KR101996547B1 - 산하엽 추출물을 유효성분으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부 미백용 화장료에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 산하엽 (skeleton flower, Diphylleia grayi) 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 미백효과를 갖는 산하엽 추출물을 함유함으로써 피부에 미백 개선 효과를 부여할 수 있으며, 피부 자극이 없고 뛰어난 제형의 안전성을 나타낸다.

Description

산하엽 추출물을 유효성분으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION WITH SKIN WHITENING EFFECT CONTAINING DIPHYLLEIA GRAYI EXTRACT}

본 발명은 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 본 발명은 유효 성분으로 산하엽 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

희고 고운 피부를 갖고자 하는 것은 모든 사람의 한결같은 소망이다. 일반적으로 사람의 피부, 모발 및 눈 등의 색은 멜라닌, 카로틴 및 헤모글로빈 등에 의해 결정된다. 특히 멜라닌은 피부색을 결정하는 가장 중요한 요인으로서, 멜라닌의 양과 성질 및 분포의 정도에 따라 피부색이 결정된다. 사람의 피부나 모발의 색소는 햇빛, 특히 자외선의 유해한 영향으로부터 피부나 모발을 보호해 주는 역할을 한다. 예컨대, 이러한 색소가 부족한 사람은 햇빛에 매우 민감하여 화상을 입기 쉬우며 어린 나이에도 피부암의 발생 확률이 높다. 단파장의 자외선(290-320 nm) 및 발암 물질은 피부에서 유해 라디칼, 예컨대, 산소 라디칼을 형성하며, 이러한 산소 라디칼이 피부 세포를 공격하여 피부를 노화시키는 것으로 알려져 있다.

일반적으로 사람의 피부가 검게 변하게 되는 것은 피부에서 생성되는 멜라닌 색소에 의해 일어나는 현상으로 정상 상태에서는 멜라닌의 과다 생성이 일어나지 않지만 피부가 자외선, 환경오염, 스트레스와 같은 외부 자극이나 호르몬, 염증 반응 매개 인자와 같은 내적 요인에 반응하게 되면 멜라닌 색소를 과다 생성하게 되고 이것이 피부 밖으로 배출되지 못하고 피부 속에 남아 있게 되어 색소 침착이 일어나게 된다.

멜라닌의 주요 기능은 이러한 유해 라디칼을 제거하여 이에 의한 손상으로부터 피부를 보호하는 것이다. 따라서 멜라닌의 양이 많다는 것은 물리적 또는 화학적 독성 물질로부터 피부를 보호할 수 있는 효과적인 대응체계를 가지고 있다는 것을 의미한다

한편, 인체 내의 색소형성세포(melanocyte)에서는 티로시나아제(tyrosinase), TRP(tyrosinase relatedprotein)-1, TRP-2 등의 효소가 존재하여 생체 내에 존재하는 티로신(L-tyrosine)을 기질로 하여 멜라닌 색소를 생성하도록 작용한다(Cohen, T., et al. Nucleic Acids Res., 18:2807-2808(1990)); (Jackson, I. J., etal., EMBO J., 11:327-535(1992)). 이러한 효소반응은 색소형성세포 내의 소기관인 멜라노좀(melanosome)에서 일어나며 새로이 생성된 멜라닌을 함유한 멜라노좀은 색소형성세포의 수지상 돌기(dendrite)를 통하여 인접한 각질형성세포(keratinocyte)로 분배되어 표피층의 피부색을 나타나게 한다.

멜라닌은 햇빛 UV의 빛 에너지를 흡수하여 UV에 의한 손상으로부터 진피 이하의 피부 기관을 보호하는 역할을 하며, 피부 생체 내에 생겨난 유해산소 및 프리라디칼 등을 잡아주는 등 외부 유해인자로부터 피부를 보호해주는 유용한 역할을 한다. 그러나 멜라닌이 비정상적으로 적게 생산되면 백반증과 같은 피부병변이 유발되고, 반대로 일광, 호르몬 변화, 염증 또는 약제 등에 의해 멜라닌의 과도하게 합성되거나 각화작용이 원활히 이루어지지 않아 멜라닌이 완전히 없어지지 않으면 피부에 손상을 줄 뿐만 아니라 피부의 색소가 침착되어 기미, 주근깨를 형성하며, 이와 같은 병변으로부터 나아가 피부암의 원인이 되기도 한다. 따라서 이러한 색소 침착 현상을 방지하기 위해서는 멜라닌 생성 과정의 일부분을 저해하여 멜라닌의 생성을 감소시켜야 한다.

프리 라디칼(free radical)은 이물질 또는 UV 조사 등과 같은 외부적인 요인에 의해 정상 또는 병리적 세포대사에서 발생한다. 인체가 호흡 및 연소를 위하여 산소를 사용할 때, 분자상 산소가 자유라디칼과 쉽게 반응하여슈퍼옥사이드(O₂ ^-), 과산화수소(H₂O₂), 히드록시 라디칼(·OH), 퍼옥시 라디칼(ROO^-)등의 유해한 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)을 생성한다. 이러한 ROS는 뛰어난 산화제 및 질화제로 작용하여 인체 내의 주요 구성성분들 예를 들어, 지질, 단백질, 핵산 및 DNA를 손상시켜 생리적 장애를 일으키고 심할 경우에는 질병을 유발하고 생명을 잃게 한다. 또한, 활성 산소종은 세포 생체막의 구성 성분인 불포화 지방산을 공격하여 과산화 반응을 일으키고 이로 인해 생체 내 축적된 과산화 지질은 노화와 각종 병변을 일으킨다고 알려져 있다.

종래의 화장품 분야에서는 미백 성분으로서, 예를 들어 코지산(kojic acid), 알부틴(arbutin), 하이드로퀴논(hydroquinone), 비타민 C 및 이의 유도체, 감초 추출물 등과 같은 티로시나제 활성을 저해하는 억제제들이 사용되어 왔다. 그러나 이들은 제형내의 안정성에 문제가 있어 그 사용이 제한되고 있다.

일본 공개특허 제2011-46646호는 Berberidaceae Diphylleia 식물에서 얻어지는 성분을 함유하는 항산화제에 관하여 개시하고 있다.

이에, 본 발명자들은 화장료의 안정성, 부작용 및 미백효과의 약화 등의 종래의 피부 미백용 화장료 조성물의 문제점을 극복하기 위하여 예의 노력한 결과, 산하엽 추출물이 티로시나제의 활성을 저해하는 효과가 우수하고 피부 자극이 없는 것을 발견하였다.

본 발명은 산하엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

바람직하게는, 상기 산하엽 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.0001 내지 50.0 중량% 함유된다.

바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 티로시나제 활성 억제 효과를 갖는다.

본 발명의 산하엽 추출물은 피부의 미백 효과를 증가시키고, 통상적인 화장품 피부 자극도 줄여주어 피부 미백용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명자들은 미백 효과를 갖는 물질을 검색하기 위하여 여러 식물추출물을 대상으로 연구한 결과, 산하엽으로부터 얻은 추출물이 피부 미백 효과가 크다는 것을 알게 되어 본 발명을 완성하게 되었다.

산하엽의 학명은 Diphylleia grayi이고, 스켈레톤 플라워(Skeletonn flower)라고도 불리며, 높이는 30~60cm이다. 잎은 심장 모양으로 생겼으며 두 갈래로 깊게 갈라진다. 6~7월에 산형(形) 꽃차례로 흰색 꽃이 핀다. 열매는 액과(液果)로 검푸르다. 주로 일본에 분포한다.

본 발명에 있어서 산하엽 추출물은 산하엽을 추출하여 얻은 것을 의미한다. 본 발명의 산하엽 추출물은 산하엽의 다양한 기관 또는 부분(예: 잎, 수피, 가지, 꽃, 뿌리, 열매, 줄기 등)으로부터 추출하여 얻은 것을 의미하고, 바람직하게는 전초 또는 뿌리로부터 얻은 추출물이고, 가장 바람직하게는 전초로부터 얻은 추출물을 의미한다.

또한, 본 발명의 산하엽 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건 하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법 (b) 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법을 이용하여 추출한다.

본 발명에서는 바람직하게는 추출용매를 이용한 용매 추출법을 이용하였다. 본 발명에서 산하엽 추출물은 다양한 추출용매, 예를 들어, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출 용매를 사용하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 사용하여 얻어진 것이고, 가장 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올을 사용하여 얻어진 것이다

한편, 본 발명의 산하엽 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명하다.

또한, 본 발명의 산하엽 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 및 발효 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리하거나 자연 상태나 각종 미생물을 이용한 발효산물에 의한 추출물 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다. 또한, 본 발명은 상기 추출물이 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 추가로 용매를 감압농축 또는 동결 건조하여 얻은 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

상기 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출법은 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)을 의미하는 것으로, 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A.1998; 479:200-205). 이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다. 지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다.

본 발명의 초임계 추출법에 사용되는 초임계 유체는 초임계 이산화탄소 또는 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합 유체를 사용함으로써 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다. 이러한 공용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있는데 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되므로 상기 방법으로 얻은 추출물을 화장료 조성물로서 사용할 수 있으며, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다. 또한 상기 초음파 추출법은 초음파 진동에 의해 발생되는 에너지를 이용하는 추출방법으로, 초음파가 수용성 용매 속에서 시료에 포함된 불용성인 용매를 파괴시킬 수 있으며, 이때 발생되는 높은 국부온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 크게 하기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격효과로 높은 압력을 유도하여 시료에 함유된 물질과 용매의 혼합 효과를 높여주어 추출 효율을 증가시키게 된다. 초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다.

본 발명에 따른 산하엽 추출물은 발효과정을 거친 추출물도 포함하는데, 산하엽의 발효추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다. 산하엽을 100~500메쉬 정도로 미세하게 파쇄한 다음 통상적인 미생물 배양액을 1~50g/L를 첨가하고 효모 또는 유산균등의 미생물을 10,000~100,000 cfu/L의 양으로 첨가한다. 배양온도는 30~37℃의 통상적인 미생물 배양조건으로 배양한다. pH는 5~7로 호기적 또는 통상 혐기(anaerobic)적인 조건으로 약 5 내지 10일간 배양한다. 이후 숙성 및 여과를 통해 발효 추출물을 얻을 수 있다.

본 발명에 따르면, 상기 산하엽 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.0001 내지 50.0 중량% 함유되며, 더욱 바람직하게는, 상기 산하엽 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.01 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 나타나지 않으며, 50.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

한편, 본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다. 본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

본 발명의 산하엽 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 이용하는 화장방법을 수행하면, 피부 자극이 없으면서 우수한 티로시나제 활성 저해 효과 및 미백효과를 얻을 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다.

제조예 1 : 산하엽 추출물 제조

음건한 산하엽 전초를 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하였다.

실험예 1 : 산하엽 추출물의 티로시나제 활성 저해도 측정

티로시나아제는 버섯에서 분리 및 정제된 것으로 시그마사(미국합중국)에서 구입하여 사용하였다. 기질로서 L-티로신(시그마사)은 0.05 M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)에 용해하여 0.1 ㎎/㎖ 용액으로 만들어 사용하였다. 제조예 1의 방법에 따라 제조한 산하엽 추출물(시료액)을 0.05M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)에 적당한 농도로 조절하여 용해한 후 사용하였다. L-티로신 용액 0.5 ㎖을 시험관에 넣고 여기에 시료액 0.5 ㎖을 각각 가하고 37℃ 항온기에서 10분간 방치하였다. 그 후 각 시료액에 200 unit/㎖ 티로시나아제 0.5 ㎖을 첨가하고 37℃에서 10분간 반응시켰다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음 위에 놓아 급냉시켜 반응을 중지시킨 후 분광 광도계로 파장 475 ㎚에서의 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 시료액 대신 완충용액 0.5 ㎖을 넣은 것을 사용하였다. 각 시료액의 티로시나아제 활성 저해율은 하기 수학식에 따라 계산하고 실험 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

산하엽 추출물 (㎍/mL)	티로시나아제 활성 저해율 (%)
5	3.5
10	10.2
20	16.4
50	30.9
100	41.1
200	67.8

상기 표 1의 결과에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 산하엽 추출물은 높은 티로시나아제 활성 저해 효과를 나타낸다.

실시예 및 비교예의 제조

아래의 표 2의 조성과 같이 미백 로션을 제조하였다.

(단위 : 중량%)

성분	비교예 1	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4
제조예 1	-	5	10	20	50
EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
정제수	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100
세토스테아릴알코올	2	2	2	2	2
글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
마이크로크리스탈린	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
스쿠알란	5	5	5	5	5
유동파라핀	3	3	3	3	3
트리옥타노인	5	5	5	5	5
폴리솔베이트	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2
솔비탄스테아레이트	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
토코페릴아세테이트	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
사이클로메치콘	3	3	3	3	3
BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
향, 방부제	적량	적량	적량	적량	적량

실험예 2 : 산하엽의 미백 효과 측정

피부색이 어두운 26-45세의 여성 30명을 대상으로, 비교예 1 및 실시예 1 내지 4의 각 화장료의 미백 효과를 측정하였다. 피검자의 팔의 5군데를 가로×세로 1 cm씩 표시하고, 5군데에 상기 처방의 화장료(비교예 1 및 실시예 1 내지 4)를 각각 도포하였다. 화장료는 2달 동안 하루에 2회 적용하였다. 측정 장비인 Minolta CR 300을 사용하여 2개월경과 후 피부색(L value)을 측정하였으며, 하기 수학식 2를 이용하여 피부색의 변화도를 계산하여 표 3에 그 결과를 나타내었다.

구분	비교예 1	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4
ΔL 값	0.53	2.98	3.53	3.65	3.87

상기 표 3에서 알 수 있는 바와 같이, 산하엽 추출물을 함유하지 않은 비교예 1에 비하여 본 발명에 따른 산하엽 추출물을 함유한 실시예 1 내지 4가 농도의존적으로 우수한 미백 효과를 나타내는 것을 알 수 있다.

실험예 3 : 산하엽 추출물의 피부 자극 시험

상기 제조된 실시예의 각 화장료의 피부 자극성을 시험하기 위해, 건강한 성인 남녀 20명을 대상으로 첩포 시험(patch test)을 헤이즈 테스트 쳄버(Haye's Test Chamber)를 이용하여 실시하였다. 시험부위를 70% 에탄올로 닦아내고 건조시킨 다음, 준비된 시험물질 15 ㎕를 적하한 쳄버(Finn chamber, 100x10, EPITEST, 핀란드)를 시험 대상자의 전박(forearm) 안쪽 부위에 밀폐 첩포하였다. 24시간 동안 첩포하고 첩포를 제거한 후 표시펜으로 시험 부위를 표시하였다. 각각 1시간 그리고 24시간 후(첩포 제거 후 1시간, 24시간 후 = 첩포 부착 포함 24시간, 48시간)에 확대경(8MC-150, DAZOR, 미합중국)을 이용하여 시험 부위를 관찰하여 홍반 및 부종 유무를 관찰하였다. 피부 반응은 국제접촉피부염연구회(ICDRG: InternationalContact Dermatitis Research Group)의 규정(표 4)에 따라 판정하였으며, 하기 수학식 3에 의하여 평균 피부 반응도를 계산하고 그 결과를 표 5에 나타내었다.

기호	반응도	평가기준
-	0.0	무반응, 정상 피부
±	0.5	희미한 또는 가벼운 홍반
+	1.0	경계가 뚜렷하나 약한 홍반, 부존 및 구진
++	2.0	뚜렷한 홍반, 구진 및 소수포
+++	3.0	심한 홍반 및 소포형성
++++	6.0	대수포 형성

시험물질	24시간	48시간	평균 피부 반응도 (n=20)
	± + ++	± + ++
실시예 1	- - -	- - -	0.17
실시예 2	- - -	- - -	0.18
실시예 3	- - -	- - -	0.15
실시예 4	- - -	- - -	0.18

상기 표 5에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 산하엽 추출물을 함유하는 실시예 1 내지 4는 피부 자극이 거의 없는 것을 확인할 수 있다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (3)

1. 산하엽 전초를 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 추출한 산하엽 추출물을 유효성분으로 함유하며, 티로시나제 활성 억제 효과를 갖는 피부 미백용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 산하엽 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.0001 내지 50.0 중량% 함유되는, 피부 미백용 화장료 조성물.
3. 삭제