CS221511B2 - Mixture fitted for developing the response in presence of the urobilinogene - Google Patents

Mixture fitted for developing the response in presence of the urobilinogene Download PDF

Info

Publication number
CS221511B2
CS221511B2 CS795160A CS516079A CS221511B2 CS 221511 B2 CS221511 B2 CS 221511B2 CS 795160 A CS795160 A CS 795160A CS 516079 A CS516079 A CS 516079A CS 221511 B2 CS221511 B2 CS 221511B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
urobilinogen
color
composition
test
strips
Prior art date
Application number
CS795160A
Other languages
English (en)
Inventor
Tak W Ch Lam
Chauncey O Rupe
Original Assignee
Miles Lab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Miles Lab filed Critical Miles Lab
Publication of CS221511B2 publication Critical patent/CS221511B2/cs

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
    • Y10T436/145555—Hetero-N
    • Y10T436/146666—Bile pigment

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Description

Vynález se týká zlepšen směsi schopné vyvolání de'taktovatelné -odezvy ' za pHtom nosti urobilinogenu. Dále se týká zařízení a metody detekce urobilinogenu.
Analýza urobilinogenu v moči je starý způsob, jehož počátek leží na přelomu století (1901), kdy Ehrlich objevil, že p-dimethylaminobenzaldehyd reaguje s urobilinogenem . za přítomnosti silné kyseliny jako kyseliny chlorovodíkové za vzniku červené barvy. Tuto reakci současně ve stejná roce objevil Proesche-r a od té doby se tato- zkouška střídavě nazývá „EhrHchova“ nebo . „Ehrlich-Proescherova“ zkouška. P?es tyto současné objevy, které jsou základem chemie, hledají se další zlepšení dnešního provádění zkoušek urobilinogenu.
Přes velkou prospěšnost a širokou použivatelnost v lékařské diagnostice bylo . brzy zjištěno, že základní Ehrlichova reakce je citlivá na různé rušivé látky v moči. Zejména bylo zjištěno, že indolové a škatulové deriváty, pyrrolové sloučeniny, sulfonamldy a další látky ruší reakci vytvářením červené barvy typické pro pozitivm výsledek zkoušky. V roce 1925 zpstH Temee^ že přením octanu sodného se nejen zrntenzwní urotiilinogen-aldehydová barva, ale také se potlací barva vzhledem k pntomným , rndolovým a skatolovým deriv^m. Stále se pro- vádějí modifikace tohoto zlepšení, jak eviduje US patent č. 3 447 905. Ještě později byly prováděny pokusy k zajmtorn dalších diagnostických činidel pro použití při detekci urobilinogenu, jak uveřejněno v US patentu c. 3 630 68°. Do dnešní doby byly vyvinuty pozoruhodné -zkoušky urobilinogenu, které jsou réměi· výlučito založeny na použití p-dialkylamrnobenzaldehydového indikátoru jako p-dimethylaminobenzaldehydu. Tento produkt běžně dodává na trh Ames Division of Miles Laboratories, lne. jako
Urobilistix reagenční papírky.
Vynález se liší od stavu techniky v tom, že je zaměřen na výrazné zlepšení Ehrlichovy reakce. Nová směs zajišťuje kratší reakční dobu, intenzivnější tvorbu barvy a menší narušování složkami moct jako dusitanem, hydrazidem kyseliny isonikotinové, kyselinou p-aminosalycilovou a indolem.
Kromě toho má použití směsi podle vynálezu při přípravě zkušebního zařízen pr° měřern urobUinogenu za následek značně zjednodušený po.stup. . Před vynálezem byly pnpraveny dvojrn máčením pro ur°bilin° gen tak zvané reagenční papírky „ponoř a čti“. Rozpušrénta aminooctové kyselrny a. íluorotoňté kyselky v alkoholickém roztoku vody se popravil prvrn reagenční roztok.
Tento první roztok se použil к Impregnaci nosičové matrice, například papíru, který se potom sušil. Druhý reagenční roztok se potom připravil z methanolu obsahujícího komplex chlorid cíničitý-dioxan a p-dimethylaminobenzaldehyd. Suchý impregnovaný papír se potom ponořil do tohoto druhého roztoku a vysušil se.
V důsledku zvýšené stability reagenčního systému podle vynálezu může se zkušební zařízení neočekávaně připravit pouze použitím 0,5 až 3. Příkladem pufru je sulfosalicylová jediné Impregnace nebo jedním máčením. V důsledku neočekávané stability směsi se mohou všechny složky rozpustit v jediném reagenčním roztoku, čímž se eliminuje další nákladné zdlouhavé máčení.
Další výhodou podle vynálezu je ta skutečnost, že se eliminuje potřeba vysoce kyselé složky dřívějších zařízení, která způsobovala rozpad papírové matrice. Podle stavu techniky je zapotřebí použití takových sloučenin, jako komplexu chlorid cíničitý-dioxan, jako zdroje HC1 při reakci. Následkem poměrně vysoké reaktivity této sožky s papírem za přítomnosti vody je potřebné dvojí máčení, první máčení do vhodného pufru a příprava nosičové matrice pro komplex uvolňující kyselinu.
Vynález odstraňuje potřebu tohoto prvního· stupně. Konečný produkt používající směs podle vynálezu, umožňuje rychlejší reakční dobu s vyvinutím intenzivnější barvy, žlutá až tmavě červená, než bylo dosud možné. Kromě toho je barevné rozmezí širší než podle stavu techniky, čímž je umožněno použití více barevných stupňů oproti ekvivalentnímu rozmezí hladiny urobilinogenu než dříve.
Výhody vynálezu oproti stavu techniky spočívají v tom, že se zvýší rychlost reakce, takže čekací doba pro vyvinutí barvy nebo jiné detektovatelné odezvy je značně zmenšena; barva vytvořená při reakci je mnohem intenzivnější, takže je usnadněna větší citlivost a přesnost; а к výrobě zařízení se může použít jen jedno máčení na rozdíl od stavu techniky, kdy se vyžaduje pro výrobu reagenčních proužků dvojí máčení.
Zlepšená směs schopná vyvolání detektovatelné odezvy za přítomnosti urobilínogenu ve zkoušeném vzorku obsahující p-dialkylaminobenzaldehyd s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku jako indikátor a pufr schopný regulace pH v rozmezí 0,5 až 3, se vyznačuje tím, že obsahuje 0,2 až 2 g/lOQ ml p-dialkylaminobenzaldehydu s 1 až 8 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a 0,005 až 5 g/100 mililitrů sloučeniny obecného vzorce I ve kterém
X je 0 nebo S a
R a R‘, stejné nebo rozdílné, značí alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo
R a R‘ tvoří dohromady alkylen s 1 až 6 atomy uhlíku nebo
O O
И II
- C -4- CH?4- C kde n je číslo 1 až 6.
Směs podle vynálezu zahrnuje tři základní složky: indikátor, pufr a sloučeninu odvozenou od močoviny,ve které oba amido-dusíkové atomy jsou substituovány, aby byly acyklické nebo cyklické. Indikátor je vybrán z různých para- di-(nižší alkyl) aminobenzaldehydů. Tyto sloučeniny jsou podobné Ehrlichovu reagenčnímu indikátoru a zahrnují p-dimethylaminobenzaldehyd, p-diethylaminobenzaldehyd, p-diisopropylaminobenzaldehyd a další podobné substituované p-anrnobenzaldehydy, .ve kterých má nižší alkylová skupina 1 až 6 atomů uhlíku.
Pufrová látka použitá v této směsi je látka schopná regulace pH na hodnotu 0,5 až 3. Když se použije směs per se pro analýzu vzorku, musí pH být v tomto rozmezí. Podobně, jestliže se použije směs ve formě reagenčního proužku, musí použitý pufr zajistit po zvlhčení nosičové matrice pH v rozmezí '0,5· až 3. Příkladem pufru je sulfosalicylová kyselina, hexamová kyselina, šťavelová kyselina a fosforečná kyselina.
Třetí základní složkou směsi je sloučenina obecného vzorce I ve kterém je
X kyslík nebo síra a
R a R‘ může být alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku jako methyl, ethyl, isopropyl, n-propyl, různé butylové isomery a další.
R a R‘ mohou také dohromady tvořit nižší alkylenovou skupinu mající 1 až 6 atomů uhlíku, jako methylen nebo ethylen, nebo
, 11
- C c ve kterém je n ceíé číslo 1 až 6, čímž se vytvoří uzavřený kruhový systém.
Příkladem vhodných sloučenin splňujících tyto požadavky je močovina, 2-imidazolidon, maíonylmočovina, malonylthlomočovina a močová kyselina.
Směsi podle vynálezu mohou zahrnovat kromě výše uvedených tří základních složek četné pomocné látky. Například může přípravek obsahovat rozličné sloučeniny jako triethanolaminborát, kofein, kyselinu askorbovou a další složky. Bylo například zjištěno, že účinky dusitanové inhibice mohou být podstatně zmírněny včleněním kyseliny askorbové do přípravku. Citlivost a reakční rychlost základního Ehrlichova přípravku může být dále zvýšena přítomností kofeinu. Triethanolaminborát značně zlepšuje stabilitu směsi během jejího vytváření a skladování. Další složky, jako povrchově aktivní činidla a komplexotvorné látky, se mohou použít к napomáhání rozpuštění složek máčecího roztoku a ke snížení dalších nepříznivých účinků. Tudíž zahrnuje vynález reagenční směsi citlivé na urobilinogen obsahující tři základní složky uvedené výše s nebo bez dalších pomocných látek.
Množství každé základní složky směsi citlivé na urobilinogen se může široce měnit. Indikátor se může použít v rozmezí 0,001 až 5,0 hmotnostních °/o; pufr v rozmezí 1 až 20 hmotnostních % a derivát močoviny nebo třetí složka v rozmezí 0,001 až 20 hmotnostních %; vztaženo na celkové složky směsi.
Zkušební zařízení podle vynálezu obsahuje nosičovou matrici spojenou s výše uvedenou zkušební směsí. Nosičová matrice může mít mnoho forem. Například uvádí US patent č. 3 846 247 použití plstěných, porézních keramických proužků a tkaných nebo matovaných skleněných vláken, jako náhražku pro papír uvádí US patent č. 3 552 929 použití dřevěných tyčinek, tkaniny, houbovitého materiálu a jílovitých látek.
Použití syntetického, pryskyřičného rouna a skleněné vláknité plsti místo papíru je navrženo v britském patentu č. 1 369 139. Další britský patent č. 1 349 623 navrhuje použití snadno prodyšné síťoviny tenkých vláken jako pokrývky pro spodní papírovou matrici. Tento odkaz také navrhuje impregnaci papíru částí reagenčního systému a impregnaci síťoviny dalšími účinnými neslučitelnými činidly.
Francouzský patent č. 2 170 397 uvádí použití nosičové matrice mající více než 50 % polyamidových vláken. Další zmínka o nosičových matricích je uvedena v US patentu č. 4 046 513, kde se používá koncepce tiskových reagencí na vhodnou nosičovou matrici. US patent č. 4 046 514 uveřejňuje spleteninu nebo pleteninu vláken nesoucí reagencie v reakčním systému. Všechny tyto návrhy nosičových matric se mohou použít ve způsobu podle vynálezu, jako se mohou použít další.
Výsledný způsob přípravy zkušebního zařízení zahrnuje více stupňů; začíná se impregnací souvislého kotouče filtračního papíru jako nosičové matrice ponořením papíru do reagenční lázně obsahující reagenční systém citlivý na urobilinogen. Po vysušení se papír laminuje na souvislý list základního materiálu jako průhledného polystyrénového filmu známého jako Trycite (§) (Dow Chemical Co.).
Výhodnou metodou připojení impregnované nosičové matrice к plastické hmotě je použití meziaplikace oboulícního adhezívního proužku. Tento proužek dává do prodeje 3M Company pod ochrannou známkou Double Stick. Když se impregnovaný filtrační papír aplikuje na základní materiál, složenina se uřízne tak, aby konečný produkt byl prodloužený proužek plastické hmoty mající obdélníkový úsek impregnované nosičové matrice laminované na část jeho jednoho konce, zbytek plastické hmoty slouží jako držadlo.
Při způsobu použití zkušebního zařízení podle vynálezu se ponoří nosičová matrice obsahující směs citlivou na urobilinogen na okamžik do zkoušeného vzorku a vyjme se. Po odstranění ze zkoušeného vzorku se nechá na směsi včleněné do nosičové matrice vyvinout barva nebo jiná detektovatelná odezva, a potom se pozoruje. Metody pozorování odezvy v matrici nebo na matrici zahrnují měření množství absorbovaného světla před a po ponoření za použití spektrofotometru nebo jiného vhodného zařízení, nebo vizuální srovnání jakékoliv barevné změny v nosičové matrici se standardním barevným blokem odpovídajícím předem stanovené hladině urobilinogenu.
Následující příklady detailně objasňují, aniž by omezovaly rozsah vynálezu, různé stupně přípravy a použití prostředku podle vynálezu.
Příklady
A. Příprava směsi a zkušebního zařízení
Příklad 1
Směs s 2-imidazolidonem
Směs citlivá na urobilinogen se připraví z následujících složek:
sulfosalicylivá kyselina 520g p-dimethylaminobenzaldehyd 40,0g triethanolamin borát 80,0g
2-imidazolidon 160,0g kofein 320,0g
Versene© (Dow Chemical Co.)8,0 g askorbová kyselina 200,0g
F, D ε C modrý roztok *') 4,0 ml
*) Připraveno rozpuštěním 20,0 miligramů F, D ε C modři č. 1 ve 4,0 mililitrech destilované vody.
Směs se připraví rozpuštěním výše uvedených složek, v uvedeném pořadí, ve čtyřech litrech destilované vody. Musí se dbát na to, aby každá složka byla úplně rozpuštěna, než se přidá další. Výsledný roztok vyvíjí jasně žlutozelenou barvu a za přítomnosti různého množství urobilinogenu vytváří různé odstíny červeně.
Příklad 2
Zkušební zařízení s 2-imidazolidonem
Připraví se lázeň obsahující roztok podle příkladu 1 a použije se к impregnaci přibližně 70,15 m filtračního papíru z 19,32 cm široké role (Eaton a Dikeman 237 filtrační papír). Po průchodu lázní se filtrační papír suší při teplotě asi 80 až 82 °C ve vzduchovém tunelu po dobu 15 minut.
Na jednu stranu suchého impregnovaného papíru se aplikuje vrstva adhezívního proužku známého pod ochrannou značkou Double Stick, druhá nechráněná strana adhezívního proužku se chrání neadhezívním papírem, který je možno jednoduše odtrhnout z adhezívního. Impregnovaný papír s připojeným adhezívním proužkem se rozřeže na pásky přibližně 5 mm široké. Získané pásky se potom aplikují na jednu stranu pásku z umělé hmoty Trycite (Ř) přibližně 70 mm širokého. To se provede stáhnutím neadhezívního papíru z adhezívního proužku a přitlačením nechráněného adhezívního proužku na Trycit. Trycitový pásek obsahující upevněný impregnovaný papírový pásek se potom řeže ve směru kolmém к jeho délce na proužky 5 mm široké. Tím se získají série zkušebních proužků citlivých na urobilinogen o rozměru 5X70 mm a obsahujících reagenčiní plochu citlivou na urobilinogen měřící 5X5 mm na jednom konci proužku. Tím se získá zkušební zařízení na urobilinogen citlivé na jednu Ehrlichovu jednotku urobilinogenu na decilitr moči.
Příklad 3
Směs a zkušební zařízení s malonylmočovínou
Připraví se lázeň obsahující následující složky:
destilovaná voda 80,0 ml
tetrahydrofuran 20,0 ml
sulfocalicylová kyselina 11,6 g
p-diethylaminobenzaldehyd 0,048 g
malonylmočovina 0,16 g
triethanolamin borát g
kofein 9,7 g
Versen 0,18 g
askorbová kyselina 4,4 g
uvedeném pořadí, každá složka se musí úplně rozpustit před přidáním další složky.
Výsledný světle oranžově zbarvený roztok se míchá asi 30 minut.
Proužky filtračního papíru Eaton a Dikeman č. 237 se impregnují roztokem a suší se v horkovzdušném sterilátoru při teplotě 80 stupňů Celsia po dobu 15 minut, aby se zajistilo zkušební zařízení podle vynálezu, které by mělo světle oranžovou barvu.
Části impregnovaného papíru se upraví na Trycitu (g) (Dow Chemical Co.) za použití adhezívního proužku 3M Compa.ny‘s Double Stick jak popsáno v příkladu 2.
Příklad 4
Směs a zkušební zařízení s 2-thiomalonylmočovinou.
Připraví se lázeň obsahující následující složky:
50% vodný roztok methanolu 15ml sulfosalicylová kyselina 3,0mg p-dimethylaminobenzaldehyd 4,8mg
2-thiomalonylmočovina 4,8mg kofein 400,0mg
50% vodný methanol do 20ml
Pevné látky se postupně přidají v uvedeném pořadí do vodného methanolu. Po přidání pevných látek se roztok upraví dalším přidáním vodného methanolu na objem 20 mililitrů.
Proužky filtračního papíru Eaton a Dikeman č. 237 se impregnují tímto roztokem a suší se v horkovzdušném sterilátoru při 75 až 80 °C, aby se připravilo zkušební zařízení. *
Příklad 5
Kontrolní zkušební zařízení
Zkušební zařízení se připraví jako^ kontrola pro použití při hodnocení zlepšené charakteristiky podle vynálezu. Připraví se podle dvoijmáčecího způsobu podle stavu techniky.
První lázeň se připraví kombinací následujících složek:
ethanol 42,6ml dioktylsodium-sulfosukcinát 425,5ml destilovaná voda1,0 1 glycin 106,4 g fluoroboritá kyselina 23,4ml
Složky se spojí tak, že se nejprve míchá dioktylsodium-sulfosukcinát v ethanolu, dokud se nerozpustí. Do oddělené nádoby se umístí destilovaná voda a za míchání se přidá glycin, dokud se nerozpustí. Do tohoto vodného roztoku se přidá ethanolický roz
Tetrahydrofuran a destilovaná voda se smíchají a pevné látky se přidají ve výše tok dioktylsodium-sulfosukcinátu. Do této směsi se přidá za míchání fluoroboritá kyselina.
Tímto roztokem se nechá projít proužek filtračního papíru (Eaton a Dikeman 237), který se potom suší 15 minut při teplotě 80 až 100 °C v horkovzdušném sterilátoru.
Tímto roztokem se nechá projít proužek filtračního papíru (Eaton a Dikeman 237), který se potom suší 15 minut při teplotě 80 až 100 °C v horkovzdušném sterilátoru.
Druhý smáčecí roztok se připraví kombinací následujících složek:
methanol 1,0 1 tris(hydroxymethyl) aminomethan 12,5 g chlorid cíničitý dioxan (Sumner Division, Miles
Laboratories, lne.) 375,0 g p-dimethylaminobenzaldehyd 15,6 g
Složky se přidávají za míchání do methanolu ve výše uvedeném pořadí.
Tímto roztokem se nechá projít impregnovaný papír z první lázně. Papír vycházející z druhé lázně se potom suší při teplotě 80 až 100 °C v sušicím tunelu.
Po vysušení se impregnovaný papír aplikuje na jednu stranu dvojlícného adhezívního pásku získaného od 3M Company. Zbylá adhezívní strana se spojí s fólií Trycitu ® (Dow Chemical Co, lne). Sestava impregnovaný papír (adhezívní pásek) Trycit se potom rozřeže na proužky o rozměru 10,16 + 0,51 cm. Část impregnovaného papíru měří 0,51X0,51 cm.
B. Zhodnocení zkušebního zařízení
Příklad 6 „Slepý pokus“
Slepý pokus byl prováděn pro srovnání zkušebního zařízení z příkladu 2 a podle stavu techniky (kontrolní zařízení podle příkladu 5). V tomto pokuse se ponořovaly reagenční proužky skupiny pěti nebo více lidí do vzorků .moči a porovnávaly jakoukoliv barvu vyvinutou na proužku se standardizovanými barevnými bloky.
Barevné bloky byly označeny smluvními číselnými hodnotami od 0 do 30. Barevný blok udávající 0,1 Ehrlichových jednotek urobilinogenu na decilitr moči (E.U./dl) byl označen smluvní hodnotou 0. Druhý blok barvy reagenčního proužku při 1 E.U./dl urobilinogenu byl označen hodnotou 10. Třetí barevný blok, označený hodnotou 20, odpovídal barvě reagenčního proužku v moči obsahující urobilinogen při koncentraci 2 E.U./dl. Konečně byl označen barevný blok pro koncentraci 4 E.U./dl urobilinogenu hodnotou 30. Kde byla barva reagenčního proužku mezi dvěma barevnými bloky, zjistily se interpolační hodnoty. Stanovil se průměr odečtených hodnot jednotlivého reagenčního proužku v jednotlivém vzorku moči vzhledem к počtu osob, které odečtení prováděly, aby se pokud možno odstranila subjektivnost v interpretaci barev.
Výše popsaný slepý pokus se použil ke zhodnocení účinků různých parametrů moči na účinnost zkušebního zařízení z příkladu 2 a kontroly, nebo stavu techniky, zařízení z příkladu 5,
Tyto pozorované parametry byly dusitan, hydrazid kyseliny isonikotinové, kyselina p-aminosalicylová a indol.
Příklad 7
Účinek dusitanu
Slepý pokus popsaný v příkladu 6 se prováděl ke zhodnocení relativních účinků dusitanového iontu v moči na urobilinogenovou analýzu za použití zkušebního zařízení podle vynálezu (příklad 2) a podle stavu techniky (kontrolní proužky podle příkladu 5).
Připravily se čtyři barevné bloky pro srovnání s barevnou reakcí dvou typů reagenčních proužků. Připravily se barevné referenční bloky odpovídající hladině urobilinogenu 0,1, 1,0 a 2 a 4 E. U./dl pro každý typ proužku a každému bloku byla přidělena smluvní číselná hodnota 0, 10, 20 a 30.
Připravily se vzorky shromážděné moči a přidal se urobilinogen do koncentrace 1,0, 2,0 a 4,0 E. U./dl. К těmto vzorkům se přidalo různé množství dusitanu a do každého roztoku se ponořily dva typy zkoušených proužků. Každé pozorované barevné změně byla přidělena numerická hodnota, založená na standardním barevném bloku. Výsledky jsou uvedeny v tabulce I.
TABULKA I
Účinek dusitanu na stanovení urobilinogenu Koncentrace urobilinogenu {E. U./dl)
N02 - (mg/dl) 1. 0 Př. 2 Př. 5 2,0 Př. 2 Př. 5 4,0 Př. 2 Př. 5
0,1 10,8 3,4 19,6 8,2 29,4 10,0
0,2 10,0 6,2 15,0 5,4 28,0 8,2
0,3 9,6 1,0 17,6 1,2 25,0 4,8
0,5 8,0 1,8 12,0 2,4 22,4 6,2
0,6 12,2 2,4 20,0 5,6
0,8 13,0 2.6 18,0 5,4
1,0 10,4 3,6 22,0 4,0
Předpokládaná 10 10 20 20 30 30
hodnota
Údaje ukazují, že dusitan má hluboký účinek na zkušební zařízení podle stavu techniky, zatímco je tento účinek značně nižší ve vztahu к zařízení podle vynálezu. Při hladině urobiliniogenu 1,0 E. U./dl jsou odečtené údaje kontrolního zkušebního proužku při koncentraci dusitanu pouze 0.1 mg/dl značně pod odečtenými hodnotami proužků podle vynálezu, zatímco je proužek z příkladu 2 neovlivněn (hodnoty 3,4 a 10,8). Když se koncentrace dusitanu zvýší na 0,3 a 0,5 je odečtená hodnota podle vynálezu 9,6 a 8,0, velice blízká hodnotě 10,0 odpovídající skutečné hladině urobilinogenu, zatímco kontrolní údaje jsou pouze 1,0 až 1,8.
Když se vezmou v úvahu účinky dusitanu na proužky podle příkladu 2 a 5, získají se podle vynálezu pouze nepatrně snížené hodnoty skutečného urobilinogenu, zatímco při kontrole se získají nesprávně negativní hodnoty (0,1 E. U./dl ve srovnání se skutečnou koncentrací 1,0 E. U./dl).
Když se provádějí stejné pokusy s vyššími koncentracemi urobilinogenu, jsou kontrolní proužky tím více nepříznivě ovlivněny, zatímco na přípravky podle vynálezu má dusitan značně menší vliv.
Příklad 8
Účinek hydrazidu kyseliny isonikotinové
Slepý pokus popsaný v příkladu 6 se prováděl pro zhodnocení relativních účinků hydrazidu isonikotinové kyseliny (INH) v moči na zkušební zařízení ke stanovení urobllinogenu podle vynálezu (příklad 2] a podle stavu techniky (příklad 5).
Připravily se barevné referenční bloky jako v příkladu 7 pro typy reagenčních proužků odpovídající stejným hladinám urobilinogenu 0,1, 1,0, 2,0 a 4,0. Opět byly přiděleny každému barevnému bloku pro použití při hodnocení reagenčního proužku smluvní číselné hodnoty 0,10, 20 a 30.
Zkoušené vzorky se připravily za použití shromážděné normální moči, ke které se přidalo různé množství hydrazidu kyseliny isonikotinové. Protože hydrazid kyseliny isonikotinové ovlivňuje standardní Ehrlichovo reagens získáním nesprávně pozitivního výsledku, byl tento pokus prováděn pro zjištění, zda zařízení podle vynálezu reaguje kladně na přítomnost hydrazidu kyseliny isonikotinové ve zkoušeném vzorku. Výsledky jsou uvedeny v tabulce II.
TABULKA II
Účinek hydrazidu kyseliny isonikotinové na urobilinogenové zkušební proužky
INH (mg/dl) Hodnoty barevné reakce
Proužky z příkladu 2 Proužky z příkladu 5
20 2,6 11,7
60 2,5 10,0
100 4,2 18,3
300 4,7 35,8
500 5,3 42,5
700 6,8 46,6
Z údajů vyplývá, že hladina hydrazidu kyseliny isonikotinové do 700 mg/dl nevyvolává závarně zkreslené výsledky zkušebního zařízení podie prrkladu 2 [podle vynálezu), zatímco stejné koncentrace vyvolávají u reagenčrnch proužků podle stavu techn.iky hodnoty ekvivalentní velice vysokým hladinám urobilinogenu (46,6 > 3,0 E. U./dl urobili.nogenu). Proužky podle stavu techniky jsou tedy citlivé na pntomnost hydrazidu kysdiny teornkoUnové do mnohem vetší míry než proužky zhotovené způsobem podle vynálezu.
Příklad 9
Omnek p-aminosalicylové kyselrny
Slepý pokus, stejný jak popsáno v příkladu 6, se prováděl ke zhodnocení účinků přítomné p-a^ino^^licylové kyselliny (PAS) ve vzorku zkoušené moči na zkušební zařízení ke stanovení urobilinogenu podle vynálezu (příklad 2.) a podle stavu techniky (příklad
5).
Připravily se barevné bloky jako v příkladu 7 pro· zhodnocení barevné reakce proužků použitých v tomto pokuse. Reagenční proužky z příkladu 2 a 5 se ponořily do vzorků zkoušené shromážděné normftní moči, ke které bylo přidáno různé množství kyseliny p-ammosalicylové. Nepřidal se žádný urobilinogen. Pozitivní hodnoty proužku indikují pozitvní odezvu na přítomnost kyseliny p-aminosalicylové, naznačujíce, že by se mohly získat pravděpodobně nesprávné vysoké hodnoty, kdyby byl přítomný ve vzorku moči urobilinogen. Výsledky jsou uvedeny v tabulce III.
TABULKA III Očinek kyselmy p-ammosalicylové na urobHinogenové zkušebm proudy
PAS (m^^/dl) Hodnoty barevné reakce
Proužky z příkladu 2 Proužky z příkladu 5
0 8,13 4,2
20 16,0 25,0
40 16,0 28,0
60 19,7 39,0
80 26,0 37,0
Z údajů vyplývá,, že i když existují nějaké rušivé vlivy kyseliny p-aminosalicylové v obou druzích reagenčních proužků, jsou mnohem citlivější proužky podle stavu techniky.
Příklad 10 Očinek rndolu
Provedly se stejné pokusy jako v příkladu až 9, aby se zjistil · nepříznivý účinek různého· množství indolu · ve zkoušeném vzorku na schopnost reagenčních proužků podle příkladů 2 a 5 stanovit hladinu urobilinogenu v moči.
Použily se vzorky shromážděné normální moči s různým množstvím indolu. Nepřidal se žádný urobili nogen. Tyto vzorky· moči se zkoušely pomocí zkušebního· zařízení připrav-eného v pMkla^ 2 a 5 a výsiedky jsou uvedeny v tabulce IV.
TABULKA IV Očinek indoto na uroMlinogenové zkušební proužky
Indol (mg/сП) Hodnoty barevné reakce
Proužky z příkladu 2 Proužky z příkladu 5
0 0 3,0
1,0 0 10,0
2,0 2,0 24,0
3,0 6,6 30,0
4,0 5,0 37,0
5,0 12,0 42,0
6,0 12,0 44,0
7,0 11,2 42,0
Z údajů vyplývá, že na zkušební zařízení podle vynálezu působí pouze zanedbatelně nepříznivé účinky indolu do koncentrace 4,0 mg/dl. Zařízení podle stavu techniky je stejným množstvím značně ovlivněno. Se zkušebními proužky podle stavu techniky se získají hodnoty urobilinogenu 4,0 E. U./dl, i když nebyl přidán žádný urobilinogen. Když je indol přítomen ve větším množství (5 až 7 mg/dl indolu], je jeho nepříznivý účinek v zařízení podle vynálezu do značné míry zmenšen.

Claims (4)

1. Směs schopná vyvolání detektovatelné odezvy za přítomnosti urobilinogenu ve zkoušeném vzorku, obsahující p-dialkylaminobenzaldehyd s 1 až 6 atomy uhlíku v alkýlovém zbytku jako indikátor a pufr schopný regulace pH v rozmezí 0,5 až 3, vyznačená tím, že obsahuje 0,2 až 2 g/100 ml p-dialkylaminobenzaldehydu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a 0,005 až 5 g/100 mililitrů sloučeniny obecného vzorce I ve kterém
X je 0 nebo S a
R a R‘, stejné nebo rozdílné, značí alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo
R a R‘ tvoří dohromady alkylen s 1 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu
O 0.
~ с Ч-- CH,-^ c kde n je celé číslo 1 až 6.
2. Směs podle bodu 1, vyznačená tím, že sloučeninou vzorce I je sloučenina, ve které R a R‘ tvoří dohromady skupinu —(CH2)n, kde n je celé číslo 1 až 6 а X má výše uvedený význam.
3. Směs podle bodu 1, vyznačená tím, že uvedenou sloučeninou vzorce I je 2- imidazolidon.
4. Směs podle bodu 1, vyznačená tím, že uvedenou sloučeninou vzorce I je malonylmočovina.
CS795160A 1978-07-24 1979-07-24 Mixture fitted for developing the response in presence of the urobilinogene CS221511B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US05/927,517 US4158546A (en) 1978-07-24 1978-07-24 Composition, test device and method for determining the presence of urobilinogen in a test sample

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS221511B2 true CS221511B2 (en) 1983-04-29

Family

ID=25454846

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS795160A CS221511B2 (en) 1978-07-24 1979-07-24 Mixture fitted for developing the response in presence of the urobilinogene

Country Status (12)

Country Link
US (1) US4158546A (cs)
JP (1) JPS5518994A (cs)
AU (1) AU510482B2 (cs)
CA (1) CA1127517A (cs)
CS (1) CS221511B2 (cs)
DE (1) DE2921023C2 (cs)
ES (1) ES481441A1 (cs)
FR (1) FR2433748A1 (cs)
GB (1) GB2026157B (cs)
IT (1) IT1116895B (cs)
NL (1) NL7904307A (cs)
SE (1) SE442149B (cs)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4405718A (en) * 1981-07-20 1983-09-20 Miles Laboratories, Inc. Method and composition for urobilinogen control standard
DK398181A (da) * 1981-09-09 1983-03-10 Slagteriernes Forskningsinst Fremgangsmaade til detektering af ornelugt hos individuelle dyrekroppe,fortrinsvis slagtekroppe eller dele deraf
JPS62168015U (cs) * 1986-04-14 1987-10-24
ES2143434B1 (es) * 1998-09-16 2000-12-16 Cerrato Paula Jimenez Pañal con indicadores sensibles al estado de la orina que lo impregna visualiazables desde el exterior.
DE102004054928B4 (de) * 2004-11-13 2009-01-02 Analyticon Biotechnologies Ag Teststreifen zum störungsfreien Nachweis von Analyten
US8012761B2 (en) * 2006-12-14 2011-09-06 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Detection of formaldehyde in urine samples
US7846383B2 (en) * 2006-12-15 2010-12-07 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Lateral flow assay device and absorbent article containing same

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2130559C3 (de) * 1971-06-19 1973-11-22 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Diagnostisches Mittel zum Nach weis von Urobihnogen
DE2229611C3 (de) * 1972-06-19 1980-07-17 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Diagnostischer Nachweis von Urobilinogen-Körpern
DE2521402C3 (de) * 1975-05-14 1979-07-26 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Urobilinogen
US4038485A (en) * 1976-03-18 1977-07-26 Miles Laboratories, Inc. Test composition, device, and method

Also Published As

Publication number Publication date
FR2433748A1 (fr) 1980-03-14
IT1116895B (it) 1986-02-10
US4158546A (en) 1979-06-19
GB2026157B (en) 1983-02-09
NL7904307A (nl) 1980-01-28
DE2921023A1 (de) 1980-02-07
JPS6125315B2 (cs) 1986-06-14
DE2921023C2 (de) 1982-06-24
AU510482B2 (en) 1980-06-26
JPS5518994A (en) 1980-02-09
SE7904890L (sv) 1980-01-25
SE442149B (sv) 1985-12-02
CA1127517A (en) 1982-07-13
ES481441A1 (es) 1980-01-16
FR2433748B1 (cs) 1984-02-24
IT7949602A0 (it) 1979-07-02
AU4717079A (en) 1980-01-31
GB2026157A (en) 1980-01-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4190419A (en) Device for detecting serum bilirubin
FI71202C (fi) Diagnostiskt medel foer paovisande av bestaondsdelar i vaetskor
US6121050A (en) Analyte detection systems
CA1337752C (en) Test device and method of assaying for proteins
CA2122237C (en) Preparation of diagnostic test strips containing tetrazolium salt indicators
EP0130335B1 (en) Testing device
JP3491863B2 (ja) 直読式試薬検査ストリツプのための化学タイマー
US4732736A (en) Analytical element for the detection hydrogen peroxide
CA2081868A1 (en) Composition and device for urinary protein assay and method of using the same
EP0828159B1 (en) Method for the detection of lysozyme
US3853466A (en) Diagnostic composition for the detection of urobilinogens
JPH0511908B2 (cs)
AU617300B2 (en) Reagent and procedure for determining cations
JPH09196923A (ja) タンパク質試薬としてのガラス／セルロース
CS221511B2 (en) Mixture fitted for developing the response in presence of the urobilinogene
US4594225A (en) Elements for analysis of calcium
US3853476A (en) Diagnostic agent for the detection of bilirubin
CA1041408A (en) Diagnostic agent for sacaharides
JPH09145711A (ja) 尿中タンパク質を検出するための試験片
JPH06100592B2 (ja) 多孔質担体マトリックスを有するイオン試験具及びその製造方法
CA1174950A (en) Method and composition for urobilinogen control standard
US4676950A (en) Indicator and test device for detecting occult blood
KR790001513B1 (ko) 진단용 조성물
US5705393A (en) Reagent composition for measurement of ionic strength of liquid samples
GB2030292A (en) Substituted indoles as urobilinogen controls