DE2309794C3 - Testreagens zur Bestimmung von Ascorbinsäure - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft ein stabiles Testreagens zur Urin ist. Bestimmung des Vorhandenseins und der Konzentra- Der Indikator besteht aus einem oder mehreren

tion von Ascorbinsäure in Flüssigkeiten in Form einer Natriumphosphomolybdatsalzen, die eine deutliche

wäßrigen Lösung, enthaltend ein oder mehrere Phos- 40 Farbänderung in Gegenwart von Ascorbinsäure erge-

phomolybdatsalze ben. Es ist bekannt, daß diese Farbänderung durch

Da vielen Nahrungsmitteln und besonders Frucht- Reduktion von Phosphomolybdatsalzen zu Molybdän-Säften Ascorbinsäure zugesetzt wird, die üblicherweise Blau entsteht. Es hat sich gezeigt, daß der Indikator in als Vitamin C bezeichnet wird, ist das Vorhandensein dem Testreagens in einer Konzentration von mindehoher Konzentrationen von Ascorbinsäure im Urin 45 stens 0,1 Gewichtsprozent und vorzugsweise ungefähr verhältnismäßig üblich. Außerdem werden hohe Dosen 0,1 bis ungefähr 0,6 Gewichtsprozent vorhanden sein von Ascorbinsäure von manchen Leuten für andere muß.

Störungen als Skorbut geraten, für den Vitamin C Natriumphosphomolybdatsalze haben sich als Indi-

die vorgeschriebene Therapie ist. So ist die Kenntnis kator für die erfindungsgemäßen Testreagentien als

hoher Konzentrationen an Ascorbinsäure in Urin- 50 geeignet erwiesen. Es hat sich gezeigt, daß gleiche

proben für den Labortechniker und Mediziner zur Mengen Natrium-2-phospho-18-molybdat und Na-

genauen Interpretation der Urinanalyse eines Patienten triumphospho-12-molybdat bevorzugt sind, da eine

erforderlich. derartige Kombination sowohl zu einer schnellen

Die meisten Urinproben enthalten Ascorbinsäure, da Reaktion in Gegenwart von Ascorbinsäure als auch

die Nieren die Hauptorgane zur Ausscheidung über- 55 zu einer intensiven Farbänderung führt.

Schüssiger Mengen Ascorbinsäure aus dem Körper Um die oben genannte Lösung zu stabilisieren,

sind. Da es jedoch bekannt ist, daß Ascorbinsäure in werden ungefähr 1,0 bis 10 Gewichtsprozent eines

Verhältnismäßig hohen Konzentrationen viele übliche neutralen Nitrats zu der Lösung zugegeben. Besonders Untersuchungen bei der Urinanalyse stört, kann ihr eine Konzentration von ungefähr 1,0 bis ungefähr

unvermutetes Vroliegen in hohen Konzentrationen zu ⁶° 3,9 Gewichtsprozent Nitrat hat sich eis wirksam er-

vielen flaschen Schlußfolgerungen in Beziehung auf wiesen. Es hat sich gezeigt, daß Nitratsalze wie

die Ergebnisse der Urinanalyse führen. Kalium- oder Natriumnitrat für diesen Zweck geeignet

Neben der Untersuchung von Urinproben auf sind. Ascorbinsäure ist ein schnelles und einfaches Nach- Um das oben beschriebene Testreagens zur Unter·

weisverfahren zur Bestimmung der Konzentration von ⁶S suchung von Urinproben geeignet zu machen, hat es Ascorbinsäure in Nahrungsmitteln zur QulaitätsUber- sich gezeigt, daß die Zugabe einer geeigneten organiprüfung in der Nahrungsmittelindustrie ebenfalls sehen Säure zu dem Testreagens empfehlenswert ist,

erwünscht. um eine mögliche Störung durch Urat zu vermeiden.

Die Zugabe von ungefähr 0,5 bis ungefähr 3,0 Gewichtsprozent einer organischen Säure wird empfohlen, um den pH-Wert der zu untersuchenden Probe herabzusetzen und dadurch ein integrale* Testreagens zu ergeben. Es ist für den Fachmann klar, daß das Testreagens bei Zugabe von Säure für alle Untersuchungen geeignet ist, obwohl diese Zugabe nur dann erforderlich ist, wenn ein Testreagens hergestellt werden soll zur Untersuchung von Proben, bei denen eine Störung durch Urat eintreten kann. Malonsäure hat sich als die organische Säure der Wahl erwiesen, da sie leicht zugängig und gut löslich ist und mit dem in dem Reagens enthaltenen Indikator nicht reagiert.

Das oben beschriebene Mittel kann leicht als Reagens zur Durchführung von Tüpfelanalysen auf das Vorhandensein und die Konzentration von Ascorbinsäure in zu untersuchenden Flüssigkeiten angewandt werden. Das Verfahren für die Durchführung von Tüpfelanalysen ist bekannt und die Anwendung des erfindungsgemäßen Mittels für derartige Analysen braucht nicht näher beschrieben zu werden.

Das oben beschriebene Mittel ist auch geeignet, um einen Träger damit zu imprägnieren, um Prüfmittel herzustellen, die eingetaucht und abgelesen werden können. Zu diesem Zweck wird ein geeignetes saugfähiges Material oder ein Träger ausgewählt wie Filterpapier, Holz, Tuch cder ähnliches. Das saugfähige Material wird imprägniert, indem es mit dem Mittel gesättigt wird. Das gesättigte Material wird dann bei ungefähr 90 bis ungefähr 130 C getrocknet, um den wäßrigen Träger des Mittels zu verdampfen oder zu entfernen. Das Prüfmittel, das eingetaucht und abgelesen werden kann, kann dann m eine praktische und wirtschaftlich günstige Größe geschnitten und bis zur Verwendung gelagert werden. Das Mittel kann auch zum Imprägnieren von polymeren, semipermeablen Membranen und Matrices verwendet werden, um papierfreie Prüfmittel zum Eintauchen und Ablesen herzustellen.

Bei der Anwendung der so hergestellten Prüfmittel ist es nur nötig, das Prüfmittel in die zu untersuchende Flüssigkeit einzutauchen, daraus zu entfernen und die Farbänderung, soweit eine solche auftritt, zu beobachten. Das so hergestellte Prüfmittel kann auch mit einer semipermeablen Membran wie Äthylcellulose überzogen sein, um es zur Untersuchung von vollständigem Blut geeignet zu machen. Wie bei der Tüpfelanalyse führt das Vorhandensein von Ascorbinsäure in der zu untersuchenden Flüssigkeit dazu, daß der in dem Testreagens oder dem Prüfmittel vorhandene Indikator eine blaue Farbe annimmt. Die Intensität der Farbe ist direkt proportional der Konzentration oder Menge von Ascorbinsäure in der untersuchten Probe. Eine Farbkarte kann vorgesehen sein, um die Interpretation der Testergebnisse zu erleichtern.

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert.

Beispiel 1

Zu 100 cm* Wasser wurden 0,2 g Natrium-2-phospho-18-molybdat, 0,2 g Natriumphospho-12-molybdat und 12,0 g Ntairumnitrat zugegeben und gründlich bis zur Lösung vermischt. S Blatt Filterpapier (E & D Nr. 204) wurden dann getrennt in die oben angegebene Lösung bis zur Sättigung eingetaucht. Die Blätter wurden aus der Imprägnierlösung entfernt und in einen Ofen mit bewegter Luft von ungefähr 100° C 15 min gegeben.

Die getrockneten imprägnierten Blätter besaßen eine

weißliche bis leicht gelbe Farbe. Die Blätter wurden dann in Streifen geschnitten und urfeuchtigkeitsdichte lichtbeständige Flaschen zur Untersuchung oder Lagerung gegeben.

Um die so hergestellten Prüfmittel zu untersuchen,

wurden Lösungen hergestellt, enthaltend 40, 120.. 240

und 400 mg % Ascorbinsäure in Wasser. Außerdem

wurde eine Blindprobe, die mir Wasser enthielt, unter-

o sucht.

Die Prüfmittel wurden in die oben angegebenen Lösungen getaucht und die folgenden Farbänderungen der Prüfmittel nach ungefähr 60 see beobachtet.

Lösung

Vergleich

40 mg% Ascorbinsäure..
120 mg % Ascorbinsäure..
240 mg% Ascorbinsäure..
400 mg% Ascorbinsäure..

Farbe

..keine Änderung
. .sehr hellgrün
.. blaß apfelgrün
..bläulich-grün
..tiefblau

Beispiel 2

Zu 1000 cm³ Wasser wurden 0,2 g Natrium-2-phospho-18-molybdat, 0,2 g Natriumphospho-12-

*⁵ molybdat, 2,0 g Natriumnitrat und 2,0 g Malonsäure zugegeben und gründlich vermischt. Rs wurden, wie in Beispiel 1 beschrieben, Prüfmittel mit dieser Lösung hergestellt und untersucht. Man erhielt im wesentlichen die gleichen Ergebnisse.

Außerdem wurden Urin- und Serumproben, die unbekannte Mengen Ascorbinsäure enthielten, mit den Prüfmitteln entsprechend Beispiel 1 und 2 untersucht. Man erhielt bei Untersuchung der Serumproben mit den Prüfmitteln der Beispiele 1 und 2 im wesentliehen die gleichen Ergebnisse. Bei Untersuchung der Urinproben wurde festgestellt, daß die Farbe der entsprechend den beiden Beispielen hergestellten Prüfmittel, sich unterschied. Die entsprechend Beispiel 1 hergestellten Prüfmittel änderten ihre Farbe zu einem

tieferen Blauton, was eine höhere Konzentration von Ascorbinsäure in den Proben anzeigt als mit den Prüfmitteln nach Beispiel 2.

Die Proben wurden dann auf übliche Weise durch Titration mit N-Bromsuccinimid untersucht (Analytical Chemistry 27, S. 536 bis 540, April 1965). Die Analyse bestätigte die Ergebnisse, die mit den Prüfmitteln erhalten worden waren, die Malonsäure enthielten, während die Prüfmittel, die ohne Malonsäure hergestellt worden waren, höhere Konzentrationen

von Ascorbinsäure in dem Urin anzeigten als tatsächlich durch die Analyse gefunden wurden. Das zeigt, daß das Prüfmittel ohne Malonsäure durch das in dem Urin vorhandene Urat gestört wird, was zu einem unerwünscht hohen und ungenauem Ergebnis führt.

Beispiel 3

Es wurden Prüfmittel entsprechend Beispiel 1 und 2 hergestellt, die jedoch kein Natriumnitrat enthielten.

Diese Prüfmittel und diejenigen der Beispiele 1 und 2 wurden in öfen von 60 und 7O⁰C gelegt. Nach 24 h wurden die Prüfmittel untersucht und es wurde keine Veränderung festgestellt bei den Prüfmitteln, die mit Natriumnitrat behandelt worden waren, während eine Farbreaktion bei den nicht-behandelten Prüfmitteln auftrat.

Ähnlich wurden die entsprechend Beispiel 1 und 2 hergestellten Prüfmittel zusammen mit den ohne

Natriumnitrat hergestellten der Luft bei Raumtemperatur ausgesetzt. Nach 48stündiger Einwirkung von Luft zeigten die natriumnitrathaltigen Prüfmittel keine Änderung, während die Prüfmitisl ohne Natriumnitratstabilisator eine bläulich^rüne Farbe angenom- S men hatten. Die stabilisierten Prüfmittei wurden in wöchentlichen Intervallen 4 Wochen lang erneut untersucht, wobei keine Farbänderung beobachtet wurde.

Die erfindungsgemäßen Testreagentien bzw. Prüfmittel ^ur Bestimmung der Konzentration von Ascorbinsäure in Flüssigkeiten sind demnach einfach in der Anwendung, genau und stabil. Außerdem sind die Testreagentien und Prüfmittel einfach herzustellen und anzuwenden. Bei der Herstellung des Pmfmittels ist eine einfache Imprägnierung erforderlich, wodurch ein wirtschaftlicher Test ermöglicht wird. Ferner fuhrt die Zugabe einer Verbindung zur Verhinderung der Störung durch Urat zu einem integralen Testreagens oder Prüfmittel, das zur Untersuchung von Unn geeignet ist.

Claims (7)

Xl Es wurde ein Prüfroittel, das zum Eintauchen und Patentansprüche: AWesen geeignet ist, beschrieben, bestehend aus einem Papier, das mit Ammoniumphosphomolybdat imprä-

1. Stabiles Testreagen·. zur Bestimmung des Vor- gniert ist, um das Vorhandensein von^sorbinsäure in handenseins und der Konzentration von Ascorbin- 5 Flüssigkeiten zu bestimmen (Spot Tests in Organic säure in Flüssigkeiten in Form einer wäßrigen Analysis, 6. Ausg. 1960, S. 405). Dieses Prufmittel ist Lösung, anhaltend ein oder mehrere Phospho- jedoch unbequem herzustellen, da es erne doppelte molybdatsalze, dadurch gekennzeich- Imprägnierung des saugfähigen Papiers erfordert, und net, daß es als Phosphomolybdatsalz Natrium- zwar zunächst mit Phosphormolybdänsau- imd dann phosphomoliybdat und zusätzlich ein neutrales io mit einem Ammoniumsalz zur Herstellu^ -les Am-Nitrat enthält. moniumphosphomolybdats und eine getrennte Trock-

2. Testreagens nach Anspruch 1, dadurch ge- nung nach jeder Imprägnierung erforderlich is*. Außerkennzeichnet, daß die Lösung ungefähr 0,1 bis dem ist angegeben, daß das Prüfmittel nur wenige Tage ungefähr 0,6 Gewichtsprozent Natrium-Phospho- stabil ist. Außerdem ist es, wenn dieses Prufmittel zur molybdat enthält. 15 Untersuchung von Unnproben verwendet werden soll,

3. Testreagens nach Anspruch 1 oder 2, dadurch zunächst notwendig, die zu untersuchende Probe mit gekennzeichnet, daß die Lösung ungefähr 1,0 bis einer starken Mineralsäure vor der Untersuchung anungefähr 10,0 Gewichtsprozent Nitrat enthält. zusäuern, um den pH-Wert der Probe herabzusetzen

4. Testreagens nach Anspruch 1 bis 3, dadurch und dadurch eine Störung durch Urat zu vermeiden, gekennzeichnet, daß das Nitrat Natriumnitrat ist. ao Es ist Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Test-

5. Testreagens nach Anspruch 1 bis 4, dadurch reagens zum Nachweis von Ascorbinsäure zu entwikgekennzeichnet, daß die Lösung zusätzlich eine kein, durch das die Stabilitäts- und Herstellungsproorganische Säure enthält. bleme, die bei den bekannten Prüfmitteln auftreten,

6. Testreagens nach Anspruch 5, dadurch ge- überwunden und ein Ansäuern der Proben vermieden kennzeichnet, daß die organische Säure Malonsäure *5 und die möglicherweise allgemein bei der Unterist, suchung von Urinproben auftretende Störung durch

7. Verwendung des Testreagens nach Anspruch 1 Urat überwunden wird, wobei das Testreagens eine bis 6 zur Herstellung eines Prüfmittels durch integrale Lösung sein soli.

Imprägnieren eines saugfähigen Trägers und Trock- Diese Aufgabe wird bei dem Testreagens der eingangs

nen. 30 genannten Art erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß

es als Phosphomolybdatsalz Natriumphosphomolybdat und zusätzlich ein neutrales Nitrat enthält. Eine

— feste organische Säure wie Malonsäure oder eine ähnliche kann zu der oben genannten Lösung zugesetzt 35 werden, um eine mögliche Störung durch Urat zu vermeiden, wenn die 2u untersuchende Flüssigkeit