DE2007013B2 - Diagnostiziermittel und Verfahren zu seiner Herstellung - Google Patents

Description

3 ν/ 4

Methanol, Äthanol und 2-Propanol in einem Verhält- nun festgestellt, daß mit Hilfe des erfindungsgemäßen nis von mindestens etwa 4 Teilen organisches Lösungs- Verfahrens eine Diazoniumsalzlösung bei Raumtempemittel auf 1 Teil Wasser verwendet. Das Verhältnis von ratur (etwa 23 ⁰C) gebildet und in praktisch niederorganischem Lösungsmittel zu Wasser wird so ge- schlagsfreier Lösung bei dieser Temperatur gehalten wählt, daß praktisch kein Niederschlag in der gebilde- 5 werden kann, obwohl die Reagenzien dieselben oder ten Diazoniumsalzlösung auftritt. Ebenfalls wünschens- ähnliche sind, wie sie in den bisher bekannten Systemen wert ist ein hoher Anteil an schnell verdunstendem verwendet wurden. Außerdem wurde festgestellt, daß, organischem Lösungsmittel, um die zum Trocknen des wenn ein Träger mit der erfindungsgemäßen Diazomit der Lösung imprägnierten Trägers erforderliche niamsalzlösung in Berührung gebracht und dann geZeit zu verringern. io trocknet wird, der Rückstand der Diazoniumsalz-

Ein diazotierbares kupplungsfähiges Arylamin wird lösung in feinteiliger Form anfällt, die leicht von dem

zweckmäßigerweise zuerst zum Lösungsmittel gegeben. Träger zurückgehalten wird.

Derartige Arylamine sind vorzugsweise 2,4-Dichlor- Die zur Bildung der erfindungsgemäßen Diazonium-

anüin, p-Nitroanilin, p-Chloranilin, 2,5-Dichloranilin, salzlösung verwendeten Reagenzien werden vorzugs-

4-Chlor-o-anisidin, 3,3'-Dimethoxybenzidin und 15 weise in folgenden Mengenbereichen eingesetzt, die je

2-Methoxy-5-nitroanilin. Jedoch können auch andere nachdem Gewichtsprozent oder Volumprozent be-

Arylamine Verwendung finden, die Diazoniumver- deuten:
binöungen bilden und werden daher ebenfalls im

Rahmen der Erfindung in Betracht gezogen. Polares Lösungsmittel 10 bis 90%

Darauf wird ein lösliches Nitril, das in wäßrigem ao Arylamin 0,02 bis 0,5 %

saurem Medium salpetrige Säure bildet, zu der Lösung Wasser 10 bis 90 %

gegeben. Vorteilhafterweise ist das lösliche Nitrit Na- Lösliches Nitrit 0,01 bis 0,25%

triumnitrit, Kaliumnitrit oder Calciumnitrit. Stabilisator 0,25 bis 5 %

Die Lösung enthält auch eine stabilisierende Ver- SuIfonsäure 0.2 bis 5 %

bindung. Die vorteilhafte Wirkung dieser Verbindung »5

liegt darin, daß ein gegebenenfalls bei der Bildung des Wie bereits angegeben, wird vorzugsweise ein Ver-Diazoniumsalzes auftretender Niederschlag als sehr hältnis von Lösungsmittel zu Wasser von 4: 1 oder feiner Niederschlag anfällt, der leicht wieder gelöst darüber eingehalten, damit das Diazoniumsalz in Löwird. Außerdem erhöht der Stabilisator die chemische sung bleibt und der Träger schneller trocknet. Das GeBeständigkeit des fertigen Prüfmittels. Der Stabilisator 30 wichtsverhältnis von Säure zu Arylaminverbindung kann aus einer großen Gruppe von Verbindungen aus- wird vorzugsweise bei etwa 10:1 gehalten,
gewählt werden, wie Salze von aromatischen oder Als Trägermaterialien werden Stoffe verwendet, die aliphatischen Sulfonsäuren, Sulfate oder Sulfonate. den trocknen Rückstand der Diazoniumsalzlösung in Beispiele hierfür sind 1,5-Naphthalindisulfonsäure- den Träger einverleibt zurückhalten können. Dieser Dinatriumsalz, 2-Naphthalinsulfonsaures Natrium, 35 Träger wird vorzugsweise so befestigt, daß er leicht 4,4'-Diamino-2,2'-biphenyldisulfonsäure-Dinatrium- mit einer Flüssigkeit in Berührung gebracht werden salz und Natriumlaurylsulfat. kann, die vermutlich die nachzuweisende kupplungs-

Eine organische Säure, vorzugsweise eine organische fähige Verbindung enthält. Der Träger für das Prüf-

Sulfonsäure, wird der Zubereitung zugesetzt, um den mittel kann mit einem größeren Teil, das als Griff

richtigen pH-Wert für die Bildung einer Diazonium- 40 dient, zu einem Stück vereinigt sein oder er kann als ge-

verbindung und die anschließende Kupplungsreaktion trenntes Teil mit einem größeren Griffteil oder einer

dieser Diazoniumverbindung mit der kupplungsfähigen Griffvorrichtung verbunden sein. Der Träger kann

Verbindung herzustellen. Als organische Sulfonsäuren ein absorbierendes Material sein, das in die Diazo-

kommen vcrteilhafterweise Sulfosalicylsäure, SuIf- niumsalzlösung eingetaucht oder auf andere Weise

amidsäure, Cyclohexansulfaminsäure und p-Toluol- 45 mit ihr in Berührung gebracht und dann getrocknet

sulfonsäure in Frage. Selbstverständlich können im wird. Geeignete Trägermaterialien sind z. B. poröse

Rahmen der Erfindung auch andere bekannte Sulfon- Stoffe, wie Filterpapier, Glasfaserpapier oder ein PoIy-

säuren und organische Säuren zur Anwendung propylenfil?. Her Träger kann auch ein polymeres Gel

kommen. sein, das >: it der Prüflösung gemischt und dann unter

Diese Reagenzien, d. h. ein polares Lösungsmittel, 50 Bildung e.-.cr semi-permeablen Membran getrocknet ein Arylamin, Wasser, ein lösliches Nitrit, ein Stabili- wurde. Dat. <Ud kann durch Lösungsmittelverdampsator und eine Sulfonsäure, werden zu der gewünschten fung gebildet sein und ein Vernetzungsmittel enthalten. Diazoniumsalzlösungzusammengegeben. Vorzugsweise Die Gesamtstruktur des Prüfmittels wird nicht als wird beim Zusammengeben die angegebene Reihen- kritisch angesehen, solange dafür Sorge getragen ist, folge eingehalten, obwohl diese Reihenfolge von 55 daß der Bereich, der den trocknen Rückstand der Dipolarem Lösungsmittel, Arylamin, Wasser, löslichem azoniumsalzlösung enthält, mit der zu untersuchenden Nitrit und Stabilisator nicht kritisch ist. Auch kann, Flüssigkeit in Berührung gebracht werden kann,
wenn mehr als ein Stabilisator zur Anwendung kommt, Zur Herstellung des Prüfmittels kann auch ein der zweite Stabilisator nach der Sulfonsäure zugegeben Stück Filterpapier, das als Träger dient, mit der werden. 60 Diazoniumsalzlösung getränkt und getrocknet werden.

Diazofarbstoffe wurden bereits unter Verwendung Das imprägnierte Papier wird vorzugsweise bei mäßi-

eines dem beschriebenen Reagenssystem ähnlichen gen Temperaturen von etwa 65 bis 7O⁰C in bewegter

Systems hergestellt. Die in den Systemen gemäß dem Luft getrocknet. Vorteilhafterweise wird die Tempe-

Stand der Technik hergestellten Diazofarbstoffe fallen ratur nicht übermäßig erhöht, da dies vermutlich

als grobkörnige Niederschläge an, was für ihre nicht- 65 nachteilig auf die Diazoniumverbindungen wirkt. Der

stäubenden Eigenschaften wünschenswert ist. Solche getrocknete Träger kann dann in kleine Stücke zerteilt

Verbindungen bilden sich bei verminderten Tempe- werden und zur Erleichterung der Handhabung mit

raturen von etwa 0⁰C. Überraschenderweise wurde einem größeren Griffteil verbunden werden.

5 6

Die Erfindung wird an Hand der folgenden Bei- . .

spiele uäher erläutert. B e ι s ρ ι e 1 Ii

. I₁ Es wurde eine Lösung gemäß Beispiel 1 mit p-Toluol-

ΰ e ι s ρ ι e 1 l sulfonsäure an Stelle von Sulfosalicylsäure hergestellt.

Es wurde eine Lösung hergestellt, indem in einem 5 Die Lösung hatte dieselben Eigenschaften wie die Glasgefäß in der angegebenen Reihenfolge und unter Lösung gemäß Beispiel 1.
ständigem Rühren die folgenden Verbindungen zu- . .

sammengegeben wurden: Beispiel 14

Ein Streifen Filterpapier (Eaton und Dikeman

Methanol 20,0 cm _{10 Nr} ^₁) _{wurde in die Lösung gem}äß Beispiel 1 einge-

2,4-Dichloranilin 0,20 g taucht und sofort wieder herausgezogen; dieses Papier

Aqua dest 20,0 cm⁸ W₁₁^ bei etwa 65 bis 7i)°C etwa 8 bis 10 min lang

Natriumnitrit 0,1 g getrocknet, wobei die Luft über der Oberfläche des

1,5-Naphthalindisulfonsäure- Papieres in Bewegung gehalten wurde. Das getrocknete

Dinatriumsalz 0,6 g _l5 p_{apier hatte eine} creme-weiße Farbe.

Natnumlaurylsulfat 1,5 g _{Es wur}d_en Bilirubin-Tsstlösungen aus einer Urin-

Sulfosalicylsäure 2,0 g _{probe eines} p_ati_enten hergestellt, der Zeichen von

Methanol 60,0 cm³ Gelbsucht aufwies. Der Urin des Patienten wurde mit

dem bekannten Tabletterireagens behandelt und eine

Die Verbindungen^ v/urden bei Raumtemperatur ao sehr starke Reaktion beobachtet, die eine hohe Kon-(etwa 23^CC) zusammengegeben und die Temperatur zentration an Bilirubin anzeigte. Der Urin wurde auch der Lösung blieb bei etwa Raumtemperatur ohne zu- mit einem modifizierten Verfahren gemäß E. G. G ο dsätzliche Temperaturkontrolle während der Bildung fried in Biochem. J. YoL 28 (1934) S. 2056 bis 2060 der Lösung. untersucht und festgestellt, daß er etwa 1 mg % BiIi-

B e i s ρ i e 1 2 *^{5 ru}^^m enthie't. Der pathologische Urin wurde weiter

mit normalem Urin auf Konzentrationen von jeweils

Es wurde eine Lösung wie im Beispiel 1 hergestellt 0.5, 0,25 und 0,1 mg % verdünnt. Jede Lösung wurde mit der Abwandlung, daß 0,05 g 2,4-Dichloranilin und mit dem Prüfmittel gemäß der Erfindung getestet und 0,5 g Sulfosalicylsäure verwendet wurden. Diese Lö- die Abstufungen der Rosafärbung notiert. Ein tieferes sung hatte im wesentlichen dieselben Eigenschaften 30 Rosa, das sich einer Rosa-Lavendelfarbe näherte, wie die Lösung des Beispiels 1. wurde bei den Lösungen höherer Konzentration be

obachtet.

B e i s ρ i e 1 3 In gleicher Weise wurden Humanblutseren von

normalen Patienten und Patie.rten, die an Gelbsucht

Es wurde eine Lösung wie im Beispiel 1 hergestellt 35 litten, hergestellt. Der Bilirubin-Gehalt dieser Seren mit dem Unterschied, daß 0,5 g 2,4-Dichloranilin und wurde mit einem weiteren bekannten Prüfmittel be-5,0 g Sulfosalicylsäure verwendet wurden. Diese Lö- stimmt und lag zwischen 0,1 und 18 mg %. Die oben sung hatte praktisch dieselben Eigenschaften wie die hergestellten erfindungsgemäßen Prüfmittel wurden Lösung gemäß Beispiel 1. mit den Seren in Berührung gebracht und die zwischen

_R ...... _in 40 Rosa und Lavendel variierenden Farbstufen für Kon-

O e 1 s ρ 1 e l e 4 bis lü zentrationen von 1,0 mg % und darüber beobachtet.

Es wurden verschiedene Lösungen wie im Beispiel 1 Die Farbänderung war proportional der Bilirubinkonhergestellt mit dem Unterschied, daß jeweils an Stelle zentration in den Lösungen,
von 2,4-Dichloranilin eine der folgenden Verbindungen
zugegeben wurde: 45 Beispiele

p-Nitroanuin, Streifen aus bekanntem Glasfaserpapier wurden wie

p-Chloranilin, die Filterpapierstreifen im Beispiel 14 behandelt. Die

2_y5-Dichloranilin, getrockneten Glasfaserpapierstreifen zeigten praktisch

4-Chlor-o-anisidin, 50 dasselbe Aussehen wie die Filterpapierstreifen gemäß

3,3'-Dimethoxybenzidin, Beispiel 14. Wurden diese Glasfaserpapierstreifen mit

2-Methoxy-5-nitroanihn. den Testlösungen gemäß Beispiel 14 in Berührung gebracht, so wurden dieselben Farbänderungen wie im

Die erhaltenen Lösungen zeigten praktisch dieselben Beispiel 14 beobachtet.

Eigenschaften wie die Lösung gemäß Beispiel 1. 55

ΰ e 1 s ρ 1 e 1 11 j_n diesem Beispiel wurde das Verfahren gemäß

Es wurde eine Lösung gemäß Beispiel 1 hergestellt Beispiel 14 wiederholt mit dem Unterschied, daß ein

mit dem Unterschied, daß Cyclohexansulfaminsäure Polypropylenfilz an Stelle des Filterpapieres verwendet

an Stelle von Sulfosalicylsäure verwendet wurde. Die 60 wurde. Die getrocknete Matrix zeigte praktisch die-

erhaltene Lösung hatte praktisch dieselben Eigen- selbe Farbe und dieselben Farbreaktionen gegenüber

schäften wie die Lösung des Beispiels 1. den Testlösungen, wie sie im Beispiel 14 beobachtet

r, · · 1 ιλ wurden.

B e ι s ρ 1 e 1 12

Es wurde eine Lösung gemäß Beispiel 1 mit SuIf- 65 B e 1 s ρ 1 e 1 17

aminsäure an Stelle von Sulfosalicylsäure hergestellt. Es wurde eine Lösung gemäß Beispiel 1 in den dort

Die Lösung hatte praktisch dieselben Eigenschaften angegebenen Mengenverhältnissen hergestellt, ein

wie die Lösung gemäß Beispiel 1. 10,16 cm breites Filterpapier durch diese Lösung ge-

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führt und bei etwa 65 bis 7O⁰C 10 min lang in zirkulierender Luft getrocknet. Nach dem Trocknen wurde das imprägnierte Filterpapier mit der einen selbstklebenden Seite eines auf beiden Seiten selbstklebenden, mit Cellulosefasern verstärkten Klebestreifens in Berührung gebracht, der Länge nach in 5,08 mm breite Streifen geschnitten und zu Rollen aufgewickelt. Eine Rolle wurde dann auf einer Achse befestigt und das auf der äußeren selbstklebenden Seite des Klebstreifens haftende Wachspapier abgezogen. Diese freigelegte selbstklebende Seite des Klebstreifens wurde kontinuierlich über die Gesamtlänge der Rolle mit dei Oberfläche einer 82,55 mm breiten und 0,54 mm starken Polystyrolfolie fest verklebt. Das Laminai wurde in 5,08 mm lange Streifen zerschnitten. Das fertige Prüfmittel wurde mit den Testlösungen gemäl Beispiel 14 in Berührung gebracht und wie dort eir Farbwechsel notiert.

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40955

Claims (3)

durch ein im Handel erhältliches Produkt verringert, Patentansprüche: eine trockene Tablette für den Nachweis von Bilirubin, wie ifl der USA.-Patentschrift 2 854 317 beschrieben.

1. Diagnostiziermiiiei zum Nachweis von Sub- Diese Tablette enthält ein Diazoniumsalz, Sulfosalicylstanzen, die mit einer Diazoverbindung unter Ein- 5 säure und Natriumbicarbonat. Für die Nachweistritt eines Farbwechsels kuppeln, enthaltend ein reaktion werden 5 Tropfen Urin auf ein besonderes, aromatisches Diazoniumsalz, das in einem saug- stark absorbierendes Material gegeben, darauf wird fähigen Träger imprägniert ist, dadurch ge- die Reagenstablette in die Mitte des feuchten Bereichs kennzeichnet, daß zusätzlich ein Stabili- gelegt und 2 Tropfen Wasser darüber fließen gelassen, sator vorgesehen ist. io 1st Bilirubin vorhanden, so tritt eine Farbreaktion auf

2. Diagnostiziermittel nach Anspruch 1, dadurch dem absorbierenden Material innerhalb von 30 Sekungekennzeichnet, daß der Stabilisator Natrium- den ein. Zwar stellt diese Reagenstablette bereits ein laurylsulfat ist. relativ schnelles und beständiges System für den Nach-

3. Verfahren zur Herstellung der Diagnostizier- weis von Bilirubin dar, es müssen aber eine Reihe von mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekenn- 15 Bestandteilen zusammentreffen, damit die Nachweiszeichnet, daß man in der angegebenen Reihenfolge reaktion vollständig abläuft.

ein polares Lösungsmittel mit einem Arylamin, Indikatorpapierartige Prüfmittel zum Eintauchen,

Wasser, einem löslichen Nitrit, dem Stabilisator die bestimmte schnell reagierende Reagenzien mit und einer Sulfonsäure unter Bildung einer beständi- einem geeigneten Träger kombinieren, sind vor allem gen Diazoniunisalzlcsung versetzt, den Träger mit ao auch auf medizinischem Gebiete weit verbreitet. Derder Diazolösung imprägniert und trocknet. artige Prüfmittel werden gewöhnlich zum Bestimmen

des pH-Wertes und zum Nachweisen von Glucose, Protein und anderen Substanzen in Körperflüssigkeiten

verwendet. Jedoch wurde beim Kombinieren der be-

s5 kannten Testsysteme für den Nachweis von Bilirubin mit einem geeigneten Träger zu indikatorpapierähn-

Die Erfindung betrifft Diagnostiziermittel zum liehen Prüfmitteln ein unbeständiges Prüfmittel erNachweis von Substanzen, die mit einer Diazoverbin- halten, das unzuverlässige Ergebnisse lieferte, dung urter Eintritt eines Farbwechselü kuppelt, ent- Es ist daher Aufgabe der vorliegenden Erfindung,

haltend ein aromatisches Diazoniumsalz, das in einem 30 ein beständiges Präf mittel zum Nachweis und zur Besaugfähigen Träger imprägniert ist, sowie ein Ver- Stimmung einer Verbindung zu entwickeln, die, wenn fahren zu dessen Herstellung. sie mit einer Diazoverbindung kuppelt, zu einer Farb-

Zahlreiche Verbindungen, vor allem solche in Kör- reaktion führt. Das Diagnostiziermittel soll zum Nachperflüssigkeiten, wie Blut und Urin, können durch eine weis von Bilirubinlösung geeignet sein und einfach, Farbreaktion nachgewiesen werden, die eintritt, wenn 35 z. B. durch einfaches Eintauchen oder Aufbringen diese Verbindungen mit einer Diazoverbindung ge- einer geringen Menge der Lösung auf das Prüfmittel, kuppelt werden. Eine derartige Verbindung von be- anwendbar sowie möglichst einfach herstellbar sein, sonderer Bedeutung für die Bestimmung des Gesund- Diese Aufgabe wird bei einem Diagnostiziermittel

heitszustandes einer Person ist Bilirubin. zum Nachweis von Substanzen, die mit einer Diazo-

Der Nachweis von Bilirubin in Körperflüssigkeiten 40 verbindung unter Eintritt eines Farbwechsels kuppeln, wird seit etwa 1883 durchgeführt, als E h r 1 i c h die enthaltend ein aromatisches Diazoniumsalz, das in Diazoreaktion zum Nachweis von Bilirubin im Urin einem saugfähigen Träger imprägniert ist, erfindungseinführte. Seit damals wurden bis heute zahlreiche gemäß dadurch gelöst, daß zusätzlich ein Stabilisatür flüssige Systeme, die von der Diazoreaktion Gebrauch vorgesehen ist.

machen, zum Nachweis von Bilirubin im Urin und im 45 Das Verfahren zur Herstellung der erfindungsge-Serum angewandt. Diese Systeme sind hinsichtlich der mäßen Diagnostiziermittel ist dadurch gekennzeichnet, für diesen Nachweis verwendeten Diazoverbindungen daß man in der angegebenen Reihenfolge ein polares und anderen Reagenzien recht unterschiedlich; sie be- Lösungsmittel mit einem Arylamin, Wasser, einem ruhen jedoch alle in erster Linie auf der Azobilirubin löslichen Nitrit, dem Stabilisator und einer Sulfonsäure rot-violetten Farbe, die auftritt, wenn Bilirubin mit 50 unter Bildung einer bertändigen Diazoniumsalzlösung einem Diazoniumsalz reagiert und die visuell oder versetzt und den Träger mit der Diazolösung imipektrophotometrisch gemessen werden kann. prägniert und trocknet.

Zwar läßt sich mit diesen flüssigen Systemen BiIi- Durch das erfindungsgemäße Diagnostiziermittel ist

rubin recht genau nachweisen; die Anwendung dieser es möglich, Substanzen, die mit einer Diazoverbindung Systeme ist aber allgemein mit Schwierigkeiten verbun- 55 unter Farbänderung kuppeln, wie besonders Bilirubin den, weil die Diazoniumsalzlösungen in diesen Syste- in Körperflüssigkeiten, sehr schnell und einfach nachmen unbeständig sind und deshalb für jede neue Charge zuweisen und zu bestimmen, wobei lediglich ein Flüssigkeit, die untersucht werden soll, frisch herge- Tropfen der zu untersuchenden Lösung auf das Dkstellt werden müssen. Auch ist die bis zur Beendigung gnostiziermittel aufgebracht zu werden braucht Von des anzeigenden Farbwechsels benötigte Zeitspanne 60 besonderem Vorteil ist es dabei, daß das erfindungsziernlich lang, die kürzeste Zeitspanne beträgt etwa gemäße Diagnostiziermittel über längere Zeit stabil 30 Minuten, und in manchen Fällen sind bis zu mehre- bleibt.

ren Stunden erforderlich. Deshalb stehen die Ver- Bei der Herstellung der Diazoniumsalzlösung wird

Suchsergebnisse nicht so schnell zur Verfügung, wie ein polares Lösungsmittel verwendet. Vorzugsweise dies wünschenswert wäre, vor allem bei der Bestim- 65 wird die Lösungsmittelphase aus Wasser und einem mung oder beim Nachweis von Bilirubin bei Klein- organischen polaren Lösungsmittel, beispielsweise tandem oder Säuglingen. _ej_nem Alkohol, einem Keton, einem Ester u. dgl. her-

fcme Reihe dieser Schwierigkeiten werden bereits gestellt. Vorteilhafterweise wird ein Alkohol, wie