DE2309794B2 - Testreagens zur Bestimmung von Ascorbinsäure - Google Patents

Description

feste organische Säure wie Malonsäure oder eine ähnliche kann zu der oben genannten Lösung zugesetzt 35 werden, um eine mögliche Störung durch Urat zu vermeiden, wenn die zu untersuchende Flüssigkeit Die Erfindung betrifft ein stabiles Testreagens zur Urin ist.

Bestimmung des Vorhandenseins und der Konzentra- Der Indikator besteht aus einem oder mehreren

tion von Ascorbinsäure in Flüssigkeiten in Form einer Natriumphosphomolybdatsalzen, die eine deutliche wäßrigen Lösung, enthaltend ein oder mehrere Phos- 40 Farbänderung in Gegenwart von Ascorbinsäure ergephomolybdatsalze ben. Es ist bekannt, daß diese Farbänderung durch

Da vielen Nahrungsmitteln und besonders Frucht- Reduktion von Phosphomolybdatsalzen zu Molybdiinsäften Ascorbinsäure zugesetzt wird, die üblicherweise Blau entsteht. Es hat sich gezeigt, daß der Indikator in als Vitamin C bezeichnet wird, ist das Vorhandensein dem Testreagens in einer Konzentration von mindehoher Konzentrationen von Ascorbinsäure im Urin 45 stens 0,1 Gewichtsprozent und vorzugsweise ungefähr verhältnismäßig üblich. Außerdem werden hohe Dosen 0,1 bis ungefähr 0,6 Gewichtsprozent vorhanden sein von Ascorbinsäure von manchen Leuten für andere muß.

Störungen als Skorbut geraten, für den Vitamin C Natriumphosphomolybdatsalze haben sich als Indi-

die vorgeschriebene Therapie ist. So ist die Kenntnis kator für die erfindungsgemäßen Testreagentien als hoher Konzentrationen an Ascorbinsäure in Urin- 5° geeignet erwiesen. Es hat sich gezeigt, daß gleiche proben für den Labortechniker und Mediziner zur Mengen Natrium-2-phospho-18-molybdat und Nagenauen Interpretation der Urinanalyse eines Patienten triumphospho-12-molybdat bevorzugt sind, da eine . erforderlich. derartige Kombination sowohl zu einer schnellen

Die meisten Urinproben enthalten Ascorbinsäure, da Reaktion in Gegenwart von Ascorbinsäure als auch die Nieren die Hauptorgane zur Ausscheidung über- 55 zu einer intensiven Farbänderung führt,
schüssiger Mengen Ascorbinsäure aus dem Körper Um die oben genannte Lösung zu stabilisieren,

sind. Da es jedoch bekannt ist, daß Ascorbinsäure in werden ungefähr 1,0 bis 10 Gewichtsprozent eines verhältnismäßig hohen Konzentrationen viele übliche neutralen Nitrats zu der Lösung zugegeben. Besonders Untersuchungen bei der Urinanalyse stört, kann ihr eine Konzentration von ungefähr 1,0 bis ungefähr unvermutetes Vrolbgen in hohen Konzentrationen zu ⁶° 3,9 Gewichtsprozent Nitrat hat sich als wirksam ervielen flascheo Schlußfolgerungen in Beziehung auf wiesen. Es hat sich gezeigt, daß Nitratsalze wie die Ergebnisse der Urinanalyse führen. Kalium- oder Natriumnitrat für diesen Zweck geeignet

Neben der Untersuchung von Urinproben auf sind.

Ascorbinsäure ist ein schnelles und einfaches Nach- Um das oben beschriebene Testreagens zur Unterweisverfahren zur Bestimmung der Konzentration von ⁶S suchung von Urinproben geeignet zu machen, hat es Ascorbinsäure in Nahrungsmitteln zur Qulaitätsüber- sich gezeigt, daß die Zugabe einer geeigneten organiprüfung in der Nahrungsmittelindustrie ebenfalls sehen Säure zu dem Testreagens empfehlenswert ist, erwünscht. um eine mögliche Störung durch Urat zu vermeiden.

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Die Zugabe von ungefähr 0,5 bis ungefähr 3,0 Ge- Die getrockneten imprägnierten Blätter besaßen eine

wichtsprozent einer organischen Säure wird empfoh- weißliche bis leicht gelbe Farbe. Die Blätter wurden

Jen, um den pH-Wert der zu untersuchenden Probe dann in Streifen geschnitten und in feuchtigkeitsdichte

herabzusetzen und dadurch ein integrales Testreagens lichtbeständige Flaschen zur Untersuchung oder Lage-

zu ergeben. Es ist für den Fachmann klar, daß das 5 rung gegeben.

Testreagens bei Zugabe von Säure für alle Untersu- Um die so hergestellten Prüfmittel zu untersuchen, chungen geeignet ist, obwohl diese Zugabe nur dann wurden Lösungen hergestellt, enthaltend 40, 120, 240 erforderlich ist, wenn ein Testreagens hergestellt wer- und 400 mg% Ascorbinsäure in Wasser. Außerdem den soll zur Untersuchung von Proben, bei denen eine wurde eine Blindprobe, die nur Wasser enthielt, unterStörung durch Urat eintreten kann. Malonsäure hat io sucht.

sich als die organische Säure der Wahl erwiesen, da Die Prüfmittel wurden in die oben angegebenen

sie leicht zugängig und gut löslich ist und mit dem in Lösungen getaucht und die folgenden Farbänderungen

dem Reagens enthaltenen Indikator nicht reagiert. der Prüfmittel nach ungefähr 60 see beobachtet.

Das oben beschriebene Mittel kann leicht als Re- Lösung Farbe

agens zur Durchführung von Tüpfelanalysen auf das 15 .

Vorhandensein uud die Konzentration von Ascorbin- Vergleich keine Änderung

säure in za untersuchenden Flüssigkeiten angewandt 40 rog% Ascorbinsäure sehr hellgrün

werden. Das Verfahren für die Durchführung von 120 mg % Ascorbinsäure blaß apfelgrün

Tüpfelanalysen ist bekannt und die Anwendung des 240 mg % Ascorbinsäure bläulich-grün

erfindungsgemäßen Mittels für derartige Analysen 30 400 mg % Ascorbinsäure... .tiefblau
braucht nicht näher beschrieben zu werden.

Das oben beschriebene Mittel ist auch geeignet, um Beispiel 2

einen Träger damit zu imprägnieren um Prüfmittel _{Zu 1000 cm}3 _{Wasser wurden 0},2 g Natrium-2-

herzustellen die eingetaucht und abgelesen werden phospho-18-molybdat, 0,2 g Natriumphospho-12-

können Zu diesem Zweck wird ein geeignetes saug- *_{5 mo}lybdat, 2,0 g Natriumnitrat und 2,0 g Malonsäure

fähiges Material oder ein Trager ausgewählt wie Filter- _{mgessbtn und} gründlich vermischt Es wurden, wie

papier, HoIa Tuch oder ähnliches. Das saugfähige _{jn B}~; _id j _beschrieben, Prüfmiltel mit dieser Lösung

Material wird imprägniert, indem es nut dem Mittel _{hergcstem und} untersucht. Man erhielt im wesentlichen

Sesattigt wird Das gesattigte Material wird dann bei _die ^S _{gleichen Ergeb}nisse.

ungefähr 90 bis ungefähr 130 C getrocknet, um den 30 _Außerde_m wurden Urin- und Serumproben, die wäßrigen Träger des Mittels zu verdampfen oder zu _unbekannte Mengen Ascorbinsäure enthielten, mit entfernen Das Prufmittel das eingetaucht und abge- _{den Prüfmitte}i_n entsprechend Beispiel 1 und 2 unterlesen werden kann, kann dann in eine praktische und _{sucht Man erhiclt bei UnterS}uchung der Serumproben wirtschaftlich gunstige Große geschnitten und bis zur _{mk den Prüfmitteln der} Beispiele 1 und 2 im wesent-Verwendung gelagert werden. Das Mittel kann auch 35 _{lichen die gleichen} Ergebnisse. Bei Untersuchung der zum Imprägnieren von polymeren, semipermeablen _urinproben wurde festgestellt, daß die Farbe der Membranen und Matrices verwendet werden, um entsprechend den beiden Beispielen hergestellten Prüfpapierfreie Prüfmittel zum Eintauchen und Ablesen _{mittel) sich unterschied}. _Die entsprechend Beispiel J herzustellen. hergestellten Prüf mittel änderten ihre Farbe zu einem

Bei der Anwendung der so hergestellten Prufmittel 40 _{tieferen Blauton) was eine} höhere Konzentration von

!st es nur notig, das Prufmittel in die zu untersuchende _Ascorbi_nsäure in den Proben anzeigt als mit den Prüf-

Flüssigkeit einzutauchen, daraus zu entfernen und die mitteln nach Beispiel 2

Farbänderung, soweit eine solche auftritt, zu beob- _{Die Proben wurden dann auf übliche Weise durch} achten. Das so hergestellte Prüfmittel kann auch mit _{Titration mit} N-Bromsuccinimid untersucht (Analytiemer semipermeablen Membran wie Äthylcellulose 45 ^₁ chemistry 27, S. 536 bis 540, April 1965). Die überzogen sein, um es zur Untersuchung von voll- _Ana, ^a^ _die Ergebnisse, die mit den Prüfständigem Blut geeignet zu machen. Wie bei der _{mittdn erhalten} worden waren, die Malonsäure ent-Tüpfelanalyse führt das Vorhandensein von Ascorbm- _hie, _{während die} Prüfmittel, die ohne Malonsäure säure in der zu untersuchenden Flüssigkeit dazu, daß _{hergestdlt worden waren)} höhere Konzentrationen der in dem Testreagers oder dem Prüfmittel vornan- 50 _{von Ascorbinsäure in dem} Urin anzeigten als tatsächdene Indikator eine blaue Farbe annimmt. Die Inten-: _{Uch durch dje Ana}, _{ge{unden wurden}. _{Das zcigt}, sität der Farbe ist direkt proportional der Konzentra- _{daß das Prüfmittd ohne} Malonsäure durch das in dem tion oder Menge von Ascorbinsäure in der unter- _{Urm vorhandene} Urat gestört wird, was zu einem suchten Probe. Eine Farbkarte kann vorgesehen sein, _unerwünscht hohen und ungenauem Ergebnis führt,
um die Interpretation der Testergebnisse zu erleichtern. 55

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele _ . ...

näher erläutert. Beispiel 3

Es wurden Prüfmittel entsprechend Beispiel 1 und 2

Beispiel 1 hergestellt, die jedoch kein Natriumnitrat enthielten.

Zu 100 cm⁸ Wässer wurden 0,2 g Natrium-2- 60 Diese Prüfmittel und diejenigen der Beispiele 1 und 2

phospho-18-molybdat, 0,2 g Natriumphospho-12- wurden in Öfen von 60 und 7O⁰C gelegt. Nach 24 h

molybdat und 12,0 g Ntairumnitrat zugegeben und wurden die Prüf mittel untersucht und es wurde keine

gründlich bis zur Lösung vermischt. 5 Blatt Filter- Veränderung festgestellt bei den Prüfmitteln, die mit

papier (E & D Nr. 204) wurden dann getrennt in die Natriumnitrat behandelt worden waren, während eine ^

oben angegebene Lösung bis zur Sättigung eingetaucht. 65 Farbreaktion bei den nicht-behandelten Prüfmitte/n ,^\

Die Blätter wurden aus der Imprägnierlösung entfernt auftrat.

und in einen Ofen mit bewegter Luft von ungefähr Ähnlich wurden die entsprechend Beispiel 1

10O⁸C 15 min gegeben. hergestellten Prüf mittel zusammen mit den.

Natriumnitrat hergestellten der Luft bei Raumtemperatur ausgesetzt. "Nach 48stündiger Einwirkung von Luft zeigten die natriumnitrathaltigen Prüf mittel keine Änderung, während die Prufmittel ohne Natriumnitratstabilisator eine bläulichgrüne Farbe angenommen hatten. Die stabilisierten Prüfmittel wurden in wöchentlichen Intervallen 4 Wochen lang erneut untersucht, wobei keine Farbänderung beobachtet wurde.

Die erfindungsgemäßen Testreagentien. bzw. Prufmittel zur Bestimmung der Konzentration von Ascorbinsäure in Flüssigkeiten sind demnach einfach in der Anwendung, genau und stabil. Außerdem sind die Testreagentien und Prüfmiitel einfach herzustellen und anzuwenden. Bei der Herstellung des Prüfmittels ist eine einfache Imprägnierung erforderlich, wodurch ein wirtschaftlicher Test ermöglicht wird. Ferner führt die Zugabe einer Verbindung zur Verhinderung der Störung durch Urat zu einem integralen Testreagens oder Prüfmittel, das zur Untersuchung von Urin geeignet ist

Claims (7)

1 2 Es wurde ein Prüfuiittel, das zum Eintauchen und Patentansprüche: Ablesen geeignet ist, beschrieben, bestehend aus einem Papier, das mit Ammoniumphosphomolybdat imprä-

1. Stabil Js Testreagens zur Bestimmung des Vor- gniert ist, um das Vorhandensein von Ascorbinsäure in handenseüis und der Konzentration von Ascorbin- 5 Flüssigkeiten zu bestimmen (Spot Tests in Organic säure in_: Flüssigkeiten in Form einer wäßrigen Analysis, 6. Ausg. 1960, S. 405). Dieses Prüfmittel ist Lösung, enthaltend ein oder mehrere Phospho- jedoch unbequem herzustellen, da es eine doppelte molybdatsalzs, dadurch gekennzeich- Imprägnierung des saugfähigen Papiers erfordert, und net, daß es als Phosphomolybdatsalz Natrium- zwar zunächst mit Phosphormolybdänsäure und dann phosphomolybdat und zusätzlich ein neutrales io mit einem Ammoniumsalz zur Herstellung des Am-Nitrat enthält. - . moniumphosphomolybdats und eine getrennte Trock-

2. Testreagens nach Anspruch 1, dadurch ge- nung nach jeder Imprägnierung erforderlich »st. Außerkennzeichnet, daß die Lösung ungefähr 0,1 bis dem ist angegeben, daß das Prüfmittel nur wenige Tage ungefähr 0,6 Gewichtsprozent Natrium-Phospho- stabil ist. Außerdem ist es, wenn dieses Prüfmittel zur molybdat enthält. 15 Untersuchung von Urinproben verwendet werden soll,

3. Testreagens nach Anspruch 1 oder 2, dadurch zunächst notwendig, die zu untersuchende Probe mit gekennzeichnet, daß die Lösung ungefähr 1,0 bis einer starken Mineralsäure vor der Untersuchung anungefähr 10,0 Gewichtsprozent Nitrat enthält zusäuern, um den pH-Wert der Probe herabzusetzen

4. Testreagens nach Anspruch 1 bis 3, dadurch und dadurch eine Störung durch Urat zu vermeiden, gekennzeichnet, daß das Nitrat Natriumnitrat ist. ao Ls ist Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Test-

5. Testreagens nach Anspruch 1 bis 4, dadurch reagens zum Nachweis von Ascorbinsäure zu entwikgekennzeichnet, daß die Lösung zusätzlich eine kein, durch das die Stabilitäts- und Herstellungsproorganische Säure enthält. bleme, die bei den bekannten Prüfmitteln auftreten,

6. Testreagens nach Anspruch 5, dadurch ge- überwunden und ein Ansäuern der Proben vermieden kennzeichnet, daß die organische Säure Malonsäure »5 und die möglicherweise allgemein bei der Unterist, suchung von Urinproben auftretende Störung durch

7. Verwendung des Testreagens nach Anspruch 1 Urat überwunden wird, wobei das Testreagens eine bis 6 zur Herstellung eines Prüfmittels durch integrale Lösung sein soll.

Imprägnieren eines saugfähigen Trägers und Trock- Diese Aufgabe wird bei dem Testreagens der eingangs

nen. 30 genannten Art erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß

es als Phosphomolybdatsalz Natriumphosphomolybdat und zusätzlich ein neutrales Nitrat enthält. Eine