JPH09145711A - 尿中タンパク質を検出するための試験片 - Google Patents
尿中タンパク質を検出するための試験片Info
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- JPH09145711A JPH09145711A JP8279536A JP27953696A JPH09145711A JP H09145711 A JPH09145711 A JP H09145711A JP 8279536 A JP8279536 A JP 8279536A JP 27953696 A JP27953696 A JP 27953696A JP H09145711 A JPH09145711 A JP H09145711A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 尿中タンパク質を検出の際に尿中の緩衝物質
の存在に影響を受けない、タンパク質誤差指示薬を含有
する試験片の提供。 【解決手段】 緩衝剤と、タンパク質の存在下で変色
するタンパク質誤差指示薬との試薬系で含浸された吸収
性担体を含む、尿中タンパク質を検出するための試験片
において、カチオン感受性剤としての酒石酸を、尿中に
有意量のタンパク質が存在しなくてもタンパク質誤差指
示薬が変色するレベルにまで試薬のpHが高まることを防
ぐことができる量で、非カチオン感受性緩衝剤と組み合
わせて使用することを特徴とする試験片。
の存在に影響を受けない、タンパク質誤差指示薬を含有
する試験片の提供。 【解決手段】 緩衝剤と、タンパク質の存在下で変色
するタンパク質誤差指示薬との試薬系で含浸された吸収
性担体を含む、尿中タンパク質を検出するための試験片
において、カチオン感受性剤としての酒石酸を、尿中に
有意量のタンパク質が存在しなくてもタンパク質誤差指
示薬が変色するレベルにまで試薬のpHが高まることを防
ぐことができる量で、非カチオン感受性緩衝剤と組み合
わせて使用することを特徴とする試験片。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、タンパク質誤差指
示薬および緩衝剤を含む試験片の使用による、尿中タン
パク質の検出に関する。より詳細には、本発明は、通常
の緩衝剤系と組み合わせて使用されると、この方法で高
比重（ＳＧ）の尿をタンパク質含量に関して試験する場
合に見られる、結果をゆがめる効果を緩和するように働
く、本明細書では「カチオン感受性（sensing)緩衝剤」
と呼ぶ特定の緩衝剤の使用に関する。
示薬および緩衝剤を含む試験片の使用による、尿中タン
パク質の検出に関する。より詳細には、本発明は、通常
の緩衝剤系と組み合わせて使用されると、この方法で高
比重（ＳＧ）の尿をタンパク質含量に関して試験する場
合に見られる、結果をゆがめる効果を緩和するように働
く、本明細書では「カチオン感受性（sensing)緩衝剤」
と呼ぶ特定の緩衝剤の使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】尿試料中のタンパク質の存在の測定は、
腎臓および循環系ならびに中枢神経系に影響するいくつ
かの病状の診断において重要である。尿中タンパク質を
定性的かつ定量的に測定することがしばしば必要であ
る。これは、糖尿病および腎臓疾患の診断に特に当ては
まる。糖尿病に関与する支配的な尿タンパク質は、分析
においてもっとも一般的に探求されるタンパク質である
アルブミンである。
腎臓および循環系ならびに中枢神経系に影響するいくつ
かの病状の診断において重要である。尿中タンパク質を
定性的かつ定量的に測定することがしばしば必要であ
る。これは、糖尿病および腎臓疾患の診断に特に当ては
まる。糖尿病に関与する支配的な尿タンパク質は、分析
においてもっとも一般的に探求されるタンパク質である
アルブミンである。
【０００３】尿中タンパク質の存在を測定するための種
々の方法が公知であり、そのもっとも簡便なものは、タ
ンパク質誤差指示薬および緩衝剤を含浸させた吸収性試
験片を少量の尿で湿らせることを含む。タンパク質誤差
指示薬は、タンパク質の存在下で置換されて検出可能な
変色を示すイオン性基を含有するpH指示薬である。これ
は、pH変化の影響のもとで指示薬が受けるであろうもの
と同じ変色である。したがって、pHの増大が、タンパク
質が存在しないときにも、指示薬の変色をもたらし、そ
れにより、偽陽性の結果をもたらすおそれがあるため、
緩衝剤を試験片に含めてそのようなpHの増大を避けるこ
とが重要である。
々の方法が公知であり、そのもっとも簡便なものは、タ
ンパク質誤差指示薬および緩衝剤を含浸させた吸収性試
験片を少量の尿で湿らせることを含む。タンパク質誤差
指示薬は、タンパク質の存在下で置換されて検出可能な
変色を示すイオン性基を含有するpH指示薬である。これ
は、pH変化の影響のもとで指示薬が受けるであろうもの
と同じ変色である。したがって、pHの増大が、タンパク
質が存在しないときにも、指示薬の変色をもたらし、そ
れにより、偽陽性の結果をもたらすおそれがあるため、
緩衝剤を試験片に含めてそのようなpHの増大を避けるこ
とが重要である。
【０００４】偽陽性の結果を出す傾向は、高ＳＧ尿の試
験に関して特に問題である。理由は、高ＳＧ尿中の緩衝
物質の存在が試験片中の緩衝剤を圧倒し、それによって
pHの変化を許容する結果、試験される尿試料中にタンパ
ク質が存在しなくても、タンパク質の存在を示す指示薬
を変色させてしまうからである。尿中の第一の緩衝成分
はリン酸塩（リン酸イオン）であり、続いてクエン酸塩
（クエン酸イオン）、尿酸、酢酸塩（酢酸イオン）、グ
リシンおよびアンモニウムである。この種の偽陽性は、
当然、可能な限り避けなければならない。そのような偽
陽性の状況の例は、タンパク質誤差指示薬が、３．７を
超えるpHで黄色から青に変わるテトラブロモフェノール
ブルー（ＴＢＰＢ）である場合の尿アルブミンの試験で
ある。もう一種の一般的な指示薬ＤＩＤＮＴＢは、２．
１を超えるpHで無色から青に変色する。従来技術の緩衝
剤を使用すると、高ＳＧ尿、すなわち通常は５〜８のpH
を有し、高いpHを維持するよう作用する緩衝物質を含有
し、それにより、試薬系のpHを３．７を超えるレベルに
高めてしまう高ＳＧ尿の添加が変色をもたらし、その結
果、尿試料中のタンパク質の偽陽性の読取りを招く。
験に関して特に問題である。理由は、高ＳＧ尿中の緩衝
物質の存在が試験片中の緩衝剤を圧倒し、それによって
pHの変化を許容する結果、試験される尿試料中にタンパ
ク質が存在しなくても、タンパク質の存在を示す指示薬
を変色させてしまうからである。尿中の第一の緩衝成分
はリン酸塩（リン酸イオン）であり、続いてクエン酸塩
（クエン酸イオン）、尿酸、酢酸塩（酢酸イオン）、グ
リシンおよびアンモニウムである。この種の偽陽性は、
当然、可能な限り避けなければならない。そのような偽
陽性の状況の例は、タンパク質誤差指示薬が、３．７を
超えるpHで黄色から青に変わるテトラブロモフェノール
ブルー（ＴＢＰＢ）である場合の尿アルブミンの試験で
ある。もう一種の一般的な指示薬ＤＩＤＮＴＢは、２．
１を超えるpHで無色から青に変色する。従来技術の緩衝
剤を使用すると、高ＳＧ尿、すなわち通常は５〜８のpH
を有し、高いpHを維持するよう作用する緩衝物質を含有
し、それにより、試薬系のpHを３．７を超えるレベルに
高めてしまう高ＳＧ尿の添加が変色をもたらし、その結
果、尿試料中のタンパク質の偽陽性の読取りを招く。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】特開平３−３５５０４
４号公報には、高ＳＧ尿中タンパク質に関する偽陽性の
応答の傾向を減らすためのカリウム塩の使用が記載され
ている。この出願明細書の５頁には機構が不明であると
述べられているが、この系は、尿中の主成分が非反応性
のカチオン感受性緩衝物質であるとしても、カリウムイ
オンが尿中のカチオン感受性成分と結合するという原理
に基づいて作用する可能性がある。挙げられているカリ
ウム塩の一つはクエン酸カリウムである。この引用例は
また、緩衝剤としてのクエン酸ナトリウムおよびクエン
酸の使用を述べている。米国特許第５，２７９，７９０
号明細書の実施例１５には、タンパク質誤差指示薬とク
エン酸カリウム緩衝剤との混合物で紙片を含浸する工程
を含む尿タンパク質試験片の調製方法が記載されてい
る。クエン酸は、大部分のアニオン性緩衝剤と同様に、
金属カチオンの存在下で陽子をいくらか放出し、それに
より、そのようなカチオンの存在下でpHを下げる能力を
有している。しかし、カチオン感受性緩衝剤が尿タンパ
ク質検出法に利益をもたらすためには、緩衝剤は、尿中
に見いだされる、カリウムの場合で最大１４０mM、ナト
リウムの場合で最大２５０mMに達する正常な生理範囲の
カチオンにさらされたとき、試薬pHを下げるのに十分な
陽子を放出しなければならない。この現象に貢献する、
尿中に通常存在する他のカチオンは、カルシウム、マグ
ネシウムおよびアンモニウムである。クエン酸は、これ
らのカチオン濃度においてpHを有意に下げるのに十分な
陽子放出能力を有していない。最高の尿緩衝能力は３５
meq/pH単位である。タンパク質誤差指示薬試験は、この
レベルの緩衝能力に抵抗性があるべきである。高いpH
（８〜９）および高い緩衝能力をもつ尿は、クエン酸塩
で緩衝された試薬のpHを最大で０．５単位も移すことが
できる。ＮａとＫとを合わせたカチオン感受能力は０．
５単位よりも大きいはずである。高ＳＧ尿の緩衝能力に
よる試薬pHの０．５の増大は、緩衝剤のカチオン感受能
力による試薬pHの０．５の減少によって相殺される。正
味の結果、高ＳＧ尿による試薬pHの増大はほとんどない
かまったくない。ＮａカチオンとＫカチオンとを合わせ
た感受性は、酒石酸の場合で０．７１であり、クエン酸
塩の場合ではわずか０．２５であった。
４号公報には、高ＳＧ尿中タンパク質に関する偽陽性の
応答の傾向を減らすためのカリウム塩の使用が記載され
ている。この出願明細書の５頁には機構が不明であると
述べられているが、この系は、尿中の主成分が非反応性
のカチオン感受性緩衝物質であるとしても、カリウムイ
オンが尿中のカチオン感受性成分と結合するという原理
に基づいて作用する可能性がある。挙げられているカリ
ウム塩の一つはクエン酸カリウムである。この引用例は
また、緩衝剤としてのクエン酸ナトリウムおよびクエン
酸の使用を述べている。米国特許第５，２７９，７９０
号明細書の実施例１５には、タンパク質誤差指示薬とク
エン酸カリウム緩衝剤との混合物で紙片を含浸する工程
を含む尿タンパク質試験片の調製方法が記載されてい
る。クエン酸は、大部分のアニオン性緩衝剤と同様に、
金属カチオンの存在下で陽子をいくらか放出し、それに
より、そのようなカチオンの存在下でpHを下げる能力を
有している。しかし、カチオン感受性緩衝剤が尿タンパ
ク質検出法に利益をもたらすためには、緩衝剤は、尿中
に見いだされる、カリウムの場合で最大１４０mM、ナト
リウムの場合で最大２５０mMに達する正常な生理範囲の
カチオンにさらされたとき、試薬pHを下げるのに十分な
陽子を放出しなければならない。この現象に貢献する、
尿中に通常存在する他のカチオンは、カルシウム、マグ
ネシウムおよびアンモニウムである。クエン酸は、これ
らのカチオン濃度においてpHを有意に下げるのに十分な
陽子放出能力を有していない。最高の尿緩衝能力は３５
meq/pH単位である。タンパク質誤差指示薬試験は、この
レベルの緩衝能力に抵抗性があるべきである。高いpH
（８〜９）および高い緩衝能力をもつ尿は、クエン酸塩
で緩衝された試薬のpHを最大で０．５単位も移すことが
できる。ＮａとＫとを合わせたカチオン感受能力は０．
５単位よりも大きいはずである。高ＳＧ尿の緩衝能力に
よる試薬pHの０．５の増大は、緩衝剤のカチオン感受能
力による試薬pHの０．５の減少によって相殺される。正
味の結果、高ＳＧ尿による試薬pHの増大はほとんどない
かまったくない。ＮａカチオンとＫカチオンとを合わせ
た感受性は、酒石酸の場合で０．７１であり、クエン酸
塩の場合ではわずか０．２５であった。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、尿中タンパク
質を検出するための試験片に対する改善であって、試験
片が、緩衝剤と、タンパク質の存在下で変色するタンパ
ク質誤差指示薬との試薬系で含浸された吸収性担体を含
む。改善は緩衝剤系の使用を含み、この緩衝剤系は、通
常の緩衝剤と、尿中に存在する緩衝物質の存在下で、尿
中に有意量のタンパク質が存在しなくてもタンパク質誤
差指示薬が変色してしまうレベルにまで試薬のpHが高ま
ることを防ぐのに十分な陽子を放出することができるよ
うにする量のカチオン感受性緩衝剤としての酒石酸とを
組み合わせたものを含む。
質を検出するための試験片に対する改善であって、試験
片が、緩衝剤と、タンパク質の存在下で変色するタンパ
ク質誤差指示薬との試薬系で含浸された吸収性担体を含
む。改善は緩衝剤系の使用を含み、この緩衝剤系は、通
常の緩衝剤と、尿中に存在する緩衝物質の存在下で、尿
中に有意量のタンパク質が存在しなくてもタンパク質誤
差指示薬が変色してしまうレベルにまで試薬のpHが高ま
ることを防ぐのに十分な陽子を放出することができるよ
うにする量のカチオン感受性緩衝剤としての酒石酸とを
組み合わせたものを含む。
【０００７】本発明によると、酒石酸を含有する分析試
験片を調製することにより、尿中タンパク質を測定する
ための、高ＳＧ尿中に通常見いだされる緩衝物質に対し
て有意に増大した抵抗を有する試験片を得ることができ
ることが見いだされた。より具体的には、本発明は、高
ＳＧ尿中タンパク質を検出するための信頼しうる簡便で
正確な方法を臨床医に提供する。
験片を調製することにより、尿中タンパク質を測定する
ための、高ＳＧ尿中に通常見いだされる緩衝物質に対し
て有意に増大した抵抗を有する試験片を得ることができ
ることが見いだされた。より具体的には、本発明は、高
ＳＧ尿中タンパク質を検出するための信頼しうる簡便で
正確な方法を臨床医に提供する。
【０００８】本発明の一つの態様は、尿中タンパク質を
検出するための分析試験片であって、好適なタンパク質
誤差指示薬と、酒石酸を含む緩衝剤系とで含浸された吸
収性担体を含む試験片に関する。好適なタンパク質誤差
指示薬には、前記したものならびに引用例として本明細
書に含める米国特許第５，２７９，７９０号明細書に開
示されたメロシアニンおよびニトロもしくはニトロソ置
換された多ハロゲン化フェノールスルホンフタレインが
ある。他の好適なタンパク質誤差指示薬には、クマシー
ブリリアントブルー、ファストグリーンＦＣＦ、ライト
グリーンＳＦ、ピロガロールレッドおよびピロカテコー
ルバイオレットがある。試験片の吸収性担体は、ろ紙で
あることが好ましい。吸収性担体として有用である他の
材料には、フェルト、多孔質セラミック片および紡織も
しくは艶消しのガラス繊維、例えば米国特許第３，８４
６，２４７号明細書に記載されたものがある。同様に適
したものは、木、布、スポンジ材料および粘土質、例え
ば米国特許第３，５５２，９２８号明細書に記載された
ものがある。あるいはまた、吸収性担体は、非孔質物
質、例えばポリマー膜またはガラスであってもよい。試
験片を調製する際、試験片を、タンパク質誤差指示薬
と、緩衝剤としての酒石酸との溶液で含浸する。タンパ
ク質の存在下で検出可能な変色を示すのに十分な誤差指
示薬を含有する試験片が得られる限り、誤差指示薬の濃
度は決定的ではない。酒石酸の濃度は、尿と接触する
と、尿中に通常存在する緩衝物質の存在下で、尿中に有
意量のタンパク質が存在しなくてもタンパク質誤差指示
薬が変色してしまうレベルにまで系のpHが高まることを
防ぐのに十分な陽子を放出するよう、十分に高いもので
あるべきである。通常、浸漬溶液中５０〜７５０mM（好
ましくは５００〜６００mM）の酒石酸濃度が、吸収性材
料の浸漬および乾燥の後で必要濃度を含有する試験片を
提供する。酒石酸のカチオン感受能力が、それを通常の
緩衝剤よりも効果的にする。通常の緩衝剤は、溶液のpH
が緩衝剤のpKa に近いとき、陽子の放出によってその緩
衝能力を示し、緩衝剤の塩基性形態と酸性形態との平衡
が式（１）のように起こる。
検出するための分析試験片であって、好適なタンパク質
誤差指示薬と、酒石酸を含む緩衝剤系とで含浸された吸
収性担体を含む試験片に関する。好適なタンパク質誤差
指示薬には、前記したものならびに引用例として本明細
書に含める米国特許第５，２７９，７９０号明細書に開
示されたメロシアニンおよびニトロもしくはニトロソ置
換された多ハロゲン化フェノールスルホンフタレインが
ある。他の好適なタンパク質誤差指示薬には、クマシー
ブリリアントブルー、ファストグリーンＦＣＦ、ライト
グリーンＳＦ、ピロガロールレッドおよびピロカテコー
ルバイオレットがある。試験片の吸収性担体は、ろ紙で
あることが好ましい。吸収性担体として有用である他の
材料には、フェルト、多孔質セラミック片および紡織も
しくは艶消しのガラス繊維、例えば米国特許第３，８４
６，２４７号明細書に記載されたものがある。同様に適
したものは、木、布、スポンジ材料および粘土質、例え
ば米国特許第３，５５２，９２８号明細書に記載された
ものがある。あるいはまた、吸収性担体は、非孔質物
質、例えばポリマー膜またはガラスであってもよい。試
験片を調製する際、試験片を、タンパク質誤差指示薬
と、緩衝剤としての酒石酸との溶液で含浸する。タンパ
ク質の存在下で検出可能な変色を示すのに十分な誤差指
示薬を含有する試験片が得られる限り、誤差指示薬の濃
度は決定的ではない。酒石酸の濃度は、尿と接触する
と、尿中に通常存在する緩衝物質の存在下で、尿中に有
意量のタンパク質が存在しなくてもタンパク質誤差指示
薬が変色してしまうレベルにまで系のpHが高まることを
防ぐのに十分な陽子を放出するよう、十分に高いもので
あるべきである。通常、浸漬溶液中５０〜７５０mM（好
ましくは５００〜６００mM）の酒石酸濃度が、吸収性材
料の浸漬および乾燥の後で必要濃度を含有する試験片を
提供する。酒石酸のカチオン感受能力が、それを通常の
緩衝剤よりも効果的にする。通常の緩衝剤は、溶液のpH
が緩衝剤のpKa に近いとき、陽子の放出によってその緩
衝能力を示し、緩衝剤の塩基性形態と酸性形態との平衡
が式（１）のように起こる。
【０００９】（１） ＨＡ＝Ｈ+ ＋Ａ-
【００１０】他方、酒石酸は、カチオンを感受すること
によりその緩衝活性を発揮する。すなわち、溶液中のカ
チオンの存在において陽子が放出されたとき、緩衝剤の
酸性形態とカチオンとの平衡が式（２）のように起こ
る。
によりその緩衝活性を発揮する。すなわち、溶液中のカ
チオンの存在において陽子が放出されたとき、緩衝剤の
酸性形態とカチオンとの平衡が式（２）のように起こ
る。
【００１１】（２） ＨＡ＋Ｍ+ ＝Ｈ+ ＋ＡＭ
【００１２】これは、酒石酸を一つ以上の典型的な緩衝
剤と組み合わせて使用すると、酒石酸が存在しない場合
に使用するであろうよりも少ない緩衝剤を使用するだけ
で必要な緩衝能力が達成されるような、より強力な緩衝
作用を提供する。同様に、溶液中のタンパク質誤差指示
薬の濃度は通常、０．１〜５．０mMの範囲である。
剤と組み合わせて使用すると、酒石酸が存在しない場合
に使用するであろうよりも少ない緩衝剤を使用するだけ
で必要な緩衝能力が達成されるような、より強力な緩衝
作用を提供する。同様に、溶液中のタンパク質誤差指示
薬の濃度は通常、０．１〜５．０mMの範囲である。
【００１３】試験片はまた、通常は、変色速度およびタ
ンパク質誤差指示薬の用量応答の両方を増大させる、約
４００〜２５，０００の分子量を有するポリマーである
色増強性ポリマーで含浸することもできる。好ましい色
増強性ポリマーには、ポリプロピレングリコール類、ポ
リカーボネート類、ポリビニルエーテル類およびポリエ
チレンオキシド類がある。
ンパク質誤差指示薬の用量応答の両方を増大させる、約
４００〜２５，０００の分子量を有するポリマーである
色増強性ポリマーで含浸することもできる。好ましい色
増強性ポリマーには、ポリプロピレングリコール類、ポ
リカーボネート類、ポリビニルエーテル類およびポリエ
チレンオキシド類がある。
【００１４】タンパク質誤差指示薬／酒石酸は、吸収性
担体に適用し、試験片形態で使用することが好ましい
が、尿を溶液と直接接触させる湿式系を使用してもよ
い。このような湿式系は通常、タンパク質誤差指示薬を
０．１〜５．０mM（好ましくは０．６〜１．０mM）の濃
度で含有し、酒石酸を５０〜７５０mM（好ましくは５０
０〜６００mM）の濃度で含有する。
担体に適用し、試験片形態で使用することが好ましい
が、尿を溶液と直接接触させる湿式系を使用してもよ
い。このような湿式系は通常、タンパク質誤差指示薬を
０．１〜５．０mM（好ましくは０．６〜１．０mM）の濃
度で含有し、酒石酸を５０〜７５０mM（好ましくは５０
０〜６００mM）の濃度で含有する。
【００１５】
【実施例】以下の実施例によって本発明をさらに説明す
る。
る。
【００１６】実施例Ｉ（緩衝剤pKa と陽子放出との関
係） カチオンを加えた際の陽子の放出をシュウ酸によって実
証した。この実験では、カチオンはテトラメチルグアニ
ジンであった。このカチオンは、尿中で通常に見られる
ものではないが、シュウ酸塩（シュウ酸イオン）の応答
を高め、ひいては、陽子の放出とカチオン濃度との関係
をより容易に示すことができるため、これを選択した。
データを表１に示す。
係） カチオンを加えた際の陽子の放出をシュウ酸によって実
証した。この実験では、カチオンはテトラメチルグアニ
ジンであった。このカチオンは、尿中で通常に見られる
ものではないが、シュウ酸塩（シュウ酸イオン）の応答
を高め、ひいては、陽子の放出とカチオン濃度との関係
をより容易に示すことができるため、これを選択した。
データを表１に示す。
【００１７】
【表１】
【００１８】シュウ酸塩（シュウ酸イオン）のpKa は、
第一のカルボキシル基については１．２７であり、第二
のカルボキシル基については４．２９である。各カルボ
キシル基について等しい数のカチオンが存在するなら
ば、陽子の放出は止まる。アルカリおよびアルカリ土類
金属ならびに第四級アンモニウム塩もまた、各カルボキ
シル基について等しい数のカチオンが存在するまで、陽
子の放出をもたらした。
第一のカルボキシル基については１．２７であり、第二
のカルボキシル基については４．２９である。各カルボ
キシル基について等しい数のカチオンが存在するなら
ば、陽子の放出は止まる。アルカリおよびアルカリ土類
金属ならびに第四級アンモニウム塩もまた、各カルボキ
シル基について等しい数のカチオンが存在するまで、陽
子の放出をもたらした。
【００１９】実施例II（緩衝剤とタンパク質指示薬染料
との関係） タンパク質試薬紙は、タンパク質の存在におけるpH指示
薬の誤差を利用することによるタンパク質の検出に依存
する。この検定の原理は、タンパク質の存在において
は、指示薬染料が変色するpHがより低くなり、一定のpH
で色を出現させるということにある。染料は、タンパク
質が存在しないときの発色を防ぐのに十分に低く、か
つ、タンパク質の存在下で変色するのに十分に高い一定
のpHに緩衝される。例えば、ＴＢＰＢ染料に基づくタン
パク質試験ではpH３．７に緩衝され、ＤＩＤＮＴＢ染料
に基づく試験ではpH２．１に緩衝される。
との関係） タンパク質試薬紙は、タンパク質の存在におけるpH指示
薬の誤差を利用することによるタンパク質の検出に依存
する。この検定の原理は、タンパク質の存在において
は、指示薬染料が変色するpHがより低くなり、一定のpH
で色を出現させるということにある。染料は、タンパク
質が存在しないときの発色を防ぐのに十分に低く、か
つ、タンパク質の存在下で変色するのに十分に高い一定
のpHに緩衝される。例えば、ＴＢＰＢ染料に基づくタン
パク質試験ではpH３．７に緩衝され、ＤＩＤＮＴＢ染料
に基づく試験ではpH２．１に緩衝される。
【００２０】通常の緩衝剤がタンパク質検出方法に利益
を与えるためには、緩衝剤は、タンパク質試験のpHの範
囲にpKa を有しなければならない。ＤＩＤＮＴＢ染料に
基づくタンパク質試薬を用いて、１．８０〜３．０の範
囲のpKa をもつ一連の緩衝剤を試験した（表３を参
照）。高ＳＧ尿に浸漬されたのち、すべての緩衝剤は緩
衝能力を示し、試薬を０．７pH単位内に維持した。緩衝
能力は個々の緩衝剤に依存し、酒石酸を用いた場合に最
高の緩衝能力が実証され、マレイン酸を用いた場合に最
低の緩衝能力が見られた。
を与えるためには、緩衝剤は、タンパク質試験のpHの範
囲にpKa を有しなければならない。ＤＩＤＮＴＢ染料に
基づくタンパク質試薬を用いて、１．８０〜３．０の範
囲のpKa をもつ一連の緩衝剤を試験した（表３を参
照）。高ＳＧ尿に浸漬されたのち、すべての緩衝剤は緩
衝能力を示し、試薬を０．７pH単位内に維持した。緩衝
能力は個々の緩衝剤に依存し、酒石酸を用いた場合に最
高の緩衝能力が実証され、マレイン酸を用いた場合に最
低の緩衝能力が見られた。
【００２１】
【表２】
【００２２】酒石酸は最小のpH変化しか示さないため、
酒石酸が本実施例に選択した緩衝剤である。この変化
は、タンパク質が存在しないときの変色を防ぐのに十分
に低いため、重要である。カチオンを加えた際の陽子の
放出は、初期pH値が緩衝剤のpKa よりも低いかその付近
にある溶液においてしか見られなかった。カチオン応答
を得るためには、緩衝剤が部分的または完全にプロトン
化されていなければならない。必要な酒石酸塩（酒石酸
イオン）の濃度は、当然、そのプロトン化の程度に依存
する。完全に脱プロトン化された緩衝剤は応答を示さな
いであろう。したがって、試験pHと緩衝剤pKa との関係
は、緩衝剤が、試薬のpHに近いかそれよりも高いpKa を
有することを必要とする。表３の緩衝剤はすべては適切
な条件にある。すなわち、pKa 値が、カチオン感受のた
めの試薬のpHよりも高いかそれに近い１．８〜３．０で
あり、ＤＩＤＮＴＢ染料を使用するタンパク質試験の場
合にはpHが２．１である。
酒石酸が本実施例に選択した緩衝剤である。この変化
は、タンパク質が存在しないときの変色を防ぐのに十分
に低いため、重要である。カチオンを加えた際の陽子の
放出は、初期pH値が緩衝剤のpKa よりも低いかその付近
にある溶液においてしか見られなかった。カチオン応答
を得るためには、緩衝剤が部分的または完全にプロトン
化されていなければならない。必要な酒石酸塩（酒石酸
イオン）の濃度は、当然、そのプロトン化の程度に依存
する。完全に脱プロトン化された緩衝剤は応答を示さな
いであろう。したがって、試験pHと緩衝剤pKa との関係
は、緩衝剤が、試薬のpHに近いかそれよりも高いpKa を
有することを必要とする。表３の緩衝剤はすべては適切
な条件にある。すなわち、pKa 値が、カチオン感受のた
めの試薬のpHよりも高いかそれに近い１．８〜３．０で
あり、ＤＩＤＮＴＢ染料を使用するタンパク質試験の場
合にはpHが２．１である。
【００２３】緩衝剤は通常、それらのpKa が、緩衝され
るpHの近くにあるとき、すなわち、緩衝能力が最大であ
る場合に最高に作用する。しかし、表３から判断するこ
とができるように、試験pHの１pH単位内の同様なpKa を
有する緩衝剤の群は、大幅に異なる有効性を有してい
る。「有効性」とは、配合物を、タンパク質を含まない
高ＳＧ尿と接触させたのちの最小のpH変化と定義する。
酒石酸塩（酒石酸イオン）によるpH変化はわずか０．１
４であったが、他の緩衝剤は、０．２２〜０．６１のpH
変化を示した。使用した緩衝剤はすべて、緩衝能力にと
って許容可能なpKa 値を有するため、この差は、緩衝剤
のカチオン感受能力を調べることによって説明すること
ができる。試薬pHにおける変化は、緩衝能力とカチオン
感受作用とを合わせた効果を表す。
るpHの近くにあるとき、すなわち、緩衝能力が最大であ
る場合に最高に作用する。しかし、表３から判断するこ
とができるように、試験pHの１pH単位内の同様なpKa を
有する緩衝剤の群は、大幅に異なる有効性を有してい
る。「有効性」とは、配合物を、タンパク質を含まない
高ＳＧ尿と接触させたのちの最小のpH変化と定義する。
酒石酸塩（酒石酸イオン）によるpH変化はわずか０．１
４であったが、他の緩衝剤は、０．２２〜０．６１のpH
変化を示した。使用した緩衝剤はすべて、緩衝能力にと
って許容可能なpKa 値を有するため、この差は、緩衝剤
のカチオン感受能力を調べることによって説明すること
ができる。試薬pHにおける変化は、緩衝能力とカチオン
感受作用とを合わせた効果を表す。
【００２４】酒石酸を含有するタンパク質試薬の改善さ
れた緩衝能力は、ＫＣｌの溶液がタンパク質試薬のpHを
下げたという発見によって説明することができる（表３
を参照）。ベタイン緩衝剤を含有するタンパク質試薬は
応答せず、クエン酸塩緩衝剤はわずかな反応性を示し
た。したがって、ベタインおよびクエン酸塩（クエン酸
イオン）はカチオン感受性ではないということがわか
る。酒石酸塩（酒石酸イオン）にさらした場合、０．６
３単位のpH低下があったが、ベタインおよびクエン酸塩
（クエン酸イオン）は、カチオン感受性緩衝剤として作
用することができないことから、実質的にpH低下を示さ
なかった。表２に示すように、カチオン感受能力の違い
が、同様な挙動を示すものと予想される緩衝剤どうしの
緩衝能力における差を説明づける。
れた緩衝能力は、ＫＣｌの溶液がタンパク質試薬のpHを
下げたという発見によって説明することができる（表３
を参照）。ベタイン緩衝剤を含有するタンパク質試薬は
応答せず、クエン酸塩緩衝剤はわずかな反応性を示し
た。したがって、ベタインおよびクエン酸塩（クエン酸
イオン）はカチオン感受性ではないということがわか
る。酒石酸塩（酒石酸イオン）にさらした場合、０．６
３単位のpH低下があったが、ベタインおよびクエン酸塩
（クエン酸イオン）は、カチオン感受性緩衝剤として作
用することができないことから、実質的にpH低下を示さ
なかった。表２に示すように、カチオン感受能力の違い
が、同様な挙動を示すものと予想される緩衝剤どうしの
緩衝能力における差を説明づける。
【００２５】
【表３】
【００２６】大部分のアニオン性の緩衝剤は、カチオン
に対して陽子をいくらか放出する。しかし、カチオン感
受性緩衝剤が尿タンパク質検出方法に利益を与えるため
には、緩衝剤が、正常な生理範囲においてカチオンにさ
らされたとき、試薬pHを下げるのに十分な陽子を放出し
なければならない。酒石酸は、高ＳＧ尿に典型的な濃度
のＫＣｌ（１４０mM）にさらされたとき、０．６pH単位
の低下を示した。１４０mMカリウムを含有する高ＳＧ臨
床尿に浸漬したのちの１．８０の試薬pHの低下および４
１mMカリウムを含有する臨床尿に浸漬したのちの２．２
８の試薬pHにより、酒石酸緩衝剤のカチオン感受能力が
さらに実証された。
に対して陽子をいくらか放出する。しかし、カチオン感
受性緩衝剤が尿タンパク質検出方法に利益を与えるため
には、緩衝剤が、正常な生理範囲においてカチオンにさ
らされたとき、試薬pHを下げるのに十分な陽子を放出し
なければならない。酒石酸は、高ＳＧ尿に典型的な濃度
のＫＣｌ（１４０mM）にさらされたとき、０．６pH単位
の低下を示した。１４０mMカリウムを含有する高ＳＧ臨
床尿に浸漬したのちの１．８０の試薬pHの低下および４
１mMカリウムを含有する臨床尿に浸漬したのちの２．２
８の試薬pHにより、酒石酸緩衝剤のカチオン感受能力が
さらに実証された。
【００２７】本発明に有用であるカチオン感受性剤は、
試薬pHに近いかそれを超えるpKa をもち、正常な生理範
囲で尿中のカチオンに応答し、尿の緩衝能力を相殺する
ことができるpHの低下をもたらすものに限定される。酒
石酸だけがこれらの性質を示すことがわかった。
試薬pHに近いかそれを超えるpKa をもち、正常な生理範
囲で尿中のカチオンに応答し、尿の緩衝能力を相殺する
ことができるpHの低下をもたらすものに限定される。酒
石酸だけがこれらの性質を示すことがわかった。
【００２８】実施例III 酒石酸（カチオン感受性剤として）および典型的な緩衝
剤（クエン酸）を別々および組み合わせて試験する実験
を実施した。試験は、実施例１に記載したタンパク質試
薬を使用して実施し、その際、試薬試験片を水および高
ＳＧ尿に浸漬したのちの試薬pHを面ＰＭ電極およびpH計
を使用して測定した。水と高ＳＧ尿とのpHの差を試薬pH
の変化として以下に示す。
剤（クエン酸）を別々および組み合わせて試験する実験
を実施した。試験は、実施例１に記載したタンパク質試
薬を使用して実施し、その際、試薬試験片を水および高
ＳＧ尿に浸漬したのちの試薬pHを面ＰＭ電極およびpH計
を使用して測定した。水と高ＳＧ尿とのpHの差を試薬pH
の変化として以下に示す。
【００２９】この実験の結果を表４にまとめる。
【００３０】
【表４】
【００３１】表４から、カチオン感受性剤としての１５
０mM酒石酸を、非カチオン感受性緩衝剤、例えば４７５
mMクエン酸と組み合わせたものが、それらいずれかの単
独よりも有効であると判断することができる。１５０mM
酒石酸の４７５mMクエン酸への添加が、６２５mMクエン
酸よりも優れたＳＧ抵抗をもたらすということは予想外
である。１５０mMの酒石酸濃度は、この実験に使用した
もののような高ＳＧ尿に対して効果的に緩衝するには低
過ぎる。したがって、pHを制御するにあたり、酒石酸の
緩衝能力に依存するのではなく、カチオン感受活性が、
典型的な緩衝剤と合わされたときの酒石酸のpH制御にお
ける優れた性能への要点であると理解することができ
る。
０mM酒石酸を、非カチオン感受性緩衝剤、例えば４７５
mMクエン酸と組み合わせたものが、それらいずれかの単
独よりも有効であると判断することができる。１５０mM
酒石酸の４７５mMクエン酸への添加が、６２５mMクエン
酸よりも優れたＳＧ抵抗をもたらすということは予想外
である。１５０mMの酒石酸濃度は、この実験に使用した
もののような高ＳＧ尿に対して効果的に緩衝するには低
過ぎる。したがって、pHを制御するにあたり、酒石酸の
緩衝能力に依存するのではなく、カチオン感受活性が、
典型的な緩衝剤と合わされたときの酒石酸のpH制御にお
ける優れた性能への要点であると理解することができ
る。
【００３２】より高濃度の緩衝剤はタンパク質応答を減
らす可能性があるため、酒石酸と典型的な非カチオン感
受性緩衝剤とを、いずれかを単独で使用する場合よりも
少なめの量で組み合わせた場合の能力は重要である。タ
ンパク質応答の減少は、病的なタンパク質レベルが検出
されないことを意味する。この改善は、非カチオン感受
性緩衝剤をクエン酸に限定しない。理由は、他の緩衝
剤、例えばベタイン、リン酸、マレイン酸、ジグリコー
ル酸およびシトラコン酸が同様な結果を提供すると予想
されるからである。
らす可能性があるため、酒石酸と典型的な非カチオン感
受性緩衝剤とを、いずれかを単独で使用する場合よりも
少なめの量で組み合わせた場合の能力は重要である。タ
ンパク質応答の減少は、病的なタンパク質レベルが検出
されないことを意味する。この改善は、非カチオン感受
性緩衝剤をクエン酸に限定しない。理由は、他の緩衝
剤、例えばベタイン、リン酸、マレイン酸、ジグリコー
ル酸およびシトラコン酸が同様な結果を提供すると予想
されるからである。
【００３３】酒石酸を非カチオン感受性緩衝剤と組み合
わせて使用するとき、酒石酸と緩衝剤とのモル比は、典
型的には２５mM：７００mM〜２００mM：１００mMであ
り、好ましくは約１５０mM：４７５mMである。酒石酸の
カチオン感受活性は、非カチオン感受性緩衝剤が存在し
なくとも働くが、典型的な緩衝剤は、溶液中に存在する
カチオンから独立して陽子を放出するため、このような
緩衝剤を酒石酸と組み合わせて使用することが好まし
い。これが、塩含量の低い尿における緩衝を可能にし、
試薬のpHを、カチオン感受性酒石酸が効果を発しうる範
囲に近づける。
わせて使用するとき、酒石酸と緩衝剤とのモル比は、典
型的には２５mM：７００mM〜２００mM：１００mMであ
り、好ましくは約１５０mM：４７５mMである。酒石酸の
カチオン感受活性は、非カチオン感受性緩衝剤が存在し
なくとも働くが、典型的な緩衝剤は、溶液中に存在する
カチオンから独立して陽子を放出するため、このような
緩衝剤を酒石酸と組み合わせて使用することが好まし
い。これが、塩含量の低い尿における緩衝を可能にし、
試薬のpHを、カチオン感受性酒石酸が効果を発しうる範
囲に近づける。
【００３４】実施例IV（タンパク質試薬例の調製手順） 本発明の改良されたタンパク質試薬は、ろ紙を連続２回
飽和させるによって調製することができる。第一の飽和
は、酒石酸および緩衝剤、例えばクエン酸ならびにバッ
クグラウンド染料、例えばキナルジンレッドを含有する
混合物の水溶液を用いて行う。水酸化ナトリウムおよび
／または塩酸を用いてこの液をpH２．１に調節する。第
二の飽和は、タンパク質指示薬染料、例えばＤＩＤＮＴ
Ｂおよびポリ（ビニルメチルエーテル）であるLutanol
M40 のようなポリマーを含有する混合物のトルエン溶液
を用いて行う。機能、好適濃度および使用可能な濃度の
範囲を表５にまとめる。混合溶液を使用して、試験片材
料、例えばろ紙、例えばAhlstrom 204または237 を飽和
させ、そこで、ろ紙を、第一の飽和ののち９５℃で５分
間乾燥させ、第二の飽和ののち８５℃で５分間乾燥させ
る。得られた乾燥試薬を試薬試験片に加工し、それらを
目視的に試験した。
飽和させるによって調製することができる。第一の飽和
は、酒石酸および緩衝剤、例えばクエン酸ならびにバッ
クグラウンド染料、例えばキナルジンレッドを含有する
混合物の水溶液を用いて行う。水酸化ナトリウムおよび
／または塩酸を用いてこの液をpH２．１に調節する。第
二の飽和は、タンパク質指示薬染料、例えばＤＩＤＮＴ
Ｂおよびポリ（ビニルメチルエーテル）であるLutanol
M40 のようなポリマーを含有する混合物のトルエン溶液
を用いて行う。機能、好適濃度および使用可能な濃度の
範囲を表５にまとめる。混合溶液を使用して、試験片材
料、例えばろ紙、例えばAhlstrom 204または237 を飽和
させ、そこで、ろ紙を、第一の飽和ののち９５℃で５分
間乾燥させ、第二の飽和ののち８５℃で５分間乾燥させ
る。得られた乾燥試薬を試薬試験片に加工し、それらを
目視的に試験した。
【００３５】
【表５】
【００３６】実施例Ｖ（緩衝剤とバックグラウンド染料
との関係） 試薬配合物は、しばしば、バックグラウンド染料を使用
して、試験レベル間のより明確な目視的区別を達成す
る。例えば、淡い青は赤のバックグラウンドのもとでは
白に対して容易に検出されないため、無色から青に遷移
する染料指示薬としてのＤＩＤＮＴＢに基づくタンパク
質試験は、正常なレベルのタンパク質の検出を覆い隠し
て試験の感度を下げるために、色の遷移をピンクから青
に変えるための赤のバックグラウンド染料を必要とす
る。バックグラウンド染料は、尿成分に対して不活性で
あるべきであり、一定の応答を提供すべきである。不活
性染料とバックグラウンド染料との違いは、表６に示す
ように、不活性のメチルレッドを反応性のキナルジンレ
ッドに比較することによって実証することができる。
との関係） 試薬配合物は、しばしば、バックグラウンド染料を使用
して、試験レベル間のより明確な目視的区別を達成す
る。例えば、淡い青は赤のバックグラウンドのもとでは
白に対して容易に検出されないため、無色から青に遷移
する染料指示薬としてのＤＩＤＮＴＢに基づくタンパク
質試験は、正常なレベルのタンパク質の検出を覆い隠し
て試験の感度を下げるために、色の遷移をピンクから青
に変えるための赤のバックグラウンド染料を必要とす
る。バックグラウンド染料は、尿成分に対して不活性で
あるべきであり、一定の応答を提供すべきである。不活
性染料とバックグラウンド染料との違いは、表６に示す
ように、不活性のメチルレッドを反応性のキナルジンレ
ッドに比較することによって実証することができる。
【００３７】キナルジンレッドはpHおよび光に対して感
受性である。その色の遷移は、pH１．４での無色から、
pHが３．４に増大するにつれ、異なる赤の色相を形成
し、pH３．４で吸光度が最大になる。２．１のキナルジ
ンレッドpKa は、ＤＩＤＮＴＢ染料に基づくタンパク質
試験のpHである。
受性である。その色の遷移は、pH１．４での無色から、
pHが３．４に増大するにつれ、異なる赤の色相を形成
し、pH３．４で吸光度が最大になる。２．１のキナルジ
ンレッドpKa は、ＤＩＤＮＴＢ染料に基づくタンパク質
試験のpHである。
【００３８】
【表６】
【００３９】メチルレッドはpHまたは光のいずれに対し
ても感受性ではない。キナルジンレッド染料に影響する
照明条件にさらしたのちでも、反応性における変化は見
られなかった。メチルレッドの色の遷移は、pH４．２で
の赤からpH６．４での黄色である。メチルレッド（pKa
５．２）が、pHによるバックグラウンド色の変化を防い
だため、これが好ましい染料である。他の不活性染料、
例えばＦＤ＆Ｃレッド＃３およびアシッドレッド＃４０
を使用することもできる。
ても感受性ではない。キナルジンレッド染料に影響する
照明条件にさらしたのちでも、反応性における変化は見
られなかった。メチルレッドの色の遷移は、pH４．２で
の赤からpH６．４での黄色である。メチルレッド（pKa
５．２）が、pHによるバックグラウンド色の変化を防い
だため、これが好ましい染料である。他の不活性染料、
例えばＦＤ＆Ｃレッド＃３およびアシッドレッド＃４０
を使用することもできる。
【００４０】実施例VI 表２に掲載した緩衝剤のカチオン感受能力を測定し、以
下の表７にまとめる。
下の表７にまとめる。
【００４１】
【表７】
【００４２】この実験は、１４１mM ＫＣｌまたは２５
０mM ＮａＣｌを加えたのちの５００mM緩衝溶液のpHの
変化を測定した。これらの濃度を、最高の尿値、すなわ
ち、ヒトの尿に予想される最高の生理的濃度とみなし
た。表７のデータは、酒石酸が、試験した緩衝剤のカチ
オンに対してもっとも応答性であることを実証する。表
３のデータは、製造した乾燥試薬を使用し、同様に試験
することによって作成した。試験した他の緩衝剤は、カ
チオンの感受には有用でなかった。シュウ酸塩はカチオ
ン応答を示す（表１）が、この応答は、本発明に使用す
るには不十分である。
０mM ＮａＣｌを加えたのちの５００mM緩衝溶液のpHの
変化を測定した。これらの濃度を、最高の尿値、すなわ
ち、ヒトの尿に予想される最高の生理的濃度とみなし
た。表７のデータは、酒石酸が、試験した緩衝剤のカチ
オンに対してもっとも応答性であることを実証する。表
３のデータは、製造した乾燥試薬を使用し、同様に試験
することによって作成した。試験した他の緩衝剤は、カ
チオンの感受には有用でなかった。シュウ酸塩はカチオ
ン応答を示す（表１）が、この応答は、本発明に使用す
るには不十分である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ロバート・ジェイ・シェーパー アメリカ合衆国、インデイアナ州、46614、 サウス・ベンド、セルカーク・ドライブ 4837
Claims (14)
- 【請求項１】 緩衝剤と、タンパク質の存在下で変色す
るタンパク質誤差指示薬との試薬系で含浸された吸収性
担体を含む、尿中タンパク質を検出するための試験片に
おいて、 カチオン感受性剤としての酒石酸を、尿中に有意量のタ
ンパク質が存在しなくてもタンパク質誤差指示薬が変色
するレベルにまで試薬のpHが高まることを防ぐことがで
きる量で、非カチオン感受性緩衝剤と組み合わせて使用
することを特徴とする試験片。 - 【請求項２】 試薬がカリウムイオンを１４０mMの濃度
で含有する尿と接触したとき試薬のpHを少なくとも約
０．５pH単位下げるのに十分な濃度で酒石酸および緩衝
剤が存在する、請求項１記載の試験片。 - 【請求項３】 タンパク質誤差指示薬がテトラブロモフ
ェノールブルーまたは５′，５″−ジニトロ−３，３″
−ジヨード−３，４，５，６−テトラブロモフェノール
スルホンフタレインである、請求項１記載の試験片。 - 【請求項４】 吸収性担体がろ紙である、請求項１記載
の試験片。 - 【請求項５】 タンパク質誤差指示薬の量が、０．１〜
５．０mMの指示薬濃度を有する指示薬の溶液に試験片を
浸漬し、溶剤を乾燥させたのち試験片中に残る残渣の量
である、請求項１記載の試験片。 - 【請求項６】 酒石酸の量が、５０〜７５０mMの酒石酸
濃度を有する溶液に試験片を浸漬したのち試験片中に残
る残渣の量であり、非カチオン感受性緩衝剤の量が、酒
石酸と非カチオン感受性緩衝剤との比率が２５mM：７０
０mM〜２００mM：１００mMである溶液に試験片を浸漬し
たのち試験片中に残る残渣の量である、請求項１記載の
試験片。 - 【請求項７】 酒石酸濃度が５００〜６００mMである、
請求項６記載の試験片。 - 【請求項８】 比率が約１５０mM：４７５mMである、請
求項６記載の試験片。 - 【請求項９】 酒石酸がジプロトン化されている、請求
項１記載の試験片。 - 【請求項１０】 酒石酸がモノプロトン化されている、
請求項１記載の試験片。 - 【請求項１１】 試薬系にバックグラウンド染料が含ま
れている、請求項１記載の試験片。 - 【請求項１２】 バックグラウンド染料が、pHまたは光
に対して感受性のない染料から選択される、請求項１０
記載の試験片。 - 【請求項１３】 バックグラウンド染料がメチルレッ
ド、ＦＤ＆Ｃレッド＃３またはアシッドレッド＃４０で
ある、請求項１１記載の試験片。 - 【請求項１４】 尿を、緩衝剤系およびタンパク質誤差
指示薬を含む試薬系と接触させる工程を含み、緩衝剤系
が、酒石酸および非カチオン感受性緩衝剤を含むもので
ある、尿中タンパク質の試験方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/548,437 US5593895A (en) | 1995-04-27 | 1995-10-26 | Method for the detection of protein in urine |
| US08/548437 | 1995-10-26 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09145711A true JPH09145711A (ja) | 1997-06-06 |
| JP3621209B2 JP3621209B2 (ja) | 2005-02-16 |
Family
ID=24188841
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27953696A Expired - Lifetime JP3621209B2 (ja) | 1995-10-26 | 1996-10-22 | 尿中タンパク質を検出するための試験片 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5593895A (ja) |
| EP (1) | EP0770873B1 (ja) |
| JP (1) | JP3621209B2 (ja) |
| KR (1) | KR100460361B1 (ja) |
| CA (1) | CA2188612C (ja) |
| DE (1) | DE69625024T2 (ja) |
| TW (1) | TW382063B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013101102A (ja) * | 2011-10-17 | 2013-05-23 | Arkray Inc | 蛋白質濃度評価方法、分析用具、及び分析装置 |
| JP2016218079A (ja) * | 2011-08-19 | 2016-12-22 | アクアサイエンス リミテッド | タンパク質検出 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5753455A (en) * | 1996-09-03 | 1998-05-19 | Bayer Corporation | Method for the detection of lysozyme using a protein error indicator dye in conjunction with an alkane sulfonic acid |
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