KR101166775B1

KR101166775B1 - 흑찰거대배아미 추출물을 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101166775B1
Application number: KR1020100099131A
Authority: KR
Inventors: 한상익; 장기창; 서우덕; 강항원; 박동수; 이기환; 박수권; 김상민; 송유천; 이학동
Original assignee: 대한민국
Priority date: 2010-10-12
Filing date: 2010-10-12
Publication date: 2012-07-27
Also published as: KR20120037585A

Abstract

본 발명은 흑찰거대배아미 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 흑찰거대배아미 추출물을 함유함으로써 주름 개선 및 미백 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

Description

흑찰거대배아미 추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing extract of black waxy rice with giant embryo}

천연식물은 항산화제, 항염증, 항암 등을 포함하는 생리활성물질의 원천으로서 많은 관심을 끌어 왔으며, 천연식물 내 항산화 물질은 생체내에서 발생한 활성산소의 해독을 위해서 중요한 작용을 하며, 이는 활성산소의 발생을 막는 시스템, 활성산소를 빠르게 안정화하는 시스템 및 활성산소에 의한 손상을 재생하는 시스템 등의 작용이 밝혀져 있다. 종래에는 BHA 및 BHT와 같은 합성 항산화 물질을 이용하였으나 그 독성 때문에 점차 사용이 제한되어 자연 천연 항산화제의 중요성이 더욱 증가하게 되었다.

검정쌀로 알려진 흑미에 함유된 안토시아닌은 상기 언급한 강한 항산화효과와 더불어, 암 예방, 면역력 강화에 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 그리고, 흑미는 미네랄이 풍부해 알칼리 성질을 띠는데, 알칼리성 식품은 여러 공해 물질들과 음식 산화물로 산화된 몸을 중화시켜 각종 염증 질환을 막는 효과가 있다. 특히, 흑미에는 미네랄 중 셀레늄의 함량이 가장 높은데, 흑미에 든 셀레늄은 간세포를 활성화시킬 뿐만 아니라 간세포 파괴를 억제하는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

찹쌀은 멥쌀과 대응되는 말로, 나미(米) 또는 점미(米)라고도 한다. 보통 밥을 짓는 멥쌀은 배젖이 반투명한데, 찹쌀은 유백색으로 불투명하므로 구별할 수 있다. 또 찹쌀의 녹말은 대부분 아밀로펙틴으로 이루어져 있으므로, 요오드 반응이 적갈색을 띠기 때문에 명백히 구별된다. 그리고 찹쌀의 경우 찰진 기운이 높고, 멥쌀보다 소화가 잘 되는 것으로 알려져 있다. 찹쌀을 이용하여 찰떡, 인절미, 경단, 단자 등의 여러 가지 떡을 만들 때 사용되며, 찰밥, 약식, 식혜, 술, 고추장 등을 만드는 데도 쓰이고 있다. 최근 찹쌀 추출물 중 프롤라민 성분이 위궤양에 효과가 있다는 보고도 있다.

피부색을 결정하는 인자에는 기본적으로 인종과 지역, 성별, 나이에 따른 차이를 배제하면 기미 및 주근깨, 자외선 노출로 인한 태닝과 같은 부분, 또는 전체적인 색소침착, 그 외에 여드름 및 흉터, 각질의 분포상태와 혈액순환, 스트레스, 건강상태 등이 있다. 이상의 인자들 가운데에서도 가장 중요한 인자는 색소침착이다.

피부색에 영향을 주는 색소로는 멜라닌, 멜라조이드, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있는데 이중 가장 중요한 것은 멜라닌으로서, 이 멜라닌의 생합성에 영향을 미치는 가장 큰 요인은 자외선과 체내 호르몬 분비 정도이다. 멜라닌은 자외선을 흡수 또는 산란시켜 자외선으로부터 피부가 손상되는 것을 방지하는데 큰 역할을 하는데, 특별한 최대흡수파장이 없으며 전 영역의 빛을 흡수한다. 또한 활성산소종을 제거하는 기능이 탁월하나, 때로는 멜라닌 자체가 활성산소를 발생시키기도 하며, 멜라닌 구조 내의 카테콜이나 퀴논에 의하여 다른 물질을 환원시키거나 산화시키고, 멜라닌 자체가 자유라디칼의 성질을 나타내기도 한다.

멜라닌의 생합성은 아미노산의 일종인 티로신이 멜라닌형성세포의 멜라노좀에서 티로시나아제에 의해 산화되어 디하이드록시 페닐알라닌(dihydroxy phenylalanine)으로 전환되는 것을 시작으로 계속되는 일련의 산화과정을 거쳐 갈색(pheoelanin), 흑색 (eumelanin)의 중합체로 형성된다. 이러한 생합성 과정은 멜라노좀이라는 특수한 형태의 갈색 세포 내 소기관에서 진행되며 멜라닌 과립을 포함한 멜라노좀은 핵 주변 부위에서 수지상 돌기 끝부분으로 이동, 각질세포의 식세포작용에 의해 세포질 내로 이동하고 이들은 각질세포의 핵 주변에 축적된다.

거대배아미는 그 주성분으로 검출되는 항산화성 비타민류인 레티놀, 루테인(Lutein), 토코페롤, 라이신, 리보플라빈, 티아민, 피토스테롤 및 GABA, 팔믹산, 올레익산 등을 함유하고 있어, 섬유아세포의 성장 및 미백 효능, 피부 수분 함유량 증가력을 토대로 하여 주름개선효능 및 미백 효능과 피부의 보습 및 탄력 개선이 우수한 것으로 보고되었다. 이와 같이, 흑미의 안토시아닌 기능과 찹쌀의 기능, 그리고 거대배아미의 효과를 모두 가지고 있는 흑찰거대배아미가 개발되었지만, 이를 응용하는 기술이 부족하여 흑찰거대배아미의 산업화를 위한 기술 개발이 필요하다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명에서는 일반미에 비해 쌀의 주요 기능성 성분 함량이 높은 흑찰거대배아미의 활용과 산업화를 위해, 항산화 활성 및 미백효과가 일반미 및 거대배아미보다 현저하게 우수한 흑찰거대배아미 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공함으로써 본 발명을 완성하였다.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 흑찰거대배아미 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름개선 및 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 흑찰거대배아미 추출물 0.1~100 g, 글리세린 2~4 mg, EDTA 0.04~0.06 mg, 벤조페논-9 0.03~0.05 mg, 카르복시비닐 폴리머 0.1~0.3 mg, 트리에탄올아민 0.1~0.3 mg, 옥시도테세스-25 0.5~0.7 mg, 글리세릴모노스테아레이트 0.8~1.2 mg, 방부제 0.005~0.015 mg, 향료 0.005~0.015 mg 및 정제수를 혼합하는 단계를 포함하는 화장료의 제조방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 주름개선 및 미백용 화장료를 제공한다.

본 발명에 따르면, 흑찰거대배아미 추출물을 함유한 화장료 조성물은 다른 쌀 추출물에 비해 뛰어난 항산화 효과로 인해 노화 및 미백의 주된 메커니즘 중의 한 부분인 산화작용을 차단함으로써 주름방지 및 미백에 효과적이며, 식품으로부터 얻어진 생리활성물질을 함유하기 때문에 그 효과가 뛰어나고 부작용을 유발하지 않은 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부의 산화에 의한 손상, 예를 들면, 반점(갈색 반), 주근깨, 피부균열, 자외선 손상(햇볕에 탐) 등을 예방하는데 매우 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 흑찰거대배아미 추출물의 농도별 세포활성을 비교한 것이다.
도 2는 흑찰거대배아미 추출물의 농도별 B16F1 melanoma 세포활성을 비교한 것이다.
도 3은 마우스의 melanoma 세포에 각각의 조건으로 처리하고 배양한 후 멜라민 억제 활성을 검정한 것이다.

본 발명의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 흑찰거대배아미 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름개선 및 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물에서, 상기 흑찰거대배아미는 흑미이면서 찰성인 거대배아미인 것을 특징으로 하는데, 기존의 흑미이면서 찰성인 조생흑찰벼와 거대배 찰벼(YR23517Acp79)를 인공교배하여 육종 개발된 흑찰거대배아미(밀양263호)를 대상으로 실시예에 사용하였다. 여기서 찰성이란 아밀로스가 2~10%, 아밀로펙틴이 90~98%로 구성된 쌀을 말한다. 또한, 상기 거대배아미란 돌연변이 육종교배를 통해 지금까지의 벼 품종에 비해 쌀눈이 3~5배 이상 커진 품종으로, 쌀 영양소의 80% 이상 집중되어 있는 것으로 알려진 쌀눈이 일반 현미에 비해 3~5배 이상 크기 때문에 쌀의 영양소가 매우 풍부한 품종을 말한다. 또한, 상기 흑찰거대배아미는 흑찰거대배아일반미, 흑찰거대배아현미 및 흑찰거대배아발아현미로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명의 조성물에서, 상기 흑찰거대배아미 추출물은 주름개선 및 미백효과를 갖는 것을 특징으로 하는데, 흑찰거대배아미 추출물이 다른 쌀 추출물에 비해 높은 항산화 활성 및 멜라닌 생합성 억제 활성을 가짐으로써 노화를 방지하여 주름을 개선 및 미백 효과를 가진다. 따라서, 기존의 쌀 추출물을 이용한 화장료 조성물에 비해 현저하게 높은 주름 개선 및 미백 효과를 가지는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 조성물에서, 상기 흑찰거대배아미 추출물은 흑찰거대배아미의 물, 에탄올, 메탄올 또는 에틸아세테이트 추출물이며, 바람직하게는 90~100% 물, 60~80% 에탄올, 60~80% 메탄올 또는 60~80% 에틸아세테이트 추출물이며, 더욱 바람직하게는 100% 물, 70% 에탄올, 70% 메탄올 또는 70% 에틸아세테이트 추출물인 것을 특징으로 하나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 상기 추출은 교반이나 초음파 추출을 이용하여 추출하는 것을 특징으로 하나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명의 조성물에서, 상기 흑찰거대배아미 추출물은 안토시아닌, 아밀로펙틴, 가바(GABA), 감마오리자놀, 단백질, 지방과 지방산, 무기성분, 아미노산, 당류 및 비타민류를 함유하는 것을 특징으로 하는데, 상기 무기성분은 칼슘(Ca), 마그네슘(Mg) 및 철(Fe) 등일 수 있으며, 비타민류는 비타민 B1, 비타민 B2 및 토코페롤류 등일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 상기 흑찰거대배아미 추출물은 거대배아미 추출물에 비해 안토시아닌, 아밀로펙틴 또는 가바(GABA)를 상대적으로 많이 함유하며, 아밀로스는 적게 함유하는 것을 특징으로 하나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명의 조성물에서, 상기 흑찰거대배아미 추출물은 조성물 총 중량 기준으로 0.01 중량% 내지 10 중량% 함유될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명의 조성물에서, 상기 화장료는 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이 크림, 아이 에센스, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일 및 바디에센스로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명은 또한, 흑찰거대배아미 추출물 0.1~100 g, 글리세린 2~4 mg, EDTA 0.04~0.06 mg, 벤조페논-9 0.03~0.05 mg, 카르복시비닐 폴리머 0.1~0.3 mg, 트리에탄올아민 0.1~0.3 mg, 옥시도테세스-25 0.5~0.7 mg, 글리세릴모노스테아레이트 0.8~1.2 mg, 방부제 0.005~0.015 mg, 향료 0.005~0.015 mg 및 정제수를 혼합하는 단계를 포함하는 주름개선 및 미백용 화장료의 제조방법을 제공한다.

상기 화장료의 제조방법은 바람직하게는 흑찰거대배아미 추출물 0.1~100 g, 글리세린 3 mg, EDTA 0.05 mg, 벤조페논-9 0.04 mg, 카르복시비닐 폴리머 0.2 mg, 트리에탄올아민 0.2 mg, 옥시도테세스-25 0.6 mg, 글리세릴모노스테아레이트 1.0 mg, 방부제 0.01 mg, 향료 0.01 mg 및 정제수를 혼합하는 단계를 포함할 수 있다.

본 발명은 또한, 상기 방법에 의해 제조된 주름개선 및 미백용 화장료를 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 흑찰거대배아미 추출물 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수(스킨), 영양 화장수(밀크로션), 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

1. 추출방법

본 실험에 사용될 흑찰거대배아미, 거대배아미(큰눈) 및 일반미(일미)의 전처리는 왕겨 껍질을 제거하고 분쇄하였으며, 발아시료의 경우 30℃ 물에 24시간 동안 침지한 다음 27℃에서 2일간 발아시켜 껍질을 제거하고 건조시켜 분쇄하였다. 분쇄한 시료로부터 물질 추출은 100% 물, 70% 에탄올, 70% 메탄올 및 70% 에틸아세테이트을 사용하여 추출하였고, 추출방법은 교반이나 초음파 추출을 수행하였다.

제조예 1: 화장료 조성물의 제조방법

흑미이며 찰성인 거대배아미 추출물을 유효성분으로 이용하여 다음과 같은 조성으로 에센스를 제조하였다.

[조성]

흑찰거대배아미 추출물 0.1~100 g, 글리세린 3 mg, EDTA 0.05 mg, 벤조페논-9 0.04 mg, 카르복시비닐 폴리머 0.2 mg, 트리에탄올아민 0.2 mg, 옥시도테세스-25 0.6 mg, 글리세릴모노스테아레이트 1.0 mg, 방부제 0.01 mg, 향료 0.01 mg 및 정제수를 혼합하여 제조하였다.

실시예 1: 추출물의 성분 함량 분석

본 실험에서는 상기 1의 추출방법으로 추출된 흑찰거대배아미, 거대배아미(큰눈) 및 일반미(일미)의 추출물 중 함유되어 있는 성분을 측정하였다. 흑미의 기능성 성분인 안토시아닌, 거대배의 주요성분인 감마 아미노부틸릭에시드(이하 가바(GABA)라 한다), 그리고 찹쌀의 특성을 결정하는 성분인 아밀로스의 함량을 측정하였다. 또한 기본적인 종자의 구성성분인 단백질, 지방, 무기성분, 구성아미노산 등을 분석하였다.

가바 함량 분석 결과는 표 1에 나타내었다. 본 발명에 따른 흑찰거대배아미 현미 추출물의 가바함량은 0.34 mg/g으로써 거대배아미(큰눈)의 0.22 mg/g과 일반미(일미)의 0.04 mg/g에 비해 높게 함유하고 있었으며, 발아현미의 경우는 흑찰거대배아미와 거대배아미가 비슷하게 일반미에 비해 2배 정도 함유하고 있었고, 배만 분리하여 가바 함량을 분석한 결과, 흑찰거대배아미가 1.90 mg/g으로서 거대배아미의 1.46 mg/g에 비해 30%이상 함량이 많았으며 일반미에 비해서는 약 3배 함유되어 있음을 확인할 수 있었다.

가바 함량(mg/g)

종류	현미	배	배유	발아현미(48hrs)
흑찰거대배아미	0.34	1.90	0.08	0.88
거대배아미(큰눈)	0.22	1.46	0.04	0.87
일반미(일미)	0.04	0.65	0.04	0.44

항산화 활성이 높다고 알려진 안토시아닌은 흑찰거대배아미가 129.4 mg/100g 함유하고 있었으나, 거대배아미나 일반미에서는 검출되지 않았다. 찰벼의 기준인 아밀로펙틴의 함량도 흑찰거대배아미가 94.5% 함유하고 있었으며, 감마오리자놀은 흑찰거대배아미와 거대배아미가 0.32 mg/g씩 함유하고 있었다. 흑찰거대배아미는 단백질 8.98%, 지방 2.57%를 함유하고 있었으며, 무기성분은 칼슘(Ca) 338.1 mg/kg, 마그네슘(Mg) 1366 mg/kg, 철(Fe) 45.7 mg/kg로서 다른 종류에 비해 많이 함유하고 있음을 알 수 있었다(표 2).

기능성 및 영양성분 함량

종류	안토시아닌 (mg/100g)	아밀로펙틴 (%)	감마오리자놀 (mg/g)	단백질(%)	지방(%)	무기성분(mg/kg)
종류	안토시아닌 (mg/100g)	아밀로펙틴 (%)	감마오리자놀 (mg/g)	단백질(%)	지방(%)	Ca	Mg	Fe
흑찰 거대배아미	129.4	94.5	0.32	8.98	2.57	338.1	1366.0	45.7
거대배아미 (큰눈)	-	85.3	0.32	8.09	3.31	167.1	1294.0	29.6
일반미 (일미)	-	83.5	0.23	7.45	2.25	164.0	875.0	30.3

구성 아미노산 함량분석에서 흑찰거대배아미는 총아미노산 함량이 340.61 mg/g으로 가장 높았으며, 라이신(lysine), 티로신(tyrosine), 알기닌(arginine), 히스티딘(histidine) 등에서도 거대배아미와 일반미에 비해 함량이 높음을 알 수 있었다(표 3).

구성아미노산 함량(mg/g)

구성아미노산	흑찰거대배아미	거대배아미(큰눈)	일반미(일미)
Aspartic acid	20.24	18.21	16.52
Threonine	17.78	16.56	14.16
Serine	14.28	13.40	11.92
Glutamic acid	20.03	18.89	17.41
Proline	16.66	16.34	17.27
Glycine	11.30	10.45	9.03
Alanine	12.84	12.17	10.83
Cysteine	18.16	15.70	33.72
Valine	16.53	15.32	13.79
Methionine	23.79	14.69	28.91
Isoleucine	18.22	16.54	15.53
Leucine	18.20	16.88	15.66
Tyrosine	32.26	29.19	19.15
Phenylanine	23.75	21.55	19.16
Histidine	26.00	22.69	19.14
Lysine	23.78	21.60	17.62
Arginine	26.79	24.97	19.80
Total (mg/g)	340.61	305.15	299.62

기타 주요 구성성분 분석에서 흑찰거대배아미는 비타민 B1은 0.67 mg/kg, 알파 토코페롤 0.61 mg/100g, 베타 토코페롤 0.04 mg/100g, 그리고 감마 토코페롤 0.06 mg/100g을 함유하고 있었고, 지방산 조성에서는 팔미트산 17.2%, 올렌산 3.0%, 리놀렌산 47.7%, 그리고 리놀레닉산을 30.8% 함유하였으며, 유리당은 3.2% 함유하고 있음을 확인하였다.

실시예 2: 추출물의 항산화 활성 비교

본 시험에서 상기 1의 추출방법으로 추출된 흑찰거대배아미, 거대배아미(큰눈) 및 일반미(일미)의 추출물의 항산화능을 측정하였다. 시험재료로부터 추출한 용액 100 ppm과 최종농도 100uM DPPH (2,2-di-(4-tert-oxyphenyl-1-picrylhydrazyl))를 혼합하여 30분간 반응시킨 후 517 nm에서 흡광도를 비교하여 활성을 평가하였다. 70% 에탄올 추출물의 항산화 활성은 흑찰거대배아미(23.7%)>일반미(14.8%)>거대배아미(12.9%) 순이었고, 70% 메탄올 추출물의 항산화 활성은 흑찰거대배아미(37.2%)>거대배아미(10.4)>일반미(5.2%) 순이었다(표 4).

추출물의 100 ppm농도에서 DPPH 항산화 활성 비교

DPPH 항산화 활성(100 ppm)	추출용매별 억제율(%)
DPPH 항산화 활성(100 ppm)	EtOAC	70% EtOH	70% MeOH
흑찰거대배아미	43.1	23.7	37.2
거대배아미(큰눈)	31.9	12.9	10.4
일반미(일미)	22.3	14.8	5.2

ABTs(2,2-azino-bis-(3-ethylbenzthizaoline-6-sulfonic acid))를 이용한 ABTs와 항산화제와의 반응을 734 nm에서 관찰하여 ABTs의 라디칼(radical) 소거능력을 비교하여 항산화 활성을 검정한 결과, 70% 에탄올 추출물의 항산화 활성은 흑찰거대배아미(73.8%)>거대배아미(38.2%)>일반미(32.2%) 순이었고, 70% 메탄올 추출물은 흑찰거대배아미(71.4%)>일반미(38.5%)>거대배아미(31.2%) 순임을 나타내어 2종류의 표준 항산화 활성 검정을 통해 흑찰거대배아미의 항산화 활성이 우수함을 확인할 수 있었다(표 5).

추출물의 100 ppm농도에서 ABTs 항산화 활성 비교

ABTS 항산화 활성(100 ppm)	추출용매별 억제율(%)
ABTS 항산화 활성(100 ppm)	EtOAC	70% EtOH	70% MeOH
흑찰거대배아미	29.5	73.8	71.4
거대배아미(큰눈)	24.5	38.2	31.2
일반미(일미)	16.8	32.2	38.5

실시예 3: 추출물의 세포활성 및 미백 활성 비교

추출물의 세포활성 시험은 미백 시험에 있어, 미백 활성이 세포독성에 의해 세포사멸에 의한 효과인지 아니면 추출물의 활성인지 결정하는 주요요인으로서, MTT assay법을 이용하여 수행하였다. B16F1 melanoma 세포의 숫자를 세고, 96 well plate에 농도별 세포 부유액을 넣고, 추출한 화합물을 농도별로 처리하여 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 4시간 동안 배양하였다. 배양이 완료된 시료에 MTT 시약 2~5 mg/ml을 넣어서 발색시킨 후 540~610 nm에서의 흡광도를 측정하여 세포 활성을 평가하였다. 흑찰거대배아미 추출물의 농도별 처리에서 0.5 mg/ml부터 세포활력에 미치는 영향이 강하게 나타남을 도 1 및 2의 그림과 사진에서 확인하여 미백효과 검정을 위한 세포에 처리 가능한 적정 처리농도는 0.2 mg/ml 이상임을 확인하였다.

B16F1 melanoma를 이용한 미백 기능규명은 마우스의 melanoma 세포를 멜라민 합성을 촉진하는 호르몬인 a-MSH(melanin stimulating hormone, 10nM)와 화합물의 농도별 추출용액을 세포배양 배지와 같이 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터(incubator) 조건하에서 배양하고 배양액을 제거한 후 인산완충용액(phosphate buffered saline, PBS)으로 세척하고 티로신(trypsin)용액을 가하여 세포를 수집(육안관찰)하여 사진촬영을 하여 활성이 있고 없고를 판정하였다. 도 3의 결과와 같이 멜라닌 색소가 생성되는 플레이트와 비교하여 흑찰거대배아미 추출물의 0.1 mg/ml의 농도에서도 멜라닌 색소 억제 활성이 관찰되었고, 0.2 mg/ml에서는 억제활성이 더욱 강함을 육안 관찰할 수 있었다. 반면 0.5 mg/ml에서의 활성은 대조로 사용된 무처리와 같음을 확인하였으나 이것은 세포활성 억제 효과와 관련이 있는 것으로 MTT assay 결과와 같았다.

실시예 4: 추출물의 멜라닌 생합성 억제 실험

B-16 세포(쥐 멜라노마 세포, 한국세포주은행)를 6-웰 플레이트(well plate)에 1× 10⁵ cell/well이 되도록 접종한 후에 24시간 배양하였다. 각 웰에 추출물을 각각 처리하고 3~4일 동안 배양한 후 각 웰의 배양액을 원심분리하였다. 분리된 세포는 디메틸설폭사이드(DMSO)에 용해한 1N NaOH 용액 500 ㎕로 용해하여 10분간 90℃ 수조(water bath)에서 가열하였다. 이 상등액을 490 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 그리고 멜라닌 생성 저해도는 하기식에 따라 계산하였으며, 그 결과는 표 6에 나타내었다.

저해도(%)=[1- 실험군 흡광도(O.D.490)/대조군흡광도(O.D.490)]×100

추출물의 멜라닌 생합성 억제 효과

샘플(100 ppm)	멜라닌 생성 억제율(%)
샘플(100 ppm)	EtOAC	70% EtOH	70% MeOH
흑찰거대배아미	78.4	74.2	76.4
거대배아미(큰눈)	34.4	38.1	37.1
일반미(일미)	26.8	25.2	29.5

상기 결과를 통해, 흑찰거대배아미 추출물이 다른 샘플에 비하여 멜라닌 생합성 억제효과가 우수하였으며, 또한 이로부터 흑찰거대배아미 추출물이 멜라닌 생성을 억제하여 피부 색소 문제를 해결할 수 있음을 알 수 있었다.

Claims

흑찰거대배아미 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름개선 및 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 흑찰거대배아미 추출물은 조성물 총 중량 기준으로 0.01 중량% 내지 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 주름개선 및 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 흑찰거대배아미는 흑찰거대배아일반미, 흑찰거대배아현미 및 흑찰거대배아발아현미로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는 주름개선 및 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 흑찰거대배아미 추출물은 흑찰거대배아미의 물, 에탄올, 메탄올 또는 에틸아세테이트 추출물인 것을 특징으로 하는 주름개선 및 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 흑찰거대배아미 추출물은 안토시아닌, 아밀로펙틴, 가바(GABA), 감마오리자놀, 단백질, 지방과 지방산, 무기성분, 아미노산, 당류 및 비타민류를 함유하는 것을 특징으로 하는 주름개선 및 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 흑찰거대배아미 추출물은 거대배아미 추출물에 비해 안토시아닌, 아밀로펙틴 또는 가바(GABA)를 상대적으로 많이 함유하는 것을 특징으로 하는 주름개선 및 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 화장료는 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이 크림, 아이 에센스, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일 및 바디에센스로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 가지는 것을 특징으로 하는 주름개선 및 미백용 화장료 조성물.
흑찰거대배아미 추출물 0.1~100 g, 글리세린 2~4 mg, EDTA 0.04~0.06 mg, 벤조페논-9 0.03~0.05 mg, 카르복시비닐 폴리머 0.1~0.3 mg, 트리에탄올아민 0.1~0.3 mg, 옥시도테세스-25 0.5~0.7 mg, 글리세릴모노스테아레이트 0.8~1.2 mg, 방부제 0.005~0.015 mg, 향료 0.005~0.015 mg 및 정제수를 혼합하는 단계를 포함하는 주름개선 및 미백용 화장료의 제조방법.
제8항의 방법에 의해 제조된 주름개선 및 미백용 화장료.