JPH0580055A - 総蛋白を分析するための試験用パツドの製造方法、試験具、それを用いる測定方法及び試験具の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 尿及びその他の液体試料中の総蛋白含量を正
確に測定し、かつ５mg/ml 程度の低濃度の定量も可能な
試験具を提供する。 【構成】 重合ウレタン系化合物を含む担体マトリック
スに、蛋白と相互作用して識別可能な応答をする指示薬
色素を組みこみ、試験用パッドとする蛋白分析用の試験
具及びそれを用いる測定法。 【効果】 尿中アルブミン濃度を容易に、又簡便に測定
することができ、高蛋白尿症ばかりでなく、低蛋白尿症
の検出をも行うことができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、試料中の蛋白の存在及
び濃度を分析する改良試験具及び方法に関する。より詳
細には、本発明は、新規で改良された担体マトリックス
に組み込まれた指示薬組成物よりなる試験用パッドを有
する試験具を利用することによる、液体、例えば尿の蛋
白を分析する新規で改良された方法及び器具に関する。
指示薬組成物を蛋白を含む液体と接触させると、試験用
パッドは検出可能な又は測定可能な応答を示す。新規で
改良された担体マトリックスは、指示薬組成物と蛋白を
含む試料との接触による、色の分解能を改善し、及び高
い蛋白感度を備える重合ウレタンベース化合物のフィル
ム、膜又は層より構成されている。従って、液体試料の
総蛋白量のより正確な検出及び定量が、視覚的に、又は
器機によるいずれかで行なわれる。その他、本発明は、
新規で改良された担体マトリックスへ組み込まれた指示
薬組成物に関しており、乾式相試験片分析法によって、
試料中の蛋白濃度、特に低い蛋白濃度、例えば約５mg／
dl（デシリットル当たりのミリグラム）程度の低い蛋白
濃度を定量する改良された方法における試験具の試験用
パッドを提供する。

【０００２】アルブミンは、最も豊富な血漿蛋白質であ
り、一般に哺乳動物の血漿中の全蛋白質の半分を僅かに
上回っている。人体において、アルブミンは、血液と組
織間の水分平衡を調節し、水に難溶な各種化合物、例え
ばビリルビン、脂肪酸、コルチゾール、チロキシン、並
びにスルホンアミド及びバルビツールのような薬剤を輸
送する分子として機能する重要な役割を有している。ア
ルブミンの不足は、水に難溶な物質の体内輸送を妨げる
ことになり、個体における欠乏は漿液の異常な蓄積又は
浮腫を示している。従って、個体に血清アルブミンの不
足があるか否かを測定することは、臨床的に重要であ
る。

【０００３】同様に、個体が過剰な蛋白質を排出してい
るか否かを測定することは、臨床的に重要である。正常
に機能している腎臓は、欠くことのできない二段階の過
程で尿を形成する。血液は、腎糸球体又は腎臓の糸球体
領域を通過して流れる。糸球体の毛細血管壁は、水及び
血漿の低分子量成分に対する透過性が高い。アルブミン
及びその他の高分子量の蛋白質はこれらの毛細血管壁を
通過することができず、これらの蛋白質は完全に尿から
濾過により捕集され、体内で利用される。低分子量の成
分を含む液体は、腎臓の細管又は細管部を通過するが、
腎臓では幾つかの尿成分、例えば低分子量の蛋白の再吸
収、その他の尿成分の分泌、及び尿の濃縮が起こる。そ
の結果、糸球体及び細尿管の連合した過程により、尿中
の蛋白質濃度は最小となり認められなくなる。従って、
尿中のアルブミン又はその他の蛋白の異常に高い値を検
出し、生理的な機能障害と関連付けることが必要であ
る。

【０００４】個人の尿中のアルブミン濃度が比較的高く
なるのは、通例、病的状態を示している。例えば、尿中
の正常な平均アルブミン濃度は約２mg／dlないし約８mg
／dlであり、全尿蛋白の約三分の一は血清アルブミンで
ある。しかしながら、病的状態の大半において、尿蛋白
レベルは明らかに増加し、アルブミンが排出された蛋白
の約６０％ないし約９０％の割合を占めるほどとなる。
尿中の蛋白量が異常に増加するのは、蛋白尿症として知
られ、腎疾患の最も有意な指標の一つであり、その他各
種の腎以外の関連疾患を示唆することもある。

【０００５】それ故、個人がアルブミン欠乏症であるか
又は蛋白を過剰に排出しているかを知るため、及び治療
の有効性を確かめる医療処置の経過を監視するため、簡
単で、正確かつ安価な蛋白の検出分析法が開発されてき
ている。さらに、尿及び血清中の蛋白の検出又は測定用
に開発された種々の異なる分析法の中で、色素結合法は
容易に自動化され、再現性があり正確な結果を提供する
ので、色素結合に基づく方法は特に有用であることが知
られている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】一般に、色素結合法
は、アルブミンのような蛋白と相互作用が可能で、ｐＨ
の変化のない状態で、蛋白との相互作用で変色し得るｐ
Ｈ指示薬色素を利用するものである。ｐＨ指示薬色素が
蛋白と相互作用又は結合する場合、指示薬色素の見かけ
のｐＫａ（酸解離定数）は変化し、色素は変色して、い
わゆる「蛋白誤差」現象を起こす。色素結合を利用する
方法において、適当な緩衝剤がｐＨ指示薬色素を一定の
ｐＨに維持し、ｐＨの実際の変動に基づくｐＨ指示薬色
素の変色を防いでいる。蛋白との相互作用による「蛋白
誤差」に基づいて、ｐＨ指示薬色素は、ｐＨの変化に由
来する変色と同一な色調の変化を受ける。蛋白と相互作
用又は結合して「蛋白誤差」の変色を起こすことが可能
で、蛋白の乾式相分析法に使用されるｐＨ指示薬色素の
例としては、テトラブロモフェノールブルー及びテトラ
クロロフェノール−３，４，５，６−テトラブロモスル
ホフタレインが挙げられる。

【０００７】蛋白の分析にｐＨ指示薬色素は広く用いら
れているが、指示薬色素を利用する蛋白分析法には幾つ
かの難点が存在する。例えば、ｐＨ指示薬色素に基づく
方法は、約１５mg／dl以下の蛋白濃度では検出不可能か
又は差異を定量的に識別できない。その上、試料の総蛋
白含量を定量するために種々の半定量的試験法及び種々
の複雑な定量試験法が行なわれているけれども、これら
の分析法の多くは、簡単な比色定量試薬の試験片を使用
する注目すべき例外があるにしても、定量的な蛋白測定
を実施するためには蛋白を沈殿させる必要がある。

【０００８】比色定量試薬の試験片は、ある種の酸−塩
基指示薬と相互作用し、ｐＨの変化とは無関係に指示薬
の色調を変化させる、蛋白の従来から検討されている活
性を利用するものである。例えば、指示薬のテトラブロ
モフェノールブルーが緩衝されて約３のｐＨに一定に保
持されている場合、この指示薬は無蛋白溶液には黄色を
呈する。しかし、蛋白を含む溶液では、溶液中の蛋白濃
度に応じて、存在する蛋白が緩衝処理した色素を、緑色
又は青色に呈色させる。

【０００９】蛋白の分析に使用される比色定量用の試験
片は、緩衝処理したｐＨ指示薬色素、例えばテトラブロ
モフェノールブルーを浸漬した担体マトリックスの小長
方形の面よりなるただ一つの分析域を有している。別の
比色定量用の試験片は、上記の蛋白評価分析のための試
験域又は試験用パッドを含み、さらに同じ試験片に数種
の別の試験用パッドを含む多種類の決定因子を有するし
ており、他の尿成分を同時分析する。どちらの型の比色
定量用試験片でも、尿中の蛋白分析は、よく撹拌した、
遠心分離前の尿試料に比色定量用試験片を浸け、試験片
の試験用パッドが発色した色を比色定量用試験片の瓶に
添付されている基準の色表と比較することによって簡単
に行なわれる。

【００１０】指示薬色素として、ｐＨ３に緩衝処理され
たテトラブロモフェノールブルーを利用した試験片によ
り、蛋白の半定量評価分析を行なうことが可能で、評価
は陰性、微量、又は１「プラス」ないし４「プラス」と
して報告される。陰性の判定又は黄色は、指示薬色素の
変色がないことから、尿が蛋白を含まないこと示す。微
量の判定は、尿中の蛋白が約５mg／dlないし２０mg／dl
であることを示す。緑色から青色の次第に濃い色調への
色の変化を表わす１「プラス」ないし４「プラス」の判
定は、それぞれ３０、１００、３００及び２０００mg／
dl以上の尿蛋白濃度にほぼ相当し、次第に重度の蛋白尿
症の信頼性ある基準として利用されている。

【００１１】上記の方法に準拠して、個人は、尿試料の
蛋白含量が０mg／dlから約３０mg／dlの範囲であること
を、視覚的に容易に分析することができる。しかしなが
ら、現在市販されている有効な試験片で行なわれる色調
の差異の判定は、０mg／dlないし約１５mg／dlの蛋白含
量の正確な定量には不十分である。通常、健常人の尿蛋
白レベルは約１０mg／dlないし約２０mg／dlの範囲なの
で、蛋白を検出して低蛋白濃度の差異を判定することが
できないのは臨床上問題である。蛋白含量を約３０mg／
dl以下のある値と概算することよりも、個人の尿蛋白含
量をより正確に知ることが臨床上重要なのである。

【００１２】勿論、尿試料の蛋白含量は、半定量的蛋白
沈殿法又は定量的２４時間蛋白沈殿法によって、より正
確に定量することができる。しかし、これらの分析法は
時間がかかり、比較的費用を要する。さらに、沈殿分析
法は試験室で熟練の技術者によって行なわれなければな
らず、そのため患者が家庭で尿蛋白含量の定量を迅速に
行ない、そして特殊な医療処置の成功又は不成功の監視
をすることには利用できない。

【００１３】従って、０mg／dlないし約５mg／dl、約５
mg／dlないし約１０mg／dl、約１０mg／dlないし約１５
mg／dl、さらに約３０mg／dlないし約３００mg／dlの範
囲での蛋白レベルの差異を視覚的に判定して、尿の蛋白
含量を分析する簡単で正確な信頼性のある方法があるこ
とは極めて望ましい。使用するのに便利な形式、例えば
浸して読む試験片のような尿の蛋白濃度の正確な定量法
が提供されることによって、尿の分析は試験室の職員に
よって行なわれ、即時に分析結果が知らされ、分析結果
を一日も待つことなく診断が下され、直ちに医療が始め
られるようになる。その上、この試験片の方法は、患者
が家庭で行ない、低レベルの尿蛋白及び／又は患者が受
けつつある医療の成功を、より正確に判断することがで
きる。結論として、蛋白の評価分析に使用される方法及
び試験具は、多種類の決定因子を有する試験片に存在す
る、その他の試験用パッドに悪影響を及ぼすことも妨害
することもない。

【００１４】以下にさらに詳細に説明するように、本発
明の方法は、指示薬組成物を組み込んだ新規で改良され
た担体マトリックスよりなる試験用パッドを含む試験片
を利用することによって、迅速に正確かつ信頼性のある
尿の蛋白分析を実施するものである。新規で改良された
担体マトリックスは、重合ウレタンベース化合物のフィ
ルム、膜又は層よりなり、この分析の色の分解能及び色
の識別を驚異的かつ予想外に高めることにより、蛋白分
析の感度及び精度を実質的に改良した。かくして、約５
mg／dl程度の低レベルでの尿蛋白濃度を正確に定量する
ことができる。従って、一般的に、本発明の担体マトリ
ックスは、蛋白を含む試料と指示薬組成物との接触によ
って起こる変色に、優れた色の分解能を付与するもので
ある。結果的に、分析の感度は改良され、約５mg／dl程
度の低レベルにある液体中の蛋白含量の検出及び測定が
達成される。

【００１５】異常に高い、又は異常に低いアルブミンレ
ベルによって起こる高蛋白尿症又は低蛋白尿症は、臨床
的及び病理学的な疾患そのものの性質、及び特定の疾患
の重篤度に依存する。蛋白尿症は断続性又は継続性で一
過性であり、断続性の蛋白尿症は、通例、腎不全よりも
生理的又は機能的な状態によって起こる。従って、尿及
びその他の試料の正確な蛋白分析は、試験室及び家庭の
両方での使用に適したものでなければならない。この評
価分析は、正しい診断をなし、正しい医療処置を実行、
管理、そして継続し得るように蛋白の検出及び定量を行
なうものでなければならない。その上、この蛋白分析法
が高濃度の蛋白若しくは低濃度の蛋白の何れの場合に
も、尿又はその他の試料中の蛋白の容易で経済的な、定
性的若しくは定量的測定のための浸して読む方式である
ことは有利である。

【００１６】さらに、尿又はその他の試験試料中の蛋白
を分析する何れの方法も、ｐＨの変化のような化学的若
しくは物理的な競合反応、又は蛋白以外の試料成分との
優先的な相互作用の結果としてではなく、指示薬組成物
と蛋白との反応の結果として、検出可能な又は測定可能
な色調の変化を与える方法を利用することによって、正
確で信頼性が高く再現性のある結果が得られなくてはな
らない。さらに、蛋白分析法が、尿又はその他の試験試
料中の蛋白の迅速で経済的かつ正確な測定に、乾式試薬
片を用いることが適当であれば有利である。それに加え
て、蛋白の分析に用いられる方法、及び担体マトリック
ス及び指示薬組成物よりなる試験物は、多種類の測定因
子を有する試験片に存在するその他の試験試薬物に悪影
響を及ぼしたり、妨げたりしてはならない。

【００１７】本発明以前に、尿又はその他の試料の蛋白
を分析する公知の方法では、重合ウレタンベース化合物
のフィルム、膜又は層よりなる担体マトリックスに均質
に組み込まれた指示薬組成物を含有する試験剤を含む試
験具を使用したものはなかった。新規な担体マトリック
スは、現在の担体マトリックスと比較して色の分解能を
改良し分析感度を増加し、それによって、約５mg／dl程
度の低蛋白濃度に対する正確で信頼性のある蛋白分析が
達成された。

【００１８】また、色素、例えばテトラブロモフェノー
ルブルー又はテトラクロロフェノール−３，４，５，６
−テトラブロモスルホンフタレインを使用する乾式相化
学試験片が、数年間、広範に用いられてきたけれども、
重合ウレタンベース化合物のフィルム、膜又は層よりな
る分析材を用いた乾式相試験片はなかった。この担体マ
トリックスは、特に約１５mg／dl程度又はそれ以下の蛋
白レベルのような低蛋白濃度において、色の分解能を改
良し、分析感度を増加する。さらに、この発明の方法以
前には、乾式相試験片は主に総蛋白濃度、すなわちアル
ブミンの分析では約３０mg／dl程度を少し欠ける低レベ
ルでのみ利用されていた。しかしながら、驚異的かつ予
想外に、新規で進歩性のある担体マトリックスによる分
析感度の増加のため、本発明の方法は、約５mg／dl程度
の低レベルに下げられた尿及びその他の試験試料中の蛋
白の乾式相試験片分析を提供する。

【００１９】従来の技術は、尿蛋白を分析するｐＨ指示
薬色素法を用いる湿式相及び乾式相化学に関する多くの
参考文献に記載されている。例えば、ケストン（Ｋｅｓ
ｔｏｎ）、米国特許第３，４８５，５８７号明細書は、
一定のｐＨで蛋白を分析するのに用いた基礎的な色素結
合技術を開示している。ケストンは、色素のｐＫａ（酸
解離定数）より僅かに低いｐＨに一定に保ち、濾紙のよ
うな乾燥した試験紙に浸漬させた単一の指示薬色素を用
い、色素の変色を検査することによりアルブミンの存在
又は濃度を測定することを示している。フリー（Ｆｒｅ
ｅ）ら、米国特許第３，０９５，２７７号明細書もま
た、適当な指示薬組成物を吸湿性の担体マトリックス、
例えば未処理の濾紙に組み込ませることによる液体試料
中のアルブミン含量の検出法を開示している。同様に、
アトキンソン（Ａｔｋｉｎｓｏｎ）ら、米国特許第３，
４３８，７３７号明細書は、未処理の吸湿性基質、例え
ば濾紙、木片、合成樹脂繊維物質、不織布及び織布に組
み込まれた液体中の蛋白検出用の試験組成物を含む試験
具を開示している。

【００２０】日本特許第６０−４９２５６号明細書は、
クマシーブリリアントブルー染料、メチルセルロース、
及び０ないし４のｐＫａを有する酸よりなる指示薬組成
物を用いた水相での蛋白分析を示している。クマシーブ
リリアントブルー染料を用いる湿式相の蛋白分析もブラ
ッドフォード（Ｍ．Ｍ．Ｂｒａｄｆｏｒｄ）著の刊行物
「蛋白染料結合原理によるマイクログラム量の蛋白の迅
速、高感度の定量法」［Ａ Ｒａｐｉｄ ａｎｄ Ｓｅ
ｎｓｉｔｉｖｅ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｑｕ
ａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｇｒａｍ Ｑ
ｕａｎｔｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｕｔｉｌ
ｉｚｉｎｇ ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｏｆ Ｐｒ
ｏｔｅｉｎ Ｄｙｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ， Ａｎａｌ．Ｂ
ｉｏ．，７２，２４８−２５６（１９７６）］に記載さ
れている。しかしながら、この湿式相の分析法は低蛋白
濃度に感度が高いけれども、湿式相の分析法も乾式相の
分析法に比較すると非実用的で扱いにくい。例えば、ク
マシーブリリアントブルー染料は、ガラス器具及びその
他の分析器具を過度に染色してしまう。対照的に、乾式
相の試験片は使用後に廃棄するので、染色されたガラス
器具及びその他の分析器具を洗浄するような、費用を要
し、時間のかかる手作業の工程は回避される。

【００２１】スミス−ルイス（Ｓｍｉｔｈ−Ｌｅｗｉ
ｓ）ら、米国特許第４，１６６，０９３号明細書は、ポ
リマー及び、場合によっては、微細に分散した微粒子物
質を含む層よりなる多層の乾式相の試験具を開示した。
このポリマー系の層は試験用パッドに含まれ、検出する
放射線を反射又は吸収して、問題の分析対象物の検出を
容易にしている。ウー（Ｗｕ）ら、米国特許第４，２７
４，８３２号明細書は、無機の金属塩のような乳濁剤、
例えば二酸化チタン、又は非繊維性のフィルムを形成す
る天然若しくは合成ポリマー、例えばゼラチン若しくは
ポリビニル化合物、又はそれらの組合せの何れか含む、
同様な放射線を遮断する層を開示した。

【００２２】シジキ（Ｓｉｄｄｉｑｉ）、米国特許第
４，４３８，０６７号明細書は、指示薬を組み込んだ特
殊のポリマービーズを、プラスチック又は金属のような
無孔性基剤に加えた乾式相試験具を開示した。ポリマー
ビーズとしては、水に不溶な親水性ポリマー、例えばセ
ルロース及びヒドロキシアクリルポリマーである。試験
具と試料との接触によって生ずる変色はビーズの中で起
こる。シジキの方法において、ビーズが試験具の支持体
に加えられる前に指示薬はポリマービーズに組み込まれ
る。

【００２３】タニー（Ｔａｎｎｙ）、米国特許第４，４
６６，９３１号明細書はモノマー又はオリゴマー溶液の
薄層を急速に重合させ不溶のポリマーを形成することに
よる、浸透性膜の製造法を記載した。次いで、溶液の溶
媒を除去し、微小多孔性膜を得た。タニーは、紫外線又
は電子線照射によって微小多孔性膜を形成するモノマー
又はオリゴマーの急速な重合を開示した。フォード（Ｆ
ｏｒｄ）、米国特許第４，６６１，５２６号明細書は、
ポリアミド又はポリアミド／ポリイミド共重合体から作
られる架橋した多孔性ポリマー膜の製造法を開示した。

【００２４】しかしながら、上記の参考文献は、単独又
は組合せの形の何れにおいても、重合ウレタンベース化
合物のフィルム、膜又は層よりなる担体マトリックスが
診断具に用いられ、試験試料中の分析対象物、例えば蛋
白の、特に分析対象物の少ない量、例えば約４mg／dlを
さらに正確に定量することはできないことを教示又は示
唆している。従来の技術並びに現在市販されている試験
片と対照的に、本発明の方法は、液体試料、例えば尿の
ような生物学的液体中の蛋白の検出及び定量において高
い確度と感度を提供するものである。驚異的かつ予想外
であるが、本発明の担体マトリックスを使用することに
よって約３０mg／dl以下、約５mg／dlまでの蛋白レベル
が正確に定量され得る。従って、本発明の方法によれ
ば、重合ウレタンベース化合物のフィルム、膜又は層よ
りなる担体マトリックスに組み込まれた指示薬組成物を
含む試験用パッドを用いることにより、尿及びその他の
試料の蛋白用の乾式相試験片分析において、新規で予想
外の結果が得られた。

【００２５】要するに、本発明は、新規で改良された試
験具、試験具の製造法、及び試験試料中の成分の存在又
は濃度の測定法に関する。この器具は、試料成分と相互
作用して検出可能な応答を生ずる指示薬組成物を組み込
んだ、改良された担体マトリックスよりなる試験用パッ
ドである。試験用パッドの改良された担体マトリックス
は、試験具と試料との接触から生じた変色の色の分解能
及び差異の判定を改良する重合ウレタンベース化合物の
フィルム、膜又は層を含む。家庭での使用では、指示薬
組成物は視覚的に検出可能な反応を生じるものである。
試験室での使用では、指示薬組成物は視覚的又は機械的
に検出可能な反応を生じるものである。

【００２６】本発明の器具における新規で改良された担
体マトリックスは、重合ウレタンベース化合物のフィル
ム、膜又は層を含む。次いで、指示薬組成物は担体マト
リックスに均質に組み込まれ、担体マトリックスは全体
に均質に指示薬組成物を一定の濃度で保持し、試料及び
分析される試料による担体マトリックスの透過性を維持
する。驚異的かつ予想外に、本発明の方法及び試験具
は、より感度の高い、正確で信頼性のある蛋白の定量法
を提供し、この器具により約５mg／dl程度の低い蛋白濃
度が定量できることが明らかになった。

【００２７】より詳細には、本発明は、指示薬組成物及
び新規で改良された担体マトリックスよりなる試験用パ
ッドを含む試験具を利用することにより、尿及びその他
の分析試料の蛋白の分析法を示すものである。重合ウレ
タンベース化合物のフィルム、膜又は層よりなる本発明
の担体マトリックスに、指示薬組成物を組み込むこと
は、蛋白質に対して、特に低蛋白濃度領域において、色
の分解能を改良し、及び高い感度を付与することが示さ
れた。本発明の重要な特徴に従って、尿及びその他の試
料における０mg／dlないし約２０００mg／dl、特に０mg
／dlないし３０mg／dlの蛋白レベルの定性又は定量が可
能である。本発明の担体マトリックスを臨床試験法に利
用することにより、尿又はその他の試料における蛋白、
例えばアルブミンの定性的又は定量的な濃度は、重合ウ
レタンベース化合物のフィルム、膜又は層が、指示薬組
成物と蛋白との相互作用で生じた変色の色の分解能を改
良するので、より正確に測定される。結果として、低濃
度の蛋白に対する乾式相分析法の感度は増加する。

【００２８】それゆえ、本発明の目的は、液体中の化学
化合物の相対濃度を定量する新規で改良された試験具及
び方法を提供することである。

【００２９】本発明の別な目的は、尿又はその他の液体
試料の蛋白の、簡単で信頼性があり正確でかつ再現性の
ある分析法を提供することである。

【００３０】本発明の別な目的は、液体試料中で蛋白と
反応し、試験具の視覚的な変化、例えば変色を起こして
液体試料の蛋白濃度を表示する、新規で改良された蛋白
と相互作用する試験具を提供することである。

【００３１】本発明の別な目的は、尿又はその他の液体
試料のアルブミンの分析法を提供することである。

【００３２】本発明の別な目的は、低濃度蛋白に対して
視覚的な色の分解能を改良した、及び高い感度を示す、
尿又はその他の液体検体の分析法を提供することであ
る。

【００３３】本発明のさらに別な目的は、約５mg／dl程
度の低濃度蛋白に感度がよく、０mg／dlないし約２００
０mg／dl、特に０mg／dlないし約３０mg／dlの蛋白レベ
ルを定量的に識別する、尿又はその他の液体試料の分析
法を提供することである。

【００３４】本発明の別な目的は、重合ウレタンベース
化合物のフィルム、膜又は層よりなる担体マトリックス
を含む試験用パッドを組み込んだ試験具を利用する、尿
又はその他の液体試料の分析法を提供することである。

【００３５】本発明の別な目的は、重合ウレタンベース
化合物のフィルム、膜又は層よりなる担体マトリックス
に組み込まれた場合に、蛋白と相互作用し、試料中の蛋
白の存在を確認し低レベルの濃度を定量する、検出、又
は定量可能な変色を生ずる指示薬組成物を利用する、尿
又はその他の液体試料の分析法を提供することである。

【００３６】本発明の別な目的は、蛋白と相互作用し、
視覚的に又は機械的に差異を判定し得る変色を起こし、
尿又はその他の液体試料中の蛋白濃度を０mg／dlないし
約２０００mg／dl、特に０mg／dlないし約３０mg／dlの
レベルで定量的に測定する、蛋白が透過可能な重合ウレ
タンベース化合物のフィルム、膜又は層よりなる新規で
改良された担体マトリックスに組み込まれた指示薬組成
物を含む試験用パッドを含む試験具を提供することであ
る。

【００３７】本発明の別な目的は、重合ウレタンベース
化合物のフィルム、膜又は層よりなる担体マトリックス
を含む試験用パッドからなる蛋白の検出具の製造法を提
供することである。

【００３８】本発明の別な目的は、新規で改良された試
験具、及び試験具の製造後又は製造の過程で、試料中の
化学化合物と相互作用し得る指示薬組成物を組み込んだ
担体マトリックスを含む試験用パッドよりなり、重合ウ
レタンベース化合物のフィルム、膜又は層よりなる担体
マトリックスが試験具と試験試料との接触から生じた変
色の色の分解能を改良する、試験具の製造法を提供する
ことである。

【００３９】本発明の別な目的は、液体中の化合物の存
在を検出するのに用いられ、化合物が重合ウレタンベー
ス化合物のフィルム、膜又は層よりなる担体マトリック
スを透過することが可能であり、担体マトリックスに組
み込まれた指示薬組成物と反応することが可能である、
試験具の新規で改良された製造法を提供することであ
る。

【００４０】本発明のさらに別な目的は、蛋白が透過可
能な重合ウレタンベース化合物のフィルム、膜又は層よ
りなる担体マトリックスに指示薬組成物が組み込まれ、
蛋白との反応で新規で予想以上の確度が得られ、多種類
の決定因子を有する試験片上の近接の試験用パッドによ
って行なわれる評価分析を妨げない、新規で改良された
乾式相試験用パッドを提供することである。

【００４１】本発明の別の目的は、蛋白の定量分析のた
めの新規で改良された試験具を提供することである。

【００４２】

【発明が解決しようとする課題】本発明の方法に従っ
て、尿及びその他の液体試料中のアルビミンのような蛋
白質に対する定性又は定量分析を、指示薬組成物を組み
込んだ担体マトリックスを含む試験用パッドよりなる試
験具を用いて行った。本発明の担体マトリックスは、試
験具を試料と接触させて生じる変色の分解能を改良し、
そのために分析感度を増加する重合ウレタンベース化合
物のフィルム、膜又は層よりなる。

【００４３】新規で改良された担体マトリックスよりな
る試験用パッドを含む試験具を用いることによって、分
析の視覚的及び機械的な色の分解能は、担体マトリック
スとして未処理の繊維状吸湿性物質よりなる試験用パッ
ドを用いる分析、及び処理済みの繊維状吸湿性物質より
なる試験用パッドを用いる評価分析よりも優っている。
結果的に、低い蛋白濃度に対する分析感度は、試験具に
本発明の担体マトリックスを用いることによって高めら
れる。本発明の担体マトリックスによって得られた、色
の分解能の改良、及び低い蛋白レベルに対する高い感度
は、尿の分析に特に有用である。

【００４４】現在市販の分析では、０mg／dlないし約３
０mg／dl、特に０mg／dlないし約１５mg／dlの範囲の蛋
白レベルの差異を判定することは不可能である。低蛋白
濃度レベルの差異を判定することは、約１０mg／dlない
し約２０mg／dlの範囲が健常人の正常な尿蛋白レベルと
して扱われているので、この技術分野において臨床上重
要である。従って、０mg／dlないし約１０mg／dlの尿蛋
白レベル、すなわち低蛋白尿症は、生理学的な不均衡を
起こす潜在的な蛋白欠乏症の可能性がある。さらに、約
２０mg／dlより高い尿蛋白レベルは、病的状態を表す蛋
白質の過剰な排出を意味している。比較的高い範囲、例
えば約１００mg／dlないし約２０００mg／dlの尿蛋白濃
度に関しては、本発明の方法は、尿蛋白濃度に対して改
良された色の分解能及び鋭敏な感度を呈するが、このよ
うに高い蛋白レベルは、その後の検査を必要とする異常
な生理学的状態を明らかに意味しているので、この比較
的高い濃度範囲での前記の臨床的な利点は重要ではない
ことを注意すべきである。

【００４５】さらに、尿の分析に加え、本発明の方法及
び器具は血漿プラズマ及び血清中のアルブミンの存在又
は定量的濃度；より一般的に、多くのその他のアルブミ
ンを含む同様の液体のアルブミン含量の決定にも用い得
ることは明らかである。本発明の別の重要な特徴に従っ
て、本発明の方法及び器具は乾式相試験片分析に用いら
れ、尿又はその他の液体試料中の蛋白の存在又は濃度を
定量する。

【００４６】驚異的かつ予想外に、本発明の担体マトリ
ックスに組み込まれた適当な指示薬組成物よりなる試験
用パッドは、試料中の蛋白の存在又は濃度を定量する色
素結合法に用いられる場合、蛋白質、特に低い蛋白濃度
に対して、優れた分解能と鋭敏な感度を示した。本発明
の担体マトリックスに組み込まれた指示薬組成物を用い
る色素結合法は、より正確で信頼性があり臨床的に有意
な蛋白定量試験法である。現在、乾式相試験片試験は、
試料中の蛋白の存在又は濃度を定量するのに使用される
試験用パッドの担体マトリックスとして、未処理の吸湿
性基質、例えば濾紙、又は処理済みの吸湿性基質の何れ
かを利用している。

【００４７】現在の蛋白試験法に用いられる指示薬組成
物は、蛋白質と相互作用し、適当な一定のｐＨが維持さ
れる場合、蛋白誤差現象によって変色する。蛋白誤差現
象は、フリ−（Ｆｒｅｅ）ら、米国特許第３，０９５，
２７７号；アトキンソン（Ａｔｋｉｎｓｏｎ）ら、米国
特許第３，４３８，７３７号；及びケストン（Ｋｅｓｔ
ｏｎ）、米国特許第３，４８５，５８７号の各明細書に
詳細に記載されており、蛋白誤差現象の観察に必要な各
種の色素、好ましいｐＨ範囲、緩衝剤、及び未処理の担
体マトリックス、例えば濾紙のような吸湿性基質が開示
されている。上記で引用した三つの特許は、基本的には
尿中の総蛋白含量に対する分析に用いられる現在の乾式
相試験片を記載している。これらの総蛋白試験片は、一
般に５又はそれ以下の強酸性で普通に変色する指示薬色
素、及び指示薬色素のｐＨを色素が変色するｐＨの僅か
下に維持する緩衝剤よりなる指示薬組成物を含んでい
る。指示薬色素の十分な緩衝処理は、色素が試料と接触
して起こすｐＨ変化によるよりも、蛋白と相互作用する
ことによって変色することを実際に証明している。現在
の総蛋白試験片は、指示薬組成物を組み込むために、担
体マトリックス、通例、未処理の濾紙を含んでいる。

【００４８】本発明の重要な特徴として、重合ウレタン
系化合物のフィルム、膜又は層よりなる新規で改良され
た担体マトリックスが、液体試料中の総蛋白含量に対す
るより正確で信頼性のある試験評価を与えることを示し
た。さらに、本質的に即時に試験の結果が得られる、迅
速で正確かつ再現性と信頼性のあるアルブミン分析法
が、家庭又は試験室で実施し得るようになった。

【００４９】それに応じて、適当な指示薬色素を含む指
示薬組成物が、本発明の担体マトリックスに組み込まれ
る。適当な色素は、蛋白と相互作用が可能で、蛋白と反
応して蛋白誤差現象に由来する十分な変色を起こし、検
出可能又は測定可能な応答を生じることができるもので
ある。しかしながら、本発明に従って、重合ウレタンベ
ース化合物のフィルム、膜又は層よりなる担体マトリッ
クスに適当な指示薬組成物を組み込むことは、指示薬色
素と蛋白との相互作用で生じる変色に基づく色の分解能
及び差異の判定を、視覚的にも機械的にも、改善してい
ることが認められる。それ故に、本発明の担体マトリッ
クスにより、蛋白分析の感度は、特に比較的低い蛋白濃
度において高められているのである。

【００５０】本発明の方法は、上記に記載した「蛋白誤
差」現象を利用したものである。しかしながら、本発明
の担体マトリックスに適当な指示薬組成物を組み込むこ
とは、色素と蛋白の相互作用の結果である変色の色の分
解能及び差異の識別を改善する。前記のように、ｐＨ指
示薬色素が蛋白と反応する場合、色素の見かけのｐＫａ
は変化し、いわゆる「蛋白誤差」現象によって変色す
る。しかしながら、本発明の担体マトリックスを用いる
ことによって、より劇的な発色があり、それによって指
示薬色素と蛋白との相互作用による色の分解能及び色の
差異の識別が改善される。従って、分析感度が高められ
る。

【００５１】一般に、色素が蛋白と相互作用し、蛋白と
の相互作用に応じて検出可能で測定可能な変色を生じる
場合には、任意のｐＨ指示薬色素も本発明の方法に利用
することができる。上記のような指示薬色素はよく知ら
れており、尿又はその他の液体試料中の蛋白の存在又は
濃度を定量する方法において、指示薬組成物に用いられ
る。指示薬色素のほか、指示薬組成物は指示薬色素がｐ
Ｈの変動の結果により変色せず、蛋白との接触及び相互
作用で変色し、試料中の蛋白の存在又は濃度を正確に示
すのに十分な量の適当な緩衝剤を必要とする。さらに、
任意の各種既知の型の緩衝剤指示薬組成物中に用いるこ
とができることが示されている。さらに、最適な結果を
得るために、指示薬組成物のｐＨは、指示薬組成物の指
示薬色素が変色するｐＨ範囲のごく僅か下のｐＨ値を維
持するべきであることが知られている。指示薬組成物の
特定の指示薬色素に対する適当な緩衝ｐＨ値の決定法、
及び指示薬組成物に使用可能である特定の緩衝剤を決定
する方法は、ケストン（Ｋｅｓｔｏｎ）、米国特許第
３，４８５，５８７号明細書に記載されている。

【００５２】尿又はその他の試料との接触による、指示
薬組成物の変色は蛋白の存在を示す。さらに、変色の強
度と程度は試料によって生成した色の強度を、蛋白の既
知濃度溶液によって生成した色の強度と比較又は相関す
ることにより、試料中の蛋白濃度を決定するのに使用す
ることができる。本発明の重要な特徴に従って、指示薬
組成物が重合ウレタンベース化合物のフィルム、膜又は
層よりなる担体マトリックスに組み込まれた場合に、指
示薬組成物の変色の強度及び程度は、驚く程予想外に増
加することが示された。その結果生じた変色は十分に解
明され、差異が識別できるので、試料中の蛋白量は、色
を測定する機器、例えば分光光度計若しくは比色計を用
いることなく正確に測定され定量され得る。しかしなが
ら、必要ならば、上記の色を測定する機器を使用して、
試料とアルブミンの既知濃度溶液との間の色の強度及び
程度の差異を測定することができる。

【００５３】従って、本発明の新規で改良された担体マ
トリックスに組み込まれた指示薬組成物を含む試験用パ
ッドを利用する蛋白の分析は、この試験の精度及び信頼
性を改善し、分析における医師の信用をも高める。さら
に、試験室における熟練した医師又は技術者と対照的
に、不慣れな患者が家庭で行う蛋白に関する尿試験の数
の面で、尿中の蛋白含量に対する正確で信頼性のある試
験法を提供することは絶対に必要を要する。同様に、こ
の試験法が多種の決定因子を有する試験片を用いて行な
われる場合、本発明の担体マトリックスは、蛋白分析
を、共存する試験用パッドによって行なわれる他の尿成
分に対する分析を妨げることがないようにし、それゆ
え、この試験における医師又は患者の信用をさらに高め
ている。

【００５４】本発明の新規で改良された担体マトリック
スに組み込まれた指示薬組成物を含む試験用パッドを利
用する蛋白の乾式相試験片試験は、この技術分野でよく
知られた方法に従い実施される。一般に、蛋白の評価試
験は、本発明の担体マトリックスに組み込まれた指示薬
組成物を含む試験用パッドよりなる分析対象物検出具
に、尿又はその他の試料を接触させることで行なわれ
る。分析対象物検出具は試料の中に浸すか、又は試験を
分析対象物検出具に滴下することができる。分析対象物
検出具に生じた変色は蛋白の存在を示す；さらに、必要
ならば、生じた変色を基準色表と比較して、尿又は試料
中の蛋白濃度を定量することが可能である。

【００５５】一般的には、従来の技術は、分析対象物検
出具を、単一試験用パッド試験片（単一分析対象物に対
して一種類の試験）又は多種類試験用パッド試験片（数
種の分析対象物の同時試験）の何れかの形に考案された
試験片として、記載している。何れの型の試験片におい
ても、試験片は、通常疎水性のプラスチックから作ら
れ、吸湿性又は非吸湿性の素材を含み指示薬組成物を組
み込んだ、少なくとも一種類の試験用パッドをつけた支
持片又はハンドルを含んでいる。一般に、吸湿性又は非
吸湿性の基質は吸着剤であり、試験試料を毛管作用によ
ってこの基質を通して移動させ、指示薬組成物と接触さ
せ、検出可能で測定可能な変色を生じる。

【００５６】この技術分野における従来の試験用パッド
は、その基質が、実際に吸湿性であれ非吸湿性であれ、
実質的に化学試薬に関して不活性であり、液体試験試料
に対して多孔性及び／又は吸収剤である限り、問題の分
析を行なうのに必要な化学的試薬を組み込むことのでき
る物質であった。しかしながら、本発明の重要な特徴と
して、この試験用パッドは重合ウレタンベース化合物の
フィルム、膜又は細片よりなる担体マトリックスを含ん
でいる。本発明の担体マトリックスは水及びその他の生
理的溶液に不溶であり、水及びその他の生理的溶液にさ
らした場合に本来の構造形態を保持している。疎水性で
非吸収性の物質は、本発明の担体マトリックスに含まれ
る重合ウレタンベース化合物としての用途に適していな
い。担体マトリックスは種々の化学組成物又は化学組成
物の混合物であり得る。担体マトリックスはまた、堅さ
及び柔らかさと共に滑らかさ及び粗さに関しても異なる
ものであり得る。しかしながら、何れの場合にも、担体
マトリックスは親水性又は吸収性の物質を含む。対照的
に、試験片のハンドルは、通常疎水性で非吸収性の物
質、例えばポリエチレンテレフタラ−ト、ポリカーボナ
ート又はポリスチレンから作られる。

【００５７】本発明の長所を十分に発揮するために、指
示薬組成物を、蛋白質がフィルム、膜又は層を均等に透
過し得るような適当な形状及び十分な大きさの細孔の分
布を有する重合ウレタンベース化合物のフィルム、膜又
は層よりなる担体マトリックスに組み込む。重合ウレタ
ンベース化合物のフィルム、膜又は層は、通例、指示薬
組成物を担体マトリックスに組み込む前に製造する。次
いで、指示薬組成物を組み込んだ本発明の担体マトリッ
クスよりなる試験用パッドは、試験試料中の蛋白を分析
するための乾式相試験片に利用される。従って、一般
に、本発明の方法は、試験試料中の蛋白質の総濃度に対
する経済的で正確かつ信頼性のある試験法を提供するも
のである。さらに、本発明の方法は、家庭又は試験室に
おいて実施され、約５mg／dlのような低い蛋白濃度の検
出、差異の判定及び定量が可能で、そのため臨床的に有
用な試験法である。

【００５８】本発明の好適な実施態様として、蛋白用の
乾式相試験片の担体マトリックスが最初に作られる。担
体マトリックスは疎水性のハンドル上に直接作られる；
又は、担体マトリックスは別の適当な素材上で作られ、
次に両面接着テープで疎水性のハンドルに固定される。
担体マトリックスはウレタン化合物を含む組成物から作
られる。以下に詳細に記載するように、ウレタンを含む
組成物は、重合可能なウレタン化合物、もしくは重合し
たウレタン化合物、又はそれらの混合物を含む。重合可
能なウレタン化合物が担体マトリックスの製造に利用さ
れる場合、重合可能なウレタン化合物を適当な方法で重
合し、次に硬化して、重合ウレタンベース化合物のフィ
ルム、膜又は層よりなる本発明の新規で改良された担体
マトリックスを形成する。それとは別に、担体マトリッ
クスが重合したウレタン化合物を含む組成物から製造さ
れる場合、重合の工程は省かれ、硬化後、本発明の新規
で改良された担体マトリックスが形成される。本発明の
長所を十分発揮するためには、担体マトリックスは、部
分的又は完全に重合したウレタン化合物から製造され
る。

【００５９】次いで、適当な指示薬組成物は、担体マト
リックスを指示薬組成物の溶液中に浸漬することによ
り、又は指示薬組成物の溶液を担体マトリックス上に噴
霧もしくは散布することにより担体マトリックスに組み
込み、試験具の試験用パッドを形成する。指示薬組成物
の溶媒は約５０°Ｃに保たれた空気オーブン中で、約２
０分ないし３０分間、オーブン乾燥することによって除
去される。あるいは、指示薬組成物をウレタン化合物を
含む組成物中に含ませてもよく、この場合には、担体マ
トリックスが製造されるにつれて担体マトリックスに組
み込まれ、硬化後、試験具の試験用パッドが製造され
る。指示薬組成物を組み込んだ担体マトリックスよりな
る試験用パッドが、疎水性のハンドル上に直接作られな
い場合、例えば、約０．２５cm×約０．５cmないし約
０．５cm×約１．０cmの大きさの試験用パッドが得られ
るように適当なサイズに裁断される。次いで、指示薬組
成物を組み込んだ担体マトリックスよりなる試験用パッ
ドは、両面接着テープで不透明な又は透明な疎水性のプ
ラスチック製ハンドルに固定される。

【００６０】試験用パッドが疎水性のハンドル上に直接
形成されるか、又は試験用パッドが疎水性のハンドルに
接着して固定されるかに係わらず、得られた試験具又は
乾式相試験片を、新鮮な、遠心分離していない尿試料
に、分析材を試料で飽和させるのに、十分な時間浸漬す
る。予め設定した時間、例えば約３０秒ないし約２分間
を経過した後、試験片の反応を視覚的又は機械的に検査
する。試験用パッドの変色は、もしあれば、尿試料中の
蛋白の存在及び／又は濃度を表している。従来の技術と
同様に、本発明の方法及び組成物を利用して蛋白の定量
試験を行なうのに、担体マトリックスの大きさ、指示薬
組成物溶液の濃度、試験試料の量、及び例えば浸すより
もピペットで付けることなどの試料の試験片への添加
法、の適当な調整をすることは、試験装置を作る技術分
野で精通した技術者の実験技術の範囲内で十分である。

【００６１】多くの場合、試験片を単に視覚的に観察す
ることで必要な情報が得られる。より正確な情報が要求
される場合、試験片に用いた特定の指示薬組成物につい
て、各種の蛋白の既知濃度に相当するカラースポットを
表す色表を作ることができる。次いで、尿試料と接触さ
せて得られた試験片の色を表のカラースポットと比較す
ることにより試料の蛋白濃度を定量する。

【００６２】さらにより正確な被検体の定量が必要な場
合、分光光度計又は比色計を使用して変色の程度をより
正確に決定することができる。その他、変色の程度をよ
り正確にかつより確実に測定するために、視覚的方法に
対して分光光度計又は比色計法を用いて乾式相試薬片試
験で定量し、かくて試験試料中の蛋白濃度、特に約３０
mg／dl以下のような低い蛋白濃度を、より正確に定量す
ることができる。

【００６３】以下に詳細に説明するように、本発明の担
体マトリックスは、試料中の低濃度蛋白の検出、差異の
判定、及び定量を改善する。従って、本発明の担体マト
リックスの鋭敏な感度は、約５mg／dl程度の低い蛋白濃
度を有する試験試料の正確な試験法を提供する。対照的
に、現在の乾式相試験片は約１５mg／dl程度の蛋白濃度
を検出し、定量することができる。そのため、現在の方
法によれば、約１５mg／dl以下の低蛋白濃度の検出には
熱及び沈殿法が必要であり、費用と時間がかかる。従っ
て、本発明の方法までは、乾式相試験片の方法は、尿の
ような試験試料中で、約１５mg／dl以下のような蛋白の
低濃度を正確に検出し測定するのには用いられなかっ
た。

【００６４】これまでに説明したように、試料中の蛋白
質の分析に使用する乾式相試験片は、通常、適当な指示
薬組成物を組み込むことが可能で；尿又はその他の試料
を、比較的速やかに蛋白の分析を得ることができる十分
な速さで、担体マトリックスに透過させ；かつ、担体マ
トリックスを含む組成物の試験試料による抽出によっ
て、又は尿若しくは試料を明らかに変化させることによ
って、見方によればその後の評価試験を不確実、不正確
又は不安にするような、尿又はその他の試料を、汚すこ
とのない担体マトリックスを含む試験用パッドよりな
る。このような担体マトリックスに適当な指示薬組成物
を組み込むことで、液体試験試料中の蛋白の検出又は正
確な測定が可能な試験用パッドとなる。

【００６５】しかしながら、従来の技術における試験用
パッドは、未処理の吸湿性（すなわち、濾紙）もしくは
非吸湿性（即ち、ポリマー）の基質である担体マトリッ
クス、又は処理した吸湿性の基質を含む担体マトリック
スに組み込んだ指示薬組成物よりなり、０mg／dlないし
約３０mg／dlの蛋白を含む試料の正確な蛋白の定量がで
きなかった。驚異的かつ予想外に、従来の技術における
未処理の吸湿性及び非吸湿性基質、並びに処理した吸湿
性基質とは異なり、本発明の方法及び試験具に使用され
る新規で改良された担体マトリックスは、試料中の低レ
ベル、例えば０mg／dlないし約３０mg／dlのアルブミン
の定量及び検出を可能にしている。

【００６６】本発明の試験片は、試験試料の総蛋白量を
分析するように設計されており、担体マトリックスは重
合ウレタンベース化合物のフィルム、膜又は層であり、
試験試料は試験片の試験用パッドを透過して飽和し、指
示薬組成物と接触することができる。本発明の長所を十
分に発揮するために、試料の総蛋白量を分析するために
用いられた試験用パッドの担体マトリックスは、ウレタ
ンポリマー、ウレタンプレポリマー又はそれらの組合せ
よりなるウレタンを含む組成物から形成された蛋白透過
性のフィルム、膜又は層よりなる。従来の技術における
未処理の濾紙及び同種の吸湿性基質は、蛋白、例えばア
ルブミンが吸湿性基質を透過し、組み込まれた指示薬組
成物と接触して反応し変色を起こすに十分な多孔度を有
していた。しかしながら、本発明の担体マトリックス
は、十分な多孔度を有していると共に、予想外に変色の
色の分解能及び差異の判定度を改善して、より感度のよ
い蛋白の試験法を提供する。従って、精度及び信頼性の
高い蛋白試験が行なわれる。

【００６７】本発明の重要な特徴として、担体マトリッ
クスは各種の方法によって作ることができる。例えば、
担体マトリックスは、適当な液体ビヒクルに分散した重
合ウレタン化合物を含む組成物から作ることができる。
この組成物は、湿性のフィルムとして基質に付け、次い
で硬化及び乾燥して、例えば孔の大きさの分布及び孔の
形状が所望の形態の重合ウレタンベース化合物のフィル
ム、膜又は層よりなる担体マトリックスを作る。あるい
は、担体マトリックスは適当な液体ビヒクルに分散した
重合可能なウレタン化合物よりなる組成物から製造する
ことができる。従って、この重合可能な組成物は湿性の
フィルムとして基質に付け、重合可能なウレタン化合物
が先ず重合される。次に、重合ウレタンベース化合物を
硬化及び乾燥し、所望の形態を有する本発明の担体マト
リックスを生成する。その結果、本発明の担体マトリッ
クスに適当な指示薬組成物を組み込むことにより、試験
試料中の異なったレベルのアルブミン、特に低レベル、
例えば０mg／dlないし約３０mg／dlのアルブミンを検出
又は差異を判定する試験具及び方法のための試験用パッ
ドが得られる。それゆえ、アルブミンのような蛋白質が
乾式相試験片試験に用いられる場合、本発明の担体マト
リックスを含む試験用パッドは、色の分解能を改善し、
色の差異判定度を改善し、及び鋭敏な感度を示す。

【００６８】以下に記載する本発明の実施態様において
示すように、担体マトリックスが適当な液状ビヒクルに
分散した重合可能なウレタン化合物よりなる組成物から
製造される場合、重合可能なウレタン化合物を最初に重
合し、重合ウレタン化合物を生成する。次いで、水浴、
水を含む超音波浴により、又は重合ウレタン化合物を加
熱することにより、適当な液状ビヒクルに分散した重合
ウレタン化合物を硬化し、重合ウレタンベース化合物を
生成する。重合ウレタン化合物が担体マトリックスを製
造するのに用いられる場合、重合工程は省かれるが、蛋
白質の分析に好適な形態の重合ウレタンベース化合物を
有する担体マトリックスを製造するのに硬化工程が行な
われる。さらに、いずれの場合にも、重合ウレタンベー
ス化合物の蛋白透過性フィルム、膜又は層よりなる担体
マトリックスには、蛋白を検出する試験具に担体マトリ
ックスが使用される前に、適当な指示薬組成物が組み込
まれる。

【００６９】本発明の新規で改良された担体マトリック
スを得るためには、重合可能なウレタン化合物又は重合
したウレタン化合物、例えばウレタンプレポリマーを最
初に適当な液状ビヒクルに分散又は溶解することが知ら
れている。同様に、適当な液体ビヒクルに分散又は溶解
した重合可能なウレタン化合物及び重合したウレタン化
合物の組合せは、本発明の担体マトリックスの製造に用
いることができる。次に、得られた分散液又は溶液は、
湿性フィルムとして適当な基質上に付けた後、ウレタン
を含む組成物の硬化の過程で、分散液又は溶液から液体
ビヒクルを除去することによって、担体マトリックスを
形成する。硬化の過程での液体ビヒクルの除去は、ウレ
タン化合物を乾燥し、蛋白質の分析に好ましい孔の大き
さ及び孔の形状を有する連続フィルム、膜又は層として
凝結する。

【００７０】適当な液体ビヒクル中に分散又は溶解した
ウレタン化合物は、重合可能であるか又は重合して、オ
リゴマー、プレポリマー、不完全に硬化したポリマー又
はそれらの組合せとなる。さらに、指示薬組成物の溶解
性と化学的性質によって異なるが、ウレタンを含む組成
物を、硬化前に指示薬組成物と混合し、ウレタンを含む
組成物を硬化することによって試験用パッドを製造し、
担体マトリックスを形成する。指示薬組成物を組み込ん
だ担体マトリックスよりなる試験用パッドは、細片、次
いで試験用パッドに裁断され、プラスチックのハンドル
に固定される。

【００７１】連続液体ビヒクルに分散された、オリゴマ
ー、プレポリマー、不完全に硬化したポリマー又はそれ
らの組合せのような、重合可能な又は重合したウレタン
化合物よりなるウレタンを含む組成物は、硬化の工程の
過程で連続液体ビヒクル相を除去して透過性のフィル
ム、膜又は層を形成する。かくして、蛋白の分析に適当
な孔の形態、大きさ及びその分布を有する担体マトリッ
クスが得られる。ウレタン化合物は、連続液体ビヒクル
相に溶解又は分散後、任意の既知の方法で硬化される。
さらに、ウレタン化合物の溶液、もしくは分散液に適当
な硬化触媒を加え、又はウレタン化合物の溶液もしくは
分散液が、不完全に硬化された溶液又は分散液の形態で
層として用いられる場合には、加熱硬化することができ
る。一般に、本発明において有用なウレタン化合物は、
液体ビヒクル、例えば有機溶媒又はアルコールに溶解又
は分散し、硬化して、本質的に無色の、蛋白透過性で連
続フィルム、膜又は層を生成し得る化合物である。

【００７２】本発明の一つの実施態様として、ウレタン
化合物は、重合可能なウレタンプレポリマー、特に本質
的にプレポリマー鎖の各末端がイソシアネート官能基で
あるウレタン単位の繰り返しよりなるウレタンプレポリ
マーである。ウレタン化合物は、電子的性質において中
性若しくは陽イオン性のいずれかであり、又は中性ウレ
タン化合物と陽イオン性ウレタン化合物との組合せが用
いられる。本発明の長所を十分に発揮するためには、重
合可能なウレタン化合物又は重合したウレタン化合物は
電子的性質において中性であることが知られている。適
当な市販のウレタンプレポリマーの例としては、バイヤ
−社（Ｂａｙｅｒ ＡＧ）から発売されているＤＥＳＭ
ＯＤＥＲＭ ＫＢＨ ＧＲＡＮＵＬＡＴＥ及びＤＥＳＭ
ＯＤＥＲＭ ＫＰＫ ＤＩＳＰＥＲＳＩＯＮが挙げられ
る。

【００７３】「ウレタンプレポリマー」という用語は、
本質的に直鎖状ポリマー又はウレタン単位の繰り返しを
意味する。ウレタンプレポリマーは、一分子当たり少な
くとも二個のイソシアナート官能基を有し、このポリウ
レタンプレポリマーは、少なくとも約５０，０００の平
均分子量（Ｍｗ）を有する。約５０，０００以下、例え
ば約３０，０００までの平均分子量を有するウレタンプ
レポリマー類は、プレポリマー類が液体ビヒクルに可溶
又は分散し得る限り有用であり、硬化して連続フィル
ム、膜又は層を形成することができる。最大のＭｗは、
このウレタンプレポリマー類が連続液体ビヒクル相、例
えば非プロトン性溶媒又はアルコールのような適当な有
機溶媒に、可溶もしくはさもなければ分散し得るもので
ある。不完全に硬化した分散ウレタンプレポリマーにつ
いては、本発明では、約５００，０００までの重量平均
分子量が実用的であると思われる。硬化の場合、フィル
ム、膜又は層の分子量の上限はない。本発明の長所を十
分に発揮するためには、重合可能なウレタンプレポリマ
ーのＭｗは、約７０，０００ないし約８０，０００のＭ
ｗの範囲内である。

【００７４】本発明の別な実施態様として、ウレタン化
合物は陽イオン性、又は、好適には中性の重合ウレタン
化合物である。ウレタン化合物は、また陽イオン性重合
ウレタンポリマー及び中性の重合ウレタンポリマーの組
合せであり得る。重合ウレタンポリマーは、ウレタンプ
レポリマー類と同じ通常の範囲の重量平均分子量（Ｍ
ｗ）を有し、連続液体ビヒクルに溶解するか又は分散す
る。本発明の担体マトリックスは、重合ウレタン化合物
の溶液又は分散液の湿性フィルムを水と接触させて、重
合ウレタン化合物を含む組成物から製造され、相の分
離、及びポリマー鎖の凝集と巻き込みを起こす。次に、
水で硬化したフィルムを加熱して残留する溶媒及び水を
除去し、乾式透過性フィルムを生成する。あるいは、水
の工程を除去及び湿性フィルムを単に加熱することによ
り、重合したウレタンポリマーの溶液又は分散系は硬化
される。

【００７５】本発明の方法において有用な、重合可能な
又は重合したウレタン化合物、例えばウレタンプレポリ
マーは、イソシアネートを含むモノマー、水酸基を含む
モノマー及び適当な第三のモノマー単位をウレタンプレ
ポリマ−に共重合させることによって、重合可能なウレ
タン化合物に組み込まれる別のモノマー単位を含むこと
ができる。その他、本発明の方法に有用な重合可能な又
は重合したウレタン化合物は、好適には、実際上中性で
あるけれども、陰イオン性若しくは陽イオン性の重合可
能な若しくは重合したウレタン化合物も有用であると思
われる。

【００７６】より詳細には、本発明の方法において有用
なプリポリマー、ＤＥＳＭＯＤＥＲＭ ＫＢＨは、中性
の熱可塑性粒状の重合したウレタン物質であり、７０モ
ル％エチレングリコール及び３０モル％１，４−ブタン
ジオールからなるアジピン酸のポリエステル（Ｍｗ＝
２，０００）を７５；アジピン酸及び１，４−ブタンジ
オールのポリエステル（Ｍｗ＝２，２５０）を２５；
１，４−ブタンジオールを２５；及びジフェニルメタン
ジイソシアネートを８５の割合で反応させて得られる。
一般に、陽イオン性ウレタン類は、ポリイソシアネー
ト、ポリオール及び水酸基を含む第三級アミンの反応に
よって作られ、このポリウレタン類のアミン部分は次に
有機酸で中和され、さらに中性の重合したウレタンを水
中に分散する。従って、ＤＥＳＭＯＤＥＲＭ ＫＰＫ
は、アジピン酸、フタール酸及びエチレングリコールの
ポリエステル（Ｍｗ＝１，７００）を２００；トルエン
ジイソシアネートを５０；Ｎ−メチルジエタノールアミ
ンを２０；及びｐ−キシリレン ジクロリドを６の割り
合の反応生成物よりなる陽イオン性の、乳化剤を含まな
い重合ウレタン分散系である。

【００７７】本発明として、本発明に利用される特定の
ウレタン化合物は、ウレタンを含む組成物の他の成分、
例えば連続液体ビヒクルと混合した後、硬化して、蛋白
が透過し得る物理構造を有するポリマーのフィルム、膜
又は層を生成する。一般に、ウレタン化合物は、ウレタ
ンを含む組成物中に、ウレタンを含む組成物の全重量に
基づいて、約０．１重量％ないし約１０重量％、好適に
は約１重量％ないし約５重量％の範囲で存在する。さら
に、ウレタンを含む組成物は、中性のウレタン化合物、
陽イオン性ウレタン化合物、又は中性のウレタン化合物
及び陽イオン性ウレタン化合物の混合物のいずれかを含
有することができる。

【００７８】以下にさらに詳細に説明するように、本発
明の担体マトリックスは、蛋白の分析における色の分解
能及び感度に影響を及ぼす。ウレタンを含む組成物に用
いられるウレタン化合物の百分率及びウレタン化合物の
性質が、中性、陽イオン性若しくは中性／陽イオン性混
合物の何れかであれ、色の分解能の程度、呈色の安定性
及び発色の速度に影響を及ぼす。従って、本発明の方法
として、本発明のウレタン系担体マトリックスよりなる
分析対象物試験具は、色の分解能を改良し、色の安定性
を増加し、又は発色を速くするように設計されている。

【００７９】重合可能な、又は重合したウレタン化合物
の他に、担体マトリックスの製造に用いられるウレタン
を含む組成物は、無機相が水に不溶性無機化合物である
分散無機相を含む。ウレタンを含む組成物は、充填物と
して、ウレタンを含む組成物の全重量に基づいて、水に
不溶性の無機化合物、例えば硫酸バリウムの約１重量％
ないし約１０重量％、好適には約２重量％ないし約５重
量％を含むものである。充填物が本質的に白色であり、
指示薬色素と蛋白との反応で生成した呈色の検出及び定
量を妨げない限り；さらに、無機の充填物が本質的に水
に不溶であり、溶解した陰イオン又は陽イオンが、蛋白
の評価試験を化学的又は物理的に妨げない限り、充填物
として用いられる無機化合物の厳密な性質は重要ではな
い。そのため、本発明の方法で用いることができる不溶
な無機化合物の例としては、硫酸カルシウム、二酸化チ
タン、アルミナ、酸化亜鉛、酸化マグネシウム、酸化カ
ルシウム、二酸化ケイ素、タルク、マグネシウムアルミ
ニウムオキシド、マグネシウムチタニウムオキシド、酸
化バリウム、硫酸バリウム、硫酸ストロンチウム及びそ
の他の類似の、本質的に白色で水に不溶な無機化合物、
特に酸化物；又はそれらの組合せが挙げられる。

【００８０】不溶な無機化合物は、ウレタンを含む組成
物に粉末として組み込まれ、ウレタンを含む組成物の全
体にわたって水に不溶な無機化合物を均質に分散するの
に役立つ。さらに、不溶な無機化合物を粉末の形態で利
用することにより、硬化の工程の過程で、不溶な無機化
合物はウレタンを含む組成物の全体にわたって均質に分
散している。不溶な無機化合物が均質に分散しているこ
とで、不溶な無機化合物がフィルム、層又は膜の全体に
わたって均質に分散した重合ウレタン系のフィルム、層
又は膜を生成する。

【００８１】ウレタンを含む組成物は、微結晶セルロー
スのような不溶の有機充填物組成物の約１０重量％ない
し約４０重量％、好適には約２０重量％ないし約３５重
量％を含む。無機充填物と同様に、不溶な有機充填物を
組成物に粉末として加え、ウレタンを含む組成物及び重
合したウレタン系フィルムの全体にわたって、不溶な有
機充填物を均一に分散させる。さらに、好適には、不溶
な有機充填物は実質上白色であり、十分に水に不溶であ
って蛋白の分析を妨げないものである。本発明として、
有機充填物は、無機充填物と共にウレタンを含む組成物
に含まれ、フィルムの接着性、フィルムの厚さ及びフィ
ルムの湿潤性を改善する。従って、適当なその他の有機
充填物の例としては、微結晶ニトロセルロース及びその
他の微結晶セルロース製物質が挙げられる。

【００８２】ウレタンを含む組成物は、また界面活性剤
を含み、不溶な無機化合物及び不溶な有機充填物を湿潤
性にするのに役立ち、そのために不溶な無機化合物及び
不溶な有機充填物を、ウレタンを含む組成物の全体にわ
たって均質に分散させるのを助けている。界面活性剤
は、ウレタンを含む組成物の全重量に基づいて、０重量
％ないし約５重量％以下で存在することができる。界面
活性剤は、蛋白と指示薬組成物との反応から生じた色を
安定化するのに役立っている。

【００８３】本発明の方法に有用な界面活性剤は、必ず
しも特別な型に限定されるものではなく、一般に陰イオ
ン界面活性剤、例えばアンモニウム、アルキルアンモニ
ウム、ドデシルベンゼンスルホン酸カリウム及び／又は
ナトリウム、アルキル硫酸エステル類、アルキルエーテ
ル硫酸エステル類、ジオクチルスルホスクシネート、ア
ルファオレフィン硫酸エステル類及びアルキルサルコシ
ネート類；又は、それらの混合物である。同様に、非イ
オン界面活性剤としては、この技術分野でよく知られて
いるように、例えばポリエチレングリコール類、ポリプ
ロピレングリコール類、エトキシ化アルコール類、ノノ
キシノール類及びオクトキシノール類が、ウレタンを含
む組成物に用いられる。上記の陰イオン及び非イオン界
面活性剤は、ウレタンを含む組成物に混合し得る界面活
性剤の例として挙げたものであって、限定されるもので
はない。一般に、蛋白に対する鋭敏で正確な分析を行な
う点で、界面活性剤が担体マトリックスに対して悪影響
を及ぼさない限り、ウレタンを含む組成物に加えられる
界面活性剤は界面活性剤の特別な型又は種類に限定され
るものではない。

【００８４】さらに、その他の界面活性剤、例えばポリ
ジメチルシロキサン液のようなケイ素を含む組成物を、
ウレタンを含む組成物の全重量に基づいて、２％以下の
重量百分率でウレタンを含む組成物に組み入れることが
できる。これらのケイ素を含む物質は表面張力が低く、
そのため不溶な無機化合物及び有機充填物を湿性にする
のを助けている。ケイ素を含む物質は、またウレタンを
含む組成物の表面張力を下げて水準測量効果を発揮し、
均一な厚さを有する平滑で「光沢のある」重合ウレタン
系フィルム、膜又は層を生成する。

【００８５】ウレタンを含む組成物は、水溶性セルロー
ス誘導体の組成物、例えばヘルクレス（Ｈｅｒｃｕｌｅ
ｓ）社（ウィルミングトン市、デラウェア州）からＫＬ
ＵＣＥＬの商品名で市販されているヒドロキシプロピル
セルロースの０％ないし約６重量％を含んでいてもよ
い。水溶性セルロース誘導体は、フィルムの孔サイズを
増加するのに役立っている。それ故、その他の適当な水
溶性セルロース誘導体の例としては、カルボキシメチル
セルロース、エトキシ化セルロース、ヒドロキシエチル
セルロース、ヒドロキシブチルセルロース及びヒドロキ
シプロピルセルロースの各ナトリウム；又は、それらの
組合せが挙げられる。水溶性セルロース誘導体の外に、
又は代わりに、水中に分散し得るセルロース誘導体、例
えばキサンタンゴム、グアールゴム、アルギン酸エステ
ル類、シリコーンゴム、カルボキシメチルグアール、ヒ
ドロキシプロピルグアール、ガッティガム、カラヤゴ
ム、カラゲーニン類、トラガカントゴム、アラビアゴ
ム、アガールゴム又はイナゴマメゴムを、ウレタンを含
む組成物に加えることもできる。

【００８６】上記で説明したように、ウレタンを含む組
成物はまた、ウレタン化合物を溶解又は分散し得る例え
ば有機溶媒のような液体ビヒクル、及び入手できる任意
の界面活性剤又はケイ素を含む物質を含む。液体ビヒク
ルはまた、不溶性無機化合物及び不溶性有機化合物充填
物を分散し得るものでなければならない。この液体ビヒ
クルは比較的不活性でウレタン化合物を反応せず、液体
ビヒクルは比較的低い温度で蒸発して、ウレタンを含む
組成物を硬化した後に乾式担体マトリックスのフィル
ム、膜又は層を生成するものである。有機の非プロトン
性溶媒、例えばジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロ
リドン、及びジメチルスルホキシド、又はそれらの組合
せは、ウレタンを含む組成物を溶解及び分散する所要の
溶解性；液状ビヒクルとウレタン化合物との相互作用を
起こさせない所要の不活性；及び溶媒を含まない重合ウ
レタン系フィルム、膜又は層を生成する所要の蒸気圧を
有することが知られている。

【００８７】同様に、低級アルコール類、例えばメチル
アルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコー
ル、イソプロピルアルコール、ｎ−ブチルアルコール、
ｓｅｃ−ブチルアルコール、イソブチルアルコール及び
ｔｅｒｔ−ブチルアルコールのような１ないし４個の炭
素原子を有するアルコールは、所要の溶解性、不活性及
び蒸気圧を有し、溶媒を含まない重合ウレタン系フィル
ムを生成する。これらの低級アルコール類は、単独で、
他の低級アルコールと混合し、又は、上記の非プロトン
性溶媒と混合して使用することができる。硬化の工程で
実質的に除去される液体ビヒクルは、ウレタンを含む組
成物の全重量に基づいて、少なくとも約４０重量％ない
し約８８．９重量％までの量で、ウレタンを含む組成物
の中に含まれる。

【００８８】非プロトン性溶媒及びアルコールよりなる
液体ビヒクルの使用は、ウレタンを含む組成物から液状
ビヒクルを除去するに要する硬化時間を減少することが
知られている。例えば、Ｎ−メチルピロリドンのみから
なる液体ビヒクルを完全に除去するには１０分間の硬化
時間；ジメチルホルムアミドのみからなる液体ビヒクル
を完全に除去するには２分間の硬化時間を必要とする；
これに対し、６０：４０の重量比のジメチルホルムアミ
ドとメチルアルコールよりなる液体ビヒクルを完全に除
去するには約３０秒で足りる。つまり、液体ビヒクルを
適当に選択することで、硬化工程を完了するに要する時
間が短縮される。

【００８９】

【実施例】本発明の重要な特徴として、ウレタンを含む
組成物は、実施例１及び２に記載した処方により作られ
る。以下に詳細に説明するように、実施例１及び２のウ
レタンを含む組成物は、湿性のフィルムとして、疎水性
プラスチックのハンドルに適用して硬化し、本発明の担
体マトリックスを形成する。硬化後、適当な指示薬組成
物は担体組成物に組み込まれ、通常の浸して読む試験片
の方法によって、標準アルブミン液を評価分析するのに
使用される試験用パッドを形成する。

【００９０】実施例１ ウレタンを含む組成物 ＤＥＳＭＯＤＥＲＭ ＫＢＨ（中性ウレタン） ２．９％ 微結晶性セルロース ２４．３％ 硫酸バリウム ２．８％ ジメチルホルムアミド ７０．０％ 計 １００．０％

【００９１】実施例２ ウレタンを含む組成物 ＤＥＳＭＯＤＥＲＭ ＫＢＨ（中性ウレタン） ２．６％ ヒドロキシプロピルセルロース ０．６％ 微結晶性セルロース ２４．０％ 硫酸バリウム ２．８％ ジメチルホルムアミド ７０．０％ 計 １００．０％

【００９２】実施例１及び２のウレタン組成物の各々を
作る場合、最初に、ウレタン化合物ＤＥＳＭＯＤＥＲＭ
ＫＢＨを小量のジメチルホルムアミドと予め混合し、
均質な組合せを生成する。同様に、存在する場合には、
最初に、ヒドロキシプロピルセルロースも小量のジメチ
ルホルムアミドと予め混合し、第二の均質な組合せを生
成する。次に、実施例１及び２の成分を混合し、均質な
ウレタンを含む組成物が得られるまで、高速ミキサーを
用いて完全に混合する。

【００９３】本発明の担体マトリックスを作るには、実
施例１の組成物又は実施例２の組成物の何れかを、湿性
のフィルムとして、ポリエチレン テレフタラート（Ｐ
ＥＴ）のような透明で不透過性のプラスチック支持体に
塗布又は被覆する。ドクターブレードを用いて、約１５
０μ（ミクロン）ないし約７５０μ（ミクロン）の液体
の厚さに調節することにより組成物で被覆した湿性フィ
ルムの厚さを調節する。プラスチック支持体をウレタン
を含む組成物で被覆した後、被覆されたプラスチック支
持体を、約２５°Ｃないし約４３°Ｃの一定の温度に保
たれた循環する水浴に、約５分ないし約３０分間浸す。
次いで、部分的に硬化した被覆されたプラスチック支持
体を室温の水浴に約３０分ないし約１６時間浸して、ウ
レタンを含む組成物を完全に硬化する。完全な硬化後、
被覆されたプラスチック支持体は、風乾又はオーブン乾
燥し、重合ウレタンベース化合物のフィルム、膜又は層
よりなるこの発明の担体マトリックスを生成する。

【００９４】上記の工程は、好ましい硬化の工程である
けれども、その代わりに、被覆されたプラスチック支持
体を水を入れた超音波浴に入れ、約３０秒、１分又は２
分間超音波処理した後、約８０°Ｃで約２０分オーブン
乾燥；又は、水による硬化の工程を省略し、プラスチッ
ク支持体を被覆したウレタンを含む組成物を、約８０°
Ｃで、約２０分間のオーブン乾燥して、プラスチック支
持体上に被覆されたウレタンを含む組成物を硬化する。
水による硬化工程を完全に省くことができることは注意
すべきである。しかしながら、水中で硬化された本発明
の担体マトリックスよりなる試験用パッドの性質は、水
中で硬化されなかった本発明の担体マトリックスよりな
る試験用パッドよりも優れている。水で硬化された担体
マトリックスが示す優秀性は、理論的に、水での硬化の
過程での液体ビヒクルの完全な除去、及び水での硬化に
よって生じた好ましいポリウレタンの孔の形状及び孔の
大きさの分布によるものである。

【００９５】通常、ウレタンを含む組成物を硬化して重
合したウレタンベース化合物を生成した後に得られた本
発明の担体マトリックスは、その中に組み込まれた指示
薬組成物を含み、試験用パッドを形成する。しかしなが
ら、指示薬組成物よりなる試薬がウレタンを含む組成物
の製造に用いられる液体ビヒクル、例えばジメチルホル
ムアミド又はアルコールに可溶である場合、さらに指示
薬組成物よりなる試薬が水に不溶である場合、指示薬組
成物は、ウレタンを含む組成物に組み込まれ、硬化前に
疎水性のプラスチック上にウレタンを含む組成物で被覆
される。

【００９６】

【発明の効果】適当な指示薬組成物を組み込んだ本発明
の担体マトリックスを含む試験用パッドよりなる試験具
を用いて得られた新規で予想外の結果を示すために、試
験試料中の蛋白量を検出し測定する蛋白の分析に、色空
間表示を行なった。この分析は、未処理の濾紙吸湿性基
質に組み込まれた指示薬組成物よりなる試験用パッド；
重合ウレタンベース化合物で均質に浸漬した繊維質の吸
湿性物質を含む担体マトリックスに組み込まれた指示薬
組成物よりなる試験用パッド；及び、本発明の担体マト
リックスに組み込まれた指示薬組成物よりなる試験用パ
ッドのような、各種の試験用パッドを有する乾式相試験
片を利用するものである。

【００９７】図１ないし図３は、標準アルブミン液を、
未処理の濾紙よりなる担体マトリックス（図１）；重合
ウレタンベース化合物で均質に浸漬した濾紙基質よりな
る担体マトリックス（図２）；又は、重合ウレタンベー
ス化合物の蛋白透過性フィルム、膜又は層よりなる本発
明の担体マトリックス（図３）に組み入れられた指示薬
組成物よりなる試験用パッドを含む各種の乾式相試験片
と、接触させて得られた色空間表示である。

【００９８】例えば、図１は乾式相試験片を、アルビミ
ンを含まない（０）、アルブミン１０mg／dl（１０）、
アルブミン５０mg／dl（５０）又はアルブミン１００mg
／dl（１００）を含む標準溶液に接触させた結果の色空
間表示である。この試験片は、未処理の濾紙担体マトリ
ックスにクエン酸緩衝液で緩衝したテトラブロモフェノ
ールブルー（ＴＢＰＢ）を含む指示薬組成物が組み込ま
れた試験用パッドからなっている。図２は、ＴＢＰＢ指
示薬組成物を、重合ウレタンベース化合物で均質に浸漬
したＷＨＡＴＴＭＡＮ ＣＣＰ５００濾紙よりなる担体
マトリックスを含む試験用パッドを有する乾式相試験片
を用いて、蛋白の評価試験を行なった結果の色空間表示
である。ＷＨＡＴＭＡＮ ＣＣＰ５００濾紙はワットマ
ン（Ｗｈａｔｍａｎ）社（メイデンヘッド市、ケント
州、英国）から市販されている。濾紙は、ＤＥＳＭＯＤ
ＥＲＭ ＫＢＨの２重量％ジメチルホルムアミド溶液で
浸漬し、硬化して乾燥した。これらの乾式相試験片を、
アルビミンを含まない（０）、アルブミン１０mg／dl
（１０）、アルブミン２０mg／dl（２０）、アルブミン
３０mg／dl（３０）、アルブミン１００mg／dl（１０
０）及びアルブミン５００mg／dl（５００）を含む標準
アルブミン含有溶液に接触させた。図３は、本発明の担
体マトリックスに組み込まれたＴＢＰＢ指示薬組成物よ
りなる試験用パッドを有する乾式相試験片を用いて、蛋
白の評価試験を行なった結果の色空間表示である。実施
例１のウレタンを含む組成物から作られた本発明の担体
マトリックスよりなる乾式相試験片を、アルビミンを含
まない（０）、アルブミン１５mg／dl（１５）、アルブ
ミン３０mg／dl（３０）及びアルブミン１００mg／dl
（１００）を含む標準アルブミン含有溶液に接触させ
た。

【００９９】図１ないし図３に示すように、色空間表示
は三軸、Ｌ＊、Ａ＊及びＢ＊軸を有している。垂直軸に
表示されたＬ＊の値は、色の強度の尺度であり、大きな
Ｌ＊の値は明色を意味し、Ｌ＊＝０は完全な黒色を意味
する。水平のＡ＊軸は、緑から赤への変色の尺度であ
り、Ａ＊の値のプラスが大きくなるにつれて、より赤色
を、同様に、Ａ＊の値のマイナスが大きくなるにつれ
て、より緑色を意味する。同様に、第三のＢ＊軸は、青
色から黄色への変色の尺度であり、Ｂ＊の値が大きくな
るにつれて、より黄色を、同様に、Ｂ＊の値が小さくな
るにつれて、より青色を意味する。

【０１００】色空間差（ΔＥ）は次式によって計算され
る： ΔＥ＝ （Ｌ₁ ＊−Ｌ₂ ＊）² ＋（Ａ₁ ＊−Ａ₂ ＊）²
＝（Ｂ₁ ＊−Ｂ₂ ＊ ²（式１）、式中：Ｌ₁ ＊、Ａ₁ ＊
及びＢ₁ ＊は、第一の標準蛋白溶液について測定された
色空間値である。 Ｌ₂ ＊、Ａ₂ ＊及びＢ₂ ＊は、第一の標準蛋白溶液と異
なる蛋白濃度を有する第二の標準蛋白溶液について測定
された色空間値である。 ΔＥは、第一及び第二の標準蛋白溶液の色空間表示の色
空間差である。

【０１０１】色空間差（ΔＥ）は、三次元色空間表示の
二点間の直線距離である。理論的には、１つの色ブロッ
クの色空間差は人間の目が識別できる最小の色差であ
る。しかしながら、個人の視覚能力には生来の差異があ
るので、実際に、かつ確実に色を識別するには約５の色
ブロックの色空間差（ΔＥ）が必要である。

【０１０２】図１ないし図３の色空間表示に表示された
Ｌ＊、Ａ＊及びＢ＊の値は、この技術分野でよく知られ
ている標準式を用いて、４００ｎｍ（ナノメーター）か
ら７００ｎｍの間を等間隔に分けた１６の異なる波長で
測定された百分率の反射率測定値から計算される。一般
に、１６の異なる波長の各々における百分率の反射率
は、その波長における光の強度を掛けたものである。次
に、これらの値に赤、青及び緑の各色についての標準秤
量関数を掛け、最後にこれらを加える。これらの計算か
ら三種の三刺激値Ｘ、Ｙ及びＺを出し、Ｌ＊、Ａ＊及び
Ｂ＊は、以下の式を用いてＸ、Ｙ及びＺの三刺激値から
計算される： Ｌ＊＝１１６ｘ［（Ｙ／Ｙｏ）１／３−１６）］ （式２） Ａ＊＝５００ｘ［（Ｘ／Ｘｏ）１／３−（Ｙ／Ｙｏ）１／３］ （式３） Ｂ＊＝２００ｘ［（Ｙ／Ｙｏ）１／３−（Ｚ／Ｚｏ）１／３］ （式３） 式中：Ｘｏ、Ｙｏ及びＺｏは、完全な白色についての三
刺激値であり（すなわち、すべての波長において、反射
率＝１００％）、Ｘ、Ｙ及びＺは、４００ｎｍと７００
ｎｍの間の１６種の波長から上記のように計算された三
刺激値である。

【０１０３】図１ないし図３の色空間表示から、色空間
差（ΔＥ）を算出し、表１に示した。表１において、Δ
Ｅ（Ａｌｂ １０−０）の項は、１０mg／dlのアルビミ
ン及び０mg／dlのアルビミンを含む蛋白溶液の蛋白の評
価試験の色空間差である。同様に、ΔＥ（Ａｌｂ ５０
−０）の項は、５０mg／dlのアルビミン及び０mg／dlの
アルビミンを含む蛋白溶液の蛋白の評価試験の色空間差
である。ΔＥ（Ａｌｂ１００−０）及びΔＥ（Ａｌｂ
５００−０）の項は、同様に定義される。

【０１０４】 表１ 各種の担体マトリックスに組み込まれたＴＢＰＢ指示薬組成物を用いた蛋白の評 価試験における色空間差（ΔＥ） 図番号 担体マトリックス ΔＥ ΔＥ ΔＥ ΔＥ (Alb 5-0) (Alb 10-0) (Alb 15-0) (Alb 20-0) １ 未処理濾紙 − ４．８ − ９．９ ２ 重合ウレタン系 − ６．６ − １２．３ 化合物を浸漬し た濾紙 ３ 重合ウレタン系 ９．６ １４．４ １８．９ − 化合物

【０１０５】 表１−続き 図番号 担体マトリックス ΔＥ ΔＥ ΔＥ ΔＥ (Alb 30-0) (Alb 50-0) (Alb 100-0) (Alb 500-0) １ 未処理濾紙 １２．１ １９．２ ２５．５ ３６．１ ２ 重合ウレタン系 １６．８ − ３７．２ ５５．６ 化合物を浸漬し た濾紙 ３ 重合ウレタン系 ３１．６ − ５４．３ − 化合物 ０＝アルビミン０mg／dl Ａｌｂ５＝アルビミン５mg／dl Ａｌｂ１０＝アルビミン１０mg／dl Ａｌｂ１５＝アルビミン１５mg／dl Ａｌｂ２０＝アルビミン２０mg／dl Ａｌｂ３０＝アルビミン３０mg／dl Ａｌｂ５０＝アルビミン５０mg／dl Ａｌｂ１００＝アルビミン１００mg／dl Ａｌｂ５００＝アルビミン５００mg／dl

【０１０６】図１及び表１の色空間表示が示すように、
標準アルブミン溶液の蛋白試験法が、未処理の濾紙基質
に組み込まれた緩衝化したテトラブロモフェノールブル
ー（ＴＢＰＢ）指示薬を有する試験用パッドよりなる、
乾式相試験片を用いて行なわれた。図１及び表１が示す
ように、アルブミンを含まない溶液での色空間差は４．
８の色ブロックである。通常、人間の目は約５の色ブロ
ックの色空間差を有する色しか識別できないので、この
分析は、０mg／dlのアルブミン溶液と接触した試験片
と、１０mg／dlのアルブミンと接触した試験片の間の色
の差異を判定するので、試料がどの程度の量のアルブミ
ンを含有していたかに関しては決定的でない。さらに、
表１及び図１は、アルブミンが２０mg／dl、３０mg／d
l、５０mg／dl及び１００mg／dlの存在に由来する色の
差異は、それらの色空間差がそれぞれ９．９、１２．
１、１９．２及び２５．２の色ブロックなので、人間の
目で検出できることを示している。

【０１０７】濾紙基質を重合ウレタンベース化合物で均
質に浸漬することによって、変色の分解能及び差異の判
定が可能な程に改善され、０mg／dlのアルブミン及び１
０mg／dlのアルブミンを含む試料の差異を、試験者は視
覚的に判定することができる。図２及び表１から、重合
ウレタンベース化合物で浸漬した濾紙を含む担体マトリ
ックスに指示薬組成物を組み入れた試験用パッドよりな
る試験具を使用した場合、１０mg／dlのアルブミンを含
む溶液とアルブミンを含まない溶液との色空間差（Δ
Ｅ）は、６．６の色ブロックである。このような色空間
差は、人間の目によって十分に識別され；図１の未処理
濾紙基質による色空間差を実質的に改善しており；試料
中の約１０mg／dl以下の蛋白レベルの検出及び測定を可
能にしている。同様に、表１及び図２は、アルブミンを
含まない溶液と比較した、２０mg／dl、３０mg／dl、１
００mg／dl及び５００mg／dlのアルブミン溶液について
の色の差異判定の程度が強められているのを示してい
る。

【０１０８】しかしながら、図３及び表１は、本発明の
担体マトリックスよりなる試験具を使用することによっ
て、変色の色の分解能及び差異判定の程度が驚異的に、
又、予想外に改善され、試験者は０mg／dl及び５mg／dl
のアルブミンを含む試料の間の差異を視覚的に識別する
ことができる。重合ウレタンベース化合物のフィルム、
膜又は層に指示薬組成物を組み入れた試験用パッドより
なる試験具を使用した場合、５mg／dlのアルブミンを含
む溶液とアルブミンを含まない溶液との色空間差が、
９．６であることが観察されている。この色の差は、人
間の目によって容易に識別され、図１及び図２の色空間
差表示を作るのに用いられた試験具の担体マトリックス
に重大な改良があったことを示している。同様な結果
は、実施例２のウレタンを含む組成物から作られた担体
マトリックスよりなる試験具を用いた場合にも観察され
る。

【０１０９】本発明の試験用パッドが使用される場合の
５mg／dlのアルブミンを含む溶液とアルブミンを含まな
い溶液との間の色空間差（９．６）は、重合ウレン系化
合物で浸漬した濾紙よりなる試験用パッドによって分析
された１０mg／dlのアルブミンを含む溶液とアルブミン
を含まない溶液との間の色空間差（６．６）よりも大幅
に大きい。従って、本発明の試験器具は、約５mg／dl程
度の低い蛋白濃度の試料を正確に試験するのに使用する
ことができる。さらに、本発明の試験具を利用する試験
法で観察される色空間差は、蛋白の全濃度範囲にわたっ
てより大きくなっている。そのため、色の分解能及び差
異の判定は改善され、分析の結果はより正確である。

【０１１０】全体として、図１ないし図３及び表１は、
重合ウレタンベース化合物のフィルム、膜又は層よりな
る担体マトリックスに組み込まれた指示薬組成物が、液
体試料中の総蛋白含量の評価試験に際して、特に３０mg
／dl以下の低蛋白レベルにおいて、色の分解能及び試験
感度を改善していることを示している。従来の技術とは
対象的に、本発明の方法と器具は、指示薬を含む担体マ
トリックスと約５mg／dlのレベルの蛋白を含む試料との
接触に由来する変色の差異の視覚的識別と、それによる
より正確で信頼性のある試験評価を可能にしている。

【０１１１】本発明の担体マトリックスによって得られ
る利点と長所をさらに明らかに示すために、現在、蛋白
の評価試験に用いられている市販の試験片を、実施例１
及び２の組成物から作られた本発明の担体マトリックス
と比較した。市販の試験片は、マイルス（Ｍｉｌｅｓ）
社（エルクハート市、インディアナ州）から販売されて
いるＡＬＢＵＳＴＩＸであった。ＡＬＢＵＳＴＩＸ試験
片は、担体マトリックスに緩衝化したテトラブロモフェ
ノールブルー（ＴＢＰＢ）指示薬組成物を組み入れた試
験用パッドを含んでいる。本発明の担体マトリックスを
作るために、実施例１の組成物又は実施例２の組成物を
ドクターブレードを用いてプラスチックハンドルに塗布
し、約７５０μ（ミクロン）の湿った厚みを有する湿っ
たフィルムを作成した。実施例１又は実施例２のウレタ
ンを含む組成物の湿ったフィルムを、プラスチックハン
ドルに塗布した後、既述の水での硬化法により湿ったフ
ィルムを硬化し、乾燥した。硬化及び乾燥後、担体マト
リックスをＴＢＰＢ指示薬組成物で浸漬し、得られた試
験用パッドを蛋白含量の標準液を試験するのに使用し
た。

【０１１２】アルブミンの試験は、試験用パッドを飽和
するに十分な時間、試験片を蛋白を含む溶液に浸し、次
いで蛋白がＴＢＰＢ指示薬組成物と相互作用するのに十
分な時間待って、最後に変色のような応答について試験
片を検査することにより行なわれる。表２は、異なる担
体マトリックスについて各種のアルブミンレベルで得ら
れた平均色空間差（ΔＥ）を要約したものである。試験
片は、試験片を試料から取り出して約１分後に応答を検
査した。

【０１１３】 表２ 各種の担体マトリックスを用いた異なるアルブミン濃度について色空間差 担体マトリックス ΔＥ ΔＥ ΔＥ (Alb 5-0) (Alb 10-0) (Alb 15-0) ＡＬＢＵＳＴＩＸ ２．１ ２．８ ５．４ 重合ウレタン系 ６．２ １０．５ １６．６ フィルム（実施例１） 重合ウレタン系 ６．７ １０．４ １６．０ フィルム（実施例２）

【０１１４】

【０１１５】表２に示すデータは、現在の蛋白試験法
が、約１５mg／dl以下の蛋白濃度を検出又は測定するこ
とができないことを示している。ＡＬＢＵＳＴＩＸ試験
用パッドの場合、５mg／dl及び１０mg／dlの蛋白濃度を
有する溶液に対する色空間差は、それぞれ２．１及び
２．８の色ブロックであった。人間の目は、このような
僅かな色空間差を検出することは不可能で、試験片は見
かけは変色を起こしていない。１５mg／dlの蛋白濃度に
おいて、５．４の色ブロックの検出限界の色空間差が現
われる。従って、現在の蛋白用の試験片で変色が起こら
ない場合、試験者は試料は約１５mg／dl以下の蛋白を含
むと評価し得るのみであるが、例えば１００mg／dlの蛋
白に対する色空間差は蛋白を検出及び定量を行なうのに
十分大きく、ΔＥは２６．８の色ブロックである。

【０１１６】しかしながら、蛋白試験用の試験具が本発
明の担体マトリックスを含む場合、試験者は１５mg／dl
以下、例えば約５mg／dl以下のアルブミン濃度を正確か
つ確実に決定することができる。表２に要約したデータ
から、実施例１及び２の何れかのウレタンを含む組成物
から作られた担体マトリックスと、アルブミンの５mg／
dl溶液を接触させて、色ブロックが６よりも大きい検出
可能な色空間差が得られることが判る。同様に、本発明
の担体マトリックスは、１０mg／dlのアルブミンを含む
試料に対し比較的顕著な発色を起こすので、試験者は試
料がアルブミンが５mg／dl又は１０mg／dl含むかを決定
することができる。低い蛋白濃度に対してここに示した
感度は、この技術分野において新規であり予想以上のも
ので、簡単な乾質相試験片の方法によって約１５mg／dl
以下の蛋白レベルの正確な検出と定量が可能である。

【０１１７】さらに、本発明の担体マトリックスを試験
具に用いる場合、１５mg／dl、３０mg／dl及び１００mg
／dlのような高いアルブミン濃度でも比較的顕著な変色
が観察され、比較的高い蛋白濃度で、より鋭敏で正確か
つ確実な蛋白評価試験が得られる。例えば、現在のＡＬ
ＢＵＳＴＩＸ試験用パッドによる色空間差は１５mg／dl
のアルブミン濃度で感知限界の５．４の色ブロックであ
るのに、本発明の担体マトリックスを含む試験用パッド
は、容易に差異を判定し得る約１６の色ブロックの色空
間差を生じる。それゆえに、表２に掲げた結果は、低蛋
白尿症、すなわち約１５mg／dl以下の蛋白濃度を試験す
る乾質相試験片は、低濃度蛋白の分析の技術限界のため
利用できなかったけれども、今回は利用することができ
ることを示している。その上、本発明の担体マトリック
スは約１５mg／dl以上の蛋白濃度に対する感度を高めて
いる。

【０１１８】それに応じて、本発明の担体マトリックス
を利用することにより、より正確な蛋白分析試験が、驚
異的及び予想外に得られる。さらに、本発明の担体マト
リックスは、試験感度を大幅に改善した担体マトリック
スを利用することで、試料中の蛋白の迅速で正確な試験
法を提供し、約５mg／dl程度の低い蛋白濃度の検出及び
定量を可能にする。そのため、一般に、適当なウレタン
を含む組成物の硬化は、乾質相試験片の蛋白、特に低い
濃度の蛋白の試験感度、確度及び精度を高める担体マト
リックスを提供する。

【０１１９】本発明の別の重要な特徴として、ジメチル
ホルムアミドのような非プロトン性溶媒の約３０重量％
ないし約７０重量％、及びメチルアルコール、エチルア
ルコール又はイソプロピルアルコールのようなアルコー
ルの約３０重量％ないし約７０重量％、好適には約３５
重量％ないし約６０重量％よりなる液体ビヒクルにウレ
タン化合物を溶解又は分散することは、ウレタンを含む
組成物の硬化時間を約３０秒程度に短縮することが証明
されている。さらに、溶媒を混合することは非プロトン
性溶媒の不快な臭気を減少し；液体試料中の蛋白に対す
るより大きな応答、従って高い感度を提供する。

【０１２０】重合したウレタンベース化合物が、濾紙の
ような吸湿性の物質を含む担体マトリックスと比較し
て、顕著な変色を起こす担体マトリックスを生成するこ
とは注目に値する。全体として、乾質相試験片による蛋
白分析に、本発明の担体マトリックスを用いることによ
って、色空間差は改善される。それゆえ、本発明の担体
マトリックスは、蛋白試験用に考案された乾質相試験片
に用いられる改良された試験用パッドとなる。結果的
に、本発明の担体マトリックスを利用することで、蛋白
試験感度、特に低い蛋白濃度における感度は劇的に増加
し、蛋白試験のために改良された乾質相試験片の方法が
得られる。

【０１２１】蛋白の分析に用いる指示薬組成物の担体マ
トリックスとして、重合ウレタン系フィルム、層又は膜
を用いることに関して、実施例１の組成物又は実施例２
の組成物のいずれかを硬化することによって得られた
膜、層又はフィルムは、試験試料を膜からふいて乾燥さ
せた後でさえも優れた色の差異と優れた色の安定性があ
ることが判った。例えば、実施例１及び実施例２の組成
物を硬化して作られた膜又はフィルムを用いた被検物の
試験具において、アルブミンと接触して生じた変色は、
数日間経過した後も色の強度又は濃度に視覚的な低下を
認めなかった。本発明の重要な特徴として、アルブミン
含量に応じて生じた色は、視覚的又は機械的のいずれか
で、及び担体と接触して残っている試料と共に、又は担
体マトリックスから試料をふき去った後の何れかで測定
される。さらに、実施例１及び実施例２は、硬化して、
蛋白、特に低い蛋白濃度での正確な定量を行なう担体マ
トリックスを提供することができるウレタンを含む組成
物の例示であって、単に限定のためのものではない。

【０１２２】従って、本発明の重要な特徴として、尿及
びその他の液体試料中の総蛋白含量に対するより正確で
確実な分析を、乾質相試験片の蛋白試験において本発明
の担体マトリックスを利用して行なうことができる。本
発明の担体マトリックスは、この試験での色の分解能を
改善し、従って、特にアルブミンが約３０mg／dl以下の
低レベルにおける分析感度を改善している。さらに、本
発明の担体マトリックスを含む乾質相試験片を用いた分
析を実施することにより、試料中の少量例えば約５mg／
dlの蛋白の存在又は濃度を測定する、新規で予期以上の
正確な方法が提供される。

【０１２３】この発明は、以上に説明したように、この
発明の精神と範囲から逸脱することなく多くの修正及び
変更を実行できる、従って、添付した請求の範囲によっ
て指定した限定以外は制約されるものではない。

【図面の簡単な説明】

【図１】未処理の濾紙の担体マトリックスを含み、指示
薬色素テトラブロモフェノールブルー（ＴＢＰＢ）が組
み込まれた乾式相試験片を用い、それぞれアルブミン
０、１０、５０及び１００mg／dlを含む液体試料の試験
を示す色空間表示である。

【図２】重合ウレタンベース化合物で均質に浸漬した濾
紙基質よりなる担体マトリックスを含み、指示薬色素テ
トラブロモフェノールブルー（ＴＢＰＢ）が組み込まれ
た乾式相試験片を用い、それぞれアルブミン０、１０、
２０、３０、１００及び５００mg／dlを含む液体試料の
試験を示す色空間表示である。

【図３】重合ウレタンベース化合物のフィルムよりなる
担体マトリックスを含み、指示薬色素としてテトラブロ
モフェノールブルー（ＴＢＰＢ）が組み込まれた乾式相
試験片を用いて、それぞれアルブミンの０、５、１０、
１５、３０及び１００mg／dlを含む液体試料の試験を示
す色空間表示である。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成４年９月９日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】発明の名称

【補正方法】変更

【補正内容】

【発明の名称】 総蛋白を分析するための試験用パッド
の製造方法、試験具、それを用いる測定方法及び試験具
の製造方法

フロントページの続き (72)発明者 ジエームス・エイチ・ペンダーグラス アメリカ合衆国、インデイアナ州、46635、 サウス・ベンド、ハイランド・ドライブ 52996 (72)発明者 キヤリー・エー・リトツシイ アメリカ合衆国、インデイアナ州、46514、 エルクハート、コロンビアン・アベニユー 1535

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次の各工程すなわち、 （ｉ）適当な液体ビヒクルに分散した、ウレタンを含む
   組成物の全量に基づいて、約０．１重量％ないし約１０
   重量％のウレタン化合物、約１重量％ないし約１０重量
   ％の水に不溶な無機化合物、及び約１０重量％ないし約
   ４０重量％の不溶な有機化合物よりなるウレタンを含む
   組成物の層を形成する工程； （ｉｉ）ウレタンを含む組成物の層を硬化して液体ビヒ
   クルの大部分を除去し、担体マトリックスを形成する工
   程； （ｉｉｉ）担体マトリックスを乾燥する工程； （ｉｖ）予め定めた化合物と検出可能な相互作用を起こ
   すことができる指示薬組成物を担体マトリックスに組み
   込んで、試験用パッドを形成する工程；及び （ｖ）試験用パッドを乾燥する工程 を含むことを特徴とする液体試料中の予め定められた化
   合物の存在又は濃度を測定するための試験用パッドの製
   造方法。
2. 【請求項２】 ウレタン化合物が、ウレタンを含む組成
   物の全重量に基づいて約１重量％ないし約５重量％の範
   囲の量で、ウレタンを含む組成物中に存在する請求項１
   記載の方法。
3. 【請求項３】 ウレタンを含む組成物中の、水に不溶な
   無機化合物が、硫酸カルシウム、二酸化チタン、アルミ
   ナ、酸化亜鉛、酸化マグネシウム、酸化カルシウム、二
   酸化ケイ素、タルク、マグネシウムチタニウムオキシ
   ド、酸化バリウム、硫酸バリウム、硫酸ストロンチウム
   及びそれらの組合せよりなる群から選ばれる請求項１記
   載の方法。
4. 【請求項４】 水に不溶な無機化合物が、ウレタンを含
   む組成物の全重量に基づいて約２重量％ないし約５重量
   ％の範囲の量で、ウレタンを含む組成物中に存在する請
   求項１記載の方法。
5. 【請求項５】 ウレタンを含む組成物中の不溶な有機化
   合物が、微結晶性セルロース、微結晶性ニトロセルロー
   ス、又はそれらの組合せである請求項１記載の方法。
6. 【請求項６】 不溶な有機化合物が、ウレタンを含む組
   成物の全量に基づいて約２０重量％ないし約３５重量％
   の範囲の量で、ウレタンを含む組成物中に存在する請求
   項１記載の方法。
7. 【請求項７】 液体試料が透過可能であり、ウレタンを
   含む組成物の全量に基づいて、約０．１重量％ないし約
   １０重量％のウレタン化合物、約１重量％ないし約１０
   重量％の水に不溶な無機化合物、約１０重量％ないし約
   ４０重量％の不溶な有機化合物、及び約４０重量％ない
   し８８．９重量％の適当な液体ビヒクルよりなるウレタ
   ンを含む組成物から形成される、ウレタンベース化合物
   の重合層を含み、蛋白と相互作用して担体マトリックス
   中に検出可能な又は定量可能な応答を生成することがで
   きる指示薬組成物を組み入れた担体マトリックスよりな
   る、液体試料中の蛋白の存在又は濃度を測定するための
   分析対象物検出具。
8. 【請求項８】 （ａ）ウレタンを含む組成物の全量に基
   づいて、約０．１重量％ないし約１０重量％のウレタン
   化合物、約１重量％ないし約１０重量％の水に不溶な無
   機化合物、約１０重量％ないし約４０重量％の不溶な有
   機化合物、及び約４０重量％ないし約８８．９重量％の
   適当な液体ビヒクルよりなるウレタンを含む組成物から
   形成されるウレタンベース化合物の重合層を含む担体マ
   トリックス、及び蛋白と相互作用して検出可能な応答を
   示すことが可能である指示薬組成物を含む試験用パッド
   よりなる、分析対象物検出具に液体試料を接触せしめ、
   かつ （ｂ）液体試料の蛋白含量への応答について分析対象物
   検出具を検査することを特徴とする液体試料中の蛋白の
   存在又は濃度の測定法。
9. 【請求項９】 適当な液状ビヒクル中に分散したウレタ
   ン化合物、水に不溶な無機化合物及び不溶な有機化合物
   よりなる、ウレタンを含む組成物の層を形成し；ウレタ
   ンを含む組成物を硬化して液状ビヒクルの大部分を除去
   し担体マトリックスを形成し；担体マトリックスを乾燥
   する；ことを特徴とする、液体試料中に約５mg／dl程度
   の少量で存在する予め定めた化合物の存在又は濃度を測
   定するための試験具において使用する担体マトリックス
   の製造法。
10. 【請求項１０】 液体試料中の予め定めた分析対象物の
    存在又は濃度を測定する分析対象物検出具に使用され
    る、液体試料が透過可能であり、ウレタンを含む組成物
    の全量に基づいて、約０．１重量％ないし約１０重量％
    のウレタン化合物、約１重量％ないし約１０重量％の水
    に不溶な無機化合物、約１０重量％ないし約４０重量％
    の不溶な有機化合物、及び約４０重量％ないし約８８．
    ９重量％の適当な液体ビヒクルよりなる担体マトリック
    ス。