	2.4	3.2
5	23.2	33.2	39.43	3.7	2.9	3.5	4.1	9.8
10	36.7	41.2	50.08	4.1	4.6	2.9	3.6	7.5
25	66.4	70.5	75.59	3.6	3.7	3.1	2.9	3.4
50	76.6	81.2	88.42	4.3	3.5	3.8	4.4	3.7

실험 결과, 제조예 1 내지 3 (분자량 10~70KDa 거미줄 펩타이드)은 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 농도 의존적으로 억제함을 확인할 수 있었다. 또한, 비교제조예 1-1 내지 3 (분자량 10KDa 미만, 70KDa 초과 거미줄 펩타이드, 거미줄 추출물)은 IL-1α 생성 억제 효능이 없는 것을 확인할 수 있었다.

상기와 같은 결과로부터, 분자량이 10~70KDa인 거미줄 펩타이드는 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 1L-1α의 생성을 효과적으로 억제함으로 확인할 수 있었다.

[실시예 1: 거미줄 펩타이드를 함유하는 화장료 조성물의 제조]

본 실시예에서는 하기 표 3과 같이 A-B-C의 순서대로 혼합한 후, 거미줄 펩타이드 또는 거미줄 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제조한 후, 각각 제형예 1 내지 3, 비교제형예 1 내지 5라고 지칭하였다.

구분	성분	제형예 1	제형예 2	제형예 3	비교 제형예1	비교 제형예 2	비교 제형예 3	비교 제형예 4	비교 제형예 5
A	거미줄 펩타이드 (제조예 1)	5.0	-	-	-	-	-	-	-
	거미줄 펩타이드 (제조예 2)	-	5.0	-	-	-	-	-	-
	거미줄 펩타이드 (제조예 3)	-	-	5.0	-	-	-	-	-
	저분자 거미줄 펩타이드 (고분자 비교제조예 1-1)	-	-	-	5.0	-	-	-	-
	거미줄 펩타이드 (비교제조예 1-2)	-	-	-	-	5.0	-	-	-
	저분자 거미줄 펩타이드 (고분자 비교제조예 2-1)	-	-	-	-	-	5.0	-	-
	거미줄 펩타이드 (비교제조예 2-2)	-	-	-	-	-	-	5.0	-
	거미줄 추출물 (비교제조예 3)	-	-	-	-	-	-	-	5.0
	EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
	정제수	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100
B	세토스테아릴알코올	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
	글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
	마이크로크리스탈린	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
	스쿠알	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	유동파라핀	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	트리옥타노인	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	폴리솔베이트	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2
	솔비탄스테아레이트	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
	토코페릴아세테이트	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
	사이클로메치콘	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
C	향,방부제	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량

[실험예 3: 거미줄 펩타이드를 함유하는 화장료 조성물의 피부 미백 효과 확인]

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 제조된 제형예 1 내지 3과 비교제형예 1 내지 5의 피부 미백 효과를 확인하고자 하였다.

색소침착증을 가지고 있는 건강한 성인 여성 140명을 무작위로 20명씩 7개 그룹(A, B, C, D, E, F 및 G)으로 나눈 후, 상기 제형예 1 내지 3, 비교제형예 1 내지 5의 화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 8주간 도포하였다. 이후, 피부색의 변화를 스펙트로포토미터(Minolta CM600-d)를 이용하여 색의 밝기 변화(L)를 측정하고, 복수의 숙련자에 의한 객관적 육안관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 실시하여, 미백효과를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 이때, 미백효과 정도를 다음의 7등급으로 평가하였다.

<미백효능 평가 기준>

-3: 매우악화, -2: 악화, -1: 약간 악화, 0: 변화 없음, 1: 약간 개선, 2: 개선, 3: 매우 개선

피검자	피부색의밝기변화(L)
피검자	A그룹 (제형예 1)	B그룹 (제형예 2)	C그룹 (제형예 3)	C그룹 (비교 제형예 1)	D그룹 (비교 제형예 2)	E그룹 (비교 제형예 3)	F그룹 (비교 제형예 4)	G그룹 (비교 제형예 5)
1	3.3	3.0	3.4	1.6	1.8	1.3	1.2	1.4
2	2.8	3.1	3.1	1.4	1.2	0.9	1.0	1.1
3	2.5	2.8	3.0	1.7	1.5	1.4	1.1	1.6
4	3.5	3.2	3.5	1.2	1.4	1.1	1.4	0.9
5	3.7	3.4	3.3	1.5	1.3	1.0	1.3	1.2
6	3.6	3.3	3.5	1.8	1.4	1.1	0.9	1.2
7	4.0	3.5	3.9	1.3	1.1	1.3	1.5	1.0
8	3.1	3.4	3.3	0.9	1.7	1.2	1.1	1.3
9	2.9	3.1	3.1	1.1	1.6	0.9	1.0	0.8
10	2.9	2.9	2.9	1.4	1.0	1.1	1.3	1.2
11	3.2	3.3	3.2	1.3	1.2	1.3	1.5	1.1
12	3.1	2.7	3.2	1.7	1.2	1.4	1.2	1.5
13	3.5	3.3	3.3	1.6	1.5	1.3	1.4	1.4
14	3.3	3.1	3.3	1.6	1.3	1.0	1.1	0.9
15	2.7	2.8	2.8	1.2	1.1	1.4	1.6	1.2
16	3.8	3.4	3.7	1.5	1.1	1.1	0.9	1.3
17	4.1	3.6	4.0	1.3	0.8	1.1	1.2	1.0
18	3.3	4.0	3.8	1.8	1.5	1.5	1.3	1.6
19	2.7	2.9	3.0	1.0	1.2	0.9	1.0	1.1
20	3.0	2.7	3.1	0.9	1.3	1.2	1.5	1.0
평균	3.25	3.17	3.32	1.39	1.31	1.18	1.23	1.19

실험결과, 제형예 1 내지 3 (10~70KDa 거미줄 펩타이드 함유 화장료 조성물)의 평균 L값은 3.25 (p<0.01), 3.17 (p<0.01), 3.32 (p<0.01)이며, 비교제형예 1 내지 5 (10KDa 미만, 70KDa 초과 거미줄 펩타이드 함유 화장료 조성물, 거미줄 추출물 함유 화장료)의 평균 L값은 1.39, 1.31, 1.18, 1.23, 1.19 (p<0.01)로 측정되었다.

상기와 같은 결과로부터, 분자량이 10~70KDa인 거미줄 펩타이드를 함유하는 화장료 조성물은 우수한 피부 미백 효과를 발휘함을 확인할 수 있었다.

Claims

10~70KDa의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.

제1항에 있어서,
상기 거미줄 펩타이드는,
거미줄을 산 또는 프로테아제로 가수분해하여 수득된 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.

제1항에 있어서,
상기 거미줄 펩타이드는,
거미줄을 붉은덕다리버섯으로 발효하여 수득된 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.

10~70KDa의 분자량을 가지는 거미줄 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 예방용 화장료 조성물.

제4항에 있어서,
상기 거미줄 펩타이드는,
거미줄을 산 또는 프로테아제로 가수분해하여 수득된 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 예방용 화장료 조성물.

제4항에 있어서,
상기 거미줄 펩타이드는,
거미줄을 붉은덕다리버섯으로 발효하여 수득된 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 예방용 화장료 조성물.