KR20120036417A

KR20120036417A - 참다시마 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20120036417A
Application number: KR1020100098071A
Authority: KR
Inventors: 김성우; 조진훈; 최종근
Original assignee: 웅진코웨이주식회사
Priority date: 2010-10-08
Filing date: 2010-10-08
Publication date: 2012-04-18
Also published as: KR101781545B1

Abstract

본 발명은 참다시마 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 참다시마 추출물은 종래의 미백 성분에 비하여 티로시나제 활성 억제 효과 및 멜라닌 합성 억제 효과가 뛰어나, 피부 미백용 화장료 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

참다시마 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물{A COSMETIC COMPOSITION FOR SKIN WHITENING COMPRISING THE EXTRACT OF SACCHARINA JAPONICA AS ACTIVE INGREDIENT}

본 발명은 참다시마 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 제기관을 온도 및 습도 변화와 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해 주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 하고 있다.

그러나 최근 산업의 급격한 발달로 오존층이 파괴됨에 따라 지표면에 도달하는 자외선, 특히 UVB 량이 증가함에 따라 피부노화가 심화되고 있으며, 이와 함께 멜라닌 색소가 침착되고 기미, 주근깨와 같은 피부 질환이 증가하고 있다. 이와 더불어 현대인들은 흰 피부에 대한 선호도가 높아지고 있으며, 웰빙에 대한 관심이 급증하면서 피부에 부작용이 적은 천연물을 이용한 미백제 탐색 연구가 활발히 이루어지고 있다.

피부가 자외선에 노출됨으로써 활성산소종(reactive oxygen species: ROS)의 생성으로 인한 광산화적 손상을 받게 되며, 이러한 활성산소종이 피부 세포를 공격하여 피부를 노화시키는 것으로 알려져 있다. 멜라닌의 주요한 기능은 이러한 유해 라디칼을 제거하여 이에 의한 손상으로부터 피부를 보호하는 것이다.

이러한 멜라닌 생성을 촉진하는 요인으로서는 자외선뿐만 아니라 에스트로겐 또는 프로스타글라딘 등이 있다. 멜라닌은 자외선에 의해 멜라닌 형성세포에서 티로신이 티로시나제(tyrosinase)라는 효소에 의해 도파, 도파크롬으로 변환된 뒤 복잡한 산화와 축합반응을 거쳐 생성된다. 생성된 멜라닌은 피부 세포에 전달되고 표피 박리와 함께 멜라닌이 상실되어 소멸하는 순환 작용을 보인다.

이러한 멜라닌 생성 과정은 자연적으로 일어나는 현상으로서, 정상 상태의 사람피부에서는 멜라닌의 과다 생성이 일어나지 않는다. 하지만, 피부가 외부의 자극, 예컨대, 자외선, 환경오염 또는 스트레스 등에 반응하면 멜라닌이 과다 생성된다. 과다 생성된 멜라닌이 피부 밖으로 배출되지 못하고 피부 속에 남아있게 되면 색소침착이 일어나게 된다. 이러한 멜라닌 생성 메커니즘의 가장 큰 특징은 티로시나제라는 단 한 개의 효소가 관여한다는 것으로, 상기 티로시나제 활성을 억제하여 멜라닌 생성을 방지하게 되면 미백 효과를 기대할 수 있다.

현재까지 다양한 미백 성분이 개발되어 사용되고 있으나 여러 가지 문제점이 제기되고 있다. 4-하이드록시퀴논과 하이드록시퀴논은 기미, 주근깨, 반점 및 임신기 과색소 침착과 같은 과잉색소증 치료에 국부적으로 사용되고 있으나, 이들 화합물은 우수한 멜라닌 생성 저해 활성을 나타내지만 멜라닌 세포의 변성을 일으키고 세포 본래의 기능을 손상시키는 부작용을 나타낸다. 또한, 코직산, 비타민 유도체, 알부틴 등 합성 항산화제는 우수한 항산화 효과를 나타내지만 과다 사용시 질병을 유발하는 등 안정성에 문제점이 있어 사용량을 규제하고 있다.

따라서, 피부에 안전하면서도 미백 활성이 높은 신소재의 개발에 대한 많은 관심이 고조되고 있으며, 특히 천연물질을 이용한 기능성 물질의 개발이 요구되고 있다.

본 발명의 과제는 천연소재로 피부에 안전하면서도 피부흑화 과정에 관여하는 티로시나제를 억제함과 아울러 멜라닌 생성을 억제하여 피부 미백 효과가 뛰어난 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

이를 위해 본 발명은 참다시마(Saccharina japonica) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 참다시마 추출물은 종래의 미백 성분에 비하여 향상된 티로시나제 활성 억제 효과를 나타내고, 멜라닌 형성세포의 멜라닌 합성 억제 효과가 뛰어나 피부 미백 효능이 우수하다.

이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

본 발명자들은 피부 부작용을 유발하지 않으면서, 안정성이 우수한 피부 미백 효과를 갖는 천연 원료를 개발하기 위한 연구를 진행하였고, 이러한 연구의 결과로서 참다시마(Saccharina japonica) 추출물, 특히 함수 아세톤 추출물이 월등히 우수한 피부 미백 효과를 제공할 수 있음을 발견하였다.

본 발명에 따른 참다시마(Saccharina japonica) 추출물은 피부자극 없이 피부 흑화 과정에 관여하는 티로시나제를 억제함과 아울러 멜라닌 생성을 억제함으로써 우수한 피부 미백 효과를 나타낸다. 이와 같은 참다시마 추출물이 함유된 본 발명의 화장료 조성물은 기미, 주근깨, 잡티 및 피부 그을림 등의 피부색소 침착 개선 및 예방에 사용될 수 있다.

참다시마(Saccharina japonica)는 갈조식물 다시마과의 한 속이며 대형 바닷말로, 해대 또는 해곤포라고도 불린다. 외관상 엽상부, 줄기, 뿌리로 구분되며, 엽상부는 띠 모양으로 길고, 엽상부의 중앙부분은 두터운 중 대부를 이루며, 중대부의 양 가는 세로로 흠이 있다. 줄기는 보통 원주상이며 직립하며, 뿌리는 줄기의 하부에서 차상으로 분지하는 수지상의 형태를 나타낸다. 한대, 아한대의 연안에 분포하는 한행성 해조류로서, 대한민국에서는 동해안 북부, 원산 이북의 함경북도에서 자생하며, 동해안 남부와 남해완의 완도 등지에서 양식을 한다. 참다시마에는 카로틴류, 크산토필류, 엽록소 등의 여러 가지 색소 외에 탄소 동화작용의 결과 만들어지는 마니트, 라미나린 등의 탄수화물과 세포벽의 성분인 알긴산이 다량으로 함유되어 있고, 요오드, 비타민 B₂ 및 글루탐산 등의 아미노산이 들어 있다.

본 발명의 참다시마 함수 아세톤 추출물로부터 활성성분을 분리하여 규명한 결과, 플로로글루시놀(phloroglucinol), 에콜(eckol), 에크스톨로놀(eckstolonol), 디에콜(dieckol), 플로로푸코푸로엑콜 A(phlorofucofuroeckol A), 플로로푸코푸로엑콜 B(phlorofucofuroeckol B)의 플로로탄닌류 화합물이 동정되었다.

이와 같은 플로로탄닌 화합물을 함유하는 본 발명의 참다시마 함수 아세톤 추출물에 대한 효능을 조사하기 위해, 멜라닌 생합성에 관여하여 피부 흑화에 작용하는 티로시나제 활성을 측정한 결과, 종래의 미백 성분과 추출용매를 달리한 참다시마 추출물과 비교하여 티로시나제 저해 활성이 현저히 우수함을 확인하였다.

본 발명의 화장료 조성물의 유효성분인 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 용매를 사용하여, 통상적으로 이용되는 열수추출, 실온추출, 가온추출, 초음파추출, 초임계추출 등의 방법으로 제조될 수 있다.

구체적으로는 물, 탄소수 1 내지 6의 글리콜, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 클로로포름, 1,3-부틸렌글리콜 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매를 사용하여 추출한다. 바람직하게는 함수 아세톤, 더욱 바람직하게는 50 내지 70%(v/v) 함수 아세톤, 가장 바람직하게는 70 %(v/v) 함수 아세톤을 추출용매로 사용하여 추출한다. 이때 추출용매의 사용량은 참다시마 건조중량의 1 내지 20 배이며, 보다 바람직하게는 5 내지 10배이다.

추출의 재료가 되는 참다시마는 이를 건조하여 사용하거나 또는 그대로 사용할 수 있으며, 바람직하게는 건조하여 사용한다. 건조법으로는 자연 건조 또는 열풍 건조법을 이용할 수 있다. 이때 추출온도와 시간은 추출하고자 하는 시료의 양에 따라 달라질 수 있으며 40 내지 100℃에서 3 내지 20 시간 동안 가열하여 추출하거나, 4 내지 40℃에서 1일 내지 15일간 실시하는 것이 바람직하다. 추출결과물을 여과 또는 정제하는 과정을 거칠 수 있다.

또한, 본 발명의 참다시마 추출물은 감압 증류, 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 발명의 조성물에서, 추출물의 함량은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 5 중량%이며, 바람직하게는 0.01 내지 3.0 중량%이다. 최소한의 피부 미백효과를 달성할 수 있도록 추출물의 함량은 상기 최소치 이상인 것이 바람직하며, 과량 첨가에 따른 사용감 저하 및 각종 제형에의 적용 가능성을 고려하여 추출물의 함량은 상기 최대치 이하인 것이 바람직하다. 이때, 추출물의 함량은 제형 또는 화장료 조성물에 함유되는 성분들의 함량에 따라 상기 범위 내에서 적절히 조절하는 것이 바람직하다.

본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 참다시마 추출물 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 더욱 상세하게는, 유연화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

[실시예]

이하 본 발명의 바람직한 실시예를 기재한다. 하기 실시예는 본 발명을 보다 명확히 표현하기 위한 목적으로 기재될 뿐 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 이때 실시예에 함량을 나타내는 %는 특별한 기재를 하지 않는 이상 v/v %를 의미한다.

제조예 1: 참다시마로부터 플로로탄닌 화합물 분리

1. 추출방법

참다시마를 동결건조 후 분쇄하여 분말화 한 다음, 70% 함수 아세톤을 마시마 분말 중량의 10배를 가하여 상온에서 5일 반응시키고 취한 액을 여과한 다음 감압농축하여 추출물을 수득하였다.

2. 플로로탄닌 화합물 분리 동정

수득한 참다시마 함수 아세톤 추출물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하였다. 에틸아세테이트:메탄올(50:1~5:1 부피비, gradient) 혼합액으로 용출시키고 얻어낸 첫번째 분획물을 실리카 겔 컬럼에서 헥산:에틸아세테이트(1:1 부피비) 혼합액으로 용출시켜 분리하였다. 이어서 RP-18 컬럼 크로마토그래피에서 메탄올(20~100%, gradient)을 사용하여 분리하고 세파덱스 LH-20으로 정제하여 하기 기재한 바와 같은 플로로탄닌류 화합물을 분리하였다. 각각의 화합물을 NMR 및 MS 등의 분석기기로 분석한 결과는 다음과 같다:

(1) 플로로글루시놀(phloroglucinol)

EI-MS : m/z (R. int) : 126(100) [M]⁺ (C₆H₆O₃)

IR (KBr) : V_max 3481, 1617 ㎝^-1

¹H-NMR (400 ㎒, DMSO-d ₆) : 5.78(3H, s)

¹³C-NMR (100 ㎒, DMSO-d ₆) : 160.9, 96.3

(2) 에콜(eckol)

HRFAB-MS : m/z 372.0460 [M]⁺ (C₁₈H₁₂O₉)

IR (KBr) : V_max 3250, 1605 ㎝^-1

¹H-NMR (400 ㎒, DMSO-d ₆) : 6.14(1H, s), 5.96(1H, d, 2.7 ㎐), 5.79(1H, d, 2.0 ㎐), 5.78(1H, d, 2.7 ㎐), 5.72(2H, d, 2.0 ㎐)

¹³C-NMR (100 ㎒, DMSO-d ₆) : 161.8, 160.1, 154.5, 147.2, 147.0, 144.2, 143.3, 138.5, 125.6, 124.8, 124.5, 99.8, 99.3, 97.6, 95.7, 95.3

(3) 에크스톨로놀(eckstolonol)

HRFAB-MS : m/z 370.0324 [M]⁺ (C₁₈H₁₀O₉)

IR (KBr) : V_max 3243, 1635 ㎝^-1

¹H-NMR (400 ㎒, DMSO-d ₆) : 6.10(1H, s), 6.04(1H, d, 2.7 ㎐), 6.01(1H, d, 2.7 ㎐), 5.84(1H, d, 2.7 ㎐), 5.82(1H, d, 2.7 ㎐)

¹³C-NMR (100 ㎒, DMSO-d ₆) : 153.3, 153.0, 146.1, 146.0, 142.1, 141.7, 140.1, 137.2, 131.6, 125.9, 122.7, 122.5, 122.3, 98.8, 97.6, 93.9

(4) 디에콜(dieckol)

HRFAB-MS : m/z 742 [M]⁺ (C₃₆H₂₂O₁₈)

IR (KBr) : V_max 3250, 1605 ㎝^-1

¹H-NMR (400 ㎒, Methanol-d ₄) : 6.15(1H, s), 6.13(1H, s), 6.09(1H, d, 2.9 ㎐), 6.06(1H, d, 2.9 ㎐), 6.05(1H, d, 2.9 ㎐), 5.98(1H, d, 2.8 ㎐), 5.95(1H, d, 2.8 ㎐), 5.92(3H, m)

¹³C-NMR (100 ㎒, Methanol-d ₄) : 161.8, 160.1, 157.8, 155.9, 154.5, 152.4, 147.3, 147.2, 147.1, 146.9, 144.3, 144.1, 143.4, 143.3, 138.6, 138.5, 126.5, 126.2, 125.6, 125.5, 124.9, 124.6, 124.5, 99.9, 99.7, 99.5, 99.4, 97.6, 96.2, 95.8, 95.7, 95.3

(5) 플로로푸코푸로엑콜 A(phlorofucofuroeckol A)

HRFAB-MS : m/z 602 [M]⁺ (C₃₀H₁₈O₁₄)

¹H-NMR (400 ㎒, DMSO-d ₆) : 6.70(1H, s), 6.42(1H, s), 6.28(1H, s), 5.82(1H, d, 2.1 ㎐), 5.82(1H, d, 1.9 ㎐), 5.75(2H, t, 2.0 ㎐), 5.71(2H, d, 2.1 ㎐)

¹³C-NMR (100 ㎒, DMSO-d ₆) : 160.3, 160.0, 159.1, 158.9, 150.9, 150.4, 149.5, 147.0, 146.5, 144.8, 142.1, 136.9, 134.0, 126.4, 122.7, 122.5, 120.2, 103.5, 103.3, 99.2, 98.4, 96.6, 96.4, 94.9, 93.8, 93.6

(6) 플로로푸코푸로엑콜 B(phlorofucofuroeckol B)

HRFAB-MS : m/z 602 [M]⁺ (C₃₀H₁₈O₁₄)

¹H-NMR (400 ㎒, DMSO-d ₆) : 6.75(1H, s), 6.48(1H, s), 6.19(1H, s), 5.82(1H, d, 2.1 ㎐), 5.82(1H, d, 1.9 ㎐), 5.76(2H, t, 2.0 ㎐), 5.71(2H, d, 2.1 ㎐)

¹³C-NMR (100 ㎒, DMSO-d ₆) : 160.3, 159.9, 159.0, 158.9, 150.4, 150.3, 149.2, 146.3, 145.5, 142.0, 141.4, 137.2, 136.7, 125.8, 123.0, 122.2, 120.4, 108.0, 104.9, 98.6, 98.6, 96.5, 96.3, 93.7, 93.5, 91.5

제조예 2 내지 17

하기 표 1에 따른 추출용매를 사용한 것을 제외하고 상시 제조예 1와 동일하게 수행하여 참다시마 추출물을 수득하였다.

구분	추출용매
제조예 2	100% 아세톤
제조예 3	90% 아세톤
제조예 4	50% 아세톤
제조예 5	증류수
제조예 6	100% 에틸아세테이트
제조예 7	90% 에틸아세테이트
제조예 8	70% 에틸아세테이트
제조예 9	50% 에틸아세테이트
제조예 10	100% 에탄올
제조예 11	90% 에탄올
제조예 12	70% 에탄올
제조예 13	50% 에탄올
제조예 14	100% 메탄올
제조예 15	90% 메탄올
제조예 16	70& 메탄올
제조예 17	50% 메탄올

실험예 1: 추출용매에 따른 티로시나제 저해활성 확인

상기에서 얻은 참다시마 추출물을 에탄올에 녹여 1 중량% 농도로 만든 것을 시료액으로 사용하였다. 시험관에 0.1 M 인산염완충액(pH 6.5) 220 ㎕와 시료액 20 ㎕ 그리고 머쉬룸 타이로시나제(1500U/mL)액 20 ㎕를 순서대로 넣었다. 이 용액에 1.5 mM 타이로신 액 40 ㎕를 넣고 37℃에서 15분 동안 반응시킨 다음, ELISA reader를 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 공시료액으로 시료액 대신 0.1 M 인산염완충액(pH 6.5)을 넣었다. 티로시나제 활성억제율은 하기 수학식 1

에 의하여 계산하였으며, IC50은 저해율이 50%일 때의 시료농도로서, 3번의 반복실험에서 5가지 다른 농도를 이용한 회귀선으로부터 계산되었다. 그 결과는 표 2 및 표 3에 나타내었다.

[수학식 1]

a : 공시료액의 반응 후의 흡광도

b : 시료액의 반응 후의 흡광도

a', b' : 타이로시나제 대신 완충액으로 대체하여 측정한 흡광도

시험물질 (실험농도 100 ug/ml)	티로시나제 활성저해율(%)	비고
제조예 1	84.4	70% 아세톤
제조예 2	9.4	100% 아세톤
제조예 3	48.2	90% 아세톤
제조예 4	66.3	50% 아세톤
제조예 5	36.1	증류수
제조예 6	7.9	100% 에틸아세테이트
제조예 7	11.6	90% 에틸아세테이트
제조예 8	17.9	70% 에틸아세테이트
제조예 9	24.0	50% 에틸아세테이트
제조예 10	12.6	100% 에탄올
제조예 11	19.4	90% 에탄올
제조예 12	38.1	70% 에탄올
제조예 13	43.0	50% 에탄올
제조예 14	13.7	100% 메탄올
제조예 15	21.5	90% 메탄올
제조예 16	37.8	70& 메탄올
제조예 17	43.7	50% 메탄올

상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 다양한 추출용매를 사용하여 얻은 참다시마 추출물이 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내었다. 특히, 아세톤을 추출용매로 한 참다시마 추출물이 우수한 티로시나제 활성 저해효과를 나타내었고, 70% 아세톤 추출물이 가장 높은 저해효과를 나타내었다.

시험물질	IC₅₀
제조예 1	26.3
알부틴	143.6
비타민 C	105.7
유용성 감초 추출물	>500

상기 표 3에 결과에서 알 수 있듯이, 알부틴, 비타민 C와 유용성 감초 추출물과 같은 종래의 미백제와 비교하여 티로시나제 활성 저해효과가 월등히 우수함을 확인하였다.

실험예 2: 멜라닌 생성 저해효과 확인

쥐 멜라노마 세포(B-16 F1)세포를 FBS(fetal bovine serum)가 함유된 DMEM 배지로 6-웰 플레이트에 1×10⁵ 세포/웰 농도로 2 ㎖씩 넣고, 5 % CO₂ _,37 ℃하에서 하루 동안 배양하였다. 배양 후의 배지를 제거하고 다시 새로운 배지로서 10 % FBS, 2 μM α-MSH(Melanocyte stimulating hormone)가 함유된 DMEM 배지를 사용하였다. 시료는 이 교체된 배지로 적당히 희석하여 넣은 다음 5 % CO₂ _,37 ℃에서 세포가 웰의 바닥에 약 80 % 이상 될 때까지 배양하였다. 시료의 농도범위는 Crystal violet assay를 이용한 독성실험을 통하여 결정하였다.

배지를 제거한 세포를 PBS(phosphated buffer saline)로 세척하고, 이것을 트립신으로 처리하여 세포를 회수하였다. 회수된 세포는 혈구계산기(hematocytometer)를 이용하여 세포수를 측정한 후 5,000?10,000 rpm으로 10분 간 원심분리한 다음 상등액을 제거하여 펠렛을 얻었다. 이 세포 펠렛을 60℃에서 건조한 후 10% DMSO가 함유된 1M 수산화나트륨액 100 ㎕를 넣어 60 ℃ 항온조에서 세포내 멜라닌을 녹였다. 이 액을 가지고 ELISA reader로 490 nm에서 흡광도를 측정하여 세포일정수당 멜라닌 양 또는 일정단백질당 멜라닌 양을 구하였고, 공시험하여 보정하였다.

하기 수학식 2를 이용하여 멜라닌 생성 저해율을 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

[수학식 2]

멜라닌 생성 저해율(%) = 100 - (각 시료의 흡광도/음성 대조군의 흡광도 X 100)

시험물질 (시험농도 = 100 ug/ml)	멜라닌 생성 저해율(%)
제조예 1	73.2
알부틴	53.1
비타민 C	56.0
유용성 감초 추출물	20.7

상기 표 4의 결과에서 알 수 있듯이, 70% 아세톤 참다시마 추출물은 멜로노마 세포의 멜라닌 생성 억제 효과가 월등히 우수하였다.

이하, 본 발명의 제형예로서 유연 화장수, 수렴 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스 및 팩을 예시하고 있으나, 본 발명의 화장료 조성물의 제형은 이에 제한되는 것은 아니다.

제형예 1: 유연화장수 ( 스킨 )

하기의 표 5와 같이 제조예 1의 참다시마 추출물을 함유하는 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
참다시마 추출물	1
글리세린	5
1,3-부틸렌글리콜	3
베타인	1
알란토인	0.1
DL-판테놀	0.3
EDTA-2Na	0.02
소듐 히아루로네이트 파우더	0.05
에탄올	5
옥틸도데세스-16	0.2
폴리옥시에칠렌경화피마자유	0.2
향	적량
방부제	적량
색소	적량
정제수	잔량
합계	100

제형예 2: 영양화장수 (로션)

하기의 표 6과 같이 제조예 1의 참다시마 추출물을 함유하는 영양화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
참다시마 추출물	3
글리세릴 스테아레이트 SE	1.5
세테아릴알콜	1.0
쉐어버터	1.5
폴리솔베이트 60	1.3
솔비탄스테아레이트	0.5
경화식물유	1
광물유	5
스쿠알란	3
사이클로메치콘	2
디메치콘	0.8
초산 토코페롤	0.5
카보머	0.12
글리세린	5
1,3-부틸렌글리콜	3
소듐 히아루로네이트 파우더	0.05
트리에탄올아민	0.12
향	적량
방부제	적량
색소	적량
증류수	잔량
합계	100

제형예 3: 영양크림

하기의 표 7과 같이 제조예 1의 참다시마 추출물을 함유하는 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
참다시마 추출물	3
친유형 모노스테아린산글리세린	2
세테아릴알콜	2
스테아린산	1.5
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄스테아레이트	0.6
하이드로제네이티드 폴리이소부텐	1
스쿠알란	3
광물유	5
사이클로메치콘	5
디메치콘	1
초산토코페롤	0.5
글리세린	5
베타인	3
트리에탄올아민	1
산탄검	0.05
향	적량
방부제	적량
색소	적량
증류수	잔량
합계	100

제형예 4 : 맛사지 크림

하기의 표 8과 같이 제조예 1의 참다시마 추출물을 함유하는 맛사지 크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
참다시마 추출물	3
친유형 모노스테아린산 글리세린	1.5
세테아릴알콜	1.5
스테아린산	1
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄스테아레이트	0.6
이소스테아릴 이소스테레이트	5
스쿠알란	5
광물유	35
디메치콘	0.5
히드록시에틸셀룰로오스	0.12
글리세린	6
1,3-부틸렌글리콜	3
트리에탄올아민	0.3
향	적량
방부제	적량
색소	적량
증류수	잔량
합계	100

제형예 5 : 에센스

하기의 표 9와 같이 제조예 1의 참다시마 추출물을 함유하는 에센스를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
참다시마 추출물	3
글리세린	6
베타인	5
PEG 1500	2
알란토인	0.1
DL-판테놀	0.3
EDTA-2Na	0.02
하이드로제네이티드 레시친	0.6
히드록시에틸 셀룰로오스	0.1
소듐 히아루로네이트 파우더	0.08
카르복시비닐폴리머	0.2
트리에탄올아민	0.2
세라마이드	0.2
옥틸도데칸올	3
스쿠알란	3
폴리소르베이트 60	0.4
글리세릴 스테아레이트 SE	1.5
향	적량
방부제	적량
색소	적량
증류수	잔량
합계	100

제형예 6: 팩

하기의 표 10과 같이 제조예 1의 참다시마 추출물을 함유하는 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
참다시마 추출물	1
폴리비닐알콜	15
셀룰로오스 검	0.15
글리세린	3
PEG 1500	2
베타인	2
DL-판테놀	0.4
알란토인	0.1
트리에탄올아민	0.2
니코틴아미드	0.5
에탄올	6
PEG 40 경화피마자유	0.3
향	적량
방부제	적량
색소	적량
증류수	잔량
합계	100

Claims

참다시마(Saccharina japonica) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물은 참다시마 함수 아세톤 추출물인 것인 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 아세톤은 50 내지 70 v/v% 함수 아세톤인 것인 화장료 조성물.
제3항에 있어서, 상기 아세톤은 70 v/v% 함수 아세톤인 것인 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물은
플로로글루시놀(phloroglucinol), 에콜(eckol), 에크스톨로놀(eckstolonol), 디에콜(dieckol), 플로로푸코푸로엑콜 A(phlorofucofuroeckol A), 및 플로로푸코푸로엑콜 B(phlorofucofuroeckol B)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 플로로탄닌 화합물을 포함하는 것인 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 추출물의 함량은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 5 중량%인 것인 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종의 제형을 갖는 것인 화장료 조성물.