DE1598153A1 - Diagnostisches Mittel zum Nachweis der Inhaltsstoffe von Koerperfluessigkeiten - Google Patents
Diagnostisches Mittel zum Nachweis der Inhaltsstoffe von KoerperfluessigkeitenInfo
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Description
Diagnostisches Mittel zum Nachweis der Inhaltsstoffe von Körperflüssigkeiten
Der Nachweis der Inhaltsstoffe von Körperflüssigkeiten gewinnt in
der ärztlichen Diagnostik eine immer größere Bedeutung. Durch die Verwendung von Testtabletten und Testpapieren sind die Nachweisverfahren
bereits erheblich vereinfacht worden, jedoch lassen viele derartige Teste hinsichtlich der Handhabung und der Zuverlässigkeit zu
wünschen übrig; auch bereitet die technische Herstellung oft Schwierigkeiten. Dies gilt inabesondere für die Verfahren zur Bestimmung der Inhaltsstoffe
von trüben und stark gefärbten Flüssigkeiten, beispielsweise Vollblut.
Es ist bekannt, übliche Testpapiere mit einer semipermeablen Membran
zu überziehen oder nachträglich zu hydrophobieren. Diese Testpapiere können aber nur durch mehrfache Imprägnation von Filterpapieren hergestellt
werden, wodurch fabrikationstechnisohe Schwierigkeiten und erhebliche Mehrkosten auftreten. Da mit steigender Anzahl der Arbeitsvorgänge
die Zahl der Fehlermögliohkeiten ansteigt, sinkt entweder die Zuverlässigkeit
eines Testpapieres oder es sind weitere kostspielige Zwischenkontrollen erforderlich.
Es ist weiterhin bekannt, zur Bestimmung der Wasserstoffionenkonzentration
in trüben, schlammigen oder stark gefärbten Flüssigkeiten indikatorhaltige Zellulosefolien zu verwenden (vgl. P. Wulff, Kolloid-Z.^C
(1926) S.341). Bei· diesen Zellulosefolien handelt es sich um stark
quellbare, hydrophile und nicht-wasserfeste Membranen, die obendrein technisch schwierig herstellbar sind. Die indikatorhaltigen Zelluloselösungen
müssen nämlich durch Schlitze in ein Säurebad gepreßt werden und anschließend so lange nachbehandelt werden, bis keine Säurereste
mthr in der Folie enthalten sind.
BAD ORlGiNAt
1771035
Ea wurde nun überraschenderweise gefunden, daß man allen Anforderungen
genügende diagnostische Mittel zum Nachweis der Inhaltsstoffe von Körperflüssigkeiten
herstellen kann, wenn man alle für die Nachweisreaktion erforderlichen Reagenzien in eine Lösung oder Dispersion solcher filmbildenden
Substanzen einträgt, welche sich zu wasserfesten Filmen verstreichen
lassen. Hierzu wird die filmbildende Mischung entweder auf einer nicht-verankernden oder einer gut haftenden Unterlage aufgebracht
und getrocknet. Im ersten Fall kann der Film von der Unterlage abgezogen werden; im zweiten Fall dient die Unterlage als Träger für den
Film, der bei dieser Variante mechanisch instabiler und dünner sein
darf. Die erfindungsgemäßen diagnostischen Mittel zum Nachweis der Inhaltsstoffe
von Körperflüssigkeiten bestehen demnach aus einem wasserfesten Film, in dem die Reagenzien gleichmäßig verteilt sind und der
gewünschtenfalls auf einer haftenden Unterlage aufgetragen ist.
Als Filmbildner sind die in organischen Lösungsmitteln löslichen bzw.
in Wasser dispergierbaren Filmbildner wie Celluloseäther, Celluloseester,
Celluloseacetatphthalat,Polyvinylester, Polyvinylacetat,
Polyacrylester, Polyacrylamid, Polyamide und andere filmbildene natürliche und synthetische Polymere sowie Mischungen derselben geeignet.
Besonders bewährt haben sich Äthylcellulose, Acetylcellulose, Polyvinylacetat, Polyvinylpropionat, Polyvinylbutyracetal und Latex.
Als Träger für die Beschichtung mit Filmen sind vorzugsweise Kunststofffolien
geeignet, es können aber auch Glas, Holz, Papier, Metallfolien und andere Träger eingesetzt werden.
Außer den für die Nachweisreaktion erforderlichen Reagenzien können der
filmbildenden Masse auoh übliche Füllstoffe und Hilfsstoffe wie Kreide,
Titandioxyd, Kieselgel, Stärke, Talcum, Schwerspat, Metallseifen, Cellulosepulver
usw., sowie geeignete Dickungsmittel, Emulgatoren, Dispergiermittel, Weichmacher etc. zugesetzt werden. Die Filme können auch
durch Zusatz von Pigmenten opak eingefärbt werden und auf ein gefärbtes Trägermaterial aufgetragen werden. Auf diese Weise können die Reagenzfolien
im Gegensatz zu völlig transparenten Folien unmittelbar mit Farbtafeln verglichen werden, ohne daß Porzellantafeln oder ähnliche Hilfsmittel
erforderlioh sind. Bei Zusatz geringer Mengen Netzmittel zu den filmbildenden Lösungen bzw. Dispersionen lassen sioh diese gleichmäßiger
009817/1035 ♦/·
auf hydrophoben Kunststoffolien verstreichen, ohne daß eich die sonstigen
Eigenschaften der erfindungsgemäßen diagnostischen Mittel wesentüoh
ändern.
Die Zusammensetzung der Reagenzien zum Naohweis der Inhaltsstoffe v<jrn
Körperflüssigkeiten ist prinzipiell dieselbe wie bei herkömmlichen diagnostischen
Mitteln. Beispielsweise kann Glucose mit Hilfe des Gemische Glucoseoxidase, Peroxidase, Puffer und Farbstoffbildner nachgewiesen
werden. Für den Nachweis von Blut in Harn ist das Gemisch aus Peroxyd
und einem Farbstoffbildner geeignet, Urobinilogen kann mit p-Dialkyl»
aminobenzaldehyden und einer starken Säure nachgewiesen werden. Als weitere
typische Naphweisreaktion seien die Grieß'sehe Nitritprobe und der
Nachweis von Harnsäure mit Hilfe von Uricase-Peroxidase und einem Farbstoff
bildner erwähnt.
Es war nicht vorherzusehen, daß die neuen diagnostischen Mittel für die
genannten Zwecke überhaupt verwendbar sind, da angenommen werden konnte, daß die in wasserfesten und im allgemeinen auch hydrophoben Filmen eingeschlossenen
Reagenzien überhaupt nicht oder nicht schnell genug mit den zu untersuchenden Flüssigkeiten reagieren würden. Typisch hydrophile und
nicht-wasserfeste Folien wie Cellulose oder Gelatine quellen in wässrigen Lösungen und vermögen Wasser bis zum Mehrfachen ihres Eigengewichts zu
binden. Trotzdem ist bei Cellulose-Indikatorfolien die Wasseraufnahme
gegenüber der Saugfähigkeit des Papiers bereits so stark herabgesetzt, daß man die Wulff1sehen Indikatorfolien mindestens 1 Minute in die Untersuchungsflüssigkeit
eintauchen muß. Dabei' kommt es bei der pH-Bestimmung mit Hilfe von Celluloee-Reagenzfolien ausschließlich auf die Wanderungsgeschwindigkeit der sehr beweglichen und kleinen Wasserstoff- und Hydroxylionen
an, während bei den erfindungsgemäßen diagnostischen Mitteln die wesentlich
größeren und langsamer wandernden Moleküle der nachzuweisenden Inhaltsstoffe von Körperflüssigkeiten durch das Filmmaterial hindurch '■
zu den Reagenzien gelangen müssen. Es ist weiterhin überraschend,daß so
große und empfindliche Moleküle wie die der Enzyme auch in den festen Lösungen der Kunststoffilme ihre Reaktionsfähigkeit behalten. Es ist
weiterhin erstaunlich, daß trotz der besseren Abschirmung der Reagenzien gegen Umweltseinflüsse sauerstoffverbrauchende Enzymreaktionen wie bei- ;
spielsweise der Glucosenachweie mit Hilfe von Glucoseoxidase, Peroxidaee
und einem Farbstoffbildner auch in den erfindungagemäßen diagnostischen ;
Mitteln störungsfrei und schnell ablaufen.
ORIGINAL,
009817/ 1035
Die Vorteile der neuen diagnostischen Mittel gegenüber den bisher ·
bekannten Testpapieren und Indikatorfolien bestehen vor allem in der wesentlich einfacheren Herstellung. Gegenüber den Cellulosefolien
ist als weiterer Vorteil zu verzeichnen, daß keine Fällung im Säurebad erforderlich ist, bei der empfindliche Reagenzien zerstört
oder zersetzt würden. Testpapiere und Cellulosefolien bestehen chemisoh aus dem gleichen Material nämlich Cellulose. Da
die erfindungsgemäßen Kunststoffilme aus den verschiendensten Grändetoffen
aufgebaut werden können, kann man für jeden speziellen Zweck dae verträglichste und am besten geeignete Material aussuchen. Die
erfindungsgeroäß verwendeten Materialien lassen sich auch wesentlich
leichter mit gleichbleibender Qualität verarbeiten, sind homogener und somit schließlich zuverlässiger. Weiterhin hat sich gezeigt,
daß sowohl die mechanische Stabilität der Folien wie die Stabilität der Reagenzien besser ist als die der Testpapiere. Die neuen Testfolien
sind auch nach erfolgter Umsetzung mit der zu untersuchenden Körperflüssigkeit erheblichstabiler als die herkömmlichen Testpapiere,
so daß die Ergebnisse gewünschtenfalls auch wesentlich später abgelesen bzw. noch nach mehreren Tagen kontrolliert werden
können. Erfindungsgemäße diagnostische Mittel zum Nachweis von Glucose im Blut oder Harn können beispielsweise dem Untersuchungsbericht
beigelegt und für die Dokumentation des Befundes aufgehoben werden.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen diagnostischen Mittel erfolgt
in einfachster Weise durch Auftragen der filmbildenden Lösungen bzw. Dispersionen und anschließendes Trocknen. Bei kontinuierlicher Auftragung
von schmalen Filmstreifen auf haftenden Kunststoffolien ist
es obendrein möglich, verschiedene Reagenzgemische nebeneinander auf einer Folie aufzutragen. Kach erfolgter Trocknung werden diese quer
zur Auftragungsrichtung in schmale Streifen zerschnitten und liefern so Mehrfachteststreifen. Im Gegensatz zu Testpapieren, deren Reagenzkonzentration
durch die Saugfähigkeit und die Sättigungsgrenze des
Papiers nicht beliebig variiert werden kann, können die erfindungsgemäßen Kunstetoffilme mit beliebiger Dicke und beliebigen Reagenzkonzentrationen
hergestellt werden. Da die Reagenzien auch nicht ausgewaschen oder durch Chromatographieeffekte ungleichmäßig verteilt
werden, kann man gewünschtenfalle die zu untersuchende Flüssig-
BAD ORIGINAL
009817/103 S •A
keit auch längere Zeit auf den Film einwirken lassen und dadurch stärkere Farbreaktionen erzeugen. Die erfindungsgemäßen diagnostischen
Mittel können daher nicht nur für bisher bekannte Testreaktionen eingesetzt werden, sondern auch für solohe, die sioh wegen
der bekannten Nachteile der Testpapiere bisher noch nioht in die wesentlich einfaoher und schneller zu bedienende Form eines Teststreifens
bringen ließen.
In den nachfolgenden Beispielen sind einige typische Beispiele für
die erfindungsgemäßen diagnostischen Mittel näher erläutert.
Ö09817/10IS
Beispiel 1
Zur Herstellung eines Reagenzfilmes zum Nachweis von Glucose, beispielsweise
in Harn oder Vollblut, wird eine Mischung folgender Zusammensetzung bereitet:
Polyvinylpropionat-Dispersion
o-Vani Hin- ( vani lloy 1 }hydrazon
Glucoseoxidase
Peroxidase
kolloidale Kieselsäure Phosphatpuffer 0,4m (pH 5,7)
Natriumalginatlösung 2,5 folg
Organische Natriurosulfonate ("Rapid-
netzer BASF")
Methanol
Auf einer weißen Polyvinylchloridfolie wird eine 400 /u dicke Schicht
der obigen Mischung aufgetragen und anschließend mit Warmluft getrocknet. Es entsteht ein wasserunlöslicher Film, der mit Glucose z. B. in
Harn oder Blut abgestufte violette Farbreaktionen ergibt. Die Reaktion mit Glucose im Blut wird sichtbar, sobald das Blut von der Folie abgewischt
oder abgewaschen worden ist. Die Farbreaktionen heben sich gut vom Untergrund der weißen Trägerfolie ab.
100,00 | g |
2,50 | g |
0,06 | e |
0,01 | g |
4,00 | g |
70,00 | ml |
35,00 | g |
1,6 | S |
40,00 | ml |
Zur Herstellung von Reagenzfolien zum Nachweis von Glucose beispiels
weise in Harn oder Vollblut wird eine Mischung folgender Zusammensetzung bereitet:
Athylcellulose | 35,00 g |
o-Vanillin-(vanilloyl)-hydrazon | 1,7 S |
Glucoseoxidase | 0,04 g |
Peroxidase | 0,011 g |
kolloidale Kieselsäure | 2,00 g |
Phosphatpuffer 0,4m (pH 5,7) | 25,00 ml |
Organische Natriumsulfonate ("Rapid- | |
netzer BASF") | 1,00 g |
Methanol | 75,00 ml |
Auf einer weißen Polyvinylohloridfolie wird eine 500 /u dicke Schicht-
der obigen Mischung aufgetragen und anschließend mit Warmluft getrocknet.
BAD Ortlü ^
·/· 00 9 8 17 /103S
Eb entsteht ein wasserunlöslicher Film, dessen Eigenschaften denen
des im Beispiel 1 beschriebenen Filmes entsprechen.
Zur Herstellung von Reagenzfilmen zum Nachweis von Blut im Harn wird
eine Mischung folgender Zusammensetzung bereitet«
o-Tolidin 0,25 g
Strontiumperoxid 2,0 g
Weinsäure 3,75 g '*
Caloiumacetat 7»0 g \
kolloidale Kieselsäure' 1,5 g
Natriumcarbonat 2,0 g
Polyvinylacetat 5»0 g
Isopropanol, wasserfrei 70,0 ml
Auf einer Polyvinylchloridfolie wird eine 500/U dicke Schicht der
obigen Mischung aufgetragen und anschließend mit warmer Luft getrocknet.
Es entsteht ein wasserunlöslicher Film, der beim Eintauchen in bluthaltigen
Harn je nach der Blutkonzenträtion eine mehr oder minder starke Farbe zeigt.
Zur Herstellung von'Reagenzfilmen zum Nachweis von Urobilinogen im Harn
wird eine Mischung folgender Zusammensetzung bereitet:
p-Dimethylaminobenzaldehyd 1,0 g
Orthophosphorsäure (85 $ig) 20,0 g
Polyvinylacetal 20,0 g
Organische Natriumsulfonate ("Ripid-
netzer BASF") 0,5 g
Methanol 100,0 ml
Auf einer Polyvinylchloridfolie wird eine 300 /u dicke Schicht der
obigen Mischung aufgetragen und anschließend mit Warmluft getrocknet.
Es entsteht ein wasserunlöslicher Film, der beim Befeuchten mit urobilinogenhaltigem
Harn je nach Urobilinogenkonzentration mehr oder minder
starke Rotfärbungen zeigt.
009817/1036
SAD ORiGiNAL
Beispiel 5
Zur Herstellung von Reagenzfilmen zum Nachweis von Nitrit in Harn wird eine Mischung folgender Zusammensetzung bereitet!
ot-Naphthylamin 1,0 g
Sulfanilamid 2,5 g Trichloressigsäure 3»0 g
Polyvinylbutyracetal20,0 g Methanol 100,0 ml
Auf einer Polyvinylchlorxdfolie wird eine 400 /U dicke Schicht der
obigen Mischung aufgetragen und anschließend mit Warmluft getrocknet,
iis entsteht ein wasserunlöslicher Film, der beim Befeuchten mit nitrithaltigem
Harn je nach Nitrit-Gehalt mehr oder minder starke Rot-
W färbungen zeigt.
8Ao
OR!Q!>ja,
009817/103
■/·
Claims (2)
1) Diagnostisches Mittel zum Nachweis der Inhaltsstoffe von Körperflüssigkeiten,
bestehend aus einem wasserfesten PiIm, in dem,die
Reagenzien gleichmäßig verteilt sind, und der gewünsohtenfalls
auf einer haftenden Unterlage aufgetragen ist.
2) Diagnostisches Mittel gemäß Anspruch 1, daduroh gekennzeichnet,
daß der wasserfeste Film aus Lösungen oder Dispersionen von ' natürlichen oder synthetischen Polymeren sowie Mischungen derselben
hergestellt wird.
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009817/ 1035
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