DE2921023C2

DE2921023C2 - Zusammensetzung, Testmittel und Verfahren zum Bestimmen von Urobilinogen in einer Probe unter Verwendung der Zusammensetzung, sowie Verfahren zum Herstellen des Testmittels

Info

Publication number: DE2921023C2
Application number: DE2921023A
Authority: DE
Inventors: Charles Tak Wai Lam; Chauncey Orvis Elkhart Ind. Rupe
Original assignee: Miles Laboratories Inc
Current assignee: Bayer Corp
Priority date: 1978-07-24
Filing date: 1979-05-23
Publication date: 1982-06-24
Also published as: JPS6125315B2; US4158546A; FR2433748A1; AU510482B2; IT1116895B; CA1127517A; SE7904890L; SE442149B; JPS5518994A; GB2026157A; NL7904307A; GB2026157B; DE2921023A1; IT7949602A0; FR2433748B1; ES481441A1; AU4717079A; CS221511B2

Description

(D

R'

enthält, in welcher X O oder S bedeutet und R und R', die gleich oder verschieden sein können und Niedrigalkyl oder zusammen ein Niedrigalkylen oder folgende Gruppe

bedeuten, worin η eine ganze Zahl von 1 bis etwa 6 ist.

2. Zusammensetzung gemäß Anspruch 1. dadurch gekennzeichnet, daß R und R' zusammen

darstellen und η eine ganze Zahl von 1 bis etwa 6 ist.

3. Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Verbindung der Formel (1) 2-Imidazo!idon ist.

4. Zusammensetzung gemäß Anspruch 3. dadurch gekennzeichnet, daß der Indikator p-Dimethylaminobenzaldehyd ist.

5. Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Verbindung der Formel (I) Malonylharnstoff ist

6. Zusammensetzung gemäß Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß der Indikator p-Diäthylaminobenzaldehyd ist.

7. Zusammensetzung nach Anspruch 3 und 4. dadurch gekennzeichnet, daß sie 2-Imidazolidon. p-Dimcthylaminobenzaldehyd. Sulfosalicylsäure. Triäthanolaminborat. Koffein und Ascorbinsäure enthält.

8 Zusammensetzung nach Anspruch 5 und 6. dadurch gekennzeichnet, daß sie Malonylharnstoff, p- Diäthylaminobenzaldehyd. Sulfosalicylsäure. Koffein. Triäthanolaminoborat und Ascorbinsäure enthält.

9 Testmittel zum Nachweis der Gegenwart von Urobilinogen in einer Probe, gekennzeichnet durch eine Trägermatrix, die mit einer Zusammensetzung gemäß der Ansprüche I bis 8 imprägniert ist.

IQ₁ Ver[ahren zum Bestimmen der Anwesenheit von Urobilinogen in einer Probe, dadurch gekennzeichnet, daß man die Probe mit einer Zusammensetzung bzw. einem Teslmittel gemäß Ansprüchen 1 bis 9 in Berührung bringt und eine eintretende Farbänderung feststellt.

11. Verfahren zur Herstellung eines Testmittels gemäß Anspruch 9, durch Imprägnieren einer

Trägermatrix mit der Reagenzlösung und Trocknen der Trägermatrix, dadurch gekennzeichnet, daß die Reagenzlösung eine Zusammensetzung gemäß Anspruch 1 bis 8 in einem geeigneten Lösungsmittel enthält

Der Nachweis von Urobilinogenkörpern in Urin ist schon seit Anfang des Jahrhunderts bekannt, als Ehrlich und Proescher entdeckten, daß p-Dimethylaminobenzaldehyd mit Urobilinogen in Gegenwart einer starken Säure, wie HCL₁ unter Bildung einer roten Farbe reagiert. Dieser Test wird deshalb als »Ehrlich«- oder »Ehrlich-Proeschere-Reaktionbezeichneu

Trotz der weiten Anwendbarkeit und Anwendung bei der medizinischen Diagnose hat man jedoch bald festgestellt, daß die grundsätzliche Ehrücb-Reaktion von verschiedenen Substanzen im Urin beeinflußt wird. Insbesondere wurde festgestellt, daß Indol- und Skatolderivate, Pyrrolverbindungen, Sulfonamide und andere Substanzen in die Reaktion eingriffen und eine rote Farbe, die typisch für ein positives Testergebnis ist. lieferten. 1925 fand Terwen, daß durch Zugabe von Natriumacetat nicht nur die Urobhinogenaldehydfarbe verstärkt wurde, sondern daß auch die Farbe die den Indol- und Skatolderivaten zuzuschreiben war. unterdrückt wurde. Modifizierungen dieser Verbesserungen sind immer noch aktuell, wie durch die US·PS 34 47 905 gezeigt wird.

Aus der DE-AS 16 48 848 ist ein diagnostisches Mittel zum Nachweis von Urobilinogenkörpern in Körperflüssigkeiten bekannt, die aus einem saugfähigen Träger oder Film einer starken festen Säure und einer Substanz bestehen, die nach Art der Ehrlich'schen Probe mit Urobilinogenkörpern einen Farbumschlag liefern. Diese Substanzen sind Derivate des ρ Aminoben/aldehyds. die an der p-Aminogruppe Substituenten tragen, die stark Elektronen abziehende Eigenschaften haben. Solche diagnostischen Mittel zum Nachweis von Urobilinogen sollen wesentlich empfindlicher sein und den Nachweis von etwa 0.4 mg % Urobilinogen im Harn ermöglichen, wobei weder durch Harnstoff noch durch Indol oder Sulfonamide eine Störung eintritt.

Aufgabe der Erfindung ist es. Zusammensetzungen und Testmittel /um Nachweis von Urobilinogen zu zeilen, die ebenfalls durch Urinbestandteile, wie Nitrit, lsi ikotinsäurehydrazid. p-Aminosalicylsäure oder Indoi wenig beeinflußt werden, und die eine sehr kur/e Reaktionszeit haben, und eine intenvve Farbbildung im Falle der Anwesenheit von Urobilinogen ergeben.

Zur Lösung der Aufgabe wird erfindungsgemäß ausgegangen "on einer Zusammensetzung zum Nachweis von Urobilinogen in Proben, enthaltend p-Di-(niedrigalkyl)-aminobenzaldehyd als Indikator und eine Puffersubstanz zum Einstellen eines pH-Wertes von etwa 0.5 bis 3. Die Erfindung ist dadurch gekennzeich net. daß die Zusammensetzung zusätzlich eine Verbin dung der Formel I

Il

(I)

R R'

in welcher X O oder S bedeutet und worin R und R'

gleich oder verschieden sind und Niedrigalkyl bedeuten oder R und R' zusammen Niedrigalkylen oder

— C -f CH₃^r C —

bedeuten, worin η eine ganze Zahl von 1 bis etwa 6 ist, enthält. Das erfindungsgemäße Testmittel ist gekennzeichnet durch eine Trägermatrix, die mit der Zusammensetzung imprägniert ist.

Vorteilhafte Ausgestaltungen der Zusammensetzung sind in den Patentansprüchen 2 bis 8 beschrieben.

Als Indikatoren kommen die bekannten Ehrlich-Reagenz-Indikatoren, wie p-Dimethylaminobenzaldehyd, p-Diäthylaminobenzaldehyd, p-Diisopropylaminobenzaldehyd und ähnlich substituierte p-Aminobenzaldehyde, in denen die Niedrigalkylgruppe 1 bis etwa 6 Kohlenstoffatome hat, in Frage. Die verwendete Puffersubstanz soll in der Lage sein, einen pH von ei.va 0,5 bis 3 zu geben. Wird die Zusammensetzung per se zum Analysieren einer Probe verwendet, so sollte sie einen pH haben, der in diesem Bereich liegt. Wird die Zusammensetzung aber in Form eines Reagenzstreifens verwendet, so soll der verwendete Puffer beim Benetzen der Trägermatrix einen pH von etwa 0,5 bis 3 ergeben. Geeignete Puffer sind beispielsweise Sulfosalicylsäure, Hexamsäure, Oxalsäure und Phosphorsäure.

Beispiele für geeignete Verbindungen der Formel (I) sind Harnstoff. 2-Imidazolidon, Malonylharnstoff, MaIonylthioharnstoff urd Harnsäure.

Die erfindungsgemäßen Zusammmensetzungen können weiterhin \;ine Reihe von Hilfskomponenten enthalten. Zum Beispiel können die Formulierungen Triäthanolaminborat, Koffein und Λ-corbinsäure enthalten. Es wurde festgestellt, daß die Wirkung der Nitritinhibisrung erheblich durch Mitverwendung von Ascorbinsäure in der Formulierung vermindert wird. Weiterhin kann die Empfindlichkeit und die Reaktionsgeschwindigkeit der grundlegenden Ehrlich-Formulierung noch durch die Gegenwart von Koffein erhöht werden. Triäthanolaminborat verbessert die Stabilität der Zusammensetzung sowohl während der Formulierung als auch während des l.agerns erheblich. Andere bekannte Bestandteile, wie oberflächenaktive Mittel und Gelierungsmittel. können verwendet werden, um die Löslichkeit der Komponenten in der Eintauchlösung zu unterstützen oder um andere nachteilige Effekte zu vermindern.

Die Menge, in welcher die Bestandteile in den Urobilinogen-empfindlichen Formulierungen vorliegen können, kann weit variieren. So kann der Indikator in einem Bereich von etwa 0.001 bis etwa 5.0 Gew. %. der Puffer in einem Bereich von etwa I bis etwa 20 Gew. % und die Verbindung der Formel (I) in einem Bereich von etwa O.ooi bis etwa 20 Gew-%, bezogen auf die gesamten Bestandteile der Zusammensetzung, vorlie gen

Das Testmittel besteht aus einer Trägermatrix, in v/elcher die vorerwähnte Zusammensetzung eingela gert ist. Die Trägermatrix kann in vielen Formen vorliegen, zum Beispiel in Form von Papier, Filzen, porösen keramischen Streifen oder gewebten oder vliesförmigen Glasfasern, Holzstäbchen, Stoff, schwammigem Material und lehmartigen Substanzen, sowie von synthetischen Harzvliesen und Glasfaservliesen. Auch lichtdurchlässige Gitter aus dünnen Fäden zur Beschieh-

tung oder zum Verstärken einer Papiermatrix, sowie Trägermatrizes, die mehr als 50% Polyamidfasern enthalten oder bei denen man Reagentien auf geeignete Trägermatrizes aufdruckt oder Fäden, die Reagentien enthalten, in ein Reaktantensystem eingewoben oder eingewebt werden, sind geeignet Alle solche Trägermatrizesartert sind bereits bekannt.

Bei der Anwendung der Testmittel wird die die Urobilinogew-empfindliche Zusammensetzung enthaltende Trägermatrix kurz in die zu untersuchende i'robe eingetaucht und dann sofort herausgenommen. Nach dem Herausnehmen aus der Probe läßt man die in der Trägermatrix enthaltene Zusammensetzung die Farbe entwickeln, d. h. man wartet bis eine nachweisbare is Ansprechung erfolgt, und beobachtet diese Ansprectvng nach bekannten visuellen oder optischen Methoden.

Die folgenden Beispiele dienen der näheren Erläuterung der Erfindung.

Beispiele

(A) Herstellung der
Zusammensetzungen und Testmittel

^2> Beispiel 1

Eine gegenüber Urobilinogen empfindliche Zusammensetzung wurde a ϊ folgenden Bestandteilen hergestellt:

Sulfosalicylsäure	520,0 g
p-Dimethylaminobenzaldehyd	40.0 g
Triäthanolaminborat	80,0 g
2-Imidazolidon	160.0 g
Koffein	320.0 g
EDTA*)	8.0 g
Ascorbinsäure	200.0 g
F.D& C Blau-Lösung**)	4.OmI

*) Äthylend'amintetraessigsäure.

Hergestellt durch Auflösen von 20.C sv\ F. D & C Blau Nr. 1 in 4.0 ml destilliertem Wasser.

Die Zusammensetzung wurde durch Auflösung der obigen Bestandteile in der angegebenen Reihenfolge in

4, 41 destilliertem Wasser bereitet. Dabei wurde Sorge getragen, daß jeder Bestandteil vollständig gelöst war, bevor der nächste zugegeben wurde. Die erhaltene Lösung hatte eine heilgelbgrüne Farbe und veränderte sich in verschiedene Rotschattierungen in Gegenwart

in von unterschiedlichen Urobilinogenmengen.

Beispie! 2

Man stellte ein Bad her. das die Lösung gemäß Beispiel 1 enthielt und imprägnierte damit ungefähr

-,i 70 m Filterpapier von einer 2OJ cm Rolle. Nachdem das Filterpapier durch das Bad gelaufen war. wurde es bei etv/a 80 bis 82° C in einem Lufttunnel während etwa 15 Minuten getrocknet. Auf eine Seite des trockenen imprägnierten Papiers wurde eine Schicht Klebepapier

bo aufgebracht, wobei die verbleibende, offene Seite des Klebebandes durch ein nichthaftendes Papier, das leicht von dem Klebstoff abgezogen werden könnte, geschützt wan Das imprägnierte Papier mit dem darauf angebrachten Klebeband wurde zu Bändern von annähernd 5 mm Breite geschnitten. Die entstehenden Bänder wurden dann mit einer Seite auf ein Band aus transparentem Polystyrol von annähernd 70 mm Breite aufgebracht. Dies wurde durchgeführt, indem man das

nichtklebende Schutzpapier von dem Klebeband abzog und die Klebeseite des Klebebandes gegen das Polystyrolband drückte. Das Polystyrolband mit dem darauf befindlichen imprägnierten Papierband wurde dann in senkrechter Richtung zu seiner Länge zu Streifen von 5 mm Breite geschnitten. Auf diese Weise erhielt man eine Reihe von Urobilinogen-empfindlichen Teststreifen einer Größe von 5 χ 70 mm, die an einem Ende des Streifens eine Urobilinogen-empfindliche Reagenzfläche von 5x5 mm Ausmaß enthielten.

Das Testmittel ist empfindlich gegenüber einer Ehrlich-Einheit von Urobilinogen pro dl Urin.

Beispiel 3

Ein Bad wurde aus den folgenden Bestandteilen hergestellt:

50%ige wäßrige	la ml
Methanollösung	3g
SulFosalicylsäure	4.8 g
p- Dimethylaminobenzaldehyd	4.8 g
2-Thiomalonylharnstoff	400 mg
Koffein	20 ml
50%iges Methanol bis auf

Die Bestandteile werden vereinigt, indem man zunächst Dioctylnatriumsulfosuccinat in Äthanol unter Rühren auflöst. Das destillierte Wasser wird in einen zweiten Behälter gegeben und Glycin wird bis zum Auflösen zugerührt. Zu dieser wäßrigen Lösung gibt man die äthanolische Dioctylnatriumsulfosuccinatlösung. Zu dieser Mischung wird dann unter Rühren Fluorborsäure zugegeben.

Durch diese Lösung wird ein Streifen Filterpapier ίο geleitet, der dann in einem Lufttunnel etwa 15 Minuten bei etwa 80 bis 100° C getrocknet wird.

Eine zweite Eintauchlösung stellt man her durch Vereinigen der folgenden Bestandteile:

Destilliertes Wasser 80,0 ml

Tetrahydrofuran 20,0 ml

Sulfosalicylsäure 11,6 g
p-Diäthylaminobenzaldehyd 0,048 g

Ma'onylharnstoff O.'6g

Triäthanolaminborat 1,8 g

Koffein 9,7 g

EDTA 0,18g

Ascorbinsäure 4,4 g

Das Tetrahydrofuran und destilliertes Wasser wurden vermischt und die festen Bestandteile wurden in der angegebenen Reihenfolge zugegeben, wobei jede Komponente sich vollständig löste, bevor die nächste zugegeben wurde. Man erhielt eine hell-orangefarbene Lösung, die etwa 30 Minuten gerührt wurde.

Streifen von Filterpapier wurden mit der Lösung imprägniert und dann in einem Heißluftofen 15 Minuten bei 80°C getrocknet. Man erhielt so ein Testmittel mit einer hellorangen Farbe.

Beispiel 4
Man stellte ein Bad aus folgenden Bestandteilen her:

Methanol 1,01
Tris-(hydroxymethyl)-amino-

methan 12,5 g

Stannichlorid-Dioxan 375 g

p- Dimethylaminobenzaldehyd 15,6 g

Die festen Bestandteile wurden hintereinander zu dem wäßrigen Methanol in der angegebenen Reihenfolge zubegeben. Nach der Zugabe der Feststoffe wurde die Lösung durch Zugabe von wäßrigem Methanol auf 20 ml Volumen gebracht.

Streifen von Filterpapier wurden mit dieser Lösung imprägniert und in einem Heißluftofen bei etwa 75 bis 80°C getrocknet.

Kontrolle

Für Vergleichszwecke wurde ein Testmittel, das keine Verbindung der Formel (I) enthielt hergestellt:

Äthanol 42,6 ml

Dioctylnatriumsulfosuccinat 425,5 mg

Destilliertes Wasser 1,01

Glycin 106,4 g

Fluofbofsäüfe 23,4 ml

Diese Mischung stellt man her, indem man zu dem Methanol die anderen drei Be^^.ndteile unter Rühren zugibt, und zwar in der angegebenen Reihenfolge.

Durch diese Lösung leitet man das vorher durch die erste Lösung schon imprägnierte Papier. Das aus der zweiten Lösung herausgenommene Papier wird dann bei etwa 80 bis 100° C in einem Trockentunnel getrocknet.

(B) Bewertung der Testmittel
Durchführung von »Blindproben«

Blindproben wurden durchgeführt, um Vergleichsdaten für die Testeinrichtung von Beispiel 2 und die Kontrolle zu sammeln. Bei diesen Untersuchungen tauchen Gruppen aus fünf oder mehr Personen Reagenzstreifen in Urinproben und bewerteten den Urobilinogengehalt der Probe durch Vergleich der auf den Streifen entwickelten Farbe mit standardisierten

4n Farbblöcken.

Die Farbblöcke enthielten willkürliche numerische Werte von 0 bis 30. Die Farbblockeinteilung von 0.1 Ehrlich-Einheiten Urobilinogen pro dl Urin (E.U7dl.) erhielt den willkürlichen Wert Null. Ein zweiter Block war die Farbe des Reagenzstreifens bei 1 E-UVdI. Urobilinogen und erhielt den Wert 10. Ein dritter Farbblock erhielt den Wert 20 entsprechend der Reagenzstreifenfarbe bei einem Urin enthaltend Urobilinogen in einer Konzentration von 2 E.U7dl. Der Farbblock für 4 E.U7dl. Urobilinogenkonzentration erhielt den Wert 30. Fiel die Farbe des Reagenzstreifens zwischen zwei Farbblöcke, so wurden entsprechende Werte interpoliert. Die Ablesungen für einen jeweiligen Reagenzstreifen mV einer jeweiligen Urinprobe wurden c'jrch die Anzahl der Personen, die die Ablesungen vornahmen, geteilt und so der Durchschnitt genommen, um bei der persönlichen FarbbestifpTiung jegliche Subjektivität im größtmöglichen Maße auszuschließen. Diese Blindproben wurden durchgeführt, um die Wirkung von unterschiedlichen Urinparameiern au; die Wirksamkeit der Testvorrichtung von Beispiel 2 und der Kontrolle festzustellen.. Die untersuchten Parameter waren Nitrit, Isonikotinsäurehydrazid, p-Aminosalicylsäüfe Und Indöl.

Der Einfluß von Nitrit

Eine Blindprobe wurde durchgeführt, um die relative Wirkung von Nitritionen in Urin bei der Urobilinogen·

analyse unter Verwendung der erfindungsgemäßen Testmittel (Beispiel 2) und der Kontrolle festzustellen.

Es wurden vier Farbblöcke hergestellt als Referenzen der Farbbildung bei jedem der beiden Arten von Reagenzstreifen. Es wurden Farbreferenzblöcke entsprechend Urobilinogenmengen von 0,1, 1,0, 2 und 4 E.Uydl für jeden Streifentyp hergestellt und jedem Block wurden willkürlich Zahlenwerle von 0,10,20 bzw. 30 zugeordnet.

Proben von gesammeltem Urin wurden hergestellt und Urobilinogen wurde bis zu Konzentrationen von 1,0, 2,0 und 4,0 E.LJydl zugegeben. Dann wurden diesen Proben unterschiedliche Mengen an Nitrit zugefügt, und beide Arten der Teststreifen wurden in die jeweilige Lösung getaucht. Den beobachteten Farbveränderungen wurden Zahlenwerte zugeordnet, die den Standardfarbblöcken entsprachen. Die Ergebnisse sind in Tabelle I enthalten.

Tabelle I: Die Wirkung von Nilrit aufdie Urobilinogenbeslimmung

NO, (mg/dl)	lirobitinogenkcm/entration (Π. U./dl)	Kontrolle	2,0	Kontrolle	4.0	Konirolle
	!.0	3.4	Beispiel 2	8,2	Beispiel 2	10,0
	Beispiel 2	6.2	19,6	5.4	29,4	8,2
0.1	10.8	i.O	15,0		28.0	-* η f,0
0.2	10.0	1.8	i7,6	2.4	25.0	6,2
Ö.3	v.ö		12,0	2.4	22.4	5,6
0.5	8.0		12,2	2,6	20,0	5,4
0,6			13.0	3,6	18,0	4,0
0.8		10	10,4	20	22,0	30
1.0		20		30
erwarteter Wert	10

Diese Daten zeigen, daß Nitrit einen erheblichen Einfluß bei den Urobilinogennachweisen haben kann, und daß dieser Einfluß durch die vorliegende Erfindung erheblich vermindert wird. Bei einem Urobilinogenniveau von 1,0 E.LL/dl ergab die Ablesung auf dem KontrolUeststreifen einen Wert weit Unterhalb dem, gemäß der vorliegenden Erfindung gemessenen bei einer Nitritkonzentration von lediglich 0,1 mg/dl, während der Streifen gemäß Beispiel 2 nicht beeinflußt wurde (Ablesungen von 3,4 bzw. 10,8). Erhöhte sich der Nitritgehalt auf 03 und 0,5, so erhielt man gemäß der Erfindung Ablesungen von 9,6 und 8,0, also Werte, die sich dem Wert von 10, dem wahren Urobilinogenniveau. stark nähern, während die Ablesungen bei den Kontrollversuchen nur 1,0 bzw. 1,8 ergaben. Berücksichtigt man die Wirkung von Nitrit auf die Streifen des Beispiels 2 und der Kontrolle, so stellte man bei den erfindungsgemäßen Streifen nur geringfügig verminderte Werte gegenüber dem tatsächlichen Urobilinogen fest, während die Kontrollstreifen falsche negative Werte ergaben (0,1 E.U/dl, gegenüber einer tatsächlichen Konzentration von 1,0 EUVdI).

Wurden ähnliche Versuche mit höheren Urobilinogenkonzentrationen durchgeführt, so ergaben die Kontrollstreifen noch schlechtere Werte, während die erfindungsgemäßen Formulierungen weit weniger durch Nilrit beeinflußt wurden.

Der Einfluß von Isonikotinsäurehydrazid

Ein Blindversuch wurde durchgeführt, um die Wirkungen von Isonikotinsäurehydrazid (INH) im Urin bei Urobilinogen-Testmitteln gemäß der Erfindung (Beispiel 2) und der Kontrolle zu bewerten.

Für beide Arten der Reagenzstreifen wurden Farbreferenzblöcke hergestellt, die den gleichen Urobilinogenmengen von 0,1 1,0, 2,0 und 4,0 entsprachen. Wiederum wurden den Farbblöcken, die für die Bewertung der Reagenzstreifen verwendet wurden, willkürlich Zahlenwerte von 0, 10, 20 bzw. 30 zugeordnet

Testproben wurden hergestellt unter Verwendung von gesammeltem normalen Urin, dem unterschiedliche Mengen an INH zugegeben wurden. Da INH das Standard-Ehrlich-Reagenz beeinflußt, indem es falsche positive Ergebnisse liefert, wurde diese Untersuchung durchgeführt, um festzustellen, ob die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung positiv auf die Gegenwart von INH in den Proben reagiert. Die Ergebnisse werden in Tabette II gezeigt.

₃. Tabellen	40	20	INH auf Urobilinogen-Teststreifen	Streifen gemäß
Die Wirkung von	60	angezeigte Farbwerte	Kontrolle
INII (mg/dl)	45 100	Streifen gemäß	11.7
	300	Beispiel 2	10,0
500	2,6	183
700	2,5	35,8
	4.2	423
	4.7	46,6
5,3
6.8

Diese Daten zeigen, daß bei INH-Mengen von bis zu 700 mg/dl bei den erfindungsgemäßen TesteinrKhtüngen gemäß Beispiel 2 keine erheblich falschen Ergebnisse eintraten, während bei den gleichen Konzentrationen die Ablesungen bei den Reagenzstreifen der Kontrolle sehr hohe Urobilinogenniveaus (46,6 > 3,0 E-U-ZdI Urobilinogen) festgestellt wurden.

Die Reagenzstreifen des Standes der Technik werden durch INH in weit stärkerem Maße beeinflußt als erfindungsgemäß hergestellte Streifen.

Der Einfluß von p-Aminosalicylsäure

Es wurde eine Blindprobe durchgeführt, um die Wirkung der Anwesenheit von p-Aminosalicylsäure (PAS) in auf Urobilinogen zu untersuchenden Urinproben unter Verwendung der Testmittel gemäß der Erfindung (Beispiel 2) und der Kontrolle festzustellea

Es wurden Farbblöcke hergestellt, um die Farbentwicklung der bei diesem Versuch verwendeten Streifen

zu bewerten. Die Reagenzstreifen gemäß Beispiel 2 und der Kontrolle wurden in die Proben aus gesammeltem normalen Urin, denen verschiedene Mengen an PAS zugegeben waren, getaucht. Es wurde kein Urobilinogen zugegeben. Eine positive Ablesung auf den Streifen bedeutet ein positives Ansprechen auf die Gegenwart von PAS und dies bedeutet eine wahrscheinlich falsche, zu hohe Ablesung, die sich ergeben würde, wenn U'robilinogen in der Urinprobe vorhanden wäre. Die erzielten Ergebnisse werden in Tabelle III gezeigt.

Tabelle III

Die Wirkung von PAS auf Urobilinogen-Tesfstreifen

PAS (mg/dl)	abgelesene Farbwerte	Streifen gemäß
	Streifen gemäß	Kontrolle
	Beispiel 2
Ö	8,3	25,0
20	16,0	28,0
40	16,0	39,0
60	19,7	37,0
80	26,0

Gesammelte Proben von normalem Urin wurden mil unterschiedlichen Mengen Indol versetzt. Es wurde kein Urobilinogen zugegeben. Diese Urinproben wurden mil den gemäß Beispiel 2 und der Kontrolle hergestellten Teststreifen geprüft und die Ergebnisse werden in Tabelle IV gezeigt.

Diese Daten zeigen, daß zwar bei beiden Arten von Reagenzstreifen ein gewisser Einfluß durch PAS auftrat, der aber bei den Kontrollstreifen weitaus stärker war.

Der Einfluß von Indol

Versuche, ähnlich den Beispielen 7 bis 9, wurden *uurchgeführt, um nachteilige Wirkungen unterschiedlicher Mengen an Indol in den auf Urobilinogen im Urin zu untersuchenden Proben bei Reagenzstreifen gemäß Beispiel 2 und der Kontrolle festzustellen.

Tabelle IV	Indol auf Urobiiinogen-Teststreifen	Streifen gemäß
Der Einfluß von	abgelesene Farbwerte	Kontrolle
Indol (mg/dl)	Streifen gemäß	3,0
	Beispiel 2	10,0
	0	24,0
0	0	30,0
1,0	2,0	37 0
2,0	6.6	42!o
3,0	5,0	44,0
*λ e\* T₁U	12,0	42,0
5,0	12,0
6,0	11,2
7,0

Diese Daten zeigen, daß die erfindungsgemäßen Testmitte! in nur geringfügigem Maße durch Indol bei Konzentrationen von 4,0 mg/dl beeinflußt werden. Dagegen zeigten die Kontrollteststreifen eine erhebliche nachteilige Beeinflussung bei gleichen Mengen, denn es wurde eine Urobilinogenablesung von 4,0 E.U7dl festgestellt, obwohl tatsächlich gar kein Urobilinogen zugegeben worden war. Wenn Indol in höheren Mengen (5 bis 7 mg dl/Indol) vorlag, wurde die nachteilige Wirkung von Indol bei den erfindungsgemä-

j5 ßen Teststreifen erheblich verringert.

Claims

Patentansprüche:

1. Zusammensetzung zum Nachweis von Urobilinogen in Proben, enthaltend p-Di-(niedrigaIkyl)-aminobenzaldehyd als Indikator und eine Puffersubstanz zum Einstellen eines pH-Wertes von etwa 0,5 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß sie zusätzlich eine Verbindung der Formel (I)